CN1038408C

CN1038408C - 高效复合菌肥

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Publication number: CN1038408C
Application number: CN95116540A
Authority: CN
Inventors: 杨爱民
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1995-10-10
Filing date: 1995-10-10
Publication date: 1998-05-20
Anticipated expiration: 2015-10-10
Also published as: CN1126713A

Abstract

本发明涉及一种高效复合菌肥，该菌肥利用氮磷钾细菌及分解纤维素、木质素、淀粉等细菌作为生产菌株所制得的菌液，再添加有益于微生物繁殖及植物生长的营养液，与草炭等吸附剂混合而制成高效复合菌肥。该菌肥可以显著提高各种作物产量，改善果实品质，改良土壤。

Description

本发明涉及一种含微生物的肥料，以及制造该肥料的方法。

在作物栽培过程中，化肥起到了积极作用，同时也造成了对化肥的依赖性。由于连年使用化肥，使肥效日减，土填板结，有机质含量降低，微生物优势种减少，大大消弱了地力，损坏了作物品质，破坏了生态平衡，污染了自然环境，严重危害着人类的身体健康。化肥已被列为农业三大公害之首。同时，在化肥生产过程中消耗大量能源，随之给交通运输造成很大负担，相比之下，微生物肥料(即菌肥)能在增产的情况下，大幅度提供作物的品质，符合人类对绿色食品的要求。能维持与提高土壤肥力，有利于微生物优势种的繁殖，保持生态平衡，减少环境污染，能源消耗低，运输量少，施用量少且使用方便等优点。因此，微生物肥料越来越受人类青睐。

在公知技术中，复合菌肥的制造方法多为固体复合菌肥的制造方法，其工艺流程复杂，难于操作，质量不稳定。采取液体培养法制造的复合菌肥，培养的菌种比例失调，难于控制，保存时间较短等，施用效果不尽人意。

本发明的目的在于提供一种工艺流程简单，操作方便且含有氮磷钾等多种营养成分的高效复合菌肥。本发明的另一个目的在于提供一种所述菌肥的制造方法。

本方法合理地搭配了微生物菌种，使之充分发挥了菌种之间、菌种与作物和土壤生态环境之间的“菌类共荣效应”、“养分协调效应”、“生物固氮、解磷、解钾以及分解纤维素、木质素、淀粉效应”、“激素刺激效应”等作用，从而施用高效复合菌肥可以显著地提高作物的产量，改善果实品质，维持与提高土壤的肥力，减少污染，并且有益于微生物优势种的增加与繁殖，从而保障了生态平衡及人类的身心健康。

本发明是通过以下技术方案实现的：分别制备固氮菌菌液、磷细菌菌液、钾细菌菌液、产黄纤维单胞菌菌液、地衣芽孢杆菌菌液、解淀粉芽孢杆菌菌液、营养液和吸附剂，再按一定的比例搅拌混合制成高效复合菌肥，其特征在于：

1)所述菌种是：固氮菌、磷细菌、钾细菌、产黄纤维单胞菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌等对作物有益的微生物(如生防菌、抗生菌等)。

2)各种菌液的配比(重量)为：

固氮菌菌液 10-40％

磷细菌菌液 5-30％

钾细菌菌液 5-30％

产黄纤维单胞菌菌液 1-15％

地衣芽孢杆菌菌液 1-10％

解淀粉芽孢杆菌菌液 1-10％；

3)所述营养液是由细菌培养物、微量元素化合物、植物生长调节剂及土壤调理剂所组成，其配比(重量)如下：

细菌营养物 20-60％

微量元素化合物 10-45％

植物生长调节剂 1-20％

土壤调理剂 1-15％

4)高效复合菌肥是由草炭(轻质碳酸钙、沸石)等吸附剂、含有效菌数为30-50亿个或以上/毫升菌液和营养液组成，其配比(重量)如下：

草炭(轻质碳酸钙、沸石)等吸附剂：

50-80％

有效菌数30-50亿个或以上/毫升菌液：10-30％

营养液： 5-40％

制造高效复合菌肥的菌种主要有固氮菌属的褐球固氮菌(Azotobacter chroococcum如ACCC10001、10002、10006，AS1.178、1.212、1.222)、固氮菌属的维涅兰德固氮菌(AzotobatterVinelandii如ACCC10087、10088、AS1.207、1.824、1.1005、1.1649)、根瘤菌属的豌豆根瘤菌(Rhizobium leguminosarum如 ACCC18001、18016、16001、17501、AS1.171、1.167、1.87、1.161)，根瘤菌属大豆根瘤菌(Rhizobiumjaponicum ACCC15005、15018、15067、AS1.174、1.1826、1.828)，根瘤菌属豇豆根瘤菌(Rhizobium vigna如 ACCC14010、14064、14082、19520、19535、19563)，肺炎克雷伯氏菌属肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella neumomiae如ACCC10082、10083)，芽孢杆菌属巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium如ACCC10008、10010、10011、AS1.127、1.151、1.941)，芽孢杆菌属蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus如AS1.182、1.1626)，假单胞杆菌属荧光假单胞杆菌(Pseudomonasfluorescens如ACCC10040、AS1.55)；芽孢杆菌属胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosusACCC10012、AS1.231)，芽孢杆菌属坚硬芽孢杆菌(Bacillus firmus如AS1.1217)；纤维单胞菌属产黄纤维单胞菌(Cellulomonas fiavigena如ACCC11055、AS1.1002)、芽孢杆菌属地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis如AS1.518、1.813)，芽孢杆菌属解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefacins如AS1.1099、1.1226)等菌株。(中国微生物菌种保藏管理委员会，中国菌种目录，1992年版，机械工业出版社，40-111)。这些菌种可由中国微生物菌种管理委员会农业微生物菌种保藏中心，普通微生物菌种保藏中心或其他有关单位获得。

褐球固氮菌(Azotobacter chroococcum)作为固氮菌的模式种，依B.E.布坎南和N.E.吉本斯等人描述的：细菌为大卵圆形杆菌，2×5微米，常成对，周生鞭毛运动。形成胞囊和荚膜粘液。不立生不溶性色素，但在洋菜培养基上的生长物具有特征性的非溶性褐色素，有些菌株的这种色素过后会变成黑色。利用淀粉、甘露醇，但不利用鼠李糖。最适宜的温度为20-30℃，pH范围5.5-8.5，优选pH7.0-7.5。DNA中的G+C含量为65-66％(摩尔)「B.E，布坎南和N.E.吉本斯等，伯杰细菌鉴定手册(第八版)，科学出版社，1984，331」。本发明的褐球固氮菌(Azotobacterchroococcum ACCC10001、10002、10006，AS1.178、1.212、1.222应符合以上所描述的特征。

固氮菌属的维涅兰德固氮菌(AzotobatterVinelandii依B.E.布坎南和N.E.吉本斯等人描述的：细菌为大的卵圆形杆菌，常成对，周生鞭毛运动，形成胞囊和丰富的荚膜粘液。荚膜粘液中会有葡萄糖醛酸的聚合物。产生水溶性的荧光色素，在紫外线光下呈绿色。不利用淀粉，而能利用甘露醇和鼠李糖。最适宜的温度20-30℃，生长的pH范围5.5-8.5，优选的pH7.0-7.5。DNA中的G+C含量为66％(摩尔)「B.E.布坎南和N.E.吉本斯等，伯杰细菌鉴定手册(第八版)，科学出版，1984，331」。本发明的固氮菌属的维涅兰德固氮菌(Azotobatter Vinelandii)ACCC10087、10088、AS1.207、1.824、1.1005、1.1649菌株应符合以上所描述的特征。

根瘤菌属的豌豆根瘤菌(Rhizobiumleguminosarum)作为根瘤菌的模式种，依B.E.布坎南和N.E.吉本斯等人描述的，该菌属群I的细菌，以二至六根周生鞭毛运动。对少数菌株记述有纤毛。有些类型形成荚膜，菌落圆形、凸起、半透明、隆起和具有粘质；在酵母膏甘露醇无机盐洋菜培养基上，生长3-5天后产生明显浊度。能利用多种碳水化合物；较喜欢葡萄糖、甘露醇或蔗糖。一些菌株需要生物素或其他水溶性维生素。最适宜生长温度25-30℃，pH范围5.0-8.5。DNA中的G+C含量为59.1-63.1％(摩尔)。「B.E.布坎南和N.E.吉本斯等，伯杰细菌鉴定手册(第八版)，科学出版社，1984，342-344」。本发明的根瘤菌属的豌豆根瘤菌(RhizobiumeguminosarumACCC18001、18016、16001、17501、AS1.171、1.167、1.87、1.161)菌株应符合以上所描述的特征。

根瘤菌属大豆根瘤菌(Rhizobiumjaponicum)、根瘤菌属豇豆根瘤菌(Rhizobiumvigna)依B.E.布坎南和N.E.吉本斯等人描述的，该菌属群II的细菌以极生或亚极生鞭毛运动。在酶母浸出液培养基上生长慢。菌落圆形、点状、不透明、很少见半透明的、白色，凸起和颗粒状组织；在酵母膏甘露醇无机盐洋菜培养基上生长5-7天的菌落直径不超过1毫米。振荡液体培养3-5天或更长的时间后，仅有中度的混浊。在这种培养基上不常见生长较快的菌株。喜欢以戊糖为碳源，通常不利用双糖类和多糖类。通常不利用生物素。最适宜温度25-30℃，生长的pH范围5.0-8.5。DNA中的G+C含量为61.6-65.5％(摩尔)，「B.E.布坎南和N.E吉本斯等，伯杰细菌鉴定手册(第八版)，科学出版社，1984，342-345」。本发明的根瘤菌属大豆根瘤菌(Rhizobiumjaponium)ACCC15005、15018、15067，AS1.174、1.7826、1.828，根瘤菌属豇豆根瘤菌(Rhizobium vigna)ACCC14010、14064、14082、19520、19535、19563菌株应符合以上所描述的特征。

肺炎克雷伯氏菌属肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella Pneumomiae)依B.E布坎南和N.E.吉本斯等人描述的：细胞不运动，有荚膜的杆菌，0.3-1.5×0.6-6微米，单个、成对或短链状排列。生长在肉膏培养基上产生粘韧度不等的稍呈半球形有闪光的菌落，这些取决菌株和培养基的成分。

不需要特殊的生长物，大多数菌株能利用柠檬酸盐和葡萄糖作为唯一碳源，氨作为氮源。发酵葡萄糖产酸产气(CO₂多于H₂)，但也有不产气菌株。大多数菌株产生2，3-丁二醇作为葡萄糖发酵的主要末端产物，V、P反应通常阳性；乳酸、乙酸和甲酸形成比混合酸发酵量较少，而乙酸比混合酸发酵量较大。从TS1不产生H₂S，通常不产生明胶酶和吲哚。最适宜生长温度35-37℃，生长的pH约7.2。DNA中的G+C含量为52-56％(摩尔)。「B.E.布坎南和N.E.吉布斯等，伯杰细菌鉴定手册(第八版)，科学出版社，1984，446-447」。本发明的克雷伯氏菌属肺炎克雷伯氏菌(Klebsilla Pneumomiae)ACCC10082、10083菌株应符合以上所描述的特征。

芽孢杆菌属巨大芽孢杆菌(Bacillusmegaterium)依B.E.布坎南和N.E.吉本斯等人描述的，在营养洋菜上，细胞呈柱状至椭圆或梨形；直径多为1.5微米，趋于扭曲的短链。在碳水化合物培养基中细胞较大；一些菌株的直径可达3微米或更大。

脂体为大的聚β-羧基丁酸盐，在着色弱的菌体中表现为不着色的小球体，特别是生长在葡萄糖培养基上的菌体更为明显。许多菌株都运动；运动慢，需要游离氧。孢子从短的椭圆形到长的形状不等。在一些菌株中孢子壳可被复红染色。在洋菜上生长丰富，不扩展，有光泽或较暗，有时微皱；生长后期一般带黄色；长时间培养，生长物和培养基可变成褐色或黑色。在葡萄糖洋菜上的生长物有不同程度的粘性。从阿拉伯糖、木糖和甘露醇通常产酸。明胶溶化快(22℃)。酪素消解迅速，苯丙氨酸脱氨。同化硝酸盐，但在培养基中不积累亚硝酸盐。在无生长因素的情况下，能以铵盐或硝酸盐和葡萄糖作为唯一的碳源增殖。好氧。DNA中的G+C含量为36-38％(摩尔)。「B.E.布坎南和N.E.吉本斯等，伯杰细菌鉴定手册(第八版)，科学出版社，1984，739」。本发明的巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)ACCC10008、10010、10011、AS1.127、1.151、1.941菌株应符合以上所描述的特征。

假单胞杆菌属荧光假单胞杆菌(Pseudomonasfluorescens)依B.E.布坎南和N.E.吉本斯等人描述的：对数生长期时为0.7-0.8×2.3-2.8微米的杆菌；在老培养物中可能变短或变细。单个或成对出现。以极生丛毛运动；偶见不运动的。

培养物产生扩散性的荧光色素，特别是缺铁培养基中尤其是如此。某些菌株产生非扩散的蓝色素。在含2-4％蔗糖培养基上，生物型I、II和IV的菌落是粘的，这是由于形成果聚糖的结果。有些菌株(生物型I、III和IV)能进行反硝化。卵黄反应：生物型I和III为阳性，在其他的菌株中不定。生物型I一般可分解脂肪，生物型II不解脂；其他生物型对解脂不定。不需要生长因素。营养多样化，单个菌株能利用60-80个以上的碳源而生长。除了能进行反硝化并能在硝酸盐培养基上厌氧生长的菌株之外，都营专性好氧生活。最适宜生长温度25-30℃。DNA中的G+C含量为59.3-61.3％(摩尔)。「B.E.布坎南和N.E.吉本斯等，伯杰细菌鉴定手册(第八版)，科学出版社，1984，280-281」。本发明的假单胞杆菌属荧光假单胞杆菌(Pseudomonas fluorescens)ACCC10040、AS1.55菌株应符合以上所描述的特征。

芽孢杆菌属胶质芽孢杆菌(Bacillusmucilaginosus)依B.E.布坎南和N.E.吉本斯描述的：细菌为4-7×1-1.2微米，长杆状，两端纯圆，胞内带有1-2个大脂肪类颗粒，革兰氏染色呈阴性，在细胞可形成比菌体大10-50倍的荚膜，有的荚膜可形成2-4层，能形成椭圆形芽孢。对营养要求不高，能利用各种糖类及淀粉，不明显产酸。在无氮培养基上生长良好，也能在含氮培养基上生长，在牛肉蛋白胨上生长不好，在牛奶中生长微弱，是微嗜氮细菌。最适宜生长温度25-30℃，生长的pH范围5.0-8.0，优选的pH7.0-7.2。本发明的芽孢杆菌属胶质芽孢杆菌(Bacil-lus mucilaginosus)ACCC10012，AS1.231菌株应符合以上所描述的特征。

芽孢杆菌属坚硬芽孢杆菌(Bacillus firmus)依B.E.布坎南和N.E.吉本斯等人描述的细菌为0.6-0.9×1.2-4微米。杆状，很少成链；染色均匀，鞭毛侧生；从葡萄糖氧化产酸；对酸敏感，只能在pH6以上生长；能支持生长的培养基上加入葡萄糖，则抑制其早期生长而pH值并没有降至6以下。能利用甘露醇，分解酪素，水解淀粉。最低的营养要求是氨基酸和V_H或V_H和硫胺素的混合物。DNA中的G+C含量为41％(摩尔)「B.E.布坎南和N.E.吉本斯等，伯杰细菌鉴定手册(第八版)，科学出版社，1984，745-746」。本发明的芽孢杆菌属坚硬芽孢杆菌(BacillusfirmusAS1.1217)菌株应符合以上所描述的特征。

纤维单胞菌属产黄纤维单胞菌(Cellulomonasflavigena)为产黄纤维单胞菌的模式种，依B.E.布坎南和N.E.在吉本斯等人描述的：幼龄培养物中，不规则杆菌直径约为0.5微米，长度0.7-2微米或更大，它可能是直的、呈角度或弯曲的，并偶有棒状或念珠状的；杆菌部分按一定的角度排列在“V”字形。细胞偶然可以表现出原始分枝，但不形成真正的菌丝体，随着培养物的菌龄增加，杆菌变得更短，但只在一周或更老的培养物中，才见到少量球形细胞。以一根(一般为极生或亚极生)或几根侧生鞭毛运动，或不运动。在30℃和接近中性的蛋白胨肉膏培养基上，生长良好或中等。在营养洋菜和相似的培养基上，大部分菌株产生黄色非扩散性色素。在0.5％蛋白胨溶液中滤纸条缩成一堆纸浆或变得十分薄。水解淀粉。缓慢水解明胶。大部分菌株将硝酸盐还原为亚硝酸盐。好氧，大部分菌株是兼性厌氧的。DNA中的G+C含量为71.7-72.7％(摩尔)「B.E.布坎南和N.E.吉本斯等，伯杰细菌鉴定手册(第八版)，科学出版社，1984，739」。本发明的纤维单胞菌属产黄纤维单胞菌(Cellulomonas flavigena)ACCC11055，AS1.1002，菌株应符合以上所描述的特征。

芽孢杆菌属地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)依B.E.布坎南和N.E.吉本斯等人描述的：细胞杆状0.6-0.8×1.5-3微米。孢子萌发时，营养细胞发生的位置从亦道到顶端各种情况都有。在营养洋菜上的菌落变成不透明，表面暗到粗糙；边缘一般呈毛发状；通常牢固地附着在洋菜上；特别是在葡萄洋菜和谷氨胺氨甘油洋菜上，菌落积累大量的粘液，呈山丘状和裂叶状。营养明胶(22℃)液化缓慢，七天呈茶蝶状。葡萄糖厌氧发酵成各种产物，其中2，3-丁二醇和甘油是最具特征的。形成的多酰基多肽在胞外呈无定形粘液。在胞外从蔗糖形成果聚糖。许多菌株在含有足够的铁的碳水化合物培养基上形成红色素(类似普切明)，老的培养物可变成褐色。在含有葡萄糖或硝酸盐的复杂培养基中可出现厌氧生长。从葡萄糖产生CO₂由硝酸盐产生N₂和N₂O在各种情况下都可发现气体时有时无的。最适宜生长温度30-50℃。DNA中的G+C含量为43-47％(摩尔)「B.E.布坎南和N.E.吉本斯等，伯杰细菌鉴定手册(第八版)，科学出版社，1984，733-735」。本发明的芽孢杆菌属地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)AS1.518、1.813菌株应符合以上所描述的特征。

芽孢杆菌属解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefacins)依B.E.布坎南和N.E.吉本斯等人描述的：细菌杆状，很少成链；鞭毛侧生，内生孢子为椭圆或柱状，孢子囊不明显膨胀，孢子中生。从葡萄糖产酸，水解淀粉。好氧生长。最适宜生长温度37℃。最适宜的pH7.2。DNA中的G+C含量为43.5-44.9％(摩尔)「B.E.布坎南和N.E.吉本斯等，伯杰细菌鉴定手册(第八版)，科学出版社，1984，733-735」。本发明的芽孢杆菌属解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefacins)AS1.1099、1.1226菌株应符合以上所描述的特征。

芽孢杆菌属蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)依B.E.布坎南和N.E.吉本斯等人描述的：细胞杆状1.0-1.2×3-5微米。在葡萄糖洋菜上早期生长的细胞含有脂肪球，大都是β-羧基丁酸盐。细胞内含物也有异染粒。从孢子囊释放出来的孢子被一个宽大的外壁包着。萌发时孢子壳迅速溶解，营养体随即生出。杆状菌株有成链的趋势；链的稳定性决定了菌落的形态，在不同的菌株中菌落形态变化很大。一种特殊的菌落为暗的或毛玻璃状，并有起伏的边缘，从边缘移出的生长物不发育。另一种特殊菌落，根状生长，在洋菜表面上扩展。生长物呈不规则纠缠，在不同菌株中，它的根状多以顺时针弯曲或逆时针弯曲。葡萄糖发酵的主要产物包括2，3-丁二醇、乙酰甲基甲醇、甘油、乳酸、琥珀酸、甲酸、乙酸和CO₂，产物因培养条件而不同。有些菌株在含有足够铁的淀粉培养基中产生红色的普切明色素。有些菌株在不同的培养基中产生黄绿色荧光色素。有些菌株在营养洋菜上使培养基微变暗，有的产生粉褐色可溶色素。必须要求一种或几种氨基酸。在复杂的培养基中呈厌氧生长；葡萄糖和硝酸盐可促进厌氧生长：最适宜生长温度25-30℃。DNA中的G+C含量为32-33％(摩尔)「B.E.布坎南和N.E.吉本斯等，伯杰细菌鉴定手册(第八版)，科学出版社，1984，736-737」。本发明的芽孢杆菌属蜡状芽孢杆菌(Bacil-lus cereus)AS1.182、1.1626菌株应符合以上所描述的特征。

下面详细描述本发明的制造方法：

一斜面培养基(种子培养基)、生产用培养基及菌液的制备

A、斜面培养基(种子培养基)制备方法：将种子培养基配方的所有原料称量后一并放入容器内，煮沸10-30分钟，调整pH为7.0-7.2。待混合均匀后，分装到试管中，装到试管容量的1/3，19×190mm的试管，装入量为15毫升。经120℃、30分钟高压灭菌后，趁热将试管斜放，制成斜面培养基。

B、生产用培养基的制备方法：将生产用培养基配方的所有原料称量后一并放入容器内，煮沸10-30分钟，调整pH为7.0-7.2。待混合均匀后，分装到三角瓶(500毫升三角瓶装入量为300毫升)或发酵罐(1000升容量的发酵灌装入量为700公斤)中，经120℃、30分钟高压灭菌。

C、菌液的制备方法：选取生产菌种(一般根据需要可选取一株或多株菌种组成一组生产菌种)，将其分别接种到相应的斜面培养基中，经25-30℃培养至菌苔形成。再将种子培养物分别接到相应的三角瓶内的生产培养基中，经25-30℃振荡培养3-10天，即为二级种子。将二级种子培养物等量混合后，按1-3％的种子量接种到装有相应生产培养基的带搅拌装置的发酵罐中，经25-30℃、100-200转/分搅拌培养3-6天，使菌数达到30-50亿个或以上/毫升。菌液制备好后待用。

下面简述各菌种培养基的配方及制备方法：

1.固氮菌(固氮菌属的褐球固氮菌、固氮菌属的维涅兰德固氮菌、根瘤菌属的豌豆根瘤菌、根瘤菌属大豆根瘤菌、根瘤菌属豇豆根瘤菌、肺炎克雷伯氏菌属肺炎克雷伯氏菌)：

斜面培养基(种子培养基)配方及制备方法：

葡萄糖 5克甘油 5克

酵母膏 10克磷酸二氢钾 0.5克

硫酸镁 0.2克氯化钠 0.1克

碳酸钙 3克 1％钼酸铵 1毫升

1％柠檬酸铁 1毫升 1％氧化钴 1毫升

1％硫酸锰 1毫升琼脂 15-20克

水 1000毫升pH 5.5-8.5

采用前述制备方法A制备

生产用培养基配方及制备方法：

蔗糖 5公斤葡萄糖 5公斤

甘油 5公斤黄豆粉 100公斤

钙镁磷肥2公斤草木灰 2公斤

水 1000公斤 pH5.5-8.5

采用前述制备方法B制备

固氮菌菌液的制备采用前述制备方法C制备(一般采用由2株固氮菌和1株根瘤菌组成一组生产菌种)。

2.磷细菌(芽孢杆菌属巨大芽孢杆菌、芽孢杆菌属蜡状芽孢杆菌、假单胞杆菌属荧光假单胞杆菌)

斜面培养基(种子培养基)配方及制备方法：

蛋白胨 5克肉膏 3克

氯化钠 3克硫酸锰 0.5克

甘油 10克马玲薯粉 5克

琼脂 10-15克

水 1000毫升 pH6.5-8.5

采用前述制备方法A制备

生产用培养基配方及制备方法：

氯化钠 3公斤氯化钾 3公斤

硫酸镁 3公斤碳酸钙 3公斤

柠檬酸铁 1公斤马玲薯粉 10公斤

水 1000公斤 pH6.5-8.5

采用前述制备方法B制备

磷细菌菌液的制备采用前述制备方法C制备(一般采用由2株磷细菌组成一组生产菌种)。

3.钾细菌(芽孢杆菌属胶质芽孢杆菌，芽孢杆菌属坚硬芽孢杆菌)

斜面培养基(种子培养基)配方及制备方法：

蔗糖 10克碳酸钙 1克

硫酸锰 0.2克蛋白胨 10克

氯化钠 3克磷酸二氢钾 0.5克

琼脂 15-20克

水 1000毫升 pH6.5-8.5

采用前述制备方法A制备

生产用培养基配方及制备方法：

蔗糖 10公斤葡萄糖 10公斤

磷酸二氢钾 0.5公斤黄豆粉 5公斤

硫酸镁 1公斤琼脂 5公斤

水 1000公斤 pH6.5-8.5

采用前述制备方法B制备。

钾细菌菌液的制备采用前述制备方法C制备(一般采用由2株钾细菌为一组生产菌种)。

4.产黄纤维单胞菌

斜面培养基(种子培养基)配方及制备方法：

氯化钠 6克硫酸镁 0.1克

磷酸二氢钾 0.5克碳酸钙 0.1克

硫酸铵 2克羧甲基纤维素钠 15克

琼脂 10-15克

水 1000毫升 pH6.5-8.5

采用前述制备方法A制备。

生产用培养基配方及制备方法：

氯化钠 3公斤硫酸镁 3公斤

磷酸二氢钾 0.5公斤羧甲基纤维素钠 15公斤

琼脂 5公斤水 1000公斤 pH6.5-8.5

采用前述制备方法B制备。

产黄纤维单胞菌菌液的制备采用前述制备方法C制备(一般采用1株菌种为生产菌种)。

5.地衣芽孢杆菌：

斜面培养基(种子培养基)配方及制备方法：

蛋白胨 5克肉膏 3克

氯化钠 5克 1％硫酸锰 5毫升

琼脂 15-20克

水 1000毫升 pH6.5-8.5

采用前述制备方法A制备。

生产用培养基配方及制备方法：

氯化钠 3公斤碳酸钙 3公斤

马玲薯粉 10公斤效甲基纤维素钠 5公斤

琼脂 5公斤硫酸锰 0.5公斤

水 1000公斤 pH6.5-8.5

采用前述制备方法B制备。

地衣芽孢杆菌菌液的制备采用前述制备方法C制备(一般采用1株菌种为生产菌种)。

6.解淀粉芽孢杆菌

斜面培养基(种子培养基)配方及制备方法：

蛋白胨 10克牛肉膏 5克

酵母膏 5克葡萄糖 5克

氯化钠 5克琼脂 15-20克

水 1000毫升 pH 6.5-8.5

采用前述制备方法A制备。

生产用培养基配方及制备方法：

蔗糖 10公斤酵母膏 3公斤

淀粉 10公斤氯化钠 3公斤

硫酸镁 1公斤琼脂 5公斤

水 1000公斤 pH 6.5-8.5

采用前述制备方法B制备。

解淀粉芽孢杆菌菌液的制备采用前述制备方法C制备(一般采用1株菌种作为生产菌种)。

二.吸附剂的制备

将原料草炭(轻质炭酸钙、沸石)等中的泥沙杂物清除干净，烘干，粉碎至粒度小于0.18毫米。然后，经120℃、30分钟高压灭菌，冷却后备用。

三.营养液的配方及其制备方法

本发明中的营养液(有利于固氮菌、磷细菌、钾细菌、产黄纤维单胞菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌等对作物生长有益的微生物繁殖及植物生长所需要的)主要由细菌营养物、微量元素及其化合物、植物生长调节剂和土壤调理剂所组成。

细菌营养物主要有：琼脂、蛋白胨、葡萄糖、蔗糖、甘油、磷酸二氢钾、碳酸钙、牛肉膏、酵母膏、氯化钠、黄豆粉、淀粉、马铃薯、钼酸铵、钙镁磷肥、羧甲基纤维素钠等。

微量元素及其化合物主要有：锌、钛、硼、铜、铁、锰、钼、钴、硒、镍、铈；硫酸锌、氧化锌、氧化钛、硼砂、硫酸铜、柠檬酸铁、硫酸锰、钼酸铵、氧化钴、硫酸硒、硫酸镍、硫酸高铈等。

植物生长调节剂主要有：腐植酸钠，腐植酸铵，比久，α-氯乙基膦酸、多效唑、马来酰肼、苯醋酸、2甲4氯等。

土壤调理剂主要有：腐植酸钠、草炭、泥炭、石灰石、硅胶等。

在以上四种成分中，可根据细菌培养繁殖，植物生长的需要，不同土壤的类型及不同的地区进行适当的选择，每种成分可选择一种或多种，这四种成分的重量比如下：

细菌营养物： 20-60％

微量化合物： 10-45％

植物生长调节剂：1-20％

土壤调理剂 1-15％

在配制的过程，各种成分营养可根据工艺的需要采取两种方法加入，一种方法是先与草炭(轻质碳酸钙、沸石)等混合，以250-500转/分的速度在搅拌机内搅拌5-15分钟，直至混合均匀，再经120℃，30分钟高压灭菌。另一种方法是配制好的营养液120℃、30分钟高压灭菌后，在加菌液的同时加营养液，以250-500转/分的速度在搅拌机内搅拌5-15分钟，直至混合均匀。

根据不同需要，可选择下面三种营养液配方(以重量份数计)：第一种：

琼脂5、磷酸二氢钾10、氯化钠1、碳酸钙5、黄豆粉5、淀粉1、葡萄糖2、马铃薯粉6、甘油2、酵母膏1、硫酸锌20、氧化钛0.5、硼砂2、硫酸铜0.5、硫酸锰5、氧化钴2、柠檬酸铁5、硫酸镍1、硫酸高铈1、腐植酸钠10、腐植酸铵5、α-氯乙基膦酸2、腐植质8。

第二种：

琼脂6、磷酸二氢钾10、蔗糖10、甘油1、酵母膏2、马铃薯粉2、碳酸钙5、钙镁磷肥3、羧甲基纤维素10、氯化钠1、硫酸锌10、硫酸铜10、柠檬酸铁8、硫酸锰6、钼酸铵2、氧化钴2、硫酸高铈2、腐植酸钠5、α-氯乙基膦酸2、硅胶3。

第三种：

琼脂10、葡萄糖10、氯化钠2、黄豆粉5、磷酸二氢钾5、钙镁磷肥8、氧化锌10、硫酸铜5、硼砂10、硫酸锰3、钼酸铵3、氧化钴3、硫酸高铈1、多效唑3、α-氯乙基膦酸2、腐植质15、腐植酸钠5。

营养液的制备方法：先分别称取上述配方中的原料，放入容器中，再各自加入100份(重量)水，煮沸30分钟，将溶液调整到pH7.0-7.2均匀后即制备成营养液。若先将营养液加入草炭(轻质碳酸钙、沸石)等吸附剂内，则在搅拌机内以250-500转/分的速度搅拌5-15分钟，再经120℃30分钟高压灭菌。若与菌液一并加入草炭、轻质碳酸钙、沸石)等中，则先将营养液经120℃、30分钟高压灭菌。然后和菌液一并加入草炭(轻质碳酸钙、沸石)等中。

四、高效复合菌肥的配制方法

高效复合菌肥是由草炭(轻质碳酸钙、沸石)等吸附剂、菌液和营养液所组成。其重量比为：

草炭等吸附剂50-80％

菌液10-30％

营养液5-40％

下面将高效复合菌肥的配制方法叙述如下：

1.将高压灭菌后的草炭(轻质碳酸钙、沸石)等吸附剂放入搅拌机内，加入培养配制好的菌液。

2.将高压灭菌后的营养液加入上述的吸附剂中。

3.在菌液、营养液加完之后，开动搅拌机以250-500转/分的速度搅拌5-15分钟，直至搅拌均匀，可得到本复合菌肥。

本发明的高效复合菌肥具有以下的积极效果：

在小麦水稻玉米花生棉花等12种作物上施用，平均增产13.7％，≥5％的增产机率约100％，其中粮食作物增产13.2％，油料作物增产13.1％，豆科牧草和绿肥增产16.6％，瓜果蔬菜增产17.2％，棉花等纤维作物增产12％。

可以改善果实的品质，改良土壤。

可以大量使用各种废物废渣，有利于三废治理。

下面通过实施例详细具体说明本发明，而不是对其的限制。

实施例1

1.菌株的选择：固氮菌ACCC10001、100088、150005、AS1.174、磷细菌AS1.127、1.55、钾细菌AS1.231、1.1217、产黄纤维单胞菌AS1.1002、地衣芽孢杆菌AS1.518、解淀粉芽孢杆菌AS1.1226菌株作为一组生产用菌株。

2.斜面培养基(种子培养基)，生产培养基及菌液的制备方法如前所述。菌液150公斤：固氮菌菌液60公斤、磷细菌菌液35公斤、钾细菌菌液35公斤、产黄纤维单胞菌10公斤、地衣芽孢杆菌菌液5公斤和解淀粉芽孢杆菌5公斤。

3.草炭吸附剂的制备方法如前所述。取草炭吸附剂750公斤。

4.营养液采用A配方，制备方法如前所述，取100公斤营养液。

5.将草炭吸附剂750公斤放入搅拌机中，加入菌液150公斤，再加入100公斤植物营养液，以250转/分的速度搅拌15分钟达到均匀，便得到高效复合菌肥。

采用该菌肥进行花生试验，与对照田相比：平均株高增加1厘米，单株分枝多1枝，单株鲜重增加10克，皮果干重增加47.5克，折合亩产增加33.7公斤。增产率为13.1％。同时，叶斑病发病率降低10.8％。

实施例2

1.菌株的选择：固氮菌ACCC10088、10082、AS1.171、ACCC14082、磷细菌ACCC10010、AS1.182、钾细菌ACCC10012、AS1.1217、产黄纤维单胞菌ACCC11055、地衣芽孢杆菌AS1.813、解淀粉芽孢杆菌AS1.1099菌株作为一组生产用菌株。

2.斜面培养基(种子培养基)，生产培养基及菌液的制备方法如前所述。菌液100公斤：固氮菌菌液50公斤、磷细菌菌液20公斤、钾细菌菌液20公斤、产黄纤维单胞菌4公斤、地衣芽孢杆菌菌液3公斤和解淀粉芽孢杆菌3公斤。

3.草炭吸附剂的制备方法如前所述。取草炭吸附剂800公斤。

4.营养液采用B配方，制备方法如前所述，取100公斤营养液。

5.将草炭吸附剂800公斤放入搅拌机中，加入菌液100公斤，再加入100公斤营养液，以500转/分的速度搅拌5分钟达到均匀，便得到高效复合菌肥。

采用该菌肥进行水稻试验，与对照相比：苗期叶色较绿，根增加1-2条，长度增加2-3厘米，每株分蘖增加1-2个，株高增加2-3厘米，每穗实粒数增加6-8粒。千粒重增加0.8克，平均亩产增加126斤，增产幅度为11.2％。

实施例3

1.菌株的选择：固氮菌AS1.212、1.1649、1.171、ACCC19563、磷细菌 ACCC10040、AS1.1626、钾细菌AS1.231、1.1217、产黄纤维单胞菌AS1.1002、地衣芽孢杆菌AS1.518、解淀粉芽孢杆菌AS1.1226菌株作为一组生产用菌株。

2.斜面培养基(种子培养基)，生产培养基及菌液的制备方法如前所述。菌液200公斤：固氮菌菌液80公斤、磷细菌菌液50公斤、钾细菌菌液50公斤、产黄纤维单胞菌10公斤、地衣芽孢杆菌菌液5公斤和解淀粉芽孢杆菌5公斤。

3.草炭吸附剂的制备方法如前所述。取草炭吸附剂600公斤。

4.营养液采用C配方，制备方法如前所述，取200公斤营养液。

5.将草炭吸附剂600公斤放入搅拌机中，加入菌液200公斤，再加入200公斤营养液，以400转/分的速度搅拌5分钟达到均匀，便得到高效复合菌肥。

采用该菌肥进行大白菜试验：大白菜的增产幅度为8-17.4％，平均增产281.25公斤/亩，并且口感好，菜香味浓。

本高效复合菌肥的质量可达到或超过“中华人民共和国农业部行业标准”NY227-94。

本菌肥的施用方法与用量：

农作物、瓜果、蔬菜、牧草、花卉等每亩施用量3公斤，每次1公斤，可在播种期、生长期、始花期施用；果树、林木每株2公斤，每次1公斤；可在施基肥、生长旺期或始花期施用；拌种：先用适量清水润湿种子，然后将本菌肥均匀拌和在种子上，要随播随拌。浸种：将本菌肥溶于清水中，再将种子放入浸泡，浸好后捞出晾干，及时播种。蘸根：将本菌肥调成稀糊状，浸蘸秧苗根部，随蘸随栽。施用时，要及时覆土与浇水，避免阳光照射与干燥。

药物配合：与杀虫剂配合使用时，可将杀虫剂与种子拌和，晾干后再与本菌肥拌和，或将本菌肥均匀施于种子附近或植株根部的土壤中。但禁止与杀菌剂配合施用。

Claims

1.一种高效复合菌肥，其特征在于它含有(以复合菌肥总重量计)：

(1)10-30％含有效菌数为30-50亿个或50亿个以上/毫升菌液。

(2)50-80％吸附剂。

(3)5-40％营养液。

所述菌液的组成(以该菌液总重量计)如下：

固氮菌菌液 10-40％

磷细菌菌液 5-30％

钾细菌菌液 5-30％

产黄纤维单胞菌菌液 1-15％

地衣芽孢杆菌菌液 1-10％

解淀粉芽孢杆菌菌液 1-10％；

所述营养液的组成(以该营养液总重量计)如下：

细菌营养物 20-60％

微量元素化合物 10-45％

植物生长调节剂 1-20％

土壤调理剂 1-15％

所述固氮菌是固氮菌属的褐球固氮菌(Az-otobacter chroococcum ACCC10001、10002、10006，AS1.178、1.212、1.222)、固氮菌属的维涅兰德固氮菌(Azotobacter VinelandiiACCC10087、10088、AS1.207、1.824、1.1005、1.1649)、根瘤菌属的豌豆根瘤菌(Rhizobium leguminosarumACCC18001、18016、16001、17501、AS1.171、1.167、1.87、1.161)、根瘤菌属的大豆根瘤菌(Rhizobium japonicum ACCC15005、15018、15067、AS1.174、1.1826、1.828)、根瘤菌属的豇豆根瘤菌(Rhizobium vigna ACCC14010、14064、14082、19520、19535、19563)、肺炎克雷伯氏菌属的肺炎克雷伯氏菌(KlebsiellaPneumomiae ACCC10082、10083)；所述的磷细菌是芽孢杆菌属的巨大芽孢杆菌(Bacillusmegaterium ACCC10008、10010、10011、AS1.127、1.151、1.941)、芽孢杆菌属的蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus AS1.182、1.1626)和假单孢杆菌属的荧光假单胞杆菌(Pseudomonasfluorescens ACCC10040、AS1.55)；所述的钾细菌是芽孢杆菌属的胶质芽孢杆菌(Bacillusmucilaginosus ACCC10012、AS1.231)和芽孢杆菌属的坚硬芽孢杆菌(BacillusfirmusAS1.1217)；所述的还有纤维单胞菌属的产黄纤维单胞菌(Cellulomonas flavigenaACCC11055、AS1.1002)、芽孢杆菌属的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis AS1.518、1.813)和芽孢杆菌属的解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefacins AS1.1099、1.1226)菌株。

2.根据权利要求1所述的菌肥，其特征在于所述的营养液中含有下述营养物质、琼脂、蛋白胨、葡萄糖、蔗糖、甘油、磷酸二氢钾、碳酸钙、牛肉膏、酵母膏、氯化钠、黄豆粉、淀粉、马铃薯、钼酸铵、钙镁磷肥或羧甲基纤维素钠。

3.根据权利要求1所述的菌肥，其特征在于所述的微量元素化合物是：硫酸锌、氧化锌、氧化钛、硼砂、硫酸铜、柠檬酸铁、硫酸锰、钼酸铵、氧化钴、硫酸硒、硫酸镍或硫酸高铈。

4.根据权利要求1所述的菌肥，其特征在于所述的植物生长调节剂是：腐殖酸钠、腐殖酸铵、比久、α-氯乙基膦酸、多效唑、马来酰肼或苯醋酸。

5.根据权利要求1所述的菌肥，其特征在于所述的土壤调理剂是：腐殖酸钠、草炭、泥炭、石灰石或硅胶。