CN1769295A - 使用纯化的抗原特异性抗体快速检测肺炎链球菌的体外方法和材料 - Google Patents

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Abstract

公开了一种肺炎链球菌的纯化的细胞壁C-多糖抗原,其含有不多于10%重量的蛋白质,如下获得:(a)处理肺炎链球菌培养物,杀死细菌细胞;(b)在约7.0-7.4的弱碱性pH条件下,分离作为湿细胞沉淀的被杀死的细菌细胞;(c)将沉淀与足量的0.1N NaOH一起保温至少45分钟,所述0.1N NaOH将其pH提高到超过12.0,溶液中混合;(d)用强酸将溶液调节到pH3以下,诱使其分层;(e)分离上清液,并用强蛋白酶处理,除去蛋白质;(f)分离出肺炎链球菌的纯化的细胞壁C-多糖抗原,它含有不多于10%重量的蛋白质。还公开了在动物体内产生的针对肺炎链球菌或其细胞壁C-多糖抗原的多价抗体。

Description

使用纯化的抗原特异性抗体快速检测肺炎链球菌的体外方法和材料
本申请是1999年9月20日提交的申请号为99811042.6,名为使用纯化的抗原特异性抗体快速检测肺炎链球菌的体外方法和材料的发明专利的分案申请。
技术领域
本发明涉及一种特异和灵敏的,可在15分钟内完成的免疫层析(“ICT”)试验,用于检测呈现肺炎链球菌感染临床症状病人的体液,如尿或脑脊髓液中的肺炎链球菌。
背景技术
肺炎链球菌(“S.pneumoniae”)是一种肺炎类疾病和其它下呼吸道感染(如支气管炎),和上呼吸道感染,如感染性中耳炎和鼻窦炎,以及播散性侵袭性感染,包括菌血症和脑膜炎的致病生物体。当未被正确诊断和治疗时,肺炎链球菌肺部感染会导致心包炎、脓胸、暴发性紫癜、心内膜炎和至少一种关节炎,在每种病例中,肺炎链球菌都是致病生物体。这些肺部感染常常是菌血症或脑膜炎的前驱。目前诊断和治疗肺炎链球菌引起的肺炎仍在一定程度上是凭经验的。
在一个显著的程度上凭经验,这是因为现行检测肺炎链球菌的试验是(1)费时、费力,需要仪器的辅助来阅读结果,或(2)缺乏灵敏性和/或特异性。由于问题和缺乏灵敏度和/或特异性有关,所以医生倾向于给肺炎型呼吸道感染病人开昂贵、广谱抗生素处方,而不是足以治愈该感染的、对肺炎链球菌有特效的、较不昂贵的抗生素。这种和其它形式的滥用广谱抗生素当然是今天众所周知的、许多类型感染性细菌对原先高效抗生素的抗性增加而产生的医学危机的主要原因。这种危机和对于至少某些病人凭经验诊断和治疗而引起的潜在不良后果,是为什么需要检测人体液中肺炎链球菌的可靠和快速的试验的原因之一。
肺炎链球菌肺炎是一种严重疾病,估计每年仅在美国每1000个人中要发生1-5例。视患肺炎链球菌肺炎感染病人的年龄和健康状况(基于无关因素),该疾病在感染病人中引起的死亡率为4-30%。
尝试诊断肺炎链球菌疾病,尤其是肺炎的最由来已久的方法,涉及对病人咳出的怀疑携带该病菌的痰进行革兰氏染色和培养,随后作生化鉴定的方法。该程序从开始到结束,需要约1-4天。已证明,这是一种不令人满意的诊断方法,因为(1)存在于病人唾液中的其它细菌常常长得超过痰培养物,和(2)即使病人没有该细菌引起的疾病症状时,肺炎链球菌也常常存在于人上呼吸道中。例如,估计美国30%的儿童都是肺炎链球菌的习惯性携带者。太多的成人中有肺炎链球菌寄居,而本身不进入疾病状态。儿童和成人的携带率随拥挤状况和在冬天将增加。
已开发了协同凝集、乳胶颗粒凝集和对流免疫电泳方法来检测痰标本中肺炎链球菌多糖荚膜抗原,这些方法是快速但未显示可靠的灵敏度或特异性,可能是由于肺炎链球菌有83种血清型,每种的免疫原性和其它方面都可能不同。商业上开发的和用于这些试验的多价抗血清含有针对所有83种肺炎链球菌血清型抗原的抗体,但尽管如此,它还是不能检测出免疫原性较低的抗原血清型。该多价抗血清还显示了和其它链球菌以及某些其它感染性细菌,如流感嗜血杆菌(Haemophilusinfluenza)的交叉反应性。所以当这些试验用于痰样本时,可能同时随机发生假阴性和假阳性反应。
己开发了几种酶联免疫试验(“EIA”),它们是基于检测发现在所有肺炎链球菌血清型的肺炎球菌细胞壁都存在着的肺炎球菌C-多糖抗原。见例如,Parkinson,A.J.,Rabiego,M.E.,Sepulveda,C.,Davidson,M.和Johnson,C.,临床微生物学杂志30:318-322(1992)。该C-多糖抗原是衍生自磷壁酸的、含有磷酸胆碱的多糖。这些EIA试验具有可接受的特异性和灵敏度,即使常用于痰样品检测。然而,这些试验每一种都要求在样品收集后2-3个小时内进行,而且要用主要在临床实验室中才可得到的仪器。另外,这些试验必须由受过训练的人员,或在其密切监督下进行。
对痰样品诊断肺炎链球菌感染的可靠性在对肺炎链球菌肺炎的诊断中常常不令人满意,不仅是由于样品可能被口腔中的其它细菌和/或固有的上呼吸道肺炎链球菌污染。而且痰往往很难收集,一旦开始对病人用药,痰中存活的肺炎链球菌数目迅速下降。特别是,如果使用了攻击肺炎链球菌微生物细胞壁的抗生素治疗,痰中C-多糖抗原的存在将迅速变得难于检测。当肺炎链球菌引起感染性中耳炎、脑膜炎和各种其它上述感染性疾病状态时,痰样品对诊断并无帮助。
对怀疑感染了肺炎链球菌的病人作血培养消除了伴随痰样品的污染问题。当在血清样品中发现含有肺炎链球菌时,可能易于作出哪种细菌是疾病的致病原的诊断。该方法的不足是,所有被肺炎链球菌感染的肺炎病人只有20%产生菌血症;因此,仅靠血样来诊断肺炎链球菌引起的肺炎可能得到假阴性结果。
已发现尿样是最可靠、最方便的用于检测肺炎链球菌肺炎的样品,因为它们是非创伤性获得的;它们不会被口腔微生物菌丛污染;而且即使病人治疗已开始,细菌也一直存在于尿中,虽然浓度水平稳定下降。所以每日监测病人尿样,来评估处方治疗的效力,可得到有用的信息。应注意不呈现疾病症状的肺炎链球菌人类携带者往往不存在足够的病原体,因而他们的尿中不存在肺炎链球菌抗原。
一篇新近的文章描述了用EIA方法检测脑脊髓液样品,成功诊断了肺炎链球菌引起的脑膜炎。在该EIA中,使用了单克隆免疫球蛋白A抗磷酸胆碱抗体,以检测C-多糖抗原。见Stuertz,K,Merx,I,Eiffert,H.,Schmutzhard,E.,Mader,M.和Nau,R.,36临床微生物学杂志,2346-2348。获得的结果和Yolken,R.H.,Davis,D.,Winkelstein,J.,Russell,H.和Sippel,J.E.,20临床微生物学杂志802-805(1984)的结果(在一EIA中获得,其中使用了两种针对脑脊髓液中肺炎链球菌的抗体——一种针对肺球菌C-多糖抗原的马抗体,结合于微量滴定板,和一种针对液相中多糖荚膜抗原的合并兔抗血清)比较,是令人满意的。
发明内容
根据本发明,用蛋白质含量低于约10%的分离和纯化的C-多糖抗原,亲和纯化在兔中产生的、针对肺炎链球菌C-多糖抗原的抗体。
将这些亲和纯化的抗体与一种试剂偶联,该试剂在与测试样品中的肺炎链球菌C-多糖抗原、和固定在硝酸纤维素基质上的亲和纯化的C-多糖抗体形成夹心时,可产生颜色反应。
在一次性使用的免疫层析试验装置中进行该试验,而且不需要用仪器解释结果。该试验可由未受过实验技术训练的人轻易和成功的进行。
用于诊断肺炎链球菌肺炎的优选试样是病人尿,但该试验也可用其它含有肺炎链球菌的体液样品,包括血清和痰。用病人脑脊髓液作为试样可容易的诊断肺炎链球菌引起的脑膜炎。
本发明首次提供了一种可在15分钟内进行,而且特异性和灵敏度和需要8-12倍时间或更长方能获得结果的EIA试验至少相等的肺炎链球菌试验。该试验易于进行,不需要特殊训练、装备、或仪器,并能迅速诊断肺炎链球菌引起的肺炎。可在医生的办公室中轻易进行,从而允许病人立即接受特别针对肺炎链球菌的治疗方案。当然该试验还能在临床实验室中进行,但也可在养老院、病人家中或任何怀疑流行肺炎链球菌肺炎或其它病理状态的环境下方便的进行。
本发明的试验对出现疾病状态,如中耳炎、支气管炎或鼻窦炎时是重要的,因为一旦可确定这些疾病的任一是由于肺炎链球菌,而不是由其它感染性因子引起的,可立即开始合适的治疗。小儿尤其易患中耳炎,因为他们的咽鼓管长度较短,直径较小,因此早期检测(如存在)出肺炎链球菌,将可很好的预防发生更严重的、或甚至威胁生命的疾病状况。Norris等,儿科学杂志821-827(1966)和Hongeng等,130儿科学杂志No.5(1997年5月)的论文表明,患有镰刀形红细胞疾病的儿童非常容易感染肺炎链球菌,而肺炎链球菌败血症是这些人中最常见的感染性疾病,那些一旦感染了该病的儿童将有高得多的复发率和随后的死亡率。显然使用本发明的ICT试验来常规检验这些病人的尿,将有助于减少对这些论文第二篇推荐的、不停顿使用青霉素作预防。
该试验易于进行,能检测尿中肺炎链球菌C-多糖抗原,提示该试验应谨慎的在没有相关感染明显症状,报告感觉异常的病人中进行。确定肺炎链球菌有显著足够量存在,以至尿ICT试验阳性的这类病人,预示很可能发展成更严重的感染——以及本发明新提出的在该疾病变得严重之前通过施用合适的治疗,可能防止疾病发展。
附图说明
本文图1和相关的图1A、1B和1C显示了典型ICT装置,适合用于进行本文下面详述的肺炎链球菌试验。
具体实施方式
广泛的说,可设计和配置本文所述的肺炎链球菌ICT试验,在本领域公开的已知一次性ICT装置上进行。优选将它设计成将在包括诊断人呼吸道系统疾病的广泛应用领域中,采用Howard Chandler的待批美国专利申请系列号07/706,639或其部分延续申请之一所公开类型的ICT装置进行的试验。所有上述申请被转让给Smith-Kline Diagnostics,Inc.但独家授权给Binax,Inc.(它被赋予转让该申请的权利)。
优选的装置在其一区域中适当充满了抗肺炎链球菌C-多糖抗原的抗原特异性多克隆抗体。将标记的抗原特异性抗体加到该装置另一区域中。首先使怀疑含有肺炎链球菌的试样和标记的抗原特异性抗体接触,然后和样品一起流到含有未标记的结合的抗原特异性抗体的该装置区域,如果样品中存在肺炎链球菌,通过接触,已形成的标记的抗体:C-多糖抗原偶联物与固定的未标记的亲和纯化的抗体结合,从而产生可见的颜色反应。标记可以是任何本领域已知的、能在标记的抗体:抗原复合物和结合的未标记抗体反应时产生可见颜色的物质。这些标记包括各种极细的金属颗粒、各种有机分子和各种分子组合,如酶和另一种产色分子的组合。在本发明中,胶态金颗粒组成了优选标记。
设计试验装置最重要的在于,该试验装置发生反应的两个部位每一处的抗体浓度应充分以确保试样中存在的抗原被标记抗体捕获,而标记的抗体/抗原易被样品捕获线处结合的抗体捕获和固定。和本发明相关的实验工作已显示,对肺炎链球菌C-多糖抗原的活性抗体必须在试验装置两部位的的每个部位都存在,在这种部位抗原:抗体反应发生的浓度为表面面积每平方毫米7.7纳克到385纳克之间。如果要发生反应的部位抗原浓度低于7.7纳克/平方毫米,可能会得到假阴性结果。
已知各种亲和纯化抗肺炎链球菌C-多糖抗原的抗体的方法。本文下面描述的是本发明优选的,但也可用其它方法代替。然而应注意,本发明亲和纯化的抗体可以和Sjogren和Holme, 102免疫学方法杂志93-100(1987)描述的亲核纯化抗体制剂明显不同。这些作者描述了获得含有17%蛋白质的热苯酚纯化的肺炎链球菌C-多糖抗原,将其吸附到离子交换凝胶DEAE-Sepharose CL6B上。48小时培育后,将该制备物以中性pH7.2装填入柱。据说该抗原和凝胶的结合效率大约60%。将抗体加到这些柱上,培育30分钟,然后用0.5M NaCl的PBS溶液洗脱该柱。据知抗原从离子交换柱上渗漏是常常发生的。在该系统中,假设从凝胶上洗脱的产物是原位形成的抗体抗原复合物,而不是本发明的纯化抗原制备物是合理的。应特别注意的是,在本发明中,含有少于10%蛋白质的纯化抗原与间隔分子,如BSA-肼偶联物共价偶联,然后将产生的标记的抗原:偶联配体与层析凝胶-(如实施例4的Formyl Spherilose)共价偶联,然后填充柱。加入抗体并用强酸性缓冲液将抗体从柱上的固定抗原上洗脱下来。
本文优选的抗体是通过用肺炎链球菌菌株R6(一种无荚膜的肺炎链球菌菌株,从美国典型培养物保藏中心ATCC号39938获得,在注射入动物前,加热杀死细胞)常规注射家兔产生的。经过一段合适时间后,对动物取血,获得含有所需抗体的血清,然后纯化。可用其它针对肺炎链球菌C-多糖抗原的抗体代替本文具体描述的那些,而不违背本发明。
首先,应测试该抗体与其它常见感染性细菌的交叉反应性。用ELISA法测试了本文所称的优选抗体的交叉反应性,测试的细菌如下:弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freudii),金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus),阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae),粪肠杆菌(Enterobacter faecalis),链球菌B组III型,大肠杆菌,脑膜炎奈瑟氏菌(Neisseria meningitidis),古巴沙门氏菌(Salmonella cubana),甲型副伤寒沙门氏菌(Samonella paratyphi A),肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae),链球菌B组II型,表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis),肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis),链球菌A组,粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens),白色念珠菌(Candida albicans),流感嗜血菌(Haemophilus influenza),粘膜炎莫拉氏菌(Moraxella catarrhalis),库氏棒杆菌(Corynebacterium kutscheri),恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida),普通变形菌(Proteus vulgaris),鸟肠球菌(Enterococcus avium),鲍氏不动杆菌(Acinetobacter baumannii),产酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca),鲁氏不动杆菌(Acinetobacter lwoffii),铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeroginosa),腐生葡萄球菌(Staphylococcus saphrophyticus),耐久肠球菌(Enterococcus durans),牛棒杆菌(Corynebaterium bovis),奇异变形菌(Proteus mirabilis),施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri),洋葱伯克霍尔德氏菌(Pseudomonas cepacia),伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi),链球菌F组,链球菌B组1a型,类星形念珠菌(Candida stellatoides),副血链球菌(Streptococcus parasanguis),链球菌G组,链球菌C组,变异链球菌(Streptococcus mutans),摩氏摩根氏菌(Morganellamorganii),溶血葡萄球菌(Staphylococcus haemolyticus),乙型流感嗜血菌,嗜麦芽糖寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia),丁型流感嗜血菌,阴道加德纳氏菌(Gardnerella vaginalis),缓症链球菌(Streptococcus mitis),副流感嗜血菌(Haemophilus parainfluenzae),血链球菌(Streptococcus sanguis)和不能分型的流感嗜血菌。
发现仅有的明显交叉反应性是和缓症链球菌和金黄色葡萄球菌。前者,缓症链球菌,是心内膜炎的病原体,医生可轻易的从临床上将有其显著症状的病人和肺炎链球菌肺部感染的病人区分开来。缓症链球菌含有与肺炎链球菌相同的C-多糖抗原,而且两者具有相同的引起心内膜炎的能力。虽然肺炎链球菌通常仅在初期肺炎未受到适当治疗的病人中引起该疾病,而且病人随后可能发生菌血症和/或心内膜炎或其它病原性二次感染。相反,缓症链球菌不是肺炎的病原体;缓症链球菌引起的心内膜炎通常不伴随任何其它感染。因此,相信当需要时,可用本发明的试验确认怀疑患缓症链球菌引起的初期心内膜炎病例。然而应注意的是,缓症链球菌比肺炎链球菌在尿中要存在的可能性少,因此在该情况下血清试验将更可能获得可信的信息。
己知某些金黄色葡萄球菌菌株分泌蛋白A,一种非特异性蛋白,能不加区别的和IgG结合,因此能和所有抗体结合。可通过本领域熟知的其它简单试验轻易的确定或排除这些金黄色葡萄球菌物质的存在。(如实施例9所示,无蛋白A的金黄色葡萄球菌菌株显示对本发明的抗体无交叉反应性。)观察到对流感嗜血菌的微量交叉反应,但相信这点交叉反应在检测尿样肺炎链球菌中不足以产生显著问题。
下列实施例说明了亲和纯化本发明抗体的优选模式,包括初步分离和纯化用于抗体纯化的抗原,从而得到抗原特异性多价抗体制备物。
                       实施例1-细菌生长条件
在补充了20mM Hepes缓冲液的肺炎链球菌肉汤中培养肺炎链球菌菌株R6(ATCC No.39938)。每升肉汤具有下列组合物:
酪蛋白的胰酶消化物               17.0克
葡萄糖                           10.0克
NaCl                             5.0克
大豆粉的木瓜蛋白酶消化物         3.0克
酵母抽提物                       3.0克
K2HPO4                  2.5克
HEPES                      20mM
该肉汤在26℃具有起始pH7.2±0.2。在15psi和121℃高压蒸汽灭菌15分钟,放置冷却。
将肺炎链球菌菌株R6(ATCC No.39938)的冷冻等分接种到5%绵羊血琼脂平板上,使其生长。将平板上的生长物收集到更小等分的接种肉汤中,将该接种肉汤接种到三个烧瓶中,各含有1,700毫升补充的上述组合物的肺炎链球菌肉汤中,在37℃,5%CO2中搅拌但不通气培养。当肉汤的pH下降到5.5以下(它的对数晚期)时,从温箱中取出烧瓶,用0.1%叠氮化钠杀死细胞,将pH调节到7.0以上,防止自溶。然后将烧瓶保藏在4℃过夜。翌日,8,000rpm离心各烧瓶中的悬液60分钟。然后合并沉淀,13,000rpm再次离心30分钟。记录沉淀的湿重,将其储藏在-20℃。
实施例2-分离含蛋白质少于10%的肺炎链球菌C-多糖抗原
将实施例1中生长、处理并储藏的细胞室温融化,将其悬浮在pH7.2的、含有0.2%叠氮化钠的磷酸缓冲盐溶液(“PBS”)中,比例为1.2毫升缓冲液比1克湿细胞,室温放置两天。
然后按每1克湿细胞11毫升0.1N的NaOH加到肺炎链球菌悬液(磷酸缓冲盐中)中,得到pH12.34(用pH计测量),约30℃培育45分钟。然后用2N HCl将悬液pH调节到2.75(用pH计测量),然后3,500rpm离心悬液25分钟。然后分离上清液,用1N NaOH将其pH调节到7.0-7.1。该基本中性的上清液置于透析管(从Spectra/Por获得,具有12,000到14,000的分子量截留值)中4℃对水透析两日。在真空旋转蒸发器上浓缩该透析上清液25-40倍。
按每克湿细胞加入0.20mg的蛋白酶K(购自Boehringer Mannheim),混合物置于37℃3.5-4小时,然后室温过夜至第二天。
用蛋白酶K消化后,在Spectra/Por的具有12,000-14,000的分子量截留值的透析管中4℃对水透析得到的上清液。然后将透析上清液分成12等份,各置于30毫升玻璃管中,和等体积的90%苯酚混合。密封试管,在热水浴中68-72℃培育23分钟,水平面比试管中的混合物平面稍高。不时用玻璃的Pasteur移液管搅拌各试管中的悬液制备肉眼看来更均匀的悬液。在该培育后,室温放置悬液30分钟,然后5,000rpm、15℃离心40分钟。
接着,将各试管中的上方水相用玻璃针筒小心吸出;对于各试管,仔细测量该水相的体积,用等体积的新鲜水替换。再次进行68-72℃培育,然后5,000rpm、15℃离心40分钟的步骤,再重复一次。
然后用玻璃针筒小心吸出各试管下面的苯酚相,剩下中间层(混合的水-苯酚)和上层(水)相在试管中。此时,将含有与合并的从试管中抽提的苯酚相体积比为10∶1的冷乙醇的烧瓶置于冰浴中。缓慢将苯酚相滴加到烧瓶中,一面充分搅拌。加入所有苯酚相后,继续搅拌10-15分钟,然后将混合物置于4℃的冰箱中,放置过夜,以形成C-多糖抗原沉淀。翌日,12,000rpm、4℃离心该混合物20分钟。将产生的C-多糖抗原沉淀以每克湿细胞悬浮在0.4毫升水中,4℃对蒸馏水透析过夜,使用上述具有12,000-14,000截留分子量的Spetra/Por透析管。冻干得到的C-多糖抗原水溶液并称重。用Lowry法评估其蛋白浓度;用蛋白质免疫印迹试验在SDS-PAGE(12%凝胶)上检查其成分并用ELISA检查其C-多糖抗原活性。
该操作重复多次。发现肺炎链球菌C-多糖抗原的总产量是每克肺炎链球菌R6菌株湿细胞1.2-1.4%,而其蛋白质含量在约5-8%之间。
应注意的是,一般蛋白质含量超过10%的C-多糖抗原制备物与蛋白质含量少于10%的制备物相比,不能满意的用于本发明。
                    实施例3-抗原BSA偶联物的制备
为了将纯化的肺炎链球菌菌株R6的C-多糖抗原和层析柱偶联,以亲和纯化兔抗-肺炎链球菌菌株R6的抗体,选择了BSA-肼偶联物。还可选择和偶联其它具有相似功能的已知物质来执行该偶联功能。
如下制备了BSA-肼偶联物:
将从Aldrich Chemical Co.获得的二盐酸肼溶解在水中,得到0.5M溶液。用无水NaOH将pH调节到5.2,加入Sigma Chemical Co.的无水牛血清白蛋白(“BSA”),产生最终浓度为每毫升溶液25毫克BSA。BSA完全溶解后,加入一定量的N-(二甲基氨基丙基)-N1-乙基碳二亚胺盐酸盐(购自Fluka Chmical Co.),产生最终浓度为每毫升2.5毫克的溶液。室温培育该反应混合物,持续搅拌过夜。翌日,4℃对蒸馏水充分透析。在Beckman DU 640分光光度计上在280纳米处测量偶联物浓度(作为BSA浓度)。
为了将该偶联物与肺炎链球菌菌株R6C-多糖抗原偶联,程序如下:
将该抗原的无水制备物溶于蒸馏水,其量为每毫升1.1毫克。用稀HCl将溶液pH调节到5.0-6.0。用稀HCl处理浓度为23毫克/毫升的BSA∶肼偶联物水溶液,将其pH调到4.0和5.0之间,然后将该溶液以体积比为约1∶6.65(重量比约3∶1)缓慢加到抗原溶液中。搅拌3分钟后,将溶于100-200毫升蒸馏水的N-(二甲基氨基丙基)-N1-乙基碳二亚胺盐酸盐(购自Fluka Chemical Co.)加到该反应混合物中,N-乙基碳二亚胺盐酸盐与C-多糖抗原的重量比是约1-1.92。
室温搅拌2小时后,用稀NaOH将得到的混合液pH调节到约9.0。继续在室温下搅拌该培养物1小时,然后4℃过夜。
实施例4-亲和柱制备和抗体纯化
在实施例3的配体溶液中,加入稀HCl使其pH至7.0。选择Isco Inc.的FormylSpherilose作为免疫吸附凝胶的基质。用已知程序,如“Spherilose应用”,ISCO应用简报78,28-35页所述的,将C-多糖抗原的配体和该基质偶联。可用其它已知基质和偶联程序代替。
将凝胶填装入柱,并用蒸馏水、0.2M pH2.5的甘氨酸-HCl溶液、3倍离子强度的pH7.2磷酸缓冲盐水和常规强度的pH7.2PBS洗涤,每种溶液用5-10凝胶柱体积。
然后用得到的活化柱亲和纯化抗体,从而产生了抗原特异性抗体,如下:
将针对热杀死全细胞的肺炎链球菌菌株R6(ATCC号39938)的兔抗血清与无水NaCl混合,使NaCl最终浓度为0.5M,8,500rpm离心该混合物20分钟,将上清液滤过棉花。将滤液加到亲和柱上。用三倍强度的pH7.2磷酸缓冲盐水和常规强度的pH7.2的磷酸缓冲盐水从柱上洗涤除去未结合的成分。用0.2M pH2.5甘氨酸-HCl缓冲液从柱上洗脱出抗体。在Beckman分光光度计上280纳米处监测洗脱液,将含有抗体的组分合并在置于冰浴中的烧瓶内。用pH9.0、0.5M NaH2PO4水溶液中和合并的组分。
在分光光度计上,用280纳米处的吸光度值评估抗体的浓度。
对pH7.2的PBS透析抗体溶液,在从Amicon获得的PM-10滤膜上浓缩,直到达到0.8-1.5mg/ml的抗体浓度。
发现从如此处理的每25毫升肺炎链球菌菌株R6的兔抗血清中可回收18-20毫克亲和纯化的抗体。
如在下一个实施例中所述,在肺炎链球菌C-多糖抗原特异性的ICT试验中采用了这些亲和纯化的抗体。
                      实施例5-ICT装置及其制备
A. 试验装置的制备:
如图1所示,制备了一试验装置,它含有一装有铰链的纸板箱,箱上有一窗口,可同时观察试验结果和对照结果。该装置有一凹槽,在槽中置有预制的塑料拭子孔,用于接受右侧沾有样品的拭子(在图中标为1)。然后将图1A中所示的外贴条贴在该装置的整个右侧。该外贴条上有两个孔-下方的孔(在图1A中标为B)中将插入饱和的拭子,而上方的(在图1A中标为B)孔可将插入孔B的拭子推到该孔(A)中。外贴条和它的孔A和B的位置,和拭子孔共同操作,在试验过程中可将拭子固定在恰当位置,并促进吸附的液体从拭子上排出。
如下所述,将一预装配的测试条(图1中标为C)插入凹槽(图1中标为2),并通过与凹槽底部粘合而固定。将图1B中所示的外贴条置于左手侧顶部。它上面有一个孔(图1B中标为D),当该装置关闭进行试验时孔D和右侧的孔A相匹配。
将装配好的该装置保存于密封的、装有干燥剂的袋中,直到使用。在密封和储藏前,将一条略带粘性的胶带置于该装置右半边的外缘上。
B. 测试条的构建和制备
图1C显示了预装配条的构建。它由一块吸收材料的偶联物纸垫构成,其中浸润了金颗粒和如上所述的抗原特异性家兔抗-肺炎链球菌C-多糖抗原抗体的偶联物。一块桥梁纸垫Ahlstrom 1281(未显示)将该偶联物纸垫和硝酸纸垫连接,它上面有一条与该偶联物反应的样品捕获线,它是通过嵌入如上所述制备的一条抗原特异性的家兔抗-肺炎链球菌C-多糖抗原的抗体条建立的。硝酸纤维素纸垫还有一条下游对照线,通过用山羊抗-家兔免疫球蛋白(IgG)在板上划线建立。沿着硝酸纤维素纸垫,该条带终止于吸收纸垫,吸收纸垫起到液体贮器的作用。所有这些纸垫背面都用黏胶带固定并置于装置中。
偶联物纸垫常用无纺聚酯或挤压乙酸纤维素酯制备。为了制备用于该试验的纸垫,将50纳米直径的金颗粒与如上所述制备的亲和纯化的家兔抗-肺炎链球菌C-多糖抗体偶联。用已知的,如DeMay于Polak,J.M.和Van Norden,S.(编), 疫化学:现代方法和应用(Wright,bristol,England,1986)所述的方法实现了该偶联。将偶联金颗粒与干燥剂混合,该干燥剂由含有1.0%BSA、0.1% Triton X-100、2.0%Tween 20、6.0%蔗糖和0.02%叠氮化钠的,pH8.0的5mM四硼酸钠水溶液构成。对纸垫充分加热,除去所有存在的液体,并储藏在低湿度环境中,直到装配测试条。这些纸垫及其处理是特别选定的,从而使纸垫能保持住干燥的偶联物,并仅在随后被样品浸湿时才释放它。
首先将一纸条亲和纯化的家兔抗-肺炎链球菌C-多糖抗体(用磷酸缓冲盐水作载体溶液)嵌入硝酸纤维素纸垫的第一部分。这些抗体作为捕获线。在装配好的测试装置第一部分的下游,纸垫的第二部分中,用溶于同一载体溶液的山羊抗-家兔IgG在该纸垫表面划线,建立对照线。然后18-25℃干燥硝酸纤维素纸垫,以促使蛋白质划线条被纸垫永久吸收。
所用的吸水纸垫是可商品购得的以商品名Ahlstrom 939出售的纤维素材料。该纸垫不需要特殊处理。
C. 试剂盒制备
如商品所售,装配含有做好的测试条的该试验装置。在实施中,许多装置和同等数量的拭子包装在一起,这些拭子采用纤维状Dacron,以及一瓶“试剂A”,装试剂A的该瓶子有一适合滴加试剂A的瓶盖。“试剂A”是2.0%Tween 20,0.05%叠氮化钠和0.5%十二烷基磺酸钠的0.05MpH6.5柠檬酸钠-磷酸钠缓冲液的溶液。在各试剂盒中还包括了阳性和阴性对照。
实施例6-进行ICT试验
在实施中,将各装置配备的拭子浸入液体样品中,完全浸没拭子头。拭子的用途是作为液体生物学样品,如尿、血液、淋巴液等,和环境学液体样品中存在的不溶解固体、半固体和胶体的过滤器,在Norman Moore和Vincent Sy,1998年3月19日提交的待批申请号09/044,677(随后被转让给Binax,Inc.)的内容中有所描述。将拭子插入该装置底部的孔(图1A的孔B),并轻轻向上推,使拭子尖端在顶部孔(图1A的孔A)中可见。将试剂A小管垂直倒置于孔B上方,缓慢滴加3滴试剂A。然后立即剥离该装置右侧边缘的粘性带,关闭该装置,安全密封,从而将拭子孔中的拭子推入正对金偶联物纸垫的拭子孔。15分钟后,可在该装置窗口读到结果。阴性样品-即不含肺炎链球菌C-多糖抗原的样品-将在窗口上半部只显示对照线。含有靶抗原的阳性样品将显示两条线,下面的一条是病人(或样品)线;甚至一条微弱的样品线也表明样品中存在的靶抗原。如果15分钟后在窗口中还未出现任何线条,或仅在窗口下半部出现样品线,则该试验是无效的,必须重做。
使用上述程序,在前述ICT程序中以实施例5所述制备的装置对146个来自疾病控制中心的病人尿样测试。由于与肺炎链球菌感染有关的病人诊断是根据各种不同指标,包括血培养、革兰氏染色、痰培养、自溶酶PCR和肺炎球菌自溶酶PCR,但没有尿试验结果,在我们的实验室中每个样品都用本文所述的ICT和ELISA测试了肺炎链球菌C-多糖抗原的存在。
进行ICT和ELISA试验的人员未被告知疾病控制中心对这些尿样是从诊断为肺炎链球菌感染阳性还是从阴性的病人中得到的。发现ICT和ELISA的结果在最低的程度上,在134个例子中灵敏度和特异性是基本相当的。然而要注意,某些例子中ELISA和ICT试验的结果都和疾病控制中心提供的病人诊断不完全一致。据信,本领域认为这种培养结果的评价不足以作为诊断肺炎链球菌感染的基础,并且不能提供任何关于给予病人何种药物治疗的信息、或不能提供相对于采集尿样时间的开始治疗的时间信息,这阻碍了对所有结果进行有意义的完全比较。
在134例中ICT和ELISA结果基本可比,从而肯定了本发明的15分钟ICT试验可提供对肺炎链球菌引起的感染的快速诊断和随之早期制定最有效的病人治疗方案的优点。
                        实施例7-临床试验
用实施例5所述制备的装置,和实施例6第一段所述的ICT程序,在3个地点用特征明确的标本库进行了临床研究。包括住院和门诊病人的273份尿样品。在273个病人中,35个得出血培养阳性结果,238个得出血培养阴性结果(应注意的是,培养方法常常随地方变化有很大的不同)。推测血培养阳性的病人尿样是在采集血样并开始施用抗生素24小时内收集的。在血培养试验阴性的238个病人的尿样中,28个是从菌血症病人收集的,4个是从脓胸病人收集的,53个是从肺炎病人收集的,而153是从患有尿道感染的病人收集的。
另外,在本发明与实施例5制备的装置和实施例6所述ICT程序的试验中,从患有未知感染的个人中收集了100个尿样。这些人的血样培养试验阴性。
在血培养试验中测试肺炎链球菌阳性的35个病人尿中,30个本发明试验结果阳性,5个结果阴性。在病人的338个尿样品中,血培养试验均为阴性,100个被假定为阴性;在本发明试验中21个阳性,317个测试阴性。计算出ICT试验的灵敏度为86%,特异性是94%,准确率是93%。
应注意的是,尿肺炎链球菌ICT测试阳性,和血培养肺炎链球菌呈阴性结果的病人中,用其它试验确定,患有尿道感染的病人中,5人有大肠杆菌感染,2人有阴沟肠杆菌感染,3人有乳杆菌感染,1人有斯氏普罗威登斯菌(PovidenciaStuartii)感染,1人有金黄色葡萄球菌感染,1人有链球菌(非甲非乙)感染,1人有链球菌(非丁)感染。患肺炎的两人也有结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)感染,1人有堪萨斯分枝杆菌(Mycobacterium kansasii)感染。1位菌血症病人也有奇异变形菌(Proteus mirabilis)感染。4位未知感染的病人尿样用本发明的ICT试验测试为阳性。
                        实施例8-临床试验
在7家医院进行了试验,6家在美国,1家在西班牙,评估了215位住院和出院病人(患有下呼吸道症状和败血症症状之一,或怀疑携带肺炎球菌)的尿样。在这些试验中,在实施例6的程序中使用了根据实施例5制备的装置,将结果和对同一病人的血样进行的血培养结果比较。未进行确定培养方法在参与的医院之间的一致性。
血培养评估结果肺炎链球菌31个阳性和184个阴性。在31个血培养阳性的病人中,对尿样进行本发明的ICT试验显示28个阳性和3个阴性。对于184个血培养结果阴性的病人,45个尿样本发明ICT试验为阳性,而139个病人尿样测试为阴性。该测试中本发明试验的灵敏度计算为90%,特异性为76%,准确率为78%。
必须结合与培养试验有关的公知问题,以及约80%肺炎球菌感染病人不产生含有肺炎链球菌的血样的可能性,来考虑实施例7和实施例8中本发明的ICT试验获得的结果。相信用本发明的试验作进一步实验,将令人可信的证明其特异性、灵敏度和准确率在实施例7和8中被低估了,因为使用了血培养实验作为比较。
                  实施例9-进一步的交叉反应性试验
使用实施例5制备的装置和实施例6的程序,测试了浓度为106-109CFU/ml的144种细菌。测试的各细菌在合适的琼脂上生长,并在37℃,5%CO2培育过夜,检查平板的纯度,选择良好分离的菌落用于测试。
在144种细菌中,仅一种-缓症链球菌ATCC#49456,得出了阳性结果,从而是交叉反应性的。这是如上文预期的,因为己知缓症链球菌含有本发明的试验设计要检测的C-多糖细胞壁抗原。
下列每种细菌都获得了本发明试验的阴性结果:无硝不动杆菌(Acinetobacter anitratus)(ATCC#49136),鲍氏不动杆菌(Acinetobacterbaumanii)(ATCC#1906-T),乙酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)(ATCCNo.49466),溶血不动杆菌(Acinetobacter haemolyticus)(ATCC#19002),腺病毒2和3(从疾病控制中心获得的合并纯培养样品),粪产碱菌(Alcaligenesfaecalis)(ATCC#6633),百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis)(ATCC#3467),粘膜炎布兰汉氏球菌(Branhamella catarrhalis)(ATCC#25238-T),皮炎芽生菌(Blastomyces dermatitidis)(从疾病控制中心获得的纯培养物,菌株号未知),白色念珠菌(Candida albicans)(ATCC#e10231,14053和60193,每种分别测试),类星形念珠菌(Candida stellatoides)(ATCC#11006),弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freudii)(ATCC#375GT),粗球孢子菌(Coccidiodes immitis)(疾病控制中心获得的纯培养物,菌株号未知),库氏棒杆菌(Corynebacteriumkutscheri)(ATCC#15677-T),马氏棒杆菌(Corynebacterium matruchotii)(ATCC#14266-T),假白喉棒杆菌(Corynebacterium pseudodipheriticum)(ATCC#10700-T),阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)(ATCC#1304-T,23355,35030和49141,每种分别测试),鸟肠球菌(Enterococcus avium)(ATCC No.49462),耐久肠球菌(Enterococcus durans)(ATCC#49135),屎肠球菌(Enterococcusfaecalis)(ATCC#19433-T,29212,49477,49478,49149和51299,每种分别测试),大肠杆菌(Escherichia coli)(ATCC#23513,8739,23514,25922,35218,1173GT,35421和15669和一种未编号的样本,各分别测试),赫氏埃希氏菌(Escherichia hermannii)(ATCC#33650-T和4648GT,各分别测试),吲哚金黄杆菌(Flavobacterium indologenes)(ATCC#49471),脑膜炎金黄杆菌(Flavobacterium meningosepticum)(ATCC#49470),阴道加德纳氏菌(Gardnerella vaginalis)(ATCC#14018-T)流感嗜血菌(Haemophilusinfluenzae)(ATCC#9006),流感嗜血菌b(Haemophilus influenzae,b)(ATCC#9795和33533,每种分别测试),流感嗜血菌c(ATCC#9007),流感嗜血菌d(ATCC#9008),流感嗜血菌e(ATCC#8142),流感嗜血菌f(ATCC#9833),流感嗜血菌NT(ATCC#49144,49247和49766,每种分别测试),副流感嗜血菌(ATCC#3339Z-T,从疾病控制中心作为纯培养物获得),荚膜组织胞浆菌(Histoplasmacapulatum)(从疾病控制中心获得的两种分离的纯培养物,每种分别测试),产酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)(ATCC#43086和49131,每种分别测试),肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)(ATCC#13882,13883-T和49472,每种分别测试),嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)(ATCC#4356),干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)(ATCC#393),加氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)(ATCC#33323),詹氏乳杆菌(Lactobacillus jensenii)(ATCC#25258),侵肺军团菌(Leginella pneumophila)(ATCC#33152),单核细胞增生利斯特氏菌(Listeriamonocytogenens)(ATCC#7644),藤黄微球菌(Micrococcus luteus)(ATCC#9341和49732,各分别测试),奥斯陆莫拉氏菌(Moraxella osloensis)(ATCC#15276),摩氏摩根氏菌(Morganella morganii)(ATCC#25830-T),生殖道枝原体(Mycoplasma genitalium)(ATCC#33530,从疾病控制中心作为纯培养物获得),人型枝原体(Mycoplasma hominis)(ATCC#27545,从疾病控制中心作为纯培养物获得)(Mycoplasma pneumoniase)(FH2型,从疾病控制中心作为纯培养物获得)灰色奈瑟氏菌(Neisseria cinerea)(ATCC#14685),淋病奈瑟氏菌(Neisseriagonorrheae)(ATCC#8660,19424-T和27631,各分别测试),乳糖奈瑟氏菌(Neisseria lactamica)(ATCC#23970-T),脑膜炎奈瑟氏菌(Neisseriameningitidis)(ATCC#13077-T),微黄奈瑟氏菌(Neisseria subflava)(ATCC#49275),皮诺卡氏菌(Nocardia farcinia)(从疾病控制中心作为纯培养物获得),巴西副球孢子菌(Paracoccidiodes brasiliensis)(菌株#未知,从疾病控制中心作为纯培养物获得)副流感1型(菌株C39,从疾病控制中心作为纯培养物获得),副流感2型(菌株号A47885,从疾病控制中心作为纯培养物获得),奇异变形菌(Proteus mirabilis)(ATCC#7002和12453,各分别测试),普通变形菌(Proteusvulgaris)(ATCC#13315-T和49132,各分别测试),斯氏普罗威登斯菌(Providenciastuartii)(ATCC#49809),铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)(ATCC#15442和27853,各分别测试),洋葱伯克霍尔德氏菌(Pseudomonas cepacia)(ATCC#25416-T),皮氏伯克霍尔德氏菌(Pseudomonas pickettii)(ATCC#49129),恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)(ATCC#49128),腐败假单胞菌(Pseudomonasputrefaciens)(ATCC#49138),施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)(ATCC#17588-T),合并的呼吸道合胞病毒(病毒株A2和ATCC#18573的合并样本,从疾病控制中心作为纯培养物获得),鼻病毒(ATCC#088和077,各从疾病控制中心作为纯培养物获得,各分别测试),古巴沙门氏菌(Salmonella cubana)(ATCC#12007),肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)(ATCC#13076-T),甲型副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphi A)(ATCC#9150),伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphi)(ATCC#6539),粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)(ATCC#13880-T),多食鞘氨醇杆菌(Sphingobacterium multivorum)(ATCC#35656),金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)(ATCC#12598,6538P,25923,29213,43300和49476,各分别测试),表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)(ATCC#12228,14990-T,49134和49461,各分别测试),溶血葡萄球菌(Staphylococcushaemolyticus)(ATCC#29970-T),腐生葡萄球菌(Staphylococcussaprophyticus)(ATCC#15305-T和49907,各分别测试),木糖葡萄球菌(Staphylococcus xylosis)(ATCC#49148),嗜麦芽糖寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)(ATCC#13637-T),咽峡炎链球菌(Streptococcusanginosus)(ATCC#9895),牛链球菌(Streptococcus bovis)(ATCC#49133),甲型链球菌(ATCC#1357和19615,各分别测试),乙型链球菌(ATCC#13813-T,12386,12400,12401,27591,12973,12403和31475,各分别测试),丙型链球菌(ATCC#12388),己型链球菌(ATCC#12392),戊型链球菌(ATCC#12394),变异链球菌(Streptolococcus mutans)(Shockman株),副血链球菌(Streptococcusparasanguis)(ATCC#15909),血链球菌(Streptococcus sanguis)(ATCC#10556-T),阴道毛单胞菌(Trichomonas vaginalis)(ATCC#085和520,各分别从疾病控制中心作为纯培养物获得,并分别测试)。
                实施例10-对健康和患病儿童的临床实验
正在进行对健康和患病儿童的临床实验,至今尚未完成。初期的各地结果显示,使用如实施例6中所述制备的装置,并根据实施例7中所述程序,在3个诊断患有鼻窦炎的儿童中,2个的尿中检测到了肺炎链球菌。相信,另一鼻窦炎病例(其中该儿童的尿测试为阴性)可能涉及一种不同的病原体。
在同样的实验中,用本发明的装置和方法在具有明显脑膜炎症状的儿童的脑脊髓液中检测到了肺炎链球菌,使该儿童能得到迅速有效的治疗处理。
实施例11-在脑膜炎病人的尿中检测肺炎链球菌抗原
让两个具有明显脑膜炎临床症状的病人住院。一个在入院前接受过抗菌药治疗,另一个没有。从各人获得脑脊髓液,并进行培养实验。实验结果是阴性的,血培养结果也一样。
作为最后的诊断方法,在实施例6所述的程序中对从各病人获得的尿样使用了根据实施例5制备的装置。在每一例中,尿样测定肺炎链球菌C-多糖细胞壁抗原呈阳性。
这些初步结果强烈提示,可常规利用尿样而不是脑脊髓液来测试肺炎链球菌引起的脑膜炎。如果进一步临床实验肯定了尿能够代替脑脊髓液作为测试基质,将对病人和医务人员都有很大的好处。脊髓抽液(通过它获得脑脊髓液)对病人来说是痛苦的,而且某种程度上还有危险。对于医务工作者,脊髓抽液耗时而且要求对细节都集中注意力。
通常免疫化学领域的技术人员,尤其是从事免疫试验的技术人员,将会知道有时其它材料、成分、其它程序步骤也可轻易的代替本文中具体推荐的那些。大量专利和非专利的文献讨论了可靠的一次性使用的免疫试验测试装置的设计和使用,该装置可代替本文描述和推荐的优选ICT装置。不应将本发明局限于可替换试验装置、材料、成分或方法步骤,除非是权利要求限制的那些。

Claims (4)

1.一种肺炎链球菌的纯化的细胞壁C-多糖抗原,其特征在于,该细胞壁C-多糖抗原含有不多于10%重量的蛋白质,所述多糖抗原是通过以下方法获得的:
(a)处理肺炎链球菌培养物,以杀死细菌细胞;
(b)在约7.0-7.4的弱碱性pH条件下,分离作为湿细胞沉淀的被杀死的细菌细胞;
(c)将步骤(b)的沉淀与足量的0.1N NaOH一起保温至少45分钟,所述0.1NNaOH将其pH提高到超过12.0,溶液中并混合;
(d)用强酸将来自步骤(c)的溶液调节到pH3以下,诱使其分层;
(e)分离步骤(d)的上清液,并用强蛋白酶处理,除去蛋白质;
(f)分离出肺炎链球菌的纯化的细胞壁C-多糖抗原,它含有不多于10%重量的蛋白质。
2.如权利要求1所述的肺炎链球菌的纯化的细胞壁C-多糖抗原,其特征在于,该细胞壁C-多糖抗原含有5-8%重量的蛋白质,其中用叠氮化钠处理杀死步骤(a)中的细菌细胞。
3.在动物体内产生的针对肺炎链球菌或其细胞壁C-多糖抗原的多价抗体,其特征在于,所述多价抗体经过亲和纯化,所述亲和纯化是将其通过层析亲和柱而赋予其抗原特异性,所述层析亲和柱上的凝胶全部是非离子交换材料,在所述非离子交换材料上偶联有权利要求1所述的纯化的细胞壁C-多糖抗原。
4.在动物体内产生的针对肺炎链球菌或其细胞壁C-多糖抗原的多价抗体,其特征在于,所述多价抗体经过亲和纯化,所述亲和纯化是将其通过层析亲和柱而赋予其抗原特异性,所述层析亲和柱上的凝胶全部是非离子交换材料,在所述非离子交换材料上偶联有权利要求2所述的纯化的细胞壁C-多糖抗原。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106244560A (zh) * 2016-09-20 2016-12-21 天津康希诺生物技术有限公司 一种C‑Ps单克隆抗体及其制备和应用

Families Citing this family (31)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6824997B1 (en) * 1998-09-18 2004-11-30 Binax, Inc. Process and materials for the rapid detection of streptococcus pneumoniae employing purified antigen-specific antibodies
US20080096236A1 (en) * 1998-08-25 2008-04-24 Binax, Inc. Method for Detecting the Presence of Target Bacteria or a Target Component Carbohydrate Antigen Thereof
US9134303B1 (en) 1998-08-25 2015-09-15 Alere Scarborough, Inc. ICT immunoassay for Legionella pneumophila serogroup 1 antigen employing affinity purified antibodies thereto
US6916626B1 (en) * 2001-04-25 2005-07-12 Rockeby Biomed Ltd. Detection of Candida
MXPA04003547A (es) * 2001-10-15 2004-07-22 Chiron Corp Tratamiento de sepsis mediante administracion de dosis bajas de inhibidor de via factor de tejido.
US7718375B2 (en) * 2002-02-27 2010-05-18 Binax, Inc. Modification of bioassays for detection of antigens characteristic of bacteria that are causative of ear and respiratory infections to eliminate false positive results caused by nasopharyngeal colonization of children
AU2003295951A1 (en) * 2003-11-26 2005-07-21 Binax, Inc. Methods and kits for predicting an infectious disease state
US20050272106A1 (en) * 2004-02-17 2005-12-08 Norman Moore Methods and kits for detection of multiple pathogens
US20080286279A1 (en) * 2004-03-17 2008-11-20 Chiron Corporation Treatment of Severe Community-Acquired Pneumonia by Administration of Tissue Factor Pathway Inhibitor (Tfpi)
US7387890B2 (en) * 2004-12-16 2008-06-17 Chembio Diagnostic Systems, Inc. Immunoassay devices and use thereof
US7189522B2 (en) 2005-03-11 2007-03-13 Chembio Diagnostic Systems, Inc. Dual path immunoassay device
WO2006098804A2 (en) 2005-03-11 2006-09-21 Chembio Diagnostic Systems, Inc. Dual path immunoassay device
US8153444B2 (en) * 2005-10-13 2012-04-10 Auric Enterprises, Llc Immuno gold lateral flow assay
US7344893B2 (en) * 2005-10-13 2008-03-18 Auric Enterprises, Llc Immuno-gold lateral flow assay
US7910381B2 (en) * 2005-10-13 2011-03-22 BioAssay Works Immuno gold lateral flow assay
US20080014657A1 (en) * 2006-07-12 2008-01-17 Beckton Dickinson And Company Use of Albumin, Bovine, P-Aminophenyl N-Acetyl B-D Glucosaminide as a Control Line for an Immunoassay Device
CN101517095A (zh) * 2006-09-26 2009-08-26 爱科来株式会社 分析用具中的试剂层的形成方法、分析用具的制造方法及分析用具
US8247220B2 (en) * 2008-02-01 2012-08-21 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Optical indicator for detecting bacterial pathogens
WO2009122714A1 (ja) 2008-03-31 2009-10-08 大塚製薬株式会社 肺炎球菌検出方法
US20100022916A1 (en) 2008-07-24 2010-01-28 Javanbakhsh Esfandiari Method and Apparatus for Collecting and Preparing Biological Samples for Testing
EP2379128A4 (en) 2008-12-23 2014-02-05 Us Gov Health & Human Serv DEVICE FOR COLLECTING PULMONARY AEROSOLS
WO2011113056A1 (en) * 2010-03-12 2011-09-15 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods for preventing and treating staphylococcus aureus colonization, infection, and disease
US8603835B2 (en) 2011-02-10 2013-12-10 Chembio Diagnostic Systems, Inc. Reduced step dual path immunoassay device and method
EP2833148A4 (en) 2012-03-30 2015-07-22 Otsuka Pharma Co Ltd METHOD FOR DETERMINING THE HEAVYNESS OF PNEUMOKOKEN PNEUMONIA
EP3126486B1 (en) 2014-04-02 2019-07-03 Chembio Diagnostic Systems, Inc. Immunoassay utilizing trapping conjugate
EP3161166A4 (en) * 2014-06-25 2017-11-29 The Rockefeller University Compositions and methods for rapid production of versatile nanobody repertoires
US20160033505A1 (en) * 2014-07-31 2016-02-04 Laborie Medical Technologies Canada Ulc Mobile Phase Test Strip Components, Conjugate Pad Pre-treatment Solutions, And Related Methods Thereof
US20160116466A1 (en) 2014-10-27 2016-04-28 Chembio Diagnostic Systems, Inc. Rapid Screening Assay for Qualitative Detection of Multiple Febrile Illnesses
TWI521063B (zh) 2015-03-10 2016-02-11 國立交通大學 生物感測裝置及分離生物分子的方法
FR3110245A1 (fr) * 2019-05-16 2021-11-19 Universite Jean Monnet Saint Etienne Procede de detection de pneumocoques
CN113063942B (zh) * 2021-03-31 2022-04-29 山东农业大学 一种检测摩氏摩根菌抗体的间接elisa检测试剂盒及应用

Family Cites Families (71)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4206094A (en) 1976-06-09 1980-06-03 California Institute Of Technology Method for producing a biological reagent
US4411832A (en) 1979-11-26 1983-10-25 Pedro Cuatrecasas Polysaccharide matrices comprising macromolecular spacer arms for use as adsorbents in affinity chromatography techniques
NL8000173A (nl) * 1980-01-11 1981-08-03 Akzo Nv Toepassing van in water dispergeerbare, hydrofobe kleurstoffen als label in immunochemische testen.
US4514509A (en) 1981-09-21 1985-04-30 Indiana University Foundation Method for the diagnosis of Legionnaires' disease
US4954449A (en) * 1982-08-24 1990-09-04 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army Human monoclonal antibody reactive with polyribosylribitol phosphate
FR2541304A1 (fr) 1983-02-21 1984-08-24 Centre Nat Rech Scient Anticorps monoclonaux anti-legionella, procede d'obtention et application au diagnostic de pneumonies
US5059591B1 (en) 1983-05-26 2000-04-25 Liposome Co Inc Drug preparations of reduced toxicity
US4703017C1 (en) * 1984-02-14 2001-12-04 Becton Dickinson Co Solid phase assay with visual readout
US5807715A (en) * 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
DE3445816C1 (de) * 1984-12-15 1986-06-12 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Flaechenfoermiges diagnostisches Mittel
US4888279A (en) * 1984-12-21 1989-12-19 Thomas Jefferson University Novel immunosorbent assays employing antibiotic keying agents
US5879881A (en) * 1985-04-04 1999-03-09 Hybritech, Incorporated Solid phase system for use in ligand-receptor assays
US4751190A (en) * 1985-07-22 1988-06-14 Abbott Laboratories Fluorescence polarization immunoassay and reagents for use therein
TW203120B (zh) * 1985-10-04 1993-04-01 Abbott Lab
ATE195022T1 (de) * 1987-04-27 2000-08-15 Unilever Nv Spezifische bindungstestverfahren
US4943522A (en) * 1987-06-01 1990-07-24 Quidel Lateral flow, non-bibulous membrane assay protocols
US5098827A (en) * 1988-02-26 1992-03-24 The University Of Florida Novel bacterial markers for pathogenic group B streptococci
AU4128089A (en) * 1988-09-15 1990-03-22 Rorer International (Overseas) Inc. Monoclonal antibodies specific to human epidermal growth factor receptor and therapeutic methods employing same
US5139933A (en) * 1989-09-26 1992-08-18 Vicam, L.P. Assay method for detecting listeria
US5075078A (en) 1989-10-05 1991-12-24 Abbott Laboratories Self-performing immunochromatographic device
US5198339A (en) 1990-07-13 1993-03-30 Board Of Regents, The University Of Texas System Method for detection of gram-negative bacterial lipopolysaccharides in biological fluids
NZ239643A (en) 1990-09-17 1996-05-28 North American Vaccine Inc Vaccine containing bacterial polysaccharide protein conjugate and adjuvant (c-nd-che-a-co-b-r) with a long chain alkyl group.
US5571511A (en) * 1990-10-22 1996-11-05 The U.S. Government Broadly reactive opsonic antibodies that react with common staphylococcal antigens
DE69130955T2 (de) 1990-12-21 1999-07-01 Antex Biolog Inc Adhesin-oligosaccharid-impfstoffkonjugate für -i(haemophilus influenza)
US5843463A (en) 1990-12-21 1998-12-01 Antexbiologics, Inc. Adhesin-oligosaccharide conjugate vaccine for Haemophilus influenzae
CA2059693C (en) * 1991-01-28 2003-08-19 Peter J. Kniskern Polysaccharide antigens from streptococcus pneumoniae
CA2059692C (en) * 1991-01-28 2004-11-16 Peter J. Kniskern Pneumoccoccal polysaccharide conjugate vaccine
US6168956B1 (en) 1991-05-29 2001-01-02 Beckman Coulter, Inc. Multiple component chromatographic assay device
JP3176659B2 (ja) 1991-09-05 2001-06-18 本田技研工業株式会社 電気自動車
WO1993009811A1 (en) * 1991-11-22 1993-05-27 Univax Biologics, Inc. TYPE I AND TYPE II SURFACE ANTIGENS ASSOCIATED WITH $i(STAPHYLOCOCCUS EPIDERMIDIS)
EP0646179A4 (en) * 1992-02-04 1996-10-02 Quidel Corp PROCESS FOR SIMPLIFIED EXTRACTION OF BACTERIAL ANTIGENS USING DEHYDRATE REAGENTS.
GB9224584D0 (en) 1992-11-23 1993-01-13 Connaught Lab Use of outer membrane protein d15 and its peptides as vaccine against haempohilus influenzae diseases
JP3281075B2 (ja) * 1992-12-28 2002-05-13 日本ジーイープラスチックス株式会社 熱可塑性樹脂組成物
EP0705426A4 (en) * 1993-06-09 1998-07-08 Quidel Corp SPECIFIC ONE-STEP TITRATIONS OF AN ANTIGEN
US5455032A (en) * 1993-07-29 1995-10-03 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Use of phosphocholine hapten conjugates in vaccines
US5415994A (en) * 1993-08-02 1995-05-16 Quidel Corporation Lateral flow medical diagnostic assay device with sample extraction means
US5367058A (en) 1993-08-25 1994-11-22 Becton, Dickinson And Company Modified antibodies with increased affinity
AU2638595A (en) * 1994-05-16 1995-12-05 Uab Research Foundation, The (streptococcus pneumoniae) capsular polysaccharide genes and flanking regions
US5665561A (en) * 1994-06-06 1997-09-09 The Rockefeller University Modulators of pneumococcal adherence to pulmonary and vascular cells and diagnostic and therapeutic applications
US6057421A (en) * 1994-11-30 2000-05-02 Immpheron, Inc. Variable heavy and light chain regions of murine monoclonal antibody 1F7
US5695768A (en) * 1995-06-07 1997-12-09 Alberta Research Council Immunostimulating activity of Streptococcus pneumoniae serotype 8 oligosaccharides
US6355255B1 (en) * 1998-12-07 2002-03-12 Regents Of The University Of Minnesota Streptococcal C5a peptidase vaccine
FR2746316B1 (fr) 1996-03-19 1998-06-12 Guerlain Nouvelles compositions cosmetologiques ou dermatologiques
US6245335B1 (en) * 1996-05-01 2001-06-12 The Rockefeller University Choline binding proteins for anti-pneumococcal vaccines
DE69724515T2 (de) * 1996-06-07 2004-04-01 Oxoid Ltd., Basingstoke Vorrichtung und Testsatz zum Test von Serum und dergleichen
AUPO071396A0 (en) 1996-06-28 1996-07-25 Chandler, Howard Milne Chromatographic assay or test device
JP3517808B2 (ja) 1996-07-17 2004-04-12 日本酸素株式会社 気相成長方法及び装置
US5770208A (en) * 1996-09-11 1998-06-23 Nabi Staphylococcus aureus B-linked hexosamine antigen
US5871951A (en) * 1996-09-23 1999-02-16 The Children's Hospital Of Philadelphia Compositions and methods for treatment of infection caused by Haemophilus influenzae and Streptococcus pneumoniae
US5798273A (en) * 1996-09-25 1998-08-25 Becton Dickinson And Company Direct read lateral flow assay for small analytes
US6194221B1 (en) * 1996-11-19 2001-02-27 Wyntek Diagnostics, Inc. Hybrid one-step immunochromatographic device and method of use
US6979576B1 (en) * 1997-07-25 2005-12-27 Shu-Ching Cheng Methods of use of one step immunochromatographic device for Streptococcus A antigen
US6676946B2 (en) * 1997-03-27 2004-01-13 Institut Pasteur Multiple antigen glycopeptide carbohydrate vaccine comprising the same and use thereof
JP3411186B2 (ja) 1997-06-06 2003-05-26 シャープ株式会社 不揮発性半導体記憶装置
US6610293B1 (en) * 1997-06-16 2003-08-26 The Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Opsonic and protective monoclonal and chimeric antibodies specific for lipoteichoic acid of gram positive bacteria
WO1999008705A1 (en) * 1997-08-20 1999-02-25 Brigham And Women's Hospital Capsular polysaccharides from enterococci
US6303114B1 (en) 1998-03-05 2001-10-16 The Medical College Of Ohio IL-12 enhancement of immune responses to T-independent antigens
JP3645711B2 (ja) * 1998-05-27 2005-05-11 松下電器産業株式会社 光ディスク装置および光ディスク制御方法
US6824997B1 (en) * 1998-09-18 2004-11-30 Binax, Inc. Process and materials for the rapid detection of streptococcus pneumoniae employing purified antigen-specific antibodies
WO2000016803A1 (en) 1998-09-18 2000-03-30 Binax, Inc. Process and materials for the rapid detection of streptococcus pneumoniae employing purified antigen-specific antibodies
US6495139B2 (en) * 1998-11-19 2002-12-17 St. Jude Children's Research Hospital Identification and characterization of novel pneumococcal choline binding protein, CBPG, and diagnostic and therapeutic uses thereof
GB9902659D0 (en) * 1999-02-05 1999-03-31 Microbiological Res Authority Assay with reduced background
US6566500B1 (en) * 1999-03-30 2003-05-20 Board Of Regents, The University Of Texas System Compositions and methods for modifying toxic effects of proteinaceous compounds
US7169903B2 (en) * 2001-12-21 2007-01-30 Biosynexus Incorporated Multifunctional monoclonal antibodies directed to peptidoglycan of gram-positive bacteria
US7718375B2 (en) * 2002-02-27 2010-05-18 Binax, Inc. Modification of bioassays for detection of antigens characteristic of bacteria that are causative of ear and respiratory infections to eliminate false positive results caused by nasopharyngeal colonization of children
US20060121058A1 (en) * 2002-08-08 2006-06-08 Children's Medical Center Corporation Anti-pneumococcal preparations
WO2004050846A2 (en) * 2002-12-02 2004-06-17 Biosynexus Incorporated Wall teichoic acid as a target for anti-staphylococcal therapies and vaccines
AU2007285775B2 (en) * 2006-08-17 2011-03-03 Sanofi Pasteur Ltd. Immunogenic PcpA polypeptides and uses thereof
CN101021526B (zh) * 2007-03-16 2012-01-25 艾博生物医药(杭州)有限公司 一种直观显示检测结果的装置和方法
WO2009122714A1 (ja) * 2008-03-31 2009-10-08 大塚製薬株式会社 肺炎球菌検出方法
AU2015208821B2 (en) * 2014-01-21 2017-11-02 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106244560A (zh) * 2016-09-20 2016-12-21 天津康希诺生物技术有限公司 一种C‑Ps单克隆抗体及其制备和应用
CN106244560B (zh) * 2016-09-20 2019-07-02 康希诺生物股份公司 一种C-Ps单克隆抗体及其制备和应用

Also Published As

Publication number Publication date
US20080241191A1 (en) 2008-10-02
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