JPS60224068A - 日和見感染における病原菌の判定方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （技術分野） 本発明は日和見感染症（Ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｓｔｉｃ　
１ｎｆｅｃ−ｔｉｏｎ）における病原菌の種類を判定す
る方法に関する。

（従来技術） 長期間の病気や極度の疲労などにより体力が低下してい
るとき、あるいは抗生物質の大量投与により体内の常在
菌が大量に死滅しているときには。

体内の微生物のフローラが大きく乱れるため常態におい
ては病原菌となり得ない、生体の内外に広く分布する微
生物により感染症がひき起こされる。

これが日和見感染症であり２例えば、肺や心臓に大量の
大腸菌が増殖し死亡する例もある。臨床麻酔ユ（４）　
、　４７７−４８５　（１９８３年）にはこのようなタ
イプの感染症として種々の内蔵真菌症が報告されている
。本発明者でもある久米等のＭｅｄ　ｉｃａ　ＩＴｅｃ
ｈｎｏｌｏｇｙ　ｖｏｌ、１０＋　Ｎｏ、１（１９８２
年）によれば、何らかの疾患による死亡例２０００件の
剖検の結果、基礎疾患の種類にかかわらず７０〜８０％
の割合で感染症が認められ、このうち感染症が直接死因
と関係する中等度以上の感染症は１２３０例（６１，５
％）であることが述べられている。そしてこれらの感染
症の大部分は日和見感染症である。日和見感染の原因と
なる微生物は常態において生体内に存在するため、どの
微生物により感染症が起きているのかが判断されにくい
。これを判断するには、もっばら、培養検査が行われて
いる。これは、感染症の原因となりそうな菌が増殖する
のに適した複数の培地を準備し、これに血液や喀痰など
からの生体試料を接種し培養を行う方法である。この培
養検査には培地や試料を調製しなければならないうえに
、接種、培養という繁雑な工程が必要である。

しかも、そのための設備も必要である。そのため。

中小規模の医療施設では検査を外部へ依頼せざるを得な
い。培養検査の結果が出るまでには２通常。

最低２〜３日を要するため設備の整った大病院において
も検査結果が出るころには患者が死亡しているような症
例も出現する。

真菌と真菌症２４　（３）　、　１７２−１７８　（１
９８３年）には２日和見感染症のひとつである内臓真菌
症の患者は末梢白血球総数、特に成熟好中球数が大幅に
低減することが述べられている。しかし、末梢白血球総
数が減少しても内臓真菌症であることは言えない。この
ように日和見感染の予知を可能にする方法について種々
の方法が模索されつつあるが。

いまだ充分な知見は得られていない。強い病原性をもっ
た感染菌による感染症は抗生物質の投与などでその数は
大幅に減少している反面９日和見感染症は毎年、確実に
増加している。このような現状から日和見感染症におけ
る病原菌の簡便でかつ正確な診断方法の確立が望まれて
いる。

（発明の目的） 本発明の目的は、感染症が日和見感染によるものである
か否かを簡単な操作で短時間のうちに判定しろる方法を
提供することにある。本発明の他の目的は１日和見感染
症の原因となっている病原菌の種類を簡単な操作で短時
間のうちに判定しうる方法を提供することにある。

（発明の構成） 本発明は日和見感染症を起こさせうる複数の菌に特有な
抗体をそれぞれ試薬化し、生体由来の試料溶液とそれぞ
れの試薬とを接触させ、抗原抗体反応の有無を確認すれ
ば、試料溶液に含まれる菌の種類が判定されうる。との
発明者らの知見にもとづいて完成された。それゆえ２本
発明の日和見感染における病原菌の判定方法は、　Ｂｓ
ｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ　に特異的な抗体を粒径０
．０７〜２０．０μｍの不活性担体に吸着させた試薬、
　Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａａｒｕ　−ｇｉｎｏｓａ
　に特異的な抗体を粒径０．０７〜２０．０μｍの不活
性担体に吸着させた試薬、　Ｓｊｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕ
ｓａｇａ　１　ａｃ　ｔ　ｉ　ａｅに特異的な抗体を粒
径０．０７〜２０．０　ｐ　ｍの不活性担体に吸着させ
た試薬、　Ａｃ１ｎｅｔｏｂａｃｔｅｒｓｐ、に特異的
な抗体を粒径　０．０７〜２０．０μｍの不活性担体に
吸着させた試薬、　５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｆａ
ｅ−ｃａｌｉｓに特異的な抗体を粒径０．０７〜２０．
０μｍの不活性担体に吸着させた試薬、　５ｅｒｒａｔ
ｉａ　ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓに特異的な抗体を粒径０．
０７〜２０．０μｍの不活性担体に吸着させた試薬、　
５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓに特異的
な抗体を粒径０．０７〜２０．０μｍの不活性担体に吸
着させた試薬、　Ｋｌｅｂｓｆｅｌｌａ　ｐｎｅｕｍｏ
ｎｓａｅに特異的な抗体を粒径０．０７〜２０．０μ鋼
の不活性担体に吸着させた試薬、　Ｃａｎｄｉｄａ　ａ
ｌｂｉｃａｎｓに特異的な抗体を粒径　０．０７〜２０
．０μｍの不活性担体に吸着させた試薬、　Ｅｎｔｅｒ
ｏｂａｃｔｅｒ　ｃｌｏａｃａｅに特異的な抗体を粒径
０．０７〜２０．０μｍの不活性担体に吸着させた試’
ｆｊ、　Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ　１ｎｆ１ｕｅｎｚａ
ｅに特異的な抗体を粒径　０．０７〜２０．０μ讃の不
活性担体に吸着させた試ｌ、　５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃ
ｕｓ　ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに特異的な抗体を粒径０．
０７〜２０．０μｍの不活性担体に吸着させた試薬およ
びＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ　ｆｒａｇｉｌｉｓに特異的
な抗体を粒径０．０７〜２０．０μｍの不活性担体に吸
着させた試薬からなる群から選択された少なくとも２種
もしくはそれ以上を生体由来の検体溶液に接触させて行
い、そのことにより上記目的が達成される。

本発明の判定方法の概略は以下のとおりである：■日和
見感染を起こしうる菌（以下９日和見感染菌という）の
培養を行う。

■得られた日和見感染菌を動物に接種し、抗血清を得る
。

■この抗血清を精製し抗体が存在する免疫グロブリンＧ
　（ＩｇＧ　）分画を得、これを不活性担体に吸着させ
て試薬を得る。

■生体から採取した検体に酵素分解など必要な処理を施
し、生体由来の試料溶液を得る。

■上記試薬と試料溶液とを混合し、凝集の有無を判断す
る。

日和見感染菌は数多く存在するが、典型的な日和見感染
菌は前述の１３種類の微生物である。これら日和見感染
菌に感染しているか否かを検査すれば９日和見感染症で
あるが否かの判断がなされうる。したがって１本発明に
おいてはこれら１３種類の日和見感染菌の純粋培養を行
う。純粋培養された日和見感染菌は滅菌され、菌体もし
くはその代謝物が免疫原として動物に接種される。動物
は家兎２モルモット、マウスなど一般に実験用に使用さ
れる動物が用いられうる。動物体内に抗体を形成させた
後、採血し、抗血清を得る。

得られた抗血清は、抗原である日和見感染菌もしくはそ
の代謝物に対して特異的な抗原抗体反応を示す。しかし
、他の日和見感染菌に対しても弱い交差反応を示しうる
。動物に接種された抗原を含む免疫原は複数の抗原決定
基を有する。したがって、形成された抗体には抗原を認
識する部位が複数個存在する。そのため、他の日和見惑
染菌に対しても交差反応が起こりうる。このような場合
には、交差反応を引き起こす日和見感染菌と抗血清とを
接触させれば、抗血清中に存在する交差反応を起こす抗
体をこの菌に吸収させることができる。このような吸収
操作を行えば交差反応はなくなり、検査を目的とする日
和見感染菌にのみ特異反応を示す抗血清が得られる。こ
の抗血清はさらに精製されて、抗体の存在するＩｇＧが
得られる。

ＩｇＧを吸着させるべき不活性担体は９粒径０．０７〜
２０．０μ印の球状合成樹脂あるいは動物の血液から得
られた赤血球である。これらは緩衝液などに分散させた
状態で用いられる。粒径０．０７〜２．００μｍの合成
樹脂担体はラテックス、そして粒径２．００〜２０．０
μｍの合成樹脂担体はゲルと呼ばれる。合成樹脂担体に
は、ポリスチレン、ポリビニルトルエン、スチレン成分
を含む共重合体、ビニルトルエン成分を含む共重合体な
どが用いられる。ラテックスあるいはゲルの表面には既
知の方法を用いてＩｇＧが物理的に吸着される。不活性
担体として赤血球を用いる場合には採取した血液にクエ
ン酸ナトリウム、　ＥＤＴＡなどの抗凝固剤を加えて遠
心分離し赤血球を得る。これにグルタルアルデヒドを加
えて赤血球の膜を固定し、タンニン酸を用いてＩｇＧを
赤血球表面に吸着させる。このようにしてＩｇＧが不活
性担体の表面に吸着された試薬が得られる。

生体から採取した血液や喀痰などの試料は、これに必要
な処理が施され、試料溶液とされる。通常は、パンクレ
アチンのリン酸緩衝液と接触させて試料に含まれる蛋白
質、脂肪などを分解する。

さらに、加熱処理を行い試料溶液と試薬との反応時に非
特異的な凝集反応の起こるのを防止する。

得られた試料溶液と試薬とを接触させると、試薬に含ま
れる抗体に対応する抗原が試料溶液中に含まれる場合に
は抗原抗体反応を起こし、凝集が認められる。ラテック
スを用いた試薬の場合には。

凝集を肉眼で観察するか特定の容器内で反応を行わせて
これを光学的に測定する。市販の自動分析器を用いて測
定することもでき９例えば日立■製自動分析装置７３６
を用いると１時間に３００検体の測定が可能である。ゲ
ルや赤血球を用いた試薬の場合には１例えば、タイター
プレートを用いた逆受身凝集反応で凝集像を判定する。

本発明の方法によれば、このように、抗原抗体反応を機
器を用いて増幅させて検出することができるため、抗原
抗体反応の有無の確認、言いかえれば目的とする日和見
感染症もしくはその代謝物が試料溶液に含まれているか
否かの判定が極めて短時間で容易にできる。この方法に
より、感染症が日和見感染症であるか否かがわかると同
時に。

その原因となる菌の種類が簡単な操作によって短時間の
うちに判定できる。

（実験例） 以下に１本発明を実験例によりさらに詳細に説明する。

スｍ （１１日日和見感染症培養：日和見感染症としてＥ。

ｃｏｌｉ　（ＩＦＯＮｏ、３３６６）を用いた。

あらかじめＢＨＩブイヨン（Ｄｉｆｃｏ社製）１００ｎ
＋ｊ！をそれぞれ分注した３本の３００　ｍ１分注フラ
スコにＥ、ｃｏｌｉをそれぞれ接種し、３７℃で４８時
間静置培養を行った。培地からそれぞれ１エーゼの菌液
をとり、　ＢＨＩ平板培地で分離培養を行い、コンタミ
ネーションのないことを確認した。

（２）免疫原の調製：チメロサールを生理食塩水に溶解
させて１％溶液とし、１００℃で３０分間加熱処理を行
った。この１％チメロサール溶液１０ｎｌずつを上記（
１１項で得られた増面ブイヨン培地に加え。

室温で１夜〜２夜放置した。この培地から１エーゼの菌
液を採取し、　ＢＨＩ平板培地で培養を行い菌が完全に
死滅していることを確認した。培地のブイヨン遠心管に
移し、　４０００ｒｐｍで１５分間遠心分離を行った。

沈渣を滅菌生理食塩水で３回遠心洗浄して菌体を得た。

この菌体のみがけの体積が全体の約２５％となるように
滅菌生理食塩水を加え、これを免疫原とした。

（３）免疫および抗血清の調製二上記（２）項で得られ
た免疫原を家兎の耳静脈内に静脈注射で０．５ｍｊ！接
種した。７２時間間隔でさらに１．０ｍ６ずつ３回接種
し、最終接種時から１９２時間後に適量の血液を採取し
た。これを４℃にて１夜放置し２フイブリンを析出させ
た。これを３００Ｏｒｐｍで１５分間遠心分離を行い、
抗血清を得た。

（４）抗血清の抗体力価測定二上記（１）項の純粋培養
されたＥ、ｃｏｌｉをＢ）ＩＩブイヨン培地で３７℃、
７２時間の条件下で培養した。得られた培養液を０．４
５μｍのミリポアフィルタ−で濾過した。濾液に０．０
１％のチメロサール生理食塩水溶液を培養液の１７１０
容量添加し、　Ｌｃｏｌｉ抗原液を得た。別に９表１に
示す２２種類の菌についても同様の操作を行い、それぞ
れの抗原液を得た。表１〜１３に記載の菌はＡＴＣＣ番
号もしくはＩＦＯ番号のついた保存株、もしくは患者の
喀痰から分離された菌である。その同定は常法の同定法
にもとづき行われた。

内径２ｆ１．長さ４ｃｍの毛細管に抗血清を５Ｎの高さ
に入れ、さらに上記のＥ、ｃｏｌｉ抗原液を積層した。

室温で９０分間静置し沈降輪が観察されることを確認し
た。抗血清を家兎の正常血清で２倍に希釈し、同様の実
験を行い、沈降輪が観察されるか否かを確認した。さら
に抗血清を同じ要領で４倍。

８倍・・・と順次倍々に希釈し、同様の実験をくりかえ
し行った。沈降輪の観察される最大の希釈率をもって抗
体力価とした。その値を表１に示す。さ　□らに、上記
２２種類の抗原液についても同様の実験を行い、沈降輪
の観察されない場合は表１において（−）で示した。沈
降輪の観察される抗原液については、上記と同様に抗血
清を希釈し沈降輪の観察される最大の希釈率を抗体力価
として示した。

表１から明らかなように、　Ｅ、ｃｏｌｉ抗原液以外に
。

Ｓ、ａｇａｌａｃｔｉａｅおよびに、ｏｘｙｔｏｃａの
抗原液を用いた場合にも沈降輪が観察された。言いかえ
れば、これらの菌と交差反応が認められた。そのため９
次に示す吸収操作を行った。

（５）吸収操作：　Ｓ、ａｇａｌａｃｔｉａｅ菌体は後
述の実験例３（１）項および（２）項の方法に従って調
製された。上記（４）項で得られた抗血清にＳ、ａｇａ
ｌａｃｔｉａｅの菌体を３７℃で３０分間接触させ吸収
操作を行った。菌体は抗血清に対し約１７５容量（見か
けの体積）使用した。菌体を遠心分離により除去し、そ
の上澄液と新しい菌体とを用いて再度吸収操作を行った
後。

菌体を遠心分離して除去した。

吸収操作後の抗血清についてＳ、ａｇａｌａｃｔｉａｅ
およびＬｏｘｙｔｏｃａとの交差反応がないことを上記
（４）項と同様に沈降輪を観察する重積法により確認し
た。このようにＳ、ａｇａｌａｃｔｉａｅの菌体と抗血
清とを接触させることにより［，０）（ｙｔｏｃａとの
交差反応も消失させることができた。吸収操作後の抗血
清の抗体力価を測定した。その結果を表１４に示す。

（６）　Ｉ　ｇ　Ｇ分画の分取二上記（５）項で得られ
た吸収操作後の抗血清を２０ｍＭリン酸生理食塩水緩衝
液（ｐＨ７，４）で２倍容に希釈した。４．０Ｍ硫酸ア
ンモニウム水溶液をアンモニア水でｐＨ７，４とし、こ
れを希釈抗血清に攪拌しながらゆっくり加え硫酸アンモ
ニウムの濃度を１．３９Ｍとした。これを−夜装置した
後１８０００ｒｐｍで３０分間遠心分離した。上滑を除
去し、沈渣に２０ｍＭリン酸生理食塩水緩衝液をはじめ
の抗血清と等容量別えた。沈渣を充分に溶解させた後上
記と同濃度の硫酸アンモニウム溶液で塩析を行った。こ
れを３回くり返し、γ−グロブリン分画を得た。得られ
たγ−グロブリン分画をセファデックスＧ２５のカラム
にかけ残存する硫酸アンモニウムを完全に除去した。こ
れをＤＥＡＥ−セファロースカラムを用いて精製し、素
通りした分画をとりＩｇＧ分画とした。ウサギＩｇＧの
分子吸光係数（Ｅ↓乱）を１３．５としてλ＝２８０ｎ
ｍの紫外線吸収からＩｇＧの濃度を算出した。

（７）試薬の調製：ソープフリーラテックスＮ−２００
（種水化学工業■製）を固形分が２．０％となるように
０．０５Ｍグリシン−水酸化ナトリウム緩衝液（ｐ）ｌ
　８．５６）で希釈しラテックス液を得た。上記（６）
項で得られたＩｇＧ分画を０．０５Ｍグリシン−水酸化
ナトリウム緩衝液で希釈しその濃度を１４００μｇ／ｍ
ｌとした。これに上記のラテックス液を等量加えて３７
℃で１時間攪拌を行い、　ＩｇＧをラテックスに吸着さ
せた。これに牛血清アルブミン（ＢＳＡ　）２％、蔗糖
１０％、アジ化ナトリウム０．２％を含有する０、０５
Ｍグリシン−水酸化ナトリウム緩衝液を等量加えた。　
このようにして感作ラテ・ノクスを含有する試薬（Ｉｇ
Ｇ　３５０μｇ／ｍｌ、ラテックス０．５％）が得られ
た。　試薬の一部をグリシン−水酸化ナトリウム緩衝液
で７倍に希釈し、約７００μｌを２鶴長のガラスセルに
入れ、　７００ｎｍの可視光での濁度を測定した。別に
ソープフリーラテックスを０．０５Ｍグリシン−水酸化
ナトリウム緩衝液で同濃度に希釈して濁度を測定した。

両者の濁度はほぼ一致し、試薬化したラテックスに自己
凝集が全く認められないことを確認した。

（８）試薬の力価測定：試薬５０μβと上記（４）項で
得られたＥ、ｃｏｌｔ抗原液５０μｌとをガラス平板上
で混合し３分間放置した。３分経過後に凝集の認められ
ることを確認した。Ｅ、ｃｏｌｉ抗原液を生理食塩水で
２倍、４倍、８倍・・・と順次希釈し、各濃度において
同様の試験を行い、凝集が認められるか否かを観察した
。凝集が認められる最大の希釈率をもって試薬の力価と
した。試薬の力価を表１５に示す。

夫１津１ （１）日和見感染菌の培養：日和見感染菌としてＰ、ａ
ｅｒｕｇｉｎｏｓａ　（ＩＦＯＮｏ、３０８０）を用い
、実験例１（１１項に準じて培養を行った。

（２）免疫原の調製：本実験例（１１項で得られたブイ
ヨン増面培地を用い、実験例１（２）項の方法に準じて
免疫原を調製した。

（３）免疫および抗血清の調製二上記（２）項で得られ
た免疫原を用い、実験例１（３）項の方法に準じて抗血
清を調製した。

（４）抗血清の抗体力価測定：　Ｅ、ｃｏｌｉＯ代わり
に本実験例（１）項で純粋培養された　Ｐ、ａｅｒｕｇ
ｉｎｏｓａを用い実験例１（４）項の方法に準じて抗血
清の抗体力価を測定した。その結果を表２に示す。表２
に示されるように他の菌との交差反応が認められたため
。

次に示す吸収操作を行った。

（５）吸収操作：　Ａｃ１ｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ　ｓｐ
、の菌体は後述の実験例４（１）項および（２）項の方
法に従って得られた。

上記（４）項で得られた抗血清と上記Ａｃｉｎｅｔｏｂ
ａｃｔｅｒｓｐ、の菌体とを用い、実験例１（５）項の
方法に準じて吸収操作を行った。　吸収操作を経た抗血
清はＡｃ１ｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ　ｓｐ、との交差反応
を示さないことが確認された。

（６）ＩｇＧ分画の分取：上記（５）項で得られた吸収
操作後の抗血清を用い、実験例１（６）項の方法に準じ
てＩｇＧ分画を得た。

（７）試薬の調製：上記（６）項で得られたＩｇＧ分画
を用い、実験例１（７）項の方法に準じて試薬の調製を
行った。

（８）試薬の力価測定：上記（７）項で得られた試薬と
上記（４）項で得られたＰ、　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ抗
原液を用い。

実験例１（８）項に準じて試薬の力価を測定した。

案櫨班ユ （１１日和見感染菌の培養二日和見感染菌としてＳ、ａ
ｇａｌａｃｔｉａｅ　（ＡＴＣＣＮｏ、１３８１３）を
用い、実験例１（１）項に準じて培養を行った。

（２）免疫原の調製二本実験例４１１項で得られたブイ
ヨン増面培地を用い、実験例１（２）項の方法に準じて
免疫原を調製した。

（３）免疫および抗血清の調製二上記（２）項で得られ
た免疫原を用い、実験例１（３）項の方法に準じて抗血
清を調製した。

（４）抗血清の抗体力価測定：Ｅ、ｃｏｌｉの代わりに
本実験例（１１項で純粋培養されたＳ、ａｇａｌａｃｔ
ｉａｅを用い、実験例１（４）項の方法に準じて抗血清
の抗体力価を測定した。その結果を表３に示す。表３に
示されるように他の菌との交差反応が認められたため９
次に示す吸収操作を行った。

（５）吸収操作：実験例１（１）項および（２）項の方
法に従ってＥ、ｃｏｌｉの菌体を得た。この菌体と本実
験例（４）項で得られた抗血清とを用いて実験例１（５
）項に準じて吸収操作を行った。吸収操作後の抗血清は
Ｅ、ｃｏｌｉとの交差反応を示さないことが確認された
。

（６）ＩｇＧ分画の分取：上記（５）項で得られた吸収
操作後の抗血清を用い、実験例１（６）項の方法に準じ
てＩｇＧ分画を得た。

（７）試薬の調製二上記（６）項で得られたＩｇＧ分画
を用い、実験例１（７）項の方法に準じて試薬の調製を
行った。

（８）試薬の力価測定二上記（７）項で得られた試薬と
上記（４）項で得られたＳ、　ａｇａｌａｃｔｉａｅ抗
原液を用い。

実験例１（８）項に準じて試薬の力価を測定した。

ス放訳土 （１）日和見感染面の培養二日和見感染菌としてＡｃ１
ｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ　ｃａｌｃｏａｃｅｔｉｃｕｓ（
ΔＴＣＣＮｏ、１５３０８）を用い、実験例１（１）項
に準じて培養を行った。

（２）免疫原の調製：本実験例（１１項で得られたブイ
ヨン増面培地を用い、実験例１（２）項の方法に準じて
免疫原を調製した。

（３）免疫および抗血清の調製二上記（２）項で得られ
た免疫原を用い、実験例１（３）項の方法に準じて抗血
清を調製した。

（４）抗血清の抗体力価測定：　Ｅ、ｃｏｌｉの代わり
に本実験例（１１項で純粋培養されたＡ、ｃａｌｃｏａ
ｃｅｔｉｃｕｓを用い、実験例１（４）項の方法に準じ
て抗血清の抗体力価を測定した。その結果を表４に示す
。表４に示されるように他の菌との交差反応が認められ
たため９次に示す吸収操作を行った。

（５）吸収操作：実験例１（１）項および（２）項の方
法に従ってＥ、ｃｏｌｉの菌体が得られた。さらに後述
の実験例１２　（１）項および（２）項の方法に従って
Ｓ　、　ｐｎｅｕｍｏｎ　ｉ　ａｅの菌体が得られた。

Ｓ、ａｇａｌａｃｔｉａｅの菌体の代わりにＥ、ｃｏｌ
ｉおよびＳ、ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの菌体をそれぞれ約
１７５容量ずつ使用し、実験例１（５）項の方法に準じ
て吸収操作を行った。　吸収操作後の抗血清はＥ。

ｃｏｌｔ、　Ｓ、ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅおよびに、　ｐ
ｎｅｕｍｏｎｉａｅとの交差反応を示さないことが確認
された。

（６）ＩｇＧ分画の分取：上記（５）項で得られた吸収
操作後の抗血清を用い、実験例１（６）項の方法に準じ
てＩｇＧ分画を得た。

（７）試薬の調製：上記（６）項で得られたＩｇＧ分画
を用い、実験例１（７）項の方法に準じて試薬の調製を
行った。

（８）試薬の力価測定：上記（７）項で得られた試薬と
上記（４）項で得られたＡ、ｃａｌｃｏａｃｅｔｉｃｕ
ｓ抗原液を用い、実験例１（８）項に準じて試薬の力価
を測定した。

大簾桝１ （１）日和見感染面の培養二日和見感染菌としてＳ、ｆ
ａｅｃａｌｉｓ　（ＩＦＯＮｏ、３１８１）を用い、実
験例１（１）項に準じて培養を行った。

（２）免疫原の調製二本実験例（１１項で得られたブイ
ヨン増面培地を用い、実験例１（２）項の方法に準じて
免疫原を調製した。

（３）免疫および抗血清の調製二上記（２）項で得られ
た免疫原を用い、実験例１（３）項の方法に準じて抗血
清を調製した。

（４）抗血清の抗体力価測定：　Ｅ、ｃｏｌｉの代わり
に本実験例（１）項で純粋培養されたＳ、　ｆａｅｃａ
ｌｉｓを用い。

実験例１（４）項の方法に準じて抗血清の抗体力価を測
定した。その結果を表５に示す。表５に示されるように
他の菌との交差反応が認められたため。

次に示す吸収操作を行った。なおＡｓｐ、　ｆｕ＋ｎｉ
ｇａｔｕｓを用いた抗原液も調製し、これについても交
差反応の有無を調べた。

（５）吸収操作：後述の実験例７（１）項および（２）
項の方法に従ってＳ、ａｕｒｅｕｓの菌体が得られた。

さらに、後述の実験例９（１）項および（２）項の方法
に従ってＣ，ａｌｂｉｃａｎｓの菌体が得られた。Ｓ、
ａｇａｌａｃｔｉａｅの菌体の代わりにＳ、ａｕｒｅｕ
ｓおよびＣ，ａｌｂｉｃａｎｓの菌体をそれぞれ約１１
５容量ずつ使用し、実験例１（５）項の方法に準じて吸
収操作を行った。吸収操作後の抗血清はＳ、ａｕｒｅｕ
ｓ　、Ｃ，ａｌｂｉｃａｎｓおよびＫ。

ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅとの交差反応を示さないことが確
認された。

（６１ＩｇＧ分画の分取：上記（５）項で得られた吸収
操作後の抗血清を用い、実験例１（６）項の方法に準じ
てＩｇＧ分画を得た。

（７）試薬の調製：上記（６）項で得られたＩｇＧ分画
を用い、実験例１（７）項の方法に準じて試薬の調製を
行った。

（８）試薬の力価測定二上記（７）項で得られた試薬と
上記（４）項で得られたＳ、　ｆａｅｃａｌｉｓ抗原液
を用い。

実験例１（８）項に準じて試薬の力価を測定した。

去辰斑■ ＋１１日和見感染菌の培養：日和見感染菌としてＳ、　
ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ　（ＩＦＯＮｏ、３０４６）を用
い、実施例１（１）項に準じて培養を行った。

（２）免疫原の調製：本実験例（１）項で得られたブイ
ヨン増面培地を用い、実験例１（２）項の方法に準じて
免疫原を調製した。

（３）免疫および抗血清の調製：上記（２）項で得られ
た免疫原を用い、実施例１（３）項の方法に準じて抗血
清を調製した。

（４１Ｅ、ｃｏｌｉの代わりに本実験例（１）項で純粋
培養されたＳ、　ｍａｒｃｅｓｓｅｎｓを用い、実験例
１（４）項の方法に準じて抗血清の抗体力価を測定した
。その結果を表６に示す。表６に示されるように他の菌
との交差反応が認められたため９次に示す吸収操作を行
った。

（５）吸収操作：実験例１（１）項および（２）項の方
法に準じてＥ、ａｅｒｏｇｅｎｅｓおよびＰ、ｍ１ｒａ
ｂｉｌｉｓの菌体を得た６Ｓ、ａｇａｌａｃｔｉａｅの
菌体の代わりにＥ、ａｅｒｏ−ｇｅｎｅｓおよびＰ、ｍ
１ｒａｂｉｌｉｓの菌体をそれぞれ約１７５容量ずつ使
用し、実施例１（５）項の方法に準じて吸収操作を行っ
た。吸収操作後の抗血清はＥ、ａｅｒｏ−ｇｅｎｅｓお
よびＰ、ｍ１ｒａｂｉｌｉｓとの交差反応を示さないこ
とが確認された。

（６１１ｇＧ分画の分取：上記（５）項で得られた吸収
操作後の抗血清を用い、実験例１（６）項の方法に準じ
てＩｇＧ分画を得た。

（７）試薬の調製二上記（６）項で得られたＩｇＧ分画
を用い、実験例１（７）項の方法に準じて試薬の調製を
行った。

（８）試薬の力価測定二上記（７）項で得られた試薬と
上記（４）項で得られたＳ、ｍａｒｃｅｓｓｅｎｓ抗原
液を用い。

実験例１（８）項に準じて試薬の力価を測定した。

大肱炭１ （１）日和見感染菌の培養：日和見惑染菌としてＳ、　
ａｕ’ｒｅｕｓ　（ＡＴＣＣＮｏ、１９６４０）を用い
、実験例１（１）項に準じて培養を行った。

（２）免疫原の調製：本実験例（１１項で得られたブイ
ヨン増面培地を用い、実験例１（２）項の方法に準じて
免疫原を調製した。

（３）免疫および抗血清の調製：上記（２）項で得られ
た免疫原を用い、実験例１（３）項の方法に準して抗血
清を調製した。

（４）抗血清の抗体力価測定：　Ｅ、ｃｏｌｉの代わり
に本実験例（１）項で純粋培養されたＳ、ａｕｒｅｕｓ
を用い実験例１（４）項の方法に準じて抗血清の抗体力
価を測定した。その結果を表７に示す。表７に示される
ように他の菌との交差反応が認められたため２次に示す
吸収操作を行った。

（５）吸収操作：実験例１（１）項および（２）項の方
法に従ってＥ、ｃｏｌｉの菌体が、実験例２（ｌ）項お
よび（２）項の方法に従ってＰ、ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ
の菌体が、実験例４（１）項および（２）項の方法に従
ってＡｃ１ｎｅｔｏｂａｃｔｅｒｓｐ、の菌体が、後述
の実験例８（１）項および（２）項の方法に従ってに、
ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの菌体が、後述の実施例１２　（
１１項および（２）項の方法に従ってＳ、ｐｎｅｕｍｏ
−ｎｉａｅの菌体がそれぞれ得られた。さらにＳ、　ｐ
ｙｏ−ｇｅｎｅｓおよびＰ、　ｍａｌｔｏｐｌｉｌｉａ
の菌体が実験例１（１１項および（２）項の方法に準じ
て得られた。

上記７種類の菌体を等量ずつ混合した混合菌体をＳ、ａ
ｇａｌａｃｔｉａｅの菌体の代わりに用い、実験例１（
５）項の方法に準じて吸収操作を行った。吸収操作後の
抗血清はＥ、ｃｏｌｉ　、Ｓ、ｐｙｏｇｅｎｅｓ、　Ｓ
、ａｇａ　−１ａｃｔｉａｅ、α−５ｔｒｅｐｔｏｃｏ
ｃｃｕｓ、　Ｓ、ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ＋　Ｓ。

ｆａｅｃａｌｉｓ＋　Ｋ、ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ＋　Ｋ
、ｏｘｙｔｏｃａ、　Ｅ、ｃｌｏａｃａｅ。

Ｓ、ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ、　Ｅ、ａｅｒｏｇｅｎｅｓ
、　Ｐ、ｍ１ｒａｂｉｌｉｓ＋Ｃ１ｔｒｏｂａｃｔｅｒ
　ｓｐ、Ｐ、ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｐ、ｍａｌｔｏｐ
ｌｉｌｉａ。

Ｐ、ｃｅｐａｃｉａ、Ｆ１ａｒｏｂａ６ｔｅｒｉｕｍ　
ｓｐ、Ａｃ１ｎｅｔｏｂａｃｔｅｒｓｐ、およびＮｅ１
ｓｓｅｒｉａ　ｓｐ、との交差反応を示さないことが確
認された。

（６）ＩｇＧ分画の分取：上記（５）項で得られた吸収
操作後の抗血清を用い、実験例１（６）項の方法に準じ
てＩｇＧ分画を得た。

（７）試薬の調製二上記（６）項で得られたＩｇＧ分画
を用い、実験例１（７）項の方法に準じて試薬の調製を
行った。

（８）試薬の力価測定二上記（７）項で得られた試薬と
上記（４）項で得られたＳ、　ａｕｒｅｕｓ抗原液を用
い、実験例１（８）項に準じて試薬の力価を測定した。

（以下余白） ス１ｕ九影 （１）日和見惑染菌の培養二日和見感染菌としてに、　
ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ　（ＡＴＣＣＮｏ、１３８８３）
を用ｔ１１．実施例１（１）項に準じて培養を行った。

（２）免疫原の調製：本実験例（１１項で得られた）゛
イコン増面培地を用い、実験例１（２）項の方法Ｇこ準
じて免疫原を調製した。

（３）免疫および抗血清の調製：上記（２）項で得られ
た免疫原を用い、実験例１（３）項の方法に準じて抗血
清を調製した。

（４）抗血−清の抗体力価測定：　Ｅ、ｃｏｌｉの代わ
りに本実験例（１）項で純粋培養されたに、　ｐｎｅｕ
ｍｏｎｉａｅを用い実験例１（４）項の方法に準じて抗
血清の抗体力価を測定した。その結果を表８に示す。表
８からこの抗血清はＬ　ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅにのみ特
異的に反応することが明らかである。そのため吸収操作
は行わなかった。

（５１１ｇＧ分画の分取：上記（４）項で得られた抗血
清−を用い、実験例１（６）項の方法に準じてＩｇＧ分
画を得た・ （６）試薬の調製：上記（５）項で得られたＩｇＧ分画
を用い、実験例１（７）項の方法に準じて試薬の調製を
行った。

（７）試薬の力価測定：上記（６）項で得られた試薬と
上記（４）項で得られたに、　ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ抗
原液を用い。

実験例１（８）項に準じて試薬の力価を測定した。

大駐璽工 （１）日和見惑染菌の培養二日和見感染菌としてＣ，ａ
ｌｂｉｃａｎｓ　（ＡＴＣＣＮｏ、１０２３１）を用い
た。

培養液としてサブローブイヨンを用い７２時間培養を行
い、サブローブドウ糖寒天培地を用いて分離培養を行い
コンタミネーションの有無を確認したこと以外は実験例
１（１）項に準じて菌の培養を行った。

（２）免疫原の調製：（１）項で得られたサブローブイ
ヨン増面培地を用い、実験例１（２）項に準じて免疫原
を調製した。ただし菌の死滅の確認にはサブローブドウ
糖寒天培地を用いた。

（３）免疫および抗血清の調製二上記（２）項で得られ
た免疫原を用い、実験例１（３）項の方法に準じて抗血
清を調製した。

（４）抗血清の抗体力価測定：　Ｅ、ｃｏｌｉの代わり
にｉ１１項で純粋培養されたＣ、　ａｌｂｉｃａｎｓを
用い、実験例１（４）項の方法に準じて抗血清の抗体力
価を測定した。その結果を表９に示す。表９に示される
ように他の菌との交差反応が認められたため１次に示す
吸収操作を行った。なおＡｓｐ、　ｆｕｍ、ｉｇａｔｕ
ｓを用いた抗原液も調製し、これについても交差反応の
有無を調べた。

（５）吸収操作：実験例１（１）項および（２）項の方
法に従ってＥ、ｃｏｌｉの菌体が、実験例７（１）項お
よび（２）項の方法に従ってＳ、ａｕｒｅｕｓの菌体が
、実験例８（１）項および（２）項の方法に従ってに、
ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの菌体がそれぞれ得られた。さら
にα−ｓ　ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｓｐ、およびＰ、
ｍａｌｔｏｐｌｉｌｉａの菌体が実験例１（１）項およ
び（２）項の方法に準じて得られた。

上記５種類の菌体を等量ずつ混合した混合菌体をＳ、ａ
ｇａｌａｃｔｉａｅの菌体の代わりに用い、実験例１（
５）項の方法に準じて吸収操作を行った。吸収操作後の
抗血清はＳ、ａｕｒｅｕｓ＋　Ｓ、ｐｙｏｇｅｎｅｓ＋
　Ｓ、ａｇａ−１ａｃｔｉａｅ、α−５ｔｒｅｐｔｏｃ
ｏｃｃｕｓ　ｓｐ、、Ｓ、ｐｎｅｕｍｏｎｆａｅ＋Ｓ、
ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｅ、ｃｏｌｉ＋　Ｋ、ｐｎｅｕｍｏ
ｎｉａｅ、に、ｏｘｙｔＯｃａ＋Ｅ、ｃｌｏａｃａｅ＋
　Ｓ、ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ＋　Ｅ、ａｅｒｏｇｅｎｅ
ｓＩ　Ｐｒｍ１ｒａｂｉｌｉｓ、Ｃ１ｔｒｏｂａｃｔｅ
ｒ　ｓｐ、、Ｐ、ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ＋　Ｐ。

ｍａｌｔｏｐｌｉｌｉａ＋　Ｐ、ｃｅｐａｃｉａ、Ｆｌ
ａｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｓｐ、＋＾ｃ’１ｎｅｔｏ
ｂａｃｔｅｒ　ｓｐ、およびＮｅ１ｓｓｅｒｉａ−ｓｐ
、との交差反応を示さないことが確認された。

（６１１ｇＧ分画の分取；上記（５）項で得られた吸収
操作後の抗血清を用い、実験例１（６）項の方法に準じ
てＩｇＧ分画を得た。

（７）試薬の調製二上記（６）項で得られたＩｇＧ分画
を用い、実験例１（７）項の方法に準じて試薬の調製を
行った。

（８）試薬Ｑ力価測定：上記（７）項で得られた試薬と
上記（４ン項で得られたＣ、ａｌｂｉｃａｎｓ抗原液を
用い。

実施例１（８）項に準じて試薬の力価を測定した。

尖題貫上工 （１）日和見感染菌の培養：日和見感染菌としてＥンｃ
ｌｏａｃａｅ　（ＡＴＣＣＮｏ、１３０４７）を用い、
実験例１（１）項に準じて培養を行った。

（２）免疫原の調製二本実験例（１１項で得られたブイ
ヨン増面培地を用い、実験例１（２）項の方法に準じて
免疫原を調製した。

（３）免疫および抗血清の調製：上記（２）項で得られ
た免疫原を用い、実験例１（３）項の方法に準じて抗血
清を調製した。

（４）抗血清の抗体力価測定：　Ｅ、ｃｏｌｉＯ代わり
に本実験例（１）項で純粋培養されたＥ、　ｃｌｏａｃ
ａｅを用い。

実験例１（４）項の方法に準じて抗血清の抗体力価を測
定した。その結果を表１０に示す。表１０に示されるよ
うに他の菌との交差反応が認められたため。

次に示す吸収操作を行った。

（５）吸収操作：実験例１（１）項および（２）項の方
法に従ってＥ、ｃｏｌｉの菌体が、実験例７（１）項お
よび（２）項の方法に従ってＳ、ａｕｒｅｕｓの菌体が
、実験例８（１）項および（２）項の方法に従ってに、
ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅめ菌体がそれぞれ得られた。Ｓ、
ａｇａｌａｃｔｉａｅの菌体の代わりにＥ、ｃｏｌｉ、
Ｓ、ａｕｒｅｕｓおよびに、ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの菌
体をそれぞれ約１７５容量ずつ使用し、実験例１（５）
項の方法に準じて吸収操作を行った。吸収操作後の抗血
清はＳ、ａｕｒｅｕｓ＋　Ｓ、ｐｙｏｇｅｎｅｓ＋　Ｓ
、ａｇａ−１ａｃｔｉａｅ、Ｓ、ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｅ
、ｃｏｌｉ＋　Ｋ、ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ。

Ｅ、　ａｅｒｏｇｅｎｅｓＩ　Ｐ、ｍ１ｒａｂｉｌｉｓ
＋　Ｃ１ｔｏｂａｃｔｅｒ　ｓｐ、およびＰ、ａｅｒｕ
ｇｉｎｏｓａとの交差反応を示さないことが確認された
。

（６１１ｇＧ分画の分取二上記（５）項で得られた吸収
操作後の抗血清を用い、実験例１（６）項の方法に準じ
てＩｇＧ分画を得た。

（７）試薬の調製二上記（６）項で得られたＩｇＧ分画
を用い、実験例１（７）項の方法に準じて試薬の調製を
行った。

（８）試薬の力価測定：上記（７）項で得られた試薬と
上記（４）項で得られたＥ、ｃｌｏａｃａｅ抗原液を用
い。

実施例１（８）項に準じて試薬の力価を測定した。

犬肱桝土上 ＋１１日和見感染菌の培養二日和見惑染菌としてＨ，１
ｎｆｌｕｅｎｚａｅ　（＾ＴＣＣＮｏ、９１３１）を用
い、実験例１（１１項に準じて培養を行った。

（２）免疫原の調製二本実験例（１１項で得られたブイ
ヨン増面培地を用い、実験例１（２）項の方法に準じて
免疫原を調製した。

（３）免疫および抗血清の調製：上記（２）項で得られ
た免疫原を用い、実験例１（３）項の方法に準じて抗血
清を調製した。

（４）抗血清の抗体力価測定：　Ｅ、ｃｏｌｉＯ代わり
に本実験例（１）項で純粋培養された　）１．１ｎｆｌ
ｕｅｎｚａｅを用い実験例１（４）項の方法に準じて抗
血清の抗体力価を測定した。その結果を表１１に示す。

表１１に示されるように他の菌との交差反応が認められ
たため。

次に示す吸収操作を行った。

（５）吸収操作：実験例１（１）項および（２）項の方
法に準じてＡｃ１ｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ　ｓｐ、および
Ｎｅ１ｓｓｅｒｉａ　ｓｐ。

の菌体が得られた。　Ｓ、ａｇａｌａｃｔｉａｅの菌体
の代わりに八ｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ　ｓｐ、および
Ｎｅ１ｓｓｅｒｉａ　ｓｐ。

の菌体をそれぞれ約１７５容量ずつ使用し、実験例１（
５）項の方法に準じて吸収操作を行った。　吸収操作後
の抗血清はＡｃ１ｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ　ｓｐ、および
Ｎｅ１ｓｓｅｒｉａｓｐ、との交差反応を示さないこと
が確認された。

（６）ＩｇＧ分画の分取：上記（５）項で得られた吸収
操作後の抗血清を用い、実験例１（６）項の方法に準じ
てＩｇＧ分画を得た。

（７）試薬の調製：上記（６）項で得られたＩｇＧ分画
を用い、実験例１（７）項の方法に準じて試薬の調製を
行った。

（８）試薬の力価測定：上記（７）項で得られた試薬と
上記（４）項で得られたＨ、　１ｎｆｌｕｅｎｚａｅ抗
原液を用い。

実験例１（８）項に準じて試薬の力価を測定した。

犬慧炎上１ （１）日和見感染菌の培養二日和見惑染菌としてＳ、　
ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ　（ＡＴＣＣＮｏ、６３０３）を
用い、実験例１（１）項に準じて培養を行った。

（２）免疫原の調製二本実験例（１１項で得られたブイ
ヨン増面培地を用い、実験例１（２）項の方法に準じて
免疫原を調製した。

（３）免疫および抗血清の調製二上記（２）項で得られ
た免疫原を用い、実験例１（３）項の方法に準じて抗血
清を調製した。

（４）抗血清の抗体力価測定：　Ｅ、ｃｏｌｉの代わり
に本実験例（１１項で純粋培養されたＳ、　ｐｎｅｕｍ
ｏｎｉａｅを用い、実験例１（４）項の方法に準じて抗
血清の抗体力価を測定した。その結果を表１２に示す。

表１２に示されるように他の菌との交差反応が認められ
たため５次に示す吸収操作を行った。なおＡｓｐ、　ｆ
ｕｍｉｇａ−ｔｕｓを用いた抗原液も調製し、これにつ
いても交差反応の有無を調べた。

（５）吸収操作：実験例７（ｌ）項および（２）項の方
法に従ってＳ、ａｕｒｅｕｓの菌体が得られた。さらに
実験例１（１）項および（２〕項の方法に準じてＳ、　
ｐｙｏｇｅｎｅｓの菌体が得られた。Ｓ、ａｇａｌａｃ
ｔｉａｅの菌体の代わりにＳ、ａｕｒｅｕｓおよびＳ、
ｐｙｏｇｅｎｅｓの菌体をそれぞれ約１７５容量ずつ使
用し、実験例１（５）項の方法に準じて吸収操作を行っ
た。吸収操作後の抗血清はＳ、ａｕｒｅｕｓ　、Ｓ、ｐ
ｙｏｇｅｎｅｓおよびＳ、ａｇａｌａｃｔｉａｅとの交
差反応を示さないことが確認された。

（６）　Ｉ　ｇ　Ｇ分画の分取二上記（５）項で得られ
た吸収操作後の抗血清を用い、実験例１（６）項の方法
に準じてＩｇＧ分画を得た。

（７）試薬の調製：上記（６）項で得られたＩｇＧ分画
を用い、−実験例１（７）項の方法に準じて試薬の調製
を行った。

（８）試薬の力価測定：上記（７）項で得られた試薬と
上記（４）項で得られたＳ、　ｐｎｅｕ＋１ｏｎｉａｅ
抗原液を用い。

実験例１（８）項に準じて試薬の力価を測定した。

叉脹■工主 ＋１１日和見感染菌の培養二日和見感染菌としてＢ、　
ｆｒａｇｉｌｉｓ　（ＡＴＣＣＮｏ、２３７４５）を用
い、実験例１（１）項に準じて培養を行った。

（２）免疫原の調製：本実験例（１１項で得られたブイ
ヨン増面培地を用い、実験例１（２）項の方法に準じて
免疫原を調製した。

（３）免疫および抗血清の調製二上記（２）項で得られ
た免疫原を用い、実験例１（３）項の方法に準じて抗血
清を調製した。

（４）抗血清の抗体力価測定：　Ｅ、ｃｏｌｉの代わり
に本実験例（１１項で純粋培養されたＢ、　ｆｒａｇｉ
ｌｉｓを用い実験例１（４）項の方法に準じて抗血清の
抗体力価を測定した。その結果を表１３に示す。表１３
に示されるように他の菌との交差反応が認められたため
９次に示す吸収操作を行った。　なおＡｓｐ、ｆｕｍｉ
ｇａｔｕｓを用いた抗原液も調製し、これについても交
差反応の有無を調べた。

（５）吸収操作：実験例１１１）項および（２）項の方
法に準じて　Ｐ、ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　の菌体が得ら
れた。Ｓ。

ａｇａｌａｃｔｉａｅの菌体の代わりにＰ、ａｅｒｕｇ
ｉｎｏｓａの菌体を使用し、実験例１（５）項の方法に
準じて吸収操作を行った。吸収操作後の抗血清はＰ、ａ
ｅｒｕｇｉｎｏｓａとの交差反応を示さないことが確認
された。

（６１１ｇＧ分画の分取：上記（５）項で得られた吸収
操作後の抗血清をｍい、実験例１（６）項の方法に準じ
てＩｇＧ分画を得た。

（７）試薬の調製二上記（６）項で得られたＩｇＧ分画
を用い、実験例１　（７）項の方法に準じて試薬の調製
を行った。

（８ン試薬の力価測定二上記（７）項で得られた試薬と
上記（４）項で得られたＢ、　ｆｒａｇｉｌｉｓ抗原液
を用い。

実験例１（８）項に準じて試薬の力価を測定した。

犬滌貫上土 実験例１〜１３で得られた試薬の精度を判断するために
次の実験を行った。

（１）試料溶液の調製：試料として日和見感染の疑いの
ある患者から喀痰を採取した。１％のパンクレアチンを
含むリン酸緩衝液（ｐｏ　７．６）を　０．２２μｍの
ミリポアフィルタ−で濾過した。このパンクレアチンリ
ン酸緩衝液と上記喀痰とを等量混合し３７℃で６０分間
反応させ、そして遠心分離を行った。この上清を採取し
、これを１００℃で５分間加熱して試料溶液とした。４
８人の患者から４８種類の試料溶液を得た。

生体から採取した試料は、このように、パンクレアチン
に含まれる各種分解酵素で分解され、さらに加熱処理さ
れるので試料溶液が試薬と反応する際に非特異的な凝集
反応、言いかえれば妨害反応、が起こらな（なる。

（２）試薬の精度判定＝（１）項で得られた試料溶液５
０μｌと実験例１で得られた試薬５０μβとをガラス平
板上で混合し、３分後に凝集反応の有無を確認した。さ
らに実験例２〜１３で得られた試薬を用いて、それぞれ
同様の実験を行い凝集反応の有無を確認した。上記操作
を４８種類の試料溶液すべてについて行った。

別に、喀痰からの培養を行い、喀痰４′８検体中に含ま
れる菌種をそれぞれ確認した。

このように１本発明方法にもとづき試薬により確認され
た菌種と、従来の培養により確認された菌種とを比較し
て次の結果を得た。

培養成績と試薬による検査結果とが一致した検体数・・
・３８件（７９，１％）。

培養で検出された菌が試薬による検査で検出されなかっ
た検体数・・・８件（１６，７％）。

培養で検出されなかった菌が試薬による検査で検出され
た検体数・・・２件（４，２％）。

このように１本発明にもとづく試薬による判定結果と、
従来の培養による判定結果とは高い相関性を示すことが
確認された。

（以下余白） 表１ 表２ 表３ 表４ 表５ 表６ 表７　、 表８ 表９ 表１０ 表１１ 表１２ 表１３ 表１４ 吸収操作後の抗血清の抗体力価 表１５ ラテックス試薬の力価 （発明の効果） 本発明によれば、このように２日和見感染の原因となる
可能性のある菌もしくはその代謝物に特異的な抗体を不
活性担体に吸着させて試薬とし抗原抗体反応を利用して
日和見感染症の病原菌の種類が判定されるため、従来の
ような培養による検査を行う繁雑さが解消される。感染
症が日和見感染であるか否かがわかると同時に、その原
因となる菌の種類も判定できる。従来の培養法による判
定では、検査に最低２〜３日を要していたが９本発明方
法によればここに挙げられた１３種類の試薬のすべてを
用いても検査に要する時間はたかだか３０分程度である
。自動分析装置などを併用すれば検査時間はさらに短縮
される。本発明の試薬による判定法は、従来の培養法に
よる判定結果と高い相関性を示す正確な診断方法である
。

本発明の方法は、さらに、従来の培養法では比較的病原
菌の把握が困難な呼吸器感染症や致死率が高く病原菌の
検出されにくい敗血症などの診断にも有効である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　、　Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　に特異的
   な抗体を粒径０．０７〜２０．０μｍの不活性担体に吸
   着させた試薬。 Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　に特
   異的な抗体を粒径０．０７〜２０．０μｍの不活性担体
   に吸着させた試薬。 ５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ａｇａｌａｃｔｉａｅに
   特異的な抗体を粒径０．０７〜２０．０μｍの不活性担
   体に吸着させた試薬。 Ａｃ１ｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ　ｓｐ、に特異的な抗体を
   粒径　０．０７〜２０．０μｍの不活性担体に吸着させ
   た試薬。 ５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｆａｅｃａｌｉｓ　に特
   異的な抗体を粒径０．０７〜２０．０μｍの不活性担体
   に吸着させた試薬。 ５ｅｒｒａｔｉａ　ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓに特異的な抗
   体を粒径０．０７〜２０．０μｍの不活性担体に吸着さ
   せた試薬。 ５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　に特異
   的な抗体を粒径０．０７〜２０．０μｍの不活性担体に
   吸着させた試薬。 Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ　ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ　に特異
   的な抗体を粒径０．０７〜２０．０μｍの不活性担体に
   吸着させた試薬。 Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓに特異的な抗体を粒
   径　０．０７〜２０．０μｍの不活性担体に吸着させた
   試薬。 Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ’　ｃｌｏａｃａｅに特異的
   な抗体を粒径０．０７〜２０．０μｌの不活性担体に吸
   着させた試薬。 Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ　１ｎｆｌｕｅｎｚａｅに特異
   的な抗体を粒径０．０７〜２０．０μｍの不活性担体に
   吸着させた試薬。 ５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに
   特異的な抗体を粒径０．０７〜２０．０μｍの不活性担
   体に吸着させた試薬およびＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ　ｆ
   ｒａｇｉｌｉｓに特異的な抗体を粒径０．０７〜２０．
   ０μｍの不活性担体に吸着させた試薬からなる群から選
   択された少なくとも２種もしくはそれ以上を生体由来の
   検体溶液に接触させて行う日和見感染における病原菌の
   判定方法。 ２、前記不活性担体が粒径０．０７〜２．００μｍの合
   成高分子ラテフクスである特許請求の範囲第１項に記載
   の判定方法。 ３、前記不活性担体が粒径２．００〜２０．０μｍの合
   成高分子ゲルまたは動物の赤血球である特許請求の範囲
   第１項に記載の判定方法。