CN1768859A - 基于醛基的微粒表面多重生物功能因子组装方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种基于醛基的微粒表面的多重生物功能因子组装方法，属于多重生物功能因子组装技术。该方法包括以下步骤：将葡聚糖、淀粉或普鲁兰进行醛化和双亲性改性，再将双亲性改性醛化多糖与脂溶性药物及可生物降解聚合物制备载药微球，微球水溶液经分离再分散于缓冲溶液中，形成微球溶液；将微球溶液滴加至溶有生物因子的缓冲溶液中孵化，再向孵化液加入硼氢化钠溶液，还原未反应的醛基和生成的西夫碱，用去离子水洗涤，得到表面组装有多重生物功能因子的微粒。本发明操作简单，所制备的表面生物多功能化微粒在药物投递、控释缓释等方面具有重要的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及一种基于醛基的微粒表面的多重生物功能因子组装方法，属于多重生物功能因子组装技术。
背景技术
纳米粒子或微球由于其较小的粒径，较长的体内循环时间，且对药物起到保护和控释、缓释的作用，是药物的理想载体。然而，理想的疾病治疗，如癌症治疗，要求药物只作用于病变组织或细胞，而对正常组织没有影响，即药物的靶向释放；而有些疗法则要求载体既具有较强的负载能力，又具有良好的靶向性，如表皮生长因子、内皮生长因子、神经生长因子的运输。上述各种功能因子需要与载体相结合，而聚乳酸等生物可降解材料为基质的粒子或微球虽然具有良好的生物相容性，但其结构上却缺乏可反应性基团，从而限制了功能因子与载体结合。葡聚糖、普鲁兰、淀粉、透明质酸、血清蛋白、胶原、明胶等天然大分子物质及其改性物的结构中富含可反应性基团，且具有良好的生物相容性、可降解性，表面以多糖修饰的纳米粒子与微球具有与聚乙二醇相似的延长体内循环周期的作用。
药物载体与靶向功能因子结合方式的设计对靶向制剂的成功实施是十分关键的。近年来大部分的研究只局限于纳米粒子及微球表面的单功能化，即只在纳米粒子或微球表面连接一种功能因子。常用的连接方式包括：硫醚键、二硫键、酯键、酰胺键、酰腙键、西夫碱等共价偶连和生物素-亲和素物理作用实现连接。上述方法实现的单功能化粒子在一些情况下并不能很好的解决问题，如用于癌症治疗的纳米粒子在体内的靶向效果受到各种生物屏障(如血脑屏障，BBB)的影响，阻碍了它们顺利到达靶向部位，即使它们的表面连有靶向物质，一种有效的解决方法就是在粒子表面引入多种功能化因子，其中某种因子引导粒子通过诸如BBB等生物屏障，而其它因子则引导粒子顺利到达靶向部位；又如上述提及的表皮生长因子、内皮生长因子、神经生长因子的运输，在负载的同时还要求靶向性，也可通过多重生物因子在载体表面的功能化来解决。
发明内容
本发明的目的是提供一种基于醛基的微粒表面多重生物功能因子组装方法。该方法以微粒表面的醛基为生物性分子的结合位点，通过简便的席夫碱反应将多种生物活性分子偶联于微粒表面，并引导载药微粒的靶向药物释放。
本发明是通过以下的技术方案加以实现的，一种基于醛基的微粒表面多重生物功能因子组装方法，其特征在于包括以下步骤：
1.双亲性多糖衍生物的制备
1)醛化多糖的制备：4℃避光条件下，在水体系中按高碘酸钠(NaIO4)与糖单元的摩尔比为1∶2～50投料反应0.5～8h，将反应液用截留分子量10,00～40,000半透膜对去离子透析10～144h，冷冻干燥得固态产物；所述的多糖选自相对分子质量10,000～1000,000的葡聚糖或淀粉或普鲁兰。
2)双亲性改性醛化多糖的制备：
a.胆固醇改性醛化多糖的制备：将胆固醇与丁二酸酐按摩尔比1∶1～5投料，70℃在吡啶催化下反应3～8h生成胆固醇-3-半琥珀酸(Chol-Succ)，乙醇重结晶1～3次，真空干燥；将胆固醇-3-半琥珀酸与二氯亚砜按摩尔比1∶2～10溶于10～50mL干燥三氯甲烷中，70℃反应1～10h，生成胆固醇-3-半琥珀酸酰氯(Chol-Succ-COCl)，真空蒸出液体，将残余固体复溶于20mL干燥三氯甲烷中待用；将上述冻干得到的醛化多糖溶于40mL干燥DMSO中，滴加数滴三乙胺，按酰氯(-COCl)与糖单元的摩尔比为1∶2～50量取Chol-Succ-COCl滴加入醛化多糖溶液中，氮气保护，80℃反应3～8h，产物对去离子水透析10～144h，透析液冷冻干燥，得胆固醇改性醛化多糖。
b.胆酸改性醛化多糖的制备：将1g胆酸溶于20～60mL乙醇中，40～78℃在1～5mL浓盐酸催化下形成胆酸乙酯，将胆酸乙酯的乙醇溶液在40～78℃下向溶有0.5～10mL水合肼的乙醇溶液中缓慢滴加，反应3～8h，冷却析出物用乙醇重结晶，得胆酸酰肼(CAH)；将100mg醛化多糖溶于8mL水中，CAH溶于16mL DMF中，两溶液混合得到一均相体系，体系中CAH与糖单元的摩尔比为1∶2～50；体系的pH值调节到4，室温反应1～24h，反应溶液倒入大量的甲醇中沉淀出产物，过滤，用甲醇充分洗涤多次，室温下真空干燥，得胆酸改性醛化多糖。
c.苯氧基改性醛化多糖的制备：将苯基甘油醚(1，2-epoxy-3-phenoxypropane)：醛化多糖糖单元的摩尔比为1∶2～50投料，在1M氢氧化钠(NaOH)溶液中室温反应10-48h，将产物在乙醇中沉降，再对去离子水透析，10～144h，冷冻干燥得苯氧基改性醛化多糖。
2.载药微球制备：
1)透析法
a.将脂溶性药物与可生物降解聚合物和双亲性改性醛化多糖按重量比为1∶0.5～100∶0.5～100共溶于1～1000体积份的二甲基亚砜(DMSO)或N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，室温下搅拌形成均相体系；所述的脂溶性药物包括：卡氮芥、消炎痛、环孢菌素A、阿克拉霉素A、利福平、酮洛芬、他莫西芬、红霉素或阿苯达唑；所述的可生物降解聚合物包括：相对分子质量5,000～100,000的聚乳酸(PLA)、聚乙醇酸(PGA)、聚己内酯(PCL)或聚乳酸-聚乙醇酸共聚物(PLGA)；所述的双亲性改性醛化多糖选自相对分子质量10,000～1000,000的醛化葡聚糖或淀粉或普鲁兰经胆固醇、胆酸或苯氧基疏水改性形成物。
b.将上述共溶体系用截留分子量7,000～50,000的半透膜在4～25℃下对去离子水透析1～144h，得到表面含醛基的载药可生物降解聚合物微粒；
2)乳液法
a.将脂溶性药物与聚合物按重量比为1∶0.5～100共溶于1～1,000体积份的丙酮、二氯甲烷或上述二者的混合溶液中形成油相，所述的脂溶性药物包括：卡氮芥、消炎痛、环孢菌素A、阿克拉霉素A、利福平、酮洛芬、他莫西芬、红霉素或阿苯达唑；所述的聚合物包括：相对分子质量5,000～200,000的聚3-羟基丁酸酯、聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯或尼龙。
b.按脂溶性药物与双亲性改性醛化多糖重量比为1∶0.5～100，将脂溶性药物和双亲性改性醛化多糖溶于1～1,000体积份的磷酸二氢钠-磷酸氢二钠(PBS)缓冲溶液中，得水相，所述的脂溶性药物包括：卡氮芥、消炎痛、环孢菌素A、阿克拉霉素A、利福平、酮洛芬、他莫西芬、红霉素或阿苯达唑；所述的双亲性改性醛化多糖选自相对分子质量10,000～1,000,000的醛化葡聚糖或淀粉，或普鲁兰经胆固醇、胆酸或苯氧基疏水改性。
c.在4～25℃下将步骤a制得油相在转速500～1,200转/分的搅拌下快速注入步骤b制得水相中并继续在磁力条件下搅拌至微球固化为止。
3.将微球水溶液离心10,000～16,000rpm，去除上清液，再将离出微球超声分散于同体积份的pH为7.4～9.18的碳酸钠-碳酸氢钠的缓冲溶液中，形成质量浓度为0.2～2.0mg/mL的微球溶液；
4.按体积比1∶0.1～2.0，将pH为7.4～9.18的微球溶液滴加溶有0.1～2.0mg/mL的两种或两种以上生物因子的pH为7.4～9.18碳酸钠-碳酸氢钠的缓冲溶液中，孵化1～5h，所述生物因子包括转铁蛋白(Tf)、兔IgG、表皮生长因子受体EGFR、转铁蛋白受体CD71、单抗OX26、内皮生长因子和神经生长因子。
5.在4～25℃下向孵化液中加入0.2～1mL的0.01mol/L的硼氢化钠(NaBH4)溶液，还原未反应的醛基和生成的西夫碱；10,000～16,000rpm下离心，用去离子水洗涤。
本发明中，多功能因子在微粒表面的组装方式是利用微球表面游离醛基与生物功能因子结构中的氨基进行化学偶连。利用本发明中基于醛基的微粒表面多重生物功能因子组装方法及其制备方法，可制得形状规整，粒径范围50-1,000nm且粒径分布窄的表面多重功能化组装的微球或颗粒。本发明操作简单，通过制备表面含反应性基团—醛基的微粒，控制反应条件与反应步骤，可以在微粒表面组装两种或两种以上的生物功能因子，以满足不同的应用要求，所制备的表面生物多功能化微粒在药物投递、控释缓释等方面具有重要的应用前景。
附图说明：
图1为实施例1制备的双功能化微球的透射电子显微镜照片，平均粒径约为250nm左右，且粒径分布较窄，微球表面极其光滑；
图2为实施例1制备的双功能化微球的原子力显微镜照片；
图3为实施例1制备的双功能化微球的荧光显微镜照片，粒子溶液呈现绿色荧光，证明了异硫氰酸荧光素(FITC)标记的转铁蛋白(Tf)在粒子表面的结合；
图4为实施例1制备的双功能化微球经ELISA比色的照片，表面结合双重因子的超微粒子分散液呈蓝色，而空白对照组则呈色不明显，证明表面兔IgG的结合
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步的说明：
实施例1：
1.胆固醇疏水改性醛化葡聚糖(Chol-Dex-CHO)的制备：(1)将1g胆固醇与1g丁二酸酐溶于30mL干燥吡啶中，70℃下反应5h，乙醇重结晶2次，真空干燥24h，得胆固醇-3-半琥珀酸(Chol-Succ)；(2)1g胆固醇-3-半琥珀酸溶于20mL干燥三氯甲烷中，70℃下向体系滴加2mL二氯亚砜，反应6h，生成胆固醇-3-半琥珀酸酰氯(Chol-Succ-COCl)，将反应液蒸干，再加入20mL干燥三氯甲烷复溶；(3)4℃避光条件下，2g葡聚糖溶于20mL去离子水中，按高碘酸钠(NaIO4)与糖单元的摩尔比为1∶5投料反应8h，将反应液用截留分子量14,000半透膜对去离子透析48h，冷冻干燥得醛化葡聚糖；(4)将上述冻干得到得醛化葡聚糖溶于40mL干燥DMSO中，滴加数滴三乙胺，按-COCl与糖单元的摩尔比为1∶10量取Chol-Succ-COCl滴加入醛化葡聚糖溶液中，氮气保护，80℃反应6h，产物对去离子水透析48h，透析液冷冻干燥，得胆固醇改性醛化葡聚糖。
2.微球制备：(1)称取4mg胆固醇疏水改性醛化葡聚糖(Chol-Dex-CHO)，8mg PLA3,0000及4mg消炎痛共溶于6mL DMSO中；(2)室温下将上述溶液用截留分子量7,000的半透膜对去离子水透析48h，，得到具有明显浊光的微球水溶液体系；(3)将微球水溶液16,000rpm离心，去除上清液；(4)离出物超声分散于4mL pH＝9.18的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液；
3.功能化：(1)将微球溶液向溶有2mg FITC标记的转铁蛋白和2mg兔IgG的pH＝9.18的磷酸氢二钠-磷酸二氢缓冲溶液中滴加，冰浴下搅拌5h；(2)向反应液中加入1mL0.01mol/L的NaHB4溶液，还原未反应的醛基和生成的西夫碱；(3)16,000rpm下离心，去离子水洗涤三次，再次加入生理盐水4mL，小功率超声分散。
实施例2：
1.胆酸疏水改性醛化淀粉(Cholic-Sta-CHO)的制备：(1)将1g胆酸溶于30mL乙醇中，78℃在4mL浓盐酸催化下形成胆酸乙酯，将胆酸乙酯的乙醇溶液在78℃下向溶有5mL水合肼的乙醇溶液中缓慢滴加，反应8h，冷却析出物用乙醇重结晶，得胆酸酰肼(CAH)；(2)将100mg醛化淀粉(制备工艺同实例1中的醛化葡聚糖)溶于8mL水中，CAH溶于16mL DMF中，两溶液混合得到一均相体系，体系中CAH与糖单元的摩尔比为1∶10；体系的pH值调节到4，室温反应8h，反应溶液倒入大量的甲醇中沉淀出产物，过滤，用甲醇充分洗涤多次，室温下真空干燥，得胆酸改性醛化淀粉。
2.微球制备：(1)将40mg聚苯乙烯和10mg消炎痛溶于15mL丙酮中油相；(2)将20mg胆酸疏水改性醛化淀粉(Cholic-Sta-CHO)溶于45mL pH＝6.98的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液中，在磁力条件下搅拌6小时，转速800转/分，得水相；(3)将油相在转速800转/分的搅拌下快速注入水相中并继续在磁力条件下搅拌至超微载体固化为止；(4)将步骤(3)得到的产物在10,000转/分离心分离、水洗；(5)将微球超声分散于10mL pH＝9.18的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液；
3.功能化：(1)将微球溶液向10mL溶有5mg FITC标记的转铁蛋白和200uL OX26的pH＝9.18的磷酸氢二钠-磷酸二氢缓冲溶液中滴加，冰浴搅拌5h；(2)向反应液中加入2mL 0.01mol/L的NaHB4溶液，还原未反应的醛基和生成的西夫碱；(3)16,000rpm下离心，去离子水洗涤三次，再次加入生理盐水20mL，小功率超声分散。
实施例3：
1.苯氧基疏水改性醛化普鲁兰(Ph-Pull-CHO)的制备：将0.5g醛化普鲁兰(制备工艺同实例1中的醛化葡聚糖)溶于20mL 1M氢氧化钠(NaOH)溶液中，将苯基甘油醚(1，2-epoxy-3-phenoxypropane)按苯基甘油醚∶醛化普鲁兰糖单元的摩尔比为1∶10投料，室温反应24h，将产物在乙醇中沉降，再对去离子水透析，24h，冷冻干燥得苯氧基改性醛化普鲁兰。
2.微球制备：(1)将2mg利福平4mg Ph-Pull-CHO与8mg聚己内酯共溶于4mL DMSO中；(2)室温下对pH＝9.18 Na2CO3-NaHCO4缓冲溶液透析48h，形成稳定的具有带浊光的溶液；(3)溶液离心并超声清洗，去除未结合Ph-Pull-CHO，再加入同体积份的pH＝9.18的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液进行分散；
3.功能化：(1)将微球溶液向2mL溶有100ug EGFR(表皮生长因子受体)和100ul CD71的pH＝9.18的磷酸氢二钠-磷酸二氢缓冲溶液中滴加，孵化5h；(2)向反应液中加入2mL0.01mol/L的NaHB4溶液，还原未反应的醛基和生成的西夫碱；(3)16,000rpm下离心，去离子水洗涤三次，再次加入生理盐水20mL，小功率超声分散，得表面双功能化的普鲁兰修饰聚己内酯超微粒子。
实施例4：
1.胆固醇疏水改性醛化葡聚糖(Chol-Dex-CHO)的制备同实例1
2.微球制备：(1)称取8mg胆固醇疏水改性醛化葡聚糖(Chol-Dex-CHO)，2mg PCL3,0000及2mg阿苯达唑共溶于6mL DMSO中；(2)室温下将上述溶液用截留分子量7,000的半透膜对去离子水透析36h，，得到具有明显浊光的微球水溶液体系；(3)将微球水溶液16,000rpm离心，去除上清液；(4)离出物超声分散于4mL pH＝9.18的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液；
3.功能化：(1)将微球溶液向溶有2mg转铁蛋白和50ug内皮生长因子的pH＝9.18的磷酸氢二钠-磷酸二氢缓冲溶液中滴加，冰浴下孵化3h；(2)向反应液中加入1mL 0.01mol/L的NaHB4溶液，还原未反应的醛基和生成的西夫碱；(3)16,000rpm下离心，去离子水洗涤三次，再次加入生理盐水4mL，小功率超声分散。
实施例5：
1.胆酸疏水改性醛化葡聚糖(Chol-Dex-CHO)的制备同实例2中胆酸疏水改性醛化淀粉的制备，将淀粉换成葡聚糖即可。
2.微球制备：(1)将30mg聚3-羟基丁酸酯和5mg他莫西芬溶于20mL二氯甲烷中得油相；(2)将40mg胆酸疏水改性醛化葡聚糖(Chol-Dex-CHO)溶于60mL pH＝6.98的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液中，在磁力条件下搅拌6小时，转速800转/分，得水相；(3)将油相在转速800转/分的搅拌下快速注入水相中并继续在磁力条件下搅拌至超微载体固化为止；(4)将步骤(3)得到的产物在10,000转/分离心分离、水洗；(5)将微球超声分散于10mL pH＝9.18的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液；
3.功能化：(1)将微球溶液向10mL溶有5mg兔IgG和200uL神经生长因子的pH＝9.18的磷酸氢二钠-磷酸二氢缓冲溶液中滴加，冰浴搅拌5h；(2)向反应液中加入2mL 0.01mol/L的NaHB4溶液，还原未反应的醛基和生成的西夫碱；(3)16,000rpm下离心，去离子水洗涤三次，再次加入生理盐水20mL，小功率超声分散。
Claims (1)
1.一种基于醛基的微粒表面多重生物功能因子组装方法，其特征在于包括以下步骤：
1)双亲性多糖衍生物的制备
(1)醛化多糖的制备：4℃避光条件下，在水体系中按高碘酸钠与糖单元的摩尔比为1∶2～50投料反应0.5～8h，将反应液用截留分子量10,00～40,000半透膜对去离子透析10～144h，冷冻干燥得固态产物；所述的多糖选自相对分子质量10,000～1000,000的葡聚糖或淀粉或普鲁兰；
(2)双亲性改性醛化多糖的制备：
a.胆固醇改性醛化多糖的制备：将胆固醇与丁二酸酐按摩尔比1∶1～5投料，70℃在吡啶催化下反应3～8h生成胆固醇-3-半琥珀酸，乙醇重结晶1～3次，真空干燥；将胆固醇-3-半琥珀酸与二氯亚砜按摩尔比1∶2～10溶于10～50mL干燥三氯甲烷中，70℃反应1～10h，生成胆固醇-3-半琥珀酸酰氯，真空蒸出液体，将残余固体复溶于20mL干燥三氯甲烷中待用；将上述冻干得到的醛化多糖溶于40mL干燥的二甲基亚砜中，滴加数滴三乙胺，按酰氯与糖单元的摩尔比为1∶2～50量取胆固醇-3-半琥珀酸酰氯滴加入醛化多糖溶液中，氮气保护，80℃反应3～8h，产物对去离子水透析10～144h，透析液冷冻干燥，得胆固醇改性醛化多糖；
b.胆酸改性醛化多糖的制备：将1g胆酸溶于20～60mL乙醇中，40～78℃在1～5mL浓盐酸催化下形成胆酸乙酯，将胆酸乙酯的乙醇溶液在40～78℃下向溶有0.5～10mL水合肼的乙醇溶液中缓慢滴加，反应3～8h，冷却析出物用乙醇重结晶，得胆酸酰肼；将100mg醛化多糖溶于8mL水中，胆酸酰肼溶于16mL的N，N-二甲基甲酰胺中，两溶液混合得到一均相体系，体系中胆酸酰肼与糖单元的摩尔比为1∶2～50；体系的pH值调节到4，室温反应1～24h，反应溶液倒入大量的甲醇中沉淀出产物，过滤，用甲醇充分洗涤多次，室温下真空干燥，得胆酸改性醛化多糖；
c.苯氧基改性醛化多糖的制备：将苯基甘油醚与醛化多糖糖单元的摩尔比为1∶2～50投料，在1M氢氧化钠溶液中室温反应10-48h，将产物在乙醇中沉降，再对去离子水透析，10～144h，冷冻干燥得苯氧基改性醛化多糖；
2)载药微球制备：
(1)透析法
a.将脂溶性药物与可生物降解聚合物和双亲性改性醛化多糖按重量比为1∶0.5～100∶0.5～100共溶于1～1,000体积份的二甲基亚砜或N，N-二甲基甲酰胺中，室温下搅拌形成均相体系；所述的脂溶性药物包括：卡氮芥、消炎痛、环孢菌素A、阿克拉霉素A、利福平、酮洛芬、他莫西芬、红霉素或阿苯达唑；所述的可生物降解聚合物包括：相对分子质量5,000～100,000的聚乳酸、聚乙醇酸、聚己内酯或聚乳酸-聚乙醇酸共聚物；所述的双亲性改性醛化多糖选自相对分子质量10,000～1000,000的醛化葡聚糖或淀粉，或普鲁兰经胆固醇、胆酸或苯氧基疏水改性形成物；
b.将上述共溶体系用截留分子量7,000～50,000的半透膜在4～25℃下对去离子水透析1～144h，得到表面含醛基的载药可生物降解聚合物微粒；
(2)乳液法
a.将脂溶性药物与聚合物按重量比为1∶0.5～100共溶于1～1,000体积份的丙酮、二氯甲烷或上述二者的混合溶液中形成油相，所述的脂溶性药物包括：卡氮芥、消炎痛、环孢菌素A、阿克拉霉素A、利福平、酮洛芬、他莫西芬、红霉素或阿苯达唑；所述的可生物降解聚合物包括：相对分子质量5,000～200,000聚3-羟基丁酸酯、聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯或尼龙；
b.按脂溶性药物与双亲性改性醛化多糖重量比为1∶0.5～100，将脂溶性药物和双亲性改性醛化多糖溶于1～1,000体积份的磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲溶液中，得水相，所述的脂溶性药物包括：卡氮芥、消炎痛、环孢菌素A、阿克拉霉素A、利福平、酮洛芬、他莫西芬、红霉素或阿苯达唑；所述的双亲性改性醛化多糖选自相对分子质量10,000～1,000,000的醛化葡聚糖或淀粉，或普鲁兰经胆固醇、胆酸或苯氧基疏水改性；
c.在4～25℃下将步骤a制得油相在转速500～1,200转/分的搅拌下快速注入步骤b制得水相中并继续在磁力条件下搅拌至粒子固化为止；
3)将步骤2)制得的微球水溶液以10,000～16,000rpm离心，去除上清液，再将离出微球超声分散于同体积份的pH为7.4～9.18的碳酸钠-碳酸氢钠的缓冲溶液中，形成质量浓度为0.2～2.0mg/mL的微球溶液；
4)按体积比1∶0.1～2.0，将pH为7.4～9.18的微球溶液滴加溶有0.1～2.0mg/mL的两种或两种以上生物因子的pH为7.4～9.18碳酸钠-碳酸氢钠的缓冲溶液中，孵化1～5h，所述生物因子包括转铁蛋白、兔IgG、表皮生长因子受体EGFR、转铁蛋白受体CD71、单抗OX26、内皮生长因子和神经生长因子；
5)在4～25℃下向孵化液中加入0.2～1mL的0.01mol/L的硼氢化钠溶液，还原未反应的醛基和生成的西夫碱；在10,000～16,000rpm下离心，用去离子水洗涤。
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Cited By (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011091723A1 (en) * | 2010-01-29 | 2011-08-04 | Zensun (Shanghai) Science & Technology Limited | Neuregulin based compositions and uses thereof for preventing, treating or delaying the myocardial ischemia-reperfusion injury |
| CN102335575A (zh) * | 2010-07-14 | 2012-02-01 | 中国科学院化学研究所 | 一种层层组装的微胶囊及其制备方法 |
| CN102351957A (zh) * | 2011-08-18 | 2012-02-15 | 西南交通大学 | 高氧化度的天然高分子多糖的氧化方法 |
| CN101502490B (zh) * | 2009-02-26 | 2013-07-31 | 沈阳药科大学 | 一种酮洛芬生物粘附凝胶微球及其制备方法 |
| CN104399062A (zh) * | 2011-01-11 | 2015-03-11 | 上海泽生科技开发有限公司 | 神经调节蛋白用于预防、治疗或延迟心脏缺血再灌注损伤的方法和组合物 |
| CN108057122A (zh) * | 2018-02-11 | 2018-05-22 | 重庆医科大学 | 一种负载阿霉素的天然普鲁兰多糖载药系统及制备方法 |
| CN108371713A (zh) * | 2018-02-11 | 2018-08-07 | 重庆医科大学 | 利用可见光诱导交联的普鲁兰多糖载药系统及其制备方法 |
| CN109310795A (zh) * | 2016-03-09 | 2019-02-05 | 吉田靖弘 | 生物体吸收性薄片或薄膜 |
| US10561709B2 (en) | 2014-10-17 | 2020-02-18 | Zensun (Shanghai) Science & Technology, Co., Ltd. | Methods and compositions of neuregulins for preventing, treating or delaying preserved ejection fraction cardiac failure |
| CN111249475A (zh) * | 2020-02-24 | 2020-06-09 | 爱尔眼科医院集团股份有限公司 | 一种药物和基因双重运载系统、其制备方法及应用 |
| US10702585B2 (en) | 2014-01-03 | 2020-07-07 | Zensun (Shanghai) Science & Technology, Co., Ltd. | Formula of neuregulin preparation |
| US11179323B2 (en) | 2013-05-22 | 2021-11-23 | Zensun (Shanghai) Science & Technology, Co., Ltd. | Extended release of neuregulin for treating heart failure |
| US11253573B2 (en) | 2011-10-10 | 2022-02-22 | Zensun (Shanghai) Science & Technology, Co., Ltd. | Compositions and methods for treating heart failure |
| CN115721608A (zh) * | 2022-11-29 | 2023-03-03 | 陕西科技大学 | 一种靶向温度敏感性聚合物胶束、制备方法及应用 |
-
2005
- 2005-10-24 CN CN 200510015573 patent/CN1768859A/zh active Pending
Cited By (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101502490B (zh) * | 2009-02-26 | 2013-07-31 | 沈阳药科大学 | 一种酮洛芬生物粘附凝胶微球及其制备方法 |
| WO2011091723A1 (en) * | 2010-01-29 | 2011-08-04 | Zensun (Shanghai) Science & Technology Limited | Neuregulin based compositions and uses thereof for preventing, treating or delaying the myocardial ischemia-reperfusion injury |
| CN102869370A (zh) * | 2010-01-29 | 2013-01-09 | 上海泽生科技开发有限公司 | 神经调节蛋白用于预防、治疗或延迟心脏缺血再灌注损伤的方法和组合物 |
| US11826400B2 (en) | 2010-01-29 | 2023-11-28 | Zensun (Shanghai) Science & Technology Limited | Neuregulin based compositions and uses thereof for preventing, treating or delaying the myocardial ischemia-reperfusion injury |
| CN102335575A (zh) * | 2010-07-14 | 2012-02-01 | 中国科学院化学研究所 | 一种层层组装的微胶囊及其制备方法 |
| CN102335575B (zh) * | 2010-07-14 | 2015-09-16 | 中国科学院化学研究所 | 一种层层组装的微胶囊及其制备方法 |
| CN104399062A (zh) * | 2011-01-11 | 2015-03-11 | 上海泽生科技开发有限公司 | 神经调节蛋白用于预防、治疗或延迟心脏缺血再灌注损伤的方法和组合物 |
| CN102351957A (zh) * | 2011-08-18 | 2012-02-15 | 西南交通大学 | 高氧化度的天然高分子多糖的氧化方法 |
| US11253573B2 (en) | 2011-10-10 | 2022-02-22 | Zensun (Shanghai) Science & Technology, Co., Ltd. | Compositions and methods for treating heart failure |
| US11179323B2 (en) | 2013-05-22 | 2021-11-23 | Zensun (Shanghai) Science & Technology, Co., Ltd. | Extended release of neuregulin for treating heart failure |
| US10702585B2 (en) | 2014-01-03 | 2020-07-07 | Zensun (Shanghai) Science & Technology, Co., Ltd. | Formula of neuregulin preparation |
| US11969458B2 (en) | 2014-01-03 | 2024-04-30 | Zensun (Shanghai) Science & Technology, Co., Ltd. | Formula of neuregulin preparation |
| US10561709B2 (en) | 2014-10-17 | 2020-02-18 | Zensun (Shanghai) Science & Technology, Co., Ltd. | Methods and compositions of neuregulins for preventing, treating or delaying preserved ejection fraction cardiac failure |
| CN109310795A (zh) * | 2016-03-09 | 2019-02-05 | 吉田靖弘 | 生物体吸收性薄片或薄膜 |
| CN108371713B (zh) * | 2018-02-11 | 2020-03-31 | 重庆医科大学 | 利用可见光诱导交联的普鲁兰多糖载药系统及其制备方法 |
| CN108057122B (zh) * | 2018-02-11 | 2020-03-31 | 重庆医科大学 | 一种负载阿霉素的天然普鲁兰多糖载药系统及制备方法 |
| CN108371713A (zh) * | 2018-02-11 | 2018-08-07 | 重庆医科大学 | 利用可见光诱导交联的普鲁兰多糖载药系统及其制备方法 |
| CN108057122A (zh) * | 2018-02-11 | 2018-05-22 | 重庆医科大学 | 一种负载阿霉素的天然普鲁兰多糖载药系统及制备方法 |
| CN111249475A (zh) * | 2020-02-24 | 2020-06-09 | 爱尔眼科医院集团股份有限公司 | 一种药物和基因双重运载系统、其制备方法及应用 |
| CN111249475B (zh) * | 2020-02-24 | 2024-05-10 | 爱尔眼科医院集团股份有限公司 | 一种药物和基因双重运载系统、其制备方法及应用 |
| CN115721608A (zh) * | 2022-11-29 | 2023-03-03 | 陕西科技大学 | 一种靶向温度敏感性聚合物胶束、制备方法及应用 |
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