CN1683016A - 用于胶质瘤靶向化疗的表面含转铁蛋白载药微粒制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于胶质瘤靶向化疗的表面含转铁蛋白载药微粒的制备方法，属于载药靶向微粒的制备技术。将可生物降解聚合物聚乳酸、聚乙醇酸、聚己内酯或聚乳酸乙醇酸共聚物和化疗药物卡莫司汀、阿霉素或紫杉醇共溶于有相溶液丙酮、乙腈或二甲基亚砜中，通过加入到具有转铁蛋白的溶液中乳化，或与胆固醇改性的葡聚糖二醛共透析后再与转铁蛋白化学结合或生物素－亲和素结合，制备了表面具有转铁蛋白的聚合物载药微粒。该种微粒通过静脉、颈动脉注射或胶质瘤立体定位瘤腔内注射，使药物越过血脑屏障并靶向胶质瘤释放，达到对肿瘤较好的体内抑制，制备简单，疗效显著。

Description

用于胶质瘤靶向化疗的表面含转铁蛋白载药微粒制备方法

                           技术领域

本发明涉及一种用于胶质瘤靶向化疗的表面含转铁蛋白载药微粒的制备方法，属于载药靶向微粒的制备技术。

                           背景技术

在疾病的治疗过程中，为了提高药效减轻毒副作用，药物定向运输和靶细胞特异治疗的策略已经引起了人们极大的兴趣。配体—受体介导的转运系统备受关注。正常情况下，配体和受体的结合、不仅能使配体导入到特定的位置，而且它们还能为生物所分解，无毒、无免疫原性。

转铁蛋白是一个很好的配体，转铁蛋白和转铁蛋白受体介导的内吞作用是生物体细胞最具特点的转运过程之一。转铁蛋白受体在人体内广泛表达，但表达量有明显差别。正常细胞和肿瘤细胞表面均有转铁蛋白受体存在，但癌细胞表面的受体是正常细胞的2～7倍，癌细胞转铁蛋白受体与转铁蛋白的亲和力是正常细胞转铁蛋白受体的10～100倍。利用正常细胞和癌细胞表面转铁蛋白受体的差异，用转铁蛋白修饰微球可使微球具导向癌细胞的靶向性。多种蛋白、抗癌药物和基因与转铁蛋白结合后可以靶向肿瘤、血脑屏障、快速分裂细胞等大量表达转铁蛋白受体的组织。如阿霉素通过碳二亚胺法或活化酯法与转铁蛋白化学联结，对肝癌细胞和白血病细胞具有较好的杀伤作用。α-银环毒素-转铁蛋白偶联物具有镇痛作用。

国外William等制备了表面结合83-14(BBB表面的胰岛素受体的配体)和8D3(瘤细胞表面转铁蛋白受体的配体)两种单抗的脂质体，成功地进行了RNA干涉基因治疗恶性脑胶质瘤体内实验，证明了超微粒在脑瘤治疗中的积极意义。但转铁蛋白引导的超微粒靶向胶质瘤缓释治疗未见报道。

                            发明内容

本发明的目的在于提供一种用于胶质瘤靶向化疗的表面含转铁蛋白载药微粒的制备方法，该方法过程简单，所制备的载药微粒靶向作用前，在胶质瘤临床应用中可灵活使用，靶向胶质瘤能力强，疗效好。

本发明是通过下述技术方案加以实现的。

一种用于胶质瘤靶向化疗的表面含转铁蛋白载药微粒的制备方法。

方法之一，其特征在于包括以下过程：

(1)将脂溶性药物卡莫司汀(卡氮芥)、紫杉醇或阿霉素，药物载体材料聚乳酸、聚乙醇酸、聚己内酯或聚乳酸乙醇酸共聚物按药物与载体的质量比为1∶100～2∶1溶于丙酮或乙腈中，得溶液A；

(2)将转铁蛋白溶于磷酸缓冲溶液中，配成质量浓度为0.1～50％的B溶液；

(3)在-20～30℃，将溶液A在转速800～2000转/分的搅拌下快速注入溶液B中并继续搅拌至球固化为止；

(4)将步骤(3)得到的产物在8000～20000转/分离心分离、水洗、干燥后得到粒径为50～500nm的表面含转铁蛋白的载药微粒。

方法之二，其特征在于包括以下过程：

(1)将脂溶性药物卡莫司汀(卡氮芥)、紫杉醇或阿霉素，药物载体材料聚乳酸、聚乙醇酸、聚己内酯或聚乳酸乙醇酸共聚物与胆固醇疏水改性葡聚糖二醛，按药物与载体的质量比为1∶100∶10～2∶1∶100溶于二甲基亚砜，得溶液A；

(2)将溶液A盛入截留分子量为1000～14000的透析袋中-20～40℃对水透析1～72小时，得超微粒悬浊液B；

(3)将步骤2得到的产物在6000～20000转/分离心分离、水洗，超声分散于磷酸缓冲溶液中，加入与悬浊液体积比为1∶100～1∶1浓度为0.1～80％的转铁蛋白磷酸缓冲溶液，室温孵化1～72小时；

(4)将步骤3得到的产物在8000～20000转/分离心分离、水洗、冷冻干燥后得到粒径为50～500nm表面含转铁蛋白的载药微粒。

方法之三，其特征在于包括以下过程：

(1)脂溶性药物卡莫司汀(卡氮芥)、紫杉醇或阿霉素，药物载体材料聚乳酸、聚乙醇酸、聚己内酯或聚乳酸乙醇酸共聚物与胆固醇疏水改性葡聚糖二醛，按药物与载体的质量比为1∶100∶10～2∶1∶100溶于二甲基亚砜，得溶液A；

(2)将溶液A盛入截留分子量为1000～14000的透析袋中-20～40℃对水透析1～72小时，得超微粒悬浊液B；

(3)将步骤2得到的产物在6000～20000转/分离心分离、水洗，超声分散于磷酸缓冲溶液中，加入与悬浊液体积比为1∶100～1∶1浓度为0.1～80％的亲和素磷酸缓冲溶液，室温孵化1～72小时；

(4)将步骤3得到的产物在6000～20000转/分离心分离、水洗，超声分散于磷酸缓冲溶液中，加入与悬浊液体积比为1∶100～1∶1浓度为0.1～80％的生物素化转铁蛋白磷酸缓冲溶液，室温孵化0.5～240分钟；

(5)将步骤4得到的产物在8000～20000转/分离心分离、水洗、冷冻干燥后得到粒径为50～500nm表面含转铁蛋白的载药微粒。

本发明制备的用于胶质瘤靶向化疗的表面含转铁蛋白载药微粒通过转铁蛋白引导载药微粒通过血脑屏障并使所包载药物靶向胶质瘤释放，减少化疗药物的全身毒副作用，提高药物的生物利用度，有效抑制体内胶质瘤生长，提高化疗预后。该剂型克服了Gliadel^载药膜片的缺点，如只能手术施用，无法多次施用等，可以针对发病部位与发病状况灵活进行注射，并多次施用，还可与载药膜片配合使用，显著提高化疗效果。本发明在胶质瘤治疗中具有重要的应用前景，同时可应用于其它表达转铁蛋白受体丰富的癌症治疗。

                           附图说明

图1实施例1所制备的微粒的扫描电子显微镜照片。

图2实施例2所制备的微粒的扫描电子显微镜照片。

图3实施例3所制备的微粒的扫描电子显微镜照片。

图4实施例5所制备的微粒的透射电子显微镜照片。

图5实施例8所制备的微粒的透射电子显微镜照片。

图6以实施例1所制得的载药微粒治疗对颅内荷胶质瘤大鼠进行治疗前后的核磁共振图象。其中(a)为治疗前，(b)为治疗后。由图可以明显看出治疗前颅内的瘤体存在，治疗后颅体胶质瘤消失。

                       具体实施方式

实施例1

(1)避光条件下称量7mg的脂溶性药物卡莫司汀、35mg的聚乳酸溶于5ml丙酮中，得溶液A；(2)将50mg的转铁蛋白溶于25ml的pH7.2磷酸缓冲溶液中，得溶液B；(3)在-4℃，将溶液A在转速800转/分的搅拌下快速注入溶液B中并继续在磁力条件下搅拌至聚乳酸超微粒固化为止；(4)将步骤(3)得到的产物在10000转/分离心分离、水洗、冷冻干燥后得到表面含转铁蛋白包载药物的聚乳酸超微粒。

本发明实施例1制备的产物，用扫描电子显微镜观察到的超微粒如图1。以颈动脉注射方法治疗脑恶性胶质瘤：动物30只分组为：无治疗组、颈动脉注射原药治疗组和颈动脉注射载药超微粒治疗组各10只。无治疗组、颈动脉注射原药治疗组和颈动脉注射载药超微粒治疗组动物平均存活时间分别为：12.9、13.8和23.8天，载药微粒组平均生存期延长84.5％。治疗前后核磁共振图象如图7。

实施例2

所用聚合物载体为聚乙醇酸，制备步骤如实施例1。本发明实施例2制备的产物，用扫描电子显微镜观察到的超微粒如图2。

实施例3

所用聚合物载体为聚乳酸-乙醇酸共聚物，制备步骤如实施例1。本发明实施例3制备的产物，用扫描电子显微镜观察到的超微粒如图3。

实施例4

所用聚合物载体为聚己内酯，制备步骤如实施例1。

实施例5

(1)35mg聚己内酯、70mg胆固醇疏水改性葡聚糖二醛、20mg紫杉醇共溶于二甲基亚砜中，得溶液A；(2)溶液A盛入截留分子量为7000的透析袋中对水透析72小时，得超微粒悬浊液B；(3)将步骤2得到的产物在10000转/分离心分离、水洗，超声分散于pH7.2磷酸缓冲溶液中，加入5ml浓度为0.1％的转铁蛋白磷酸缓冲溶液，室温孵化24小时；(4)将步骤3得到的产物在10000转/分离心分离、水洗、冷冻干燥后得到表面含转铁蛋白包载紫杉醇的聚己内酯超微粒。

本发明实施例5得到的产物，用透射电子显微镜观察到的超微粒如图4。以瘤腔内立体定位注射方法治疗脑恶性胶质瘤：动物30只分组为：无治疗组、立体定位瘤腔内注射原药治疗组和立体定位瘤腔内注射载药超微粒治疗组各10只。无治疗组、立体定位瘤腔内注射原药治疗组和立体定位瘤腔内注射载药超微粒治疗组动物平均存活时间分别为：12.9、14.7和25.2，载药超微粒组平均生存期延长95.3％。

实施例6

所用聚合物载体为聚乳酸，制备步骤如实施5。

实施例7

所用聚合物载体为聚乙醇酸，制备步骤如实施5。

实施例8

(1)35mg聚乳酸、70mg胆固醇疏水改性葡聚糖二醛、20mg阿霉素共溶于二甲基亚砜中，得溶液A；(2)溶液A盛入截留分子量为7000的透析袋中对水透析72小时，得超微粒悬浊液B；(3)将步骤2得到的产物在10000转/分离心分离、水洗，超声分散于pH7.2磷酸缓冲溶液中，加入5ml浓度为0.1％的亲和素磷酸缓冲溶液，室温孵化24小时；(4)将步骤3得到的产物在10000转/分离心分离、水洗，超声分散于pH7.2磷酸缓冲溶液中，加入5ml浓度为0.1％的生物素化转铁蛋白磷酸缓冲溶液，室温孵化10分钟；(5)将步骤4得到的产物在10000转/分离心分离、水洗，冷冻干燥后得到表面含转铁蛋白包载紫杉醇的聚乳酸超微粒。

本发明实施例2制备的产物，用扫描电子显微镜观察到的超微粒如图5。

实施例9

所用聚合物载体为聚己内酯，制备步骤如实施8。

实施例10

所用聚合物载体为聚乙醇酸，制备步骤如实施8。

实施例11

所用聚合物载体为聚乳酸乙醇酸，制备步骤如实施8。

Claims (3)

1.一种用于胶质瘤靶向化疗的表面含转铁蛋白载药微粒的制备方法，其特征在于包括以下过程：

(1)脂溶性药物卡莫司汀、紫杉醇或阿霉素，药物载体材料聚乳酸、聚乙醇酸、聚己内酯或聚乳酸乙醇酸共聚物按药物与载体的质量比为1∶100～2∶1溶于丙酮或乙腈中，得溶液A；

(2)将转铁蛋白溶于磷酸缓冲溶液中，配成质量浓度为0.1～50％的B溶液；

(3)在-20～30℃，将溶液A在转速800～2000转/分的搅拌下快速注入溶液B中并继续搅拌至球固化为止；

(4)将步骤(3)得到的产物在8000～20000转/分离心分离、水洗、干燥后得到粒径为50～500nm的表面含转铁蛋白的载药微粒。

2.一种用于胶质瘤靶向化疗的表面含转铁蛋白载药微粒的制备方法，其特征在于包括以下过程：

(1)将脂溶性药物卡莫司汀、紫杉醇或阿霉素，药物载体材料聚乳酸、聚乙醇酸、聚己内酯或聚乳酸乙醇酸共聚物与胆固醇疏水改性葡聚糖二醛，按药物与载体的质量比为1∶100∶10～2∶1∶100溶于二甲基亚砜，得溶液A；

(2)将溶液A盛入截留分子量为1000～14000的透析袋中-20～40℃对水透析1～72小时，得超微粒悬浊液B；

(3)将步骤2得到的产物在6000～20000转/分离心分离、水洗，超声分散于磷酸缓冲溶液中，加入与悬浊液体积比为1∶100～1∶1浓度为0.1～80％的转铁蛋白磷酸缓冲溶液，室温孵化1～72小时；

(4)将步骤3得到的产物在8000～20000转/分离心分离、水洗、冷冻干燥后得到粒径为50～500nm表面含转铁蛋白的载药微粒。

3.一种用于胶质瘤靶向化疗的表面含转铁蛋白载药微粒的制备方法，其特征在于包括以下过程：

(1)溶性药物卡莫司汀、紫杉醇或阿霉素，药物载体材料聚乳酸、聚乙醇酸、聚己内酯或聚乳酸乙醇酸共聚物与胆固醇疏水改性葡聚糖二醛，按药物与载体的质量比为1∶100∶10～2∶1∶100溶于二甲基亚砜，得溶液A；

(2)将溶液A盛入截留分子量为1000～14000的透析袋中-20～40℃对水透析1～72小时，得超微粒悬浊液B；

(3)将步骤2得到的产物在6000～20000转/分离心分离、水洗，超声分散于磷酸缓冲溶液中，加入与悬浊液体积比为1∶100～1∶1浓度为0.1～80％的亲和素磷酸缓冲溶液，室温孵化1～72小时；

(4)将步骤3得到的产物在6000～20000转/分离心分离、水洗，超声分散于磷酸缓冲溶液中，加入与悬浊液体积比为1∶100～1∶1浓度为0.1～80％的生物素化转铁蛋白磷酸缓冲溶液，室温孵化0.5～240分钟；

(5)将步骤4得到的产物在8000～20000转/分离心分离、水洗、冷冻干燥后得到粒径为50～500nm表面含转铁蛋白的载药微粒。

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