CN1660073A

CN1660073A - 一种多烯紫杉醇纳米粒及其制备方法

Info

Publication number: CN1660073A
Application number: CN 200410099292
Authority: CN
Inventors: 李亚平; 顾王文; 阎州; 徐郑虹
Original assignee: Shanghai Institute of Materia Medica of CAS
Current assignee: Shanghai Institute of Materia Medica of CAS
Priority date: 2004-12-30
Filing date: 2004-12-30
Publication date: 2005-08-31
Anticipated expiration: 2024-12-30
Also published as: CN100423719C

Abstract

本发明涉及一种多烯紫杉醇纳米粒及其制备方法，该多烯紫杉醇纳米粒由多烯紫杉醇与生物降解性聚合物制成，粒径为10～400nm。利用本发明纳米粒可以制成多种剂型的多烯紫杉醇靶向给药系统，具有肿瘤靶向性好，抗肿瘤效果良好。毒副作用低等优点。

Description

一种多烯紫杉醇纳米粒及其制备方法

技术领域

本发明涉及药品领域中的靶向给药制剂，更具体指一种由多烯紫杉醇与生物降解性聚合物制成的纳米粒，多烯紫杉醇借助于纳米粒的作用，达到靶向治疗肿瘤的目的。本发明还涉及该纳米粒的制备方法。

背景技术

肿瘤靶向治疗是利用具有一定特异性的载体，将药物或其他杀伤肿瘤细胞的活性物质选择性地运送到肿瘤部位，把治疗作用或药物效应尽量限定在特定的靶细胞、组织或器官内，而不影响正常细胞、组织或器官的功能，从而提高疗效、减少毒副作用的一种方法。

多烯紫杉醇(docetaxel)是近年开发的新一代紫杉烷类抗肿瘤药物，为有丝分裂抑制剂，多烯紫杉醇是半合成抗肿瘤新药，对多种实体瘤具有较强的抗肿瘤活性，体外实验提示多烯紫杉醇可以抑制SPC A1肺腺癌细胞的生长，而且随着剂量的增大抑制作用增强，这种作用与该药物诱导细胞发生G2 M期阻滞有关。对在体Lewis肺癌的研究表明，多烯紫杉醇通过诱导Lewis肺癌细胞发生G2 M期阻滞和凋亡抑制肿瘤组织的生长。多烯紫杉醇的作用机制与紫杉醇类似，但抗肿瘤活性是紫杉醇的1.3～12倍，对乳腺癌、非小细胞肺癌等癌症均有明显疗效。

多烯紫杉醇难溶于水，即使配制成注射液，在临床应用中的毒副作用也较大，容易引起较多的并发症，如过敏反应、骨髓抑制、神经毒性、心血管毒性、脱发等等，同时药物的体内生物利用度较低，且需长期使用。目前对其结构改造以减少不良反应的尝试尚无大的进展。

目前多烯紫杉醇主要是以聚氧乙烯氢化蓖麻油和乙醇等配制而成注射液，注射后对人体有毒副作用，特别是在使用多烯紫杉醇注射液前，必须先服用抗过敏药物或注射抗过敏药物来帮助缓解由于多烯紫杉醇注射液的使用而产生的严重过敏等毒副作用，常常给病人带来痛苦，直接影响了该药的使用。

发明内容

本发明的目的是提供一种新型的多烯紫杉醇纳米粒，该纳米粒在保持多烯紫杉醇原有结构的前提下，借助纳米粒载体，可制备成具有肿瘤靶向性的制剂。

本发明的另一个目的在于提供该纳米粒的制备方法。

本发明所述的治疗肿瘤的多烯紫杉醇纳米粒由多烯紫杉醇与生物降解性聚合物制成，二者的比例按重量计算为多烯紫杉醇∶生物降解性聚合物＝1∶1～500份，通过物理方法制备而成。其中生物降解性聚合物可以是聚乳酸，聚乳酸甘醇酸，聚乙二醇化聚乳酸，聚乙二醇化聚乳酸乙醇酸共聚物，明胶，甲壳素，磷脂，卵磷脂，大豆磷脂，磷脂的衍生物等。该纳米粒的粒径为10～400nm，优选50～200nm。

本发明还提供了多烯紫杉醇纳米粒的制备方法，该方法是将多烯紫杉醇和生物降解性聚合物按上述比例溶解于有机溶剂，将所得的溶液注入到以3000rpm～30000rpm速度搅拌下的浓度为0.1％～5.0％(重量比)表面活性剂水溶液中，继续匀化搅拌，形成水包油型乳液后搅拌挥发有机溶剂，经离心、洗涤、干燥后制成。

上述方法中，有机溶剂可以选择二氯甲烷、三氯甲烷、乙醇、乙酸乙酯、乙醚或它们的混合物；表面活性剂可以是聚乙烯醇、大豆磷脂、卵磷脂、氢化卵磷脂、胆酸钠、胆酸、羟化卵磷脂、磷脂酰乙醇胺等。优选的匀化转速为8000rpm～20000rpm，该条件下可制成粒径为50～200nm的纳米粒，达到靶向释药的目的。多烯紫杉醇纳米粒继而可用于进一步制备成医用的注射液、冻干粉针、混悬型注射液、注射用片剂等制剂。多烯紫杉醇与生物降解性聚合物之间并没有发生化学作用，而只是物理方法制备而成，纳米粒是多烯紫杉醇的载体，在体内纳米粒依靠被动作用机制，通过肿瘤组织的毛细血管，作用于肿瘤细胞，抑制肿瘤细胞的增生。与现有的多烯紫杉醇制剂相比，多烯紫杉醇纳米粒有明显的肿瘤靶向性和提高药效、降低毒性的优势。

下面通过药理试验来说明本发明多烯紫杉醇纳米粒的靶向性及抗肿瘤活性：

下述实验中多烯紫杉醇纳米粒混悬注射液的配置方法为：准确称取多烯紫杉醇药物200mg和聚乙二醇化聚乳酸乙醇酸共聚物800mg溶于10ml的二氯甲烷中，将此溶液注入在15000rpm速度搅拌下的0.3％的聚乙烯醇水溶液500ml中，继续高速搅拌(15000rpm)，形成O/W乳液，随后慢速(500rpm)搅拌4h，挥去二氯甲烷，固化纳米粒，将获得的纳米粒悬浮液通过高速(15000rpm)离心收集，并用蒸馏水200ml洗涤3次后干燥，即得粒径在120～200nm的纳米粒约850mg，经检测多烯紫杉醇的载药量为20.8％，在4℃冰箱内保存，临用时悬浮于2％的羧甲基纤维素钠溶液中。

(一)本发明多烯紫杉醇纳米粒的靶向性实验

取昆明种小白鼠20只(体重20±5g)，按正常接种的方法，在无菌条件下，皮下接种S-180肿瘤细胞，7天后，S-180肿瘤模型建立成功。

取上述荷瘤小鼠，随机分成二组，每组10只，按20g/kg体重的剂量，一组尾静脉注射多烯紫杉醇纳米粒混悬注射液；另一组尾静脉注射市售多烯紫杉醇注射液(规格为30mg/5ml)，分别于注射后1小时和6小时处死各5只荷瘤小鼠，取肿瘤组织，用HPLC检测肿瘤组织中的多烯紫杉醇量。

结果显示：注射后6小时，注射多烯紫杉醇纳米粒组的荷瘤小鼠肿瘤组织中的多烯紫杉醇量是市售多烯紫杉醇注射液组的6倍。说明多烯紫杉醇纳米粒有较好的肿瘤靶向作用。

(二)本发明多烯紫杉醇纳米粒的抗肿瘤活性实验

取昆明种小白鼠24只(体重20±5g)，在无菌条件下，腋下接种S-180肿瘤细胞，7天后，S-180肿瘤模型建立成功。

取上述荷瘤小鼠，随机分成二组，每组10只，按20g/kg体重的剂量，一组小鼠尾静脉注射多烯紫杉醇纳米粒混悬注射液；另一组尾静脉注射市售多烯紫杉醇注射液(规格为30mg/5ml)，每间隔2天注射一次，连续注射5次，最后一次注射2天后，处死小鼠，剥离肿瘤组织，称重，同时比较小鼠的体重变化。

结果显示：注射多烯紫杉醇纳米粒组的小鼠肿瘤抑制率为79.8％，市售多烯紫杉醇注射液组的肿瘤抑制率为36.4％。说明多烯紫杉醇纳米粒有更好的抗肿瘤效果。另外，注射多烯紫杉醇纳米粒组的小鼠体重增加明显(体重26.5±2.2g)，与对照组(体重19±2.1g)的体重变化呈显著性差异(p＜0.05)，说明多烯紫杉醇纳米粒有更低的毒性。

有益效果

1、本发明烯紫杉醇纳米粒在动物体内具有较好的肿瘤靶向性，抗肿瘤效果良好。毒副作用低。

2、本发明提供的制备烯紫杉醇纳米粒的方法为物理方法，在制备过程中多烯紫杉醇与生物降解性聚合物之间并没有发生化学作用，多烯紫杉醇通过纳米粒载体，在体内依靠被动作用机制，通过肿瘤组织的毛细血管，作用于肿瘤细胞，抑制肿瘤细胞的增生。与现有的多烯紫杉醇制剂相比，多烯紫杉醇纳米粒有明显的肿瘤靶向性和提高药效的优点。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但不限制本发明。

实施例1

精密称取多烯紫杉醇100mg和乙交酯丙交酯共聚物200mg溶于10ml的二氯甲烷中，将上述溶液注入到在5000rpm的速度搅拌下的1％的聚乙烯醇水溶液200ml中，经高压乳匀机处理(压力150000kPa)2分钟，形成水包油型(O/W)乳液，随后慢速(500rpm)搅拌2h，挥去二氯甲烷，使纳米粒固化，将获得的纳米粒悬浮液通过高速(12000rpm)离心收集，并用二次蒸馏水洗涤3次，每次100ml，干燥，即得粒径为150～250nm的纳米粒。

实施例2

精密称取多烯紫杉醇50mg和分子量为15000的聚乳酸200mg溶于10ml的二氯甲烷中，将此溶液注入到在13000rpm速度搅拌下的0.5％的聚乙烯醇水溶液200ml中，经高压乳匀机处理(压力100000kPa)3分钟，形成O/W乳液，随后慢速(400rpm)搅拌3h，挥去二氯甲烷，将获得的纳米粒悬浮液通过高速(15000rpm)离心收集，并用二次蒸馏水洗涤3次，每次100ml，干燥，即得粒径为90～200nm的纳米粒。

实施例3

准确称取多烯紫杉醇药物60mg和大豆磷脂200mg溶于8ml无水乙醇中，将此溶液注入到在12500rpm速度搅拌下的0.3％的聚乙烯醇水溶液200ml中，继续高速搅拌(10000rpm)，形成O/W乳液，随后慢速(500rpm)搅拌4h，挥去乙醇，固化纳米粒，将获得的脂质纳米粒悬浮液通过高速(14400rpm)离心收集，并用蒸馏水洗涤3次，每次200ml，干燥，粒径在120～200nm的纳米粒，在4℃冰箱内保存。

在无菌条件下，取上述所得的多烯紫杉醇纳米粒210mg，加入7ml的7.5％(V/V)的甘露醇水溶液，常规法冻干即得多烯紫杉醇纳米粒粉针剂。冻干即得多烯紫杉醇纳米粒粉针剂。

实施例4

精密称取多烯紫杉醇药物100mg和聚乙二醇化的聚乳酸甘醇酸共聚物400mg溶于20ml的二氯甲烷中，将此溶液注入到在14000rpm速度搅拌下的0.5％的聚乙烯醇水溶液200ml中，继续高速(10000rpm)搅拌，形成O/W乳液，随后慢速(800rpm)搅拌3h，挥去二氯甲烷，固化纳米粒，将获得的纳米粒悬浮液通过高速(14400rpm)离心收集，并用蒸馏水洗涤3次，每次100ml，干燥，即得粒径为90～160nm的纳米粒，在4℃冰箱内保存。

在无菌条件下，取上述所得的取上述所得的多烯紫杉醇纳米粒(300mg)，混悬于2％聚乙烯吡咯烷酮溶液10ml中，即得多烯紫杉醇脂质纳米粒混悬注射液。

实施例5

精密称取多烯紫杉醇药物100mg和大豆磷脂500mg溶于20ml的乙醇中，将此溶液注入到在15000rpm速度搅拌下的0.5％的聚乙烯醇水溶液500ml中，继续高速(12000rpm)搅拌，形成O/W乳液，随后慢速(500rpm)搅拌2h，挥去乙醇，固化纳米粒，将获得的脂质纳米粒悬浮液通过高速(14400rpm)离心收集，并用蒸馏水洗洗涤3次，每次100ml，干燥，即得粒径为60～140nm的纳米粒，在4℃冰箱内保存。

在无菌条件下，取上述所得的多烯紫杉醇纳米粒420mg，混悬于2％聚乙烯吡咯烷酮溶液13ml中，即得多烯紫杉醇脂质纳米粒混悬注射液。

实施例6

在无菌条件下，精密称取无菌的多烯紫杉醇药物200mg和聚乙二醇化聚乳酸400mg溶于15ml的乙醇中，将此溶液注入到在15000rpm速度搅拌下的0.3％的聚乙烯醇水溶液500ml中，继续高速(18000rpm)搅拌，形成O/W乳液，高压乳匀机处理(压力100000kPa)2分钟，随后慢速(500rpm)搅拌3h，挥去乙醇，固化纳米粒，将获得的纳米粒悬浮液通过高速(14400rpm)离心收集，并用蒸馏水洗洗涤3次，每次100ml，干燥，即得粒径为50～100nm的纳米粒，在4℃冰箱内保存。

在无菌条件下，取上述所得的多烯紫杉醇纳米粒，与葡萄糖和甘露醇混匀后，压片，即得注射用多烯紫杉醇纳米粒片剂。片剂的组成(以重量计)为多烯紫杉醇纳米粒40％、葡萄糖45％、甘露醇15％。

Claims

1、一种多烯紫杉醇纳米粒，其特征在于由多烯紫杉醇与生物降解性聚合物制成，两者的比例为多烯紫杉醇1重量份，生物降解性聚合物1～500重量份；该纳米粒的粒径为10～400nm。

2、根据权利要求1所述的多烯紫杉醇纳米粒，其特征在于生物降解性聚合物为聚乳酸、聚乳酸甘醇酸、聚乙二醇化聚乳酸、聚乙二醇化聚乳酸乙醇酸共聚物、明胶、甲壳素、磷脂、卵磷脂、大豆磷脂、磷脂的衍生物。

3、根据权利要求1所述的多烯紫杉醇纳米粒，其特征在于粒径为50～200nm。

4、权利要求1所述多烯紫杉醇纳米粒的制备方法，其特征在于将多烯紫杉醇和生物降解性聚合物溶解于有机溶剂，所得的溶液注入到以3000rpm～30000rpm转度搅拌下的浓度为0.1％～5.0％(重量比)的表面活性剂水溶液中，继续匀化搅拌，形成水包油型乳液后搅拌挥发有机溶剂，经离心、洗涤、干燥后制成。

5、根据权利要求4所述的多烯紫杉醇纳米粒的制备方法，其特征在于匀化转速为8000rpm～20000rpm。

6、根据权利要求4所述的多烯紫杉醇纳米粒的制备方法，其特征在于有机溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、乙醇、乙酸乙酯、乙醚或它们的混合物。

7、根据权利要求4所述的多烯紫杉醇纳米粒的制备方法，其特征在于表面活性剂为聚乙烯醇、大豆磷脂、卵磷脂、氢化卵磷脂、胆酸钠、胆酸、羟化卵磷脂、磷脂酰乙醇胺。

8、权利要求1所述的多烯紫杉醇纳米粒，其特征在于可进一步制成注射液、冻干粉针、混悬型注射液、注射用片剂。