CN1753692A - 淋巴毒素β受体药剂与化疗剂的联合用药 - Google Patents

Abstract

本发明涉及联合用药治疗，其中包括一种组合物、以及治疗方法和筛选方法，其中所述的组合物与一种或多种其它化疗剂联用能活化淋巴毒素－β受体信号传导，其中所述筛选方法用于鉴定与淋巴毒素－β受体激动剂联用时对肿瘤具有超相加抑制效果的药剂。

Description

淋巴毒素β受体药剂与化疗剂的联合用药

相关申请

本申请要求于2002年12月20日提交的美国临时申请No.60/435185的优先权。本申请还与于2002年12月20日提交的美国临时申请No.60/435154有关。这些专利和专利申请每一篇在此全文引入作为参考。

技术领域

本发明属于免疫学和癌症诊断及治疗领域。更具体地说，本发明涉及淋巴毒素β受体(LT-β-R)活化剂与化疗剂在治疗方法中的联合用药。

背景技术

淋巴细胞毒素β受体(本申请中称之为LT-β-R)是肿瘤坏死因子家族的一个成员，其在免疫系统发育过程中和免疫系统中众多细胞，包括滤泡树状细胞和许多基质细胞类型功能保持中发挥的作用已有详细的阐述(Crowe et al.(1994) Science 264：707；BRowning et al.(1993)72：847；BRowning et al.(1995)154：33；Matsumoto  et al.(1997)Immunol.Rev.156：137)。现已查明LT-β-R的活化诱导某些癌细胞系的体内凋亡(PCT/US96/01386)。因此，用激动剂LT-β-R活化剂处理，例如特异性人源化抗LT-β-R抗体处理，可用于治疗或减缓患者(例如，人)肿瘤形成的进程、严重程度或作用。癌症是当今世界上最普遍的健康问题之一，在美国大约每5个人中就有一个受到影响。因此，控制肿瘤细胞和治疗各种癌症现在是而且将来也可能仍是一项重要的保健需要。

发明概述

部分地，本发明提供了抑制肿瘤体积并治疗癌症的方法，其中包括淋巴毒素β受体(LT-β-R)激动剂和化疗剂的使用，该化疗剂不是淋巴毒素受体激动剂。激动剂和化疗剂的联用取得的肿瘤抑制效果大于单独使用激动剂和化疗剂的预期效果。这种效果在本申请中称为“超-相加(supra-additive)”抑制，这可能由协同的或加强性的相互作用造成。本发明还提供了用于实施本发明方法的药物组合物、递送装置和试剂盒。

本发明提供了一种用于抑制肿瘤体积方法，其中包括施用有效量的淋巴毒素-β受体(LT-β-R)激动剂和有效量的至少一种化疗剂，其中LT-β-R激动剂和化疗剂的施用导致对肿瘤的超-相加抑制。

本发明还提供了一种用于抑制肿瘤体积的方法，其中包括施用有效量的抗淋巴毒素-β受体(LT-β-R)抗体和有效量的至少一种化疗剂，其中抗LT-β-R抗体和化疗剂的施用导致对肿瘤的超-相加抑制。

本发明提供了一种药物组合物，其中含有有效量的LT-β-R激动剂、有效量的至少一种化疗剂和可药用的载体，将该组合物施用给受试者导致对肿瘤的超-相加抑制。

本发明还包括有效量的淋巴毒素-β受体(LT-β-R)激动剂和有效量的化疗剂在制备用于治疗癌症的药物中的用途，将该药物施用给患者导致对肿瘤的超-相加抑制。

本发明的一个实施方案中，所述对肿瘤的超-相加抑制作用是协同性的。另一个实施方案中，所述对肿瘤的超-相加抑制作用具有小于1.00的联用指数(combination index)。另一实施方案中，所述对肿瘤的超-相加抑制作用是加强性的。在本发明的另一个实施方案中，所述对肿瘤的超-相加抑制作用具有小于0.05的P-值。

本发明的一个实施方案中，所述的LT-β-R激动剂是抗LT-β-R抗体。另一个实施方案中，本发明所述的抗LT-β-R抗体是单克隆抗体，其中所述单克隆抗体选自：BKA11，CDH10，BCG6，AGH1，BDA8，CBE11或BHA10。本发明的另一实施方案中，所述抗LT-β-R抗体是人源化抗体，包括例如，huCBE11和huBHA10。另一个实施方案中，本发明所述的抗LT-β-R抗体是多价的抗LT-β-R抗体。本发明的一个实施方案中，所述的多价的抗LT-β-R抗体是多特异性的。

本发明的一个实施方案中，所述抗体偶联于化疗剂。

本发明的另一实施方案中，所述化疗剂是干扰DNA合成的药剂。一个实施方案中，所述的干扰DNA合成的药剂是核苷类似物化合物，包括，例如，吉西他滨(gemcitabine)。另一个实施方案中，所述的干扰DNA合成的药剂是蒽环类抗生素(anthracyclines)，包括，例如，阿霉素(adriamycin)。

本发明的另一个实施方案中，所述化疗剂是拓扑异构酶I抑制剂，包括，例如，Camptosar。另一个实施方案中，所述化疗剂烷化剂，包括，例如，铂化合物(platinum compound)。一个实施方案中，所述铂化合物是卡铂(carboplatin)或顺氯氨铂(cisplatin)。

另一个实施方案中，所述化疗剂植物碱(plant alkaloid)。一个实施方案中，所述植物碱是紫杉烷(taxane)，包括，例如，红豆杉醇(Taxol)。

一个实施方案中，用于抑制肿瘤体积的方法，其包括施用有效量的淋巴毒素-β受体(LT-β-R)和有效量的化疗剂，该化疗剂不是淋巴毒素受体激动剂，其中LT-β-R激动剂和化疗剂的施用导致对肿瘤的超-相加抑制。所述对肿瘤的超-相加抑制作用是协同性的，一些实施方案中，所述对肿瘤的超-相加抑制作用具有小于1.00的联用指数。可选，所述联用指数为约0.85-约0.90；约0.70-约0.85；约0.30-约0.70；约0.10-约0.30。另一个实施方案中，所述联用指数是小于0.10。其它实施方案中，所述对肿瘤的超-相加抑制作用是加强性的，一些实施方案中，所述对肿瘤的超-相加抑制作用具有小于0.05的p-值。可选，所述对肿瘤的超-相加抑制作用具有的P-值为约0.05-约0.04；约0.04-约0.03；约0.03-约0.02；约0.02-约0.01。还有另一个实施方案中，所述p-值小于0.01。

各种LT-β-R激动剂中的任一种都可用于用于本发明所述方法。一些个实施方案中，所述的LT-β-R激动剂可以是抗LT-β-R抗体。一个实施方案中，所述的抗LT-β-R抗体是单克隆抗体。一些实施方案中，所述单克隆抗体选自：BKA11，CDH10，BCG6，AGH1，BDA8，CBE11或BHA10。另一实施方案中，所述抗LT-β-R抗体是人源化抗体。一些实施方案中，所述人源化抗体选自：huCBE11或huBHA10。一个实施方案中，所述人源化抗体为huCBE11。本发明中使用的人源化抗体在一些实施方案中可以用选自E46.4(ATCC专利保藏名称PTA-3357)或细胞系E77.4(ATCC专利保藏名称3765)的细胞系制备。其它另外的实施方案中，所述抗-LT-β-R抗体是多价抗-LT-β-R抗体构建体，一些实施方案中，可以是多特异性的。在本发明的一个实施方案中，所述抗LT-β-R抗体偶联于化疗剂。

同样地，各种化疗剂中的任一种都可用于本发明所述方法，只要激动剂和化疗剂的联用取得的肿瘤抑制效果大于单独使用激动剂和化疗剂的预期效果即可。一些实施方案中，所述化疗剂是干扰(disrupt)DNA合成的药剂。一个实施方案中，所述的干扰DNA合成的药剂是核苷类似物化合物。一个实施方案中，所述核苷类似物化合物是吉西他滨。另一个实施方案中，所述的干扰DNA合成的药剂是蒽环类抗生素，一些实施方案中，所述蒽环类抗生素是阿霉素。其它实施方案中，所述化疗剂拓扑异构酶I抑制剂。一个实施方案中，所述拓扑异构酶I抑制剂是伊立替康(irinotecan)，包括，例如，Camptosar。其它实施方案中，所述化疗剂中可以是烷化剂。一个实施方案中，所述烷化剂是铂化合物，一些实施方案中，选自卡铂和顺氯氨铂。一个实施方案中，所述铂化合物是顺氯氨铂。其它另外的实施方案中，所述化疗剂是植物碱。一个实施方案中，所述植物碱是紫杉烷，并且在一些实施方案中，可以是红豆杉醇。

本发明提供了用于筛选具有下述特性的化疗剂的方法：即与淋巴毒素-β受体(LT-β-R)激动剂一起施用的情况下产生抑制对肿瘤体积的超-相加作用。一个实施方案中，所述方法包括：(a)让受试者中的第一肿瘤与LT-β-R激动剂接触，然后测量对肿瘤体积的抑制情况；(b)让受试者中可比的第二肿瘤与候选化疗剂接触，然后测量肿瘤体积的抑制情况；以及(c)让受试者中可比的第三肿瘤与所述LT-β-R激动剂和所述候选化疗剂二者接触，然后测量对肿瘤体积的抑制情况；其中，当所述LT-β-R激动剂和所述候选化疗剂二者存在下对肿瘤体积的抑制大于所述LT-β-R激动剂和所述候选化疗剂单一存在下对肿瘤体积抑制之和时，则可以认为所述候选化疗剂具有抑制肿瘤体积的超-相加作用。

本发明还提供了本发明所述方法中使用的药物组合物。一个实施方案中，所述药物组合物含有有效量的LT-β-R激动剂、有效量的至少一种化疗剂，该化疗剂不是LT-β-R激动剂，以及可药用的载体，其中所述LT-β-R激动剂和所述化疗剂的联合给药获得了超-相加的肿瘤抑制效果。一些实施方案中，所述化疗剂选自：干扰DNA合成的药剂、核苷类似物化合物、烷化剂和植物碱。一些实施方案中，所述LT-β-R激动剂可以是抗LT-β-R抗体，一些实施方案中可以是人源化抗体。一个实施方案中，所述人源化抗体为huCBE11。其它实施方案中，所述抗LT-β-R抗体是多价的抗LT-β-R抗体构建体。

另外，还提供了所述方法中使用的药物递送装置。一个实施方案中，药物递送装置含有或能负载有效量的LT-β-R激动剂，有效量的化疗剂，该化疗剂不是LT-β-R激动剂，以及可药用的载体，其中用所述装置施用所述LT-β-R激动剂和所述化疗剂获得了超-相加的肿瘤抑制效果。一些实施方案中，用所述装置施用所述所述激动剂和所述化疗剂是同时进行的。一些实施方案中，在用所述装置给药前，可以先将所述激动剂和化疗剂在该装置中混合。其它另外的实施方案中，用所述装置施用所述所述激动剂和所述化疗剂是依次的进行的。

另外，还提供了用本发明组合物及治疗癌症或抑制肿瘤体积的方法。一个实施方案中，治疗癌症的方法包括向所述受试者施用有效量的本发明所述药物组合物。一些实施方案中，所述受试者是人。一些实施方案中，所述癌症包括实体瘤。可以向肿瘤位点局部施用所述组合物。一个实施方案中，将所述组合物组合物直接地施至肿瘤的动脉血供给(arterial bloodsupply)。另一个实施方案中，治疗受试者中癌症的方法包括：用本发明所述的药物递送装置向该所述受试者施用有效量的LT-β-R激动剂和有效量的化疗剂，该化疗剂不是LT-β-R激动剂。其它实施方案中，抑制受试者中肿瘤体积的方法包括向该受试者施用有效量的本发明所述药物组合物。另一个实施方案中，抑制受试者肿瘤体积的方法包括：用本发明所述的药物递送装置向该所述受试者施用有效量的LT-β-R激动剂和有效量的化疗剂，该化疗剂不是LT-β-R激动剂。

本发明进一步还提供了试剂盒，其中包括本发明药物组合物或药物递送装置，以及任选地使用它们的说明书。所述试剂盒的用途包括，例如，治疗应用。一些实施方案中，包含在任一试剂盒中的本发明组合物均已冻干，需要在使用之前再水化。

一个实施方案中，本发明提供了含有或能盛装下列物质的药物递送装置：：(1)有效量的LT-β-R激动剂；(2)有效量的至少一种化疗剂，该化疗剂不是LT-β-R激动剂；以及(3)可药用的载体；从而使得用所述装置施用所述LT-β-R激动剂和所述化疗剂可产生超-相加的肿瘤抑制效果。一个实施方案中，所述装置同时施用所述LT-β-R激动剂和化疗剂。另一个实施方案中，在用所述装置同时给药前，可以先将所述LT-β-R激动剂和化疗剂在该装置中混合。在一个单独的实施方案中，所述LT-β-R激动剂和化疗剂用所述装置顺次施用。

其它实施方案中，通过下述方法治疗受试者的癌症：用任一上述药物递送装置向该所述受试者施用有效量的LT-β-R激动剂和有效量的化疗剂，该化疗剂不是LT-β-R激动剂。

另一个实施方案中，本发明提供了一种治疗受试者癌症的方法，包括：向所述受试者施用有效量的药物组合物权利要求任一项所述的药物组合物。一个实施方案中，所述受试者是人。另一个实施方案中，所述癌症包括实体瘤。就实体瘤的治疗而言，一个实施方案提供了将所述药物组合物向所述肿瘤位点的局部给药。另一个有关实体瘤治疗的实施方案中，将所述药物组合物直接地施用至肿瘤的动脉血供给。

本发明的另一个实施方案中，是通过向所述受试者施用有效量的任一上述药物组合物来抑制肿瘤体积的。在一个单独的实施方案中，通过下述方法抑制受试者的肿瘤体积：用任一上述药物递送装置向该所述受试者施用有效量的LT-β-R激动剂和有效量的化疗剂，该化疗剂不是LT-β-R激动剂。

另一个实施方案中，本发明提供了用于治疗受试者癌症的试剂盒，其中含有任一种上述药物合成物。另一个实施方案中，所述试剂盒进一步还包括向所述受试者施用所述组合物用的说明书。

另一个实施方案中，本发明提供了用药物递送装置治疗受试者癌症所用的试剂盒，其中包括：有效量的LT-β-R激动剂和有效量的化疗剂，该化疗剂不是LT-β-R激动剂，以及任选地还包括使用说明书。

最后的实施方案中，本发明提供了筛选具有下述特性的化疗剂的方法：即与淋巴毒素-β受体(LT-β-R)激动剂一起施用产生超-相加的抑制肿瘤体积的作用，该方法包括：

让受试者中的第一肿瘤与LT-β-R激动剂接触，然后测量肿瘤体积的抑制情况；

让受试者中可比的第二肿瘤与候选化疗剂接触，然后测量肿瘤体积的抑制情况；以及

让受试者中可比的第三肿瘤与所述LT-β-R激动剂和所述候选化疗剂二者接触，然后测量肿瘤体积的抑制情况；

其中，当所述LT-β-R激动剂和所述候选化疗剂二者存在下对肿瘤体积的抑制大于所述LT-β-R激动剂和所述候选化疗剂单独存在下对肿瘤体积抑制之和时，则可以认为所述候选化疗剂具有抑制肿瘤体积的超-相加作用。

本发明的其它特点和优势可以从下面的发明详述和权利要求部分明显地看出。

附图简述

图1图示了治疗过程中，与盐水对照(十字形)、单用伊立替康(圆形)和单用huCBE11(三角形)相比，伊立替康(Camptosar)与huCBE11(正方形)联合用药对WiDr人结肠直肠腺癌肿瘤重量的影响。每种药剂的最初剂量都用一个箭头标示。

图2图示了治疗过程中，与盐水对照(十字形)、单用吉西他滨(圆形)和单用huCBE11(三角形)相比，吉西他滨与huCBE11联合用药(正方形)对WiDr人结肠直肠腺癌肿瘤重量的影响。每种药剂的最初剂量都用一个箭头标示。

图3图示了治疗过程中，与盐水对照(十字形)、单用红豆杉醇(圆形)和单用huCBE11(三角形)相比，红豆杉醇与huCBE11联合用药(正方形)对WiDr人结肠直肠腺癌肿瘤重量的影响。每种药剂的最初剂量都用一个箭头标示。

图4图示了治疗过程中，与盐水对照(十字形)、单用顺氯氨铂(圆形)和单用huCBE11(三角形)相比，顺氯氨铂(CDDP)与huCBE11联合用药(正方形)对WiDr人结肠直肠腺癌肿瘤重量的影响。每种药剂的最初剂量都用一个箭头标示。

图5图示了治疗过程中，与盐水对照(十字形)、单用阿霉素(圆形)和单用huCBE11(三角形)相比，阿霉素与huCBE11联合用药(正方形)对WiDr人结肠直肠腺癌肿瘤重量的影响。每种药剂的最初剂量都用一个箭头标示。

图6图示了治疗过程中，与盐水对照(十字形)、单用顺氯氨铂(实心正方形)和单用huCBE11(空心正方形)相比，顺氯氨铂(1mg/kg)与huCBE11(三角形；500μg)联合用药对WiDr人结肠直肠腺癌肿瘤重量的影响。每种药剂的剂量给药用箭头标示。

图7图示了治疗过程中，与盐水对照(实心三角形)、单用阿霉素(实心圆形)和单用huCBE11(空心正方形)相比，阿霉素(6mg/kg)与huCBE11(实心正方形；500μg)联合用药对WiDr人结肠直肠腺癌肿瘤重量的影响。每种药剂的剂量给药用箭头标示。

图8图示了治疗过程中，与盐水对照(正方形)、单用Camptosar(三角形)和单用huCBE11(圆形)相比，Camptosar(3mg/kg)与huCBE11(菱形；20mg/kg)联合用药对WiDr人肿瘤重量的影响。每种药剂的剂量给药用箭头标示。

图9图示的是在WiDr结肠直肠腺癌模型中huCBE11与Camptosar联合用药对于减小肿瘤体积在每一效果水平的联用指数的曲线。联用指数(CI)相对于受影响分值(the fraction affected)(Fa)绘图。联用指数＜1表明协同作用。

图10图示的是在对KM-20L2直肠结肠腺癌模型治疗的多个时间点，huCBE11与Camptosar(huCBE11∶Camptosar的固定剂量比例为1∶0.63)联合用药对于减小肿瘤体积在每一效果水平的联用指数的曲线。联用指数(CI)相对于观察到的肿瘤抑制百分比绘图。联用指数＜1表明协同作用。

图11图示的是WiDr结肠直肠腺癌模型中huCBE11与Camptosar联合用药对于减小肿瘤体积在每一效果水平的联用指数的曲线图。联用指数(CI)相对于受影响分值(Fa)绘图。联用指数＜1表明协同作用。

图12图示了治疗过程中，与盐水对照(十字形)、单用吉西他滨(圆形)和单用huCBE11(三角形)相比，吉西他滨(20mg/kg)与huCBE11(正方形；4mg/kg)联合用药对WiDr人结肠直肠腺癌肿瘤重量的影响。每种药剂的剂量用箭头标示。

图13图示的是在KM-20L2直肠结肠腺癌模型治疗的多个时间点，huCBE11与Camptosar(huCBE11∶吉西他滨的固定剂量比例为4∶5)联合用药对于减小肿瘤体积在每一效果水平的联用指数的曲线。联用指数(CI)相对于观察到的肿瘤抑制百分比绘图。联用指数＜1表明协同作用。

图14给出的是，当huCBE11∶吉西他滨以4∶5的固定比例施用给KM-20L2直肠结肠癌模型小鼠时，huCBE11∶吉西他滨联合治疗的剂量-反应范围的三维图。

图15图示的是huCBE11与红豆杉醇联用对于减小肿瘤体积在每一效果水平的联用指数的曲线。联用指数(CI)相对于受影响分值(Fa)作图。联用指数＜1表明协同作用。

发明详述

定义

为了方便起见，在描述本发明之前，在此给出说明书、实施例和所附权利要求中使用的一些术语的定义。

除上下文有清楚地说明外，所述单数形式“一”、“一种”和“所述(该)”也将复数情况包括在内。

术语″施用″包括用于将药物组合物或治疗药物递送至受试者系统内或者特定部位之内或之上的任一方法。″系统施用″、″系统地施用″、″外周施用″和″外周地施用″在本申请中是指化合物、药物或其它物质通过除直接进入中枢神经系统之外的施用方式进入患者系统，从而经过新陈代谢及其它类似过程，例如，经皮下施用。“经非胃肠道施用”和“非胃肠道地施用”是指除肠道和局部施用之外的施用方式，通常经注射，包括，但不限于，静脉内，肌肉内，动脉内，鞘内，囊内，眶内，心内，皮内，腹膜内，经气管，皮下，表皮下，关节内，包囊下，蛛网膜下，脊柱内和胸骨内注射及输注。

“干扰(disrupt)DNA合成的药剂”是指能够减缓或抑制DNA合成进程的任一分子或化合物。干扰DNA合成的药剂的实例包括但不限于实施或促进DNA合成的酶的抑制剂，例如拓扑异构酶I，或者核苷类似物例如嘧啶或嘌呤类似物。

“烷基化试剂”是指能与亲核基团(例如，胺，醇，酚，有机和无机酸)反应从而在另一分子例如蛋白质或核酸上添加烷基的任一分子或化合物。用作化疗剂的烷化剂的实例包括白消安(busulfan)、chloarmbucil，环磷酰胺(cyclophosphamide)，异环磷酰胺(isosfamide)，氮芥(mechlorethamine)，苯丙氨酸氮芥(melphalan)，硫替派(thiotepa)，各种亚硝基脲(nitrosourea)化合物，以及铂化合物例如顺氯氨铂和卡铂(carboplatin)。

″抗肿瘤活性″是指物质或组合物针对与其相互作用肿瘤细胞表现出的阻遏其增殖或诱导其死亡的能力。″凋亡″是指程序性细胞死亡过程。

″癌症″或“肿瘤”通常是指任一恶性肿瘤或细胞的自发生长或增殖。在本申请中该术语包括充分发育的恶性赘生物，以及恶变前的病变。″癌症″患者，例如，患有肿瘤或白细胞增殖例如白血病。一些实施方案中，患有癌症的患者具有肿瘤，例如实体瘤。涉及实体瘤的癌症包括但不限于非小细胞肺癌(NSCLC)，睾丸癌(testicular cancer)，肺癌(lung cancer)，卵巢癌(ovarian cancer)，子宫癌(uterine cancer)，宫颈癌(cervical cancer)，胰腺癌(pancreatic cancer)，结肠直肠癌(colorectal cancer)(CRC)，乳腺癌(breastcancer)，以及前列腺(prostate)癌、胃(gastric)癌、皮肤癌、胃(stomach)癌、食管和膀胱癌。

″化疗剂″是指被用于治疗异源细胞或恶性细胞，诸如肿瘤引发疾病的任一分子或组合物。本申请中的化疗剂包括能与本发明抗体偶联的药剂，或者可选能与本发明抗体联用但不与所述抗体偶联的药剂。在本发明的一个实施方案中，用于与本发明抗体联用的化疗剂包括，但不限于：铂(即顺式铂)，蒽环类抗生素，核苷类似物(嘌呤和嘧啶)，紫杉烷，喜树碱，表鬼臼毒素(epipodophyllotoxin)，DNA烷化剂，叶酸拮抗剂，长春花生物碱(vincaalkaloid)，核糖核苷酸抑制剂，雌激素抑制剂，孕酮(progesterone)抑制剂，雄激素抑制剂，芳香酶抑制剂，干扰素，白细胞介素，单克隆抗体，红豆杉醇，Camptosar，阿霉素(dox)，5-氟尿嘧啶和吉西他滨。可以通过将所述抗体与所述化疗药物一起施用而在本发明的实践中将所述化疗剂与本发明抗体联用。一个实施方案中，本发明抗体不与化疗剂偶联。本发明的另一个实施方案中，所述化疗剂和所述抗-LT-βR激动剂抗体偶联在一起。

″联用指数″是指用Chou and Talalay(1984)Adv.Enz.Regul.22：27中方法测定时对至少两种分子或化合物的联合剂量效果(combined dose-effct)的测量，该方法在发明详述和实施例部分有进一步的描述。如果剂量影响是协同的，所述联用指数小于1.00。可选，显示协同作用的联用指数为约0.85-约0.90；约0.70-约0.85；约0.30-约0.70；约0.10-约0.30。

″有效量″是指化合物、物质或含有本发明化合物的组合物足以获得预期效果的量，所述预期效果包括但不限于，例如，体外或体内减小肿瘤体积。本发明药物组合物的有效量是指足以获得预期临床结果的所述药物组合物的量，包括但不限于，例如改善，稳定，防止或延迟患者体内癌症的发展。两种情况下，本发明所述化合物的有效量都可以以一次或多次给药的方式施用。上述这些指标的检测和测定已为本领域技术人员所知，包括，但不限于例如，肿瘤负荷的减小，肿瘤大小的抑制，第二(secondary)肿瘤增殖的减少，肿瘤组织中基因的表达，生物标志物的出现，淋巴结的累积，组织学分级，以及细胞核分级。

“人源化抗体”是指这样的抗体或抗体构建体，其中将来自一物种的抗体的互不决定区(CDR)嫁接于人抗体可变区的框架区。

“肿瘤体积的抑制”是指肿瘤体积的减小或缩小。药物组合物或治疗剂抑制肿瘤体积的能力可以通过“受影响分值(fraction affcted value)”测量。“受影响分值(Fa)”是指肿瘤被抑制分值的测量值，是通过用治疗组的平均肿瘤体积的缩小除以对照组平均肿瘤体积得出的。Fa为1.000表示肿瘤被完全抑制。Fa的计算在发明详述部分有进一步的描述。

″淋巴毒素-β受体(LT-β-R)激动剂″是指能使配体与所述LT-β-R结合、细胞表面LT-β-R聚簇和/或LT-β-R信号转导增强的任一药剂。

″抗LT-β-R抗体″是指能识别和结合LT-β受体至少一个表位的任一分子。抗LT-β-R抗体的实例包括单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体和多价抗体。“抗体”意图包括完整的抗体，例如，任一同种型(IgG，IgA，IgM，IgE，等)，并且包括其能与脊椎动物例如哺乳动物蛋白质特异性反应的片段，以及含有抗体片段的融合蛋白质。可以用常规方法将抗体片段化，用与如上述对完整抗体所用方法相同的方法筛选片段。因此，该术语中包括抗体分子蛋白水解切割或重组制备得到的片段，其能与特定蛋白质选择性反应。所述蛋白水解的和/或重组片段的非限制性实例包括Fab，F(ab’)2，Fab’，Fv，以及含有通过肽接头连接在一起的V[L]和/或V[H]结构域的单链抗体。″抗体″还包括″抗体构建体″，其中含有连接于5类Ig(例如IgA，IgD，IgE，IgG和IgM)中任一类的恒定区上的两或多个可变区。本发明包括多克隆抗体、单克隆抗体、人源化抗体，或其它的抗体纯化制剂，以及重组抗体。

“单克隆抗体”是指只含有能与具体表位免疫反应或结合抗原结合位点的抗体分子。对于针对表位的单克隆抗体或其衍生物、片段、类似物或同系物的制备，可以采用通过连续细胞系培养来制备抗体分子的任一技术。这样的技术包括，但不限于，杂交瘤技术(参见Kohler & Milstein(1975)Nature 256：495-497)；三体瘤(trioma)技术；人B细胞杂交瘤技术(参见Kozbor，et al.(1983)Immunol.Today 4：72)以及用于制备人单克隆抗体的EBV杂交瘤技术(参见Cole，et al.，1985 In： Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy，Alan R.Liss，Inc.，pp.77-96)。人单克隆抗体可以用于实施本发明，并且可以通过使用人杂交瘤(参见Cote et al.(1983).Proc.Natl.Acad.Sci.USA 80：2026-2030)或者通过用EB病毒体外转化B细胞(参见Cole et al.(1985)In： Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy，Alan R.Liss，Inc.，pp.77-96)来制备。

“多价抗体”或“多价抗体构建体”是指这样的抗体或抗体构建体，其中含有一种以上的抗原识别位点。例如，″二价″抗体构建体具有2种抗原识别位点，而″四价″抗体构建体具有四种抗原识别点。术语″单特异性″，″双特异性″，″三特异性″，″四特异性″，等，是指本发明多价抗体构建体中存在的不同抗原识别点特异性的数目(与抗原识别点数目不同)。例如：″单特异性″抗体构建体的抗原识别点全部结合同一表位。″双特异性″抗体构建体具有至少一个与第一表位结合的抗原识别位，以及至少一个与不同于第一表位的第二表位结合的抗原识别位点。″多价单特异性″抗体具有多个全部与同一表位结合的抗原识别位点。″多价双特异性″抗体具有多个抗原识别位点，其中的一部分与第一表位结合，一部分与不同于第一表位的第二表位结合。所述多价抗体构建体及其制备和使用方法的实例，见题为″Anti-LT-β-R Multispecific Multivalent Antibody Constructs，and Methods ofMaking and Using the Same″的临时专利申请，该申请提交于2002年12月20日，美国临时申请号为60/435154，在此全文引入作为参考。

术语″P-值″是指概率值。p-值表示完全随机状态下试验获得所述结果的可能性。在本发明的一个实施方案中，为双尾单样本T-检验(two-tailedone-sample T-test)的P-值。p-值小于0.05被认为是统计学显著的，即不可能是完全随机的。可选，统计学显著的p-值为约0.05-约0.04；约0.04-约0.03；约0.03-约0.02；约0.02-约0.01。一些情况下，p-值可能会小于0.01。在本申请中，所述p-值可用于测定当将淋巴毒素-β受体(LT-β-R)激动剂和非淋巴毒素受体激动剂的化疗剂施用至肿瘤或长有肿瘤的受试者时，是否取得了统计学显著的肿瘤体积超-相加抑制作用。当统计学显著性在并非偶然一天而是在一系列治疗日都观察到的情况下，存在生物学相关性。

“患者”或“受试者”或“宿主”是指人或非人动物。

术语″药物递送装置″是指可将治疗剂或药剂施用至受试者的任一用具。N药物递送装置的非限制性实例包括皮下注射器，多室注射器(multichambersyringe)，支架，导管，经皮贴剂(transcutaneous patch)，显微操作针(microneedle)，显微研磨器(microabraders)，和可植入控制释放用具。一个实施方案中，术语″药物递送装置″是指可将两种化合物在注射前混合的双室注射器。

术语“可药用的”在本申请中是指化合物、物质、组合物、和/或剂量形式，在合适的医疗判断范围内，适用与人及动物组织接触而不会产生毒性、放射性、过敏反应或其它问题或并发症，具有合理的利益/风险比。

术语″可药用的载体″在本申请中是指可药用的原料、组合物或载体，例如液态或固态填料、稀释剂、赋形剂、或溶剂包封原料，涉及将目标化合物从身体的一个器官或部分传送或输送到身体的另一器官或部分。从与制剂中其余组分适配并且对患者无害意义上说每一载体都必须是″可接受的″。可作为可药用载体的原料的一些实例包括：(1)糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素，及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠盐、乙基纤维素和醋酸纤维素；(4)黄蓍胶(tragacanth)粉；(5)麦芽；(6)白明胶；(7)滑石；(8)赋形剂，例如可可脂和栓剂蜡；(9)油剂，例如花生油、棉花籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和豆油；(10)乙二醇，例如丙二醇；(11)多元醇，例如甘油、山梨糖醇、甘露醇和聚乙二醇；(12)酯，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)藻酸；(16)无热原的水；(17)等渗盐水；(18)林格氏(Ringer’s)溶液；(19)乙醇；(20)pH缓冲的溶液；(21)聚酯、聚碳酸酯和/或聚酐；以及(22)其它药物制剂中使用的无毒相容物质。

“可药用的盐”是指化合物的相对无毒的无机和有机酸加成盐。这些盐可以在给药载体或剂型制备过程中原位制备，或者通过下述方法制备：让以游离碱形式存在的经纯化的本发明化合物与合适的有机或无机酸反应，分离随后纯化过程中形成的盐。本发明化合物的可药用盐包括所述化合物的常规无毒盐或季铵盐，例如，来自无毒的有机或无机酸。

术语“植物碱”是指属于下述特性的分子家族的化合物：即源自植物且具有生物学活性和细胞毒的碱性含氮分子。植物碱的实例包括，但不限于，紫杉烷例如多西紫杉醇(docetaxel)和紫杉醇(paclitaxel)，长春胺(vinca)例如长春花碱(vinblastine)、长春新碱(vincristine)，以及长春烯碱(vinorelbine)。一个实施方案中，所述植物碱是红豆杉醇。

术语″超-相加″是指联合用药的效果，其中该联合用药的效果大于单个药物单独用药效果的总和。超-相加效果的实例包括加强和协同作用。术语″加强″是指这样一种情况：2或多种药物的同时效应大于这些药物单独给药作用的总和。一个实施方案中，发生的加强是这样一种情况，一种药剂单独施用时没有任何抑制作用，但是联合用药时加强了第二种药剂的作用。在本发明的一个实施方案中，LT-β-R激动剂或化疗剂中只有一种具有抑制肿瘤体积的能力，但是联合用药时所述药剂的作用得到了加强。

术语″肿瘤的超-相加抑制″是指肿瘤体积缩小的总数大于每种药剂单个用药时产生作用之和。在本发明的一个实施方案中，肿瘤的超-相加抑制包括LT-β-R激动剂与非LT-β-R激动剂的化疗剂联合用药产生的平均肿瘤抑制，统计学上显著地大于所述LT-β-R激动剂和化疗剂分别单独用药时产生的肿瘤抑制作用的总和。LT-β-R激动剂和化疗剂联合给药产生的肿瘤抑制作用是否“统计学上显著大于”单个化合物的预期相加值，可以用发明详述中描述的多种统计学方法测定。

术语″协同的″是指比任两或多种单个药剂的相加效应更有效的联合。在本发明的一个实施方案中，术语协同包括超-相加抑制，其中LT-β-R激动剂和化疗剂各自都具有抑制肿瘤体积的能力。

术语“拓扑异构酶I抑制剂”是指能够抑制或减少拓扑异构酶I酶生物活性的分子或化合物。拓扑异构酶I抑制剂的非限制性实例包括蒽环类抗生素例如daunombicin、阿霉素和idambicin，以及表鬼臼毒素例如依托泊苷(etoposide)和替尼泊苷(teniposide)。

“治疗癌症”或“治疗患有癌症的受试者”是指向受试者施用药物治疗，例如，施用药物，从而使得癌症程度被减弱或防止。治疗癌症是指抑制癌细胞的复制，抑制癌症的扩散，缩小肿瘤体积，减少体内癌细胞的数目，和/或改善或减轻癌症引发疾病的症状。如果死亡率和/或发病率下降则可认为治疗是有疗效的。在本发明的一个实施方案中，术语治疗癌症是指缩小肿瘤体积。治疗包括(但不限于)组合物的施用，例如药物组合物，并可以以预防为目的进行施用，或者发病开始之后施用。

术语″肿瘤体积″是指肿瘤的总体积，包括所述肿瘤本身再适当加上受影响的淋巴结。肿瘤体积可以用本领域已知的多种方法测定，例如，如，通过使用测径计(calipers)、计算机断层摄影术(CT)或核磁共振成像(MRI)扫描来测定肿瘤的维数，然后根据例如Z轴直径或常规形状例如球体、椭圆体或立方体使用方程计算体积。

淋巴毒素-β-受体(LT-β-R)激动剂

多种LT-β-R激动剂中的任一种都可用于用于本发明所述方法。U.S.6,312,691和WO 96/22788，在此全文引入作为参考，描述了用于使用触发癌细胞死亡的LT-β-R激动剂治疗癌症的方法和组合物。例如，U.S.6,312,691描述了本发明使用的LT-β-R激动剂，包括膜-结合LT-α/β复合体、可溶性LT-α/β复合体及抗LT-β-R抗体，以及其制备和纯化的方法。

表面LT-α/β异聚复合体可以通过用LT-α和LT-β基因共转染过宿主细胞来重构。表面LT复合体无法在稳定的细胞系上观察到，因为该细胞系只能表达单一的LT基因。但是，如果宿主细胞正常能产生大量LT-α(例如RPMI1788细胞；见下文)，然后用编码所需LT-β多肽的LT-β基因转染应该能足以生成其中含有全长LT-α亚单位的LT-α/β复合体。

LT-α和LT-β多肽在多种真核表达系统中的共表达能够实现它们作为活性配体的装配和输出(Crowe et al.，J.Immunol.Methods，168，79-89(1994))。宿主系统包括但不限于CHO细胞，COS细胞，B细胞包括骨髓瘤，杆状病毒-感染的昆虫细胞和酵母。本发明所述的LT-α/β异聚复合体中的LT-α亚单位可以选自淋巴毒素-α、天然人或动物淋巴毒素-α、重组淋巴毒素-α、可溶性淋巴毒素-α、分泌型淋巴毒素-α、具有LT-α生物活性的淋巴毒素-α突变型蛋白，或者任何上述具有LT-α生物活性的淋巴毒素-α的淋巴毒素-α片段。

可溶性的(非膜-结合的)LT-α/β异聚复合体含有LT-β亚单位，其已经从膜-结合形式变为可溶形式。这些复合体在申请人的同时待审的国际申请中做了详细的描述(PCT/US93/11669，公开于1992年1月9日，公开号为WO 94/13808).可溶性的LT-β肽是用淋巴毒素-β的氨基酸序列定义的，其中在跨膜区末端(即在大约#_44氨基酸)和第一TNF同源区(即在#_88氨基酸)之间的任一点切割该序列，所述氨基酸的编号根据B Rowning et al(1993)Cell 72：847.的编号系统。

可以通过截短LT-β的N-末端除去胞质尾部和跨膜区制备可溶性的LT-β多肽(Crow et al.，Science，264，pp.707-710(1994)。可选，可以通过缺失或者通过用亲水氨基酸残基取代组成跨膜结构域的常规疏水氨基酸残基，使所述跨膜结构域失活。两种情况都创造了基本上亲水的水疗法方案(hydropathy profile)，这样便降低了脂类亲合力并且提高了水溶性。缺失所述跨膜结构域比用亲水性的氨基酸残基进行替代更为优选，因为这样可以避免引入潜在的免疫原表位。

可以通过用编码LT-α和可溶性的LT-β的DNA共转染合适的宿主细胞，制备可溶性LT-α/β异聚复合体(Crow et al，(1994)J.Immunol.Methods，168：79)。在无LT-α存在条件下，分泌的可溶性LT-β高度寡聚。但是，当与LT-α共表达时，形成了一种70kDa的三聚-样结构，其中含有两种蛋白质。另外，还可以通过用编码可溶性LT-β多肽的基因转染通常情况下只表达LT-α(例如上述RPMI 1788细胞)的细胞系，制得可溶性的LT-α1/β2异聚复合体。可以分别合成LT-α和LT-β多肽，用温和的去污剂使其变性，混合在一起，通过除去所述去污剂使其复性，形成可分离的混合LT异聚复合体(见下文)。

一些实施方案中，所述的LT-β-R激动剂可以是抗LT-β-R抗体。一些实施方案中，所述的抗LT-β-R抗体可以是多克隆抗体。免疫后，可以获得可与LT-β-R反应的抗血清，如果需要，可以从中分离出多克隆抗体。另一个实施方案中，所述的抗LT-β-R抗体是单克隆抗体。一些实施方案中，所述单克隆抗体可选自：BKA11，CDH10，BCG6，AGH1，BDA8，CBE11或BHA10。为了制备单克隆抗体，从免疫后的动物收获产抗体的细胞(淋巴细胞)，然后用常规体细胞融合方法与无限增殖的细胞例如骨髓瘤细胞融合，得到杂交瘤细胞。这类技术已为本领域所熟知，包括例如，杂交瘤技术(最初由Kohler and Milstein，(1975)Nature，256：495-497开发)，人B细胞杂交瘤技术(Kozbar et al.，(1983)Immunology Today，4：72)，以及用于制备人单克隆抗体的EBV杂交瘤技术(Cole et al.，(1985)Monoclonal Antibodies andCancer Therapy，Alan R.Liss，Inc.pp.77-96)。可以通过免疫化学方法筛选能产生可与LT-β-R特异性反应的杂交瘤细胞，分离单克隆抗体。一些实施方案中，用选自表1中细胞系的细胞系制备本发明所使用的单克隆抗体：

表1：

细胞系              mAb名称         保藏号

a)AG.H1.5.1         AGH1            HB 11796

b)BD.A8.AB9         BDA8            HB 11798

c)BC.G6.AF5         BCG6            B 11794

d)BH.A10            BHA10           B 11795

e)BK.A11.AC10       BKA11           B 11799

f)CB.E11.1          CBE11           B 11793

g)CD.H10.1          CDH10           B 11797

其它实施方案中，所述抗LT-β-R抗体是人源化抗体。一些实施方案中，所述人源化抗体选自：huCBE11或huBHA10。一个实施方案中，所述人源化抗体为huCBE11，其描述于WO 02/30986；美国临时申请No.60/240,285；美国临时申请60/275,289；美国临时申请60/299,987。另一个实施方案中，所述人源化抗体为huBHA10，描述于PCT申请PCT US03/20762；美国临时申请60/392,993；和美国临时申请60/417,372。

上表中申请人的申请，其内容在此全文引入，描述了用huCBE11和huBHA10分别治疗癌症触发癌细胞死亡所使用的方法和组合物。用目的抗原免疫动物，分离相应的抗体，将导致特异性抗原结合的可变区序列部分。然后，将动物-来源的抗原结合区克隆入其中的抗原结合区已经删除的人抗体的合适位置。参见，例如，Jones，P.et al.(1986)，Nature 321，522-525 orTempest et al.(1991)Biotechnology 9，266-273。另外，还可以使用转基因小鼠或其它哺乳动物表达人源化抗体。所述人源化可以是部分的或者完全的。人源化抗体将人抗体中的异源(种间)序列的利用降至最低，因而在所处理的受试者中激发免疫应答的可能性较低。一些实施方案中，可以使用选自下列细胞系的细胞系制备本发明所使用的人源化抗体：E46.4(ATCC专利保藏号PTA-3357)或细胞系E77.4(ATCC专利保藏号3765).

另外还可以使用常规重组DNA技术制备各种形式的抗LT-β-R抗体(Winter and Milstein，Nature，349，pp.293-99(1991))。例如，可以构建″嵌合″抗体，其中来自动物抗体的抗原结合结构域被连接于人恒定结构域(例如Cabilly et al.，U.S.Pat.No.4,816,567；Morrison et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，81，pp.6851-55(1984))。嵌合抗体可减少当动物抗体用于人临床治疗时激发的可见免疫原性应答。另外，还可以通过制备其中含有抗LT-β-R可变区和自不同类免疫球蛋白类型分离的人恒定区(CH1，CH2，CH3)的嵌合或人源化抗体，完成不同类重组抗LT-β-R抗体的构建。例如，可以通过将抗原结合位点克隆入携带人mu链恒定区的载体，重组制备出抗原结合位点效价增加了的抗LT-β-R IgM抗体(Arulanandam et al.，J.Exp.Med.，177，pp.1439-50(1993)；Lane et al.，Eur.J.Immunol.，22，pp.2573-78(1993)；Traunecker et al.，Nature，339，pp.68-70(1989))。此外，可以使用常规重组DNA技术，通过改变抗原结合位点附近的氨基酸残基，改变重组抗体与其抗原间的结合亲合力。参见，例如，(Queen et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，86，pp.10029-33(1989)；WO 94/04679)。

另外，如本领域所知，本发明的抗LT-β-R抗体还可以是交联的。交联后的最终偶联物优选可溶于生理性液体例如血液。偶联形式的所述聚合体不应该是高度免疫原性的，而且在选择经静脉内输注或注射之一作为施用方式的情况下，还应该具有适于经静脉内输注或注射的粘稠度。

其它实施方案中，所述抗LT-β-R抗体是多价的抗LT-β-R抗体构建体，并且一些实施方案中，可以是多特异性的。这类多价抗体构建体的实例，及其制备和使用方法，描述于美国临时申请60/435,154和名为″Anti-LT-β-R Multispecific Multivalent Antibody Constructs，and Methods ofMaking and Using the Same″的PCT申请No.＿＿＿，与本申请同日提交，在此全文引入作为参考。

一个实施方案中，所述多价抗体是淋巴毒素-β受体的激动剂，其中含有至少两个能结合所述受体并诱导LT-β-R信号的结构域。这些构建体可以包括重链和含有一个或多个可变区的轻链，其中所述重链包含两个或多个含可特异性结合LT-β受体的抗原识别位点；或者被构建成只包括重链或轻链，其中包含两个或多个含可特异性结合LT-β受体的CDR的可变区。

一方面，本发明包括多价抗体构建体，该构建体是人淋巴毒素-β受体(LT-β-R)激动剂。一个实施方案中，多价抗体构建体含有至少一个特异性结合LT-β-R表位的抗原识别位点。一些实施方案中，至少一个所述抗原识别位点位于scFv结构域，其它实施方案种，所有抗原识别位点都位于scFv结构域。

抗体构建体可以是二价的，三价的，四价的或五价的。一些实施方案中，所述抗体构建体是单特异性的。一个实施方案中，所述抗体构建体特异于可与CBE11结合的表位。其它实施方案中，本发明的所述抗体是单特异性的四价LT-β-R激动剂抗体，其中含有四个CBE11-抗原识别位点。另一个实施方案中，所述抗体构建体特异于BHA10表位，一些实施方案中是四价的。这些实施方案的任一个中，至少一个抗原识别位点位于scFv结构域，而这些实施方案中的一些中，所有抗原识别位点都位于scFv结构域。抗体可以是多特异性的，其中本发明所述抗体可结合人LT-β受体上的不同表位。

一些实施方案中，所述抗体构建体是双特异性的。其它实施方案中，所述抗体构建体特异性针对淋巴毒素-β受体(LT-β-R)表位组中的至少两个成员，该表位组是由可与下列抗体之一结合的表位组成的：BKA11，CDH10，BCG6，AGH1，BDA8，CBE11或BHA10。一个实施方案中，所述抗体构建体特异性针对可与CBE11和BHA10结合的表位，一些实施方案中，该构建体是四价的。一个实施方案中，所述抗体构建体具有2个CBE11-特异性抗原识别位点和2个BHA10-特异性识别位点，其中所述抗体是双特异性的四价的LT-β-R激动剂抗体。任一所述多特异性的抗体构建体中，至少一个抗原识别位点位于scFv结构域，一些实施方案中，所有抗原识别位点都位于scFv结构域。

其它实施方案中，本发明所述抗体构建体包含下表2中的多核苷酸序列和编码的多肽序列：

表2

序列	描述
		SEQ ID NO：1	所述hCBE11/hBHA10双特异性-1抗体构建体的成熟重链的多核苷酸序列

SEQ ID NO：2	所述hCBE11/hBHA10双特异性-1抗体构建体的成熟重链的多肽序列
		SEQ ID NO：3	所述hCBE11/hBHA10双特异性-1抗体构建体的成熟轻链的多核苷酸序列
SEQ ID NO：4	所述hCBE11/hBHA10双特异性-1抗体构建体的成熟轻链的多肽序列
		SEQ ID NO：5	成熟hCBE11/hBHA10双特异性-2抗体构建体的多核苷酸序列
SEQ ID NO：6	成熟hCBE11/hBHA10双特异性-2抗体构建体的多肽序列
		SEQ ID NO：7	所述hCBE11单特异性-1抗体构建体的成熟重链的多核苷酸序列
SEQ ID NO：8	所述hCBE11单特异性-1抗体构建体的成熟重链的多肽序列
		SEQ ID NO：9	成熟hCBE11单特异性-2抗体构建体的多核苷酸序列
SEQ ID NO：10	成熟hCBE11单特异性-2抗体构建体的多肽序列
		SEQ ID NO：11	成熟CBE11五聚重链抗体构建体的多核苷酸序列
SEQ ID NO：12	成熟CBE11五聚重链抗体构建体的多肽序列
		SEQ ID NO：13	成熟CBE11嵌合轻链抗体构建体的多核苷酸序列
SEQ ID NO：14	成熟CBE11嵌合轻链抗体构建体的多肽序列

另外，含有SEQ ID NOs：11-14所示重链和轻链的五聚CBE11构建体还可以用于筛选试验，鉴定联合用药的疗效。

所述抗原识别位点或整个可变区可以是源自一种或多种亲代抗体。所述亲代抗体可以包括天然存在的抗体或抗体片段，由天然存在抗体改造而来的抗体或抗体片段，使用已知特异于LT-β受体的抗体或抗体片段的序列从头构建的抗体。可以源自亲代抗体的序列比包括重和/或轻链可变区和/或CDR，其框架区或其它部分。

多价的、多特异性抗体可以含有包含两个或多个可变区的重链和/或包含一个或多个可变区的轻链，其中所述可变区中的至少2个识别LT-β受体上的不同的表位。

用于制造多价多特异性抗体的方法已为本领域所知。全长双特异性抗体的常规制备方法是基于2个免疫球蛋白重链-轻链对共表达，其中这2个链具有不同的特异性(milstein等。，Nature，305：537-539(1983))。因为免疫球蛋白重链和轻链随机组合，所以这些杂交瘤(quadromas)生产出10种不同抗体分子的潜在混合物，其中只有一种抗体分子具有所述正确的双特异性的结构。该正确分子的纯化，通常通过亲和层析步骤完成，相当繁重，并且产量很低。类似方法的描述见WO 93/08829，以及Traunecker et al.，EMBO J.，10：3655-3659(1991)。

可以使用源自亲代抗LT-β-R抗体的不同序列按照多种方式构建多价抗LT-β-R抗体，包括鼠或人源化BHA10(B Rowning et al.，J.Immunol.154：33(1995)；BRowning et al.J.Exp.Med.183：867(1996))和/或鼠或人源化CBE11(美国专利6,312,691)。

根据一种不同的方法，将带有所需结合特异性(抗体-抗原结合部位)的抗体可变区融合于免疫球蛋白恒定结构域序列。优选地，所述融合是与免疫球蛋白重链恒定结构域融合，其中含有至少部分铰链区，CH2和CH3区。优选地，具有含有轻链结合必需位点的第一重链恒定区(CH1)，其出现在至少一种所述融合体中。将编码所述免疫球蛋白重链融合体的DNA以及如果需要还有编码免疫球蛋白轻链的DNA插入独立的表达载体，然后共转染入合适的宿主有机体。这就为当在构建中使用比例不等的三种多肽链以提供最适产量的实施方案，提供了很大的灵活性调整实施方案中所述三种多肽相互间的比例。但是，当至少两种多肽链等比例表达得到高产时，或者当所述比例不特别重要时，可以将两种或全部三种多肽链的编码序列插入一个表达载体。

本发明的另一实施方案包括人抗LT-β-R抗体的用途，其可以在非人类动物，例如携带一种或多种人免疫球蛋白转基因的转基因动物中产生。这类动物可以作为制备杂交瘤所需脾细胞的来源，描述见美国专利5,569,825，WO00076310，WO00058499和WO00037504，在此引入作为参考。

一些实施方案中，本发明所述抗体和抗体片段可以是用化学方法修饰达到所需要的效果。例如，本发明抗体和抗体片段的聚乙二醇化可以使用本领域已知的任一聚乙二醇化反应完成，描述参见，例如，下列参考文献：Focus on Growth Factors 3：4-10(1992)；EP 0 154 316；EP 0 401 384(这些文献中的每一篇在此均全文引入作为参考)。优选地，所述聚乙二醇化通过与聚乙二醇分子(或类似的反应性水溶性聚合物)的酰基化反应或烃基化反应实现。用于本发明所述抗体和抗体片段聚乙二醇化的优选的水溶性聚合物为聚乙二醇(PEG)。在本申请中，“聚乙二醇”是指已经被用于衍生化其它蛋白质的任一形式的PEG，例如单(C1-C1O)烷氧基-或芳氧基-聚乙二醇。

用于制备聚乙二醇化的本发明抗体和抗体片段的方法通常包括下列步骤：(a)让抗体或抗体片段与聚乙二醇例如PEG的反应性酯或醛衍生物，在所述抗体或抗体片段能够结合于一个或多个PEG基团的条件下发生反应，以及(b)获取反应产物。根据已知参数和预期结果选择最佳反应条件或酰基化反应对于本领域普通技术人员来说是显而易见的。

聚乙二醇化抗体和抗体片段通常可用于治疗通过施用本申请所述抗体和抗体片段可减轻或调节的疾病。与非聚乙二醇化抗体和抗体片段相比，聚乙二醇化抗体和抗体通常具有延长的半衰期。所述聚乙二醇化抗体和抗体片段可以单独使用，或者与其它药物组合物联合用药。

本发明的其它实施方案中，使用本领域已知技术将所述抗体或其抗原结合片段偶联于白蛋白。

本发明的另一个实施方案中，抗体，或其片段，经过修饰减少或消除了潜在的糖基化位点。这类经过修饰的抗体通常称为″去糖基化的(aglycosylated)″抗体。为了提高抗体或其抗原-结合片段的结合亲合力，可以改变所述抗体的糖基化位点，例如，通过诱变(例如，定点诱变)。″糖基化位点″是指被真核细胞识别作为糖基结合位置的氨基酸残基。碳水化合物例如寡糖结合的氨基酸通常为天冬酰胺(O-连接)，丝氨酸(O-连接)，和苏氨酸(O-连接)残基。为了鉴定抗体或抗原-结合片段中潜在的糖基化位点，例如，使用公众可获得的数据库对所述抗体的序列进行检测，所述数据库诸如the Center for Biological Sequence Analysis提供的网址(参见http：∥www.cbs.dtu.dk/services/NetNGlyc/用于预测N-连接的糖基化位点)和http：∥www.cbs.dtu.dk/services/NetOGlyc/用于预测氧-连接的糖基化位点)。用于改变抗体糖基化位点的其它方法的描述参见美国专利6,350,861和5,714,350。

本发明的另一个实施方案中，可以改变抗体或其片段，其中该抗体的恒定区经过修饰，相对于未经修饰的抗体减少了至少一种恒定区-介导的生物学效应器功能。为了修饰本发明的抗体使得其与Fc受体(FcR)结合能力减弱，可以在FcR相互作用所必需的特定区域将所述抗体的免疫球蛋白恒定区片段突变(参见例如，Canfield et al(1991)J.Exp.Med. 173：1483；andLund，J.et al.(1991)J.of Immunol.₁₄₇：2657)。抗体FcR结合能力的减弱还能降低其它依赖FcR相互作用的效应器功能，例如调理作用和吞噬作用和抗原-依赖性细胞的细胞毒性。

在一个具体的实施方案中，本发明还提供了具有改变的效应器功能的抗体，例如结合效应分子的能力，例如补体或效应细胞上的受体。具体而言，本发明所述人源化抗体具有改变了的恒定区，例如，Fc区，其中至少一个氨基酸残基已经被不同残基或侧链所取代，从而减弱了该抗体结合FcR的能力。抗体FcR结合能力的减弱还能减弱其它依赖于FcR相互作用的效应器功能，例如调理作用和吞噬作用和抗原-依赖性细胞的细胞毒性。一个实施方案中，所述修饰后的人源化抗体是IgG类，包含至少一个Fc区中的氨基酸残基取代，从而使得所述人源化抗体具有改变了的效应器功能，例如，与未经修饰的人源化抗体相比。具体实施方案中，本发明所述人源化抗体具有改变了的效应器功能因而其免疫原性减弱(例如，不能激发非所需效应细胞活性、溶解或补体结合)，和/或具有更合乎需要的半衰期，同时仍然保持了针对LTβR或其配体的特异性。

可选，本发明涉及人源化抗体，其恒定区改变从而提高其与FcR，例如FcgR3结合的能力。这类抗体可用于调节效应细胞功能，例如，用于增加ADCC活性，例如，具体而言为用于本发明的肿瘤学应用。

在本申请中，″抗体-依赖性细胞-介导细胞毒″和″ADCC″是指细胞-介导的反应，其中表达FcR的非特异性细胞毒性细胞(例如自然杀伤(NK)细胞，嗜中性细胞和巨噬细胞)能够识别结合于靶细胞上的抗体，随后引发所述靶细胞的溶解。介导ADCC的初级细胞，NK细胞，只表达抗体例如该抗体与另一药剂或抗体的偶联物的FcgRIII，而单核细胞表达抗体例如该抗体与另一药剂或抗体的偶联物的FcgRI、FcgRII和FcgRIII。

另一个实施方案中，本发明所述抗LT-β-R抗体可以与化疗剂偶联以超-相加方式抑制肿瘤体积。可以与本发明所述抗体偶联的示范性的化疗剂包括，但不限于放射性偶联物(90Y，131I，99mTc，111In，186Rh，等)，肿瘤-活化的前药(美登类化合物(maytansinoid)，CC-1065类似物，clicheamicin衍生物，蒽环类抗生素，长春花生物碱(vinca alkaloid)，等)，蓖麻毒，白喉(diphtheria)毒素，假单胞菌属外毒素。

公知，其它LT-β-R激动剂——包括但不限于使用体外肿瘤细胞毒性试验鉴定的那些——当单独施用或联合施用给动物或者人时，在体内具有类似的抗肿瘤作用。

LT-β-R激动剂对肿瘤细胞的细胞毒作用在LT-β-R活化剂，具体为IFN-γ存在下得到加强。能诱导干扰素优选IFN-γ的任一药剂，和能增强LT-α/β异聚复合体和抗LT-β-R抗体对肿瘤细胞的细胞毒性作用的任一药剂，都属于本发明所述的LT-β-R激动剂。例如，临床实验已经显示了双股RNA(dsRNA)治疗的干扰素诱导。因此，多核糖鸟苷酸/多核糖胞苷酸(聚-rG/rC)及其它形式的dsRNA可以充当干扰素诱导剂(Juraskova et al.，Eur.J.Pharmacol.，221，pp.107-11(1992))。

可以将上述方法制备的LT-β-R激动剂纯化至适于用作药物组合物的纯度。通常，纯化的组合物是指该组合物中一种组分超过全部组分的约85％，超过全部组分的约85％、90％、95％、99％或更多。所述目的组分可以纯化至基本同质(在所述组合物中用常规检测方法检测不到污染组分)，其中所述组合物基本上由单一组分组成。按照本申请的教导，本领域技术人员能够使用蛋白质纯化的常规方法纯化本发明的多肽。多肽的纯度可以用本领域已知的多种方法测定，包括例如，氨基-末端氨基酸序列分析，凝胶电泳和质谱分析。

LT-βR激动剂和化疗剂的超-相加抑制

3.1化疗剂

本发明提供了淋巴毒素-β受体激动剂和化疗剂联合用药治疗癌症。同样地，多种化疗剂中任一种都可用于或受试用于本发明所述方法，只要激动剂和化疗剂的联用实现的肿瘤抑制效果大于将单独使用激动剂和化疗剂的效果单纯相加的预期效果即可。根据如何影响癌细胞中特异性化学物质的不同，将化疗药物分为数类，所述药物干扰细胞活性或程序，所述药物影响所述细胞周期的特定时期。

一些实施方案中，所述化疗剂是干扰DNA合成的药剂。一个实施方案中，所述的干扰DNA合成的药剂是核苷类似物化合物。一些实施方案中，所述核苷类似物化合物是吉西他滨。另一实施方案中，所述的干扰DNA合成的药剂是蒽环类抗生素，一些实施方案中，所述蒽环类抗生素是阿霉素。

其它实施方案中，所述化疗剂是拓扑异构酶I抑制剂。一些实施方案中，所述拓扑异构酶I抑制剂是Camptosar。

其它实施方案中，所述化疗剂中是烷化剂。烷化剂直接作用于DNA阻止癌细胞的复制。作为一类药物，这些药剂不是阶段-特异性(换句话说，它们在细胞周期的全部阶段中都发挥作用)。烷化剂通常具有抗下列疾病的活性：慢性白血病(chronic leukemias)、非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin’slymphoma)、霍奇金病(Hodgkin’s disease)、多发性骨髓瘤(multiple myeloma)、以及一些肺癌、乳腺癌及卵巢癌。烷化剂的实例包括白消安、顺氯氨铂、卡铂、苯丁酸氮芥、环磷酰胺，异环磷酰胺，氮烯唑胺(DTIC)、氮芥(mechlorethamine)(氮芥(nitrogen mustard)，和苯丙氨酸氮芥(melphalan)。一个实施方案中，所述烷化剂是铂化合物，一些实施方案中，选自卡铂和顺氯氨铂。一些实施方案中，所述铂化合物是顺氯氨铂。

其它实施方案中，所述化疗剂植物碱。一个实施方案中，所述植物碱是紫杉烷，包括，例如，红豆杉醇。

也可以使用各种形式的化疗剂和/或其它生物活性剂。这些包括，但不限于，不带电的分子、分子复合体、盐、醚、酯、酰胺等，当植入、注射入或者插入肿瘤中时它们在生物学意义上被活化。

3.2超-相加化疗剂的筛选

本发明提供了用于筛选具有下述特性的化疗剂的方法：即当与淋巴毒素-β受体(LT-β-R)激动剂联合用药时产生超-相加的肿瘤体积抑制效果。一个实施方案中，所述方法包括：(a)让受试者中第一肿瘤与LT-β-R激动剂接触，然后测量肿瘤体积的抑制情况；(b)让受试者中可比的第二肿瘤与候选化疗剂接触，然后测量肿瘤体积的抑制情况；以及(c)让受试者中可比的第三肿瘤与所述LT-β-R激动剂和所述候选化疗剂二者接触，然后测量肿瘤体积的抑制情况；其中，当所述LT-β-R激动剂和所述候选化疗剂二者存在下对肿瘤体积的抑制大于所述LT-β-R激动剂和所述候选化疗剂单一存在下对肿瘤体积抑制之和时，则可以认为所述候选化疗剂具有抑制肿瘤体积的超-相加作用。

在本申请中，″对肿瘤的超-相加抑制″是指LT-β-R与化疗剂联合用药产生的平均肿瘤抑制，统计学上显著地于所述LT-β-R激动剂和化疗剂分别单独用药时产生的肿瘤抑制的总和。LT-β-R激动剂和化疗剂联合给药产生的肿瘤抑制是否“统计学上显著大于”单个化合物的预期相加值，可以用下述方法测定。所述超-相加抑制可以是加强性的，或者协同性的，如上所定义。

通常，可以通过下述方法评估加强：测定试验组联合用药是否能够产生这样的平均肿瘤体积缩小，其与试验组分别单个用药产生的平均肿瘤体积缩小之和相比，为统计学上显著超-相加的。所述平均数肿瘤体积缩小可以计算为对照组和试验组之间平均肿瘤体积的差。肿瘤体积的被抑制分值，″受影响分值″(Fa)，可以通过用试验组平均数肿瘤体积缩小除以对照组平均数肿瘤体积计算得出。Fa为1.000表示肿瘤被完全抑制。检验统计学上的显著加强需要计算每一试验组的Fa。联合用药的预期相加Fa被认为是单独接受所述联合用药中任一种药物的组的平均Fa之和。例如，可以使用双尾单样本T-检验来评估试验得到的结果有多大可能是单纯随机产生的，如通过p-值测定的那样。小于0.05的p-值被认为是统计学显著的，包括但不限于约0.05-约0.04；约0.04-约0.03；约0.03-约0.02；约0.02-约0.01，即，不可能是随机产生的。一些情况下，p-值可能会小于0.01。因此，要认定是联合用药产生了加强的超-相加效果，那么联合用药试验组的Fa就必须统计学上显著大于单因素试验组的预期相加Fa。

协同效应是否源自于联合用药可以通过中间值-效果/联用-指数等效线图解法评定(Chou，T.，and Talalay，P.(1984)Ad.Enzyme Reg.，22：27-55)。在该方法中，根据从LT-β-R激动剂单用时的、化疗剂单用时的以及这二者以一定摩尔比联用时的中间值-效果曲线得到的参数，计算出不同剂量-效果水平的联用指数(CI)值。CI值＜1表明协同作用，所述CI值包括但不限于约0.85-约0.90；约0.70-约0.85；约0.30-约0.70；约0.10-约0.30。还有另一个实施方案中，所述联用指数是小于0.10。这种分析可以使用剂量效果分析用的CalcuSyn、Windows_软件(Biosoft，CamβRidge UK)实施。

本领域已知的或随后发展的用于分析超-相加效果是否因联合治疗而产生的任一方法都可用于筛选合适的化疗剂。

在本发明的一个实施方案中，在治疗癌症方面具有联合超-相加效果的激动剂/化疗剂联用通过本领域已知的筛选实验包括测定肿瘤体积抑制情况的实验进行鉴定。肿瘤体积常常用作评定一种化合物或联用化合物的抗-癌症药效的代表(参见实施例，Naundorf，et al.(2002)Int.J.Cancer，100：101；Goel.，et al.(2001)Clin Cancer Res.7：175；Liao，et al.(2000)Cancer Res.60：6805；Prewett，et al.(1999)Cancer Res.59：5209；Boudreau M.D.，et al.(2001)Cancer Res.61：1386)，肿瘤体积可以使用异种移植模型进行研究。用于筛选激动剂/化疗剂的异种移植模型的实例包括WiDr人结肠直肠腺癌和KM-20L2人结肠直肠腺癌。另外，现在还已经公开了抗-Erb2抗体Herceptin(参见美国专利No.6,627,196)和抗-VEGF抗体(参见美国专利No.5,955,311)使小鼠模型的肿瘤体积缩小或抑制。用于评定肿瘤大小(例如肿瘤体积)的指导方案记载于，“NCI-cooperative group-industryrelationship guidelines，appendix XVII(Status of the NCI preclinical antitumoragent discovery screen，principles and practice of oncology updates)”。

评价一种或多种抗体和/或化学治疗化合物抗癌药效的其它方法包括：存活及死亡率分析试验，以及合适的标记物(例如前列腺癌症中的PSA，结肠癌中的TPA)评价，其中所述标记物的水平可以在评估化合物的抗癌活性中进行评估。

4.药物组合物及递送装置

4.1药物组合物

本发明提供了含有上述LT-β-R激动剂和化疗剂的药物组合物。一个方面，本发明提供了可药用的组合物，其中含有一种治疗-有效量的一种或多种上述化合物，以及与之配制在一起的一种或多种可药用的载体(相加)和/或稀释剂。另一个方面，一些实施方案中，本发明所述化合物独自或与可药用的载体混合施用，以及还可以与其它化疗剂联合施用。因此，结合(联合)治疗包括活性化合物的连续、同时以及分别或以随后施用时首先施用药物的治疗效果还未完全消失的方式共-施用。

无论选择什么样的施用途径，都应通过本领域技术人员已知的常规方法，将可采用水合形式的本发明所述化合物和/或本发明所述药物组合物配制成可药用的剂型。尽管本发明的化合物可以单独施用，但是优选将所述化合物以药物制剂(组合物)形式施用。本发明所述化合物可以配制成与其它药物类似的任何便于人医或兽医施用的形式。

如下文详述，可以将本发明所述药物组合物为施用而专门配制为固相或液相形式，包括适合于下列施用途径的制剂形式：(1)口服，例如，灌剂(drench)(含水或非水溶液或悬液)，片剂，例如，用于颊、舌下和系统吸收的片剂，丸剂，粉剂，颗粒剂，用于舌头的糊剂；(2)肠胃外施用，例如，通过皮下、肌内、静脉内或硬膜外注射，作为例如无菌溶液或悬液，或缓释制剂给药；(3)局部施用，例如，乳膏剂，软膏剂，或者应用于皮肤的控制-释放的贴剂或喷雾剂；(4)阻道内或者直肠内施用，例如，作为阴道栓(pessary)、乳膏或泡沫；(5)舌下施用；(6)在眼部施用；(7)透皮；或者(8)在鼻部施用。一个实施方案中，所述药物组合物配制为用于肠胃外施用。另一个实施方案中，所述药物组合物配制为用于动脉内注射。另一个实施方案中，所述药物组合物配制为用于系统给药。

其它情况下，本发明所述化合物可以含有一或多个酸性功能基团，因而能与可药用的碱基形成可药用的盐。

润湿剂、乳化剂和润滑剂例如十二烷基硫酸钠和硬脂酸镁，以及着色剂，释放剂(release agent)，包被剂，甜味剂、调味剂及芳香剂，防腐剂以及抗氧化剂也可以存在于所述组合物中。

本发明的制剂包括适于口服、经鼻、局部(包括颊和舌下)、直肠、阴道和/或肠胃外给药的制剂。所述制剂可以便利地以单位剂型存在，可以用制药领域熟知的任一方法制备。可以与载体物质结合制备单一剂型的活性成分的量随要治疗的宿主、具体的给药方式而变化。可以与载体物质联合制备单一剂型的活性成分的量通常是所述化合物产生疗效的量。

本发明所述化合物的口服液态剂型包括可药用的乳剂、微乳剂、溶液、悬液、糖浆和酏剂。除所述活性成分之外，所述液体剂型还可以含有：本领域常用惰性稀释剂，例如，水或者其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例如乙醇，异丙醇，碳酸乙酯(ethyl carbonate)，乙酸乙酯，苯甲基醇(benzyl alcohol)，苯甲酸苄酯(benzyl benzoate)，丙二醇，1，3-丁二醇，油(具体是棉籽油油，花生，玉米油，胚芽油(germ)，橄榄油，蓖麻油和芝麻油)，甘油，四氢呋喃甲醇(tetrahydrofuryl alcohol)，聚乙二醇和去水山梨糖醇的脂肪酸酯，及其混合物。除惰性稀释剂之外，所述口服组合物还可以包含佐剂例如润湿剂、乳化及悬浮剂，甜味剂、调味剂、着色剂、芳香剂及防腐剂。悬液，除所述活性化合物之外，还可以含有助悬剂，例如，乙氧化的异硬脂酰醇，聚氧乙烯山梨醇及山梨聚糖酯，微晶纤维素，氢氧化铝(aluminummetahydroxide)，斑脱土(bentonite)，琼脂-琼脂(agar-agar)和黄蓍胶，及其混合物。

适于口服的本发明制剂可以采用下列剂型：胶囊剂，扁囊剂(cachet)，药丸，片剂，糖锭(lozenge)(使用一种加香的基质，通常为蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶)，粉末，颗粒，或者含水或非水液体中的溶液或悬液，或者水包油或油包水型乳液，或者酏剂或糖浆，或者锭剂(pastille)(使用一种惰性的基质，例如明胶和甘油，或者蔗糖和阿拉伯胶)和/或漱口剂等，每一种剂型都含有预定量的本发明化合物作为活性成分。本发明的化合物还可以以丸剂(bolus)、药糖剂(electuary)或糊剂(paste)的形式施用。

在口服的本发明固体剂型(胶囊、片剂、药丸、糖衣丸(dragee)、粉剂、颗粒等)中，所述活性成分混以一种或多种可药用的载体，例如柠檬酸钠或者磷酸氢钙，和/或任一下列物质：(1)填料或者膨胀剂，例如淀粉，乳糖，蔗糖，葡萄糖，甘露醇，和/或硅酸；(2)粘合剂，例如，羧甲基纤维素，藻酸盐，明胶，聚乙烯基吡咯烷酮，蔗糖和/或阿拉伯胶；(3)湿润剂，例如甘油；(4)崩裂剂，例如琼脂-琼脂，碳酸钙，马铃薯或者木薯淀粉，藻酸，某些硅酸盐，以及碳酸钠；(5)溶液阻滞剂(solution retarding agent)，例如石蜡；(6)吸收促进剂，例如季铵化合物；(7)润湿剂，例如鲸蜡基醇，单硬脂酸甘油酯，和非离子型表面活性剂；(8)吸收剂，例如高岭土(kaolin)及班脱土(bentonite clay)；(9)润滑剂，例如滑石，硬脂酸钙，硬脂酸镁，固体聚乙二醇，月桂基硫酸钠，及其混合物；以及(10)着色剂。就胶囊、片剂和药丸而言，所述药物组合物还可以含有缓冲剂。类似类型的固态组合物还可以利用乳糖或乳糖等赋形剂以及高分子量聚乙二醇等作为软及硬壳胶囊中的填料。

片剂可以通过压制或模制而成，任选含有一种或多种附加成分。压制片的制备可以使用粘合剂(例如，明胶或者羟丙基甲基纤维素)，润滑剂，惰性稀释剂，防腐剂，崩解剂(例如，淀粉羟基乙酸钠或者交联的羧甲基纤维素钠)，表面活性剂或者分散剂。模制片可以通过将湿润的粉末化合物与惰性液态稀释剂的混合物在合适的机器中浇模制备而成。本发明所述药物组合物的片剂及其它固体剂型，例如糖衣丸，胶囊、药丸和颗粒，可以任选地加上包衣或外壳制成，例如肠溶包衣以及本领域熟知的其它包衣。另外，还可以将它们配制以提供其中活性成分的缓慢或受控制的释放，例如，使用能提供所需释放曲线的不同比例的羟丙基甲基纤维素，其它聚合物基质，脂质体和/或微球体。可以将它们配制为快速释放的形式，例如，冻干的。可以通过下述方法将它们灭菌：例如用阻菌(bacteria-retaining)滤膜过滤，或者在无菌固相组合物中引入灭菌剂，该组合物可以即用即配溶于无菌水或一些其它无菌可注射介质。这些组合物还可以任选含有遮光剂(opacifyingagents)，而且可以是这样一种组合物，即它们仅在或者优选在胃肠道的某一部分释放，任选以延迟方式。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物及蜡。所述活性成分还可以微胶囊化形式存在，如果合适，使用一种或多种上述赋形剂。

本发明所述化合物的局部或透皮施用的剂型包括粉剂、喷雾剂、软膏剂、糊剂、乳膏剂、洗液、凝胶剂、溶液、贴剂和吸入剂。所述活性化合物可以在无菌条件下与可药用的载体混合，并且需要的话混以任一种防腐剂、缓冲液、或者推进剂。除本发明所述的活性化合物之外，所述软膏剂、糊剂、乳膏剂及凝胶剂可以含有赋形剂，例如动物和植物脂肪，油剂，蜡，石蜡，淀粉，黄蓍胶，纤维素衍生物，聚乙二醇，硅酮，班脱土，硅酸，滑石及氧化锌，或其混合物。除本发明所述的化合物之外，粉剂及喷雾剂可以含有赋形剂例如乳糖，滑石，硅酸，氢氧化铝，硅酸钙及聚酰胺粉末，或这些物质的混合物。另外，喷雾剂还可以含有常用推进剂，例如氯氟烃及挥发性的未被取代的烃，例如丁烷及丙烷。

适于肠胃外施用的本发明所述药物组合物含有一种或多种本发明的化合物以及一种或多种可药用的无菌等渗含水或无水溶液、分散液(dispersions)、悬液或乳液，或者无菌粉末，该粉末可以即用即配重新溶解于无菌注射液或者分散液，所述注射液或分散液中可以含有糖，酒精，抗氧化剂，缓冲液，抑菌剂，可使该制剂与目的接受者的血液等渗的溶质或者助悬或增稠剂。这些组合物还可以含有佐剂例如防腐剂、润湿剂、乳化剂及分散剂。为了确保本发明化合物不受微生物的作用可以在加入各种抗细菌剂及抗真菌剂，例如，对羟苯甲酸(paraben)，氯代丁醇，苯酚山梨酸(phenolsorbic acid)等。此外，还可以根据需要在所述组合物中含有等渗剂，例如糖、氯化钠等。此外，还可以通过引入可延迟吸收的试剂例如单硬脂酸铝及明胶，实现可注射药物形式的长效吸收。

一些情况下，为了延长药物的效果，根据需要减缓皮下或肌肉注射的吸收。这一点可以通过利用水溶性很差的结晶或非结晶物质的液体悬浮液完成。然后，所述药物的吸收率取决于它的溶解速度，反过来溶解速度取决于晶粒大小及结晶形状。可选，通过将所述药物溶解或悬浮于油载体中，实现胃肠外-施用药物形式的延迟吸收。

通过用可生物降解的聚合物例如聚交酯-聚乙醇酸(polyactide-polyglycolide)将本发明化合物微胶囊化制成可注射的储存(depot)形式。可以根据药物与聚合物之间的比例和所采用的具体聚合物的特性，控制药物释放的速率。其它可生物降解的聚合物的实例包括聚(原酸酯)及聚(酐)。还可以通过将所述药物包埋于与身体组织相容的脂质体或微乳剂，制备可注射的贮存剂型。

递送方法与装置

另外，还可以利用药物递送装置施用本发明所述的药物组合物，所述的递送装置包括皮下注射器，多室注射器，支架，导管，经皮贴剂，显微操作针，显微研磨器，和可植入控制释放用具。一个实施方案中，药物递送装置含有或能装有至少有效量的LT-β-R激动剂及有效量的化疗剂。一些实施方案中，所述装置能同时递送或施用所述LT-β-R激动剂及化疗剂。在用所述装置施用之前，所述装置能够将所述激动剂和化疗剂混合。其它另外的实施方案中，所述装置连续地施用所述LT-β-R激动剂和化疗剂。

一种加强型的药物递送装置是能在注射前混合两种化合物或顺序递送它们的多室注射器。常用的两室注射器以及预装填的所述注射器的自动化生产方法公开于Neue Verpackung，No.3，1988，p.50-52；Drugs Made inGermany，Vol.30，Pag.136-140(1987)；Pharm.Ind.46，Nr.10(1984)p.1045-1048 and Pharm.Ind.46，Nr.3(1984)p.317-318。注射器型安瓿是一种双室装置，该装置具有一个开放用于连接针头的前瓶区，两个活塞和外部的绕流管(by-pass)，使得盛装于前室的冻干粉与后室中的重配液在该绕流管中混合。所述方法包括下列主要步骤：洗涤并硅烷化注射器筒，将多个注射器筒插入载体托盘(carrier tray)，灭菌，将中间活塞经由筒尾端引入，翻转(upside down)所述托盘，通过筒尾端加入粉末溶液，冻干成干粉，在冻干室中时关闭前开口，翻转托盘，通过筒尾末端插引入重配的液体，插入尾塞(rear piston)，移去托盘中的产物，最后控制(final control)并包装。可以生产预装填了不同成分的安瓿以便与所述注射器配合使用。

另一个实施方案中，所述多室注射器是一种Lyo-Lyo-Ject系统(Vetter Pharma Turm，Yardley，PA)。所述Lyo-Ject可以让用户将所述药物直接冻干于注射器中，并且该系统还配套有用于快速重配并注射的稀释剂。描述见专利4,874,381和5,080,649。

其它实施方案中，所述化合物利用两个单独的注射器、导管、显微针、或其它能完成注射的装置来施用。

本发明所述的药物组合物还可以利用放入所作用组织内的、附近的或者与受影响组织或血流相联系的微球体、脂质体、其它微粒递送系统或缓释剂型施用。缓释载体的合适的实例包括成型制品例如栓剂或微胶囊形式的半透性聚合物基质。可植入的或微囊型缓释基质包括聚交酯(美国专利No.3,773,319；EP 58,481)、L-谷氨酸与γ乙基-L-谷氨酸的共聚物(Sidmanet al.，Biopolymers，22，pp.547-56(1985))；聚(2-羟乙基-异丁烯酸)或乙烯-乙酸乙烯共聚物(Langer et al.，J.Biomed.Mater.Res.，15，pp.167-277(1981)；Langer，Chem.Tech.，12，pp.98-105(1982))。本发明所述组合物将以有效剂量施用治疗特定的临床病症。优选药物制剂的确定以及给定应用的治疗有效剂量可由本领域技术人员考虑到下列因素而确定，例如，患者的身体状况及体重，预期治疗程度以及所述患者对所述治疗的耐受性。

经皮贴剂具有额外的好处，能将本发明化合物控制送递至身体。这类剂型可以通过将所述化合物溶解或分散于适当介质制备而成。另外还可以利用吸收增强因子增加所述化合物透过皮肤的通量。所述通量的速率可以通过下述手段控制：提供一种速率控制膜或将所述化合物分散于聚合物或凝胶中。

治疗方法

本发明进一步还提供了新型的治疗癌症治疗方法，其中包括向所述受试者施用有效量的本发明药物组合物，任选使用上述的递送装置。

本发明所述方法可用于治疗任一癌症，包括但不限于治疗实体瘤，可以用本发明化合物治疗的实体瘤的实例，包括但不限于乳腺癌，睾丸癌，肺癌，卵巢癌，子宫癌，宫颈癌，胰腺癌，非小细胞肺癌(NSCLC)，结肠癌，以及前列腺癌，胃癌，皮肤癌，胃癌，食道癌和膀胱癌。一些实施方案中，所述方法包括以胃肠道外方式向受试者施用有效量的本发明药物组合物。一个实施方案中，所述方法包括以经动脉内方式向受试者施用本发明的组合物。其它实施方案中，所述方法包括直接向受试者中肿瘤的动脉血供给施用有效量的本发明所述组合物。一个实施方案中，所述方法包括使用导管直接向癌性肿瘤的动脉血供给施用有效量的本发明所述组合物。在使用导管施用本发明组合物的实施方案中，所述的导管插入可以通过荧光检查或其它本领域已知的观察和/或引导导管插入的方法而得以引导或观察。另一个实施方案中，所述方法包括化疗栓塞。例如化疗栓塞方法可以包括，用一种由混以油基剂的树脂-样材料(例如混入乙碘油中的聚乙烯醇)与一或多种化疗剂组成的组合物，将为癌性肿瘤提供营养的血管堵塞。其它另外的实施方案中，所述方法包括以系统施用的方式向受试者施用本发明的组合物。

通常，使用本发明药物组合物的化疗栓塞或定向动脉内或静脉内注射治疗往往采用类似的方式，与位点无关。简而言之，待栓塞区域的血管造影术(血管的分布图)或更具体地说一些实施方案中待栓塞区域的动脉图(arteriography)可首先通过将不透射线的反衬物通过插入动脉或静脉(根据待栓塞或待注射的位点而定)的导管来注入而作为用X射线获得。所述导管可以经皮或通过外科手术插入。然后，使本发明的药物组合物通过导管回流将所述血管栓塞，直至观察到血流停止。可以通过重复所述血管造影术验证闭塞。在使用直接注射的实施方案中，随后用所需剂量的本发明药物组合物输注入所述血管。

通常，栓塞治疗导致含抑制剂的组合物的分布遍及被治疗肿瘤或血管肿块的空隙。堵塞动脉管腔的拴塞颗粒的物理体积导致血液供给的阻断。除这些效果之外，抗血管生成因子的存在能够防止供养肿瘤或血管肿块的新生血管的形成，增强切断血液供给的促老(devitalizing)作用。直接的动脉内或静脉内给药通常也能导致含抑制剂的组合物的分布遍及被治疗肿瘤或血管肿块的空隙。但是，通常不提倡使用该方法阻断血液供给。

本发明一个方面，肝或其它组织的原发和继发肿瘤可以使用栓塞或直接动脉内或静脉内注射疗法来治疗。简而言之，插入导管使其经由股动脉或肱动脉进入肝动脉，所述过程通过在荧光导引下将导管引入动脉系统来实施。所述导管前尽可能进入肝动脉树深处，以便将供给肿瘤的血管完全堵塞，而且为正常组织提供尽可能多的动脉分支供给。理想地这是肝动脉的节段性分支，但是，也可以是肝动脉末梢至胃十二指肠动脉起点的全部，或者甚至根据肿瘤及其单独血液供给的程度需要阻断多个分离的动脉。一旦获得目的导管位置，那么就通过动脉插管注射组合物(如上所述)栓塞所述动脉直至待阻塞动脉中血流停止，优选观察5分钟之后仍然如此。所述动脉的堵塞可以通过下述方法验证：通过所述导管注射不透射线的反衬物，然后通过荧光检查或X射线底片显示预先充满反衬物的血管不再能通过所述反衬物(no longer does so)。在使用直接注射的实施方案中，通过将所需剂量的组合物(如上所述)注入动脉插管来灌注所述动脉。可以对每一个待阻塞供给动脉重复同样的操作。

大多数实施方案中，本发明的药物组合物包括足够量的待递送物质，所述量足以使得递送给患者治疗有效量的所掺入治疗剂或其它物质作为部分预防或治疗性治疗。活性化合物在所述颗粒中的所需浓度取决于所述药物的吸收、失活和排出速率以及所述化合物的递送速度。应当注意的是剂量值还应随待减轻疾病的严重程度而变动。还应理解的是，对于任一特定的受试者来说，特异性给药方案应该根据个体需要和实施或监督组合物施用的人士的专业判断而随时调整。通常，使用本领域技术人员已知的技术确定剂量。选用的剂量取决于多种因素，包括所用的本发明所述具体化合物或者其酯、盐或酰胺的活性，施用途径，施用时间，所使用的具体化合物的排泄或新陈代谢速度，与所用具体化合物联合使用的其它药物、化合物和/或原料，患者的年龄、性别、体重、身体状况、总体健康及既往病史，以及医疗领域熟知的类似因素。

剂量基于每公斤患者体重的组合物的量。其它的量已为本领域技术人员所知，并且易于测定。可选，可以根据所述组合物的血浆浓度测定本发明所述剂量。例如，可以使用最大血浆浓度(Cmax)和从0到无穷大(AUC(0-4))的血浆浓度-时间关系曲线下面积。本发明的剂量包括能得出上述Cmax和AUC(0-4)值的剂量以及能得出这些参数的更大或更小值的其它剂量。

具有本领域普通技术的医生或兽医能够很容易地测定并给出所需要的药物组合物有效量。例如，所述医生或兽医开始可以在药物组合物中使用低于获得预期治疗效果所需水平的本发明所述化合物的剂量，然后逐渐增加所述剂量直至达到预期效果。

通常，本发明化合物的合适日剂量为该化合物产生疗效的最小有效剂量。所述有效剂量通常取决于上述因素。

能在给定患者中产生最有效治疗的任何具体化合物的准确施用时间及用量取决于具体化合物的活性、药物动力学和生物利用率，患者的生理状况(包括年龄、性别、疾病的类型及阶段、总的健康状况、对给定剂量及剂型药物的反应)，施用途径等。本申请给出的指导原则可用于优化治疗，例如确定最适的给药时机和/或量，只需要常规试验包括监测所述受试者并调整所述剂量和/或时机即可。

当对患者进行治疗时，可以在24-小时时段内通过在预定时间测量一个或多个相关指数，监测该患者的健康状况。治疗包括给药的添加物(supplement)、量、时机和制剂，可以根据监测结果进行优化。可以周期性地对所述患者进行再评估，通过测量相同参数测定改善程度，首次的所述再评估通常在治疗开始起4周末进行，随后在治疗期内每4-8周进行再评估，此后为每3个月评估。治疗可以持续数月乃至数年，对于人而言治疗期长短通常为至少1个月。可以根据这些再评估，对所用药量以及在可能情况下对施用时机进行调整。

治疗可以从小于所述化合物最佳量的较小剂量开始。此后，通过小量增加来提高剂量直至达到最佳疗效。

知晓这一点有助于肿瘤学家判定哪些药物可以在一起很好发挥作用，以及如果使用一种以上药物时，每一药物给药的确切计划(其中包括用药的先后顺序及频率)。

数种本发明化合物的联用，或者可选，与其它化疗剂的联用，可以减少任一单一组分的所需剂量，这是因为不同成分的显效起始时间及持续时间可以互补。在所述的联合治疗中，不同的活性药剂可以一起或分别递送，并且可以同时或在一天中的不同时间点递送。本发明化合物毒性及疗效可以通过细胞培养或实验动物中的常规药物学方法测定，例如，测定LD50和ED50。优选那些显现出较大治疗指数的组合物。尽管可以使用有毒副作用的化合物，但是为了减少副作用，应该小心设计将所述化合物靶向目标位点的递送系统。

细胞培养试验和动物研究中得到的数据可以用于配制人用的各种剂量。任一添加剂的剂量，或者可选，其中任一成分的剂量，优选位于循环浓度的范围内，包括几乎或根本无毒性的ED50。落在该范围内的剂量取决于采用的剂型和采用的施用途径。对于本发明的药剂而言，可以首先从细胞培养试验测定治疗有效剂量。可以计算出动物模型中的剂量以获得循环血浆浓度范围，其中包括细胞培养测定中的IC50(即，能实现对症状的半数-最大抑制的测试化合物的浓度)。这些信息可以用于更加精确地测定人用剂量。血浆中的水平可以，例如，通过高效液相层析法测定。

试剂盒

本发明提供了用于治疗各种癌症的试剂盒。例如，试剂盒可以包括一种或多种上述药物组合物以及任选地还包括其使用说明书。其它另外的实施方案中，本发明提供的试剂盒中含有一种或多种药物组合物以及一种或多种用于完成所述组合物给药的装置。例如，本发明的试剂盒可以包括药物组合物和用于完成将所述组合物直接经动脉内注射入癌性肿瘤的导管。其它实施方案中，本发明的试剂盒可以包括预充满LT-β-R激动剂和化疗剂的安瓿，所述物质任选地配制为药物或冻干的，以便利用递送装置来施用。

实施例

本发明通过下列实施例作进一步说明，这些实施例无论如何都不应被理解为是对本发明的限制。

材料与方法

WiDr小鼠模型

为了研究化疗剂与huCBE11联合用药的效果，使用了WiDr异种移植模型。现已发现CBE11对作为严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠中的异种移植物生长的WiDr肿瘤的抗肿瘤活性(BRowning et al.(1996)J.Exp.Med.183：867)。将治疗剂，即LTβR激动剂和化疗剂，施用给已经植入WiDr肿瘤细胞的无胸腺裸鼠。根据WiDr异种移植的人结肠直肠肿瘤的生长，对抗肿瘤活性包括所述联合治疗的协同或加强效果进行了研究，其中在已有的、预先形成的肿瘤块上开始进行治疗。

WiDr细胞获自美国典型培养物保藏中心(ATCC)(Manassas，VA)。将细胞体外培养于加有2mM L-谷氨酰胺的90％Eagle’s极限必需培养基和经调整含有下列物质的Earle’s平衡盐液(BSS)：1.5g/L碳酸氢钠、0.1mM非必需氨基酸，和1mM丙酮酸钠，外加10％胎牛血清(FBS)，无抗生素(5％CO2)。为了确保植入后24和48小时所有培养物都无细菌污染，对植入小鼠的肿瘤匀浆制剂取等分量进行细菌培养。

在第0天，将200μL无血清RPMI 1640中的2×10⁶WiDr细胞接种物经皮下植入右胁腹部位。从第3天开始每周两次记录肿瘤重量和体重的测量结果，对于包括Camptosar的试验在第4天开始记录所述重量。当测得的肿瘤长宽都约为5mm时，将小鼠随机分为治疗组和对照组。从第0天开始每周两次记录体重的测量结果。

KM-20L2小鼠模型

为了研究化疗剂与huCBE11联合用药的效果，使用了KM-20L2异种移植模型。将治疗剂，即LTβR激动剂和化疗剂，施用给已经植入WiDr肿瘤细胞的无胸腺裸鼠。根据WiDr异种移植的人结肠直肠肿瘤的生长，对抗肿瘤活性包括联合治疗的任何协同或加强效果进行了研究，其中在已有的、预先形成的肿瘤块上起始治疗。

KM-20L2获自NCI肿瘤贮藏所(repository)。将细胞培养于无抗生素的含10％胎牛血清的90％RPMI-1640。为了确保植入后24和48小时所有培养物都无细菌污染，对植入小鼠的肿瘤细胞匀浆制剂取等分量进行细菌培养。

在第0天，将无血清培养基中的2×10⁶或3×10⁶KM-20L2细胞接种物皮下植入小鼠右胁腹部位。定期记录肿瘤大小的测量结果。当测得的肿瘤长宽都约为5mm(65毫克)时，将小鼠随机分为治疗组和对照组。

肿瘤测量

使用游标卡尺测量肿瘤。依照研究定期记录肿瘤大小的测量结果，直至所述研究结束。根据2维肿瘤测量数值，利用长椭球体积计算公式计算肿瘤体积(mm³)：肿瘤体积(mm³)＝(长×宽²[L×W²])÷2。假定单位密度，将体积换算为重量(即，1mm³＝1mg)。肿瘤生长抑制用％T/C评定，其中T为治疗组的平均肿瘤重量，C为对照组的平均肿瘤重量。就这种类型的试验而言，％T/C值为42％或更小，就可以认为具有国立癌症研究院(USA)规定的有意义活性。据此牺牲动物。

统计学分析

根据标准统计方法，对肿瘤重量测量值进行统计学分析。在所有评估试验中，测定所有剂量组的体重和肿瘤重量的平均值、标准差(SD)和平均值的标准误(SEM)。对每次评估包括每一试验的终了的平均肿瘤重量进行Student′s t检验，测定在每个治疗组与载体对照组之间以及每一联合用药治疗组与单独施用huCBE11的组之间是否存在任何统计学上的显著差异。

进行分析，确定在用huCBE11与化疗剂联合治疗过程中是否产生了协同的或加强的抗肿瘤活性。如果单用化疗剂治疗荷WiDr肿瘤小鼠产生了剂量-反应型抗肿瘤效力，那么huCBE11加化疗剂联合用药的协同作用可以通过计算联用指数来评估(Chou and Talalay(1984)Adv.Enz.Regu.22：27)。此外，还可以通过下述方法评估加强作用：测定与单独治疗产生的效果之和相比，联合治疗产生的效果是否为统计学上显著的超-相加。

通过比较每一治疗组的肿瘤体积与对照组的肿瘤体积，测定抗肿瘤效力。平均的肿瘤体积缩小可以计算为对照组和试验组之间平均肿瘤体积的差。肿瘤体积的被抑制分值(fraction inhibition)，即，受影响分值(Fa)，可以通过用试验组平均数肿瘤体积缩小除以对照组平均肿瘤体积计算得出。Fa为1.000表示肿瘤被完全抑制。据此作进一步的统计学分析。

协同作用分析

CI表示的协同作用或拮抗作用程度的总体解释，其描述见下表3。

表3：用于描述协同作用或拮抗作用的符号的解释

联用指数的范围	符号	解释
			＜0.1	+++++	极强协同作用
0.1-0.3	++++	强协同作用
			0.3-0.7	+++	协同作用
0.7-0.85	++	中等协同作用
			0.85-0.90	+	轻度协同作用
0.90-1.10	±	近乎相加
			1.10-1.20	-	轻度拮抗作用
1.20-1.45	--	拮抗作用
			1.45-3.3	---	中等拮抗作用
3.3-10	----	强拮抗作用
			＞10	-----	极强拮抗作用

实施例1：LTβR激动剂与烷基化化疗剂联合用药的抗肿瘤效力

huCBE11与顺氯氨铂联用的抗肿瘤效力

为了测定烷基化化疗剂例如顺氯氨铂与huCBE11联合用药是否具有超-相加的抗肿瘤活性，例如，协同的或加强的活性，将顺氯氨铂与huCBE11联合施用给WiDr异种移植模型。

进行剂量范围试验，测定出适于研究顺氯氨铂与huCBE11的抗肿瘤效力的顺氯氨铂和huCBE11的剂量。另外，剂量试验还检测了每一药剂单独施用时抑制肿瘤生长的抗肿瘤效力。用盐水(对照)、huCBE11(50μg或500μg)或顺氯氨铂(剂量为0.25mg/kg-2mg/kg)对荷有既定WiDr肿瘤的无胸腺裸鼠进行处理(盐水对照组n＝30；试验组n＝10每一剂量)。第3天时测定肿瘤大小，此后定期进行直至分期日(staging day)。

在第50天时，生长于2mg/kg、1mg/kg和0.25mg/kg顺氯氨铂剂量组中的肿瘤生长与盐水对照组差别不显著。认为，根据NCI活性标准(％T/C为42或更小)，2mg/kg-0.25mg/kg的顺氯氨铂对WiDr模型无活性。第50天时，只在0.5mg/kg(p＜0.05)这一剂量，顺氯氨铂对生长于裸鼠的WiDr人结肠直肠肿瘤产生显著抑制。平行试验中测得，第44天时，在500μg(P＜0.001)和50μg(P＜0.01)的剂量，huCBE11产生了对肿瘤生长的显著抑制。单用顺氯氨铂治疗没有产生剂量-反应型的抗肿瘤效力，因此，顺氯氨铂加huCBE11联合用药的协同作用不能评估。

为了测定顺氯氨铂与huCBE11联合用药是否能使肿瘤生长抑制作用显著升高，按照上述方法对荷有既定WiDr肿瘤细胞的无胸腺裸鼠进行联合用药试验。该试验比较了huCBE11(50和500μg)与顺氯氨铂(1和2mg/kg)的各种联用的效果来测定药效，协同作用以及强化作用。对顺氯氨铂(1和2mg/kg)与huCBE11(50和500μg)的四种不同剂量组合进行了评估。

联合用药试验结果(如表4-6以及图4和6所示)表明huCBE11与顺氯氨铂联用能显著缩小所处理小鼠内的肿瘤体积。所有的肿瘤数据都是在第44天采集的。通过比较每一治疗组与对照组的肿瘤体积，测定抗肿瘤效力。Fa为1.000表示肿瘤被完全抑制。表4显示了huCBE11和顺氯氨铂单独及联合治疗时的量效关系。

表4：量效关系

治疗	剂量	单位	共治疗	剂量	单位	肿瘤体积	体积缩小	Fa
									对照						1418.6	0.0	0.000
顺氯氨铂	1	mg/kg				1300.4	118.2	0.083
									顺氯氨铂	2	mg/kg				1340.1	78.5	0.055
huCBE11	50	μg				869.7	548.9	0.387
									huCBE11	500	μg				614.7	803.9	0.567
huCBE11	50	μg	顺氯氨铂	1	mg/kg	490.4	928.2	0.654
									huCBE11	50	μg	顺氯氨铂	2	mg/kg	354.5	1064.1	0.750
huCBE11	500	μg	顺氯氨铂	1	mg/kg	410.9	1007.7	0.710
									huCBE11	500	μg	顺氯氨铂	2	mg/kg	275.0	1143.6	0.806

与单独施用500μg huCBE11相比，500μg huCBE11与2mg/kg顺氯氨铂1mg/kg顺氯氨铂联合用药产生了统计学意义上显著(分别为P＜0.01和P＜0.05)较小的WiDr肿瘤重量。50μg huCBE11与2mg/kg顺氯氨铂或1mg/kg顺氯氨铂联合用药也产生了统计学意义上显著(分别为P＜0.001和P＜0.01)较小的WiDr肿瘤重量。第44天时，huCBE11 500μg加顺氯氨铂2mg/kg(P＜0.01)(图1)或huCBE11 500μg加顺氯氨铂1mg/kg)(P＜0.05)联合治疗后，肿瘤重量与单独施用500μg huCBE11时相比显著减小。此外，huCBE11 50μg加顺氯氨铂2mg/kg(P＜0.001)或huCBE11 50μg加顺氯氨铂1mg/kg(P＜0.01)联合治疗后，肿瘤重量与单独施用50μg huCBE11时相比显著减小。

根据NCI活性标准，huCBE11加顺氯氨铂联合用药的所有受试剂量组合都被认为在WiDr模型中都具有活性(％T/C 42或更小)。对于huCBE11500μg加顺氯氨铂2mg/kg的剂量组合，第24天(38.4％)至44天(19.4％)当中，％T/C＜42％。对于huCBE11 500μg加顺氯氨铂1mg/kg的剂量组合，第30天(37.3％)-44天(29.0％)当中，％T/C＜42％(图2)。对于huCBE1150μg加顺氯氨铂2mg/kg的剂量组合，第27天(40.5％)-44天(25.0％)当中，％T/C＜42％(图3)。对于huCBE11 50μg加顺氯氨铂1mg/kg的剂量组合，第34天(40.0％)-44天(34.6％)当中，％T/C＜42％。

使用获自这些试验的肿瘤重量数据，进行统计学比较测定huCBE11加顺氯氨铂的联合用药是否产生加强作用。使用第44天的个体肿瘤体积(表5)计算每只动物的肿瘤体积的被抑制分值(即，Fa)(表6)。对统计学显著的加强作用的检验需要计算每只动物的Fa。使用个体肿瘤体积(表5)计算每只动物的肿瘤体积的被抑制分值(即，Fa)(表6)。如表4所示，Fa用下列公式计算：(对照组平均肿瘤体积-个体动物肿瘤体积)÷对照组平均肿瘤体积。联合用药的预期相加Fa是单独接受所述联用药物之一(huCBE11或顺氯氨铂)的各个组的平均Fa之和。另外，如果治疗是简单相加，也计算了联合治疗的实际疗效与预期疗效之间的差(表6)。使用双尾单样本t-检验测定所述联合治疗是否产生了统计学上显著不同于预期相加值的平均Fa(表6)。与预期相加的抗肿瘤效力相比，本试验中采用的所有使用huCBE11加顺氯氨铂的联合治疗方案都以统计学上显著的方式加强了抗肿瘤效力。

表5：第44天时的个体肿瘤体积

	对照	顺氯氨铂1mg/kg	顺氟氨铂2mg/kg	huCBE1150μg	huCBE11500μg	huCBE1150μg+顺氯氨铂1mg/kg	huCBE1150μg+顺氯氨铂2mg/kg	huCBE11500μg+顺氯氨铂1mg/kg	huCBE11500μg+顺氯氨铂2mg/kg
										1503.6	1280.0	970.2	842.6	726.2	445.5	305.8	460.1	292.7
	1123.2	1038.3	1204.2	686.0	645.6	638.0	632.2	388.2	159.9
										983.3	2096.4	1301.9	487.5	99.1	548.5	420.8	285.4	141.6
	1052.2	930.1	1505.3	802.7	944.8	359.8	286.8	314.2	271.7
										1228.2	1383.3	1469.5	624.9	534.1	398.7	407.0	359.3	690.3
	1413.9	1440.7	541.4	712.0	333.2	437.1	247.0	418.9	691.6
										1649.3	1220.3	1829.8	1216.2	469.4	830.0	463.2	388.0	175.8
	703.0	1274.3	2160.2	580.7	655.8	639.3	318.3	427.3	28.1
										1626.8	1103.9	1076.4	1866.3	1014.0	480.0	250.4	424.8	145.4
	1285.5	1236.7	1342.0	878.7	725.3	126.8	213.5	642.5	152.6
										1215.6
	2294.6
										2271.9
	974.4
										2039.3
	1713.9
										741.1
	1467.8
										1757.7
	1327.3
										Ave.：	1418.6	1300.4	1340.1	869.7	614.7	490.4	354.5	410.9	275.0

表6：个体的肿瘤体积被抑制分值

	顺氟氨铂1mg/kg	顺氯氨铂2mg/kg	huCBE1150μg	huCBE11500μg	huCBE1150μg+顺氯氨铂1mg/kg	huCBE1150μg+顺氯氨铂2mg/kg	huCBE11500μg+顺氯氨铂1mg/kg	huCBE11500μg+顺氯氨铂2mg/kg
									0.098	0.316	0.406	0.488	0.686	0.784	0.676	0.794
	0.268	0.151	0.516	0.545	0.550	0.554	0.726	0.887
									-0.478	0.082	0.656	0.930	0.613	0.703	0.799	0.900
	0.344	-0.061	0.434	0.334	0.746	0.798	0.778	0.808
									0.025	-0.036	0.559	0.624	0.719	0.713	0.747	0.513
	-0.016	0.618	0.498	0.765	0.692	0.826	0.705	0.512
									0.140	-0.290	0.143	0.669	0.415	0.673	0.726	0.876
	0.102	-0.523	0.591	0.538	0.549	0.776	0.699	0.980
									0.222	0.241	-0.316	0.285	0.662	0.824	0.701	0.898
	0.128	0.054	0.381	0.489	0.911	0.849	0.547	0.892
									平均值：	0.083	0.055	0.387	0.567	0.654	0.750	0.710	0.806
相加：					0.470	0.442	0.650	0.622
									差：					0.184	0.308	0.060	0.184
	双尾单样本t-检验
									T-值					4.345	10.806	2.784	3.572
DF：					9	9	9	9
									P-值：					0.0019	＜0.0001	0.0213	0.0060

huCBE11/顺氯氨铂试验中使用的所有组合对肿瘤体积都产生了统计学显著的超-相加抑制(表6)。当与50μg或500μg剂量的huCBE11联用时，1和2mg/kg剂量的顺氯氨铂能产生统计学上显著的超-相加效果。这些联合显著地加强了huCBE11的抗肿瘤效力。总之，与huCBE11和顺氯氨铂的单独施用相比，LTβ受体-活化型mAb huCBE11与化疗剂顺氯氨铂对皮下植入了WiDr人结肠直肠腺癌的无胸腺裸鼠中的联合治疗表现出显著改善的结果，即表现出了加强作用。

实施例2：LTβR激动剂与蒽环类抗生素类似物化疗剂联合用药的抗 肿瘤效力

huCBE11与阿霉素联用的抗肿瘤效力

为了测定蒽环类抗生素类似物化疗剂例如阿霉素与huCBE11联合用药是否具有超-相加的抗肿瘤活性，例如，协同的或加强的抗肿瘤活性，将阿霉素与huCBE11联合施用给WiDr异种移植肿瘤模型。

首先进行剂量范围试验，测定出适于研究阿霉素与huCBE11联合用药抗肿瘤效力的阿霉素与huCBE11的剂量，并且测定出每一药物单独施用的单独效果。将从1mg/kg至6mg/kg递增剂量的阿霉素通过腹膜内注射施用给经皮下植入了WiDr肿瘤细胞的无胸腺裸鼠(第0天)。所有测试剂量的阿霉素作为化疗剂对WiDr模型都无活性，根据国立癌症研究院(NCI)的活性标准(试验组(test)/对照组(control)百分比[％T/C]等于或低于42)。第42天(试验结束)时，阿霉素组与载体对照组之间无显著差异。在单独的试验中，第35天(评估日)时，6mg/kg或4mg/kg的阿霉素也未产生对肿瘤生长的显著抑制。因此，阿霉素不能产生对WiDr肿瘤的显著抑制，并且阿霉素组和盐水对照组组之间无显著差异。

平行试验中发现，第42天时500μg、100μg和50μg剂量的huCBE11抑制肿瘤生长，并且根据NCI活性标准确定其作为化疗剂在WiDr模型中是有活性的。试验结束(第42天)时，所有huCBE11抗体试验组的WiDr肿瘤重量都统计学上显著地小于载体对照组。观察发现：huCBE11 500μg和100μg组在第32-42天期间的％T/C＜42％(因此，满足NCI活性标准)。

根据NCI活性标准(％T/C等于或低于42)，经测定huCBE11加阿霉素联合用药的所有受试剂量组合在WiDr模型中都具有活性。huCBE11 100μg/注射或500μg/注射与阿霉素6mg/kg(P＜0.001)以及huCBE11 50μg/注射与阿霉素6mg/kg或4mg/kg(p＜0.05)联合用药组与单独施用huCBE11的对应组相比，具有统计学上显著较小的肿瘤重量。在所有联合剂量组中，从第18、21、或32天至第42天期间，％T/C小于42％，hCBE11 100μg加阿霉素6mg/kg的组中，第42天时％T/C小于8.4％。观察发现，在试验结束即第42天时，huCBE11 500μg或100μg加阿霉素6mg/kg联合用药组的肿瘤重量在统计学上显著低于单独施用huCBE11的对应组(图5和图7)。

阿霉素和huCBE11的活性试验后，进行试验以更好地表征给予联合治疗的观察效果。使用WiDr人结肠直肠肿瘤生长模型，向异种移植了WiDr人结肠直肠肿瘤的无胸腺裸鼠单独施用50、100或500μg huCBE11或者联合施用4或6mg/kg阿霉素。通过比较每一治疗组的肿瘤体积与对照组的肿瘤体积，测定抗肿瘤效力。所述平均数肿瘤体积缩小计算为对照组和试验组之间平均肿瘤体积的差。肿瘤体积的被抑制分值，即，受影响分值(Fa)，可以通过用治疗组平均数肿瘤体积缩小除以对照组平均数肿瘤体积计算得出。Fa为1.000表示肿瘤被完全抑制。表7显示了单独及联合治疗时的量效关系。

表7：huCBE11与阿霉素联合用药试验组的量效关系

治疗	剂量	单位	共治疗	剂量	单位	肿瘤体积	体积缩小	Fa
									对照						1124.0	0.0	0.000
阿霉素	4	mg/kg				1353.0	-229.0	-0.204
									阿霉素	6	mg/kg				1023.5	100.5	0.089
huCBE11	50	μg				633.2	490.8	0.437
									huCBE11	100	μg				399.5	724.5	0.645
huCBE11	500	μg				396.0	728.0	0.648
									huCBE11	50	μg	阿霉素	4	mg/kg	350.3	773.7	0.688
huCBE11	50	μg	阿霉素	6	mg/kg	258.9	865.1	0.770
									huCBE11	100	μg	阿霉素	4	mg/kg	356.5	767.5	0.683
huCBE11	100	μg	阿霉素	6	mg/kg	86.5	1037.5	0.923
									huCBE11	500	μg	阿霉素	4	mg/kg	288.9	835.1	0.743
huCBE11	500	μg	阿霉素	6	mg/kg	118.7	1005.3	0.894

单用阿霉素治疗荷WiDr肿瘤小鼠没有产生剂量-反应的抗肿瘤效力；因此huCBE11+阿霉素联合用药的协同作用不能通过计算联用指数来评估(Chou and Talalay(1984)Adv.Enz.Regul.22：27)。

通过下述方法对联合治疗的加强作用进行评估：测定与单独治疗产生的效力之和相比，huCBE11/阿霉素联合治疗产生的效力是否为统计学上显著的超-相加。统计学显著加强作用的检验需要计算每只动物的Fa。在第35天时，使用个体肿瘤体积(表8)计算每只动物肿瘤体积的被抑制分值(Fa)(表9)。如上面的表7所示，Fa用下列公式计算：(对照组平均肿瘤体积-个体动物肿瘤体积)÷对照组平均肿瘤体积。联合用药的预期相加Fa是单独接受所述联合用药中的药物之一(huCBE11或阿霉素)的各组的平均Fa之和。另外，如果治疗是简单相加，也计算了联合治疗的实际疗效与预期疗效之间的差(表9)。使用双尾单样本t-检验测定所述联合治疗是否产生了在统计学上显著不同于预期相加值的平均Fa(表9)。

表8：第35天时用于计算被抑制分值的个体及平均肿瘤体积

对照	阿霉素4mg/kg	阿霉素6mg/kg	huCBE1150μg		huCBE11100μg		huCBE11500μg		huCBE1150μg+阿霉素4mg/kg		huCBE1150μg+阿霉素6mg/kg	huCBE11100μg+阿霉素4mg/kg	huCBE11100μg+阿霉素6mg/kg	huCBE11500μg+阿霉素4mg/kg	huCBE11500μg+阿霉素6mg/kg
																975.4	842.1	537.2	289.2		990.1		778.7		205.8		70.6	65.1	57.2	432.8	81.7
2233.6	548.3	1881.7	754.4		171.4		296.8		476.1		128.7	602.9	110.3	180.7	151.9
																909.0	1087.2	1455.4	311.9		267.9		0.1		284.8		259.1	128.5	74.7	209.2	76.7
1069.4	1582.5	1017.1	375.4		208.9		280.9		406.8		451.8	799.1	155.9	273.4	80.0
																879.1	2687.5	696.6	381.9		245.8		781.0		561.2		147.0	241.3	38.9	217.4	120.1
610.1	528.1	605.1	409.6		293.4		272.3		281.4		135.2	426.8	38.9	248.1	117.4
																761.8	1865.5	901.8	766.4		281.4		537.5		191.2		281.9	601.7	131.1	277.0	164.7
647.5	1277.8	889.3	1688.6		737.5		273.7		340.8		319.0	188.2	59.8	130.9	100.2
																2065.7	1550.2	1059.5	762.8		457.4		368.7		369.8		112.7	202.8	126.5	758.7	117.8
583.7	1560.9	1191.2	592.2		341.5		370.6		385.1		682.7	308.3	71.3	160.7	175.9
																1028.3
1024.9
																777.8
1795.6
																1817.0
1434.7
																2087.6
908.0
																684.4
187.0
																平均值
1124.0	1353.0	1023.5		633.2		399.5		396.0		350.3	258.9	356.5	86.5	288.9	118.7

表9：肿瘤体积的被抑制分值

	阿霉素4mg/kg	阿霉素6mg/kg	huCBE1150μg	huCBE11100μg	huCBE11500μg	huCBE1150μg+阿霉素4mg/kg	huCBE1150μg+阿霉素6mg/kg	huCBE11100μg+阿霉素4mg/kg	huCBE11100μg+阿霉素6mg/kg	huCBE11500μg+阿霉素4mg/kg	huCBE11500μg+阿霉素6mg/kg
													0.251	0.522	0.743	0.119	0.307	0.817	0.937	0.942	0.949	0.615	0.927
	0.512	-0.674	0.329	0.848	0.736	0.576	0.885	0.464	0.902	0.839	0.865
													0.033	-0.295	0.723	0.762	1.000	0.747	0.769	0.886	0.934	0.814	0.932
	-0.408	0.095	0.666	0.814	0.750	0.638	0.598	0.289	0.861	0.757	0.929
													-1.391	0.380	0.660	0.781	0.305	0.501	0.869	0.785	0.965	0.807	0.893
	0.530	0.462	0.636	0.739	0.758	0.750	0.880	0.620	0.965	0.779	0.896
													-0.660	0.198	0.318	0.750	0.522	0.830	0.749	0.465	0.883	0.754	0.853
	-0.137	0.209	-0.502	0.344	0.756	0.697	0.716	0.833	0.947	0.884	0.911
													-0.379	0.057	0.321	0.593	0.672	0.671	0.900	0.820	0.887	0.325	0.895
	-0.389	-0.060	0.473	0.696	0.670	0.657	0.393	0.726	0.937	0.857	0.844
												平均值：	-0.204	0.089	0.437	0.645	0.648	0.688	0.770	0.683	0.923	0.743	0.894
相加：	-	-	-	-	-	0.437	0.526	0.645	0.734	0.648	0.737
												差：	-	-	-	-	-	0.252	0.244	0.038	0.189	0.095	0.157
双尾单样本T-检验：与相加是否有显著差异？
												T-值：	-	-	-	-	-	7.719	4.577	0.559	16.182	1.827	15.687
DF：	-	-	-	-	-	9	9	9	9	9	9
												P-值：	-	-	-	-	-	＜0.0001	0.0013	0.5901	＜0.0001	0.1010	＜0.0001

如表9所示，使用双尾单样本t-检验证实了大量huCBE11：阿霉素联合治疗相对于huCBE11抗体单独用药的超-相加效果。与50μg剂量huCBE11联用时，4和6mg/kg剂量的阿霉素都产生了超-相加效果(分别为p＜0.0001和P＝0.0013)。与100μg或500μg剂量huCBE11联用时，6mg/kg的阿霉素产生了超-相加效果(P＜0.0001)。由此可以看出这些联合用药显著地加强了huCBE11的抗肿瘤效力。

与预期相加的抗肿瘤效力相比，本试验中采用的大多数使用huCBE11加阿霉素的联合治疗方案都统计学显著地加强了抗肿瘤效力。总之，与huCBE11及阿霉素的单独施用相比，LTβ受体-活化型mAb huCBE11与化疗剂阿霉素对皮下植入了WiDr人结肠直肠腺癌的无胸腺裸鼠联合治疗表现出显著改善的结果。这些联合用药显著地加强了huCBE11的抗肿瘤效力。

实施例3：LTβR激动剂与拓扑异构酶I化疗剂联合用药的抗肿瘤效力

A.WiDr异种移植模型中huCBE11/Camptosar联合治疗的抗肿瘤效力

为了测定拓扑异构酶I化疗剂例如Camptosar(又称伊立替康)与huCBE11联合用药是否具有超-相加的抗肿瘤活性，例如，协同的或加强的抗肿瘤活性，将Camptosar与huCBE11联合施用给WiDr鼠模型检测癌症治疗。

进行剂量范围试验(dose ranging study)，测定合适的Camptosar及huCBE11剂量，并测定每一药物单独施用的单独活性。将从1.8mg/kg至10mg/kg递增剂量的Camptosar施用给经皮下植入WiDr肿瘤细胞的无胸腺裸鼠(第0天)。与载体对照组相比，第43天时10mg/kg(P＜0.001)、6mg/kg(P＜0.01)和3mg/kg(P＜0.05)的Camptosar对WiDr肿瘤生长产生了统计学上显著的抑制。除Camptosar 10mg/kg组第24天-31天期间的％T/C降至41％外，所有剂量组中所有其它评估的％T/C都＞45％。剂量试验结果表明：按照国立癌症研究院的活性标准(NCI；测试组/对照组百分比[％T/C]为等于或小于42组成活性)，Camptosar在WiDr模型中无活性。

平行试验中发现，第43天时500μg(P＜0.001)、50μg(P＜0.001)和5μg(P＜0.05)剂量的huCBE11抑制肿瘤生长。huCBE11 500μg和50μg组在第35或38天至第42天期间的％T/C＜42％。与载体对照组相比，在500μg(P＜0.001)，50μg(P＜0.001)和5μg(P＜0.05)，以及10mg/kg(P＜0.01)和6mg/kg(P＜0.05)在试验结束时及3mg/kg(P＜0.05)的剂量情况下，huCBE11产生了对统计学上显著的肿瘤生长抑制。在hCBE11 500μg和50μg组中，第35/38天至第42天期间％T/C＜42％。这一结果表明：按照NCI活性标准(％T/C等于或小于42)，huCBE11在WiDr模型中有活性。

另外还对huCBE11与Camptosar联合用药的活性进行了分析。第42天时，huCBE11 50μg与10mg/kg Camptosar联合用药治疗后肿瘤的重量显著小于单用huCBE11 50μg治疗后的肿瘤重量(P＜0.001)(参见图1)。此外，huCBE11 50μg加Camptosar 6mg/kg(P＜0.01)以及huCBE11 50μg加Camptosar3mg/kg(P＜0.05)联合用药组的平均肿瘤重量与单独施用huCBE1150μg组的平均肿瘤重量之间有显著差异。在huCBE11 50μg加Camptosar10mg/kg组中，％T/C在第17天时降至42％以下，第42天时为6.2％。此外，hCBE11 50μg加Camptosar 6mg/kg组第17-42天以及huCBE11 50μg加Camptosar 3mg/kg组第24-42天，％T/C＜42％。

第42天时，huCBE11 18μg加Camptosar 10mg/kg、huCBE11 10.5μg加Camptosar 6mg/kg或huCBE11 5.4μg加Camptosar3mg/kg联合治疗组与单独施用相应剂量Camptosar的组之间，平均肿瘤重量无统计学意义上的显著差异。只有huCBE11 18μg加Camptosar 10mg/kg组(第21-42天)的％T/C＜42％。

总之，可以确定的是：按照NCI活性标准(％T/C等于或小于42)，huCBE11与Camptosar联合用药在WiDr模型中有活性。经下列的huCBE11与化疗剂联用组合治疗后，预先-建立的WiDr人结肠直肠肿瘤的重量统计学显著地小于单用huCBE11治疗后的肿瘤重量：

(1)50μg huCBE11加10mg/kg Camptosar与单用50μg hCBE11相比(P＜0.001)，第17-42天时的％T.C＜42％(最小为6.2％)；

(2)50μg huCBE11加6mg/kg Camptosar与单用50μg hCBE11相比(P＜0.01)，第17-42天时的％T.C＜42％；以及

(3)50μg huCBE11加3mg/kg Camptosar与单用50μg hCBE11相比(P＜0.05)，第24-42天时的％T.C＜42％。

进行超-相加试验，测定huCBE11与Camptosar是否能对植入WiDr人结肠直肠肿瘤生长模型的无胸腺裸鼠发挥协同作用。选择10mg/kg、6mg/kg或3mg/kg剂量的Camptosar进行这些huCBE 11/Camptosar联合用药试验。第21天时得到用于计算Fa值的全部肿瘤数据。通过比较每一治疗组的肿瘤体积与对照组的肿瘤体积，测定抗肿瘤效力。所述平均数肿瘤体积缩小计算为对照组和试验组之间平均肿瘤体积的差。肿瘤体积的被抑制分值，即受影响分值(Fa)，是用试验组平均数肿瘤体积缩小除以对照组平均数肿瘤体积计算得出的。Fa为1.000表明肿瘤被完全抑制。表10显示了单独及联合治疗时的量效关系。然后，用得到的Fa值评估huCBE11与Camptosar联合治疗的协同及加强效果。

表10：huCBE11与Camptosar联合治疗的量效关系

治疗	剂量	单位	共治疗	剂量	单位	肿瘤体积	体积缩小	Fa
									对照						434.0	0.0	0.000
Camptosar	3	mg/kg				330.9	103.1	0.238
									Camptosar	6	mg/kg				242.8	191.2	0.441
Camptosar	10	mg/kg				227.2	206.8	0.476
									huCBE11	5	μg				319.0	115.0	0.265
huCBE11	50	μg				267.8	166.2	0.383
									huCBE11	500	μg				252.5	181.5	0.418
huCBE11	5.4	μg	Camptosar	3	mg/kg	283.1	150.9	0.348
									huCBE11	10.5	μg	Camptosar	6	mg/kg	237.6	196.4	0.453
huCBE11	18	μg	Camptosar	10	mg/kg	135.5	298.5	0.688
									huCBE11	50	μg	Camptosar	3	mg/kg	188.0	246.0	0.567
huCBE11	50	μg	Camptosar	6	mg/kg	103.2	330.8	0.762
									huCBE11	50	μg	Camptosar	10	mg/kg	78.0	356.0	0.820

本试验中用于评估药物加强作用的那些数据不限于固定比例的组合。对统计学显著的加强作用的检验需要计算每只动物的Fa。使用个体肿瘤体积(表41)计算每只动物的肿瘤体积的被抑制分值(Fa)(表42)。用下列公式计算出Fa：(对照组平均肿瘤体积-个体动物肿瘤体积)÷对照组平均肿瘤体积。联合用药的预期相加Fa是单独接受所述联合用药中的药物之一的各组的平均Fa相加得出的。如果治疗是简单相加，也计算了联合治疗的实际疗效与预期疗效之间的差(表42)。使用双尾单样本t-检验测定所述联合治疗是否产生了统计学上显著不同于预期相加值的平均Fa(表42)。

表41：个体肿瘤体积

									对照	Camp 3	Camp 6	Camp 10	hCBE 50	hCBE 50+Camp 3	hCBE 50+Camp 6	hCBE 50+Camp10
	607.4	463.6	177.9	363.3	171.3	137.9	175.0	102.2
									588.4	265.8	197.8	209.9	356.5	150.7	136.3	123.1
	356.7	211.5	386.4	137.2	440.3	112.9	93.0	118.8
									239.1	343.5	167.6	252.0	254.0	124.4	81.7	34.3
	353.0	393.6	313.8	152.8	326.6	261.7	16.7	80.3
									352.7	288.0	246.9	232.5	170.5	288.5	70.8	31.8
	638.2	297.6	303.1	283.6	244.3	230.1	73.3	49.2
									573.4	400.1	228.8	184.4	231.8	197.0	77.0	37.4
	508.8	317.4	207.9	271.4	178.1	163.6	81.5	65.2
									365.5	327.6	197.8	185.4	304.5	213.3	226.8	137.6
	625.5
									356.5
	394.0
									387.8
	576.4
									350.6
	346.0
									283.3
	351.9
									424.8
	平均值：	434.0	330.9	242.8	227.2	267.8	188.0	103.2									78.0

表42：个体的肿瘤体积被抑制分值

								Camp 3	Camp 6	Camp 10	hCBE 50	hCBE 50+Camp 3	hCBE 50+Camp 6	hCBE 50+Camp10
	-0.068	0.590	0.163	0.605	0.682	0.597	0.764
								0.388	0.544	0.516	0.179	0.653	0.686	0.716
	0.513	0.110	0.684	-0.015	0.740	0.786	0.726
								0.208	0.614	0.419	0.415	0.713	0.812	0.921
	0.093	0.277	0.648	0.247	0.397	0.962	0.815
								0.336	0.431	0.464	0.607	0.335	0.837	0.927
	0.314	0.302	0.347	0.437	0.470	0.831	0.887
								0.078	0.473	0.575	0.466	0.546	0.823	0.914
	0.269	0.521	0.375	0.590	0.623	0.812	0.850
								0.245	0.544	0.573	0.298	0.508	0.477	0.683
	平均值：	0.238	0.441	0.476	0.383	0.567	0.762								0.820
相加：												0.621	0.824	0.859
	差：					-0.054	-0.061								-0.039
								双尾单样本t-检验
	T-值					-1.246	-1.404								-1.319
DF：												9	9	9
	P-值：					0.2444	0.1940								0.2197

单用Camptosar治疗荷WiDr肿瘤小鼠产生了剂量-反应型的抗肿瘤效力，因此huCBE11+Camptosar联合用药的协同作用不能通过计算联用指数(CI)来正式评估。用于评估协同性药物作用的那些数据是在Camptosar∶huCBE11为0.555μg∶1mg/kg的固定比例情况下得到的。这一比例是以上述试验中测得的两种药剂中值效果剂量(median efiect dose)之比为基础的。协同作用的正式评估采用对联用指数(CI)进行计算，使用CalcuSyn V1.1(Biosoft CamβRidge，UK)软件，该软件可用于基于windows的剂量-效果分析。如上所述，联合用药治疗时，CI＝1代表相加的药效。CI＜1代表协同作用。CI＞1代表拮抗作用。CI计算中使用的量效关系(Fa值)列于表11。

表11：用于WiDr异种移植模型中Camptosar-huCBE11协同作用计算 的量效关系

给定的单独用药				联合用药(0.555∶1)
							Camptosar剂量(mg/kg)	受影响分值	huCBE11剂量(μg)	受影响分值	Camptosar剂量(mg/kg)	huCBE11剂量(μg)	受影响分值

3	0.238	5	0.265	3	5.4	0.348
							6	0.441	50	0.383	6	10.8	0.453
10	0.476	500	0.418	10	18.0	0.688

根据计算得到的Camptosar与huCBE11的CI值，可以确定：Camptosar/huCBE11的固定-比例联合治疗(0.555mg/kg∶1μg)显示出协同的抗肿瘤效力。分别及联合治疗的剂量-反应关系的药效(Potency)和形状分别显示于表12和13。对本发明试验使用的具体水平试验剂量计算得出的CI显示于表14。因为本发明试验使用了被认为具有完全独立模式作用的药物，所以使用了非各自独有的(mutually nonexclusive)的CI值。使用3mg/kgCamptosar+5.4μg huCBE11、6mg/kg Camptosar+10.5μg huCBE11以及10mg/kg Camptosar+18μg huCBE11的联合用药表现出了协同效果。联合用药剂量水平范围内的CI模拟(Simulations)显示于表15。从3.3mg/kgCamptosar+6μg huCBE11(肿瘤体积35％被抑制)至313mg/kg Camptosar+563μg huCBE11(肿瘤体积99％被抑制)范围内联合用药剂量表现出了协同效应。CI表示的协同或拮抗作用程度的总体解释见表3。作为受影响分值函数的CI显示于图8。总之，当第21天评估时，使用Camptosar加huCBE11固定-比例(0.555∶1)的联合用药治疗表现出了针对预先建立的WiDr人结肠直肠腺癌异种移植物的协同抗肿瘤效力。

表12：中值效果剂量

药剂	剂量单位	中值效果剂量(95％C.L.)
				单独用药	联合用药(0.555∶1)
		Camptosar	mg/kg			9.8(6.1-15.6)	5.7(4.2-7.7)
huCBE11	μg			2933(157-54760)	10.2(7.6-13.9)

表13：量-效曲线特征

值

斜率

Y-截距

R

Camptosar
				平均值	0.913	-0.903	0.9510
SEM	0.297	0.232
				huCBE11
平均值	0.150	-0.519	0.9488
				SEM	0.050	0.094
Camptosar+huCBE11
				平均值	1.147	-0.866	0.9543
SEM	0.359	0.281

表14：试验值的计算的联用指数(CIs)

Camptosar剂量(mg/kg)	huCBE11剂量(ug)	受影响分值	作用机理
							各自独有的		非独有的
			CI	协同作用	CI	协同作用
							3	5.4	0.348	0.734	++	0.809	+++
6	10.8	0.453	0.769	+++	0.779	+++
							10	18.0	0.688	0.431	+++	0.431	+++

++   中等协同作用

+++  协同作用

表15：联合指数(CI)模拟

Fa	CI	Camptosar(mg/kg)	huCBE11(g)	符号
					各自独有的作用机理
0.02	2.31E+07	0.191	0.344	-----
					0.05	9.40E+04	0.44	0.79	-----
0.10	1224.405	0.8	1.5	-----
					0.15	84.071	1.3	2.3	-----
0.20	11.792	1.7	3.1	-----
					0.25	2.812	2.2	3.9	---
0.30	1.185	2.7	4.9	-
					0.35	0.797	3.3	6.0	++

0.40	0.675	4.0	7.2	+++
					0.45	0.621	4.8	8.6	+++
0.50	0.587	5.7	10.2	+++
					0.55	0.559	6.8	12.2	+++
0.60	0.533	8.1	14.6	+++
					0.65	0.508	9.8	17.6	+++
0.70	0.483	1.9	21.4	+++
					0.75	0.456	4.8	26.7	+++
0.80	0.428	19.1	34.3	+++
					0.85	0.396	25.8	46.5	+++
0.90	0.357	38.6	69.6	+++
					0.95	0.302	74.1	133.4	+++
0.99	0.209	312.6	562.8	++++
					非排斥(完全独立的作用方式)
0.02	5.53E+07	1.91E-01	0.3	-----
					0.05	2.00E+05	0.437	0.8	-----
0.10	2390.925	0.837	1.5	-----
					0.15	155.609	1.254	2.3	-----
0.20	20.537	1.698	3.1	-----
					0.25	4.354	2.183	3.9	----
0.30	1.523	2.717	4.9	---
					0.35	0.883	3.316	6.0	+
0.40	0.699	3.994	7.2	+++
					0.45	0.628	4.775	8.6	+++
0.50	0.589	5.688	10.2	+++
					0.55	0.559	6.776	12.2	+++
0.60	0.533	8.101	14.6	+++
					0.65	0.508	9.759	17.6	+++
0.70	0.483	11.908	21.4	+++
					0.75	0.456	14.825	26.7	+++
0.80	0.428	19.052	34.3	+++
					0.85	0.396	25.813	46.5	+++
0.90	0.357	38.639	69.6	+++
					0.95	0.302	74.127	133.4	+++
0.99	0.209	312.642	562.8	++++

总之，与huCBE11及Camptosar的单独施用相比，LTβ受体-活化型mAbhuCBE11与化疗剂Camptosar对皮下植入了WiDr人结肠直肠腺癌的无胸腺裸鼠的联合治疗表现出显著改善的结果。令人惊奇的是，huCBE11与Camptosar以固定比例(0.555mg/kg Camptosar∶1g huCBE11)联合治疗的效果通过联用指数分析被认为是协同性的。

B.KM-20L2异种移植模型中huCBE11/Camptosar联合治疗的抗肿瘤效力

此外，还使用了其它的人结肠直肠腺癌小鼠模型系统KM-20L2模型来测定，同Camptosar与huCBE11联合用药相比时，拓扑异构酶I化疗剂例如Camptosar与huCBE11联合用药是否具有超-相加的抗肿瘤活性，例如加强的或协同的抗肿瘤活性。

进行剂量范围试验，测定出适于研究顺氯氨铂与huCBE11联用抗肿瘤效力的顺氯氨铂和huCBE11的剂量。将从1.8mg/kg至10mg/kg递增剂量的Camptosar施用给经皮下植入了KM-20L2肿瘤细胞的无胸腺裸鼠(第0天)。在第33天(试验结束)时，10mg/kg(P＜0.001)和6mg/kg(P＜0.01)和3mg/kg(P＜0.05)剂量的Camptosar治疗产生了对KM-20L2肿瘤生长的统计学显著的抑制。第11-14天期间首次观察到抑制。10mg/kg组的％T/C在第18-33天期间等于或小于42％，因此满足NCI活性标准。在单独用药试验中，与盐水对照组相比，Camptosar组在第55天结束时未见显著的肿瘤抑制，而6mg/kg组在第13-51天期间(P＜0.001第13-44天；P＜0.01第48天；P＜0.05第51天)，3mg/kg组在第13-48天期间(P＜0.001第13-41天；P＜0.01第44天；P＜0.05第48天)以及1.8mg/kg组在第9-44天期间(P＜0.001第16-27，41天；P＜0.01第13，30-37天；P＜0.05第9、44天)观察到了显著的肿瘤抑制。6mg/kg组在第16-30天期间以及3mg/kg组在第20天时，％T/C等于或小于42％。因此，根据NCI活性国立癌症研究院(％T/C等于或低于42)，可以确定Camptosar在KM-20L2肿瘤模型中是有活性的。

在评估huCBE11在KM-20L2异种移植模型中抗肿瘤活性的平行剂量试验中发现，与载体对照组相比，huCBE11 2mg/kg剂量组(第28和33天时)和4mg/kg剂量组(第21-28天)中的肿瘤生长显著缩小。在平行的单独用药试验中(其中也测定了联合治疗的效力)，在下列剂量时huCBE11产生了对肿瘤生长的显著抑制：

(1)20mg/kg第16-55天(p＜0.001第20-48天；p＜0.01第16、51、55天)，

(2)2mg/kg第16-55天(p＜0.001第16-51天；p＜0.01第55天)，以及

(3)0.2mg/kg第20-55天(p＜0.001第27-30、41天；p＜0.01第20-23、34-37、44-48天；p＜0.05第51-55天)。

在两个试验过程中huCBE11剂量组的％T/C都＞42％。第二个试验中最小的％T/C出现在20mg/kg组第27天。总之，根据NCI活性标准(％T/C等于或小于42)，可以确定huCBE11在KM-20L2肿瘤模型中无活性。在第33天剂量试验结束时，与载体对照组相比，2mg/kg huCBE11产生了对肿瘤生长统计学显著的抑制。抑制还发现于4mg/kg组第21-28天以及2mg/kg组第28天。在单独用药试验中发现，与载体对照组相比，huCBE11 20mg/kg组第16-55天，2mg/kg组第16-55天以及0.2mg/kg组第20-55天都出现了显著的肿瘤抑制。hCBE11 20mg/kg组第27天时％T/C降至低点42.4％。

另外还对huCBE11与Camptosar联用效果进行了测定。与huCBE1120mg/kg单独施用相比，huCBE11 20mg/kg与Camptosar 3mg/kg联合用药使得肿瘤生长出现统计学显著的缩小(p＜0.001第16-41、48天；p＜0.01第13、44-55天)(图8)。当与huCBE11 2mg/kg联合用药时，3mg/1g(P＜0.001，第16-44天；P＜0.01第48-55天；P＜0.05第13天)或1.8mg/kg(P＜0.001第20天；P＜0.01第23天；P＜0.05，第16、27-37天)剂量的Camptosar与单独施用huCBE11 2mg/kg相比也出现了显著较低的平均肿瘤重量。与huCBE110.2mg/kg单独施用相比，Camptosar 1.8mg/kg与huCBE11 0.2mg/kg联用时在13-23天出现了对肿瘤生长统计学显著(P＜0.05)抑制。此外，huCBE119.48mg/kg加Camptosar 6mg/kg(P＜0.001)，huCBE11 4.74mg/kg加Camptosar 3mg/kg(P＜0.001)以及huCBE11 2.84mg/kg加Camptosar 1.8mg/kg(P＜0.01)在试验末产生了统计学显著的肿瘤生长抑制。这些huCBE11加Camptosar联合用药组的大多数在从第16或20天到试验末期，％T/C小于42％。因此，可以确定：按照NCI活性标准(％T/C等于或小于42)，huCBE11与Camptosar联合用药在KM-20L2肿瘤模型中有活性。

为了测定huCBE11与Camptosar是否能相互加强或发生协同作用，在上述的肿瘤生长模型中，使用植入了KM-20L2人结肠腺癌的无胸腺裸鼠进行了超-相加试验。选择6mg/kg、3mg/kg或1.8mg/kg剂量的Camptosar进行这些huCBE11/Camptosar联合用药试验。用于计算Fa值的全部肿瘤数据是在第9、13、16、20、23、27、30、34、37和41天时得到的。通过比较每一治疗组的肿瘤体积与对照组的肿瘤体积，测定抗肿瘤效力。所述平均数肿瘤体积缩小被计算为对照组和试验组之间平均肿瘤体积的差。肿瘤体积的被抑制分值，受影响分值(Fa)，是用试验组平均数肿瘤体积缩小除以对照组平均数肿瘤体积计算得出的。Fa为1.000表明肿瘤被完全抑制。表15显示了整个试验时程中单独及联合治疗时的量效关系。然后，用得到的Fa值评估huCBE11与Camptosar联合治疗的协同及加强效果。

表15：huCBE11与Camptosar：预期相加相对于实际肿瘤体积抑制

治疗	剂量(mg/kg)	共治疗	剂量(mg/kg)	天
														9	13	16	20	23	27	30	34	37	41
				肿瘤体积的抑制：平均的受影响分值(Fa)
Camptosar	1.8																	0.144	0.196	0.278	0.417	0.357	0.340	0.260	0.250	0.254	0.212
				huCBE11	0.2			-0.026	0.003	0.125	0.249	0.294	0.377	0.369	0.345	0.372	0.381
huCBE11	0.2	Camptosar	1.8															0.031	0.207	0.389	0.579	0.542	0.539	0.500	0.475	0.414	0.382
				相加：				0.118	0.199	0.403	0.666	0.651	0.718	0.629	0.595	0.626	0.592
差：																		-0.087	0.009	-0.013	-0.087	-0.109	-0.178	-0.130	-0.119	-0.212	-0.210
				t：				-1.383	0.151	-0.300	-2.968	-2.916	-4.077	-2.570	-2.290	-4.262	-2.853
DF：																		7	7	7	7	7	7	7	7	7	7
				P：				0.2093	0.8846	0.7729	0.0209	0.0225	0.0047	0.0370	0.0558	0.0037	0.0246
Camptosar	1.8																	0.144	0.196	0.278	0.417	0.357	0.340	0.260	0.250	0.254	0.212
				huCBE11	2			0.101	0.137	0.322	0.458	0.497	0.542	0.524	0.541	0.485	0.541
huCBE11	2	Camptosar	1.8															0.092	0.287	0.530	0.748	0.793	0.791	0.775	0.776	0.715	0.699
				相加：				0.246	0.332	0.600	0.875	0.854	0.882	0.785	0.791	0.739	0.752
差：																		-0.154	-0.046	-0.070	-0.127	-0.061	-0.091	-0.009	-0.014	-0.023	-0.054
				t：				-2.193	-1.098	-1.732	-3.729	-1.252	-1.503	-0.135	-0.219	-0.294	-0.673
DF：																		7	7	7	7	7	7	7	7	7	7
				P：				0.0644	0.3086	0.1269	0.0074	0.2507	0.1765	0.8961	0.8329	0.7775	0.5224

表15：huCBE11与Camptosar：预期相加相对于实际肿瘤体积抑制(续表)

治疗	剂量(mg/kg)	共治疗	剂量(mg/kg)	天
														9	13	16	20	23	27	30	34	37	41
				肿瘤体积的抑制：平均的受影响分值(Fa)
Camptosar	3																	0.098	0.327	0.466	0.593	0.521	0.463	0.406	0.381	0.368	0.335
				huCBE11	2			0.101	0.137	0.322	0.458	0.497	0.542	0.524	0.541	0.485	0.541
huCBE11	2	Camptosar	3															0.108	0.377	0.682	0.852	0.883	0.897	0.888	0.886	0.859	0.852
				相加：				0.199	0.464	0.789	1.051	1.018	1.005	0.930	0.922	0.853	0.875
差：																		-0.091	-0.087	-0.107	-0.198	-0.136	-0.109	-0.042	-0.036	0.006	-0.023
				t：				-1.081	-1.585	-2.808	-6.581	-4.138	-2.642	-0.927	-0.719	0.141	-0.479
DF：																		7	7	7	7	7	7	7	7	7	7
				P：				0.3156	0.1569	0.0262	0.0003	0.0044	0.0333	0.3847	0.4954	0.8916	0.6466
Camptosar	3																	0.098	0.327	0.466	0.593	0.521	0.463	0.406	0.381	0.368	0.335
				huCBE11	20			0.053	0.087	0.263	0.435	0.504	0.576	0.539	0.543	0.525	0.538
huCBE11	20	Camptosar	3															0.043	0.376	0.714	0.892	0.943	0.959	0.957	0.953	0.927	0.909
				相加：				0.151	0.413	0.730	1.028	1.026	1.039	0.945	0.924	0.893	0.872
差：																		-0.108	-0.037	-0.016	-0.136	-0.083	-0.080	0.013	0.029	0.034	0.037
				t：				-1.521	-0.757	-0.515	-7.466	-7.095	-8.447	1.255	2.372	1.776	1.582
DF：																		7	7	7	7	7	7	7	7	7	7
				P：				0.1720	0.4737	0.6226	0.0001	0.0002	0.0001	0.2497	0.0494	0.1190	0.1576

在观察了huCBE11与Camptosar分别及联合用药的抗肿瘤活性以及计算了Fa值后，然后，检测huCBE11与Camptosar之间的相互关系是否为协同作用。由于单用Camptosar治疗荷KM-20L2肿瘤小鼠产生了剂量-反应型抗肿瘤效力，所以可以通过计算联用指数(CI)对huCBE11+Camptosar的协同作用进行正式评估。用于CI计算量的量效关系见表16，中值效果剂量概括于表17。本发明试验中用于评估协同性药物作用的那些数据是在固定比例1∶0.63(mg/kghuCEB11∶mg/kg Camptosar)情况下得到的。这一比例是以上述试验中测得的两种药剂中值效果剂量之比为基础的。协同作用的正式评估采用对联用指数(CI)进行计算，所述计算使用CalcuSyn V1.1(Biosoft CamβRidge，UK)软件，该软件可用于基于windows的剂量-效果分析。如上所述，联合用药治疗时，CI＝1代表相加的药效。CI＜1代表协同作用。CI＞1代表拮抗作用。对于给定的联合用药治疗，CI＝1代表相加的效力。CI＜1表示协同作用。CI＞1表明为拮抗作用。通过Camptosar与huCBE11的联用指数检验发现，以1∶0.63固定比例联用治疗(mg/kg huCEB11∶mg/kg Camptosar)显示出协同的抗肿瘤效力。Camptosar与huCBE11分别及联合治疗的剂量-反应关系的药效(Potency)和形状分别显示于表18和19。对联合治疗试验中使用的具体水平试验剂量计算得出的CI列于表19。

表16：huCBE11与Camptosar的用于联用指数计算的量-效关系(Fa值)

治疗	剂量(mg/kg)	共治疗	剂量(mg/kg)	天
													13	16	20	23	27	30	34	37	41
				受影响分值(Fa)
													分别用药
huCBE11	0.2			0.003	0.125	0.249	0.294	0.377	0.369	0.345	0.372	0.381
													2.0			0.137	0.322	0.458	0.497	0.542	0.524	0.541	0.485	0.541
	20.0			0.086	0.264	0.435	0.504	0.576	0.539	0.543	0.525	0.538
													Camptosar	1.8			0.196	0.278	0.417	0.357	0.340	0.260	0.250	0.254	0.212
3.0			0.327	0.467	0.593	0.521	0.463	0.406	0.381	0.368	0.335
												6.0				0.360	0.594	0.781	0.759	0.701	0.607	0.564	0.495	0.444
联合用药(1∶0.63)
													huCBE11	2.84	Camptosar	1.8	0.082	0.459	0.775	0.841	0.859	0.855	0.830	0.796	0.779
4.74	3.0	0.363	0.747	0.901	0.936	0.953	0.938	0.933	0.901	0.892
											9.48	6.0		0.385		0.770	0.945	0.978	0.994	0.996	0.995	0.981	0.974

表17：huCBE11与Camptosar：用于联用指数计算的中值效果剂量(mg/kg)

天	huCBE11		Camptosar
					单独用药	联合用药(1∶0.63)	单独用药	联合用药(1∶0.63)
	中值效果剂量(95％置信区间)
					13	174	10.7	12.4	6.7
(0-220250)	(3.5-32.7)	(3.2-47.7)	(2.2-20.6)
				16		981	2.6	4.0	1.6
(0-1300300)	(1.0-6.7)	(3.1-5.0)	(0.6-4.2)
					20	32.7	1.0	2.3	0.6
(0-3435)	(0.5-2.0)	(2.2-2.4)	(0.3-1.3)
				23		9.0	1.1	2.7	0.7
(0.7-115)	(0.9-1.3)	(2.6-2.9)	(0.6-0.8)
					27	2.1	1.5	3.2	1.0
(0.5-9)	(1.3-1.8)	(2.9-3.5)	(0.8-1.1)
				30		3.8	1.8	4.2	1.1
(0.6-24)	(1.1-2.7)	(4.0-4.3)	(0.7-1.7)
					34	3.6	1.8	4.7	1.1
(0.4-31)	(1.3-2.6)	(4.5-4.9)	(0.8-1.6)
				37		6.6	1.6	6.0	1.0
(1.9-22)	(1.2-2.1)	(5.1-6.9)	(0.8-1.3)
					41	3.0	1.5	7.3	1.0
(0.3-29)	(1.3-1.9)	(5.2-10.3)	(0.8-1.2)

表18：huCBE11与Camptosar(KM-20L2异种移植模型)剂量-反应曲线特征

天	值	huCBE11			Camptosar			huCBE11+Camptosar
											斜率	Y-截距	R	斜率	Y-截距	R	斜率	Y-截距	R
		13	平均值	0.75	-1.67	0.7989	0.67	-0.73	0.9021	1.53										-1.57	0.8434
SEM	0.56										0.49		0.32	0.17		0.98	0.72
			16	平均值	0.20	-0.60	0.7325	1.09	-0.65	0.9758									1.08	-0.45	0.8642
SEM	0.19	0.16										0.24	0.13		0.63	0.46
				20	平均值	0.18	-0.28	0.8173	1.33	-0.48								0.9998	1.31	-0.01	0.9787
SEM	0.13	0.11									0.03	0.02		0.27	0.20
					23	平均值	0.19	-0.18	0.8795	1.45							-0.64	0.9991	1.76	-0.05	0.9982
SEM	0.10	0.09		0.06							0.03		0.11	0.08
						27	平均值	0.18	-0.06	0.9347						1.27	-0.63	0.9954	2.76	-0.50	0.9976
SEM	0.07	0.06		0.12	0.07							0.19	0.14
							30	平均值	0.15	-0.09					0.9026	1.23	-0.76	0.9996	3.16	-0.77	0.9815
SEM	0.07	0.06		0.04	0.02						0.62	0.45
								34	平均值	0.18				-0.10	0.8703	1.12	-0.76	0.9995	3.12	-0.81	0.9873
SEM	0.10	0.09		0.04	0.02		0.50				0.37
									37	平均值			0.14	-0.11	0.9627	0.87	-0.68	0.9954	2.16	-0.43	0.9940
SEM	0.04	0.03		0.08	0.05		0.24	0.17
										41		平均值	0.14	-0.07	0.8578	0.89	-0.77	0.9847	1.97	-0.37	0.9973
SEM	0.08	0.07		0.16	0.09		0.15	0.11

表19：huCBE11与Camptosar(Cam)：试验值的联用指数(CI)

天	剂量(mg/kg)		受影响分值	作用机理
								各自独有的		非独有的
				huCBE11	Cam	CI	协同作用					CI	协同作用
	13	2.84						1.8	0.082	5.842	----			8.090	----
4.74			3.0	0.363	0.620	+++	0.653					+++
		9.48						6.0	0.385	1.078	±		1.178	-
16			2.84	1.8	0.459	0.532	+++					0.536			+++
	4.74	3.0						0.747	0.279	++++	0.279		++++
			9.48	6.0	0.770	0.497	+++					0.497		+++
	20	2.84						1.8	0.775	0.308	+++		0.308		+++
4.74			3.0	0.901	0.248	++++	0.248					++++
		9.48						6.0	0.945	0.308	+++		0.308	+++
23			2.84	1.8	0.841	0.206	++++					0.206			++++
	4.74	3.0						0.936	0.170	++++	0.170		++++
			9.48	6.0	0.978	0.158	++++					0.158		++++
	27	2.84						1.8	0.859	0.137	++++		0.137		++++
4.74			3.0	0.953	0.088	+++++	0.088					+++++
		9.48						6.0	0.994	0.034	+++++		0.034	+++++
30			2.84	1.8	0.855	0.101	++++					0.101			++++
	4.74	3.0						0.938	0.078	+++++	0.078		+++++
			9.48	6.0	0.996	0.016	+++++					0.016		+++++
	34	2.84						1.8	0.830	0.092	+++++		0.092		+++++
4.74			3.0	0.933	0.061	+++++	0.061					+++++
		9.48						6.0	0.995	0.011	+++++		0.011	+++++
37			2.84	1.8	0.796	0.063	+++++					0.063			+++++
	4.74	3.0						0.901	0.040	+++++	0.040		+++++
			9.48	6.0	0.981	0.011	+++++					0.011		+++++
	41	2.84						1.8	0.779	0.059	+++++		0.059		+++++
4.74			3.0	0.892	0.038	+++++	0.038					+++++
		9.48						6.0	0.974	0.014	+++++		0.014	+++++

+++++极强协同作用

++++强协同作用

+++协同作用

±近乎相加

-轻度拮抗作用

----强拮抗作用

因为本发明试验使用了被认为具有完全独立模式作用的药物，所以能够应用非各自独有的的CI值。使用2.84mg/kg+1.8mg/kg Camptosar，4.74mg/kg huCBE11+3mg/kg Camptosar以及9.48mg/kg huCBE11+6mg/kgCamptosar的联合用药剂量在第16-41天表现出协同效应(表19)。联合用药剂量水平范围内的CI模拟显示于表20和21，CI表示的协同或拮抗作用程度的总体解释见表3。协同效应遍及整个治疗期间。作为肿瘤抑制百分比函数的CI显示于图10。大多数情况下，协同作用定位在50％以上水平的肿瘤抑制。联合用药的协同效应峰值出现在第16天。产生20％至80％肿瘤抑制的剂量范围联用了剂量水平为1-100mg/kg的两种药物。总之，huCBE11加Camptosar以1∶0.63固定比例联合用药出现了协同的抗肿瘤效力。

表20：联用指数模拟：各自独有的作用方式

Fa	CI	剂量(mg/kg)		符号	CI	剂量(mg/kg)		符号	CI	剂量(mg/kg)		符号
													buCBE11	Cam	huCBE11	Cam	huCBE11	Cam
		Day 13				Day 16				Day 20
	0.02													16	0.8	0.5	-----	21000	0.07	0.05	-----	2.8E+06	0.05	0.03	------
0.05		7	1.6	1.0	----	440	0.2	0.1	-----	32000	0.1	0.1	-----
	0.10													3.8	2.5	1.6	----	21	0.3	0.2	-----	954	0.2	0.1	-----
0.15		2.56	3.4	2.2	---	3.6	0.5	0.3	----	109	0.3	0.2	-----
	0.20													1.918	4.3	2.7	---	1.18	0.7	0.5	-	21	0.4	0.2	-----
0.25		1.509	5.2	3.3	---	0.651	1.0	0.6	+++	5.7	0.4	0.3	----
	0.30													1.224	6.1	3.9	--	0.500	1.2	0.8	+++	1.94	0.5	0.3	---
0.35		1.012	7.1	4.5	±	0.449	1.5	0.9	+++	0.847	0.6	0.4	++
	0.40													0.848	8.2	5.2	++	0.430	1.8	1.1	+++	0.486	0.7	0.5	+++
0.45		0.715	9.4	5.9	++	0.423	2.2	1.4	+++	0.358	0.9	0.5	+++
	0.50													0.605	11	7	+++	0.419	2.6	1.6	+++	0.310	1.0	0.6	+++
0.55		0.512	12	8	+++	0.418	3.2	2.0	+++	0.292	1.2	0.7	++++
	0.60													0.432	14	9	+++	0.418	3.8	2.4	+++	0.285	1.4	0.9	++++
0.65		0.362	16	10	+++	0.418	4.6	2.9	+++	0.283	1.6	1.0	++++
	0.70													0.300	19	12	++++	0.418	5.7	3.6	+++	0.282	1.9	1.2	++++
0.75		0.243	22	14	++++	0.418	7.2	4.5	+++	0.283	2.4	1.5	++++
	0.80													0.192	26	17	++++	0.418	9.4	5.9	+++	0.284	2.9	1.8	++++
0.85		0.144	33	21	++++	0.419	13	8	+++	0.285	3.8	2.4	++++
	0.90													0.098	45	28	+++++	0.419	20	13	+++	0.287	5.4	3.4	++++
0.95		0.053	73	46	+++++	0.420	40	25	+++	0.290	10	6	++++
	0.99													0.014	215	135	+++++	0.422	181	114	+++	0.296	34	21	++++
		第23天				第27天				第30天
	0.02													7.0E+06	0.12	0.07	-----	7.4E+08	0.4	0.2	-----	2.3E+10	0.5	0.3	-----
0.05		9.0E+04	0.2	0.1	-----	4.7E+06	0.5	0.3	-----	5.8E+07	0.7	0.4	-----
	0.10													2893	0.3	0.2	-----	88100	0.7	0.4	-----	512000	0.9	0.6	-----
0.15		346	0.4	0.3	-----	7477	0.8	0.5	-----	27400	1.0	0.6	-----
	0.20													70	0.5	0.3	-----	1168	0.9	0.6	-----	3021	1.1	0.7	-----
0.25		19	0.6	0.4	-----	252	1.0	0.6	-----	489	1.2	0.8	-----
	0.30													6.1	0.7	0.4	----	66	1.1	0.7	-----	100	1.3	0.8	-----
0.35		2.3	0.8	0.5	---	20	1.2	0.8	-----	24	1.4	0.9	-----
	0.40													1.03	0.9	0.5	±	6.6	1.3	0.8	----	6.4	1.5	1.0	----
0.45		0.553	1.0	0.6	+++	2.4	1.4	0.9	---	2.0	1.6	1.0	---
	0.50													0.366	1.1	0.7	+++	1.02	1.5	1.0	±	0.73	1.8	1.1	++
0.55		0.288	1.2	0.8	++++	0.525	1.6	1.0	+++	0.370	1.9	1.2	+++
	0.60													0.253	1.4	0.9	++++	0.338	1.8	1.1	+++	0.252	2.0	1.3	++++
0.65		0.235	1.5	1.0	++++	0.259	1.9	1.2	++++	0.203	2.1	1.3	++++
	0.70													0.224	1.7	1.1	++++	0.219	2.1	1.3	++++	0.175	2.3	1.4	++++

0.75	0.216	2.0	1.3	++++	0.192	2.3	1.4	++++	0.153	2.5	1.6	++++
													0.80	0.208	2.4	1.5	++++	0.168	2.5	1.6	++++	0.132	2.7	1.7	++++
0.85	0.199	2.9	1.8	++++	0.145	2.8	1.8	++++	0.111	3.0	1.9	++++
													0.90	0.188	3.8	2.4	++++	0.119	3.4	2.1	++++	0.088	3.5	2.2	+++++
0.95	0.172	5.7	3.6	++++	0.087	4.4	2.8	+++++	0.061	4.4	2.8	+++++
													0.99	0.141	15	9	++++	0.043	8.0	5.1	+++++	0.027	7.5	4.7	+++++

表20：联用指数模拟：各自独有的作用方式(续表)

Fa	CI	剂量(mg/kg)		符号	CI	剂量(mg/kg)		符号	CI	剂量(mg/kg)		符号
													huCBE11	Cam	huCBE11	Cam	huCBE11	Cam
		Day 34				Day 37				Day 41
	0.02													5.5E+08	0.5	0.3	-----	1.2E+11	0.3	0.2	-----	1.2E+11	0.2	0.1	-----
0.05		3.5E+06	0.7	0.4	-----	1.7E+08	0.4	0.3	-----	2.0E+08	0.3	0.2	-----
	0.10													64000	0.9	0.6	-----	967000	0.6	0.4	-----	1.3E+06	0.5	0.3	-----
0.15		5409	1.0	0.7	-----	39400	0.7	0.4	-----	59000	0.6	0.4	-----
	0.20													842	1.2	0.7	-----	3533	0.8	0.5	-----	5687	0.8	0.5	-----
0.25		182	1.3	0.8	-----	483	1.0	0.6	-----	824	0.9	0.6	-----
	0.30													48	1.4	0.9	-----	85	1.1	0.7	-----	153	1.0	0.6	-----
0.35		14	1.5	0.9	-----	18	1.2	0.7	-----	33	1.1	0.7	-----
	0.40													4.8	1.6	1.0	----	4.2	1.3	0.8	----	8.0	1.3	0.8	----
0.45		1.8	1.7	1.1	---	1.2	1.4	0.9	-	2.1	1.4	0.9	---
	0.50													0.76	1.8	1.1	++	0.41	1.6	1.0	+++	0.65	1.5	1.0	+++
0.55		0.392	1.9	1.2	+++	0.205	1.7	1.1	++++	0.251	1.7	1.1	++++
	0.60													0.252	2.1	1.3	++++	0.141	1.9	1.2	++++	0.137	1.9	1.2	++++
0.65		0.189	2.2	1.4	++++	0.113	2.1	1.3	++++	0.099	2.1	1.3	+++++
	0.70													0.155	2.4	1.5	++++	0.094	2.3	1.5	+++++	0.080	2.4	1.5	+++++
0.75		0.131	2.6	1.6	++++	0.079	2.6	1.7	+++++	0.068	2.7	1.7	+++++
	0.80													0.111	2.8	1.8	++++	0.065	3.0	1.9	+++++	0.056	3.1	2.0	+++++
0.85		0.090	3.2	2.0	+++++	0.051	3.5	2.2	+++++	0.046	3.7	2.3	+++++
	0.90													0.069	3.7	2.3	+++++	0.037	4.4	2.8	+++++	0.034	4.7	3.0	+++++
0.95		0.045	4.7	2.9	+++++	0.022	6.2	3.9	+++++	0.022	6.9	4.3	+++++
	0.99													0.018	7.9	5.0	+++++	0.007	13.2	8.3	+++++	0.008	15.9	10.0	+++++

表21：huCBE11和Camptosar(Cam)：联用指数模拟：非各自独有的(完 全独立)作用方式

Fa	CI	剂量(mg/kg)		符号	CI	剂量(mg/kg)		符号	CI	剂量(mg/kg)		符号
													huCBE11	Cam	huCBE11	Cam	huCBE11	Cam
		Day 13				Day 16				Day 20
	0.02													29	0.8	0.5	-----	29600	0.07	0.05	-----	3.5E+06	0.05	0.03	-----
0.05		10	1.6	1.0	-----	622	0.2	0.1	-----	40600	0.1	0.1	-----
	0.10													4.7	2.5	1.6	----	30	0.3	0.2	-----	1212	0.2	0.1	-----
0.15		3.04	3.4	2.2	---	4.9	0.5	0.3	----	138	0.3	0.2	-----
	0.20													2.20	4.3	2.7	---	1.50	0.7	0.5	---	27	0.4	0.2	-----
0.25		1.69	5.2	3.3	---	0.749	1.0	0.6	++	7.2	0.4	0.3	----
	0.30													1.35	6.1	3.9	--	0.535	1.2	0.8	+++	2.41	0.5	0.3	---

0.35	1.099	7.1	4.5	±	0.463	1.5	0.9	+++	1.005	0.6	0.4	±
													0.40	0.910	8.2	5.2	±	0.436	1.8	1.1	+++	0.544	0.7	0.5	+++
0.45	0.760	9.4	5.9	++	0.425	2.2	1.4	+++	0.380	0.9	0.5	+++
													0.50	0.639	11	7	+++	0.420	2.6	1.6	+++	0.318	1.0	0.6	+++
0.55	0.537	12	8	+++	0.419	3.2	2.0	+++	0.295	1.2	0.7	++++
													0.60	0.450	14	9	+++	0.418	3.8	2.4	+++	0.286	1.4	0.9	++++
0.65	0.375	16	10	+++	0.418	4.6	2.9	+++	0.283	1.6	1.0	++++
													0.70	0.309	19	12	+++	0.418	5.7	3.6	+++	0.283	1.9	1.2	++++
0.75	0.250	22	14	++++	0.418	7.2	4.5	+++	0.283	2.4	1.5	++++
													0.80	0.196	26	17	++++	0.418	9.4	5.9	+++	0.284	2.9	1.8	++++
0.85	0.146	33	21	++++	0.419	13	8	+++	0.285	3.8	2.4	++++
													0.90	0.099	45	28	+++++	0.419	20	13	+++	0.287	5.4	3.4	++++
0.95	0.053	73	46	+++++	0.420	40	25	+++	0.290	10	6	++++
													0.99	0.014	215	135	+++++	0.422	181	114	+++	0.296	34	21	++++
	第23天				第27天				第30天
													0.02	9.7E+06	0.12	0.07	-----	1.9E+09	0.4	0.2	-----	6.6E+10	0.5	0.3	-----
0.05	1.2E+05	0.2	0.1	-----	9.8E+06	0.5	0.3	-----	1.3E+08	0.7	0.4	-----
													0.10	3824	0.3	0.2	-----	156000	0.7	0.4	-----	917000	0.9	0.6	-----
0.15	451	0.4	0.3	-----	12200	0.8	0.5	-----	44600	1.0	0.6	-----
													0.20	90	0.5	0.3	-----	1805	0.9	0.6	-----	4615	1.1	0.7	-----
0.25	24	0.6	0.4	-----	374	1.0	0.6	-----	713	1.2	0.8	-----
													0.30	7.7	0.7	0.4	----	95	1.1	0.7	-----	140	1.3	0.8	-----
0.35	2.9	0.8	0.5	---	28	1.2	0.8	-----	32	1.4	0.9	-----
													0.40	1.23	0.9	0.5	--	8.9	1.3	0.8	----	8.4	1.5	1.0	----
0.45	0.629	1.0	0.6	+++	3.1	1.4	0.9	---	2.4	1.6	1.0	---
													0.50	0.395	1.1	0.7	+++	1.24	1.5	1.0	--	0.85	1.8	1.1	++
0.55	0.299	1.2	0.8	++++	0.593	1.6	1.0	+++	0.401	1.9	1.2	+++
													0.60	0.257	1.4	0.9	++++	0.359	1.8	1.1	+++	0.259	2.0	1.3	++++
0.65	0.237	1.5	1.0	++++	0.265	1.9	1.2	++++	0.205	2.1	1.3	++++
													0.70	0.225	1.7	1.1	++++	0.221	2.1	1.3	++++	0.176	2.3	1.4	++++
0.75	0.216	2.0	1.3	++++	0.192	2.3	1.4	++++	0.153	2.5	1.6	++++
													0.80	0.208	2.4	1.5	++++	0.168	2.5	1.6	++++	0.132	2.7	1.7	++++
0.85	0.199	2.9	1.8	++++	0.145	2.8	1.8	++++	0.111	3.0	1.9	++++
													0.90	0.188	3.8	2.4	++++	0.119	3.4	2.1	++++	0.088	3.5	2.2	+++++
0.95	0.172	5.7	3.6	++++	0.087	4.4	2.8	+++++	0.061	4.4	2.8	+++++
													0.99	0.141	15	9	++++	0.043	8.0	5.1	+++++	0.027	7.5	4.7	+++++

表21：huCBE11和Camptosar(Cam)：联用指数模拟：非各自独有的(完全 独立)作用方式(续表))

Fa	CI	剂量(mg/kg)		符号	CI	剂量(mg/kg)		符号	CI	剂量(mg/kg)		符号
													huCBE11	Cam	huCBE11	Cam	huCBE11	Cam
		Day 34				Day 37				Day 41
	0.02													1.8E+09	0.5	0.3	-----	4.1E+11	0.3	0.2	-----	2.9E+11	0.2	0.1	-----
0.05		8.0E+06	0.7	0.4	-----	3.9E+08	0.4	0.3	-----	3.6E+08	0.3	0.2	-----
	0.10													1.2E+05	0.9	0.6	-----	1.7E+06	0.6	0.4	-----	2.0E+06	0.5	0.3	-----
0.15		8938	1.0	0.7	-----	61000	0.7	0.4	-----	81800	0.6	0.4	-----
	0.20													1293	1.2	0.7	-----	5060	0.8	0.5	-----	7463	0.8	0.5	-----
0.25		264	1.3	0.8	-----	654	1.0	0.6	-----	1039	0.9	0.6	-----
	0.30													66	1.4	0.9	-----	10	1.1	0.7	-----	187	1.0	0.6	-----
0.35		19	1.5	0.9	-----	22	1.2	0.7	-----	39	1.1	0.7	-----
	0.40													6.1	1.6	1.0	----	5.1	1.3	0.8	----	9.3	1.3	0.8	----
0.45		2.2	1.7	1.1	--	1.3	1.4	0.9	--	2.4	1.4	0.9	---
	0.50													0.88	1.8	1.1	+	0.45	1.6	1.0	+++	0.72	1.5	1.0	++
0.55		0.430	1.9	1.2	+++	0.214	0.7	1.1	++++	0.267	1.7	1.1	++++
	0.60													0.263	2.1	1.3	++++	0.143	1.9	1.2	++++	0.141	1.9	1.2	++++
0.65		0.193	2.2	1.4	++++	0.113	2.1	1.3	++++	0.099	2.1	1.3	+++++
	0.70													0.156	2.4	1.5	++++	0.094	2.3	1.5	+++++	0.081	2.4	1.5	+++++
0.75		0.132	2.6	1.6	++++	0.079	2.6	1.7	+++++	0.068	2.7	1.7	+++++
	0.80													0.111	2.8	1.8	++++	0.065	3.0	1.9	+++++	0.056	3.1	2.0	+++++
0.85		0.090	3.2	2.0	+++++	0.051	3.5	2.2	+++++	0.046	3.7	2.3	+++++
	0.90													0.069	3.7	2.3	+++++	0.037	4.4	2.8	+++++	0.034	4.7	3.0	+++++
0.95		0.045	4.7	2.9	+++++	0.022	6.2	3.9	+++++	0.022	6.9	4.3	+++++
	0.99													0.018	7.9	5.0	+++++	0.007	13.2	8.3	+++++	0.008	15.9	10.0	+++++

总之，与huCBE11及Camptosar的单独施用相比，LTβ受体-活化型mAb huCBE11与化疗剂Camptosar对皮下植入了KM-20L2人结肠直肠腺癌的无胸腺裸鼠联合治疗表现出显著改善的结果。令人惊奇的是，huCBE11与Camptosar以1∶0.63固定比例(mg/kg hCEB11∶mg/kg Camptosar)联合治疗的效果通过联用指数分析是协同性的。与用同样化合物对WiDr鼠模型进行联合用药分析得到的结果类似。

实施例4：LTβR激动剂与核苷类似物化疗剂联合用药的抗肿瘤效力

A.WiDr异种移植小鼠模型中huCBE11/吉西他滨联合治疗的抗肿瘤效 力

为了测定核苷类似物化疗剂例如吉西他滨与huCBE11联合用药是否具有超-相加的抗肿瘤活性，例如协同的抗肿瘤活性，将吉西他滨与huCBE11联合施用给WiDr小鼠模型。

进行剂量范围试验，测定出适于研究吉西他滨与huCBE11联用抗肿瘤效力的吉西他滨剂量。测量了4个吉西他滨组(140、100、50和25mg/kg)和盐水对照组在整个剂量试验过程(第0-42天)中的平均肿瘤重量(±平均值的标准误(SEM))。植入时肿瘤种植率(take rate)＞98％，选择其大小接近内的56只小鼠开始治疗试验。与盐水对照组相比，吉西他滨140mg/kg(P＝0.001)、100mg/kg(P＝0.0002)、50mg/kg(P＝0.008)和25mg/kg(P＝0.006)组第42天时出现肿瘤生长的显著抑制。这些剂量组中抑制初次出现于第11-14天。因此，在植入预先-建立的WiDr人结肠直肠肿瘤的无胸腺裸鼠中，所试验的全部吉西他滨剂量(140、100、50和25mg/kg)都显著(P≤0.01)抑制了肿瘤生长。

在单独用药试验中，对50、25、12.5和6.25mg/kg吉西他滨的效果进行了测定。植入时肿瘤种植率为100％，选择大小接近的180只小鼠启动治疗。与盐水对照组相比，吉西他滨140mg/kg(P＝0.001)、100mg/kg(P＝0.0002)、50mg/kg(P＝0.008)和25mg/kg(P＝0.006)组第41天(试验结束)时出现对肿瘤生长的显著抑制。这些组到第10天时抑制明显。12.5mg/kg组在第41天时未见显著抑制。吉西他滨50mg/kg组第17-28天以及吉西他滨25mg/kg组第21-28天，％T/C降至42％以下。除这些时间点外，对单独施用吉西他滨的反应没有超过国立癌症研究院(NCI)活性标准(测试组/对照组百分比[％T/C]等于或小于42)，因此可以认定按照NCI指标，第41天(试验结束)时受试的全部吉西他滨治疗都无活性。总之，测定发现：第41天第二个试验结束时，按照NCI活性标准(％T/C等于或小于42)，50mg/kg-6.25mg/kg剂量的吉西他滨在WiDr模型中无活性。与盐水对照组相比，吉西他滨50mg/kg(P＜0.001)、25mg/kg(P＜0.001)和6.25mg/kg(P＜0.05)组第41天(试验结束)时出现对肿瘤生长的显著抑制。

在平行实验中，对huCBE11在WiDr人结肠直肠腺癌异种移植模型中的活性进行了测定。对施用递增剂量(5、50和100μg)吉西他滨的3个组以及盐水对照组的抗肿瘤活性进行了测试。与载体对照组相比，huCBE1150μg和100μg组中在第41天时肿瘤生长(P＜0.001)显著减小。到第14天时这种减小开始明显。用huCBE11 5μg治疗未显著抑制肿瘤生长。huCBE11 100μg组第41天时％T/C降至40.0％，50μg组第41天时％T/C降至43.5％。因此，按照NCI活性标准(％T/C等于或小于42)，huCBE11100μg在WiDr模型中有活性。

另外，还对huCBE11与吉西他滨在WiDr人结肠直肠腺癌异种移植模型中的联合抗肿瘤效力进行了测定。在第41天时，huCBE11 100μg与吉西他滨25mg/kg(图2)或12.5mg/kg的联用治疗与单独施用huCBE11相比出现了对无胸腺裸鼠中肿瘤生长的显著抑制。与单独施用huCBE11相比，huCBE11 50μg与吉西他滨25mg/kg或12.5mg/kg联合治疗了对肿瘤生长的显著抑制(分别为P＜0.01和P＜0.05)。在第17天给药两剂量huCBE11后以及全部剂量都已经施用后，所有组中的抑制都一样明显。该效果一直延续贯穿整个试验过程。这些huCBE11加吉西他滨联合用药组的％T/C在第17或21-41天全都小于42％。％T/C的最小值出现在第41天(剂量组范围：20.1-26.8％)。

此外，在试验结束时，huCBE11加吉西他滨为88μg/50mg/kg(p＜0.05)、44μg/25mg/kg(p＜0.05)、22μg/12.5mg/kg(p＜0.01)、11μg/6.25mg/kg(P＝0.01)的剂量组出现了肿瘤生长的显著抑制。这种抑制在第14-17天变得明显。huCBE11 88μg加吉西他滨50mg/kg组(最低点为19.6％)和huCBE11 44μg加吉西他滨25mg/kg组(最低点为24.5％)的％T/C在第14或17-41天降至42％以下。huCBE11 22μg加吉西他滨12.5mg/kg组在28-41天期间的％T/C等于或小于42％(最低点为37.9％)。第41天时huCBE11 11μg加吉西他滨6.25mg/kg组在第41天时的最小％T/C为42.6％。除最小剂量组合外，hCBE11加吉西他滨的所有剂量组合在第41天时的％T/C都等于或小于42％(剂量组的范围：20.1％-38.1％)。因此，可以确定的是：按照NCI活性标准(％T/C等于或小于42)，huCBE11加吉西他滨的联合治疗在WiDr模型中有活性。

为了测试huCBE11与吉西他滨是否能够协同作用，在上述的肿瘤生长模型中，使用植入了WiDr人结肠腺癌的无胸腺裸鼠进行了超相加试验。选择50、25、12.5和6.25mg/kg剂量的吉西他滨以及100、88、50、44、22和11μg剂量的huCBE11，进行这些huCBE11+吉西他滨联合用药试验。第28天时得到用于计算Fa值的全部肿瘤数据。通过比较每一治疗组与对照组的肿瘤体积，测定抗肿瘤效力。所述肿瘤体积缩小平均值计算为对照组和试验组肿瘤体积平均值之间的差。肿瘤体积的被抑制分值，即受影响分值(Fa)，是用治疗组平均肿瘤体积缩小除以对照组平均肿瘤体积计算得出的。Fa为1.000表明肿瘤被完全抑制。表22显示了单独及联合治疗时的量效关系。然后，用得到的Fa值评估huCBE11与吉西他滨联合治疗的协同效果。

表22：吉西他滨与huCBE11单独及联合治疗时的量效关系。

治疗	剂量	单位	共治疗	剂量	单位	肿瘤体积	体积缩小	Fa
									对照						803.2	0.0	0.000
吉西他滨	6.25	mg/kg				545.6	257.6	0.321
									吉西他滨	12.5	mg/kg				479.5	323.7	0.403
吉西他滨	25	mg/kg				318.9	484.3	0.603
									吉西他滨	50	mg/kg				326.0	477.2	0.594
huCBE11	5	μg				688.4	114.8	0.143
									huCBE11	50	μg				448.0	355.2	0.442
huCBE11	100	μg				386.1	417.1	0.519
									huCBE11	11	μg	吉西他滨	6.25	Mg/kg	342.7	460.5	0.573
huCBE11	22	μg	吉西他滨	12.5	mg/kg	304.5	498.7	0.621
									huCBE11	44	μg	吉西他滨	25	mg/kg	196.9	606.3	0.755
huCBE11	88	μg	吉西他滨	50	mg/kg	157.8	645.4	0.804
									huCBE11	50	μg	吉西他滨	12.5	mg/kg	206.9	596.3	0.742
huCBE11	50	μg	吉西他滨	25	mg/kg	171.8	631.4	0.786
									huCBE11	100	μg	吉西他滨	12.5	mg/kg	217.0	586.2	0.730
huCBE11	100	μg	吉西他滨	25	mg/kg	196.5	606.7	0.755

使用获自这些联合治疗试验的肿瘤重量数据，进行统计学比较来测定huCBE11加吉西他滨联合用药的作用方式是否为协同性的。由于单用Camptosar治疗荷WiDr肿瘤小鼠产生了剂量-反应型抗肿瘤效力，所以可以通过计算联用指数(CI)来对huCBE11+Camptosar联用的协同效果进行正式评估(Chou，1984)。协同作用的正式评估采用对联用指数(C.I.)的计算，所述计算使用CalcuSyn V1.1(Biosoft，CamβRidge，UK)软件，该软件可用于基于windows的剂量-效果分析。如上所述，联合用药治疗时，C.I.＝1表示相加的药效。C.I.＜1代表协同作用。C.I.＞1代表拮抗作用。本发明试验中用于评估协同性药物作用的那些数据是在固定比例0.568∶1(mg/kg吉西他滨∶μg huCBE11)的情况下得到的。这一比例是以先前初步试验中测得的两种药剂中值效果剂量之比为基础的。协同作用的正式评估采用对联用指数(CI)进行的计算，所述使用CalcuSyn V1.1(Biosoft CamβRidge，UK)软件，该软件可用于基于windows的剂量-效果分析。对于联合用药治疗，CI＝1代表相加的药效。CI＜1表示协同作用。CI＞1表明为拮抗作用。CI计算中使用的量效关系见表23。

表23：huCBE11与吉西他滨的用于协同作用计算的量效关系

单独用药				联合用药(0.568∶1)
							吉西他滨剂量(mg/kg)	受影响分值	huCBE11剂量(μg)	受影响分值	吉西他滨剂量(mg/kg)	huCBE11剂量(μg)	受影响分值
6.25	0.321	5	0.143	6.25	11	0.573
							12.5	0.403	50	0.442	12.5	22	0.621
25	0.603	100	0.519	25	44	0.755
											50	88	0.804

吉西他滨与huCBE11分别及联合治疗的剂量-反应关系的药效(Potency)及形状分别显示于表24和25。对该试验中使用的具体水平试验剂量计算得出的CI列于表26。

因为本发明试验使用了被认为具有完全独立模式作用的药物，所以能够应用非各自独有的CI值。使用6.25mg/kg吉西他滨+11.0μg huCBE11、12.5mg/kg吉西他滨+22.0μg huCBE11、25mg/kg吉西他滨+44μghuCBE11和50mg/kg吉西他滨+88μg huCBE11的联合用药剂量显示了协同效果。联合用药剂量水平范围内的CI模拟显示于表27，CI表示的协同或拮抗作用程度的总体解释见表3。从0.005mg/kg吉西他滨+0.008μghuCBE11(肿瘤体积的2％被抑制)至85mg/kg吉西他滨+150μg huCBE11(肿瘤体积的85％被抑制)范围内的联合用药剂量表现出了协同效应。因此，吉西他滨∶huCBE11以0.568∶1的固定比例联合治疗显示出了协同性的抗肿瘤效力。作为受影响分值函数的CI显示于图11。

表24：huCBE11与吉西他滨协同作用的测定：huCBE11与吉西他滨协同作用的中值效果剂量

药剂	剂量单位	中值效果剂量(95％置信区间)
				单独用药	联合用药(0.568∶1)
		吉西他滨	mg/kg			16.7	4.2
(12.6-22.0)	(2.6-6.6)
				huCBE11	μg	81.1	7.3
(65.2-100.8)	(4.6-11.6)

表25：协同作用的测定：单独及联合治疗的剂量-反应曲线的特征

值	斜率	Y-截距	R
				吉西他滨
平均值	0.842	-1.028	0.9756
				SEM	0.189	0.213
huCBE11
				平均值	0.636	-1.215	0.9977
SEM	0.043	0.068
				吉西他滨+huCBE11
平均值	0.575	-0.356	0.9804
				SEM	0.082	0.106

表26：协同作用的测定：对于huCBE11+吉西他滨治疗获得的试验值所计算的联用指数

吉西他滨剂量(mg/kg)	huCBE11剂量(μg)	受影响分值	作用机理
							各自独有的		非独有的
			CI	协同作用	CI	协同作用
							6.25	11	0.573	0.350	+++	0.373	+++
12.5	22	0.621	0.543	+++	0.595	+++
							25	44	0.755	0.487	+++	0.524	+++
50	88	0.804	0.680	+++	0.746	++
							++中等协同作用+++协同作用

表27：协同作用的测定：联用指数(CI)模拟

Fa	CI	吉西他滨(mg/kg)	huCBE11(μg)	符号
					各自独有的作用机理
0.02	0.076	0.005	0.008	+++++
					0.05	0.104	0.025	0.044	++++
0.10	0.137	0.091	0.160	++++
					0.15	0.163	0.2	0.4	++++
0.20	0.188	0.4	0.7	++++
					0.25	0.211	0.6	1.1	++++
0.30	0.235	1.0	1.7	++++
					0.35	0.259	1.4	2.5	++++
0.40	0.284	2.1	3.6	++++
					0.45	0.311	2.9	5.2	+++
0.50	0.340	4.2	7.3	+++
					0.55	0.373	5.9	10.4	+++
0.60	0.409	8.4	14.8	+++
					0.65	0.452	12.2	21.5	+++
0.70	0.503	18.2	32.0	+++
					0.75	0.567	28.2	49.5	+++
0.80	0.652	46.4	81.7	+++
					0.85	0.773	85.1	149.8	++
0.90	0.972	190.4	335.1	±
					0.95	1.419	698.6	1229.6	--
0.99	3.357	12347.0	21731.0	----
					非独有的(完全独立的作用方式)
0.02	0.077	0.005	0.008	+++++
					0.05	0.107	0.025	0.044	++++
0.10	0.141	0.091	0.160	++++
					0.15	0.170	0.2	0.4	++++
0.20	0.196	0.4	0.7	++++
					0.25	0.222	0.6	1.1	++++
0.30	0.247	1.0	1.7	++++
					0.35	0.273	1.4	2.5	++++
0.40	0.301	2.1	3.6	+++
					0.45	0.331	2.9	5.2	+++
0.50	0.363	4.2	7.3	+++
					0.55	0.399	5.9	10.4	+++
0.60	0.440	8.4	14.8	+++
					0.65	0.487	12.2	21.5	+++
0.70	0.545	18.2	32.0	+++
					0.75	0.617	28.2	49.5	+++
0.80	0.713	46.4	81.7	++
					0.85	0.851	85.1	149.8	+
0.90	1.082	190.4	335.1	±
					0.95	1.608	698.6	1229.6	---
0.99	3.977	12347.0	21731.0	----

本发明试验中用于评估药物加强作用的那些数据不限于固定比例的组合。统计学显著加强作用的检验需要计算每只动物的Fa。使用个体肿瘤体积(表43)计算每只动物的肿瘤体积的被抑制分值(Fa)(表44)。用下列公式计算出Fa：(对照组平均肿瘤体积-个体动物肿瘤体积)÷对照组平均肿瘤体积。联合用药的预期相加Fa是单独接受所述联合用药其中一种药物各组的平均Fa相加得出的。如果治疗是简单相加，也计算了联合治疗的实际疗效与预期疗效之间的差(表44)。使用双尾单样本t-检验测定所述联合治疗是否产生了统计学上显著不同于预期相加值的平均Fa(表44)。

因为本发明试验使用被认为具有完全独立模式作用的药物，所以能够应用非各自独有的C.I.值。使用6.25mg/kg吉西他滨+11μg huCBE11、12.5mg/kg吉西他滨+22μg huCBE11、25mg/kg吉西他滨+44μg huCBE11和50mg/kg吉西他滨+88μg huCBE11的联合用药剂量显示出协同效果。从0.005mg/kg吉西他滨+0.008μg huCBE11(肿瘤体积2％被抑制)至85mg/kg吉西他滨+150μg huCBE11(肿瘤体积85％被抑制)范围内的联合用药剂量表现出了协同效应。C.I.表示的协同或拮抗作用程度的总体解释见表15。当与50或100μg剂量huCBE11联用时，12.5或25mg/kg剂量的吉西他滨产生的效果在统计学上显著小于相加作用(表44)。

表43：个体肿瘤体积

												对照	吉西他滨6.25	吉西他滨12.5	吉西他滨25	吉西他滨50	hCBE50	hCBE100	hCBE50+吉西他滨12.5	hCBE50+吉西他滨25	hCBE100+吉西他滨12.5	hCBE100+吉西他滨25
	854.1	777.9	295.5	238.8	181.8	606.1	356.8	335.7	232.2	392.7	263.8
												1407.4	354.4	849.7	354.3	274.1	138.7	222.4	124.5	29.9	349.0	244.8
	596.7	415.6	367.1	288.2	468.6	352.2	310.4	227.7	95.0	140.7	200.5
												591.4	291.2	344.8	258.5	319.6	428.2	197.9	323.1	50.8	177.0	208.4
	722.9	372.2	802.2	352.8	151.2	363.5	972.2	85.2	131.3	140.0	196.2
												660.7	354.5	382.6	275.7	203.1	350.4	449.1	217.1	323.9	250.2	211.8
	1084.2	460.8	409.5	450.0	400.1	431.3	329.2	194.2	275.5	198.4	167.2
												856.5	1251.7	459.9	397.8	446.1	437.1	324.7	222.5	160.9	223.4	100.7
	806.3	469.1	418.6	342.6	370.9	521.8	442.5	219.1	149.0	133.7	138.3
												1860.8	708.9	465.3	230.9	444.1	851.1	255.6	120.6	270.1	165.1	233.8
	818.6
												1250.8
	682.8
												815.7
	574.9
												576.4
	1034.9
												612.3
	829.1
												835.0
	511.6
												503.7
	613.1
												686.0
	305.0
												1004.2
	708.0
												967.9
	600.8
												724.3
	平均：	803.2	545.6	479.5	319.0	326.0	448.0	386.1	207.0	171.8	217.0												196.5

表44：个体的肿瘤体积的被抑制分值

											吉西他滨6.25	吉西他滨12.5	吉西他滨25	吉西他滨50	hCBE50	hCBE100	hCBE 50+吉西他滨12.5	hCBE50+吉西他滨25	hCBE100+吉西他滨12.5	hCBE 100+吉西他滨25
	0.032	0.632	0.703	0.774	0.245	0.556	0.582	0.711	0.511	0.672
											0.559	-0.058	0.559	0.659	0.827	0.723	0.845	0.963	0.566	0.695
	0.483	0.543	0.641	0.417	0.562	0.614	0.717	0.882	0.825	0.750
											0.637	0.571	0.678	0.602	0.467	0.754	0.598	0.937	0.780	0.741
	0.537	0.001	0.561	0.812	0.547	-0.210	0.894	0.837	0.826	0.756
											0.559	0.524	0.657	0.747	0.564	0.441	0.730	0.597	0.688	0.736
	0.426	0.490	0.440	0.502	0.463	0.590	0.758	0.657	0.753	0.792
											-0.558	0.427	0.505	0.445	0.456	0.596	0.723	0.800	0.722	0.875
	0.416	0.479	0.574	0.538	0.350	0.449	0.727	0.815	0.834	0.828
											0.117	0.421	0.712	0.447	-0.060	0.682	0.850	0.664	0.794	0.709
	均值：	0.321	0.403	0.603	0.594	0.442	0.519	0.742	0.786	0.730											0.755
相加：																	0.845	1.045	0.922	1.122
	差：							-0.103	-0.259	-0.193											-0.367
											双尾单样本T-检验
	T-值							-3.186	-6.563	-5.425											-18.783
DF：																	9	9	9	9
	P-值：							0.0111	0.0001	0.0004											＜0.0001

总之，用LTβ受体-活化型mAb huCBE11与化疗剂吉西他滨对经皮下植入了WiDr人结肠直肠腺癌的无胸腺裸鼠的联用治疗中，出现了huCBE11与吉西他滨联合治疗的效果，经测定在huCBE11和吉西他滨低浓度情况下该效果为协同性的。

使用KM-20L2小鼠模型测定huCBE11与吉西他滨联合用药的抗肿瘤效 力

此外，还使用了其它的人结肠直肠腺癌小鼠模型系统如KM-20L2模型，来测定核苷类似物化疗剂例如吉西他滨与huCBE11联合用药是否具有超-相加的抗肿瘤活性，例如，协同的或加强的抗肿瘤活性。

首先进行剂量范围试验，测定出适于研究吉西他滨与huCBE11联合抗肿瘤效力的吉西他滨与huCBE11的剂量。将从25mg/kg至140mg/kg递增剂量的吉西他滨施用给经皮下植入KM-20L2肿瘤细胞的无胸腺裸鼠(第0天)。植入时肿瘤种植率为100％，选择大小接近的110只小鼠启动治疗试验。与盐水对照组相比，吉西他滨140mg/kg(P＜0.05第10天；P＜0.001第14-41天)、100mg/kg(P＜0.05第10天；P＜0.001第14-41天)、50mg/kg(P＜0.001第10-41天)和25mg/kg(P＜0.01第19和41天；P＜0.001第14-37天)组在试验第10天至最后一天即第41天期间中被观察到肿瘤生长显著抑制。吉西他滨140mg/kg、100mg/kg和50mg/kg组的％T/C在第14或17天时等于或小于42％，并且一直保持到试验结束。吉西他滨25mg/kg组的％T/C第17天时等于或小于42％，并且一直保持到第31天。单独用药试验中，测定了5、10和20mg/kg剂量吉西他滨在KM-20L2人腺癌异种移植模型中的抗肿瘤活性。植入时肿瘤种植率为100％，选择大小接近的129只小鼠启动治疗试验。试验发现：使用这种模型的这个实验室中，载体对照组中的肿瘤生长恰好在这种常规剂量范围内。与载体对照组相比，吉西他滨20mg/kg组在第13-55天(P＜0.001第13-47天；P＜0.01第50-55天)、10mg/kg组在第16-55天(P＜0.01第16-50天；P＜0.05第55天)和5mg/kg组在第13-43天(P＜0.01第20-23天，P＜0.05第13-16天和第27-43天)出现对肿瘤生长的显著抑制。吉西他滨20mg/kg组的％T/C第16天时等于或小于42％，并且一直保持到第34天。因此，根据NCI活性标准(％T/C等于或小于42)，可以确定吉西他滨具有抗KM-20L2肿瘤模型的活性。

在平行剂量范围试验中，检测了huCBE11在KM-20L2人腺癌异种移植模型中的活性。施用0.2、2、4和20mg/kg的huCBE11。植入时肿瘤种植率为99.5％，选择大小接近的110只小鼠启动治疗试验。与载体对照组相比，huCBE11 2mg/kg剂量组(第28-33天)和4mg/kg剂量组(第21-28天)中的肿瘤生长显著缩小。这些剂量组中观察到的％T/C的最小值＞42％。单独用药试验中，向KM-20L2模型小鼠施用0.2、2和4mg/kg剂量的吉西他滨。就这些小鼠而言，与载体对照组相比，huCBE11 4mg/kg组(P＜0.01第20-23天；P＜0.001第27-55天)和2mg/kg组(P＜0.01第20-23天；P＜0.001第27-55天)在第20-55天期间肿瘤生长显著降低。hCBE11 4mg/kg组在第50和55天，2mg/kg组在第41-55天，％T/C等于或小于42％。因此，根据NCI活性标准(％T/C等于或小于42)，可以确定huCBE11具有抗KM-20L2肿瘤模型的活性。

另外还对huCBE11与吉西他滨联用效果进行了测定。用下列物质处理动物群：对照用盐水(0.9％灭菌盐水)；递减量的吉西他滨(20、10和5mg/kg)；递减量的huCBE11(4、2和0.2mg/kg)；huCBE11加吉西他滨剂量组合(4mg/kg huCBE11+20mg/kg吉西他滨、4mg/kg huCBE11+10mg/kg吉西他滨、0.2mg/kg huCBE11+20mg/kg吉西他滨、0.2mg/kghuCBE11+10mg/kg吉西他滨、4mg/kg huCBE11+5mg/kg吉西他滨、8mg/kg huCBE11+10mg/kg吉西他滨和20mg/kg huCBE11+25mg/kg吉西他滨)，从第7天开始使用与单试剂相同的方案。当肿瘤达到5毫米(mm)长×5mm宽的平均体积时，开始所有治疗。第10-55天，huCBE11 4mg/kg与吉西他滨20mg/kg联合治疗与单用huCBE11 4mg/kg相比对肿瘤生长显示显著抑制(p＜0.01第10天；p＜0.001第13-55天)(图12)。该剂量组的％T/C在第16-55天等于或小于42％，在第37天降至最小值为13.6％。第13--55天，huCBE11 4mg/kg与吉西他滨10mg/kg联合治疗与单用huCBE11 4mg/kg相比对肿瘤生长显示明显抑制(p＜0.001第16-50天，p＜0.01第13和第55天)。该剂量组的％T/C在第20-55天等于或小于42％，其中的最小值为15.8％。第27-55天，huCBE11 0.2mg/kg与吉西他滨20mg/kg联合治疗与单用吉西他滨20mg/kg相比对肿瘤生长显示显著抑制(p＜0.05第27、37和43天；p＜0.01第30-34、41、47-55天)。该剂量组的％T/C在第16-55天等于或小于42％，在第30天降至最小值19.8％。huCBE11 0.2mg/kg与吉西他滨10mg/kg联合治疗与单用吉西他滨10mg/kg对肿瘤生长显示显著抑制，实验任何时候都中未出现％T/C等于或小于42％。第9-43和第55天，huCBE114mg/kg与吉西他滨5mg/kg联合治疗与单用huCBE11 4mg/1g相比对肿瘤生长显示显著抑制(p＜0.05第9、41、43和55天；p＜0.01第13、20、27、34和37天；p＜0.001第16、23和30天)。该剂量组的％T/C在第20-55天等于或小于42％，第37天降至最小值为25.6％。尽管无法对hCBE11 8mg/kg加吉西他滨10mg/kg组与hCBE11 8mg/kg，或者对hCBE11 20mg/kg加吉西他滨25mg/kg组与hCBE11 20mg/kg的肿瘤生长抑制情况进行比较，但是在第16-55天观察到这些组的％T/C等于或小于42％。总之，可以确定的是：按照NCI活性标准(％T/C等于或小于42)，上述6组huCBE11加吉西他滨联合治疗在KM-20L2肿瘤模型中有活性。这6组huCBE11+吉西他滨联合治疗的每一组都出现了对肿瘤生长的明显抑制。

使用获自这些联合治疗试验的肿瘤重量数据，进行统计学比较来测定huCBE11加吉西他滨联合用药的作用方式是否为协同性的。由于单用吉西他滨或huCBE11治疗荷KM-20L2肿瘤小鼠产生了剂量-反应型抗肿瘤效力，所以可以通过计算联用指数(CI)对huCBE11+吉西他滨联用的协同效果进行正式评估(Chou，1984)。

为了确保对联合施用huCBE11与吉西他滨时是否产生超-相加效果的评估，首先通过比较每一治疗组的肿瘤体积与对照组的肿瘤体积对抗肿瘤效力进行了测定。对照组和治疗组肿瘤体积平均值之间的差。肿瘤体积的被抑制分值，即受影响分值(Fa)，可以通过治疗组平均肿瘤体积缩小除以对照组平均肿瘤体积计算得出。Fa为1.000表示肿瘤被完全抑制。本发明试验中用于评估协同性药物作用的那些数据是在固定比例4∶5(mg/kg西他滨∶mg/kg huCBE11)的情况下得到的。这一比例是以这两种药剂的中值效果剂量之比为基础的。表28显示了单独及联合治疗时的量效关系。

表28：huCBE11与吉西他滨(吉西他滨)：平均肿瘤大小，计算出的治疗导致的被抑制分值，吉西他滨与huCBE11 分别及联合治疗的天数

治疗	剂量(mg/kg)	共治疗	剂量(mg/kg)	天
															9	13	16	20	23	27	30	34	37	41	43
				平均肿瘤体积(立方毫米)
载体																			111.8	172.6	265.0	401.0	527.2	668.6	816.2	1050.3	1208.0	1439.4	1606.7
				吉西他滨	5			101.0	141.8	204.1	276.8	371.6	506.7	616.2	740.4	877.5	1075.3	1244.3
吉西他滨	10																		102.4	140.9	169.0	231.7	311.2	417.4	499.5	642.3	723.7	865.2	975.7
				吉西他滨	20			105.9	111.0	99.8	101.1	147.3	225.1	322.6	443.0	522.1	674.3	753.0
huCBE11	0.2																		104.8	160.4	250.5	371.9	518.7	673.8	792.1	926.4	1048.5	1266.0	1452.0
				huCBE11	2			100.3	62.7	233.5	263.7	339.2	388.7	450.1	519.9	580.1	623.2	662.7
huCBE11	4																		125.8	180.9	247.6	278.0	344.3	385.8	480.1	558.9	591.1	702.0	775.1
				huCBE11	0.2	吉西他滨	10	97.2	113.6	143.0	174.5	241.5	348.4	456.2	574.9	689.4	877.3	1012.8
huCBE11	4	吉西他滨	10																106.5	125.6	114.8	106.6	113.3	122.0	135.6	171.1	204.3	272.4	327.8
				huCBE11	0.2	吉西他滨	20	110.8	110.7	107.4	101.7	109.6	138.1	164.5	221.7	272.9	337.6	395.0
huCBE11	4	吉西他滨	20																97.7	102.2	103.2	101.5	106.4	99.4	127.0	147.4	168.5	227.3	260.5
				huCBE11	4	吉西他滨	5	103.7	130.7	137.4	155.0	160.9	191.7	216.2	279.0	318.0	405.3	469.8
huCBE11	8	吉西他滨	10																94.8	103.6	98.4	82.0	87.9	98.7	125.3	155.0	199.7	249.1	299.7
				huCBE11	20	吉西他滨	25	99.5	110.9	93.3	77.0	83.5	85.1	96.7	124.2	165.4	204.8	264.0

表28：huCBE11与吉西他滨(吉西他滨)：平均肿瘤大小，计算出的治疗导致的被抑制分值，吉西他滨与huCBE11 分别及联合治疗的天数(续)

治疗	剂量(mg/kg)	共治疗	剂量(mg/kg)	天
															9	13	16	20	23	27	30	34	37	41	43
				平均肿瘤体积减小(立方毫米)
载体																			0.0	0.0	0.0	0.0	0.0	0.0	0.0	0.0	0.0	0.0	0.0
				吉西他滨	5			10.8	30.8	60.9	124.2	155.6	161.9	200.0	309.9	330.5	364.1	362.4
吉西他滨	10																		9.4	31.7	96.0	169.3	216.0	251.2	316.7	408.0	484.3	574.2	631.0
				吉西他滨	20			5.9	61.6	165.2	299.9	379.9	443.5	493.6	607.3	685.9	765.1	853.7
huCBE11	0.2																		7.0	12.2	14.5	29.1	8.5	-5.2	24.1	123.9	159.5	173.4	154.7
				huCBE11	2			11.5	9.9	31.5	137.3	188.0	279.9	366.1	530.4	627.9	816.2	944.0
huCBE11	4																		-14.0	-8.3	17.4	123.0	182.9	282.8	336.1	491.4	616.9	737.4	831.6
				huCBE11	0.2	吉西他滨	10	14.6	59.0	122.0	226.5	285.7	320.2	360.0	475.4	518.6	562.1	593.9
huCBE11	4	吉西他滨	10																5.3	47.0	150.2	294.4	413.9	546.6	680.6	879.2	1003.7	1167.0	1278.9
				huCBE11	0.2	吉西他滨	20	1.0	61.9	157.6	299.3	417.6	530.5	651.7	828.6	935.1	101.8	1211.7
huCBE11	4	吉西他滨	20																14.1	70.4	161.8	299.5	420.8	569.2	689.2	902.9	1039.5	1212.1	1346.2
				huCBE11	4	吉西他滨	5	8.1	41.9	127.6	246.0	366.3	476.9	600.0	771.3	890.0	1034.1	1136.9
huCBE11	8	吉西他滨	10																17.0	69.0	166.6	319.0	439.3	569.9	690.9	895.3	1008.3	1190.3	1307.0
				huCBE11	20	吉西他滨	25	12.3	61.7	171.7	324.0	443.7	583.5	719.5	926.1	1042.6	1234.6	1342.7

表28：huCBE11与吉西他滨(吉西他滨)：平均肿瘤大小，计算出的治疗导致的抑制分值，吉西他滨与huCBE11 分别及联合治疗的天数(续)

治疗	剂量(mg/kg)	共治疗	剂量(mg/kg)	天
															9	13	16	20	23	27	30	34	37	41	43
				平均受影响分值(Fa)
载体																			0.000	0.000	0.000	0.000	0.000	0.000	0.000	0.000	0.000	0.000	0.000
				吉西他滨	5			0.097	0.178	0.230	0.310	0.295	0.242	0.245	0.295	0.274	0.253	0.226
吉西他滨	10																		0.084	0.184	0.362	0.422	0.410	0.376	0.388	0.388	0.401	0.399	0.393
				吉西他滨	20			0.053	0.357	0.623	0.748	0.721	0.663	0.605	0.578	0.568	0.532	0.531
huCBE11	0.2																		0.063	0.071	0.055	0.073	0.016	-0.008	0.030	0.118	0.132	0.120	0.096
				huCBE11	2			0.103	0.057	0.119	0.342	0.357	0.419	0.449	0.505	0.520	0.567	0.588
huCBE11	4																		-0.125	-0.048	0.066	0.307	0.347	0.423	0.412	0.468	0.511	0.512	0.518
				huCBE11	0.2	吉西他滨	10	0.131	0.342	0.460	0.565	0.542	0.479	0.441	0.453	0.429	0.391	0.370
huCBE11	4	吉西他滨	10																0.047	0.272	0.567	0.734	0.785	0.818	0.834	0.837	0.831	0.811	0.796
				huCBE11	0.2	吉西他滨	20	0.009	0.359	0.595	0.746	0.792	0.793	0.798	0.789	0.774	0.765	0.754
huCBE11	4	吉西他滨	20																0.126	0.408	0.611	0.747	0.798	0.851	0.844	0.860	0.861	0.842	0.838
				huCBE11	4	吉西他滨	5	0.072	0.243	0.482	0.613	0.695	0.713	0.735	0.734	0.737	0.718	0.708
huCBE11	8	吉西他滨	10																0.152	0.400	0.629	0.796	0.833	0.852	0.846	0.852	0.835	0.827	0.813
				huCBE11	20	吉西他滨	25	0.110	0.357	0.648	0.808	0.842	0.873	0.882	0.882	0.863	0.858	0.836

表28：huCBE11与吉西他滨(吉西他滨)：平均肿瘤大小，计算出的治疗导致的抑制分值，吉西他滨与huCBE11 分别及联合治疗的天数(续)

治疗	剂量(mg/kg)	共治疗	剂量(mg/kg)	天
															9	13	16	20	23	27	30	34	37	41	43
				平均受影响分值/未受影响分值(Fa/Fu)
载体																			0.000	0.000	0.000	0.000	0.000	0.000	0.000	0.000	0.000	0.000	0.000
				吉西他滨	5			0.107	0.217	0.298	0.449	0.419	0.320	0.325	0.419	0.377	0.339	0.291
吉西他滨	10																		0.092	0.225	0.568	0.731	0.694	0.602	0.634	0.635	0.669	0.664	0.647
				吉西他滨	20			0.056	0.555	1.655	2.966	2.579	1.970	1.530	1.371	1.314	1.135	1.134
huCBE11	0.2																		0.067	0.076	0.058	0.078	0.016	-0.008	0.030	0.134	0.152	0.137	0.107
				huCBE11	2			0.115	0.061	0.135	0.521	0.554	0.720	0.813	1.020	1.082	1.310	1.424
huCBE11	4																		0.111	0.046	0.070	0.442	0.531	0.733	0.700	0.879	1.044	1.050	1.073
				huCBE11	0.2	吉西他滨	10	0.150	0.519	0.853	1.298	1.183	0.919	0.789	0.827	0.752	0.641	0.586
huCBE11	4	吉西他滨	10																0.050	0.374	1.308	2.762	3.653	4.480	5.019	5.139	4.913	4.284	3.901
				huCBE11	0.2	吉西他滨	20	0.009	0.559	1.467	2.943	3.810	3.841	3.962	3.737	3.427	3.264	3.068
huCBE11	4	吉西他滨	20																0.144	0.689	1.568	2.951	3.955	5.726	5.427	6.126	6.169	5.333	5.168
				huCBE11	4	吉西他滨	5	0.078	0.321	0.929	1.587	2.277	2.488	2.775	2.765	2.799	2.551	2.420
huCBE11	8	吉西他滨	10																0.179	0.666	1.693	3.890	4.998	5.774	5.514	5.776	5.049	4.778	4.361
				huCBE11	20	吉西他滨	25	0.124	0.556	1.840	4.208	5.314	6.857	7.441	7.457	6.304	6.028	5.086

表28中列出的huCBE11+吉西他滨固定比例联合治疗的数据使得能够通过计算CI完成使用CalcuSyn V1.1(Biosoft，CamβRidge，UK)软件对协同作用的评估，该软件可用于基于windows的剂量-效果分析。对于给定的联合用药治疗，CI＝1代表相加的药效。CI＜1表示协同作用。CI大于1表明为拮抗作用。CI计算中使用的量效关系见表29。

表29：用干协同作用计算的huCBE11与吉西他滨的量效关系

治疗	剂量(mg/kg)	共治疗	剂量(mg/kg)	天
													16	20	23	27	30	34	37	41	43
				受影响分值
													给定的单独用药
huCBE11	0.2			0.055	0.073	0.016	0.000	0.030	0.118	0.132	0.120	0.096
													2.0			0.119	0.342	0.357	0.419	0.449	0.505	0.520	0.567	0.588
	4.0			0.120	0.307	0.347	0.423	0.412	0.468	0.511	0.512	0.518
													吉西他滨	5			0.230	0.310	0.295	0.242	0.245	0.295	0.274	0.253	0.226
10			0.362	0.422	0.410	0.376	0.388	0.388	0.401	0.399	0.393
												20				0.623	0.748	0.721	0.663	0.605	0.578	0.568	0.532	0.531
联合用药(4∶5)
													huCBE11	4	吉西他滨	5	0.482	0.613	0.695	0.713	0.735	0.734	0.737	0.718	0.708
8	10	0.629	0.796	0.833	0.852	0.846	0.852	0.835	0.827	0.813
											20	25		0.648		0.808	0.842	0.873	0.882	0.882	0.863	0.858	0.836

huCBE11与吉西他滨分别及联合治疗的中值效果剂量列于表30。吉西他滨与huCBE11分别及联合治疗的剂量-反应关系的药效(Potency)及形状分别显示于表31和32。对于该试验中使用的确切水平试验剂量计算得出的CI列于表32。

因为本发明试验使用了被认为具有完全独立模式作用的药物，所以能够应用非各自独有的的CI值(参见表3和32-34)。使用4mg/kg huCBE11+5mg/kg吉西他滨、8mg/kg huCBE11+10mg/kg吉西他滨和20mg/kghuCBE11+25mg/kg吉西他滨(即按4∶5的固定比例)的联合剂量在第34-37天出现协同效果。这些两药物较低剂量联用在治疗期的大部分时间表现出了协同作用(表32)。联合用药剂量水平范围内的CI模拟显示于表33和34，CI表示的协同或拮抗作用程度的总体解释见表3。协同效应遍及整个治疗期间。作为肿瘤抑制百分比函数的CI显示于图13。大多数情况下，协同作用在60％以下的肿瘤抑制水平最为显著。联合用药的协同效应峰值在第34天观察到。图14给出了发生效力协同效应的剂量范围。产生20％至80％肿瘤抑制的剂量范围联用了剂量水平为0.1-10mg/kg的两种药物(图14)。该试验的结果表明：使用固定比例(4∶5)huCBE11+吉西他滨治疗显现出了协同的抗肿瘤效力。

表30：协同作用的测定：huCBE11与吉西他滨协同作用的中值效果剂量(mg/kg；药效)

天	huCBE11		吉西他滨
					单独用药	联合用药(4∶5)	单独用药	联合用药(4∶5)
	中值效果剂量(95％置信区间)
					16	2077	3.6	14.1	4.5
(83-51942)	(1.1-11.4)	(11.7-17.0)	(1.4-14.2)
				20		9.5	1.3	10.1	1.7
(2.2-42.0)	(0.1-13.2)	(7.4-13.7)	(0.2-16.5)
					23	4.8	0.6	10.8	0.7
(2.0-11.7)	(0.1-4.2)	(8.1-14.3)	(0.1-5.3)
				27		3.3	0.7	12.8	0.9
(1.6-6.7)	(0.1-4.1)	(10.4-15.8)	(0.1-5.1)
					30	3.8	0.6	14.1	0.8
(1.5-9.6)	(0.2-1.8)	(12.7-15.6)	(0.3-2.3)
				34		3.2	0.6	14.8	0.8
(1.3-8.4)	(0.2-2.2)	(11.7-18.7)	(0.2-2.7)
					37	2.7	0.4	15.0	0.5
(1.3-5.6)	(0.2-1.1)	(14.1-16.0)	(0.2-1.3)
				41		2.4	0.6	16.8	0.7
(1.0-6.2)	(0.2-1.8)	(15.3-18.5)	(0.2-2.2)
					43	2.4	0.4	16.9	0.6
(0.9-6.1)	(0.1-1.5)	(14.5-19.7)	(0.2-1.9)

表31：协同作用的测定：huCBE11与吉西他滨联合治疗的剂量-反应曲线特征

天	值	huCBE11			吉西他滨			huCBE11+吉西他滨
											斜率	Y-截距	R	斜率	Y-截距	R	斜率	Y-截距	R
		16	平均值	0.30	-1.01	0.9774	1.23	-1.42	0.9898	0.41										-0.23	0.8811
SEM	0.07										0.04		0.18	0.18		0.22	0.21
			20	平均值	0.64	-0.62	0.9556	1.36	-1.37	0.9629									0.58	-0.07	0.8608
SEM	0.20	0.11										0.38	0.39		0.34	0.34
				23	平均值	1.26	-0.86	0.9728	1.31	-1.35								0.9688	0.50	0.12	0.8611
SEM	0.30	0.17									0.34	0.35		0.30	0.29
					27	平均值	3.19	-1.64	0.9756	1.31							-1.45	0.9852	0.61	0.09	0.9049
SEM	0.72	0.40		0.23							0.24		0.29	0.28
						30	平均值	1.14	-0.66	0.9654						1.12	-1.29	0.9969	0.60	0.12	0.9568
SEM	0.31	0.17		0.09	0.09							0.18	0.18
							34	平均值	0.69	-0.35					0.9587	0.86	-1.00	0.9854	0.60	0.13	0.9401
SEM	0.21	0.12		0.15	0.15						0.22	0.21
								37	平均值	0.70				-0.30	0.9716	0.90	-1.06	0.9989	0.49	0.19	0.9430
SEM	0.17	0.09		0.04	0.04		0.17				0.17
									41	平均值			0.76	-0.29	0.9518	0.87	-1.07	0.9979	0.52	0.13	0.9433
SEM	0.24	0.14		0.06	0.06		0.18	0.18
										43		平均值	0.86	-0.32	0.9484	0.98	-1.20	0.9949	0.45	0.16	0.9216
SEM	0.29	0.16		0.10	0.10		0.19	0.18

表32：协同作用的测定：试验值的联用指数(CIs)

天	剂量(mg/kg)		受影响分值	作用机理
								各自独有的		非独有的
				huCBE11	吉西他滨	CI	协同作用					CI	协同作用
	16	4						5	0.482	0.378	+++			0.379	+++
8			10	0.629	0.463	+++	0.463					+++
		20						25	0.648	1.082	±		1.084	±
20			4	5	0.613	0.559	+++					0.631			+++
	8	10						0.796	0.465	+++	0.501		+++
			20	25	0.808	1.085	±					1.276		--
	23	4						5	0.695	0.679	+++		0.786		++
8			10	0.833	0.735	++	0.862					+
		20						25	0.842	1.746	---		2.458	---
27			4	5	0.713	1.115	-					1.295			--
	8	10						0.852	1.620	---	1.911		---
			20	25	0.873	3.795	----					5.297		----
	30	4						5	0.735	0.569	+++		0.630		+++
8			10	0.846	0.623	+++	0.695					+++
		20						25	0.882	1.186	-		1.448	--
34			4	5	0.734	0.387	+++					0.417			+++
	8	10						0.852	0.284	++++	0.301		+++
			20	25	0.882	0.498	+++					0.552		+++
	37	4						5	0.737	0.441	+++		0.476		+++
8			10	0.835	0.396	+++	0.428					+++
		20						25	0.863	0.738	++		0.851	+
41			4	5	0.718	0.578	+++					0.626			+++
	8	10						0.827	0.513	+++	0.554		+++
			20	25	0.858	0.949	±					1.092		±
	43	4						5	0.708	0.726	++		0.799		++
8			10	0.813	0.748	++	0.829					++
		20						25	0.836	1.560	---		1.918	---

++++强协同作用

+++协同作用

++中等协同作用

+ _轻度 协同作用

±近乎相加

- _轻度 拮抗作用

--中等拮抗作用

--拮抗作用

----强拮抗作用

表33：协同作用的测定：联用指数(CIs)的模拟：各自独有的作用方式

Fa	CI	剂量(mg/kg)		符号	CI	剂量(mg/kg)		符号	CI	剂量(mg/kg)		符号
													huCBE11	吉西他滨	huCBE11	吉西他滨	huCBE11	吉西他滨
		Day 16				Day 20				Day 23
	0.02													0.043	0.00025	0.00031	+++++	0.079	0.00161	0.00201	+++++	0.002	0.00025	0.00032	+++++
0.05		0.022	0.0026	0.0032	+++++	0.097	0.0082	0.0103	+++++	0.005	0.0017	0.0021	+++++
	0.10													0.019	0.0161	0.0202	+++++	0.117	0.0299	0.0374	++++	0.013	0.0073	0.0091	+++++
0.15		0.025	0.0504	0.0630	+++++	0.135	0.0664	0.0830	++++	0.023	0.0183	0.0229	+++++
	0.20													0.038	0.119	0.148	+++++	0.154	0.121	0.151	++++	0.035	0.037	0.046	+++++
0.25		0.056	0.241	0.301	+++++	0.172	0.199	0.249	++++	0.049	0.065	0.081	+++++
	0.30													0.082	0.447	0.559	+++++	0.193	0.307	0.384	++++	0.067	0.106	0.133	+++++
0.35		0.118	0.784	0.980	++++	0.215	0.455	0.569	++++	0.088	0.167	0.209	+++++
	0.40													0.166	1.33	1.66	++++	0.240	0.66	0.82	++++	0.114	0.26	0.32	++++
0.45		0.231	2.19	2.74	++++	0.269	0.94	1.17	++++	0.145	0.38	0.48	++++
	0.50													0.320	3.59	4.49	+++	0.303	1.32	1.65	+++	0.185	0.57	0.71	++++
0.55		0.445	5.89	7.36	+++	0.344	1.87	2.34	+++	0.235	0.85	1.06	++++
	0.60													0.623	9.75	12.18	+++	0.394	2.66	3.33	+++	0.301	1.28	1.60	+++
0.65		0.886	16.5	20.6	+	0.457	3.8	4.8	+++	0.389	2.0	2.4	+++
	0.70													1.290	28.9	36.1	--	0.539	5.7	7.1	+++	0.511	3.1	3.8	+++
0.75		1.953	53.6	67.1	---	0.653	8.8	11.0	+++	0.691	5.1	6.3	+++
	0.80													3.138	109	36	---	0.822	14	18	+	0.977	9	11	±
0.85		5.574	256	321	----	1.099	26	33	±	1.484	18	22	---
	0.90													11.957	800	1001	-----	1.646	59	73	---	2.587	45	56	---
0.95		41.022	5032	6290	-----	3.260	213	266	---	6.347	197	246	----
	0.99													624.821	292040	365040	-----	15.883	3666	4583	-----	46.123	5200	6499	-----

表33：协同作用的测定：联用指数(CI)的模拟：各自独有的作用方式(续)

Fa	CI	剂量(mg/kg)		符号	CI	剂量(mg/kg)		符号	CI	剂量(mg/kg)		符号
													huCBE11	吉西他滨	huCBE11	吉西他滨	huCBE11	吉西他滨
		第27天				第30天				第34天
	0.02													0.003	0.00118	0.00148	+++++	0.011	0.00097	0.00121	+++++	0.088	0.00095	0.00119	+++++
0.05		0.009	0.0056	0.0070	+++++	0.022	0.0047	0.0058	+++++	0.111	0.0046	0.0057	++++
	0.10													0.022	0.0190	0.0238	+++++	0.039	0.0162	0.0202	+++++	0.134	0.0159	0.0198	++++
0.15		0.036	0.0407	0.0509	+++++	0.057	0.0349	0.0436	+++++	0.151	0.0342	0.0428	++++
	0.20													0.054	0.072	0.090	+++++	0.074	0.062	0.078	+++++	0.165	0.061	0.076	++++
0.25		0.076	0.116	0.144	+++++	0.093	0.100	0.126	+++++	0.178	0.098	0.123	++++
	0.30													0.102	0.174	0.218	++++	0.113	0.153	0.191	++++	0.190	0.149	0.187	++++
0.35		0.134	0.254	0.317	++++	0.135	0.223	0.279	++++	0.202	0.218	0.273	++++
	0.40													0.173	0.36	0.45	++++	0.159	0.32	0.40	++++	0.215	0.31	0.39	++++
0.45		0.222	0.50	0.63	++++	0.187	0.45	0.56	++++	0.227	0.44	0.55	++++
	0.50													0.283	0.70	0.88	++++	0.219	0.62	0.78	++++	0.240	0.61	0.76	++++
0.55		0.361	0.97	1.22	+++	0.256	0.87	1.09	++++	0.254	0.85	1.07	++++
	0.60													0.465	1.36	1.70	+++	0.300	1.23	1.53	+++	0.269	1.20	1.50	++++
0.65		0.605	1.9	2.4	+++	0.355	1.7	2.2	+++	0.285	1.7	2.1	++++
	0.70													0.804	2.8	3.5	++	0.424	2.6	3.2	+++	0.305	2.5	3.1	+++
0.75		1.101	4.3	5.3	-	0.515	3.9	4.9	+++	0.328	3.8	4.7	+++
	0.80													1.582	7	9	---	0.645	6	8	+++	0.357	6	8	+++
0.85		2.459	12	15	---	0.846	11	14	++	0.396	11	14	+++
	0.90													4.435	26	32	----	1.214	24	30	--	0.456	24	29	+++
0.95		11.599	88	110	-----	2.174	84	104	---	0.577	82	102	+++
	0.99													99.562	1319	1648	-----	7.879	1301	1626	----	1.008	1267	1584	±

表33：协同作用的测定：联用指数(CI)的模拟：各自独有的作用方式(续)

Fa	CI	剂量(mg/kg)		符号	CI	剂量(mg/kg)		符号	CI	剂量(mg/kg)		符号
													huCBE11	吉西他滨	huCBE11	吉西他滨	huCBE11	吉西他滨
		Day 37				Day 41				Day 43
	0.02													0.015	0.00014	0.00018	+++++	0.025	0.00032	0.00040	+++++	0.003	0.00007	0.00009	+++++
0.05		0.027	0.0010	0.0012	+++++	0.044	0.0020	0.0025	+++++	0.009	0.0006	0.0008	+++++
	0.10													0.044	0.0045	0.0057	+++++	0.069	0.0083	0.0103	+++++	0.020	0.0032	0.0040	+++++
0.15		0.059	0.0117	0.0146	+++++	0.092	0.0200	0.0250	+++++	0.033	0.0091	0.0113	+++++
	0.20													0.073	0.024	0.030	+++++	0.114	0.039	0.049	++++	0.048	0.020	0.025	+++++
0.25		0.089	0.043	0.054	+++++	0.136	0.068	0.085	++++	0.066	0.038	0.047	+++++
	0.30													0.104	0.072	0.090	++++	0.159	0.110	0.137	++++	0.086	0.066	0.083	+++++
0.35		0.121	0.114	0.143	++++	0.183	0.170	0.212	++++	0.111	0.110	0.138	++++
	0.40													0.139	0.18	0.22	++++	0.208	0.26	0.32	++++	0.140	0.18	0.22	++++
0.45		0.160	0.27	0.34	++++	0.237	0.38	0.47	++++	0.176	0.28	0.35	++++
	0.50													0.182	0.40	0.51	++++	0.268	0.55	0.69	++++	0.219	0.44	0.55	++++
0.55		0.209	0.61	0.76	++++	0.304	0.81	1.02	+++	0.273	0.69	0.86	++++
	0.60													0.239	0.93	1.16	++++	0.345	1.21	1.51	+++	0.343	1.09	1.37	+++
0.65		0.276	1.4	1.8	++++	0.394	1.8	2.3	+++	0.433	1.8	2.2	+++
	0.70													0.323	2.3	2.9	+++	0.454	2.8	3.5	+++	0.557	2.9	3.7	+++
0.75		0.383	3.8	4.8	+++	0.531	4.5	5.7	+++	0.735	5.2	6.4	++
	0.80													0.467	7	9	+++	0.636	8	10	+++	1.009	10	12	±
0.85		0.595	14	17	+++	0.791	15	19	++	1.482	21	27	---
	0.90													0.825	36	45	++	1.059	37	47	±	2.469	60	75	---
0.95		1.410	166	207	--	1.699	156	195	---	5.643	321	402	----
	0.99													4.851	4830	6037	----	4.882	3675	4594	----	35.251	12948	16185	-----

表34：协同作用的测定：联用指数(CI)的模拟：互相非独有的(完全独立的)作用方式

Fa	CI	剂量(mg/kg)		符号	CI	剂量(mg/kg)		符号	CI	剂量(mg/kg)		符号
													huCBE11	吉西他滨	huCBE11	吉西他滨	huCBE11	吉西他滨
		第16天				第20天				第23天
	0.02													0.043	0.00025	0.00031	+++++	0.079	0.00161	0.00201	+++++	0.002	0.00025	0.00032	+++++
0.05		0.022	0.0026	0.0032	+++++	0.097	0.0082	0.0103	+++++	0.005	0.0017	0.0021	+++++
	0.10													0.019	0.0161	0.0202	+++++	0.119	0.0299	0.0374	++++	0.013	0.0073	0.0091	+++++
0.15		0.026	0.0504	0.0630	+++++	0.139	0.0664	0.0830	++++	0.023	0.0183	0.0229	+++++
	0.20													0.038	0.119	0.148	+++++	0.158	0.121	0.151	++++	0.035	0.037	0.046	+++++
0.25		0.057	0.241	0.301	+++++	0.179	0.199	0.249	++++	0.050	0.065	0.081	+++++
	0.30													0.082	0.447	0.559	+++++	0.201	0.307	0.384	++++	0.068	0.106	0.133	+++++
0.35		0.118	0.784	0.980	++++	0.226	0.455	0.569	++++	0.090	0.167	0.209	+++++
	0.40													0.166	1.33	1.66	++++	0.255	0.66	0.82	++++	0.117	0.26	0.32	++++
0.45		0.231	2.19	2.74	++++	0.288	0.94	1.17	++++	0.150	0.38	0.48	++++
	0.50													0.321	3.59	4.49	+++	0.326	1.32	1.65	+++	0.193	0.57	0.71	++++
0.55		0.446	5.89	7.36	+++	0.373	1.87	2.34	+++	0.248	0.85	1.06	++++
	0.60													0.624	9.75	12.18	+++	0.430	2.66	3.33	+++	0.322	1.28	1.60	+++
0.65		0.887	16.5	20.6	+	0.503	3.8	4.8	+++	0.424	2.0	2.4	+++
	0.70													1.291	28.9	36.1	--	0.600	5.7	7.1	+++	0.572	3.1	3.8	+++
0.75		1.954	53.6	67.1	---	0.734	8.8	11.0	++	0.803	5.1	6.3	++
	0.80													3.140	109	136	---	0.934	14	18	±	1.199	9	11	-
0.85		5.576	256	321	----	1.266	26	33	--	1.999	18	22	---
	0.90													11.961	800	1001	-----	1.930	59	73	---	4.158	45	56	----
0.95		41.028	5032	6290	-----	3.930	213	266	----	15.863	197	246	-----
	0.99													624.846	292040	365040	-----	20.339	3666	4583	-----	555.039	5200	6499	-----

表34：协同作用的测定：联用指数(CI)的模拟：互相非独有的(完全独立的)作用方式(续)

Fa	CI	剂量(mg/kg)		符号	CI	剂量(mg/kg)		符号	CI	剂量(mg/kg)		符号
													huCBE11	吉西他滨	huCBE11	吉西他滨	huCBE11	吉西他滨
		第27天				第30天				第34天
	0.02													0.003	0.00118	0.00148	+++++	0.011	0.00097	0.00121	+++++	0.089	0.00095	0.00119	+++++
0.05		0.009	0.0056	0.0070	+++++	0.022	0.0047	0.0058	+++++	0.112	0.0046	0.0057	++++
	0.10													0.022	0.0190	0.0238	+++++	0.040	0.0162	0.0202	+++++	0.136	0.0159	0.0198	++++
0.15		0.037	0.0407	0.0509	+++++	0.057	0.0349	0.0436	+++++	0.154	0.0342	0.0428	++++
	0.20													0.055	0.072	0.090	+++++	0.075	0.062	0.078	+++++	0.169	0.061	0.076	++++
0.25		0.077	0.116	0.144	+++++	0.095	0.100	0.126	+++++	0.183	0.098	0.123	++++
	0.30													0.104	0.174	0.218	++++	0.115	0.153	0.191	++++	0.196	0.149	0.187	++++
0.35		0.138	0.254	0.317	++++	0.138	0.223	0.279	++++	0.209	0.218	0.273	++++
	0.40													0.179	0.36	0.45	++++	0.164	0.32	0.40	++++	0.222	0.31	0.39	++++
0.45		0.231	0.50	0.63	++++	0.194	0.45	0.56	++++	0.235	0.44	0.55	++++
	0.50													0.297	0.70	0.88	++++	0.228	0.62	0.78	++++	0.249	0.61	0.76	++++
0.55		0.384	0.97	1.22	+++	0.268	0.87	1.09	++++	0.265	0.85	1.07	++++
	0.60													0.501	1.36	1.70	+++	0.317	1.23	1.53	+++	0.281	1.20	1.50	++++
0.65		0.663	1.9	2.4	+++	0.378	1.7	2.2	+++	0.300	1.7	2.1	++++
	0.70													0.899	2.8	3.5	+	0.457	2.6	3.2	+++	0.322	2.5	3.1	+++
0.75		1.267	4.3	5.3	--	0.565	3.9	4.9	+++	0.349	3.8	4.7	+++
	0.80													1.894	7	9	---	0.723	6	8	++	0.383	6	8	+++
0.85		3.132	2	15	---	0.980	11	14	±	0.429	11	14	+++
	0.90													6.304	26	32	----	1.488	24	30	---	0.502	24	29	+++
0.95		21.318	88	110	-----	3.050	84	104	---	0.656	82	102	+++
	0.99													470.496	1319	648	-----	9.243	1301	1626	----	1.262	267	1584	--

表34：协同作用的测定：联用指数(CI)的模拟：互相非独有的(完全独立的)作用方式(续)

Fa	CI	剂量(mg/kg)		符号	CI	剂量(mg/kg)		符号	CI	剂量(mg/kg)		符号
													huCBE11	吉西他滨	huCBE11	吉西他滨	huCBE11	吉西他滨
		第37天				第41天				第43天
	0.02													0.015	0.00014	0.00018	+++++	0.025	0.00032	0.00040	+++++	0.003	0.00007	0.00009	+++++
0.05		0.027	0.0010	0.0012	+++++	0.044	0.0020	0.0025	+++++	0.009	0.0006	0.0008	+++++
	0.10													0.044	0.0045	0.0057	+++++	0.070	0.0083	0.0103	+++++	0.020	0.0032	0.0040	+++++
0.15		0.059	0.0117	0.0146	+++++	0.093	0.0200	0.0250	+++++	0.033	0.0091	0.0113	+++++
	0.20													0.074	0.024	0.030	+++++	0.115	0.039	0.049	++++	0.048	0.020	0.025	+++++
0.25		0.089	0.043	0.054	+++++	0.138	0.068	0.085	++++	0.066	0.038	0.047	+++++
	0.30													0.106	0.072	0.090	++++	0.162	0.110	0.137	++++	0.087	0.066	0.083	+++++
0.35		0.123	0.114	0.143	++++	0.187	0.170	0.212	++++	0.113	0.110	0.138	++++
	0.40													0.142	0.18	0.22	++++	0.214	0.26	0.32	++++	0.143	0.18	0.22	++++
0.45		0.163	0.27	0.34	++++	0.244	0.38	0.47	++++	0.180	0.28	0.35	++++
	0.50													0.187	0.40	0.51	++++	0.277	0.55	0.69	++++	0.225	0.44	0.55	++++
0.55		0.215	0.61	0.76	++++	0.316	0.81	1.02	+++	0.283	0.69	0.86	++++
	0.60													0.249	0.93	1.16	++++	0.361	1.21	1.51	+++	0.358	1.09	1.37	+++
0.65		0.289	1.4	1.8	++++	0.416	1.8	2.3	+++	0.458	1.8	2.2	+++
	0.70													0.341	2.3	2.9	+++	0.484	2.8	3.5	+++	0.600	2.9	3.7	+++
0.75		0.410	3.8	4.8	+++	0.573	4.5	5.7	+++	0.810	5.2	6.4	++
	0.80													0.509	7	9	+++	0.698	8	10	+++	1.155	10	12	-
0.85		0.667	14	17	+++	0.891	15	19	++	1.807	21	27	---
	0.90													0.972	36	45	±	1.246	37	47	--	3.411	60	75	----
0.95		1.874	166	207	---	2.216	156	195	---	10.872	321	402	-----
	0.99													10.732	4830	6037	-----	9.792	3675	4594	----	266.201	12948	16185	-----

总之，LTβ受体-活化mAb huCBE11与化疗剂吉西他滨对皮下植入了KM-20L2人结肠直肠腺癌的无胸腺裸鼠的联合治疗表现出了huCBE11与吉西他滨联合治疗的效果，经测定该效果是协同性的。

实施例5：LTβR激动剂与植物碱化疗剂联合用药的抗肿瘤效力

huCBE11与红豆杉醇联用的抗肿瘤改力

为了测定植物碱化疗剂例如红豆杉醇与LTβ受体-活化mAb huCBE11的联合用药在治疗癌症方面是否有超-相加效果，对抗体/化疗联合在WiDr异种移植模型上的潜在协同的及加强性抗肿瘤活性进行了检测。

首先进行剂量范围试验，测定适于研究联合抗肿瘤效力的红豆杉醇和huCBE11的剂量。另外，单药剂试验还检测了每一药剂单独施用时抑制肿瘤生长的抗肿瘤效力。用盐水(对照)、huCBE11(5μg、50μg、100μg或500μg)或红豆杉醇(剂量范围为3.13mg/kg-25mg/kg)对荷有人工建立的(established)WiDr肿瘤的无胸腺裸鼠进行治疗(盐水对照组n＝30；试验组n＝10/剂量)。第3天时测定肿瘤大小，此后定期进行直至分期日(staging day)。

单独施用红豆杉醇的试验组中肿瘤生长受到了抑制。第50天时，在25mg/kg(P＜0.0001)这一剂量，红豆杉醇具有对生长于裸鼠的WiDr人结肠直肠肿瘤生长产生显著抑制。25mg/kg组在第21-25天期间的％T/C小于42％。12.5mg/kg、6.25mg/kg和3.13mg/kg红豆杉醇剂量组的肿瘤生长与载体对照组无显著差别，这些剂量组在整个试验过程中的％T/C都＞82％。此外，25mg/kg(P＜0.0001)、18.75mg/kg(P＜0.001)和6.25mg/kg(P＜0.05)剂量组的红豆杉醇在第39天，12.5mg/kg组(P＜0.05)在第13-32天，显现了对肿瘤生长的显著抑制。25mg/kg组第13-39天以及18.75mg/kg组第21-34天的％T/C小于42％。

huCBE11试验组中的肿瘤生长也受到了抑制。第45天时，500μg(P＜0.001)、100μg(P＜0.001)、50μg(P＜0.001)和5μg(P＜0.05)剂量的huCBE11对肿瘤生长产生了显著的抑制。类似的结果出现于第39天；经500μg(P＜0.001)和50μg(P＜0.01)huCBE11治疗后的肿瘤重量显著小于载体治疗的肿瘤重量。500μg组第31-45天期间的％T/C小于42％。

为了测定红豆杉醇与huCBE11联合用药是否能有效抑制肿瘤生长，按照上述方法对荷有人工建立的(established)WiDr肿瘤细胞的无胸腺裸鼠进行联合用药试验。测定发现：按照NCI活性标准(％T/C等于或小于42)，huCBE11与红豆杉醇的联用在WiDr模型中是有活性的。第39天时，与单独施用huCBE11(500μg)相比，huCBE11 500μg与红豆杉醇12.5mg/kg联用对WiDr肿瘤生长产生了显著较大的抑制(P＜0.05)。huCBE11 500μg加红豆杉醇12.5mg/kg组第24-39天期间的％T/C，huCBE11 75μg加红豆杉醇25mg/kg组第13-39天期间的％T/C，huCBE11 56.25μg加红豆杉醇18.75mg/kg组第18-34天期间的％T/C，以及huCBE11 37.5μg加红豆杉醇12.5mg/kg组第27、34和39天时的％T/C，都小于42％(图3)。

联合用药试验的结果(显示于表35-39以及图3和15)表明：huCBE11与红豆杉醇联用使得被治疗小鼠的肿瘤体积显著缩小。通过比较每一治疗组的肿瘤体积与对照组的肿瘤体积，测定抗肿瘤效力。Fa为1.000表示肿瘤被完全抑制。表35显示了第34天时huCBE11与红豆杉醇分别及联合治疗的量效关系。

表35：huCBE11与红豆杉醇之间的量效关系

治疗	剂量	单位	共治疗	剂量	单位	肿瘤体积	体积缩小	Fa
									对照						1376.4	0.0	0.000
红豆杉醇	6.25	mg/kg				1045.2	331.2	0.241
									红豆杉醇	18.75	mg/kg				567.5	808.9	0.588
红豆杉醇	25	mg/kg				259.1	1117.3	0.812
									huCBE11	5	ug				1024.0	352.4	0.256
huCBE11	50	ug				880.1	496.3	0.361
									huCBE11	500	ug				735.6	640.8	0.466
huCBE11	18.75	ug	红豆杉醇	6.25		639.9	736.5	0.535
									huCBE11	37.5	ug	红豆杉醇	12.5	mg/kg	539.2	837.2	0.608

huCBE11	75	ug	红豆杉醇	25	mg/kg	157.7	1218.7	0.885
									huCBE11	50	ug	红豆杉醇	6.25	mg/kg	1019.8	356.6	0.259
huCBE11	50	ug	红豆杉醇	12.5	mg/kg	689.7	686.7	0.499
									huCBE11	500	ug	红豆杉醇	6.25	mg/kg	652.6	723.8	0.526
huCBE11	500	ug	红豆杉醇	12.5	mg/kg	555.0	821.4	0.597

由于单用红豆杉醇治疗荷WiDr肿瘤小鼠产生了剂量-反应的抗肿瘤效力，所以可以通过计算联用指数对huCBE11加红豆杉醇联合用药的协同作用进行常规评估。本试验中用于评估协同性药物作用的那些数据是在固定比0.333∶1(mg/kg红豆杉醇∶mg/kg huCBE11)的情况下得到的。这一比例是以先前初步试验中测得的两种药剂中值效果剂量之比为基础的。协同作用的常规评估采用使用CalcuSyn V1.1(Biosoft CamβRidge，UK)软件对联用指数(CI)进行计算，该软件可用于基于windows的剂量-效果分析。对于给定的联合用药治疗，CI＝1代表相加的效力。CI＜1表示协同作用。CI大于1表明为拮抗作用。CI计算中使用的量效关系见表36。

表36：huCBE11的用于协同作用计算的量效关系

给定的单独用药				联合用药(0.333∶1)
							红豆杉醇剂量(mg/kg)	受影响分值	huCBE11剂量(g)	受影响分值	红豆杉醇剂量(mg/kg)	huCBE11剂量(g)	受影响分值
6.25	0.241	5	0.256	6.25	18.8	0.535
							18.75	0.588	50	0.361	12.5	37.5	0.608
25	0.812	500	0.466	25	75.0	0.885

使用联用指数，用第34天时的肿瘤体积评估协同作用。红豆杉醇与huCBE11分别及联合治疗的剂量-反应关系的效力及形状分别显示于下列的表37和38。对于该试验中使用具体水平试验剂量计算得出的联用指数列于表39。

表37：协同作用的测定：huCBE11与红豆杉醇协同作用的中值效果剂量

药剂	剂量单位	中值效果剂量(95％置信区间)
				给定的单独用药	联合用药(0.333∶1)
		红豆杉醇	mg/kg			12.6(9.4-16.8)	6.6(3.4-12.8)
huCBE11	g			932.9(720.7-1207.6)	19.8(10.2-38.4)

表38：分别及联合治疗的剂量-反应曲线的形状

剂量-反应曲线特征
				值	斜率	Y-截距	R
红豆杉醇
				平均值	1.740	-1.914	0.9717
SEM	0.423	0.501
				huCBE11
平均值	0.202	-0.600	0.9993
				SEM	0.008	0.014
红豆杉醇+huCBE11
				平均值	1.371	-1.125	0.9298
SEM	0.542	0.610

表39：适于试验剂量的联用指数

用于试验值的联用指数CI)
							红豆杉醇剂量(mg/kg)	huCBE11剂量(ug)	受影响分值	作用机理
各自独有的		非独有的
				CI	协同作用	CI				协同作用
6.25	18.75	0.535	0.468								+++	0.473	+++
				12.5	37.5	0.608	0.777	++	0.780	++
25	75	0.885	0.615								+++	0.615	+++

++中等协同作用

+++协同作用

因为本发明试验使用了被认为具有完全独立作用模式的药物，所以可使用非各自独有的的CI值。使用6.25mg/kg红豆杉醇+18.75μg huCBE11，12.5mg/kg红豆杉醇+37.5μg huCBE11以及25mg/kg红豆杉醇+75μg huCBE11的联合用药剂量显示除了协同效果。联合用药剂量水平范围内的CI模拟(Simulations)显示于表40。从4.9mg/kg红豆杉醇+14.7μg huCBE11(肿瘤体积40％被抑制)至57mg/kg红豆杉醇+170μg huCBE11(肿瘤体积95％被抑制)范围内的联合用药剂量表现出了协同效应。作为效果分值函数的联用指数显示于图12。

表40：联合指数(CI)模拟

Fa	CI	红豆杉醇(mg/kg)	huCBE11(g)	符号
					各自独有的作用机理
0.02	287000	0.39	1.16	-----
					0.05	5278	0.77	2.32	-----
0.10	226	1.33	3.99	-----
					0.15	32	1.87	5.60	-----
0.20	7.796	2.40	7.22	----

0.25	2.634	2.97	8.90	---
					0.30	1.219	3.56	10.69	--
0.35	0.767	4.21	12.63	++
					Fa	CI	红豆杉醇(mg/kg)	huCBE11(g)	符号
0.40	0.611	4.92	14.76	+++
					0.45	0.559	5.71	17.13	+++
0.50	0.547	6.61	19.83	+++
					0.55	0.551	7.65	22.96	+++
0.60	0.563	8.89	26.66	+++
					0.65	0.580	10.38	31.16	+++
0.70	0.600	12.27	36.80	+++
					0.75	0.623	14.73	44.20	+++
0.80	0.651	18.17	54.53	+++
					0.85	0.687	23.43	70.30	+++
0.90	0.738	32.84	98.52	++
					0.95	0.829	56.63	169.91	++
0.99	1.070	188.80	566.46	±
					0.02	370000	0.39	1.16	-----
0.05	7036	0.77	2.32	-----
					0.10	310	1.33	3.99	-----
0.15	45	1.87	5.60	-----
					0.20	10	2.40	7.22	----
0.25	3.604	2.97	8.90	----
					0.30	1.569	3.56	10.69	---
0.35	0.905	4.21	12.63	±
					0.40	0.669	4.92	14.76	+++
0.45	0.584	5.71	17.13	+++

0.50	0.558	6.61	19.83	+++
					0.55	0.556	7.65	22.96	+++
0.60	0.565	8.89	26.66	+++
					0.65	0.581	10.38	31.16	+++
0.70	0.600	12.27	36.80	+++
					0.75	0.623	14.73	44.20	+++
0.80	0.651	18.17	54.53	+++
					0.85	0.687	23.43	70.30	+++
0.90	0.738	32.84	98.52	++
					0.95	0.829	56.63	169.91	++
0.99	1.070	188.80	566.46	±

本发明试验中用于评估药物加强作用的那些数据不限于固定比例的组合。统计学显著加强作用的检验需要计算每只动物的Fa。使用个体肿瘤体积(表45)计算每只动物的肿瘤体积的被抑制分值(Fa)(表46)。用下列公式计算出Fa：(对照组平均肿瘤体积-个体动物肿瘤体积)÷对照组平均肿瘤体积。联合用药的预期相加Fa是单独接受所述联合用药中的一种药物的两个组的平均Fa之和。如果治疗是简单相加，也计算了联合治疗的实际疗效与预期疗效之间的差(表46)。使用双尾单样本t-检验测定所述联合治疗是否产生了统计学上显著不同于预期相加值的平均Fa(表46)。

表45：个体肿瘤体积

										对照	红豆杉醇6.25	红豆杉醇12.5	hCBE 50	hCBE 500	hCBE 50+红豆杉醇6.25	hCBE 50+红豆杉醇12.5	hCBE 500+红豆杉醇6.25	hCBE 500+红豆杉醇12.5
	1302.1	616.0	1112.7	794.0	832.1	995.6	697.0	553.6	464.5
										2573.3	985.1	1554.9	448.6	541.3	564.3	231.8	501.0	297.4
	1410.2	1675.4	1104.0	1698.4	1059.8	953.2	111.8	647.5	624.6
										1348.2	1144.5	914.1	531.6	751.2	1868.1	463.3	401.3	483.8
	1020.3	1058.1	201.1	1322.2	1136.7	906.8	188.0	591.6	725.8
										1268.8	1425.5	1113.1	638.5	881.2	960.2	1271.4	923.2	494.1
	1321.9	796.7	1183.1	798.8	685.7	763.9	1221.9	613.8	664.2
										1318.2	860.4	1325.2	754.3	648.1	1801.1	983.6	726.4	488.5
	1629.6	730.5	1759.5	838.2	430.1	762.2	884.1	716.5	730.8
										1458.9	1159.9	1143.0	976.8	389.8	623.0	844.0	850.8	576.6
	1165.3
										781.6
	1540.0
										1196.5
	1198.1
										1279.7
	975.4
										1079.5
	1666.2
										1994.8
	平均值：	1376.4	1045.2	1141.1	880.1	735.6	1019.8	689.7	652.6										555.0

表46：个体的肿瘤体积被抑制分值

									红豆杉醇6.25	红豆杉醇12.5	hCBE 50	hCBE 500	hCBE 50+红豆杉醇6.25	hCBE 50+红豆杉醇12.5	hCBE 500+红豆杉醇6.25	hCBE 500+红豆杉醇12.5
	0.552	0.192	0.423	0.395	0.277	0.494	0.598	0.663
									0.284	-0.130	0.674	0.607	0.590	0.832	0.636	0.784
	-0.217	0.198	-0.234	0.230	0.307	0.919	0.530	0.546
									0.168	0.336	0.614	0.454	-0.357	0.663	0.708	0.649
	0.231	0.854	0.039	0.174	0.341	0.863	0.570	0.473
									-0.036	0.191	0.536	0.360	0.302	0.076	0.329	0.641
	0.421	0.140	0.420	0.502	0.445	0.112	0.554	0.517
									0.375	0.037	0.452	0.529	-0.309	0.285	0.472	0.645
	0.469	-0.278	0.391	0.688	0.446	0.358	0.479	0.469
									0.157	0.170	0.290	0.717	0.547	0.387	0.382	0.581
	平均值：	0.241	0.171	0.361	0.466	0.259	0.499	0.526									0.597
相加：													0.601	0.532	0.706	0.637
	差：					-0.342	-0.033	-0.180									-0.040
									双尾单样本T-检验
	T-值					-3.286	-0.340	-4.981									-1.291
DF：													9	9	9	9
	P-值：					0.0094	0.7418	0.0008									0.2289

综上所述，使用红豆杉醇加huCBE11的固定-比例联合治疗(0.333∶1)对WiDr人结肠直肠腺癌显现出了协同的抗肿瘤效力。

等同技术方案

本发明提供了包括LT-β-R激动剂的联合治疗。尽管本发明中已经对具体的实施方案进行了讨论，但是上述具体技术方案是为了说明而非限制本发明。在这些具体实施方案的基础上得到本发明的许多不同形式，对于本领域技术人员来说是显而易见的。本发明的完整范围应该根据所附权利要求确定，其中包括等同方案的完整范围以及具体实施方案及其变体。

本申请中提到的所有出版物及专利，包括下列那些对象在内，在此全文引入作为参考，如同每一单个出版物或专利专门且单独地指明在此引入作为参考。如有抵触，包括本申请中的任一定义，以本申请为准。

                       序列表

<110>比奥根艾迪克MA公司(Biogen Idec MA Inc.)

<120>淋巴毒素β受体药剂与化疗剂的联合用药

<130>BINA171PC

<150>60/435185

<151>2002-12-20

<160>14

<170>FastSEQ for Windows Version 4.0

<210>1

<211>2094

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HuCBE11/huBHAIO双特异性-1抗体的重链

<400>1

gaggtacaac tggtggagtc tgggggaggc ttagtgaagc ctggagggtc cctgaggctc 60

tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt gactattaca tgtattggtt tcgccaggcc 120

ccgggaaagg ggctggagtg ggtcgcaacc attagtgatg gtggtagtta cacctactat 180

ccagacagtg tgaaggggcg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa cagcctctac 240

ctgcagatga gcagcctgag ggctgaggac acagctgtgt attactgcgc aagagaggag 300

aatggtaact tttactactt tgactactgg ggccaaggga ccacggtcac cgtctcctca 360

gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 420

ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 480

tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 540

ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 600

tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agttgagccc 660

aaatcttgtg acaagactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 720

ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 780

gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 840

tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 900

agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 960

gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1020

aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgcgatgag 1080

ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 1140

gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1200

ttggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1260

cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1320

cagaagagcc tctccctgtc tcccggggga gggggtggat caggaggtgg cggctcccag 1380

gtccaactgg tgcagtctgg agctgaggtg aagaagcctg ggtcctcagt gaaggtgtcc 1440

tgcaaggctt ctggctacac tttcacaacc tactatttgc actgggtgag gcaggcccct 1500

ggacagggac ttgagtggat gggatggatt tatcctggaa atgttcatgc tcagtacaat 1560

gagaagttca agggcagggt cacaatcact gcagacaaat ccaccagcac agcctacatg 1620

gagctcagca gcctgaggtc tgaagatact gcggtctatt actgtgcaag atcctgggaa 1680

ggttttcctt actggggcca agggaccacg gtcaccgtct cctcaggtgg gggcggatct 1740

gggggcggcg gatccggtgg tggtggtagt gacattcaga tgacccagtc tcctagctcc 1800

ctgtccgcct cagtaggaga cagggtcacc atcacctgca aggccagtca gaatgtgggt 1860

attaatgtag cctggtatca acagaaacca gggaaggctc ctaaatcact gatttcctcg 1920

gcctcctacc ggtacagtgg agtcccttcc agattcagcg gcagtggatc tgggacagat 1980

ttcactctca ccatcagcag cctccagcct gaagacttcg caacctattt ctgtcagcaa 2040

tatgacacct atccattcac gttcggccag ggtaccaagg tggagatcaa atga       2094

<210>2

<211>697

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>HuCBE11/huBHAIO的重链

<400>2

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

            20                  25                  30

Tyr Met Tyr Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ala Thr Ile Ser Asp Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val

    50                  55                  60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Glu Glu Asn Gly Asn Phe Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

            100                 105                 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

        115                 120                 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

    130                 135                 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145                 150                 155                 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

                165                 170                 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

            180                 185                 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

        195                 200                 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

    210                 215                 220

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly

225                 230                 235                 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

                245                 250                 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

            260                 265                 270

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

        275                 280                 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

    290                 295                 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305                 310                 315                 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

                325                 330                 335

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

            340                 345                 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr LVs Asn Gln Val Ser Leu

        355                 360                 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

    370                 375                 380

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

385                 390                 395                 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

                405                 410                 415

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

            420                 425                 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

        435                 440                 445

Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val

    450                 455                 460

Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser

465                 470                 475                 480

Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr Tyr Leu His Trp Val

                485                 490                 495

Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Trp Ile Tyr pro

            500                 505                 510

Gly Asn Val His Ala Gln Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr

        515                 520                 525

Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser

    530                 535                 540

Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Trp Glu

545                 550                 555                 560

Gly Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly

                565                 570                 575

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile

            580                 585                 590

Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg

        595                 600                 605

Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Ile Asn Val Ala

    610                 615                 620

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile Ser Ser

625                 630                 635                 640

Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly

                645                 650                 655

Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp

            660                 665                 670

Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asp Thr Tyr Pro Phe Thr Phe

        675                 680                 685

Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

    690                 695

<210>3

<211>645

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HuCBE11/huBHAIO双特异性-1抗体的轻链

<400>3

gatatccaga tgacccagtc tccatcatcc ttgtctgcat cggtgggaga cagggtcact  60

atcacttgca aggcgggtca ggacattaaa agctatttaa gctggtacca gcagaaacca  120

gggaaagcgc ctaagcttct gatctattat gcaacaaggt tggcagatgg ggtcccatca  180

agattcagtg gcagtggatc tggtacagat tatactctaa ccatcagcag cctgcagcct  240

gaggatttcg caacttatta ctgtctacag catggtgaga gcccgtggac gttcggtgga  300

ggcaccaagc tggagatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca  360

tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat  420

cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag  480

gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg  540

ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc  600

ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag                  645

<210>4

<211>194

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>HucBE11/huBHAIO双特异性-1抗体的轻链

<400>4

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

 1               5                  10                  15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Gly Gln Asp Ile Lys Ser Tyr

            20                  25                  30

Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

        35                  40                  45

Tyr Tyr Ala Thr Arg Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

    50                  55                  60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65                  70                  75                  80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Gly Glu Ser Pro Trp

                85                  90                  95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

            100                 105                 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

        115                 120                 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

    130                 135                 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145                 150                 155                 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

                165                 170                 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly

            180                 185                 190

Glu Cys

<210>5

<211>2196

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>成熟的huCBE11/huBHAIO双特异性-2抗体的轻链

<400>5

gaggtacaac tggtggagtc tgggggaggc ttagtgaagc ctggagggtc cctgaggctc  60

tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt gactattaca tgtattggtt tcgccaggcc  120

ccgggaaagg ggctggagtg ggtcgcaacc attagtgatg gtggtagtta cacctactat  180

ccagacagtg tgaaggggcg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa cagcctctac  240

ctgcagatga gcagcctgag ggctgaggac acagctgtgt attactgcgc aagagaggag  300

aatggtaact tttactactt tgactactgg ggccaaggga ccacggtcac cgtctcctct  360

gggggcgggg ggtccggggg aggcgggtcg ggaggtggcg gaagtgatat ccagatgacc  420

cagtctccat catccttgtc tgcatcggtg ggagacaggg tcactatcac ttgcaaggcg  480

ggtcaggaca ttaaaagcta tttaagctgg taccagcaga aaccagggaa agcgcctaag  540

cttctgatct attatgcaac aaggttggca gatggggtcc catcaagatt cagtggcagt  600

ggatctggta cagattatac tctaaccatc agcagcctgc agcctgagga tttcgcaact  660

tattactgtc tacagcatgg tgagagcccg tggacgttcg gtggaggcac caagctggag  720

atcaaagggg gtggtggttc aggaggtgga ggatccgagc ccaaatctag tgacaagact  780

cacacatgcc caccgtgccc agcacctgaa ctcctggggg gaccgtcagt cttcctcttc 840

cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac atgcgtggtg 900

gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag 960

gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag gagcagtaca acagcacgta ccgtgtggtc 1020

agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg ctgaatggca aggagtacaa gtgcaaggtc 1080

tccaacaaag ccctcccagc ccccatcgag aaaaccatct ccaaagccaa agggcagccc 1140

cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca tcccgcgatg agctgaccaa gaaccaggtc 1200

agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc 1260

aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc acgcctcccg tgttggactc cgacggctCC 1320

ttcttcctct acagcaagct caccgtggac aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc 1380

tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca cgcagaagag cctctccctg 1440

tctcccgggg gagggggtgg atcaggaggt ggcggctccc aggtccaact ggtgcagtct 1500

ggagctgagg tgaagaagcc tgggtcctca gtgaaggtgt cctgcaaggc ttctggctac 1560

actttcacaa cctactattt gcactgggtg aggcaggccc ctggacaggg acttgagtgg 1620

atgggatgga tttatcctgg aaatgttcat gctcagtaca atgagaagtt caagggcagg 1680

gtcacaatca ctgcagacaa atccaccagc acagcctaca tggagctcag cagcctgagg 1740

tctgaagata ctgcggtcta ttactgtgca agatcctggg aaggttttcc ttactggggc 1800

caagggacca cggtcaccgt ctcctcaggt gggggcggat ctgggggcgg cggatccggt 1860

ggtggtggta gtgacattca gatgacccag tctcctagct ccctgtccgc ctcagtagga 1920

gacagggtca ccatcacctg caaggccagt cagaatgtgg gtattaatgt agcctggtat 1980

caacagaaac cagggaaggc tcctaaatca ctgatttcct cggcctccta ccggtacagt 2040

ggagtccctt ccagattcag cggcagtgga tctgggacag atttcactct caccatcagc 2100

agcctccagc ctgaagactt cgcaacctat ttctgtcagc aatatgacac ctatccattc 2160

acgttcggcc agggtaccaa ggtggagatc aaatga                           2196

<210>6

<211>731

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>成熟的huCBE11/huBHAIO双特异性-2抗体

<400>6

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

            20                  25                  30

Tyr Met Tyr Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ala Thr Ile Ser Asp Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val

    50                  55                  60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Glu Glu Asn Gly Asn Phe Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

            100                 105                 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

        115                 120                 125

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser

    130                 135                 140

Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala

145                 150                 155                 160

Gly Gln Asp Ile Lys Ser Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly

                165                 170                 175

Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Thr Arg Leu Ala Asp Gly

            180                 185                 190

Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu

        195                 200                 205

Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu

    210                 215                 220

Gln His Gly Glu Ser Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu

225                 230                 235                 240

Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu  Pro Lys Ser

                245                 250                 255

Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu

            260                 265                 270

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

        275                 280                 285

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

    290                 295                 300

His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

305                 310                 315                 320

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr

                325                 330                 335

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

            340                 345                 350

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro

        355                 360                 365

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

    370                 375                 380

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val

385                 390                 395                 400

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

                405                 4l0                 415

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

            420                 425                 430

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr

        435                 440                 445

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

    450                 455                 460

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

465                 470                 475                 480

Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln

                485                 490                 495

Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser Ser Val Lys

            500                 505                 510

Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr Tyr Leu His

        515                 520                 525

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Trp Ile

    530                 535                 540

Tyr Pro Gly Asn Val His Ala Gln Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Arg

545                 550                 555                 560

Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu

                565                 570                 575

Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser

            580                 585                 590

Trp Glu Gly Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser

        595                 600                 605

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

    610                 615                 620

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

625                 630                 635                 640

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Ile Asn

                645                 650                 655

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile

            660                 665                 670

Ser Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

        675                 680                 685

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

    690                 695                 700

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asp Thr Tyr Pro Phe

705                 710                 715                 720

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

                725                 730

<210>7

<211>2106

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>huCBE11单特异性-1抗体

<400>7

gaggtacaac tggtggagtc tgggggaggc ttagtgaagc ctggagggtc cctgaggctc  60

tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt gactattaca tgtattggtt tcgccaggcc  120

ccgggaaagg ggctggagtg ggtcgcaacc attagtgatg gtggtagtta cacctactat  180

ccagacagtg tgaaggggcg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa cagcctctac  240

ctgcagatga gcagcctgag ggctgaggac acagctgtgt attactgcgc aagagaggag  300

aatggtaact tttactactt tgactactgg ggccaaggga ccacggtcac cgtctcctca  360

gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg  420

ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg  480

tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca  540

ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc  600

tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agttgagccc  660

aaatcttgtg acaagactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga  720

ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct  780

gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg  840

tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac  900

agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag  960

gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc  1020

aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgcgatgag  1080

ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc  1140

gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg  1200

ttggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg  1260

cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg  1320

cagaagagcc tctccctgtc tcccgggggg ggaggtggat caggaggtgg cggctccgag  1380

gtacaactgg tggagtctgg gggaggctta gtgaagcctg gagggtccct gaggctctcc  1440

tgtgcagcct ctggattcac tttcagtgac tattacatgt attggtttcg ccaggcaccg  1500

ggaaaggggc tggagtgggt cgcaaccatt agtgatggtg gtagttacac ctactatcca  1560

gacagtgtga aggggcgatt caccatctcc agagacaatg ccaagaacag cctctacctg  1620

cagatgagca gcctgagggc tgaggacaca gctgtgtatt actgcgcaag agaggagaat  1680

ggtaactttt actactttga ctactggggc caagggacca cggtcaccgt ctcctctggg  1740

ggcggggggt ccgggggagg cgggtcggga ggtggcggaa gtgatatcca gatgacccag  1800

tctccatcat ccttgtctgc atcggtggga gacagggtca ctatcacttg caaggcgggt  1860

caggacatta aaagctattt aagctggtac cagcagaaac cagggaaagc gcctaagctt  1920

ctgatctatt atgcaacaag gttggcagat ggggtcccat caagattcag tggcagtgga  1980

tctggtacag attatactct aaccatcagc agcctgcagc ctgaggattt cgcaacttat  2040

tactgtctac agcatggtga gagcccgtgg acgttcggtg gaggcaccaa gctggagatc  2100

aaatga                                                             2106

<210>8

<211>701

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>hucBE11单特异性-1抗体

<400>8

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

            20                  25                  30

Tyr Met Tyr Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ala Thr Ile Ser Asp Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val

    50                  55                  60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Glu Glu Asn Gly Asn Phe Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

            100                 105                 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

        115                 120                 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

    130                 135                 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145                 150                 155                 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

                165                 170                 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

            180                 185                 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

        195                 200                 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

    210                 215                 220

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly

225                 230                 235                 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

                245                 250                 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

            260                 265                 270

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

        275                 280                 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

    290                 295                 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305                 310                 315                 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

                325                 330                 335

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

            340                 345                 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

        355                 360                 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

    370                 375                 380

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

385                 390                 395                 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

                405                 410                 415

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

            420                 425                 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

        435                 440                 445

Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val

    450                 455                 460

Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser

465                 470                 475                 480

Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr Met Tyr Trp Phe

                485                 490                 495

Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Thr Ile Ser Asp

            500                 505                 510

Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr

        515                 520                 525

Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Ser Ser

    530                 535                 540

Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Glu Asn

545                 550                 555                 560

Gly Asn Phe Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr

                565                 570                 575

Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

            580                 585                 590

Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser

        595                 600                 605

Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Gly Gln Asp Ile Lys

    610                 615                 620

Ser Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu

625                 630                 635                 640

Leu Ile Tyr Tyr Ala Thr Arg Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe

                645                 650                 655

Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu

            660                 665                 670

Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Gly Glu Ser

        675                 680                 685

Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

    690                 695                 700

<210>9

<211>2208

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>huCBE11单特异性-2抗体

<400>9

gaggtacaac tggtggagtc tgggggaggc ttagtgaagc ctggagggtc cctgaggctc  60

tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt gactattaca tgtattggtt tcgccaggcc  120

ccgggaaagg ggctggagtg ggtcgcaacc attagtgatg gtggtagtta cacctactat  180

ccagacagtg tgaaggggcg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa cagcctctac  240

ctgcagatga gcagcctgag ggctgaggac acagctgtgt attactgcgc aagagaggag  300

aatggtaact tttactactt tgactactgg ggccaaggga ccacggtcac cgtctcctct  360

gggggcgggg ggtccggggg aggcgggtcg ggaggtggcg gaagtgatat ccagatgacc  420

cagtctccat catccttgtc tgcatcggtg ggagacaggg tcactatcac ttgcaaggcg  480

ggtcaggaca ttaaaagcta tttaagctgg taccagcaga aaccagggaa agcgcctaag  540

cttctgatct attatgcaac aaggttggca gatggggtcc catcaagatt cagtggcagt  600

ggatctggta cagattatac tctaaccatc agcagcctgc agcctgagga tttcgcaact  660

tattactgtc tacagcatgg tgagagcccg tggacgttcg gtggaggcac caagctggag  720

atcaaagggg gtggtggttc aggaggtgga ggatccgagc ccaaatctag tgacaagact  780

cacacatgcc caccgtgccc agcacctgaa ctcctggggg gaccgtcagt cttcctcttc  840

cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac atgcgtggtg  900

gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag  960

gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag gagcagtaca acagcacgta ccgtgtggtc  1020

agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg ctgaatggca aggagtacaa gtgcaaggtc  1080

tccaacaaag ccctcccagc ccccatcgag aaaaccatct ccaaagccaa agggcagccc  1140

cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca tcccgcgatg agctgaccaa gaaccaggtc  1200

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ttcttcctct acagcaagct caccgtggac aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc  1380

tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca cgcagaagag cctctccctg  1440

tctcccgggg ggggaggtgg atcaggaggt ggcggctccg aggtacaact ggtggagtct  1500

gggggaggct tagtgaagcc tggagggtcc ctgaggctct cctgtgcagc ctctggattc  1560

actttcagtg actattacat gtattggttt cgccaggcac cgggaaaggg gctggagtgg  1620

gtcgcaacca ttagtgatgg tggtagttac acctactatc cagacagtgt gaaggggcga  1680

ttcaccatct ccagagacaa tgccaagaac agcctctacc tgcagatgag cagcctgagg  1740

gctgaggaca cagctgtgta ttactgcgca agagaggaga atggtaactt ttactacttt  1800

gactactggg gccaagggac cacggtcacc gtctcctctg ggggcggggg gtccggggga  1860

ggcgggtcgg gaggtggcgg aagtgatatc cagatgaccc agtctccatc atccttgtct  1920

gcatcggtgg gagacagggt cactatcact tgcaaggcgg gtcaggacat taaaagctat  1980

ttaagctggt accagcagaa accagggaaa gcgcctaagc ttctgatcta ttatgcaaca  2040

aggttggcag atggggtccc atcaagattc agtggcagtg gatctggtac agattatact  2100

ctaaccatca gcagcctgca gcctgaggat ttcgcaactt attactgtct acagcatggt  2160

gagagcccgt ggacgttcgg tggaggcacc aagctggaga tcaaatga               2208

<210>10

<211>735

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>huCBE11单特异性-2抗体

<400>10

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

            20                  25                  30

Tyr Met Tyr Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ala Thr Ile Ser Asp Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val

    50                  55                  60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Glu Glu Asn Gly Asn Phe Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

            100                 105                 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

        115                 120                 125

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser

    130                 135                 140

Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala

145                 150                 155                 160

Gly Gln Asp Ile Lys Ser Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly

                165                 170                 175

Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Thr Arg Leu Ala Asp Gly

            180                 185                 190

Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu

        195                 200                 205

Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu

    210                 215                 220

Gln His Gly Glu Ser Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu

225                 230                 235                 240

Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser

                245                 250                 255

Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu

            260                 265                 270

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

        275                 280                 285

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

    290                 295                 300

His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

305                 310                 315                 320

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr

                325                 330                 335

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

            340                 345                 350

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro

        355                 360                 365

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

    370                 375                 380

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val

385                 390                 395                 400

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

                405                 410                 415

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

            420                 425                 430

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr

        435                 440                 445

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

    450                 455                 460

Met His Glu Ala Leu His Asr His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

465                 470                 475                 480

Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln

                485                 490                 495

Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Arg

            500                 505                 510

Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr Met Tyr

        515                 520                 525

Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Thr Ile

    530                 535                 540

Ser Asp Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg

545                 550                 555                 560

Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met

                565                 570                 575

Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu

            580                 585                 590

Glu Asn Gly Asn Phe Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

        595                 600                 605

Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

    610                 615                 620

Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser

625                 630                 635                 640

Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Gly Gln Asp

                645                 650                 655

Ile Lys Ser Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro

            660                 665                 670

Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Thr Arg Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser

        675                 680                 685

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser

    690                 695                 700

Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Gly

705                 710                 715                 720

Glu Ser Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

                725                 730                 735

<210>11

<211>1407

<212>DNA

<213>H人工序列

<220>

<223>成熟的五聚CBE11的重链

<400>11

gaggtacaac tggtggagtc tgggggaggc ttagtgaagc ctggagggtc cctgaaactc  60

tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt gactattaca tgtattggtt tcgccagact  120

ccggaaaaga ggctggagtg ggtcgcaacc attagtgatg gtggtagtta cacctactat  180

ccagacagtg tgaaggggcg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa caacctgtac  240

ctgcaaatga gcagtctgaa gtctgaggac acagccatgt attactgtgt aagagaggag  300

aatggtaact tttactactt tgactactgg ggccaaggga ccacggtcac cgtctcctca  360

gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg  420

ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg  480

tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca  540

ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc  600

tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agttgagccc  660

aaatcttgtg acaagactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga  720

ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct  780

gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg  840

tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac  900

agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag  960

gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc  1020

aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggatgag  1080

ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc  1140

gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg  1200

ttggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg  1260

cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg  1320

cagaagagcc tctccctgtc taccgggaaa cccaccctgt acaacgtgtc cctggtcatg  1380

tccgacacag ctggcacctg ctactga                                      1407

<210>12

<211>468

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>成熟的五聚CBE11的重链

<400>12

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

            20                  25                  30

Tyr Met Tyr Trp Phe Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ala Thr Ile Ser Asp Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val

    50                  55                  60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Asn Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Val Arg Glu Glu Asn Gly Asn Phe Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

            100                 105                 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

        115                 120                 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

    130                 135                 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145                 150                 155                 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

                165                 170                 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

            180                 185                 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

        195                 200                 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

    210                 215                 220

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly

225                 230                 235                 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

                245                 250                 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

            260                 265                 270

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

        275                 280                 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

    290                 295                 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305                 310                 315                 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

                325                 330                 335

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln  Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

            340                 345                 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

        355                 360                 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

    370                 375                 380

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

385                 390                 395                 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

                405                 410                 415

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

            420                 425                 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Thr

        435                 440                 445

Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser Asp Thr Ala

    450                 455                 460

Gly Thr Cys Tyr

465

<210>13

<211>645

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>成熟的嵌合CBE11的轻链

<400>13

gatattaaga tgacccagtc tccatcctcc atgtatgcat cgctgggaga gagagtcact  60

atcacttgca aggcgggtca ggacattaaa agctatttaa gctggtacca gcagaaacca  120

tggaaatctc ctaagatcct gatctattat gcaacaaggt tggcagatgg ggtcccatca  180

agattcagtg gcagtggatc tgggcaagat tattctctaa ccatcagcag cctggagtct  240

gacgatacag caacttatta ctgtctacag catggtgaga gcccgtggac gttcggtgga  300

ggcaccaagc tggagatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca  360

tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat  420

cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480

gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540

ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600

ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag                 645

<210>14

<211>214

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>成熟的嵌合CBE11的轻链

<400>14

Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly

 1               5                  10                  15

Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Gly Gln Asp Ile Lys Ser Tyr

            20                  25                  30

Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Trp Lys Ser Pro Lys Ile Leu Ile

        35                  40                  45

Tyr Tyr Ala Thr Arg Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

    50                  55                  60

Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser

65                  70                  75                  80

Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Gly Glu Ser Pro Trp

                85                  90                  95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

            100                 105                 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

        115                 120                 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Lau Asr Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

    130                 135                 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145                 150                 155                 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

                165                 170                 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

            180                 185                 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

        195                 200                 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

    210

Claims (32)

1.一种用于抑制肿瘤体积的方法，该方法包括施用有效量的淋巴毒素-β受体(LT-β-R)激动剂和有效量的至少一种化疗剂，其中所述的LT-β-R激动剂和化疗剂的施用导致对肿瘤的超-相加抑制。

2.一种用于抑制肿瘤体积方法，该方法包括施用有效量的抗-淋巴毒素-β受体(LT-β-R)抗体和有效量的至少一种化疗剂，其中所述的抗-LT-β-R抗体和化疗剂的施用导致对肿瘤的超-相加抑制。

3.一种药物组合物，其含有有效量的LT-β-R激动剂、有效量的至少一种化疗剂和可药用的载体，将该药物组合物施用给受试者导致超-相加的肿瘤抑制效果。

4.有效量的淋巴毒素-β受体(LT-β-R)激动剂和有效量的化疗剂在制备用于治疗癌症的药物中的用途，该药物施用给受试者时导致对肿瘤的超-相加抑制作用。

5.上述权利要求中任一项所述的方法、用途或组合物，其中所述对肿瘤的超-相加抑制作用是协同性的。

6.权利要求5所述的方法、用途或组合物，其中所述对肿瘤的超-相加抑制作用具有小于1.00的联用指数。

7.上述权利要求中任一项所述的方法、用途或组合物，其中所述对肿瘤的超-相加抑制作用被加强的。

8.上述权利要求中任一项所述的方法、用途或组合物，其中所述对肿瘤的超-相加抑制作用具有小于0.05的P-值。

9.权利要求1或3-8中任一项所述的方法、用途或组合物，其中所述的LT-β-R激动剂是抗LT-β-R抗体。

10.上述权利要求中任一项所述的方法、用途或组合物，其中所述抗LT-β-R抗体是单克隆抗体。

11.权利要求10所述的方法，其中所述的单克隆抗体选自：BKA11、CDH10、BCG6、AGH1、BDA8、CBE11或BHA10。

12.上述权利要求中任一项所述的方法、用途或组合物，其中所述抗LT-β-R抗体是人源化抗体。

13.权利要求12所述的方法、用途或组合物，其中所述的人源化抗体选自：huCBE11或huBHA10。

14.权利要求13所述的方法、用途或组合物，其中所述的人源化抗体是huCBE11。

15.上述权利要求中任一项所述的方法、用途或组合物，其中所述的抗LT-β-R抗体是多价抗LT-β-R抗体。

16.权利要求15所述的方法、用途或组合物，其中所述的多价抗LT-β-R抗体构建体是多特异性的。

17.上述权利要求中任一项所述的方法、用途或组合物，其中所述的抗体与所述化疗剂偶联在一起。

18.上述权利要求中任一项所述的方法、用途或组合物，其中所述的化疗剂是干扰DNA合成的药剂。

19.权利要求18所述的方法，其中所述的干扰DNA合成的药剂是核苷类似物化合物。

20.权利要求19所述的方法，其中所述的核苷类似物化合物是吉西他滨。

21.权利要求19所述的方法，其中所述的干扰DNA合成的药剂是蒽环类抗生素。

22.权利要求21所述的方法，其中所述的蒽环类抗生素是阿霉素。

23.上述权利要求中任一项所述的方法、用途或组合物，其中所述的化疗剂是拓扑异构酶I抑制剂。

24.权利要求22所述的方法，其中所述的拓扑异构酶I抑制剂是Camptosar。

25.上述权利要求中任一项所述的方法、用途或组合物，其中所述的化疗剂是烷化剂。

26.权利要求25所述的方法，其中所述的烷化剂是铂化合物。

27.权利要求26所述的方法，其中所述的铂化合物选自卡铂和顺氯氨铂组成的组。

28.权利要求27所述的方法，其中所述的铂化合物是顺氯氨铂。

29.上述权利要求中任一项所述的方法、用途或组合物，其中所述的化疗剂是植物碱。

30.权利要求29所述的方法，其中所述的植物碱是紫杉烷。

31.权利要求30所述的方法，其中所述的紫杉烷是红豆杉醇。

32.上述权利要求中任一项所述的方法、用途或组合物，其中所述的化疗剂选自：干扰DNA合成的药剂、拓扑异构酶I抑制剂、铂化合物或紫杉烷。

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