CN1740200A

CN1740200A - 抑制子宫颈癌的融合蛋白

Info

Publication number: CN1740200A
Application number: CN 200410064182
Authority: CN
Inventors: 章修纲; 廖朝暐; 郑文芳
Original assignee: HealthBanks Biotech Co Ltd
Current assignee: Biocybernetic Gene Vaccine Co., Ltd.
Priority date: 2004-08-24
Filing date: 2004-08-24
Publication date: 2006-03-01
Anticipated expiration: 2024-08-24
Also published as: CN100540567C

Abstract

本发明是有关于一种抑制子宫颈癌的融合蛋白，包括：一段人类乳突状病毒16型E7蛋白胜太片段；一段具有移位功能的胜太片段；以及一段具羧基终端部分的胜太片段；本发明还揭示一种与E7胜太结合的抗体组成物，其中该E7胜太序列为SEQ.ID.NO.1。

Description

抑制子宫颈癌的融合蛋白

技术领域

本发明是关于一种融合蛋白，尤指一种用于抑制子宫颈癌的融合蛋白。

背景技术

在台湾，子宫颈癌发生率一向高居妇女癌症首位。一般子宫颈上皮变异或是早期子宫颈癌发生时，几乎没有任何症状，虽然早期治疗愈后效果良好，但预防胜于治疗，因此相关学者皆以找寻能有效预防子宫颈癌的方法为目的。

目前已证实人类乳突病毒(human papillomavirus，HPV)与子宫颈癌的形成息息相关，是子宫颈癌最主要的致病因子。HPV的某些亚型(如16、18型)的DNA序列已在75％～100％的子宫颈癌病例的癌细胞中发现，但其致癌机制尚未完全清楚。近来发现HPV的16、18和31高危险亚型的早期病毒基因产物E6和E7蛋白，极易与Rb和p53基因的产物结合并中和其抑制细胞生长的功能，这现象说明了HPV在致癌时不是单独作用的，同时也需要环境因素的协同；且E7蛋白在子宫颈癌细胞和癌组织细胞内持续表现，并在维持转化组织恶性表型的过程中扮演着重要的角色。

肿瘤免疫反应以细胞免疫为主，体液免疫为辅。参加细胞免疫的反应细胞主要有细胞毒性T细胞(cytotoxic T lymphocytes，CTL)、自然杀手细胞(NK)和巨噬细胞。CTL被细胞介白素2(IL-2)启动后，藉由可被T细胞识别，位于抗原呈现状态的肿瘤细胞上的组织兼容性复合体(majorhistocompatibility compolex，MHC)第一型分子的出现，而释放某些溶解酶，将肿瘤细胞杀灭，并抑制肿瘤细胞的增殖。CTL的保护作用在对抗如HPV导致的肿瘤时特别明显，因此，如能通过增加HPV抗原与MHCI型分子的复合体出现于肿瘤细胞的途径来诱发属于具备HPV抗原特异性的CTL如CD8⁺T细胞的增殖，则有可能直接针对抑制肿瘤细胞来进行免疫预防或治疗。

已有研究证实子宫颈癌可通过施打疫苗来事先预防，而由于与形成子宫颈癌息息相关的HPV病毒结构中，E7蛋白常被发现于癌症病灶组织或是癌化前损伤的组织，因此具有做为疫苗发展标的的潜力；此外，目前发展中的DNA疫苗虽然具有长效特性，但是其高成本，高危险性(病毒本身容易被诱发突变)的考量仍是限制其发展的主因；然而，在应用E7蛋白做为子宫颈癌的基因治疗时，常由于HPV病毒E7蛋白的弱抗原特性，而无法诱发良好的免疫反应，进而无法发生所预期的预防或治疗的功效。

一般而言，肿瘤的特异性抗原必须在宿主体内经过处理后与MHC-I型分子结合，才能被呈现到细胞表面以启动CD8⁺T淋巴细胞。有研究显示子宫颈癌组织中含有HPV16 E7基因，但缺乏能够呈现出E7基因编码抗原特定的MHC-I型分子的特定复合体于抗原呈现细胞表面，使得HPV16 E7蛋白在宿主体内不被呈现而逃过宿主的免疫监视。此外，一般做为疫苗的蛋白质在进入生体中时，多会被细胞认为是外源抗原，而在还没发挥作用的前即分解，而减低了蛋白质疫苗的效果，因此必须发展一种传输系统可以有效的将蛋白质抗原完整送达细胞质内部，同时又能诱发生体产生有效性细胞免疫反应的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种可针对特定癌症诱发细胞免疫效果的融合蛋白，尤其是不易诱发免疫反应的弱抗原病毒，本发明可由有效传输系统以及激发细胞免疫的过程达到抑制癌化细胞增殖的目的，而降低癌化程度甚至达到预防癌症的功效。

本发明融合蛋白可于接受融合蛋白的生体细胞中诱生CTL及抗体的保护作用，进而促使被感染的细胞由于抗原的呈现而被歼灭；本发明亦提供一种含有抑制子宫颈癌融合蛋白的医药组合物，以期于细胞发生癌变的前抑制癌化细胞增殖，达到抑制癌症发生的目的。

本发明提供的抑制子宫颈癌的融合蛋白，T细胞疫苗或含该融合蛋白的医药组合物，包括：一段人类乳突状病毒16型(human papillomavirus，HPV，type 16)的E7蛋白胜太片段；一段具有移位功能的胜太片段；以及一段具羧基终端部分的胜太片段。

于本发明融合蛋白中，其中人类乳突状病毒16型的E7蛋白胜太片段的核苷酸序列为SEQ.ID.NO.1；适用的移位胜太片段可选自常用的任何一种具移位功能的胜太片段，较佳是来自假单胞菌属外毒素(pseudomonasaeruginosa exotoxin A)的一部分；而羧基终端部分的胜太片段亦可选自常用的任何一种具羧基终端的序列，较佳来自假单胞菌属外毒素的一部分，且，该羧基终端部分的胜太片段包括KDEL的胺基酸序列，其核苷酸序列为SEQ.ID.NO.2。

本发明较佳的融合蛋白胺基酸序列为SEQ.ID.NO.3。

本发明还提供一种与E7胜太结合的抗体组成物，其中该E7胜太序列为SEQ.ID.NO.1；利用本发明抗体组成物，可侦测生体内E7胜太片段的出现，并以抗原抗体方式键结的。

本发明利用细菌性毒素的特性，使带有蛋白质的细菌毒素与标的细胞(抗原呈现细胞)的细胞膜表面接受器接合，使蛋白质进入细胞，并发挥细菌毒素自然的位移特性，再将蛋白质带至细胞质；此时，位于细胞质的外源蛋白质可被产制成小胜太，并接着与组织兼容性复合体II或I型分子(MhcII or MhcI)进行结合，而被呈现于抗原呈现细胞的外部，与MhcII或I结合者再由CD4⁺T或CD8⁺T细胞辨识，而诱发一连串的免疫反应，使本发明融合蛋白达到免疫提升的功效。

本发明的医药组合物可包括根据技艺中已知的技术使用适合的佐剂；分散剂或保湿剂(如Tween80)以及悬浮剂调配无菌注射剂，例如，无菌注射水溶液或含油性悬浮液。无菌注射制剂亦可用于无毒性注射的稀释剂或溶剂中的无菌注射液或悬浮液，例如，于1，3-丁二醇中的溶液。在可使用的可接受的载体与溶剂中，有甘露醇、水、Ringer溶液、与等张氯化钠溶液。此外，常用的使用灭菌、固定油类作为溶剂或悬浮介质(例如合成的单酸或二酸甘油酯类)。脂肪酸(例如油酸与其甘油酯衍生物)，以及天然医药上可接受的油类(例如橄榄油或蓖麻油，尤其是其多氧乙基化的型态)，可使用于可注射制剂。此等油溶液或悬浮液亦可含有长链醇稀释剂或分散剂、或羧甲基纤维素或类似的分散剂。其它一般使用的界面活性剂例如Tweens或Spans或其它类似的乳化剂或生体可用率增强剂(一般用于制造医药上可接受的固体、液体、或其它剂量形式)亦可用于调配的目的。

口服投药用的组合物可为任何口服上可接受的剂量形式，包含但不限于胶囊、锭、乳剂、及水性悬浮液、分散剂、与溶液。在口服用途的锭剂的例中，一般使用的载体包含乳醣及玉米淀粉。一般亦常添加润滑剂，例如，硬脂酸镁。对于以胶囊形式口服投药而言，可使用的稀释剂包含乳糖及玉米淀粉。当口服投药水性分散剂或乳剂时，可使活性成份与乳化剂或悬浮剂组合悬浮或分散于油相中。若需要，可添加特定的甜味剂、风味剂、或着色剂。鼻腔喷剂或吸入剂组合物可依据医药配方的技艺中习知的技术制备，及可制成生理食盐水，使用苯甲醇或其它适合的防腐剂、增加生体可用率的吸收促进剂、氟碳化合物、及/或其它技艺中已知的溶解剂或分散剂。含吲哚化合物的组合物亦可以直肠投药的栓剂形式投药。

医药组合物中的载体必须为″可接受″，意为与配方中的活性成份相容(及较佳地是能使配方安定)及对接受治疗的病患无害。其它载体的实例包含胶态二氧化硅、硬脂酸镁、纤维素、十二烷基硫酸钠、及D&C黄色10号。

附图说明

图1为本发明实施例二质体构筑的流程图。

图2为本发明实施例二的肿瘤生长试验结果图。

图3为本发明实施例六的E7专一性CD8⁺T细胞前驱物的诱发结果图。

图4为本发明实施例七的E7专一性抗体的检测结果图。

具体实施方式

实施例一、E7核苷酸以及KDEL序的列合成

自美国国立生物技术数据中心(NCBI)数据库中找到HPV16 E7蛋白序列(NC_001526，SEQ.ID.NO.3)，共98个胺基酸。

利用台湾专利申请案号92126644所公开的方法，使HPV16E7蛋白可由大肠杆菌系统大量表现出来；改质的重点主要在将野生病毒株的核苷酸片段，以在不影响其原本表现出的胺基酸，而又能有效的在大肠杆菌宿主系统中表现的状况下，进行单一核苷酸的改质，改质后核苷酸序列为SEQ.ID.NO.1。

本实施例合成的核苷酸片段，分别利用共8对引子，以聚合酶连锁反应(polymerase chain reaction，PCR)进行核苷酸片段的合成，所有引子对的序列请见表1，表中有底线的序列表示将与特定的片段发生互补。

首先利用无DNA模板的聚合方式，只利用F1以及R1引子进行核苷酸片段，其中在此二引子的3’端部分各有15个碱基是设计为彼此互补的结合，再经由聚合酵素的读写及补足成为一条双股的DNA模板聚合产物；完成第一次PCR后，取1μl的聚合产物作为第二次PCR的模板DNA，同时加入F1以及R2引子各4μl，连同所需的dNTPs、反应试剂以及Pfu聚合酶等，开始进行第二次PCR；接着依照相同方式共进行8次的PCR，合成出改质后的核苷酸序列(SEQ.ID.NO.1)。

以同样的方式聚合出一段作为讯息胜太的KDEL序列，其引子序列如表1中K3F与K3R；合成出的KDEL核苷酸序列为SEQ.ID.NO.2。

表1、引子对序列表

序列	引子代号	碱基序列
序列	引子代号	碱基序列	E7	F1	5’-AGAATTC ATG CAC GGT GAC ACC CCG ACC CTGCAC GAA TAC ATG CTG GAC CTC-3’
R1	5’-C GTA GCA GTA CAG GTC GGT GGT TTC CGG CTGGAG GTC CAG CAT GTA-3’			F1
R1		R2		5’-TTC GTC TTC TTC TTC GGA GGA GTC GTT CAGCTG TT C GTA GCA GTA CAG GTC-3’
R3	5’-GTC CGG TTC AGC CTG ACC AGC CGG ACC GTCGAT TTC GTC TTC TTC TTC-3’	R2
R3		R4		5’-T GCA GCA GAA GGT AAC GAT GTT GTA GTG AGCAGC GTC CGG TTC AGC CTG-3’

	R5	5’-CTG AAC GCA CAG ACG CAG GGT GGA GTC GCATT T GCA GCA GAA GGT AAC-3’
	R5		R6	5’-TTC CAG GGT ACG GAT GTC AAC GTG GGT GGACTG AAC GCA CAG ACG-3’
	R7	5’-AAC GAT ACC CAG GGT ACC CAT CAG CAG GTCTTC CAG GGT ACG GAT-3’	R6
	R7		R8	5’-TTT GAA TTC CGG TTT CTG GGA GCA GAT CGGGCA AAC GAT ACC CAG GGT AC-3’
	KDEL	K3F	R8		5’-AGAATTCGTCGAC TAC CTC AAA AAA GAC GAA CTG AGA GAT GAA CTG-3’
K3R		K3F	5’-GTG GTG GTG CTC GAG TCA TTA CAG TTC GTCTTT CAG TTC ATC TCT CAG TT-3’

实施例二、载体构筑

将实施例一中完成聚合反应后所获得的E7产物，利用5％聚丙烯醯氨(polyacrylamide)琼酯胶体进行分离，并以产物分子量为依据纯化萃取出标的产物；取pET或pPE(ΔIII)载体(J.R.Chen，C.W.Liao，S，J.T.Mao，and C.N.Weng，Vet.Microbiol.80(2001)347-357)，利用限制酶同时处理二载体以及纯化后E7片段，再同样以5％聚丙烯醯氨琼酯胶体进行分离纯化，取0.3kb含有E7序列的片段，利用T4ligase将E7片段与载体建构为一段长度为7.84kb，含绿脓杆菌外毒素A不含酵素毒性部位的PE(ΔIII)基因，以及含E7基因的融合蛋白PE(ΔIII)-E7的质体pPE(ΔIII)-E7，以及一段长度为3.83kb，含E7及pET23a的pE7质体。

由K3-FK3-R引子所制得的PCR DNA以利用限制酶切割及纯化后后，接合至pET23a的Sal1-Xho1位置可以获得一段长度为3.78kb，含n’-KDELRDELKDEL多生polypeptide基因的pKDEL3质体。

以同样方式，以限制酶Sal1及Pst1在pKDEL3质体中将一段长度为1.47kb含KDEL序列切出后接合至以限制酶Xho11及Pst1切割的6.5kb的PE(ΔIII)-E7质体DNA上，完成一8.0kb大小含有融合蛋白PE(ΔIII)-E7-KDEL3基因的质体pPE(DIII)-E7-K3。上述质体构筑流程图请参见图1。

将上述完成构筑的质体转形(transform)入大肠杆菌JM108菌株中保存。

实施例三、蛋白质纯化

将上述完成构筑的质体转形(transform)入大肠杆菌BL21(DE3)pLys菌株中，接着将大肠杆菌培养于含有200μg/ml抗生素ampicillin的200ml LB培养液中，直到菌液浓度OD550达到0.3；接着加入1mM IPTG(isopropylthio-β-D-galactoside，Promege，USA)，继续培养2小时，将所生长出的细胞进行离心收集；以冷冻解冻反复操作的方式使带有目标蛋白质的细胞的细胞膜结构略松，此时加入溶解液10ml(含有0.3mg/ml溶菌酶，1mM的PMSF以及0.06mg/ml的DNaseI)，置于室温下20分钟，接着再加入1ml 10％TritonX-100，置于室温下10分钟，的后以12000xg离心10分钟收集蛋白质；再分别以与1M与2M的urea进行清洗；最后，将所收集到的蛋白质包涵体(Inclusion body)溶于8ml的8M urea中。

接着再以市售的pET His-Tag纯化系统(Novagen，USA)，依照实验说明书进行如下的实验：将溶于8M urea中的蛋白质包涵体倒入已先以4mlNTA-Ni2⁺配装完成的琼酯树脂管柱中；再将黏接于管柱中的蛋白质以不同pH(8.0、7.0、6.5、6.0、5.4以及3.5)的缓冲液(含6M urea、0.3m NaCl、20mM磷酸盐缓冲液以及20mM Tris-HCl)冲下收集的；最后以SDS-PAGE分析蛋白质纯度并定量；此蛋白质的胺基酸序列为SEQ.ID.NO.4。

实施例四、肿瘤细胞株(TC-1)制备

将HPV16-E6、E7及ras致癌基因用以癌化C57BL/6品系的小鼠的主要肺部上皮细胞，此癌化细胞株即为TC-1，利用公知方式来维持与生产TC-1细胞株。将此细胞株培养于RPMI1640中，同时添加10％(v/v)胎牛血清，50单位/ml的penicillin或是streptomycin，L-麸醯氨酸(L-Glutamine)2mM，丙酮酸钠(sodium pyruvate)1mM，2mM非必须胺基酸以及0.4mg/ml G418，培养的条件为37℃，培养箱中维持5％的CO₂。

欲使用肿瘤细胞株的当天，以胰蛋白酶处理(trypsin)并收集培养的细胞，以1X HBSS缓冲液清洗细胞2次，最后再以1X HBSS稀释细胞至欲使用的浓度。

实施例五、小鼠癌化模式的活体肿瘤试验

将所欲进行试验的蛋白质样品：E7、PE(ΔIII)、PE(ΔIII)-E7、PE(ΔIII)-E7-KDEL3分别以1∶10的比例稀释于磷酸盐缓冲液中，使浓度为0.1mg/ml，先培养于37℃2小时，使用前再与10％ISA206佐剂(Sepec，France)以震荡方式混合，形成四种不同的疫苗；分别取含有抗原量0.1mg的上述疫苗，同时进行小鼠的免疫，并分别于2周后追加补强一次免疫；在最后一次免疫后一周，取5×10⁴ TC-1肿瘤细胞注射至免疫小鼠的右腿皮下位置以诱发肿瘤生长，同时注射一组未经免疫的小鼠，以观察肿瘤的自然生长情形。在诱发肿瘤生长实验进行的60天的后，每1至2周进行肿瘤生长的目测与触诊。

结果如图2所示，接受PE(ΔIII)-E7-KDEL3融合蛋白(■)免疫后的小鼠，在诱发肿瘤生长试验期间，参与该试验组的小鼠均无肿瘤发生100％，且持续观察了60天皆为同样现象；相反的，接受E7、PE(ΔIII)、PE(ΔIII)-E7等融合蛋白，以及未接受融合蛋白注射的小鼠组，在诱发肿瘤生长试验后，最长只有20天维持无肿瘤发生纪录。由结果可以看出，含有PE(ΔIII)以及KDEL3序列与E7抗原片段的融合蛋白，在TC-1细胞株诱发小鼠癌化试验模式中可以有效的发挥抑制肿瘤生长的免疫效果。

实施例六、细胞免疫实验

如上述疫苗免疫的小鼠试验，于一周后牺牲试验小鼠后取其脾脏巨噬细胞，属于不同疫苗处理的脾脏巨噬细胞约含3.5×10⁵的细胞液与含有一组织兼容复合体(MHC class I)抗原决定位的E7胜太(第46-57个胺基酸位置)1μg/ml，一起培养16小时，再利用CD8⁺细胞表面标记(surface marker)与细胞内细胞素IFN-γ的结合染色反应以及流式细胞仪(FACScan)分析结果，来观察各免疫组之间属于E7专一性的CD8⁺T细胞前驱物的生成差异情形。CD8⁺细胞表面标记(surface marker)与细胞内细胞素IFN-γ的染色方法以及使用流式细胞仪(FACScan)的检验方法请参见Cheng，et al.，HumGene Ther，13：553-568，2002.

于本实施例中，首度确认PE(ΔIII)-E7-KDEL3融合蛋白对于E7专一性免疫的诱发具有影响力。如图3所示，在注射PE(ΔIII)-E7-KDEL3融合蛋白此组中，可发现IFN-γ所制造出具E7专一性的CD8⁺T细胞前驱物，比任何一组实验组来的高(空白组10.0±1.4，E7组14.0±2.1，PE(ΔIII)组12.0±2.1，PE(ΔIII)-E7组36.0±2.8，PE(III)-E7-KDEL3组564.0±28.0，p＜0.01，AVONA)。由结果可知PE(III)-E7-KDEL3组可诱发比E7组高于40倍的具E7专一性的CD8⁺T细胞前驱物。

实施例七、E7专一性抗体的检测

如实施例五的免疫动物方法，以0.1mg的E7、PE(ΔIII)、PE(ΔIII)-E7、PE(ΔIII)-E7-KDEL3融合蛋白进行小鼠的免疫，并分别于1周与2周后追加补强一次疫苗；在最后一次免疫进行后7天收集小鼠血清。

于96孔盘的各孔中覆上100μl的HPV16-E7(0.5μg/ml)融合蛋白，于4℃下培养隔夜；再以含20％胎牛血清的PBS阻覆于培养孔中；将小鼠血清以PBS进行连续稀释，接着加入培养孔中，于37℃中培养2小时；再以含有0.05％Tween 20的PBS清洗培养孔后，加入1∶2000的键结有过氧化酶的兔子抗老鼠IgG抗体(peroxidase-conjugated rabbit anti-mouse IgG antibody，Zymed，San Francisco，CA)于培养孔内，再于室温下培养1小时；的后冲洗培养盘，并加入1-Step Turbo TMB-ELISA(Pierce，Rockford，IL)使颜色展开，最后以1M的H₂SO₄终止反应；利用ELISA判读机于450nm的吸收光谱下进行结果的判读。

于本实施例中，进一步以实验求得PE(ΔIII)-E7-KDEL3可提升抗E7抗体的力价。如图4所示，免疫后的小鼠所生产出的抗E7的抗体，于血清中测得的数值，以1∶100稀释倍数来看，空白组为0.629±0.093，E7组0.882±0.086，PE(ΔIII)组0.69±0.06，PE(ΔIII)-E7组0.93±0.06，而PE(ΔIII)-E7-KDEL3则高达3.593±0.54(p＜0.01，AVONA)，可明显了解以PE(ΔIII)-KDEL/E7融合蛋白免疫小鼠，将可使小鼠产生高于其它组的抗E7抗体。

本发明的实验结果充分显示PE(III)-E7-KDEL3融合蛋白具有诱发E7专一性的免疫反应，包括增加E7专一性CD8⁺T淋巴细胞以及E7专一性抗体。

所得数据皆以平均值及标准误差值(Mean±SEM)表示。实验组之间的比较数据利用「社会科学统计软件包」(Statistical Package for SocialSciences，SPSS 9.0，SPSS Inc，Chicago，IL)进行ANOVA变异数分析，如误差机率低于0.05，则表示此数据具有显着差异性。

上述实施例仅为了方便说明而举例而已，本发明所主张的权利范围自应以申请专利范围所述为准，而非仅限于上述实施例。

序列表

<110>生宝生物科技股份有限公司

<120>抑制子宫颈癌的融合蛋白

<130>P7547/0613

<160>3

<170>PatentIn version 3.2

<210>1

<211>310

<212>DNA

<213>Human papillomavirus type 16

<400>1

ggaattcatg cacggtgaca ccccgaccct gcacgaatac atgctggacc tccagccgga 60

aaccaccgac ctgtactgct acgaacagct gaacgactcc tccgaagaag aagacgaaat 120

cgacggtccg gctggtcagg ctgaaccgga ccgtgctcac tacaacatcg ttaccttctg 180

ctgcaaatgc gactccaccc tgctgctgtg cgttcagtcc acccacgttg acatccgtac 240

cctggaagac ctgctgatgg gtaccctggg tatcgtttgc ccgatctgct cccagaaacc 300

gctcgagaaa 310

<210>2

<211>18

<212>PRT

<213>Pseudomonas sp.

<400>2

Lys Leu Asp Tyr Leu Lys Lys Asp Glu Leu Arg Asp Glu Leu Lys Asp

1 5 10 15

Glu Leu

<210>3

<211>297

<212>DNA

<213>Human papillomavirus type 16

<300>

<308>NC_001526

<309>2004-07-27

<313>(1)..(297)

<400>3

atgcatggag atacacctac attgcatgaa tatatgttag atttgcaacc agagacaact 60

gatctctact gttatgagca attaaatgac agctcagagg aggaggatga aatagatggt 120

ccagctggac aagcagaacc ggacagagcc cattacaata ttgtaacctt ttgttgcaag 180

tgtgactcta cgcttcggtt gtgcgtacaa agcacacacg tagacattcg tactttggaa 240

gacctgttaa tgggcacact aggaattgtg tgccccatct gttctcagaa accataa 297

Claims

1.一种抑制子宫颈癌的融合蛋白，包括：

一段人类乳突状病毒16型(human papillomavirus，HPV，type 16)的E7蛋白胜太片段；

一段具有移位功能的胜太片段；以及

一段具羧基终端部分的胜太片段。

2.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，其中该人类乳突状病毒16型E7蛋白胜太片段的核苷酸序列为SEQ.ID.NO.1。

3.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，其中该移位胜太片段来自假单胞菌属外毒素(pseudomonas exotoxin)的一部分。

4.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，其中该羧基终端部分的胜太片段来自假单胞菌属外毒素的一部分。

5.如权利要求4所述的融合蛋白，其特征在于，其中该羧基终端部分包括KDEL的胺基酸序列。

6.如权利要求5所述的融合蛋白，其特征在于，其中该羧基终端部分的胺基酸序列为SEQ.ID.NO.2。

7.一种包含抑制子宫颈癌融合蛋白的医药组合物，其中该融合蛋白包括：

一段具有移位功能的胜太片段；以及

一段具羧基终端部分的胜太片段。

8.如权利要求7所述的医药组合物，其特征在于，其中该移位胜太片段来自假单胞菌属外毒素(pseudomonas exotoxin)的一部分。

9.如权利要求7所述的医药组合物，其特征在于，其中该人类乳突状病毒16型的E7蛋白胜太片段的核苷酸序列为SEQ.ID.NO.1。

10.如权利要求7所述的医药组合物，其特征在于，其中该羧基终端部分的胜太片段来自假单胞菌属外毒素的一部分。

11.如权利要求10所述的医药组合物，其特征在于，其中该羧基终端部分包括KDEL的胺基酸序列。

12.如权利要求11所述的医药组合物，其特征在于，其中该羧基终端部分的胺基酸序列为SEQ.ID.NO.2。

13.一种与E7胜太结合的抗体组成物，其中该E7胜太的核苷酸序列为SEQ.ID.NO.1。