CN1727887A - 通过毛细管电泳法分离蛋白质的改良方法以及用于毛细管电泳法的缓冲剂组合物 - Google Patents

通过毛细管电泳法分离蛋白质的改良方法以及用于毛细管电泳法的缓冲剂组合物 Download PDF

Info

Publication number
CN1727887A
CN1727887A CNA200510092201XA CN200510092201A CN1727887A CN 1727887 A CN1727887 A CN 1727887A CN A200510092201X A CNA200510092201X A CN A200510092201XA CN 200510092201 A CN200510092201 A CN 200510092201A CN 1727887 A CN1727887 A CN 1727887A
Authority
CN
China
Prior art keywords
adjuvant
buffering agent
composition
lipoprotein
alkyl
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CNA200510092201XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN1727887B (zh
Inventor
F·罗伯特
D·西蒙尼
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sebia SA
Original Assignee
Sebia SA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sebia SA filed Critical Sebia SA
Publication of CN1727887A publication Critical patent/CN1727887A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN1727887B publication Critical patent/CN1727887B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G01N27/416—Systems
    • G01N27/447—Systems using electrophoresis
    • G01N27/44704—Details; Accessories
    • G01N27/44747—Composition of gel or of carrier mixture

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Electrochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明涉及一种在碱性pH下用于分析含有蛋白质成分的样品的游离溶液毛细管电泳法，该蛋白质成分包括一种或多种脂蛋白成分，其特征在于包括至少一个步骤，在该步骤中样品被引入含有分析缓冲剂的毛细管中，所述分析缓冲剂进一步含有至少一种阴离子表面活性剂类型的添加剂，该添加剂能够与脂蛋白成分发生疏水作用，并能够调节电泳迁移率。该方法还涉及一种用于毛细管电泳法的组合物，以及分析蛋白质成分的试剂盒。

Description

通过毛细管电泳法分离蛋白质的 改良方法以及用于毛细管电泳法的缓冲剂组合物
发明领域
本发明涉及一种在样品中存在脂蛋白的条件下，通过毛细管电泳法分离蛋白质和肽的方法，同时涉及用于所述分离的包括添加剂的缓冲剂组合物。
发明背景
分析生物液体，如血清中的蛋白质含量以用于分析目的，特别是用于诊断目的是公知的，通常通过电泳法来分离蛋白质，该方法中既可使用凝胶电泳又可使用毛细管电泳法。毛细管电泳法的一个优势在于仅需分析极少量生物液体。此外，只要可以使用高电压，则使用该技术的分离操作会非常快速，而且在分离过程中不会对样品过度加热。
为分离血清蛋白，通常在碱性缓冲剂存在下使用毛细管电泳法。通常，所得到的蛋白质剖析图中含有5或6个部分，其对应于蛋白质成分，即白蛋白成分、α1-和α2-成分，β-球蛋白成分，β1-和β2-成分，以及γ-球蛋白成分。这些成分中的每个成分都包括一种或多种血清蛋白。
可使用毛细管电泳法和分析缓冲剂，如美国专利US Re36011和欧洲专利EP-A-0518475、EP-A-1229325或EP-A-1258724中所描述的那些技术来实现这种分离。
然而，血清蛋白的分离有时并不能令人满意。
实际上，术语“蛋白质成分”此处并不仅仅意味着蛋白质成分，即α1-；α2-；β-或β1-和β2-；和γ-球蛋白成分，同时还意味着脂蛋白成分，主要是α-脂蛋白、β-脂蛋白以及前-β-脂蛋白，对于“高密度脂蛋白”、“低密度脂蛋白”和“极低密度脂蛋白”，其还被称为HDL，LDL和VLDL，即剖析图有时是不精确的，这主要是由于那些脂蛋白，主要为β-脂蛋白和前-β-脂蛋白出现在α1-和α2-球蛋白以及β1-球蛋白所对应的剖析图区内。
发明内容
申请人现已证明，使用阴离子表面活性剂作为分析缓冲剂中的添加剂可改善分离，特别是能够使电泳剖析图中的α1-和α2-以及β1-球蛋白区域更纯。所述添加剂选自阴离子表面活性剂，其能够与一种或多种脂蛋白成分，特别是脂蛋白疏水残基产生疏水作用。其可向脂蛋白成分提供一个或多个负电荷。其可使电泳迁移率相对于其它蛋白质成分的电泳迁移率有所改变，特别是有所降低。
在根据本发明而使用的低浓度的所述添加剂下(其中，浓度低是相对于在其它应用中所用的添加剂浓度而言)，正如在实施例中显而易见的，在毛细管电泳法中得到的剖析图可以为除去肩峰的非常纯的峰，特别是对于α1和α2成分而言。这对于解释高血脂血清的剖析图是非常有用的，特别地，对正常血脂样品的分析也同样有用。
因此，本发明涉及一种在碱性pH下的游离溶液毛细管电泳法，该方法用于分析含有蛋白质成分的样品，该蛋白质成分包括脂蛋白成分，在该方法中，样品被引入到含有分析缓冲剂的毛细管中，所述分析缓冲剂还包括至少一种能够与一种(或多种)脂蛋白成分发生疏水作用的阴离子表面活性剂型添加剂。所述添加剂能够向所述脂蛋白成分提供一个或多个负电荷，因此可使电泳迁移率相对于其它非脂类蛋白质成分的电泳迁移率有所改变。
所述步骤之后通常还要通过迁移来分离蛋白质成分，并检测各成分。
本发明还涉及一种通过电泳法在分析缓冲剂中分离样品的蛋白质成分的方法，该样品至少包括白蛋白和α1-、α2-和β1-球蛋白成分以及脂蛋白，其中分析缓冲剂还包括至少一种能够与脂蛋白发生疏水作用的阴离子表面活性剂型添加剂。
本发明还涉及一种在碱性pH下，通过游离溶液毛细管电泳法从包括脂蛋白的液体样品中电泳分离蛋白质成分的方法，在该方法中，使包括所述成分的样品通过含有分析缓冲剂的毛细管，该分析缓冲液进一步含有能够与脂蛋白发生特定作用的添加剂；该添加剂可为阴离子表面活性剂，其包括疏水部分，如C10-C20的烷基链，还包括阴离子部分，其在pH大于9时供给强负电荷。
阴离子表面活性剂类型的添加剂以低浓度用于缓冲剂中，从而其与白蛋白或其它非脂类的蛋白质成分的相互作用很弱，并特别集中于脂蛋白上，此处称为“脂蛋白-特异性”。对于此脂蛋白-特异性的相互作用，优选以低浓度使用阴离子型表面活性剂添加剂。对于每一种阴离子表面活性剂，所述浓度部分取决于其对脂蛋白的亲和性，部分取决于其对白蛋白的亲和性或对其它非脂类蛋白质成分的亲和性。因此每一种表面活性剂的最佳浓度都不同。其在缓冲剂中可为小于1mM的数量级，例如为0.001mM-0.2mM的数量级，优选大于0.01mM并小于0.1mM，例如在0.01mM-0.09mM的范围内。
申请人已证明，特别是对SDS而言，大约0.05mM的浓度无法促成脂蛋白成分的充分迁移，而当浓度大于0.2mM时，剖析图就会变形(当浓度为0.25mM时，β2部分缩小，α1部分变形，当浓度为0.5mM时，所得的剖析图甚至会完全变形)。
因此，在本发明毛细管电泳法的分析缓冲剂中用作添加剂，且能够与脂蛋白发生特定疏水作用的化合物可为阴离子表面活性剂，如用在MECC(胶束动电毛细管色谱)中的那些物质，但所用浓度基本上低于临界胶束浓度。在本发明中，将所述化合物用于如上所述的游离溶液CE中，并且脂蛋白通过所述脂蛋白的疏水残基与所述化合物的疏水部分之间的疏水作用而带有负电荷，从而导致与其它蛋白质相比，所述脂蛋白的迁移减慢。一个结果就是改善了α1、α2和β1成分的分离，使脂蛋白迁移到其通常迁至的区域之外，即α1、α2和β1区。其使用浓度低于EP-A-1229325中所述的浓度。
此外，本发明涉及用于毛细管电泳法的电解质组合物，其包括，在可接受的载体中的至少一种缓冲剂和如上所述的阴离子表面活性剂类添加剂，其能够使脂蛋白迁移到其通常迁至的区域之外，特别是在成分α1、α2和β1的区域之外。
如实施例中所示，使用本发明的添加剂，通过使脂蛋白迁移到通常区域之外可显著改善α1、α2和β1成分的分离。因此，与使用常用缓冲剂所进行的分析相比，其可改善血清蛋白定量分析的速度和准确度。所述添加剂对富含β-脂蛋白和前-β-脂蛋白的生物样品的分析具有特殊的优势。
最后，本发明涉及用于分析生物样品的蛋白质成分的试剂盒，其包括至少一种分析缓冲剂和阴离于表面活性剂类型的添加剂，该添加剂能够使脂蛋白迁移到它们通常迁至的区域之外，特别是迁移至α1、α2和β1成分的区域之外，和/或包括疏水部分，例如C10-C20的烷基链，以及在pH大于9时提供强负电荷的阴离子部分，和/或一种或多种毛细管冲洗液，和/或稀释部分，和/或一种或多种用于被分析的样品的稀释剂。在该试剂盒中，缓冲剂和添加剂以及稀释剂可分别存储以备临时混合，或可混合存储。所述试剂盒任选包括进行分析的操作说明。
本发明进一步的特征和优势将通过下列详细描述和实施例以及附图而得以明确。
附图简述
图1表示根据EP-A-1229325，使用缓冲剂通过毛细管电泳法分析得到的人体血清的电泳图谱。
图2表示使用进一步包括本发明的阴离子表面活性剂添加剂的相同缓冲剂，通过毛细管电泳法分析得到的相同血清的电泳图谱。
图3A、3B、3C和3D显示通过EC法得到的相同正常血脂血清的电泳图谱，该方法中使用相同的缓冲剂，并向其中分别加入0；0.05；0.07和0.25mM的SDS。
图4A、4B、4C和4D显示通过EC法得到的相同高血脂血清的电泳图谱，该方法中使用相同的缓冲剂，并向其中分别加入0；0.05；0.07和0.25mM的SDS。
毛细管电泳法(CE)的操作条件是本领域公知的。通常包括使用清洗剂清洗毛细管，用分析缓冲剂清洗，任选一次或多次稀释样品，注射样品，迁移以及检测。所述步骤可使用自动仪器进行操作。
毛细管电泳法的操作条件是，例如，适于使用毛细管(SEBIA)自动仪器的条件。
包括在碱性pH下提供强负电荷的阴极和疏水部分的化合物可用作根据本发明的缓冲剂的添加剂，且其能够与脂蛋白的疏水部分发生相互作用。
疏水烷基链可由至少一个C10-C24的烷基链组成，其可带有或不带有支链，并包括至少一个约10个碳原子，特别是10-20个碳原子的直链部分。如本领域熟练技术人员容易理解的，所述疏水部分可包括不会在本质上改变其疏水特性的残基或官能团。
阴极可由下列的一种或多种基团或化学官能团组成：磺酸根、羧酸根、硫酸根以及磷酸根。
特别地，可列举下列阴离子表面活性剂：如C10-C24烷基单-、二-或三硫酸根，C10-C24烷基单-、二-或三磺酸根，C10-C24烷基单-、二-或三羧酸根，C10-C24烷基单-、二-或三磷酸根，以及C10-C24烷基羧基-磺酸根、-硫酸根和-磷酸根，特别是C10-C24烷基硫酸根。
因此，上述二-或三-羧酸根、二-或三-磺酸根、二-或三-硫酸根和二-或三-磷酸根以及羧基-磺酸根、硫酸根和磷酸根在含有10-24个碳原子的烷基链上结合了一个或多个羧酸根、硫酸根、磺酸根或磷酸根官能团。
上面列举的那些物质中优选的阴离子表面活性剂是C10-C24单烷基硫酸根，特别是C10-C20烷基硫酸根，以及在这些中，优选C10-C16烷基硫酸根。
所述化合物本身是已知的，且可通过市售获得。其可以为酸的形式或盐的形式，特别是碱金属盐的形式。
月桂基硫酸根是特别优选的，更具体为月桂基硫酸钠(SDS)。
在上述命名中，烷基优选为直链烷基。
上述阴离子表面活性剂类型的添加剂也可作为混合物使用。
此外，可在已知与白蛋白发生相互作用的其它添加剂存在下，通过如EP-A-1229325中所述的改善α1-球蛋白和白蛋白之间的距离来有利地使用该阴离子表面活性剂类型的添加剂。
EP-A-1229325中提到的用于与白蛋白发生相互作用的添加剂优选为C6-C10烷基磺酸根，在这些C6-C10烷基磺酸根中，辛烷磺酸根是特别优选的，因为其通过对α1-球蛋白和白蛋白进行分离而基本上改善了剖析图的清晰度。
术语“根据本发明的样品”意味着待分析的生物样品，其例如先用合适的稀释溶液或分析缓冲剂进行稀释，或采用纯样品进行分析。
可分析任何健康或患病者的液态生物样品。因此，人体液态生物样品可为正常或非正常血清，以及溶血血液、血浆、尿液或脑脊液体。除了人体生物样品，还可分析来源于动物的样品。样品也可为合成蛋白质，那么本发明的方法就旨在进行例如，生产控制。
本发明的添加剂可特别用于分析血清，以及分离人体样品中的血清蛋白质。
在血清样品中，欲分离的血清蛋白质为白蛋白和α1-；α2-；β(或β1-和β2-)；以及γ-球蛋白成分，和α-脂蛋白、β-脂蛋白和-β-脂蛋白，特别是β-脂蛋白和前-β-脂蛋白。所述命名可包括所述种类的所有子类型的蛋白质成分。
分析缓冲剂可为任何已知的适于进行所需分离，并适用于通常的电泳法，尤其是毛细管电泳法的分析缓冲剂。可列举的例子为硼酸盐、磷酸根和碳酸盐缓冲剂，基于氨基酸和生物缓冲剂的缓冲剂。特别地，可使用Capillarys B1B2+缓冲剂(SEBIA)。
可列举的生物缓冲剂为下列的已知缓冲剂：Bis-TRIS(2-双[2-羟乙基]氨基-2-羟甲基-1，3-丙二醇)、ADA(N-[2-乙酰氨基]-2-亚氨二乙酸)、ACES(2-[2-乙酰氨基]-2-氨基乙烷磺酸)、PIPES(1，4-哌嗪二乙烷磺酸)，MOPSO(3-[N-吗啉代]-2-羟基丙烷磺酸)、Bis-TRIS PROPANE(1，3-双[三(羟甲基)甲基氨基丙烷])、BES(N，N-双[2-羟乙基]-2-氨基乙烷磺酸)、MOPS(3-[N-吗啉代]丙烷磺酸)、TES(2-[2-羟基-1，1-双(羟甲基)乙基氨基]乙烷磺酸)、HEPES(N-[2-羟乙基]哌嗪-N’-(2-乙烷磺)酸)、DIPSO(3-N，N-双[2-羟乙基]氨基-2-羟基丙烷磺)酸)、MOBS(4-N-吗啉代丁烷磺酸)、TAPSO(3-[N-三-羟甲基-甲基氨基]-2-羟基丙烷磺酸)、TRIS(2-氨基-2-[羟甲基]-1，3-丙二醇)、HEPPSO(N-[2-羟乙基]哌嗪-N’-[2-羟基丙烷磺]酸)、POPSO(哌嗪-N，N’-双[2-羟基丙烷磺]酸)、TEA(三乙醇胺)、EPPS(N-[2-羟乙基]-哌嗪-N’-[3-丙烷磺]酸)、TRICINE(N-三[羟甲基]甲基甘氨酸)、GLY-GLY(二甘氨酸)、BICINE(N，N-双[2-羟乙基]-甘氨酸)、HEPBS(N-[2-羟乙基]哌嗪N’-[4-丁烷磺]酸)、TAPS(N-三[羟甲基]甲基-3-氨基丙烷磺酸)、AMPD(2-氨基-2-甲基-1，3-丙二醇)、TABS(N-三[羟甲基]甲基-4-氨基丁烷磺酸)、AMPSO(3-[(1，1-二甲基-2-羟乙基)氨基]-2-羟基丙烷磺酸)、CHES(2-(N-环己基氨基)乙烷磺酸)、CAPSO(3-[环己基氨基]-2-羟基-1-丙烷磺酸)、AMP(2-氨基-2-甲基-1-丙醇)、CAPS(3-环己基氨基-1-丙烷磺酸)或CABS(4-[环己基氨基]-1-丁烷磺酸)，优选AMPD、TABS、AMPSO、CHES、CAPSO、AMP、CAPS或CABS。
在碱性pH毛细管电泳法中，分析缓冲剂的pH在8-12的范围内，优选在9-11的范围内，更特别优选的值为约10。
本发明的分析缓冲剂还可包括至少一种调节pH的化合物。可使用的pH调节剂例如选自下列化合物：氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铷、氢氧化铯、氢氧化钫以及在烷基部分含有1-8个碳原子的单-、二-、三-或四-烷基氢氧化铵。
根据本发明，在常规条件和常规浓度下使用该分析缓冲剂，即在10-500mM的浓度级别，优选20-400mM下使用。
本发明的添加剂在上述浓度下使用，该浓度低于EP-A-1229325中所述的与白蛋白相互作用时所用的浓度。总的来说，该浓度为0.001-0.2mM的数量级，优选0.01-0.09mM，如果是SDS的话，则该浓度小于能与白蛋白或其它非脂类蛋白质成分产生强烈相互作用的浓度，即会强烈干扰剖析图的浓度。
已知与白蛋白发生相互作用的更特殊的添加剂应以0.1mM-500mM的浓度使用，但是不能超过其在分析缓冲剂中的临界胶束浓度。该临界胶束浓度值对表面活性剂添加剂来说是有效的。
当使用辛烷磺酸根时，其在缓冲剂中的浓度为1-10mM数量级，优选2.5-5mM。
在SDS存在下其可能阻碍SDS对最大位移的影响，特别是在白蛋白区域。
此外，缓冲剂还可包括一种或多种添加剂，其可增加离子强度。
用于缓冲剂并可增强电解质离子强度的所述添加剂例如可列举为选自下列的化合物：碱金属的氯化物、硫酸根、磺酸根、碳酸盐、羧酸根、氟化物和磷酸根，及其混合物。其中，碱金属的氯化物、硫酸根、磺酸根及其混合物是优选的。
更优选使用硫酸根。优选选择钠盐、锂盐或钾盐。如上所列举的添加剂中，硫酸钠和/或硫酸锂是优选的。
本发明的缓冲剂细合物通过制备分析缓冲剂组合物的常规方法制得，即通过将液态形式或固态形式的待稀释组分加入到可接受的载体中而制得。该载体通常为水，其可为蒸馏水或软化水。
用于毛细管的材料为通常在毛细管电泳法中使用的材料。因此，可使用石英玻璃毛细管。其内径可为5-2000μm。优选地，可使用内径小于200μm的毛细管，更优选小于100μm。优选使用内表面未处理的毛细管。本领域熟练技术人员能够按照分析的要求来改变毛细管性质及尺寸。
具体实施方式
实施例
方法及装置
A) 毛细管电泳法
使用CE装置进行临床样品的毛细管电泳试验，该CE装置试剂盒有内径为25微米的熔融硅毛细管。在200nm下进行检测。样品置于毛细管装置(SEBIA)的样品托盘中，并通过流体注射进行自动注射。通过施加约400V/cm的电场而在小于5分钟的时间内对样品进行分离。在每次分析之前使用0.25M氢氧化钠，然后再使用分析缓冲剂对毛细管进行清洗。
分析缓冲剂：
使用的化学药品为分析级。
在1升的去离子水中溶解9.3g硼酸(摩尔质量：61.83g/mol)，和5.1g氢氧化钠(摩尔质量：40.0g/mol)，从而制得150mM的硼酸盐缓冲剂。最终浓度为150mM，pH为10.0。
B)临床样品
对于CE法，则在分析缓冲剂中将人体血清稀释到五分之一。
实施例1(对比例)
按照如上所述制备硼酸盐分析缓冲剂。
使用上述方法时高血脂人体血清(甘油三酯：5.73g/1)进行电泳操作。
如图1所示，所得的电泳图谱具有从左至右的六个连续峰值，分别为白蛋白、α1、α2、β1、β2和γ-球蛋白成分。
  成分   ％
  白蛋白α1α2β1β2γ   52.39.79.66.47.814.2
实施例2
将SDS以0.07mM的浓度加入到实施例1的分析缓冲剂中。
如实施例1所述进行电泳操作。
如图2所示，所得的电泳图谱具有从左至右的六个连续峰值，分别为白蛋白、α1、α2、β1、β2和γ-球蛋白成分。与实施例1相比较可知，两个成分之间的分离基本上得以改善。α1峰(相当于前β-脂蛋白)上用箭头标记的肩峰从剖析图中消除。
  成分   ％
  白蛋白α1α2β1β2γ   57.73.99.16.27.615.5
实施例3
按照与前面实施例相同的方式对正常血脂的人体血清(甘油三酯1.10g/l)进行电泳操作，但向缓冲剂中加入浓度为0.00；0.05；0.07和0.25mM的SDS。
所得这些电泳图谱从左至右的六个连续峰分别为白蛋白成分和α1-、α2-、β1-、β2-和γ-球蛋白成分。下表表示所得结果。
  成分   ％
  SDS浓度(mM)
  0.00图3A   0.05图3B   0.07图3C   0.25图3D
  白蛋白α1α2β1β2γ   50.46.516.26.25.415.3   50.55.217.95.04.916.5   49.16.018.34.94.816.9   52.47.316.54.12.317.4
  白蛋白峰上有轻微血脂干扰   无干扰   α1部分变形；白蛋白峰上存在轻微肩峰；β2部分减小
实施例4
使用如实施例3中相同的方法处理高血脂人体血清(甘油三酯5.63g/l)。所得这些电泳图谱从左至右的六个连续峰值分别为白蛋白成分和α1-、α2-、β1-、β2-和γ-球蛋白成分。下表表示所得结果。
  成分   ％
  SDS浓度(mM)
  0.00图4A 0.05图4B   0.07图4C   0.25图4D
  白蛋白α1α2β1β2γ   54.79.77.95.03.419.3 59.14.98.35.03.219.5   57.25.68.64.93.420.3   58.75.97.23.71.822.7
  血脂干扰；α1上有肩峰 白蛋白峰上存在肩峰 无干扰   干扰白蛋白峰；α1部分变形；β2部分减小

Claims (28)

1、一种碱性pH下用于样品分析的游离溶液毛细管电泳法，该样品包括含有一种或多种脂蛋白成分的蛋白质成分，其特征在于该方法包括至少一个步骤，该步骤中：样品被引入到含有分析缓冲剂的毛细管中，所述分析缓冲剂进一步包括至少一种阴离子表面活性剂类型的添加剂，其能够与脂蛋白成分发生疏水作用，并能够使电泳迁移率相对于其它蛋白质成分的电泳迁移率有所改变，缓冲剂中添加剂的浓度在0.001mM-0.2mM的范围内。
2、根据权利要求1的方法，其特征在于其进一步包括通过迁移来分离该成分和检测所述成分。
3、根据权利要求1或2的方法，其特征在于所述样品为生物样品。
4、根据权利要求1-3之一的方法，其特征在于所述样品为血清、溶血血液、血浆、尿液或脑脊液。
5、根据权利要求1-4之一的方法，其特征在于所述成分为血清成分。
6、根据权利要求1-5之一的方法，其特征在于所述成分为白蛋白和α1-、α2-、β-或(β1-和β2-)、γ-球蛋白成分，所述脂蛋白成分为α-脂蛋白、β-脂蛋白和/或前-β-脂蛋白。
7、根据权利要求1-6之一的方法，其特征在于所述添加剂包括pH大于9下的阴极和疏水部分。
8、根据权利要求1-7之一的方法，其特征在于所述添加剂包括疏水部分和阴极，该疏水部分由至少一个C10-C24烷基链组成，其可具有或没有支链，并包括含有至少10个碳原子的直链部分，该阴极由一种或多种选自磺酸根、羧酸根、硫酸根以及磷酸根的基团所细成。
9、根据权利要求1-8之一的方法，其特征在于所述添加剂选自阴离子表面活性剂，如C10-C24烷基单-、二-或三硫酸根，C10-C24烷基单-、二-或三磺酸根，C10-C24烷基单-、二-或三羧酸根，C10-C24烷基单-、二-或三磷酸根，以及C10-C24烷基羧基磺酸根、硫酸根和磷酸根，特别是C10-C24烷基硫酸根。
10、根据权利要求1-9之一的方法，其特征在于所述添加剂为C10-C20烷基硫酸根。
11、根据权利要求1-10之一的方法，其特征在于所述添加剂为月桂基硫酸钠。
12、根据权利要求1-11之一的方法，其特征在于所述缓冲剂中添加剂的浓度在0.01mM-0.09mM的范围内。
13、根据权利要求1-12之一的方法，其特征在于所述缓冲剂中添加剂的浓度为0.07mM数量级。
14、根据权利要求1-13之一的方法，其特征在于所述缓冲剂进一步包括辛烷磺酸根类型的添加剂，其在所述缓冲剂中的浓度为1-10mM，优选2.5-5mM。
15、根据权利要求1-14之一的方法，其特征在于所述分析缓冲剂的pH在9-11的范围内。
16、根据权利要求1-15之一的方法，其特征在于毛细管由熔融硅形成。
17、根据权利要求1-16之一的方法，其特征在于所述分析缓冲剂进一步包含至少一种pH调节剂。
18、根据权利要求17的方法，其特征在于所述pH调节剂选自氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铷、氢氧化铯、氢氧化钫以及在烷基部分含有1-8个碳原子的单-、二-、三-或四-烷基氢氧化铵。
19、一种通过电泳法在缓冲剂中分离样品蛋白质成分和脂蛋白的方法，该样品包含α1-、α2-和β1-球蛋白成分，在该方法中，使含有所述成分的样品通过含有分析缓冲剂的毛细管，分析缓冲剂中进一步包括至少一种能够与脂蛋白发生疏水作用的添加剂，缓冲剂中添加剂的浓度在0.001-0.2mM的范围内。
20、一种通过碱性pH下的游离溶液毛细管电泳法来电泳分离液体样品中的蛋白质成分的方法，在该方法中，使含有所述成分的样品通过含有分析缓冲剂的毛细管，该分析缓冲液能够与脂蛋白发生作用，且该缓冲剂还含有至少一种添加剂，该添加剂为包括下列部分的化合物：在pH大于9时带负电荷的阴极和包含至少一个C10-C20烷基链的疏水部分，缓冲剂中添加剂的浓度在0.001-0.2mM的范围内。
21、根据权利要求1-20之一的方法，其特征在于分析缓冲剂进一步包括硫酸钠或硫酸锂。
22、一种用于毛细管电泳法的电解质组合物，其特征在于其包含至少一种缓冲剂，还包含至少一种在合适支持物中的能够与脂蛋白发生疏水作用的添加剂，缓冲剂中添加剂的浓度在0.001-0.2mM的范围内。
23、一种用于毛细管电泳法的组合物，其特征在于其包含至少一种分析缓冲剂和至少一种添加剂，该添加剂包含疏水部分和阴极，该疏水部分由至少一个C10-C24烷基链组成，其可有或没有支链，并包括至少一个含有10个碳原子的直链部分，该阴极由一种或多种选自磺酸根、羧酸根、硫酸根以及磷酸根的基团所组成，缓冲剂中添加剂的浓度在0.001-0.2mM的范围内。
24、根据权利要求22或23的用于毛细管电泳法的组合物，其特征在于所述添加剂选自阴离子表面活性剂，如C10-C24烷基单-、二-或三硫酸根，C10-C24烷基单-、二-或三磺酸根，C10-C24烷基单-、二-或三羧酸根，C10-C24烷基单-、二-或三磷酸根，以及C10-C24烷基羧基单-、二-或三-磺酸根、硫酸根和磷酸根，特别是C10-C24烷基硫酸根。
25、根据权利要求22-24之一的用于毛细管电泳法的组合物，其特征在于所述添加剂选自C10-C24烷基硫酸根阴离子表面活性剂及其混合物。
26、根据权利要求22-25之一的组合物，其特征在于所述添加剂为C10-C16烷基硫酸根。
27、根据权利要求22-26之一的组合物，其特征在于所述添加剂为月桂基硫酸钠。
28、一种用于分析生物样品中蛋白质成分的试剂盒，包括至少一种分析缓冲剂和阴离子表面活性剂类型的添加剂，该添加剂能够使脂蛋白迁移到它们通常迁至的区域之外，特别是迁到α1、α2和β1成分区之外，和/或包括疏水部分，例如C10-C20烷基链，以及在pH大于9时提供强负电荷的阴离子部分；和/或一种或多种用于冲洗毛细管的溶液，和/或一种或多种合适的稀释剂和/或稀释部分，在任选将所述缓冲剂和所述添加剂进行混合之后，缓冲剂中添加剂的浓度在0.001-0.2mM的范围内。
CN200510092201XA 2004-05-10 2005-05-10 通过毛细管电泳法分离蛋白质的改良方法以及用于毛细管电泳法的缓冲剂组合物 Active CN1727887B (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR0405039A FR2869995B1 (fr) 2004-05-10 2004-05-10 Procede ameliore de separation de proteines par electrophorese capillaire et compositions de tampon pour electrophorese capillaire
FR0405039 2004-05-10

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1727887A true CN1727887A (zh) 2006-02-01
CN1727887B CN1727887B (zh) 2010-05-05

Family

ID=34942263

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN200510092201XA Active CN1727887B (zh) 2004-05-10 2005-05-10 通过毛细管电泳法分离蛋白质的改良方法以及用于毛细管电泳法的缓冲剂组合物

Country Status (13)

Country Link
US (1) US7906001B2 (zh)
EP (1) EP1596192B1 (zh)
JP (1) JP4693484B2 (zh)
CN (1) CN1727887B (zh)
AR (1) AR048735A1 (zh)
BR (1) BRPI0501751B1 (zh)
CY (1) CY1113490T1 (zh)
DK (1) DK1596192T3 (zh)
ES (1) ES2397156T3 (zh)
FR (1) FR2869995B1 (zh)
PL (1) PL1596192T3 (zh)
PT (1) PT1596192E (zh)
SI (1) SI1596192T1 (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102498392A (zh) * 2009-07-01 2012-06-13 落碧亚公司 通过毛细管电泳进行的糖化血红蛋白分析及测定、用于毛细管电泳的缓冲液组合物及试剂盒
CN109991303A (zh) * 2019-02-27 2019-07-09 北京工商大学 利用毛细管电泳技术快速鉴别单花蜂蜜的方法
CN110520103A (zh) * 2017-04-10 2019-11-29 花王株式会社 皮肤清洁剂组合物

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060160235A1 (en) * 2004-11-19 2006-07-20 Craighead Harold G Separation of denatured proteins in free solution
WO2008029684A1 (fr) 2006-09-04 2008-03-13 National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology Procédé pour analyse d'échantillon par électrophorèse capillaire
US8137512B2 (en) 2006-09-04 2012-03-20 National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology Process for analyzing sample by capillary electrophoresis method
US20100155242A1 (en) * 2006-09-04 2010-06-24 Arkray, Inc. Method of Analyzing a Sample by Capillary Electrophoresis
JP2009186445A (ja) * 2008-02-08 2009-08-20 Arkray Inc キャピラリー電気泳動法によるヘモグロビンの分析方法およびそれに用いる試薬
CN101339158B (zh) * 2008-08-28 2012-05-02 内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司 一种乳中β-酪蛋白含量的检测方法
CN101339159B (zh) * 2008-08-28 2012-05-02 内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司 一种乳中α-酪蛋白含量的检测方法
EP2343544B1 (en) * 2009-12-25 2015-03-11 Arkray, Inc. Method for analyzing hemoglobin by electrophoresis
WO2013188879A1 (en) * 2012-06-16 2013-12-19 Atherotech, Inc. Measurement of serum lipoproteins
JP7463272B2 (ja) 2017-09-07 2024-04-08 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー キャピラリー電気泳動による純度の決定方法
JP2024064686A (ja) 2022-10-28 2024-05-14 アークレイ株式会社 試料分析方法、キャピラリ電気泳動用溶液、及び試料分析用キット
JP2024064685A (ja) 2022-10-28 2024-05-14 アークレイ株式会社 試料分析方法、試料の製造方法、アルブミン及びγ－グロブリン含有試料希釈用希釈液、及び試料分析用キット

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6136296A (ja) * 1984-07-30 1986-02-20 Lion Corp 生体膜蛋白質の分離精製法
US5120413A (en) 1991-05-31 1992-06-09 Beckman Instruments, Inc. Analysis of samples utilzing capillary electrophoresis
FR2684998B1 (fr) * 1991-12-11 1994-10-28 Sebia Sa Procede de separation de la lp(a) par electrophorese, gels pour la mise en óoeuvre de ce procede, et application a la determination in vitro du risque atherogene lie a la presence de la lp(a).
US5213669A (en) * 1992-01-31 1993-05-25 Beckman Instruments, Inc. Capillary column containing a dynamically cross-linked composition and method of use
JPH08114575A (ja) * 1994-10-17 1996-05-07 Taisei Corp Ｌ型およびｄ型アミノ酸の分析法
SE9404141D0 (sv) * 1994-11-30 1994-11-30 Pharmacia Biotech Ab New buffer system for electrophoresis
US5662787A (en) * 1996-01-19 1997-09-02 Beckman Instruments, Inc. Device for profiling oligosaccharides released from glycoproteins
US5660701A (en) 1996-02-29 1997-08-26 Bio-Rad Laboratories, Inc. Protein separations by capillary electrophoresis using amino acid-containing buffers
ATE196148T1 (de) * 1996-07-10 2000-09-15 American Nat Red Cross Verfahren zur selektiver trennung organischer komponenten aus biologischen flüssigkeiten
FR2819888B1 (fr) * 2001-01-19 2003-09-12 Sebia Sa Procede de separation de proteines par electrophorese capillaire et compositions de tampon pour electrophorese capillaire
FR2819889B1 (fr) 2001-01-19 2003-08-01 Sebia Sa Procede d'electrophorese capillaire en solution libre a ph alcalin
JP2003194775A (ja) * 2001-12-28 2003-07-09 Japan Science & Technology Corp タンパク質の電気泳動法
US8580533B2 (en) * 2002-05-31 2013-11-12 Waters Technologies Corporation Destructible surfactants and uses thereof

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102498392A (zh) * 2009-07-01 2012-06-13 落碧亚公司 通过毛细管电泳进行的糖化血红蛋白分析及测定、用于毛细管电泳的缓冲液组合物及试剂盒
CN110520103A (zh) * 2017-04-10 2019-11-29 花王株式会社 皮肤清洁剂组合物
US11406849B2 (en) 2017-04-10 2022-08-09 Kao Corporation Amino alcohol-containing skin cleansing composition for removing keratotic plugs from skin
CN109991303A (zh) * 2019-02-27 2019-07-09 北京工商大学 利用毛细管电泳技术快速鉴别单花蜂蜜的方法
CN109991303B (zh) * 2019-02-27 2023-10-03 北京工商大学 利用毛细管电泳技术快速鉴别单花蜂蜜的方法

Also Published As

Publication number Publication date
DK1596192T3 (da) 2013-01-07
FR2869995B1 (fr) 2006-09-22
EP1596192A1 (fr) 2005-11-16
CN1727887B (zh) 2010-05-05
PT1596192E (pt) 2013-01-23
JP2005326407A (ja) 2005-11-24
US20050274616A1 (en) 2005-12-15
BRPI0501751B1 (pt) 2020-10-27
JP4693484B2 (ja) 2011-06-01
CY1113490T1 (el) 2016-06-22
ES2397156T3 (es) 2013-03-05
AR048735A1 (es) 2006-05-17
BRPI0501751A (pt) 2006-04-04
SI1596192T1 (sl) 2013-06-28
PL1596192T3 (pl) 2013-03-29
FR2869995A1 (fr) 2005-11-11
US7906001B2 (en) 2011-03-15
EP1596192B1 (fr) 2012-10-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN1727887A (zh) 通过毛细管电泳法分离蛋白质的改良方法以及用于毛细管电泳法的缓冲剂组合物
EP1659398B1 (fr) Procédé d'analyse de l'hémoglobine par électrophorèse capillaire, trousse pour électrophorèse capillaire et utilisation de ralentisseur de flux dans un tel procédé
US9598716B2 (en) Destructible surfactants and uses thereof
CN1630816A (zh) 通过毛细管电泳分离蛋白质的方法和毛细管电泳用的缓冲组合物
JP5513802B2 (ja) 等電点電気泳動用ゲル及び等電点電気泳動方法
CN101078720A (zh) 一种改进的用于对白细胞进行分类的试剂及方法
WO2009133153A1 (en) Methods and systems for the separation and analysis of analytes using ffe
US9034652B2 (en) Colloidal Coomassie stain
WO2020221182A1 (zh) 05sar-page及其制备方法和应用
CN1242262C (zh) 二维或多维毛细管电泳分离生物大分子的方法
KR20220050140A (ko) 핵산의 크기 선택적 농축을 위한 방법, 조성물 및 키트
CN1473067A (zh) 综合分离方法
US9448202B2 (en) Electrophoresis buffer for extending the useful electrophoresis life of an electrophoresis gel
DE69004429T2 (de) Verfahren zur rückgewinnung rekombinanter proteine.
CN1504580A (zh) 凝血酶试剂以及检查试剂套装
Gáspár et al. Capillary electrophoresis for the direct determination of cephalosporins in clinical samples
JP2009074811A (ja) 異種緩衝液を使用する電気泳動法
Xu Analysis of reproduction proteins from butterflies
JP2004286665A (ja) フリーフロー電気泳動法
WO2007015697A9 (en) Method for enhancing two-dimensional gel electrophoresis resolution
WO2022122659A1 (en) Free-flow electrophoresis method for separating analytes
AU2007200153A1 (en) Method for Separating Proteins by Capillary Electrophoresis and Buffer Compositions for Capillary Electrophoresis

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant