JPH08114575A - Ｌ型およびｄ型アミノ酸の分析法 - Google Patents
Ｌ型およびｄ型アミノ酸の分析法Info
- Publication number
- JPH08114575A JPH08114575A JP6251026A JP25102694A JPH08114575A JP H08114575 A JPH08114575 A JP H08114575A JP 6251026 A JP6251026 A JP 6251026A JP 25102694 A JP25102694 A JP 25102694A JP H08114575 A JPH08114575 A JP H08114575A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- buffer solution
- type
- capillary
- carrier buffer
- amino acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 リン酸塩緩衝液、β−サイクロデキストリ
ン、尿素、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を含むキ
ャリアー緩衝液を用いたキャピラリー電気泳動によるフ
ェニルアラニン、バリン、メチオニン、アラニンを含む
Ｌ型およびＤ型アミノ酸の分析法。 【効果】 本発明の方法は、食品や医薬品の製造分野
で生じるアミノ酸の光学分割に適用できる。
ン、尿素、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を含むキ
ャリアー緩衝液を用いたキャピラリー電気泳動によるフ
ェニルアラニン、バリン、メチオニン、アラニンを含む
Ｌ型およびＤ型アミノ酸の分析法。 【効果】 本発明の方法は、食品や医薬品の製造分野
で生じるアミノ酸の光学分割に適用できる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、キャピラリー電気泳動
によるＬ型およびＤ型アミノ酸の分析法に関する。
によるＬ型およびＤ型アミノ酸の分析法に関する。
【０００２】
【従来の技術】アミノ酸を合成すると、Ｌ型とＤ型が等
量ずつ生成されるが、通常必要とされるのはＬ型であ
る。食品や医薬品製造分野では合成したアミノ酸（Ｌ型
とＤ型の混合物）をさらに分離してＬ型のみを抽出しな
ければならない。従来、アミノ酸の光学分割（Ｌ型とＤ
型を分離すること）には、ガスクロマトグラフィー（Ｇ
Ｃ）、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）などが
用いられてきたが、分離性能が低い上に試料を多量に必
要とした。また、専用の分離カラムを使用する必要があ
るため操作が煩雑で、分析に要するコストも比較的高い
等の欠点が見られた。これらの欠点を補う分析技術とし
て最近、キャピラリー電気泳動装置を用いたアミノ酸の
分析法が検討されている。例えば、100mM ホウ酸塩緩衝
液、60mMγ−サイクロデキストリン、100mM SDS (pH8.
3) からなるキャリアー緩衝液を用いたフェニルアラニ
ン、バリン、ロイシン、メチオニン、グルタミン酸の分
析（寺部茂、「キャピラリー電気泳動 −原理と応用
−」、生化学、Vol.64、No.2、pp.111-115, 1992) 、50
mMリン酸塩緩衝液、数〜数十mM 光学活性デタージェン
ト、数〜数十mM SDS からなるキャリアー緩衝液を用い
たバリン、メチオニン、ノルバリン、ロイシン、ノルロ
イシン、トリプトファンの分析（三村典行、満野千加
子、伊藤裕子、木下俊夫、花井俊彦、「光学活性デター
ジェントを用いるキャピラリーMEKCによる光学分割」、
第12回キャピラリー電気泳動シンポジウム、pp.45-46、
1992) 、20mMリン酸塩緩衝液、20% メタノール、100mM
β−サイクロデキストリン、5M尿素、60mM SDSからなる
キャリアー緩衝液を用いたロイシンの分析（「キャピラ
リー電気泳動基礎概論」、p.35、ウォ−ターズクロマト
グラフィー事業部、日本ミリポアリミテッド発行）等が
それぞれ報告される。これらはいずれもそれぞれの分析
条件の違いによって、分解可能なアミノ酸が限られてい
る。これらの報告例において、検出波長、印加電圧、キ
ャピラリー有効長、試料注入法に大きな差異は見られな
いが、キャリアー緩衝液に関しては種々の成分が使用さ
れており、それらがＬ型アミノ酸とＤ型アミノ酸の分離
に及ぼす影響が大きいことが示唆される。
量ずつ生成されるが、通常必要とされるのはＬ型であ
る。食品や医薬品製造分野では合成したアミノ酸（Ｌ型
とＤ型の混合物）をさらに分離してＬ型のみを抽出しな
ければならない。従来、アミノ酸の光学分割（Ｌ型とＤ
型を分離すること）には、ガスクロマトグラフィー（Ｇ
Ｃ）、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）などが
用いられてきたが、分離性能が低い上に試料を多量に必
要とした。また、専用の分離カラムを使用する必要があ
るため操作が煩雑で、分析に要するコストも比較的高い
等の欠点が見られた。これらの欠点を補う分析技術とし
て最近、キャピラリー電気泳動装置を用いたアミノ酸の
分析法が検討されている。例えば、100mM ホウ酸塩緩衝
液、60mMγ−サイクロデキストリン、100mM SDS (pH8.
3) からなるキャリアー緩衝液を用いたフェニルアラニ
ン、バリン、ロイシン、メチオニン、グルタミン酸の分
析（寺部茂、「キャピラリー電気泳動 −原理と応用
−」、生化学、Vol.64、No.2、pp.111-115, 1992) 、50
mMリン酸塩緩衝液、数〜数十mM 光学活性デタージェン
ト、数〜数十mM SDS からなるキャリアー緩衝液を用い
たバリン、メチオニン、ノルバリン、ロイシン、ノルロ
イシン、トリプトファンの分析（三村典行、満野千加
子、伊藤裕子、木下俊夫、花井俊彦、「光学活性デター
ジェントを用いるキャピラリーMEKCによる光学分割」、
第12回キャピラリー電気泳動シンポジウム、pp.45-46、
1992) 、20mMリン酸塩緩衝液、20% メタノール、100mM
β−サイクロデキストリン、5M尿素、60mM SDSからなる
キャリアー緩衝液を用いたロイシンの分析（「キャピラ
リー電気泳動基礎概論」、p.35、ウォ−ターズクロマト
グラフィー事業部、日本ミリポアリミテッド発行）等が
それぞれ報告される。これらはいずれもそれぞれの分析
条件の違いによって、分解可能なアミノ酸が限られてい
る。これらの報告例において、検出波長、印加電圧、キ
ャピラリー有効長、試料注入法に大きな差異は見られな
いが、キャリアー緩衝液に関しては種々の成分が使用さ
れており、それらがＬ型アミノ酸とＤ型アミノ酸の分離
に及ぼす影響が大きいことが示唆される。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は、キャ
リアー緩衝液の組成を検討することにより、特定のアミ
ノ酸に有効な、新規なＬ型およびＤ型アミノ酸の分析法
を提供することにある。
リアー緩衝液の組成を検討することにより、特定のアミ
ノ酸に有効な、新規なＬ型およびＤ型アミノ酸の分析法
を提供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは上記課題を
解決すべく鋭意研究を重ねた結果、今までに報告されて
いない分析条件で特定のアミノ酸のＬ型およびＤ型を良
好に分析する方法を開発し、本発明を完成した。
解決すべく鋭意研究を重ねた結果、今までに報告されて
いない分析条件で特定のアミノ酸のＬ型およびＤ型を良
好に分析する方法を開発し、本発明を完成した。
【０００５】すなわち、本発明は、リン酸塩緩衝液、β
−サイクロデキストリン、尿素、ドデシル硫酸ナトリウ
ム（ＳＤＳ）を含むキャリアー緩衝液を用いたキャピラ
リー電気泳動による、フェニルアラニン、バリン、メチ
オニン、アラニンを含むＬ型およびＤ型アミノ酸の分析
法である。
−サイクロデキストリン、尿素、ドデシル硫酸ナトリウ
ム（ＳＤＳ）を含むキャリアー緩衝液を用いたキャピラ
リー電気泳動による、フェニルアラニン、バリン、メチ
オニン、アラニンを含むＬ型およびＤ型アミノ酸の分析
法である。
【０００６】本発明に用いるキャリアー緩衝液は、30〜
100mM、好ましくは50mMのリン酸塩緩衝液、50〜150mM、
好ましくは100mMのβ−サイクロデキストリン、３〜6
M、好ましくは 5M の尿素、50〜100mM、好ましくは75〜
95mM、さらに好ましくは85mMのドデシル硫酸ナトリウム
（ＳＤＳ）を含み、ｐＨは6.0〜8.0、好ましくは7.0で
ある。
100mM、好ましくは50mMのリン酸塩緩衝液、50〜150mM、
好ましくは100mMのβ−サイクロデキストリン、３〜6
M、好ましくは 5M の尿素、50〜100mM、好ましくは75〜
95mM、さらに好ましくは85mMのドデシル硫酸ナトリウム
（ＳＤＳ）を含み、ｐＨは6.0〜8.0、好ましくは7.0で
ある。
【０００７】本発明におけるキャピラリー電気泳動の条
件は、検出波長185〜220nm、印加電圧８〜30kV、キャピ
ラリー有効長75〜100μm×30〜100cmが例示され、試料
注入は重量法(60秒間) にて行う。
件は、検出波長185〜220nm、印加電圧８〜30kV、キャピ
ラリー有効長75〜100μm×30〜100cmが例示され、試料
注入は重量法(60秒間) にて行う。
【０００８】本発明に用いるキャピラリー電気泳動（Ｃ
Ｅ）の装置として図１の構成が例示できる。該装置はＣ
Ｅシステム部（Ｓ）、データ解析装置（Ｄ）、プリンタ
ー（Ｐ）から構成される。ＣＥシステム部においては、
中空キャピラリー（１）の両端をキャリアー緩衝液
（２）の瓶に浸し、キャピラリー内をキャリアー緩衝液
で満しており、両端のキャリアー緩衝液の瓶に高電圧パ
ワーサプライ（Ｖ）にて接続した電極（３）、さらにキ
ャピラリーの一方の端近くにオンライン検出器（４）が
取り付けられている。キャピラリー電気泳動（ＣＥ）の
装置としては、市販のウォーターズ クォンタTM 4000C
E システム(Millipore製) 、ベックマンP/ACE System 2
00 (Bechman製) 、CE-800 (日本分光製) 、CES(日本ダ
イオネクス製)等が好適に使用される。
Ｅ）の装置として図１の構成が例示できる。該装置はＣ
Ｅシステム部（Ｓ）、データ解析装置（Ｄ）、プリンタ
ー（Ｐ）から構成される。ＣＥシステム部においては、
中空キャピラリー（１）の両端をキャリアー緩衝液
（２）の瓶に浸し、キャピラリー内をキャリアー緩衝液
で満しており、両端のキャリアー緩衝液の瓶に高電圧パ
ワーサプライ（Ｖ）にて接続した電極（３）、さらにキ
ャピラリーの一方の端近くにオンライン検出器（４）が
取り付けられている。キャピラリー電気泳動（ＣＥ）の
装置としては、市販のウォーターズ クォンタTM 4000C
E システム(Millipore製) 、ベックマンP/ACE System 2
00 (Bechman製) 、CE-800 (日本分光製) 、CES(日本ダ
イオネクス製)等が好適に使用される。
【０００９】
【発明の効果】本発明によれば、特定のアミノ酸のＬ型
およびＤ型を極めて良好に、かつ簡便に分析することが
できるので、食品や医薬品の製造分野で生じるアミノ酸
の光学分割に適用できる。
およびＤ型を極めて良好に、かつ簡便に分析することが
できるので、食品や医薬品の製造分野で生じるアミノ酸
の光学分割に適用できる。
【００１０】
【実施例】以下、実施例を挙げて本発明を更に詳細に説
明するが、これらの実施例は本発明の範囲を何等限定す
るものではない。 〔実施例１〕 アミノ酸の分析 下記の分析条件により、フェニルアラニン、バリン、メ
チオニン、アラニンを含む標品についてウォーターズ
クォンタTM 4000CE システム(Millipore製) を用いてキ
ャピラリー電気泳動を行った。 ・キャリアー緩衝液：50mMリン酸塩緩衝液／100mM β−
サイクロデキストリン／5M 尿素、85mM SDS (pH7.0) ・検出波長：214 nm ・印加電圧：20kV ・キャピラリー有効長:75μm×52.5cm ・試料注入法: 重力法 (60秒間)
明するが、これらの実施例は本発明の範囲を何等限定す
るものではない。 〔実施例１〕 アミノ酸の分析 下記の分析条件により、フェニルアラニン、バリン、メ
チオニン、アラニンを含む標品についてウォーターズ
クォンタTM 4000CE システム(Millipore製) を用いてキ
ャピラリー電気泳動を行った。 ・キャリアー緩衝液：50mMリン酸塩緩衝液／100mM β−
サイクロデキストリン／5M 尿素、85mM SDS (pH7.0) ・検出波長：214 nm ・印加電圧：20kV ・キャピラリー有効長:75μm×52.5cm ・試料注入法: 重力法 (60秒間)
【００１１】図２に示す如く、フェニルアラニン、バリ
ン、メチオニン、アラニンのＤ型、Ｌ型に対応する極め
て明確な８本のピークを検出することができた。尚、試
薬の組成上出現するメチルアミン、DL型の区別のないグ
リシンについてもピークを確認できた。
ン、メチオニン、アラニンのＤ型、Ｌ型に対応する極め
て明確な８本のピークを検出することができた。尚、試
薬の組成上出現するメチルアミン、DL型の区別のないグ
リシンについてもピークを確認できた。
【００１２】〔比較例〕キャリアー緩衝液として以下の
ものを使用する以外は、実施例１と同様なる条件でフェ
ニルアラニン、バリン、メチオニン、アラニンを含む標
品についてキャピラリー電気泳動を行った。 キャリアー緩衝液：100mM ホウ酸塩緩衝液、60mMγ
−サイクロデキストリン、100mM SDS (pH8.3) キャリアー緩衝液：50mMリン酸塩緩衝液、15mM 光
学活性デタージェント(オクチル−β−Ｄ−チオグルコ
シド）、20mM SDS (pH7.0) キャリアー緩衝液：20mMリン酸塩緩衝液、20% メタ
ノール、100mM β−サイクロデキストリン、5M尿素、60
mM SDS (pH7.0) 、、のキャリアー緩衝液を使用した場合の分析結
果を図３、図４、図５にそれぞれ示した。各分析結果よ
り明らかなように、ピークが出ていても分離が悪かった
り（図３）、分離が全く不能であったり（図４）、ピー
ク数が足らなかったり（図５）していずれも上記のアミ
ノ酸の分析には不適当であった。
ものを使用する以外は、実施例１と同様なる条件でフェ
ニルアラニン、バリン、メチオニン、アラニンを含む標
品についてキャピラリー電気泳動を行った。 キャリアー緩衝液：100mM ホウ酸塩緩衝液、60mMγ
−サイクロデキストリン、100mM SDS (pH8.3) キャリアー緩衝液：50mMリン酸塩緩衝液、15mM 光
学活性デタージェント(オクチル−β−Ｄ−チオグルコ
シド）、20mM SDS (pH7.0) キャリアー緩衝液：20mMリン酸塩緩衝液、20% メタ
ノール、100mM β−サイクロデキストリン、5M尿素、60
mM SDS (pH7.0) 、、のキャリアー緩衝液を使用した場合の分析結
果を図３、図４、図５にそれぞれ示した。各分析結果よ
り明らかなように、ピークが出ていても分離が悪かった
り（図３）、分離が全く不能であったり（図４）、ピー
ク数が足らなかったり（図５）していずれも上記のアミ
ノ酸の分析には不適当であった。
【図１】 本発明に用いるキャピラリー電気泳動の装置
の一例を示す。
の一例を示す。
【図２】 本願発明に係るキャリアー緩衝液によるフェ
ニルアラニン、バリン、メチオニン、アラニンのＬおよ
びＤ型のアミノ酸分析結果を示す。
ニルアラニン、バリン、メチオニン、アラニンのＬおよ
びＤ型のアミノ酸分析結果を示す。
【図３】 キャリアー緩衝液（）による同アミノ酸分
析結果を示す。
析結果を示す。
【図４】 キャリアー緩衝液（）による同アミノ酸分
析結果を示す。
析結果を示す。
【図５】 キャリアー緩衝液（）による同アミノ酸分
析結果を示す。
析結果を示す。
１：中空キャピラリー ２：キャリアー緩衝液 ３：電極 ４：オンライン検出器 Ｓ：ＣＥシステム部 Ｄ：データ解析装置 Ｐ：プリンター Ｖ：高電圧パワーサプライ
Claims (2)
- 【請求項１】 リン酸塩緩衝液、β−サイクロデキスト
リン、尿素、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を含む
キャリアー緩衝液を用いたキャピラリー電気泳動による
Ｌ型およびＤ型アミノ酸の分析法。 - 【請求項２】 アミノ酸がフェニルアラニン、バリン、
メチオニン、アラニンを含むことを特徴とする、請求項
１記載の分析法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6251026A JPH08114575A (ja) | 1994-10-17 | 1994-10-17 | Ｌ型およびｄ型アミノ酸の分析法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6251026A JPH08114575A (ja) | 1994-10-17 | 1994-10-17 | Ｌ型およびｄ型アミノ酸の分析法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08114575A true JPH08114575A (ja) | 1996-05-07 |
Family
ID=17216520
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6251026A Pending JPH08114575A (ja) | 1994-10-17 | 1994-10-17 | Ｌ型およびｄ型アミノ酸の分析法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH08114575A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6929729B2 (en) * | 2000-01-27 | 2005-08-16 | Spectrumedix Llc | Method for conducting capillary zone electrophoresis |
| JP2005326407A (ja) * | 2004-05-10 | 2005-11-24 | Sebia | キャピラリー電気泳動によりタンパク質を分離する改良方法とキャピラリー電気泳動用バッファー組成物 |
-
1994
- 1994-10-17 JP JP6251026A patent/JPH08114575A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6929729B2 (en) * | 2000-01-27 | 2005-08-16 | Spectrumedix Llc | Method for conducting capillary zone electrophoresis |
| JP2005326407A (ja) * | 2004-05-10 | 2005-11-24 | Sebia | キャピラリー電気泳動によりタンパク質を分離する改良方法とキャピラリー電気泳動用バッファー組成物 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Scriba | Pharmaceutical and biomedical applications of chiral capillary electrophoresis and capillary electrochromatography: An update | |
| Liu et al. | Capillary electrophoresis of amino sugars with laser-induced fluorescence detection | |
| Nishi | Enantiomer separation of drugs by electrokinetic chromatography | |
| Gershey et al. | Chemical studies of histone acetylation: the occurrence of ε-N-acetyllysine in the f2a1 histone | |
| Harada et al. | A method usingL/CMS for determination of absolute configuration of constituent amino acids in peptide---advanced Marfey's method--- | |
| Patrick et al. | Review applications of capillary electrophoresis to the analysis of biotechnology‐derived therapeutic proteins | |
| AU7022787A (en) | Process for purifying recombinant proteins, and products thereof | |
| JP2016027345A (ja) | 糖鎖試料調製方法 | |
| EA200100485A1 (ru) | Соединение сдлс и способ его измерения | |
| Weber et al. | Characterization of glycopeptides from recombinant coagulation factor VIIa by high-performance liquid chromatography and capillary zone electrophoresis using ultraviolet and pulsed electrochemical detection | |
| JPH02107960A (ja) | 荷電または分極性巨大分子を電気泳動により分離、精製および濃縮するための方法および装置 | |
| Landon et al. | Sequence of Bovine Liver Glutamate Dehydrogenase: I. Isolation of Tryptic Peptides from the Carboxymethylated Protein | |
| Oka et al. | Improvement of chemical analysis of antibiotics. 22. Identification of residual tetracyclines in honey by frit FAB/LC/MS using a volatile mobile phase | |
| Skanchy et al. | Resolution of acylated dipeptide stereoisomers by capillary electrophoresis using sulfobutylether derivatized β‐cyclodextrin | |
| JPH08114575A (ja) | Ｌ型およびｄ型アミノ酸の分析法 | |
| Grammer et al. | Chemistry and mechanism of vanadate-promoted photooxidative cleavage of myosin | |
| López‐Soto‐Yarritu et al. | Comparison of different capillary electrophoresis methods for analysis of recombinant erythropoietin glycoforms | |
| Krueger et al. | Analysis of endoproteinase Arg C action on adrenocorticotrophic hormone by capillary electrophoresis and reversed-phasse high-performance liquid chromatography | |
| Fukui et al. | Isolation from bovine brain of a novel analgesic pentapeptide, neo-kyotorphin, containing the Tyr-Arg (kyotorphin) unit | |
| Kaneta et al. | Determination of cyanine-labeled amino acid enantiomers by cyclodextrin-modified capillary gel electrophoresis combined with diode laser fluorescence detection | |
| KEHL et al. | High-performance liquid chromatography of proteins as applied to fibrinogen chains | |
| Wright et al. | A reassessment of structure-function relationships in glucagon. Glucagon1-21 is a full agonist. | |
| Kašička et al. | Application of capillary and free-flow zone electrophoresis and isotachophoresis to the analysis and preparation of the synthetic tetrapeptide fragment of growth hormone-releasing peptide | |
| Jadaud et al. | The stereochemical resolution of the enantiomers of aspartame on an immobilized α‐chymotrypsin hplc chiral stationary phase: The effect of mobile‐phase composition and enzyme activity | |
| AU3537697A (en) | A process and an apparatus for purifying and concentrating molecules |