CN1724687A - 血管紧张素转换酶2基因与原发性高血压的相关性 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种检测原发性高血压易感性的方法，它包括检测个体的血管紧张素转换酶2基因ACE2、转录本和/或蛋白与正常相比是否存在变异，存在变异就表明该个体患原发性高血压的可能性大于正常人群。本发明还公开了相应的检测试剂盒。
Description
技术领域
本发明涉及分子生物学和医学领域。更具体地涉及人血管紧张素转换酶2基因(Angiotensin converting enzyme 2 gene，ACE2)的单核苷酸多态性(singlenucleotide polymorphism，SNP)及其与原发性高血压的相关性。本发明还涉及检测这些SNP的方法和试剂盒。
背景技术
原发性高血压(essential hypertension，EH)是最常见的心血管疾病，其发病率逐年上升，并可引起严重的心、脑、肾并发症，是脑卒中和冠心病的主要危险因素。EH是一种由遗传因素和环境因素相互作用而发病的多基因病，寻找EH相关基因进而阐明高血压发病的遗传机制已经成为目前研究的热点(HarrapSB.Hypertension：genes versus environment.Lancet，1994，344：169-171)。
肾素-血管紧张素(RAS)系统是体内调节血压和水盐代谢的重要系统。血管紧张素II(AngII)是RAS系统中一个重要的血管收缩剂，血管紧张素转换酶(ACE)主要将血管紧张素I(AngI)转换成AngII，而ACE2却将AngI转化成血管舒张剂Ang(1-7)，并且这种作用是不被ACE抑制剂所阻滞的(Tipnis SR，Hooper NM，Hyde R，et al.A human homolog of angiotensin-converting enzyme：cloningand functional expression as a captopril-insensitive carboxypeptidase.J Biol Chem 2000；275：33238-33243)。近年来有许多研究提示ACE2与血压和心血管结构功能的关系密切。小鼠ace2基因的定位相当于人的X染色体，该部位存在与血压相关的数量性状位点(Hilbert P，Lindpaintner K，BeckmannJS，et al.Chromosomal mapping of two genetic loci associated withblood-pressure regulation in hereditary hypertensive rats.Nature1991；353：521-529)，ace2基因敲除小鼠的基础血压较正常小鼠高10-20mmHg(Allre AJ，Donoghue M，Acton S，et al.Regulation of blood pressureby the angiotensin converting enzyme homologue ACE2.Paper presentedat：35th Annual Meeting of the American Society of Nephrology；November1-4，2002；Philadelphia，PA)，提示ace2可能是X染色体上与血压相关的候选基因。同时研究发现ace2基因敲除小鼠的心脏功能发生了严重的损害，果蝇ACER基因(ACER相当与人的ACE2基因)敲除后，也出现了心脏管的形成缺陷，导致心脏祖细胞数量减少和中胚层的发育异常(Crackower MA，Sarao R，Oudit GY，et al.Angiotensin-converting enzyme 2 is an essentialregulator of heart function.Nature 2002；417：822-823)。因此，已有学者提出了ACE2基因调节血压的假说机制，并认为ACE2可能成为心血管治疗中的一个重要的靶点，但目前没有证实ACE2基因与原发性高血压相关性的报道，更没有证实ACE2基因的SNP与原发性高血压相关性的报道。
综上所述，为了最终实现治疗高血压，本领域迫切需要寻找原发性高血压易感基因，并开发检测原发性高血压的方法、试剂盒，以及相关的治疗药物。
发明内容
本发明的目的就是提供一种辅助性诊断(尤其是早期诊断)高血压等高血压的方法及检测试剂盒。
本发明的另一目的是提供一种新的治疗高血压的方法。
本发明的再一目的是提供一种治疗高血压的药物组合物。
在本发明的第一方面，提供了一种对个体的高血压易感性进行辅助性诊断的方法，它包括步骤：
检测该个体的ACE2基因、转录本和/或蛋白，并与正常的ACE2基因、转录本和/或蛋白相比较，
存在差异就表明该个体患高血压的可能性高于正常人群。
在另一优选例中，检测的是ACE2的基因或转录本，并与正常ACE2核苷酸序列比较差异。
在另一优选例中，所述的差异是选自下组的单核苷酸多态性：
1790位A→G；
16286位G→A；
28308位A→G；
36150位A→G；
其中，核苷酸位置编号基于SEQ ID NO：1。
在本发明的第二方面，提供了一种检测样品是否存在ACE2基因的单核苷酸多态性的方法，包括步骤：
(a)用ACE2基因特异性引物扩增样品的ACE2基因，得到扩增产物；和
(b)检测扩增产物中是否存在选自下组的单核苷酸多态性：
11790位A→G；
16286位G→A；
28308位A→G；
36150位A→G；
其中，核苷酸位置编号基于SEQ ID NO：1。
在另一优选例中，所述的单核苷酸多态性是28308位AG。
在本发明的第三方面，提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的ACE2蛋白以及药学上可接受的载体。
还提供了严重ACE2基因和蛋白的用途，它们被用于(a)制备辅助性检测的试剂；或(b)制备治疗高血压的药物。
在本发明的第四方面，提供了一种用于辅助性检测高血压的试剂盒，它包括特异性扩增ACE2基因或转录本的引物和说明书。
在另一优选例中，所述的试剂盒还含有选自下组的试剂：
(a)与突变部位结合的探针；
(b)识别突变位点的限制性内切酶。
在另一优选例中，所述的突变选自：
11790位A→G；
16286位G→A；
28308位A→G；
36150位A→G；
其中，核苷酸位置编号基于SEQ ID NO：1。
更佳地，所述的单核苷酸多态性是28308位AG。
附图说明
图1显示了ACE2的一种SNP图像(以SNP03为例)的测序结果。
具体实施方式
本发明人经过多年研究，首次发现和证明了ACE2基因与高血压密切相关，而且发现了它的新功能：ACE2的改变将导致高血压，其中关联研究结果显示，在ACE2第28308位的SNP03(A/G)在病例和对照组中的分布存在显著性差异(P＜0.05)，该SNP多态可改变氨基酸编码进而可能影响基因表达产物的功能，因此与高血压发病存在密切的相关性。基于此发现，本发明提供了利用检测ACE2基因、转录本或蛋白是否存在突变，从而为诊断高血压提供辅助性或早期参考指标的方法和试剂盒。
ACE2基因的总长度为42975bp。其详细序列可参见登录号为NM_021804的核苷酸序列(可参见网址http：//genome.ucsc.edu/或http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/)或参见SEQ ID NO：1。
基于本发明的新发现，ACE2蛋白或多肽有多方面的新用途。这些用途包括(但不限于)：直接做为药物治疗ACE2蛋白功能低下或丧失所致的疾病(如高血压)，和用于筛选促进ACE2蛋白功能的物质，如抗体、多肽或其它配体。用表达的重组人ACE2蛋白筛选多肽库可用于寻找有治疗价值的能刺激人ACE2蛋白功能的多肽分子。
另一方面，本发明还包括对人ACE2 DNA或是其片段编码的多肽具有特异性的多克隆抗体和单克隆抗体，尤其是单克隆抗体。这里，“特异性”是指抗体能结合于人ACE2基因产物或片段。较佳地，指那些能与人ACE2基因产物或片段结合但不识别和结合于其它非相关抗原分子的抗体。本发明中抗体包括那些能够结合并抑制人ACE2蛋白的分子，也包括那些并不影响人ACE2蛋白功能的抗体。
本发明不仅包括完整的单克隆或多克隆抗体，而且还包括具有免疫活性的抗体片段，如Fab’或(Fab)2片段；抗体重链；抗体轻链；遗传工程改造的单链Fv分子；或嵌合抗体。
本发明的抗体可以通过本领域内技术人员已知的各种技术进行制备。例如，纯化的人ACE2基因产物或者其具有抗原性的片段，可被施用于动物以诱导多克隆抗体的产生。与之相似的，表达人ACE2蛋白或其具有抗原性的片段的细胞可用来免疫动物来生产抗体。多种佐剂可用于增强免疫反应，包括但不限于弗氏佐剂等。
本发明的抗体也可以是单克隆抗体。此类单克隆抗体可以利用杂交瘤技术来制备。本发明的抗体包括能阻断人ACE2蛋白功能的抗体以及不影响人ACE2蛋白功能的抗体。本发明的各类抗体可以利用人ACE2基因产物的片段或功能区，通过常规免疫技术获得。这些片段或功能区可以利用重组方法制备或利用多肽合成仪合成。与人ACE2基因产物的未修饰形式结合的抗体可以用原核细胞(例如E.Coli)中生产的基因产物来免疫动物而产生；与翻译后修饰形式结合的抗体(如糖基化或磷酸化的蛋白或多肽)，可以用真核细胞(例如酵母或昆虫细胞)中产生的基因产物来免疫动物而获得。
抗人ACE2蛋白的抗体可用于免疫组织化学技术中，检测活检标本中的人ACE2蛋白。一种优选的抗ACE2抗体是不识别正常ACE2但识别突变ACE2的抗体，或者识别正常ACE2但不识别突变ACE2的抗体。利用该抗体对正常和异常ACE2蛋白的特异性差异，可以方便地进行蛋白质水平的高血压易感性检测。
利用本发明ACE2蛋白，通过各种常规筛选方法，可筛选出与ACE2蛋白发生相互作用的物质，如抑制剂、激动剂或拮抗剂等。
本发明ACE2蛋白及其抗体、抑制剂、激动剂、拮抗剂等，当在治疗上进行施用(给药)时，可提供不同的效果。通常，可将这些物质配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的水性载体介质中，其中pH通常约为5-8，较佳地pH约为6-8，尽管pH值可随被配制物质的性质以及待治疗的病症而有所变化。配制好的药物组合物可以通过常规途径进行给药，其中包括(但并不限于)：肌内、静脉内、或皮下给药。
正常的ACE2多肽可直接用于疾病治疗，例如，用于高血压治疗。在使用本发明ACE2蛋白时，还可同时使用其他治疗高血压的药剂。
本发明还提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的本发明ACE2蛋白以及药学上可接受的载体或赋形剂。这类载体包括(但并不限于)：盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其组合。药物制剂应与给药方式相匹配。本发明的药物组合物可以被制成针剂形式，例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他辅剂的水溶液通过常规方法进行制备。诸如片剂和胶囊之类的药物组合物，可通过常规方法进行制备。药物组合物如针剂、溶液、片剂和胶囊宜在无菌条件下制造。活性成分的给药量是治疗有效量，例如每天约0.1微克/千克体重-约10毫克/千克体重。此外，本发明的多肽还可与其他治疗剂一起使用。
使用药物组合物时，是将安全有效量的ACE2蛋白或其拮抗剂、激动剂施用于哺乳动物，其中该安全有效量通常至少约0.1微克/千克体重，而且在大多数情况下不超过约10毫克/千克体重，较佳地该剂量是约0.1微克/千克体重-约100微克/千克体重。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。
人ACE2蛋白的多聚核苷酸也可用于多种治疗目的。基因治疗技术可用于治疗由于ACE2蛋白的无表达或异常/无活性的ACE2蛋白的表达所致的细胞增殖、发育或代谢异常。构建携带ACE2基因的重组病毒载体的方法可见于已有文献(Sambrook，et al.)。另外重组人ACE2基因可包装到脂质体中，然后再转移至细胞内。
多聚核苷酸导入组织或细胞内的方法包括：将多聚核苷酸直接注入到体内组织中；或在体外通过载体(如病毒、噬菌体或质粒等)先将多聚核苷酸导入细胞中，再将细胞移植到体内等。
本发明还涉及定量和定位检测人ACE2蛋白水平的诊断试验方法。这些试验是本领域所熟知的，且包括FISH测定和放射免疫测定。
一种检测检测样品中是否存在ACE2蛋白的方法是利用ACE2蛋白的特异性抗体进行检测，它包括：将样品与ACE2蛋白特异性抗体接触；观察是否形成抗体复合物，形成了抗体复合物就表示样品中存在ACE2蛋白。
ACE2蛋白的多聚核苷酸可用于ACE2蛋白相关疾病的诊断和治疗。在诊断方面，ACE2蛋白的多聚核苷酸可用于检测ACE2蛋白的表达与否或在疾病状态下ACE2蛋白的异常表达。如ACE2 DNA序列可用于对活检标本的杂交以判断ACE2蛋白的表达异常。杂交技术包括Southern印迹法，Northern印迹法、原位杂交等。这些技术方法都是公开的成熟技术，相关的试剂盒都可从商业途径得到。本发明的多核苷酸的一部分或全部可作为探针固定在微阵列(microarray)或DNA芯片(又称为“基因芯片”)上，用于分析组织中基因的差异表达分析和基因诊断。用ACE2蛋白特异的引物进行RNA-聚合酶链反应(RT-PCR)体外扩增也可检测ACE2蛋白的转录产物。
检测ACE2基因的突变也可用于诊断高血压。检测可以针对cDNA，也可针对基因组DNA。ACE2蛋白突变的形式包括与正常野生型ACE2 DNA序列相比的点突变、易位、缺失、重组和其它任何异常等。一类优选的突变是表2所示的SNP。可用已有的技术如Southern印迹法、DNA序列分析、PCR和原位杂交检测突变。另外，突变有可能影响蛋白的表达，因此用Northern印迹法、Western印迹法可间接判断基因有无突变。
本发明的主要优点在于：
首次用实验证实了ACE2的改变与高血压的密切相关性，进而提供了辅助性诊断高血压(或易感性)的方法和试剂盒。本发明可以为临床诊断(尤其是早期诊断)高血压提供极为有价值的辅助性参考指标，从而有利于实现早诊断、早预防、早得益。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York：Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1
1对象与方法
1.1研究对象
1.1.1中国人SNP发现和确认样本
样本为来自24个核心汉族高血压家系、无亲缘关系的24例原发性高血压病人。
1.1.2SNP分型和关联分析研究样本
所有受试者均为汉族。原发性高血压组(EH组)和正常血压组(NT组)各96例，均来自中国上海地区，彼此无亲缘关系。EH组为上海市瑞金医院高血压科住院病人，均为汉族，无亲缘关系。共390人，平均年龄为57.32±11.75岁。入选标准：
收缩压140mmHg和/或舒张压90mmHg，或正在接受抗高血压药物治疗至少一年以上；
在30岁之前或60岁以后发病者除外；
临床上除外继发性高血压，如原发性醛固酮增多症、嗜铬细胞瘤、肾性高血压等。
NT组为上海地区40岁以上居民，均为汉族，无亲缘关系。共440例，平均年龄56.39±6.45岁。收缩压＜140mmHg且舒张压＜90mmHg，无服用抗高血压药物史，排除肝、肾功能障碍、甲状腺疾病、糖尿病、冠心病史。
1.2实验方法
1.2.1DNA提取
常规酚-氯仿法提取外周血白细胞DNA，并标化DNA浓度值至20ng/μl。
1.2.2PCR及测序引物的设计
根据GenBank中ACE2的基因组序列，应用prime3软件(美国麻省理工生物医学白头研究所，http：//www-gonome.wi.mit.edu/cgi-bin/primer/primer3_www.cgi)设计引物。具体引物如下表所示。
表1引物序列表
| 引物名称 | 位置 | 序列(5’-3’) | SEQ ID NO： |
| ACE2P1 | 上游 | attttcctgcctgcctcact | 2 |
| 下游 | ctgcatcaaaaagaggtgga | 3 | |
| ACE2P2 | 上游 | ggaatgtgggaggagctttt | 4 |
| 下游 | ccactgcttttccttattcca | 5 | |
| ACE2P3 | 上游 | tgcctccactattgcttttaga | 6 |
| 下游 | tagccatgggatcacaacaa | 7 | |
| ACE2P4 | 上游 | ccctgccatttaaagtgctc | 8 |
| 下游 | cacgcccagctaagtttttg | 9 | |
| ACE2P5 | 上游 | agttgggcagatcacaaggt | 10 |
| 下游 | ttcatcctggagaggacaga | 11 | |
| ACE2E1 | 上游 | ttggccataaagtgacagga | 12 |
| 下游 | ttcagtttcacgggcagtaa | 13 | |
| ACE2E2 | 上游 | tggcctggtcactcttaacc | 14 |
| 下游 | ttcactctcaaagattccagtttg | 15 | |
| ACE2E3 | 上游 | tttgggttttggtagatctgg | 16 |
| 下游 | tgaaacacacatatctgcaatca | 17 | |
| ACE2E4 | 上游 | gggcaaggacatgaatgaat | 18 |
| 下游 | atatcaaagggcaggcttgg | 19 | |
| ACE2E5 | 上游 | tgcatccctttgagttgatg | 20 |
| 下游 | gaatgagccagaatgccttt | 21 |
| ACE2E6 | 上游 | ttttgggacctgtgttctcc | 22 |
| 下游 | ggctcactcaaaaaggcaat | 23 | |
| ACE2E7 | 上游 | tgatctcttttgaagccaaca | 24 |
| 下游 | tgaggccattgtaaactgctt | 25 | |
| ACE2E8 | 上游 | acgctttgaccatcatctcc | 26 |
| 下游 | ctggcaatcctcttttcctg | 27 | |
| ACE2E9 | 上游 | agctgtgcccattgctttat | 28 |
| 下游 | cctcataccttatgtggcaaaa | 29 | |
| ACE2E10 | 上游 | ctgttctgttccagggcttc | 30 |
| 下游 | agtgtcacctgacccaagga | 31 | |
| ACE2E11 | 上游 | agttatgcccacctgcttgt | 32 |
| 下游 | ttgggatgtaaccccattgt | 33 | |
| ACE2E12 | 上游 | gcatcatttatgtgaaagggcta | 34 |
| 下游 | aggttcctgtctgaccacaaa | 35 | |
| ACE2E13 | 上游 | agagcggtttagggtggaat | 36 |
| 下游 | ggccaaaggagactagacga | 37 | |
| ACE2E14 | 上游 | ttggctctttgtgggtctgt | 38 |
| 下游 | caaagccaaaggccagaat | 39 | |
| ACE2E15 | 上游 | cccttcaggtgatacggatg | 40 |
| 下游 | atggagtcacccaaattcca | 41 | |
| ACE2E16 | 上游 | tcccccatgtctctctatcct | 42 |
| 下游 | ttgcccatagtggtaacttgc | 43 | |
| ACE2E17 | 上游 | ccatgcctggctaggtgtat | 44 |
| 下游 | aaatttctagggaatgcatcaga | 45 | |
| ACE2E18 | 上游 | tcctagcagtgggaaagctg | 46 |
| 下游 | ctccttggccatgttgtctt | 47 |
1.2.3ACE2基因的调控区和编码区分段体外扩增
以提取的DNA为模板，用Taq酶，在GeneAmp 9700 PCR仪上以Touchdown程序进行PCR扩增。反应条件为：94℃预变性2分钟，94℃变性30秒，63℃退火40秒，72℃延伸40秒，共10个循环，每个循环退火温度递减0.5℃；以后94℃变性30秒，58℃退火40秒，72℃延伸40秒，共30个循环；最后72℃延伸7分钟。PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳验证。
1.2.4SNP的发现和检测
PCR产物经Resin树脂纯化后，用ABI-PRISMTM377 DNA测序仪(美国应用生物系统公司appliedbiosystems(ABI))进行荧光标记末端终止法双向测序，用Polyphred软件(美国华盛顿大学http：//droog.mbt.washington.edu/Polyphred.html)进行序列的判读和SNP确认。
1.2.5SNP基因分型和关联分析
用直接单向测序法进行SNP基因分型。选择外显子区的SNP进行初步分型，即在390个高血压病人和440个正常血压对照组中进行分型和关联分析。
1.3统计学方法
SNPs各基因型在病人和正常血压对照中分布的比较采用R×C表x2检验。P＜0.05认为有统计学差别。
2.结果
2.1ACE2基因SNP的发现和分布
ACE2的基因共有18个外显子，测序总长度是10539bp，共发现4个SNP，包括编码区1个，内含子3个，其中编码区的1个是新发现的SNP。ACE2基因SNP分布情况见表2。测序确认杂合子图像见图1。
表2中国人ACE2基因SNP的种类及其分布
| SNP名称 | 在基因序列中的位置 | 基因区域 | 等位基因 | 检测引物 |
| SNP01 | 11790 | intron | A/G | ACE2E3 |
| SNP02 | 16286 | intron | G/A | ACE2E6 |
| SNP03 | 28308 | exon | A/G | ACE2E10 |
| SNP04 | 36150 | intron | A/G | ACE2E15 |
说明：
(1)表中第一列为SNP的名称；第二列为SNP在ACE2基因序列中的位置；第三列为SNP所属基因区域，exon为外显子区，intron为内含子区；第四列为在等位基因中SNP的两个碱基；第五列为测序所用引物。
(2)SNP03为新发现的SNP(图1)。
2.2SNP位点的基因分型
在390例EH和440例NT中，对SNP03进行基因分型和关联分析。
结果提示，SNP03等位基因分布在两组中有显著差异(P＜0.01)(表3)表明该SNP与高血压显著相关。
表3SNP03基因分型和关联分析结果
| 基因型 | 等位基因频率 | |||||||
| EHNT | 390440 | AA365439 | AG210 | GG41 | A0.960.998 | G0.040.002 | x227.49 | p＜0.01 |
EH，原发性高血压NT，正常血压对照
3.讨论
高血压是遗传因素与多种环境因素相互作用而导致的多基因疾病，其遗传机制的研究已经成为目前的研究热点。迄今研究者已经成功地确定了几种单基因遗传性高血压的候选基因，但占高血压约95％的原发性高血压的遗传方式和易感基因仍未确认。研究候选基因是原发性高血压遗传研究的主要策略之一。RAS系统是体内调节血压和水盐代谢的重要系统，该系统中的AGT、ACE、AT1R、ACE2、REN、RENBP等均为原发性高血压的候选基因。
人的ACE2基因位于X染色体上(Xp22)，基因组全长40kb，有18个外显子，在肾脏、心脏等组织高度表达(Tipnis SR，Hooper NM，Hyde R，et al.A humanhomolog of angiotensin-converting enzyme：cloning and functionalexpression as a captopril-insensitive carboxypeptidase.J Biol Chem2000；275：33238-33243)。虽然与ACE同为锌指蛋白酶，并有40％的同源结构，但二者的生化活性却大有差异。AngII是RAS系统中一个重要的血管收缩剂，ACE主要将AngI转换成AngII，而ACE2却将AngI转化成血管舒张剂Ang(1-7)，并且这种作用是不被ACE抑制剂所阻滞的。近年来虽有动物实验提示ACE2与血压和心血管结构功能的关系密切，但对其的研究特别是多态性方面的研究很少。
本研究首次对中国汉族人群进行了ACE2基因的SNP检测，发现了位于编码区的1个SNP和位于内含子连接区的3个SNP。位于编码区的该SNP尚未被收录于NCBI的SNP数据库(http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/SNP)中。本研究发现这是一个非同义的低频SNP，通过A/G碱基的改变，导致了编码的氨基酸由异亮氨酸(Ile)变为缬氨酸(Val)。该SNP的G等位基因在高血压病例中的频率为4％，在正常人中不到1％。提示我们ACE2基因和原发性高血压的关系是值得关注的，特别是这些低频SNP在高血压中的作用。近年来的研究提示低频SNP在多基因疾病中的地位是不容忽视的。那些有功能意义的SNP，即改变氨基酸编码或致无义突变的SNP将朝着等位基因频率分布的低处移动(Stephens JC，SchneiderJA，Tanguay DA，et al.Haplotype variation and linkage disequilibriumin 313 human genes.Sci ence 2001；293：489-493)，并且往往伴随早显的相对严重的疾病(Botstein D，Risch N.Discovering genotypes underlyinghuman phenotypes：past successes for mendelian disease，futureapproaches for complex disease.Nat Genet 2003；33：228-237)。
由于多基因疾病表现型的复杂性、相关基因的微效性和人群的遗传异质性，其相关基因定位克隆研究一直是一个很大的挑战。在原发性高血压候选基因中筛选多态性标记，然后在病例-对照中进行相关分析是目前寻找疾病相关基因的重要方法之一。SNP数量多、分布广、密度高，是进行遗传连锁分析和关联研究最理想的遗传标记。本研究从ACE2基因的4个SNP中选出一个外显子区改变氨基酸编码的SNP(SNP03)，在上海地区汉族中，通过病例-对照分析，进行它与高血压间的相关性研究。结果表明这个SNP(28308A/G)的2种等位基因频率分布，在390例EH和440例NT之间有显著性差异(P＜0.01)。ACE2基因的这个位于编码区的SNP是一个新发现的SNP，该位点的变异涉及氨基酸编码的改变，设想该位点能够影响ACE2的功能。
实施例2
原发性高血压易感性辅助检测试剂盒
制备一试剂盒，它含有：
名称 序列(5’→3’) 编号 浓度
正向引物 ctgttctgttccagggcttc SEQ ID NO：30 干粉20D
反向引物 agtgtcacctgacccaagga SEQ ID NO：31 干粉20D
PCR反应液 含Taq酶dNTP镁离子PCR反应缓冲液
抽取待检测男性病人的血液3ml，使用常规方法(或使用特定的试剂盒)从血液中提取DNA。将高血压检测试剂盒中的PCR引物稀释到1μmol/μl，以所提取的DNA为模板与所提供的引物进行PCR反应。PCR产物纯化后，用ABI-PRISMTM 377 DNA测序仪进行荧光标记末端终止法双向测序，用Polyphred软件进行序列的判读和SNP确认。检测结果图1所示。其中，含C表示高血压易感性高于正常人群。
用本实施例的试剂盒对近百例待测对象进行了SNP28308的检测，对于检测发现存在28308位A→G的3个对象，再对其进行血压测量，结果证实具有28308位A→G的人的血压高于正常人。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
序列表
<110>上海市高血压研究所
国家人类基因组南方研究中心
<120>血管紧张素转换酶2基因与原发性高血压的相关性
<130>044610
<160>47
<170>PatentIn version 3.1
<210>1
<211>42975
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>1
gtctttggat atattttttt actattgtat tctatcagag aggagatagg gcaggcagca 60
tctgacttat tcctagtgaa ttcctaatgg accagagata tatttttcca agtgcaaatc 120
acattctaaa aattttactt taggccgggt gcggtggctc atgcctgtaa tcccagcact 180
ttgggaggcc gaggcgggca gatcacgagg tcagaagatc gagaccatcc tggctaacac 240
agtgaaaccc cgtctctatt aaaaatacaa aaatattagc tgcgcatggt ggcgggcgcc 300
tgtagtccca gctactcggg aggccgaggc aggagaatgg cgtgaacctg ggaggcggag 360
cttgcagtga gcggagatcg cgccgctgca ctccagcctg ggtgacaaag cgagactccg 420
tctcaaaaaa aaaaaaattt actttatagc tttactaggt gttaaggtca aacttccctt 480
taccattatg aaatccaccc cctcctccaa tctttttgaa acatagaaca tctttcctgc 540
atctttggtc ttctaatttt ttctgattct ccaatttttc tcaaagacaa tacattcctt 600
tagaccaatt gtttttctgg gtctcatctc ctgagtcttc agtgaattct ttccattctc 660
ggaatgcgct cagagagaac gcttctgggg aactatcaga acattgatat cttctcaaaa 720
aagtgtgaac aaaaattcca ataattcagt cagtgcttgc agttggccat tctgggctag 780
tttttctaca gaatcactgt agactattct cccttttccc ttgcttctca aagtttcttg 840
gcttctagca ttttcctgcc tgcctcactg ctgtcccagg ctccttgttc atttattctt 900
agctttcaga ttttatatct tgctttctcc atttcagttt gatcaagtta atcgtatttt 960
ctgcctcagc gaattgaatt tggactactc ccattttttc cactaaaccc acgtgtttca 1020
tttaggaact tacctgtgta gaaatttatt tccgctttta ttacagtaac atttcaacct 1080
tttcttcaga tactcgtgtg ctgtcctctt tcttgcctgt tttttctcct attgtgtgca 1140
aggagtgagt ggatctaggt ttcctggaat gtgggaggag cttttctgaa atttctgcac 1200
tgattttttt tttttaccct catctcactt tcatttaaaa ttctttatta ttattactta 1260
tatttgtgag ctgctttatt tttttaaaag gagagtatat tttgattcac atcaagggaa 1320
gtaagagtcc acctcttttt gatgcagtgt aactaaatct gtcatcttca ctgaggcaca 1380
aggccctctg tcacatttta tctatgcctc cactattgct tttagactgt tgactacaag 1440
ttagttaaga gcctatactc tagaatcaga atacatagat ccatgttctg attccatcat 1500
ttgttagctg agtgagatat agcaatttac ttaaacttag tttcataatt cataaaatgg 1560
tgataaaata tttgcctata ggtttcttgt gatgctcaaa tgagatatta taacacaaag 1620
cactttgaat agttacttat aattgttttt ttcctattct acaataatat acacaacttt 1680
ggaataagga aaagcagtgg acattttttt aaaggcttga ttattgcaat gtcacctgaa 1740
cctggaagac ttgtttttct gggtgaagaa atattttctc tgtgtcagag tttcacaatc 1800
atcgtcaggt aggcccttga accctgccat ttaaagtgct cctctctttg atctgtggca 1860
ctcatacata cactctggca atgaggacac tgagctcgct tctgaaattt gacaagataa 1920
ccactaaaat ctctttgaat tctatgttgt tgtgatccca tggctacaga ggatcaggag 1980
ttgacataga tactctttgg atttcatacc atgtggaggc tttcttactt ccacgtgacc 2040
ttgactgagt tttgaatagg taagtgaagg agaaggaggc actcaaagaa gtcagccaca 2100
gaaccagtgt gagaaatagg aaatgagctt ttttaagttt tgcaaaggca gatcaggaga 2160
gttgacctgt ggagtggaga gtagtcataa ttttaaaaaa tggccatgga aattaaaact 2220
gatcagaaat ggctgggcac agtggctcac gcctgtaatc ctagcacttt gggaggccga 2280
gttgggcaga tcacaaggtc aggagataga gaccgtcctg actaacacgg tgaaaccccg 2340
tctctattaa aaatacaaaa acttagctgg gcgtggtggt gggcacctgt agtcccagct 2400
actcgggagg ctgaggcagg agaatggcgt gaacctggga ggcagagctt gcagtgagcc 2460
gagatcgcgc cactgtgctc cagcctgggc gacagaccga gactcagtct caaaaaaaaa 2520
aaaaaaaaaa aaactgatca gaaatatgaa ttccataaag acaagggcaa agtcatgtat 2580
ttggaaggga aaatgttgcc caagtagaga gtttctggga atatgatctt gaaataaaaa 2640
taaatgtgag ataacctatt aatgaaattg tctgaaaacc atacaaacac caacattatc 2700
ttcatgatcc ctagttctag acctctttgg tcactgtaaa attataacat tttccgtgta 2760
tctttaacag ctttctagga aaatattaac caaaagtacc ggttttgatt tggccataaa 2820
gtgacaggag aggtaaggtt ctctaggatt aaagaataac gtattcttat ttgattcact 2880
ttaaaaaatt attctaaaat ctgttacata tctgtcctct ccaggatgaa ctttatattg 2940
gctcagcaga ttgtttactg tgttcttctt ctttttcttt ttttggtctt tcctgctcag 3000
cgcccaaccc aagttcaaag gctgataaga gagaaaatct catgaggagg ttttagtcta 3060
gggaaagtca ttcagtggat gtgatcttgg ctcacagggg acgatgtcaa gctcttcctg 3120
gctccttctc agccttgttg ctgtaactgc tgctcagtcc accattgagg aacaggccaa 3180
gacatttttg gacaagttta accacgaagc cgaagacctg ttctatcaaa gttcacttgc 3240
ttcttggaat tataacacca atattactga agagaatgtc caaaacatgg tgagttctca 3300
tggctctatt gggctatttg ttgcctctta aagattagat tactgcccgt gaaactgaaa 3360
agggaaatca aaaaaaatgc tctgagttgt gagattggat gtttgcctcc atatccctga 3420
ttttggagtc ccagataact aaacttaatt gaccctgggg ttcattcaga aaattgttac 3480
aaaataattc actggtctca atccagatgc ttggaaacaa gagaatattc tttataaagt 3540
taccaccata attctcatca cagtcaggat ttcaaagcat ttcatggaaa tgccataagt 3600
tattgagtta ataatttcct ttagcctaca atatcaatag gaatatctaa agattctcta 3660
caaatgatat attaactgaa aaatgcaact ggaggcttag tgaaagaact agtaattaag 3720
ctaatcaggg cttgggtgag gctggacttg ggaattcctt tcctctttgt cacagacctc 3780
caagggactc caaaaggtca cagaatccag gcagagccct ccaaaacaaa aacaaaaaca 3840
aacaacaaaa aaactatgat taaaccagtt ctgacaaata tcagaatgct ctgggaaagc 3900
cagatgcttt aacaagtgca aggatttagg aatttcttct ctcacagatc ccaaaacagt 3960
atccttaagt ggtgatcctt atgtcaagct gtgagaatat acctcaaaat aatagaaggc 4020
atccaaactt gatcagtata gtgtcataaa gctgctgatg tagaagtgtg gagaagtcca 4080
tcagatagag atatggaaaa aaaagcttgg ttaaaacagg tttccaaagt tctctccctt 4140
tctctgccat tgtggtatgt gtggttgacc atttctcatc atgttttctt acaagacttt 4200
caggatcaag caattcctcg ccaaaaaaca aaatcaagga cacgttgtag ctatttcttg 4260
gtgagttacc agaagctgtg aagagagagc atgaggccca tacttttttt tttttttgaa 4320
gggtctcgct ctgttgccca ggctggaatg gagtggcatg atcatgattc attgcagctt 4380
gacctcctgg gctcaaatga tcctctcgca tcatttaaca tttttttttg tagagatgag 4440
atctcacttt gtctcccagg ctggtcttga actcctgggc tcaagtgatc ctcttgcctc 4500
aggctcccaa agtgctggga tgacaggcat gagccactgc acctagccta ccacacttac 4560
tctttgcgtg gtctctagag cttcttcagc ccccctgctg ccagggtccc tagggtcttg 4620
ggcatgcccc atttctgaac ctattcctgt ctccagggat agagtcacag tgaactcaga 4680
ccagggtaat tctaaactgc tattctgtat atacccaagg aaatttcatc cctgtctcta 4740
atgagtctgt cccatgcccc ttaatacaca tgaacaccta cacacaggta caagtcgggg 4800
aagatcactg tgcagcacat aaaataaaat tcaggggcga gcactttttt tcccatgaga 4860
taaagttagg aaaaaataaa aatgttcata cagattaaaa attttaaatg ttaaaatatt 4920
aaacccccaa tctaaaataa agaaaaaata atttcttaaa tcctaagctt gagttatgga 4980
attcacattc ttataattta cattacctat tttgttaaat ggaagacttt tttttttaat 5040
atgcaagtac ctgggcatat ttagaaagta accaaggcag cttttgtctt tgaacctgat 5100
gcggttttga cagctctatc tggaaattga gccagcatat gggagccaag ggtgaaagtt 5160
ttcctgggag atttgggctc caaggtactg gatagatgct aaagattcca ttcagttttt 5220
cattttctgt cttcatggaa ctctcacacc tacaggggaa gaaatggttt agaggttact 5280
aaaagtatat agcctggttt aggtgatagt gagctataga aaaagagaaa ataagttgtc 5340
aatactttaa atctcaaaca acttcttaca aaaggatttt aatagtttaa atacaattat 5400
cacaagttgg gtaaagacaa ccagacctat ggcctgataa atcatgtatt taatttatgc 5460
atatagttag ggccaaaaag agcagagtat ctttttgaat gttttaaaat ataatctagg 5520
attttatgcc tacagtcctt gaaattacaa aggatctctc tcaagttggg aatatgctat 5580
ccattgcagt tacggatggg atttagagac tgttttaatt tcttgtgatt atctcaaaca 5640
acgtgttcct tactcccaaa actcccttgt atggctacag aaactgttgc agttttagtt 5700
gcttctcccc tgcctttgcc cagaggtagt gtggaatgcc accaatttta tctgtaatgg 5760
ttcctttcaa gcctggggct atgtaagctg ctatatatgc ttcattccat tcatcattca 5820
gtctaaatat agctatcaac cactaaatta tctgataggt atgcatgaac tgactgattc 5880
tttgcataac tactaagcta tctgttttat ttaggcttgg gagccctagg gtaaggatac 5940
ggaataaatt gtaaatgata ttaaaagaat agcttggcaa ggaataatac ctcctcaggg 6000
gccaaaatgc aaggcaacac aaagtgattt ttttggtgat ataattataa cacatgtagt 6060
atggtagtga taactaaaat aaaattggat agcctcaaaa ttcctacatg tagtatgata 6120
aacaatgttc taagactgag gcctttggga ggtagtgagt tatttcctat agatagagag 6180
taaaattatt cctataattt ggtatgaaag ttttaccaga aattttgctt cacagtaaat 6240
catctggatt gggtgaagcc aggtagggat tgagaagtga gtcaggtggg ttgcatagat 6300
gagtttgtgc tgcagaccaa actcctcttc ccatagctca cttcttccca ctcctgcatg 6360
ttagagagaa gactagaatg tgtcaaatac aacctatagg ataatagttc agagcattag 6420
cttcggaagt aaacactagg ttgatgccct ggttcttcta atttctagct gtgtgaccta 6480
gggaaagtta cctgctgtgt gcctcatttc ccttatttgt aaagttgaga caataacaac 6540
tccctcacaa ggttgttgtg aagattaatg aaaaagcagt ttctgagagg ttgtgagtgt 6600
tcagtaaaga aagaaattgc tttccttttt tttttttttt gagacagatt ctcattctgt 6660
cattcaggct ggagtgcagt ggcgtgatca tggctcactg cgcctcgact tccccaagct 6720
caggcaatct tcccacctca gcctcctgag tagctgggac tacaggtgcg agccaccaca 6780
cctggctagt ttttgtatta tttgcagaga tggggtctcg ccttgttgcc caggcttgtc 6840
tcaaacttct gggctcaagc gatcttccca cctcaacctc ccaaagtgct gggattacag 6900
gcatgaacca ctacacacag cctattttcc attttcactg ccattatttt ctctgtctct 6960
tgtgtggctc attactgcca cttctgtgca ccatttccat catgtcacat gcgtagtcaa 7020
aaccctcagt gactgcctaa ttctcagagg gtaaaagtga aattccttgg cctggaaagt 7080
gcaatcatgc ctgaagttct acctgtggga gctgtactag ttatctattg tgtaaaaagt 7140
taccacaagc ttagcagatt aaaacaacac atatttaata tcccacagta tctgtgggct 7200
aggagtccag gcacagttca gctggatctt ctgcttctaa gtctcatatg gttgcattca 7260
aggtgctggc tagagctatg gtctcttctg aggcttgact ggggatggat atacttccaa 7320
gccaatgcaa ttactcagag gccgtcttta attatttgcc atgtggcctt ttccataggg 7380
tagctcacaa cgtggcatct tgctgcaaca agtcagcaaa ggagagagtc ttctatcaag 7440
attaaagtta aaatcttatg taacgtaaac atgacatcct gtcacctgtg ttgtatgcta 7500
ttggttgaaa gtaaatcacg ggtctgctca tacttatggg gaggggatca cacaagggtg 7560
tgaccaccaa aggcagagat catgggagca ttcttagagt ctgtctgcca cagggccagg 7620
atcaaatgct ggtggctgat tgccagctcc actgtttatt tctctcagcc gctttctgta 7680
tgtacaaaaa aggagagaga gtgattttct acctcatagt gttgttaaga aaatcaaatg 7740
aggtaaatta ttttgcaaag tattctctac tcatctgact cctacctact ttcaggtctg 7800
tcttaagttg caacttctgc atgagggctt ggccaagtat ggtcacctgc atgaatttcc 7860
tctttcttgt aacagaaact gcttggccca ctcataattt atacattatt atatactctt 7920
atgtttcatt aatgaaacat ttataatgca tatcttatct gtctgataaa atggaaagca 7980
atctaaggac aacgactttt cccctataca taacaaaata taaaataaat cataacataa 8040
taaataataa ataaataata aaataactaa catttgttga atgattagga tgtgttaggc 8100
actcttgtaa gcatttcatt tttttgttac ttcttcaaat ccttacaaca gtccttggag 8160
gtaagtccta ttattacttt cattttgcag ataagacaac tgtggctcag agaggctaag 8220
gtacttgagt ccaggagcag aattcttact ttcctcaaac gttatctctt ttgtgtggtc 8280
tagggcagta caatatacca agtagttgct cattttggtc tttggtaaat ggaaatgaat 8340
ttgtaagttg agaaaagact acactacagt agtttggaga agtccacttt ccaactgatg 8400
ttcaagattc aggagggggg gaaatgtgtc ctggcatcat cacttgcttg atgatttctt 8460
ttgctggtag aaaatcacca tggctaccaa tggccatttt ctgggaagcc ttttttggga 8520
atcctaactt aagatcaaaa tccctgggct aagtcacggc agctaggagg ttactgtgaa 8580
ccggttctca tttcttatgg tttccattgt tattaggggg ctgtattctc attaagtcca 8640
ctctgagctc tactggattc tctttttaga gcactcgtct ttgaattctt ggccaactca 8700
tctatgtcac agcactaagg ctataaattc cagggcccca caatgtggat tatctgtgag 8760
aattcatttc cagttctggg gacaagaccc ttgggaaaac caggcaatag gccagagaga 8820
gacagagaga gagagagtgg tcaaaagtgg cctggtcact cttaacctaa accttgacct 8880
tcagcggagt agaggactaa atcactcagg aaatattaaa tgtttcacca gatattattt 8940
ggactatatc ttctgttcta tctcttcaag caatgccatt ccaacttcaa ttttcttttc 9000
tgtcatttca gaataatgct ggggacaaat ggtctgcctt tttaaaggaa cagtccacac 9060
ttgcccaaat gtatccacta caagaaattc agaatctcac agtcaagctt cagctgcagg 9120
ctcttcagca aaatgggtct tcagtgctct cagaagacaa gagcaaacgg gtacgtttgt 9180
gaacatttta gcattgatcc caagagttga aatatttggg aaatattaaa cattaatatc 9240
acccacagca gctgccttta tttgaaaaaa tagtaatgct gatgttagaa aaatctctct 9300
ctatgcctag gtaaggtgtc catataattt attattcaaa ctggaatctt tgagagtgaa 9360
agacactggt aattattata ttcaaacaca gagttaaact gagattgtcc ctggcactgt 9420
ggtgtgtatg gacaccccct agtgttaggt caccttcctg aaggatcagg cagcctgaag 9480
aatacagtta gtttatgtca gtggttctca actgggggtg atttagccct ccggggatat 9540
ttgacaatgt ctggagacgt ttttggttgc cacaaatggg gatactgttg acatctagtg 9600
ggtagggatg ctgcagaaca tttcacaatg catgggatgg cccccaacaa caaagaatga 9660
tcttgtccac aatgtcaaca gcaaactttt ttttctgtaa aggaacagat gacagtaaat 9720
attttaggtt ttgtgtattt aggtattgtc tgtgttgcaa ctagtcaact gtgctgttgt 9780
atcaggaaat cagctgtagc taatatataa atgaacaagt atggctgtgt tcaaataaaa 9840
ctttacaaaa acaggcagca gacaggattt ggtctgcaga acacagtttg cagacctctg 9900
atatagccta ttgaaatatt tttaacctaa aatatttagc tatttaaaaa gaaagtcttc 9960
tttctcagtt gcttgtcctc tggaactttg tatgttctaa tctgtgaata taaaaataaa 10020
aatgcatcaa aaaggcaaag ataaaaccat gtgaaatgta tctttctaca agttaacatt 10080
tatttttctg cattctttgg gtccaattat ccaactaatt atcaatgcac tttactttat 10140
ccattctatg tttctccatt ttttccccca acaaggacac tataagaaac cttgcccatt 10200
cgcatataga caatctggtc tagcctaggt ggaacctaga aattctattt tttaaaaaat 10260
ccccagataa ttctaatgtg tagccaggac tgaaaaccac tgaaatgcat gtaagagctt 10320
aaagtgtttg ggaagaggag ggactcaagg ttgcttagat ttgatggaga ggaagccgtg 10380
gagattgaag aagagctgga gagagaccat gaggggtttt gtgccatggt aaggaattta 10440
ggtttgttcc tttggactat gggatcgtgt ggaagtttta aacataggat ctatttcatg 10500
ttttaggatg actctcaagg cagaaccaaa gggaaatagg agaaggagaa acagatcctt 10560
taatccagtg cttcttaaat caatctgagg gagagaacca tttccttcct tccttccttc 10620
ctttcttctc ttcttccttc cctccttctc tcctccctcc cgtctttcct ttctccctcc 10680
tttattcctt tatttccaat acattgcaga tcaatacttg cttaagttca ttgattacat 10740
gcttagatgt catggaaata tcaaattgtt ctccaaagtt tataaacttt tattctctta 10800
attcctgtac ttatcacaga atggaaacaa actgtcactt gcactggtcc acggattaca 10860
cctggagtag cactgcttca ctatatcacc ttcactttat ctgcagggta aagtttaaaa 10920
actttggtat ggcatagacg gtccctcgtg atctggcccc tgcttgtctc tccattctca 10980
tgtctttcat ttcccctaat gaacaccatt gctccagttt cattcaacat ctcactgtcc 11040
cctgagaatg ccttgtcttt tccaacctcc ttccatcttt tagactcttc cctctacctc 11100
ccttctctac atgaccagtg cctacttctt ctccaagaca cagctcttat cttcccttct 11160
ctttggaccc attcttgaat ctcctggtta ttagttatta atttctccct gctcctatac 11220
taccgcatca ctttttggtg acagttatag cacttgtcat tctgttatgt attaatagtt 11280
attgatttca tggctgcctc actgtcctat gactttatgg tctttgactt gttcacttca 11340
gaattgtcag agtgtaggac atattccagg ttcaataaat gctgaatgaa acaaaaaatg 11400
cacctctctg tgtatgtgtg gataagaaaa cttctttggg ttttggtaga tctggttatt 11460
tcaattactc catatatatt tattatgtgc ttatagtact ttgtgctagt cgacagtggg 11520
gaaacttaac tgggctattc cttctccaca tacagaaaga tacatggcaa agaagtaaat 11580
tgctgtattt tgagtaatca aaaaatcatg tggtcaaaag gatatcttta tattagcatt 11640
ctcttcagca aaatttccat tgttaacatt gtttattatc tttaatttgc agttgaacac 11700
aattctaaat acaatgagca ccatctacag tactggaaaa gtttgtaacc cagataatcc 11760
acaagaatgc ttattacttg aaccaggtaa gctactaatt tttagtagtg attatgaaat 11820
ttacttttct ctcagatttt aaaaatgatt gcagatatgt gtgtttcaac acatagatgc 11880
tcttttaact tttagtaaaa ctttcttgta aattgtatca catttactta atttgatcaa 11940
gtcagtaagt aagtcatttc agtggtttat tttctctgca gacatatttt ggaactataa 12000
gggcaaggac atgaatgaat catgagattt tatttaacca ctttatgacc tgatgtctgc 12060
caaccttact tttaattctt taaagttcat gtagttcttt acaaataaaa tttttacaaa 12120
ggcatctttt cttgtctttg tgtgctttgg gataacaggt ttgaatgaaa taatggcaaa 12180
cagtttagac tacaatgaga ggctctgggc ttgggaaagc tggagatctg aggtcggcaa 12240
gcagctgagg ccattatatg aagagtatgt ggtcttgaaa aatgagatgg caagagcaaa 12300
tcgtaagttt gctgatctgt agaggtcctg aagctctctg tgtggccacg gggctatttc 12360
ttctgcatta ccaagcctgc cctttgatat cagggatacc cctcaattaa caatcatgtc 12420
ctcaacaatt cagattacct gttttcaaaa gaaattactg gggaaaaaga aaaggtgcac 12480
tggcattcta caattcaaga agctcaagaa tgagactcaa ctacaaggcc taaagtaaat 12540
tatccaggaa ttatgaatta taagtaatct aggaagatct caggccccta aaagttcccg 12600
agggagtctg gggattaagg gggggaatcc catttctcag gatgaaagac agagtcactg 12660
ccttttgtct aaagccccca cagttcactt tcaaaggtca tttgtgtgtc taccttaggg 12720
tgatacccca gaaagaaaaa atatcagatt agtttaggct ggaaatgtat tattttctgc 12780
agttgtaatt atatctcaga ttatgtggtc ataaaaaatc ttaacatagg aaggaatttc 12840
catatctctt aacttattct cttccctgaa tagtgagctg aagtcatgga atcatgattc 12900
acattttgct ttgatgattt actgcccact gaggttgagt aaggaagaat ttttttcccg 12960
catttgttgt tttaacattt ctttcactgc cacttaaatt cagtattctt aagccttagg 13020
caagctggag acaatagctt atcaccattt ttaaaacaat atcctgcatg tcctttcatc 13080
caaatattta tttctctcct catcttcctg atcattaatt gccaatgtga atgtaaaaat 13140
aaaaattatt aaattatgtt tacaaacttt attagctaat atcctgacac aagcttgtgt 13200
tttctgatgg tgagatacta aaggaagcac atagaaacat gctattgata catataattt 13260
gcaaacaaac acaggttcac tgtggcaaag tctaagatga gttgggtctg atctaaaaat 13320
aaaaggccat gaacaaaaga agaatttaaa aacttagaga tccagtcaca tattttaaag 13380
ctaaagatac aaactgatgt atcaagagag tacacaccca gggttaagag actaggaatg 13440
tgcttctttc gcttaccagc tgtgtgatct tggacaagtg atttaaccac tctaagcaca 13500
ggttgttggt gggaatataa actggtgaag ctgttatgga aaaatagtat gaggattcct 13560
aaataaatta aaaatagaat taccgtatga tccagcaatc cctcttctgg gtatatacct 13620
aaattagatg aaattaccac ttcataaaga tatctacact gccatgttca ctgcagcatt 13680
attcgcaata gccaagatag ggaaacaacc taagtgtttg tcaagggatg aatgaataaa 13740
gaaaccgtgg tgggtatatg gaatgggata ttattcagcc ttaaaaaaga ggagatcctg 13800
tcatttgcct caacatggat agacctggag gacattatgc taagtgaaat aatccagaca 13860
taaaaagaaa aatatggcat catctcactc aaaagtggat tctacaaaaa aatcaaatat 13920
acagagatag agtaatagtg attaccaggg gtgaggtgga gcggggtggg atatggggag 13980
aagtgggtta aaggatacaa agtagcagat atgcaggatg aacaagtcta aagatctaat 14040
gtacaacata aggactgtag ttagtaataa tgttttgtat tcaggatttt tgcaaaatga 14100
gtagatttta gctgctcttc catggggggg ataatgctta actatgtgag atgatggata 14160
tgttaatttg ttttactata gtaaccattt tattatataa gtatctcata acatcatgtt 14220
gtacacctta aatatacaca ataaaattta tttaaaaata aacataggct gttactctgc 14280
acagtgggag ttataataat gacaatcttg tatggttctt gtgcttatta aataaaataa 14340
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ttcaaggtga caggtctaaa gagagaagaa tccagggaac aggtagagga cattgctttt 42720
tcacttccaa ggtgcttgat caacatctcc ctgacaacac aaaactagag ccaggggcct 42780
ccgtgaactc ccagagcatg cctgatagaa actcatttct actgttctct aactgtggag 42840
tgaatggaaa ttccaactgt atgttcaccc tctgaagtgg gtacccagtc tcttaaatct 42900
tttgtatttg ctcacagtgt ttgagcagtg ctgagcacaa agcagacact caataaatgc 42960
tagatttaca cactc 42975
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<213>智人(Homo sapiens)
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attttcctgc ctgcctcact 20
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<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
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ctgcatcaaa aagaggtgga 20
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<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
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ggaatgtggg aggagctttt 20
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<211>21
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>5
ccactgcttt tccttattcc a 21
<210>6
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<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
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tgcctccact attgctttta ga 22
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<213>智人(Homo sapiens)
<400>7
tagccatggg atcacaacaa 20
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<213>智人(Homo sapiens)
<400>8
ccctgccatt taaagtgctc 20
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cacgcccagc taagtttttg 20
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agttgggcag atcacaaggt 20
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<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
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ttcatcctgg agaggacaga 20
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<212>DNA
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ttcagtttca cgggcagtaa 20
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<213>智人(Homo sapiens)
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ttcactctca aagattccag tttg 24
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tttgggtttt ggtagatctg g 21
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tgaaacacac atatctgcaa tca 23
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gaatgagcca gaatgccttt 20
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<212>DNA
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ttttgggacc tgtgttctcc 20
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<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>23
ggctcactca aaaaggcaat 20
<210>24
<211>21
<212>DNA
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tgatctcttt tgaagccaac a 21
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<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
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tgaggccatt gtaaactgct t 21
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<212>DNA
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acgctttgac catcatctcc 20
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ctggcaatcc tcttttcctg 20
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<212>DNA
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<400>29
cctcatacct tatgtggcaa aa 22
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<212>DNA
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ctgttctgtt ccagggcttc 20
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<213>智人(Homo sapiens)
<400>31
agtgtcacct gacccaagga 20
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<213>智人(Homo sapiens)
<400>32
agttatgcc acctgcttgt 20
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<213>智人(Homo sapiens)
<400>33
ttgggatgta accccattgt 20
<210>34
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<213>智人(Homo sapiens)
<400>34
gcatcattta tgtgaaaggg cta 23
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aggttcctgt ctgaccacaa a 21
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agagcggttt agggtggaat 20
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ggccaaagga gactagacga 20
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tcctagcagt gggaaagctg 20
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<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>47
ctccttggcc atgttgtctt 20
Claims (10)
1.一种对个体的高血压易感性进行辅助性诊断的方法，其特征在于，它包括步骤：
检测该个体的ACE2基因、转录本和/或蛋白，并与正常的ACE2基因、转录本和/或蛋白相比较，
存在差异就表明该个体患高血压的可能性高于正常人群。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，检测的是ACE2的基因或转录本，并与正常ACE2核苷酸序列比较差异。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的差异是选自下组的单核苷酸多态性：
11790位A→G；
16286位G→A；
28308位A→G；
36150位A→G；
其中，核苷酸位置编号基于SEQ ID NO：1。
4.一种检测样品是否存在ACE2基因的单核苷酸多态性的方法，其特征在于，包括步骤：
(a)用ACE2基因特异性引物扩增样品的ACE2基因，得到扩增产物；和
(b)检测扩增产物中是否存在选自下组的单核苷酸多态性：
11790位A→G；
16286位G→A；
28308位A→G；
36150位A→G；
其中，核苷酸位置编号基于SEQ ID NO：1。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的单核苷酸多态性是28308位A G。
6.一种ACE2基因和蛋白的用途，其特征在于，用于(a)制备辅助性检测的试剂；或(b)制备治疗高血压的药物。
7.一种用于辅助性检测高血压的试剂盒，其特征在于，它包括特异性扩增ACE2基因或转录本的引物和说明书。
8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，它还含有选自下组的试剂：
(a)与突变部位结合的探针；
(b)识别突变位点的限制性内切酶。
9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述的突变选自：
11790位A→G；
16286位G→A；
28308位A→G；
36150位A→G；
其中，核苷酸位置编号基于SEQ ID NO：1。
10.如权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述的单核苷酸多态性是28308位A G。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200410053094 CN1724687A (zh) | 2004-07-23 | 2004-07-23 | 血管紧张素转换酶2基因与原发性高血压的相关性 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200410053094 CN1724687A (zh) | 2004-07-23 | 2004-07-23 | 血管紧张素转换酶2基因与原发性高血压的相关性 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1724687A true CN1724687A (zh) | 2006-01-25 |
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ID=35924318
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
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|---|---|
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105886641A (zh) * | 2016-05-20 | 2016-08-24 | 宁波大学 | 用于辅助诊断原发性高血压的检测试剂盒及其应用 |
| CN108660205A (zh) * | 2018-07-04 | 2018-10-16 | 刘城 | 一种糖尿病遗传风险评估试剂盒及其运用 |
-
2004
- 2004-07-23 CN CN 200410053094 patent/CN1724687A/zh active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105886641A (zh) * | 2016-05-20 | 2016-08-24 | 宁波大学 | 用于辅助诊断原发性高血压的检测试剂盒及其应用 |
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