CN1169831C - 具有抑制癌细胞生长功能的新的人蛋白及其编码序列 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一类新的具有抑癌功能的人蛋白,编码此多肽的多核苷酸和经重组技术产生该多肽的方法。本发明还公开了此多肽用于治疗多种疾病如癌症等的方法。本发明还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明还公开了编码这类新的具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸的用途。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域,具体地说,本发明涉及新的编码具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸,以及此多核苷酸编码的多肽。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的用途和制备。
背景技术
人基因组学研究目前是国际上的热点,除人染色体DNA大规模测序,表达序列测序(EST)的方法外,还缺少从功能开始的筛选具有功能基因的高通量的方法。
癌症是危害人类健康的主要疾病之一。为了有效地治疗和预防肿瘤,目前人们已越来越关注肿瘤的基因治疗。因此,本领域迫切需要开发研究具有抑癌功能的人蛋白及其激动剂/抑制剂。
发明内容
本发明的目的是提供一类新的具有抑癌功能的人蛋白多肽以及其片段、类似物和衍生物。
本发明的另一目的是提供编码这些多肽的多核苷酸。
本发明的另一目的是提供生产这些多肽的方法以及该多肽和编码序列的用途。
在本发明的第一方面,提供新颖的分离出的具有抑癌功能的蛋白多肽,它包含具有选自下组的氨基酸序列的多肽:SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ IDNO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29;或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。
较佳地,该多肽是具有选自下组的氨基酸序列的多肽:SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ IDNO:23、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29。
在本发明的第二方面,提供了一种分离的多核苷酸,它包含一核苷酸序列,该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少85%相同性:(a)编码上述的具有抑癌功能的蛋白多肽的多核苷酸;(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地,该多核苷酸编码的多肽具有选自下组的氨基酸序列:SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ IDNO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29。更佳地,该多核苷酸的序列选自下组:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:30的编码区序列或全长序列。
在本发明的第三方面,提供了含有上述多核苷酸的载体,以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。
在本发明的第四方面,提供了制备具有抑癌功能的蛋白活性的多肽的制备方法,该方法包含:(a)在适合表达具有抑癌功能的蛋白的条件下,培养上述被转化或转导的宿主细胞;(b)从培养物中分离出具有抑癌功能的蛋白活性的多肽。
在本发明的第五方面,提供了与上述的具有抑癌功能的蛋白多肽特异性结合的抗体。还提供了可用于检测的核酸分子,它含有上述的多核苷酸中连续10个核苷酸至全长核苷酸,较佳地它含有连续的约10-800个核苷酸。
在本发明的第六方面,提供了一种药物组合物,它含有安全有效量的本发明的具有抑癌功能的蛋白多肽以及药学上可接受的载体。这些药物组合物可治疗癌症以及细胞异常增殖等病症。
本发明的其它方面由于本文的技术的公开,对本领域的技术人员而言是显而易见的。
本发明采用大规模cDNA克隆转染癌细胞,在获得具有抑癌作用的基础上,经测序证明为新的基因,进一步得到全长cDNA克隆。DNA转染试验证明,本发明的具有抑癌功能的蛋白对癌细胞(肝癌细胞)具有抑制克隆形成的作用,其抑制率在50%或50%以上。
如本文所用,“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质,原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和多肽是没有分离纯化的,但同样的多聚核苷酸或多肽如从天然状态中同存在的其他物质中分开,则为分离纯化的。
如本文所用,“分离的具有抑癌功能的蛋白或多肽”是指具有抑癌功能的蛋白多肽基本上不含天然与其相关的其它蛋白、脂类、糖类或其它物质。本领域的技术人员能用标准的蛋白质纯化技术纯化具有抑癌功能的蛋白。基本上纯的多肽在非还原聚丙烯酰胺凝胶上能产生单一的主带。具有抑癌功能的蛋白多肽的纯度能用氨基酸序列分析。
本发明的多肽可以是重组多肽、天然多肽、合成多肽,优选重组多肽。本发明的多肽可以是天然纯化的产物,或是化学合成的产物,或使用重组技术从原核或真核宿主(例如,细菌、酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞)中产生。根据重组生产方案所用的宿主,本发明的多肽可以是糖基化的,或可以是非糖基化的。本发明的多肽还可包括或不包括起始的甲硫氨酸残基。
本发明还包括具有抑癌功能的人蛋白的片段、衍生物和类似物。如本文所用,术语“片段”、“衍生物”和“类似物”是指基本上保持本发明的天然具有抑癌功能的人蛋白相同的生物学功能或活性的多肽。本发明的多肽片段、衍生物或类似物可以是(i)有一个或多个保守或非保守性氨基酸残基(优选保守性氨基酸残基)被取代的多肽,而这样的取代的氨基酸残基可以是也可以不是由遗传密码编码的,或(ii)在一个或多个氨基酸残基中具有取代基团的多肽,或(iii)成熟多肽与另一个化合物(比如延长多肽半衰期的化合物,例如聚乙二醇)融合所形成的多肽,或(iv)附加的氨基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽(如前导序列或分泌序列或用来纯化此多肽的序列或蛋白原序列)。根据本文的教导,这些片段、衍生物和类似物属于本领域熟练技术人员公知的范围。
本发明的多核苷酸可以是DNA形式或RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因组DNA或人工合成的DNA。DNA可以是单链的或是双链的。DNA可以是编码链或非编码链。以PP4491蛋白(在本申请中,蛋白质的命名采用其克隆编号)为例,编码成熟多肽的编码区序列可以与SEQ ID NO:3所示的编码区序列相同或者是简并的变异体。如本文所用,“简并的变异体”在本发明中是指编码具有SEQ ID NO:2的蛋白质,但与SEQ IDNO:3所示的编码区序列有差别的核酸序列。以PP5644蛋白(在本申请中,蛋白质的命名采用其克隆编号)为例,编码成熟多肽的编码区序列可以与SEQ ID NO:6所示的编码区序列相同或者是简并的变异体。如本文所用,“简并的变异体”在本发明中是指编码具有SEQ ID NO:5的蛋白质,但与SEQ ID NO:6所示的编码区序列有差别的核酸序列。对于其他具有抑癌功能的蛋白,可依此类推。对于其他具有抑癌功能的蛋白,可依此类推。
编码成熟多肽的多核苷酸包括:只编码成熟多肽的编码序列;成熟多肽的编码序列和各种附加编码序列;成熟多肽的编码序列(和任选的附加编码序列)以及非编码序列。
术语“编码多肽的多核苷酸”可以是包括编码此多肽的多核苷酸,也可以是还包括附加编码和/或非编码序列的多核苷酸。
本发明还涉及上述多核苷酸的变异体,其编码与本发明有相同的氨基酸序列的多肽或多肽的片段、类似物和衍生物。此多核苷酸的变异体可以是天然发生的等位变异体或非天然发生的变异体。这些核苷酸变异体包括取代变异体、缺失变异体和插入变异体。如本领域所知的,等位变异体是一个多核苷酸的替换形式,它可能是一个或多个核苷酸的取代、缺失或插入,但不会从实质上改变其编码的多肽的功能。
本发明还涉及与上述的序列杂交且两个序列之间具有至少50%,较佳地至少70%,更佳地至少80%相同性的多核苷酸。本发明特别涉及在严格条件下与本发明所述多核苷酸可杂交的多核苷酸。在本发明中,“严格条件”是指:(1)在较低离子强度和较高温度下的杂交和洗脱,如0.2×SSC,0.1%SDS,60℃;或(2)杂交时加有变性剂,如50%(v/v)甲酰胺,0.1%小牛血清/0.1%Ficoll,42℃等;或(3)仅在两条序列之间的相同性至少在95%以上,更好是97%以上时才发生杂交。并且,可杂交的多核苷酸编码的多肽与SEQ IDNO:2所示的成熟多肽有相同的生物学功能(以PP4491蛋白为例)和活性。
本发明还涉及与上述的序列杂交的核酸片段。如本文所用,“核酸片段”的长度至少含15个核苷酸,较好是至少30个核苷酸,更好是至少50个核苷酸,最好是至少100个核苷酸以上。核酸片段可用于核酸的扩增技术(如PCR)以确定和/或分离编码具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸。
本发明中的多肽和多核苷酸优选以分离的形式提供,更佳地被纯化至均质。
本发明的DNA序列能用几种方法获得。例如,用本领域熟知的杂交技术分离DNA。这些技术包括但不局限于:1)用探针与基因组或cDNA文库杂交以检出同源性核苷酸序列,和2)表达文库的抗体筛选以检出具有共同结构特征的克隆的DNA片段。
编码具有抑癌功能的蛋白的特异DNA片段序列产生也能用下列方法获得:1)从基因组DNA分离双链DNA序列;2)化学合成DNA序列以获得所需多肽的双链DNA。
上述提到的方法中,分离基因组DNA最不常用。当需要的多肽产物的整个氨基酸序列已知时,DNA序列的直接化学合成是经常选用的方法。如果所需的氨基酸的整个序列不清楚时,DNA序列的直接化学合成是不可能的,选用的方法是cDNA序列的分离。分离感兴趣的cDNA的标准方法是从高表达该基因的供体细胞分离mRNA并进行逆转录,形成质粒或噬菌体cDNA文库。提取mRNA的方法已有多种成熟的技术,试剂盒也可从商业途径获得(Qiagene)。而构建cDNA文库也是通常的方法(Sambrook,et al.,Molecular Cloning,A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory.New York,1989)。还可得到商业供应的cDNA文库,如Clontech公司的不同cDNA文库。当结合使用聚合酶反应技术时,即使极少的表达产物也能克隆。
可用常规方法从这些cDNA文库中筛选本发明的基因。这些方法包括(但不限于):(1)DNA-DNA或DNA-RNA杂交;(2)标志基因的功能出现或丧失;(3)测定具有抑癌功能的蛋白的转录本的水平;(4)通过免疫学技术或测定生物学活性,来检测基因表达的蛋白产物。上述方法可单用,也可多种方法联合应用。
在第(1)种方法中,杂交所用的探针是与本发明的多核苷酸的任何一部分同源,其长度至少15个核苷酸,较好是至少30个核苷酸,更好是至少50个核苷酸,最好是至少100个核苷酸。此外,探针的长度通常在2kb之内,较佳地为1kb之内。此处所用的探针通常是在本发明的基因DNA序列信息的基础上化学合成的DNA序列。本发明的基因本身或者片段当然可以用作探针。DNA探针的标记可用放射性同位素,荧光素或酶(如碱性磷酸酶)等。
在第(4)种方法中,检测具有抑癌功能的蛋白基因表达的蛋白产物可用免疫学技术如Western印迹法,放射免疫沉淀法,酶联免疫吸附法(ELISA)等。
应用PCR技术扩增DNA/RNA的方法(Saiki,et al.Science 1985;230:1350-1354)被优选用于获得本发明的基因。特别是很难从文库中得到全长的cDNA时,可优选使用RACE法(RACE-cDNA末端快速扩增法),用于PCR的引物可根据本文所公开的本发明的序列信息适当地选择,并可用常规方法合成。可用常规方法如通过凝胶电泳分离和纯化扩增的DNA/RNA片段。
如上所述得到的本发明的基因,或者各种DNA片段等的核苷酸序列的测定可用常规方法如双脱氧链终止法(Sanger et al.PNAS,1977,74:5463-5467)。这类核苷酸序列测定也可用商业测序试剂盒等。为了获得全长的cDNA序列,测序需反复进行。有时需要测定多个克隆的cDNA序列,才能拼接成全长的cDNA序列。
本发明也涉及包含本发明的多核苷酸的载体,以及用本发明的载体或具有抑癌功能的蛋白编码序列经基因工程产生的宿主细胞,以及经重组技术产生本发明所述多肽的方法。
通过常规的重组DNA技术(Science,1984;224:1431),可利用本发明的多聚核苷酸序列可用来表达或生产重组的具有抑癌功能的蛋白多肽。一般来说有以下步骤:
(1).用本发明的编码具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸(或变异体),或用含有该多核苷酸的重组表达载体转化或转导合适的宿主细胞;
(2).在合适的培养基中培养的宿主细胞;
(3).从培养基或细胞中分离、纯化蛋白质。
本发明中,具有抑癌功能的人蛋白多核苷酸序列可插入到重组表达载体中。术语“重组表达载体”指本领域熟知的细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒如腺病毒、逆转录病毒或其他载体。在本发明中适用的载体包括但不限于:在细菌中表达的基于T7的表达载体(Rosenberg,et al.Gene,1987,56:125);在哺乳动物细胞中表达的pMSXND表达载体(Lee and Nathans,J Bio Chem.263:3521,1988)和在昆虫细胞中表达的来源于杆状病毒的载体。总之,只要能在宿主体内复制和稳定,任何质粒和载体都可以用。表达载体的一个重要特征是通常含有复制起点、启动子、标记基因和翻译控制元件。
本领域的技术人员熟知的方法能用于构建含具有抑癌功能的人蛋白编码DNA序列和合适的转录/翻译控制信号的表达载体。这些方法包括体外重组DNA技术、DNA合成技术、体内重组技术等(Sambroook,et al.Molecular Cloning,a Laboratory Manual,coldSpring Harbor Laboratory.New York,1989)。所述的DNA序列可有效连接到表达载体中的适当启动子上,以指导mRNA合成。这些启动子的代表性例子有:大肠杆菌的lac或trp启动子;λ噬菌体PL启动子;真核启动子包括CMV立即早期启动子、HSV胸苷激酶启动子、早期和晚期SV40启动子、反转录病毒的LTRs和其他一些已知的可控制基因在原核或真核细胞或其病毒中表达的启动子。表达载体还包括翻译起始用的核糖体结合位点和转录终止子。
此外,表达载体优选地包含一个或多个选择性标记基因,以提供用于选择转化的宿主细胞的表型性状,如真核细胞培养用的二氢叶酸还原酶、新霉素抗性以及绿色荧光蛋白(GFP),或用于大肠杆菌的四环素或氨苄青霉素抗性。
包含上述的适当DNA序列以及适当启动子或者控制序列的载体,可以用于转化适当的宿主细胞,以使其能够表达蛋白质。
宿主细胞可以是原核细胞,如细菌细胞;或是低等真核细胞,如酵母细胞;或是高等真核细胞,如哺乳动物细胞。代表性例子有:大肠杆菌,链霉菌属;鼠伤寒沙门氏菌的细菌细胞;真菌细胞如酵母;植物细胞;果蝇S2或Sf9的昆虫细胞;CHO、COS或Bowes黑素瘤细胞的动物细胞等。
本发明的多核苷酸在高等真核细胞中表达时,如果在载体中插入增强子序列时将会使转录得到增强。增强子是DNA的顺式作用因子,通常大约有10到300个碱基对,作用于启动子以增强基因的转录。可举的例子包括在复制起始点晚期一侧的100到270个碱基对的SV40增强子、在复制起始点晚期一侧的多瘤增强子以及腺病毒增强子等。
本领域一般技术人员都清楚如何选择适当的载体、启动子、增强子和宿主细胞。
用重组DNA转化宿主细胞可用本领域技术人员熟知的常规技术进行。当宿主为原核生物如大肠杆菌时,能吸收DNA的感受态细胞可在指数生长期后收获,用CaCl2法处理,所用的步骤在本领域众所周知。可供选择的是用MgCl2。如果需要,转化也可用电穿孔的方法进行。当宿主是真核生物,可选用如下的DNA转染方法:磷酸钙共沉淀法,常规机械方法如显微注射、电穿孔、脂质体包装等。
获得的转化子可以用常规方法培养,表达本发明的基因所编码的多肽。根据所用的宿主细胞,培养中所用的培养基可选自各种常规培养基。在适于宿主细胞生长的条件下进行培养。当宿主细胞生长到适当的细胞密度后,用合适的方法(如温度转换或化学诱导)诱导选择的启动子,将细胞再培养一段时间。
在上面的方法中的重组多肽可包被于细胞内、细胞外或在细胞膜上表达或分泌到细胞外。如果需要,可利用其物理的、化学的和其它特性通过各种分离方法分离和纯化重组的蛋白。这些方法是本领域技术人员所熟知的。这些方法的例子包括但并不限于:常规的复性处理、用蛋白沉淀剂处理(盐析方法)、离心、渗透破菌、超处理、超离心、分子筛层析(凝胶过滤)、吸附层析、离子交换层析、高效液相层析(HPLC)和其它各种液相层析技术及这些方法的结合。
重组的具有抑癌功能的人蛋白或多肽有多方面的用途。这些用途包括(但不限于):直接做为药物治疗具有抑癌功能的蛋白功能低下或丧失所致的疾病,和用于筛选促进或对抗具有抑癌功能的蛋白功能的抗体、多肽或其它配体。例如,抗体可用于激活或抑制具有抑癌功能的人蛋白的功能。用表达的重组具有抑癌功能的人蛋白筛选多肽库可用于寻找有治疗价值的能抑制或刺激具有抑癌功能的人蛋白功能的多肽分子。
本发明也提供了筛选药物以鉴定提高(激动剂)或阻遏(拮抗剂)具有抑癌功能的人蛋白的药剂的方法。激动剂提高具有抑癌功能的人蛋白刺激细胞增殖等生物功能,而拮抗剂阻止和治疗与细胞过度增殖有关的紊乱如各种癌症。例如,能在药物的存在下,将哺乳动物细胞或表达具有抑癌功能的人蛋白的膜制剂与标记的具有抑癌功能的人蛋白一起培养。然后测定药物提高或阻遏此相互作用的能力。
具有抑癌功能的人蛋白的拮抗剂包括筛选出的抗体、化合物、受体缺失物和类似物等。具有抑癌功能的人蛋白的拮抗剂可以与具有抑癌功能的人蛋白结合并消除其功能,或是抑制具有抑癌功能的人蛋白的产生,或是与多肽的活性位点结合使多肽不能发挥生物学功能。具有抑癌功能的人蛋白的拮抗剂可用于治疗用途。
在筛选作为拮抗剂的化合物时,可以将具有抑癌功能的蛋白加入生物分析测定中,通过测定化合物影响具有抑癌功能的蛋白和其受体之间的相互作用来确定化合物是否是拮抗剂。用上述筛选化合物的同样方法,可以筛选出起拮抗剂作用的受体缺失物和类似物。
本发明的多肽可直接用于疾病治疗,例如,各种恶性肿瘤、和细胞异常增殖等。
本发明的多肽,及其片段、衍生物、类似物或它们的细胞可以用来作为抗原以生产抗体。这些抗体可以是多克隆或单克隆抗体。多克隆抗体可以通过将此多肽直接注射动物的方法得到。制备单克隆抗体的技术包括杂交瘤技术,三瘤技术,人B-细胞杂交瘤技术,EBV-杂交瘤技术等。
可以将本发明的多肽和拮抗剂与合适的药物载体组合后使用。这些载体可以是水、葡萄糖、乙醇、盐类、缓冲液、甘油以及它们的组合。组合物包含安全有效量的多肽或拮抗剂以及不影响药物效果的载体和赋形剂。这些组合物可以作为药物用于疾病治疗。
本发明还提供含有一种或多种容器的药盒或试剂盒,容器中装有一种或多种本发明的药用组合物成分。与这些容器一起,可以有由制造、使用或销售药品或生物制品的政府管理机构所给出的指示性提示,该提示反映出生产、使用或销售的政府管理机构许可其在人体上施用。此外,本发明的多肽可以与其它的治疗化合物结合使用。
药物组合物可以以方便的方式给药,如通过局部、静脉内、腹膜内、肌内、皮下、鼻内或皮内的给药途径。具有抑癌功能的蛋白以有效地治疗和/或预防具体的适应症的量来给药。施用于患者的具有抑癌功能的蛋白的量和剂量范围将取决于许多因素,如给药方式、待治疗者的健康条件和诊断医生的判断。
具有抑癌功能的人蛋白的多聚核苷酸也可用于多种治疗目的。基因治疗技术可用于治疗由于具有抑癌功能的蛋白的无表达或异常/无活性的具有抑癌功能的蛋白的表达所致的细胞增殖、发育或代谢异常。重组的基因治疗载体(如病毒载体)可设计成表达变异的具有抑癌功能的蛋白,以抑制内源性的具有抑癌功能的蛋白活性。例如,一种变异的具有抑癌功能的蛋白可以是缩短的、缺失了信号传导功能域的具有抑癌功能的蛋白,虽可与下游的底物结合,但缺乏信号传导活性。因此重组的基因治疗载体可用于治疗具有抑癌功能的蛋白表达或活性异常所致的疾病。来源于病毒的表达载体如逆转录病毒、腺病毒、腺病毒相关病毒、单纯疱疹病毒、细小病毒等可用于将具有抑癌功能的蛋白基因转移至细胞内。构建携带具有抑癌功能的蛋白基因的重组病毒载体的方法可见于已有文献(Sambrook,et al.)。另外重组具有抑癌功能的人蛋白基因可包装到脂质体中转移至细胞内。
抑制具有抑癌功能的人蛋白mRNA的寡聚核苷酸(包括反义RNA和DNA)以及核酶也在本发明的范围之内。核酶是一种能特异性分解特定RNA的酶样RNA分子,其作用机制是核酶分子与互补的靶RNA特异性杂交后进行核酸内切作用。反义的RNA和DNA及核酶可用已有的任何RNA或DNA合成技术获得,如固相磷酸酰胺化学合成法合成寡核苷酸的技术已广泛应用。反义RNA分子可通过编码该RNA的DNA序列在体外或体内转录获得。这种DNA序列已整合到载体的RNA聚合酶启动子的下游。为了增加核酸分子的稳定性,可用多种方法对其进行修饰,如增加两侧的序列长度,核糖核苷之间的连接应用磷酸硫酯键或肽键而非磷酸二酯键。
多聚核苷酸导入组织或细胞内的方法包括:将多聚核苷酸直接注入到体内组织中;或在体外通过载体(如病毒、噬菌体或质粒等)先将多聚核苷酸导入细胞中,再将细胞移植到体内等。
本发明的多肽还可用作肽谱分析,例如,多肽可用物理的、化学或酶进行特异性切割,并进行一维或二维或三维的凝胶电泳分析。
本发明还提供了针对具有抑癌功能的人蛋白抗原决定簇的抗体。这些抗体包括(但不限于):多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、Fab片段和Fab表达文库产生的片段。
抗具有抑癌功能的人蛋白的抗体可用于免疫组织化学技术中,检测活检标本中的具有抑癌功能的人蛋白。
与具有抑癌功能的人蛋白结合的单克隆抗体也可用放射性同位素标记,注入体内可跟踪其位置和分布。这种放射性标记的抗体可作为一种非创伤性诊断方法用于肿瘤细胞的定位和判断是否有转移。
本发明中的抗体可用于治疗或预防与具有抑癌功能的人蛋白相关的疾病。给予适当剂量的抗体可以刺激或阻断具有抑癌功能的人蛋白的产生或活性。
抗体也可用于设计针对体内某一特殊部位的免疫毒素。如具有抑癌功能的人蛋白高亲和性的单克隆抗体可与细菌或植物毒素(如白喉毒素,蓖麻蛋白,红豆碱等)共价结合。一种通常的方法是用巯基交联剂如SPDP,攻击抗体的氨基,通过二硫键的交换,将毒素结合于抗体上,这种杂交抗体可用于杀灭具有抑癌功能的人蛋白阳性的细胞。
多克隆抗体的生产可用具有抑癌功能的人蛋白或多肽免疫动物,如家兔,小鼠,大鼠等。多种佐剂可用于增强免疫反应,包括但不限于弗氏佐剂等。
具有抑癌功能的人蛋白单克隆抗体可用杂交瘤技术生产(Kohler and Milstein.Nature,1975,256:495-497)。将人恒定区和非人源的可变区结合的嵌合抗体可用已有的技术生产(Morrison et al,PNAS,1985,81:6851)。而已有的生产单链抗体的技术(U.S.PatNo.4946778)也可用于生产抗具有抑癌功能的人蛋白的单链抗体。
能与具有抑癌功能的人蛋白结合的多肽分子可通过筛选由各种可能组合的氨基酸结合于固相物组成的随机多肽库而获得。筛选时,必须对具有抑癌功能的人蛋白分子进行标记。
本发明还涉及定量和定位检测具有抑癌功能的人蛋白水平的诊断试验方法。这些试验是本领域所熟知的,且包括FISH测定和放射免疫测定。试验中所检测的具有抑癌功能的人蛋白水平,可以用作解释具有抑癌功能的人蛋白在各种疾病中的重要性和用于诊断具有抑癌功能的蛋白起作用的疾病。
具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸可用于具有抑癌功能的蛋白相关疾病的诊断和治疗。在诊断方面,具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸可用于检测具有抑癌功能的蛋白的表达与否或在疾病状态下具有抑癌功能的蛋白的异常表达。如具有抑癌功能的蛋白DNA序列可用于对活检标本的杂交以判断具有抑癌功能的蛋白的表达异常。杂交技术包括Southern印迹法,Northern印迹法、原位杂交等。这些技术方法都是公开的成熟技术,相关的试剂盒都可从商业途径得到。本发明的多核苷酸的一部分或全部可作为探针固定在微阵列(Microarray)或DNA芯片(又称为“基因芯片”)上,用于分析组织中基因的差异表达分析和基因诊断。用具有抑癌功能的蛋白特异的引物进行RNA-聚合酶链反应(RT-PCR)体外扩增也可检测具有抑癌功能的蛋白的转录产物。
检测具有抑癌功能的蛋白基因的突变也可用于诊断具有抑癌功能的蛋白相关的疾病。具有抑癌功能的蛋白突变的形式包括与正常野生型具有抑癌功能的蛋白DNA序列相比的点突变、易位、缺失、重组和其它任何异常等。可用已有的技术如Southern印迹法、DNA序列分析、PCR和原位杂交检测突变。另外,突变有可能影响蛋白的表达,因此用Northern印迹法、Western印迹法可间接判断基因有无突变。
本发明的序列对染色体鉴定也是有价值的。该序列会特异性地针对某条人染色体具体位置且并可以与其杂交。目前,需要鉴定染色体上的各基因的具体位点。现在,只有很少的基于实际序列数据(重复多态性)的染色体标记物可用于标记染色体位置。根据本发明,为了将这些序列与疾病相关基因相关联,其重要的第一步就是将这些DNA序列定位于染色体上。
简而言之,根据cDNA制备PCR引物(优选15-35bp),可以将序列定位于染色体上。然后,将这些引物用于PCR筛选含各条人染色体的体细胞杂合细胞。只有那些含有相应于引物的人基因的杂合细胞会产生扩增的片段。
体细胞杂合细胞的PCR定位法,是将DNA定位到具体染色体的快捷方法。使用本发明的的寡核苷酸引物,通过类似方法,可利用一组来自特定染色体的片段或大量基因组克隆而实现亚定位。可用于染色体定位的其它类似策略包括原位杂交、用标记的流式分选的染色体预筛选和杂交预选,从而构建染色体特异的cDNA库。
将cDNA克隆与中期染色体进行荧光原位杂交(FISH),可以在一个步骤中精确地进行染色体定位。此技术的综述,参见Verma等,Human Chromosomes:a Manual of BasicTechniques,Pergamon Press,New York(1988)。
一旦序列被定位到准确的染色体位置,此序列在染色体上的物理位置就可以与基因图数据相关联。这些数据可见于例如,V.Mckusick,Mendelian Inheritance in Man(可通过与Johns Hopkins University Welch Medical Library联机获得)。然后可通过连锁分析,确定基因与业已定位到染色体区域上的疾病之间的关系。
接着,需要测定患病和未患病个体间的cDNA或基因组序列差异。如果在一些或所有的患病个体中观察到某突变,而该突变在任何正常个体中未观察到,则该突变可能是疾病的病因。比较患病和未患病个体,通常涉及首先寻找染色体中结构的变化,如从染色体水平可见的或用基于cDNA序列的PCR可检测的缺失或易位。根据目前的物理作图和基因定位技术的分辨能力,被精确定位至与疾病有关的染色体区域的cDNA,可以是50至500个潜在致病基因间之一种(假定1兆碱基作图分辨能力和每20kb对应于一个基因)。
本发明的具有抑癌功能的蛋白核苷酸全长序列或其片段通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。对于PCR扩增法,可根据本发明所公开的有关核苷酸序列,尤其是开放阅读框序列来设计引物,并用市售的cDNA库或按本领域技术人员已知的常规方法所制备的cDNA库作为模板,扩增而得有关序列。当序列较长时,常常需要进行两次或多次PCR扩增,然后再将各次扩增出的片段按正确次序拼接在一起。
一旦获得了有关的序列,就可以用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是将其克隆入载体,再转入细胞,然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。
此外,还可用人工合成的方法来合成有关序列,尤其是片段长度较短时。通常,通过先合成多个小片段,然后再进行连接可获得序列很长的片段。
目前,已经可以完全通过化学合成来编码本发明蛋白(或其片段,或其衍生物)的DNA序列。然后可将该DNA序列引入本领域中的各种DNA分子(如载体)和细胞中。此外,还可通过化学合成将突变引入本发明蛋白序列中。
此外,由于本发明的具有抑癌功能的蛋白具有源自人的天然氨基酸序列,因此,与来源于其他物种的同族蛋白相比,预计在施用于人时将具有更高的活性和/或更低的副作用(例如在人体内的免疫原性更低或没有)。
下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。应理解,这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件如Sambrook等人,分子克隆:实验室手(New York:Cold Spring Harbor LaboratoryPress,1989)中所述的条件,或按照制造厂商所建议的条件。
具体实施方式
实施例1:cDNA基因的获得及对癌细胞克隆形成的抑制作用
PP4491、PP5644、PP6068、PP6361、PP6455、PP6489、PP6614、PP6781、PP6832和PP6933是通过用常规方法构建人胎盘cDNA文库获得的。取3、6、10月龄的胎盘组织,用Trizol试剂(GIBCO BRL公司)按厂方说明书提取总RNA,用mRNA提纯试剂盒(Pharmacia公司)提取mRNA。用pCMV-script TMXRcDNA文库构建试剂盒(Stratagene公司)构建上述mRNA的cDNA文库。其中反转录酶改用MMLV-RT-Superscriptll(GIBCO BRL),反转录反应在42℃进行。转化XL 10-Gold感受细胞,获得了1×106cfu/μg cDNA滴度的cDNA文库。第一轮随机挑取cDNA克隆,其后以高丰度cDNA克隆和已证明有抑癌细胞生长功能的cDNA克隆为探针,杂交筛选cDNA文库,挑取弱阳性及阴性克隆。用Qiagen 96孔板质粒抽提试剂盒,按厂家说明书进行质粒DNA的提取。质粒DNA和空载体同时转染肝癌细胞系7721。100ng DNA酒精沉淀干燥后,加6μl H2O溶解,待转染。每份DNA样品中加0.74μl脂质体及9.3μl无血清培液,混匀后,室温放置10分钟。每管中加150μl无血清培液,均分加入3孔生长于96孔板的7721细胞中,37℃放置2小时,每孔再加50μl无血清培液,37℃24小时。每孔换100μl全培液,37℃24小时,换含G418的全培液100μl,37℃24~48小时,边观察,边换G418浓度不等的培液。约2~3次后,直到镜检细胞有克隆形成,计数。发现以上克隆有抑制细胞克隆形成作用,结果如下表所示。
cDNA克隆转染细胞(7721)克隆形成情况
cDNA克隆名称 | cDNA克隆数(三个重复) | 空载体克隆数(三个重复) |
PP4491PP5644PP6068PP6361PP6455PP6489PP6614PP6781PP6832PP6933 | 4 8 122 2 25 7 819 12 112 9 1015 11 1213 16 1112 10 1115 18 141 8 1 | 48 38 3535 39 3223 2 2525 26 3151 35 3751 35 3748 38 3548 38 3548 38 3548 38 35 |
对上述cDNA克隆采用双脱氧终止法,在ABI377 DNA自动测序仪上测定其一端近500bp的核苷酸序列。分析后,确定为新基因克隆,进行另一端测序,仍未获得全长cDNA序列,设计引物,再次进行测序,直到获得全长序列(SEQ ID NO:1、4、7、10、13、16、19、22、25、28)。
实施例2:从胎盘cDNA中PCR获得全长基因:
取3、6、10月龄的胎盘组织,用Trizol试剂(GIBCO BRL公司)按厂方说明书提取总RNA,用mRNA提纯试剂盒(Pharmacia公司)提取mRNA。用MMLV-RT-Superscript II(GIBCO BRL),反转录酶在42℃进行反转录反应,获得胎盘cDNA。利用各个基因的转异引物(如下表所示),按97℃3分钟、1个循环;94℃30秒→60℃30秒→72℃1分钟,共35个循环;72℃10分钟,1个循环,进行PCR扩增,获得含有完整开放阅读框序列的各蛋白基因的扩增产物。扩增产物经测序验证,与实施例1测得的序列相符,随后用常规技术将扩增产物转入宿主细胞,从而获得重组蛋白。
基因特异引物
克隆名称 | 特异引物1(5’→3’) | 特异引物2(5’→3’) |
PP4491PP5644PP6068PP6361PP6455PP6489PP6614PP6781PP6832PP6933 | CCAGGCCTTGTTTTGTTTGTCTTGTTAACGGATGCCTGGTGTGGTCTGGTGGCATTTCTTGACTCTTCCCAGTGTCCTGCCCGGAAGGTGAAAGTGTTCTGGAGGTGGATCAGACAGCATGGCACTAAATGGTGCTTGGTTGATCATCTTCCTCATCCCCCAGAGTAGCTGCGGTGAGTGCAGCTGCCCAAACAGTTTTC | ATGATATTCGAGGCCTGGTGAACGCACTGTTTATTTGGGGCTCTTGGGTTTCCTGGTCAATCACAGACACTGACCCTCCAGGAAAAGTGGCTCATTCCAATAGCCCACAAACATGCCATATTGTGCTACTGTGCCCACTCCTGTGGCACTGAGCTACTGGGGAAAGAGAGAGGGACTGGGAGAGGGATGGTGATGAGGTG |
实施例3:cDNA克隆序列分析
1.PP4491
A:核苷酸序列(SEQ ID NO:1)长度:2058bp
1 CGACCTTTAT TGCTGGGAGC TGGCTTCTGT CCCTTTCTTC CCCCCCCCAC GAGTCTTGCC
61 CTTGACTTCT GCTCTGGATT CACTCTTCCC TGTCGGCCGC GCATGTGCTC ATCCCACTCT
121 CCGCTAAGCG GGAGGCTGCT GTTAGAGCAG GCTGCTTCCT GCCTAAAGCA GGCCCTTCGG
181 GGCTCGCTGC ACACACATCT CTGGCTCTCC AGGCTTCGTG TTCTGTCTTT TCATCAGCAT
241 GGCGGGGCGG GGGGCGGGGG GCGGGGGTGT GTTTGGGAAT CCCTCCCCCT CTTACTTTTT
301 CTCTTGTGGA ACTTGGCCAC AGTTTCTGAA CAATGTGCCT ACATTACCAG CTGGTTTCAG
361 TGATTCCTCT GTGTCCCTTT TTGGTTTCTG GAAAGATTCT TTGTCAACAT TAGTAACTGA
421 TACATAGAAC CAAGGAGCAC TCAAATAGGG AGCCAGGAGC CAGGGAGCTG GTGACACTTG
481 TGTGCTGTGG GGCAGCTGGG ATCCAGGTAA GACCGGATTG AAGCTTTGAA ATTAGACTAA
541 CAAAGCTCCA GACAGCAAGA GCCCAGGTGC ACTGCTCACA CCCCCACCTG CATTTTGAAG
601 TCATATTATT TTTTGTTTTG TTTTTTAAGA CGGTCTGGCT CTGTCGCCTA AGCTGGAGTG
661 TGGTGGCACG ATCACAGCTC ACTGCAGCCT CCATCTCCTA GGCTCAAGCC ATTTTCCCAC
721 CTCAGCCTCC CGAGTAGCTG GGACTACAGG TGCACACCAC CACACCTGGC TAATTTTTTG
781 TATTTTTAGT AGAGACGGGG GTTTCTTCCA TGTTGCCCAG GCTGGTCTCG AACTCCTGGA
841 CTCAAGCAAT CCGCCCACCT TGACTTCCCA AAGTGCTGGG ATTATGGGTG GGTGTGAGCC
901 ATTGCGCCCA GCCTTGAAGT CATGTTCTAA ATTGTATTTG AATTTGTGCC TCTTTGTTTT
961 TCCCCAAACC AAAGCCCTCA AATTGTAGTC TCTGTCGGCT TCTGCAGAAT TCTGGAAAAT
1021 GCCAGTTTTC CTCCCCCGCC CTTGTTTTCC ATAAAACATA TTTATATATT GTGATGAGGA
1081 GTACTTTCTG AAGAGTACTT CGTATTTTTT TTTAATTGCC TTGTTTGCCT TCAACTTCCT
1141 TGATTTTCAT AGTTTACATG GGTGTGTGTA GGGGTGTGTG TGTGTATGTG TGTGGGTTAG
1201 GGCTTTTTTC GTTGCATGTG ATGGTTCTGT GGACATATGA TCCCCACAAA CTGTGGGAGT
1261 GATTGGCCAG GCCTTGTTTT GTTTGTTTGT TTGTTTGTGT TTTTGTTCTT TTGAAGAATA
1321 GAGTGGTATT TAGAAAATAA ATTGCATTGC AAAGCTCTTA TCGGCTCATA TGAGAGAGCA
1381 GGTTCCTGCC CTTGAAAATG CCGGTAAGCT ATAGCATATG TTTTTTAAGA CTTAAGCATT
1441 TCATGCTTTA AAATACCTTC ACAAGTGAAC ATTACACACA GAAGTTCATT TGGTTTTCCT
1501 TTGTTTTATG GTGCATATAG CAATAAAGAC CCCCCTCCAC CCTGCAACCC CCATCCCCCA
1561 CCGGGCCTTT GTCCCTGCCT TGGCTTTTCT CCCCTTCTCA TTCTCCTCTC CCCTTTCCTC
1621 ACTGAAGGCT GTGAGTTGCT TTCAATGTGA CAACACTATG ATGTCATTTG GAAGGATTTG
1681 CCAGGACAGA CTGATTCTGA GTCCTGGGTG CCGTATGTGT ATGCGGCAGT GTTGTCAGGC
1741 GATCTTGTTT GAAGCTCTAT GTTGCCATAA TTACCATCAA GTACACACTG TTGGCAAAAG
1801 GCTAACACCT GACTTTAGAA AATGCTGATT TGAGAACAAA AGGAAAGGTC TTTTTTCACT
1861 GCTTAAAGTG GGGTCACTTT GATACCTTTG CGGTCATGTC TGTGTCTGAT GAGTGTAGAA
1921 TCTCTGGATG TGCACTGTCA GTCATGTGTC CACCAGGCCT CGAATATCAT ATGGGAAATG
1981 TCATAGTTAA AAACGTACAG CCAGGCCCGT GTGCTGTTAA TAGTGTGAAA TTGTCATGTT
2041 AAAAAAAAAA AAAAAAAA
B:氨基酸序列 (SEQ ID NO:2)长度:106个氨基酸
1 MVHIAIKTPL HPATPIPHRA FVPALAFLPF SFSSPLSSLK AVSCFQCDNT MMSFGRICQD
61 RLILSPGCRM CMRQCCQAIL FEALCCHNYH QVHTVGKRLT PDFRKC
C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:3)
克隆号:PP4491
起始编码子:1508 ATG 终止编码子:1826 TGA
蛋白质分子量:11939.69
1 C GAC CTT TAT TGC TGG GAG CTG GCT TCT GTC CCT TTC TTC CCC CCC 46
47 CCA CGA GTC TTG CCC TTG ACT TCT GCT CTG GAT TCA CTC TTC CCT GTC 94
95 GGC CGC GCA TGT GCT CAT CCC ACT CTC CGC TAA GCG GGA GGC TGC TGT 142
143 TAG AGC AGG CTG CTT CCT GCC TAA AGC AGG CCC TTC GGG GCT CGC TGC 190
191 ACA CAC ATC TCT GGC TCT CCA GGC TTC GTG TTC TGT CTT TTC ATC AGC 238
239 ATG GCG GGG CGG GGG GCG GGG GGC GGG GGT GTG TTT GGG AAT CCC TCC 286
287 CCC TCT TAC TTT TTC TCT TGT GGA ACT TGG CCA CAG TTT CTG AAC AAT 334
335 GTG CCT ACA TTA CCA GCT GGT TTC AGT GAT TCC TCT GTG TCC CTT TTT 382
383 GGT TTC TGG AAA GAT TCT TTG TCA ACA TTA GTA ACT GAT ACA TAG AAC 430
431 CAA GGA GCA CTC AAA TAG GGA GCC AGG AGC CAG GGA GCT GGT GAC ACT 478
479 TGT GTG CTG TGG GGC AGC TGG GAT CCA GGT AAG ACC GGA TTG AAG CTT 526
527 TGA AAT TAG ACT AAC AAA GCT CCA GAC AGC AAG AGC CCA GGT GCA CTG 574
575 CTC ACA CCC CCA CCT GCA TTT TGA AGT CAT ATT ATT TTT TGT TTT GTT 622
623 TTT TAA GAC GGT CTG GCT CTG TCG CCT AAG CTG GAG TGT GGT GGC ACG 670
671 ATC ACA GCT CAC TGC AGC CTC CAT CTC CTA GGC TCA AGC CAT TTT CCC 718
719 ACC TCA GCC TCC CGA GTA GCT GGG ACT ACA GGT GCA CAC CAC CAC ACC 766
767 TGG CTA ATT TTT TGT ATT TTT AGT AGA GAC GGG GGT TTC TTC CAT GTT 814
815 GCC CAG GCT GGT CTC GAA CTC CTG GAC TCA AGC AAT CCG CCC ACC TTG 862
863 ACT TCC CAA AGT GCT GGG ATT ATG GGT GGG TGT GAG CCA TTG CGC CCA 910
911 GCC TTG AAG TCA TGT TCT AAA TTG TAT TTG AAT TTG TGC CTC TTT GTT 958
959 TTT CCC CAA ACC AAA GCC CTC AAA TTG TAG TCT CTG TCG GCT TCT GCA 1006
1007 GAA TTC TGG AAA ATG CCA GTT TTC CTC CCC CGC CCT TGT TTT CCA TAA 1054
1055 AAC ATA TTT ATA TAT TGT GAT GAG GAG TAC TTT CTG AAG AGT ACT TCG 1102
1103 TAT TTT TTT TTA ATT GCC TTG TTT GCC TTC AAC TTC CTT GAT TTT CAT 1150
1151 AGT TTA CAT GGG TGT GTG TAG GGG TGT GTG TGT GTA TGT GTG TGG GTT 1198
1199 AGG GCT TTT TTC GTT GCA TGT GAT GGT TCT GTG GAC ATA TGA TCC CCA 1246
1247 CAA ACT GTG GGA GTG ATT GGC CAG GCC TTG TTT TGT TTG TTT GTT TGT 1294
1295 TTG TGT TTT TGT TCT TTT GAA GAA TAG AGT GGT ATT TAG AAA ATA AAT 1342
1343 TGC ATT GCA AAG CTC TTA TCG GCT CAT ATG AGA GAG CAG GTT CCT GCC 1390
1391 CTT GAA AAT GCC GGT AAG CTA TAG CAT ATG TTT TTT AAG ACT TAA GCA 1438
1439 TTT CAT GCT TTA AAA TAC CTT CAC AAG TGA ACA TTA CAC ACA GAA GTT 1486
1487 CAT TTG GTT TTC CTT TGT TTT ATG GTG CAT ATA GCA ATA AAG ACC CCC 1534
1 Met Val His Ile Ala Ile Lys Thr Pro 9
1535 CTC CAC CCT GCA ACC CCC ATC CCC CAC CGG GCC TTT GTC CCT GCC TTG 1582
10 Leu His Pro Ala Thr Pro Ile Pro His Arg Ala Phe Val Pro Ala Leu 25
1583 GCT TTT CTC CCC TTC TCA TTC TCC TCT CCC CTT TCC TCA CTG AAG GCT 1630
26 Ala Phe Leu Pro Phe Ser Phe Ser Ser Pro Leu Ser Ser Leu Lys Ala 41
1631 GTG AGT TGC TTT CAA TGT GAC AAC ACT ATG ATG TCA TTT GGA AGG ATT 1678
42 Val Ser Cys Phe Gln Cys Asp Asn Thr Met Met Ser Phe Gly Arg Ile 57
1679 TGC CAG GAC AGA CTG ATT CTG AGT CCT GGG TGC CGT ATG TGT ATG CGG 1726
58 Cys Gln Asp Arg Leu Ile Leu Ser Pro Gly Cys Arg Met Cys Met Arg 73
1727 CAG TGT TGT CAG GCG ATC TTG TTT GAA GCT CTA TGT TGC CAT AAT TAC 1774
74 Gln Cys Cys Gln Ala Ile Leu Phe Glu Ala Leu Cys Cys His Asn Tyr 89
1775 CAT CAA GTA CAC ACT GTT GGC AAA AGG CTA ACA CCT GAC TTT AGA AAA 1822
90 His Gln Val His Thr Val Gly Lys Arg Leu Thr Pro Asp Phe Arg Lys 105
1823 TGC TGA TTT GAG AAC AAA AGG AAA GGT CTT TTT TCA CTG CTT AAA GTG 1870
106 Cys *** 107
1871 GGG TCA CTT TGA TAC CTT TGC GGT CAT GTC TGT GTC TGA TGA GTG TAG 1918
1919 AAT CTC TGG ATG TGC ACT GTC AGT CAT GTG TCC ACC AGG CCT CGA ATA 1966
1967 TCA TAT GGG AAA TGT CAT AGT TAA AAA CGT ACA GCC AGG CCC GTG TGC 2014
2015 TGT TAA TAG TGT GAA ATT GTC ATG TTA AAA AAA AAA AAA AAA AA 2058
2.PP5644
A:核苷酸序列(SEQ ID NO:4)长度:2293bp
1 GCACGCATAG GGGCTTGGTT CTATGTCCCT GTGGCTATGT TTCCAGTGTC CTCTGGGTGT
61 TTCCAAGAGC AACAAGAAAC GAATAAATCT CTGCCCCGCA GCGCCTCCAC CCCAGAGACC
121 CGGACCAAGT TCACACAGGA CAATCTGTGC CACGCCCAGC GCGAGCGCCT GGACTCGGCC
181 AACCTGTGGG TGCTGGTGGA CTGCATCCTT CGCGACACCT CCGAGGACCT GGGACTCCAG
241 TGTGACGCCG TGAACCTGGC CTTCGGGCGC CGCTGTGAGG AACTGGAGGA CGCGCGGCAC
301 AAGCTGCAGC ACCACCTGCA CAAGGTGGGG CACCCTTGAA CCCCGAAGAC GGCTCCGGCG
361 CCTGCCCACC ACTCTGCCCC CTCTCATCAC CTGGCCTGGG CCCTCAACAC CTTTCTCCTC
421 TGTCCCACTT ATCCCGAGGG ACCCCAGAAG CAAGTGTCAC CTCTCCGTAA ACCTATGTAA
481 AACCAGGTGA CACTGGGTAT GATCGCAGTG TGTTGCAACC CCCATGACTG AGAAGGAGGA
541 GCTGTGGGGA GGATGGAGGC AGGAGCTGGT CTGGGGAGCA TTGACTGCCT GGGAGGTCCC
601 CAAGAGTCCT GGCCTGGCAG GCAGGGCTCT GACTCTAGGG CCTCAGCATG GCCTTTACCA
661 CCTCTGAGTC CCCAGTCCTT GAGCAGGATT TGGGTCCTGG TGACCACCAA GGATGGGGGT
721 TCTTGGACCA GAGCTAAGAG ACAACAGGCT GCCTGACTCT CCAGAGCCCG CTGGGGGCCC
781 CAGTGCACAT TGGTTCCCCT CACCCACGCC TCCCCAGGGC CACTGGTCAG GACCACCCTC
841 TGGACACAGC CCCAGGAGCT GGGTAGGACC AGACTGGTCT CTACATTCCA TATGCCCGGG
901 CATGGGGGCA CAGGCCCAAG GGGCACTGTC CTGTCTGCAG ATGCTGCGGG AAATCACAGA
961 TCAGGAACAC AACGTGGTGG CACTGAAGGA GGCCATCAAG GACAAGGAGG AACCTCTGCA
1021 CATAGCCCAG ACCCGGCTGT AGCTTGCTCT CACACCGGCC CAACATGCAG CTGTCGGCGA
1081 TGCACGCCCA GTTCAGGTAC TGCCTGGGCC TCTGAGGCAG TCCCAGGTGC CCCCGTCCAC
1141 CTCCTCGCTG CGACCCTCTC CAATAAACAC TCCAATCTCC ACACACACAT CCCCCACAGG
1201 TGCTGAGAGG GGAGGGAGAC TCTGCGGCCA CACACAACAT GCAAGCACGC CTTAAACACA
1261 CAGATATAGA CATGACACTG GGCAGGTCAT GGGTCGGGGG CCTCCCCGTG CCAGGGACCT
1321 GTGCCCACGT GGTCTCACCC CACCCTGTGC TACCTCATCT TCCCGGGAGG AAGCTCCTTC
1381 AGACAAGGTG AGCTCCTGGA GGCCACGGGG CCAGAGAGGC CAGAGAGGGC CATTCCCTGC
1441 TGCCCTGAGG GTGCTGTCCC CACCTCTGGT GGAAAGTATG ACCTACGCCT GGGCTACAGG
1501 CATAGATGGG CCGTCCTTTT GTTTCCCTTG TTAACGGATG CCTGGTGGCC CCTTCTGAGC
1561 CTAAGTACCT TTCTTCCTTC CCTGCCCCTC AGTTCCTTCA AGGAACTGGG TGCCTCCTTC
1621 CGTCAAATAT CAGGAATGGA AAGAACTGAG CCTGGTCGGC TGAGGCCAGT CCTGTCCTGT
1681 CAGGGTCGAG ATTGCACGCG GGTCACTCAT TCCCACTCAG GTCCGCGCTC CCTGGGAGGA
1741 CCCTCGTAAT TTATGCTCTG CCCTAGAGCC GCTTTCCTGG TAGGATCCTT TCATGGCGTC
1801 TTCCCAGGAC CTCCTGCCAG CTCCCATTGG GAGTTTTGGG TCCCCTCCAC CCCAGTAGGT
1861 GCATACTTCT GCCCTCCCCA GCCCCAGCTC ACACCCCCCA ACACCCCCAA GCTGGTGAGT
1921 GAGGTGGAGG AGCTGTACAA GTCCATCACA GCGCTGCGGG AGAAGCTTCT ACAAGCGGAG
1981 CAGTCCCTGC GCAACCTCAA GGACATCCAC ATGAGCCTGG AGAAGGACGT CACCGCCATG
2041 ACCAACAGTG TCTTCATCGA CCGCCAGAAG TGCATGGCCC ATCGTACTTG CTACCCCACC
2101 ATTCTGCAGC TGGCTGGCTA CCAGTGAGCA GCGGCACGGT GCTTCCCCCC AATCCCCCAA
2161 ATAAACAGTG CGTTAGTTTC TGCAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA
2221 AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAAA AAAAAAAAA AAAAAAAAAA
2281 AAAAAAAAAA AAA
B:氨基酸序列(SEQ ID NO:5)长度:124个氨基酸
1 MLCPRAAFLV GSFHGVFPGP PASSHWEFWV PSTPVGAYFC PPQPQLTPPN TPKLVSEVEE
61 LYKSITALRE KLLQAEQSLR NLKDIHMSLE KDVTAMTNSV FIDRQKCMAH RTCYPTILQL
121 AGYQ
C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:6)
克隆号:PP5644
起始编码子:1753 ATG 终止编码子:2125 TGA
蛋白质分子量:13946.47
1 GCA CGC ATA GGG GCT TGG TTC TAT GTC CCT GTG GCT ATG TTT CCA GTG 48
49 TCC TCT GGG TGT TTC CAA GAG CAA CAA GAA ACG AAT AAA TCT CTG CCC 96
97 CGC AGC GCC TCC ACC CCA GAG ACC CGG ACC AAG TTC ACA CAG GAC AAT 144
145 CTG TGC CAC GCC CAG CGC GAG CGC CTG GAC TCG GCC AAC CTG TGG GTG 192
193 CTG GTG GAC TGC ATC CTT CGC GAC ACC TCC GAG GAC CTG GGA CTC CAG 240
241 TGT GAC GCC GTG AAC CTG GCC TTC GGG CGC CGC TGT GAG GAA CTG GAG 288
289 GAC GCG CGG CAC AAG CTG CAG CAC CAC CTG CAC AAG GTG GGG CAC CCT 336
337 TGA ACC CCG AAG ACG GCT CCG GCG CCT GCC CAC CAC TCT GCC CCC TCT 384
385 CAT CAC CTG GCC TGG GCC CTC AAC ACC TTT CTC CTC TGT CCC ACT TAT 432
433 CCC GAG GGA CCC CAG AAG CAA GTG TCA CCT CTC CGT AAA CCT ATG TAA 480
481 AAC CAG GTG ACA CTG GGT ATG ATC GCA GTG TGT TGC AAC CCC CAT GAC 528
529 TGA GAA GGA GGA GCT GTG GGG AGG ATG GAG GCA GGA GCT GGT CTG GGG 576
577 AGC ATT GAC TGC CTG GGA GGT CCC CAA GAG TCC TGG CCT GGC AGG CAG 624
625 GGC TCT GAC TCT AGG GCC TCA GCA TGG CCT TTA CCA CCT CTG AGT CCC 672
673 CAG TCC TTG AGC AGG ATT TGG GTC CTG GTG ACC ACC AAG GAT GGG GGT 720
721 TCT TGG ACC AGA GCT AAG AGA CAA CAG GCT GCC TGA CTC TCC AGA GCC 768
769 CGC TGG GGG CCC CAG TGC ACA TTG GTT CCC CTC ACC CAC GCC TCC CCA 816
817 GGG CCA CTG GTC AGG ACC ACC CTC TGG ACA CAG CCC CAG GAG CTG GGT 864
865 AGG ACC AGA CTG GTC TCT ACA TTC CAT ATG CCC GGG CAT GGG GGC ACA 912
913 GGC CCA AGG GGC ACT GTC CTG TCT GCA GAT GCT GCG GGA AAT CAC AGA 960
961 TCA GGA ACA CAA CGT GGT GGC ACT GAA GGA GGC CAT CAA GGA CAA GGA 1008
1009 GGA ACC TCT GCA CAT AGC CCA GAC CCG GCT GTA GCT TGC TCT CAC ACC 1056
1057 GGC CCA ACA TGC AGC TGT CGG CGA TGC ACG CCC AGT TCA GGT ACT GCC 1104
1105 TGG GCC TCT GAG GCA GTC CCA GGT GCC CCC GTC CAC CTC CTC GCT GCG 1152
1153 ACC CTC TCC AAT AAA CAC TCC AAT CTC CAC ACA CAC ATC CCC CAC AGG 1200
1201 TGC TGA GAG GGG AGG GAG ACT CTG CGG CCA CAC ACA ACA TGC AAG CAC 1248
1249 GCC TTA AAC ACA CAG ATA TAG ACA TGA CAC TGG GCA GGT CAT GGG TCG 1296
1297 GGG GCC TCC CCG TGC CAG GGA CCT GTG CCC ACG TGG TCT CAC CCC ACC 1344
1345 CTG TGC TAC CTC ATC TTC CCG GGA GGA AGC TCC TTC AGA CAA GGT GAG 1392
1393 CTC CTG GAG GCC ACG GGG CCA GAG AGG CCA GAG AGG GCC ATT CCC TGC 1440
1441 TGC CCT GAG GGT GCT GTC CCC ACC TCT GGT GGA AAG TAT GAC CTA CGC 1488
1489 CTG GGC TAC AGG CAT AGA TGG GCC GTC CTT TTG TTT CCC TTG TTA ACG 1536
1537 GAT GCC TGG TGG CCC CTT CTG AGC CTA AGT ACC TTT CTT CCT TCC CTG 1584
1585 CCC CTC AGT TCC TTC AAG GAA CTG GGT GCC TCC TTC CGT CAA ATA TCA 1632
1633 GGA ATG GAA AGA ACT GAG CCT GGT CGG CTG AGG CCA GTC CTG TCC TGT 1680
1681 CAG GGT CGA GAT TGC ACG CGG GTC ACT CAT TCC CAC TCA GGT CCG CGC 1728
1729 TCC CTG GGA GGA CCC TCG TAA TTT ATG CTC TGC CCT AGA GCC GCT TTC 1776
1 Met Leu Cys Pro Arg Ala Ala Phe 8
1777 CTG GTA GGA TCC TTT CAT GGC GTC TTC CCA GGA CCT CCT GCC AGC TCC 1824
9 Leu Val Gly Ser Phe His Gly Val Phe Pro Gly Pro Pro Ala Ser Ser 24
1825 CAT TGG GAG TTT TGG GTC CCC TCC ACC CCA GTA GGT GCA TAC TTC TGC 1872
25 His Trp Glu Phe Trp Val Pro Ser Thr Pro Val Gly Ala Tyr Phe Cys 40
1873 CCT CCC CAG CCC CAG CTC ACA CCC CCC AAC ACC CCC AAG CTG GTG AGT 1920
41 Pro Pro Gln Pro Gln Leu Thr Pro Pro Asn Thr Pro Lys Leu Val Ser 56
1921 GAG GTG GAG GAG CTG TAC AAG TCC ATC ACA GCG CTG CGG GAG AAG CTT 1968
57 Glu Val Glu Glu Leu Tyr Lys Ser Ile Thr Ala Leu Arg Glu Lys Leu 72
1969 CTA CAA GCG GAG CAG TCC CTG CGC AAC CTC AAG GAC ATC CAC ATG AGC 2016
73 Leu Gln Ala Glu Gln Ser Leu Arg Asn Leu Lys Asp Ile His Met Ser 88
2017 CTG GAG AAG GAC GTC ACC GCC ATG ACC AAC AGT GTC TTC ATC GAC CGC 2064
89 Leu Glu Lys Asp Val Thr Ala Met Thr Asn Ser Val Phe Ile Asp Arg 104
2065 CAG AAG TGC ATG GCC CAT CGT ACT TGC TAC CCC ACC ATT CTG CAG CTG 2112
105 Gln Lys Cys Met Ala His Arg Thr Cys Tyr Pro Thr Ile Leu Gln Leu 120
2113 GCT GGC TAC CAG TGA GCA GCG GCA CGG TGC TTC CCC CCA ATC CCC CAA 2160
121 Ala Gly Tyr Gln *** 125
2161 ATA AAC AGT GCG TTA GTT TCT GCA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA 2208
2209 AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA 2256
2257 AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA A 2293
3.PP6068
A:核苷酸序列(SEQ ID NO:7)长度:1851bp
1 GAAATTCCAC AGCTCCCGTC CTGGCCACCC TGGAAGCTCA TCAGGCCAAG ACCCGGACAG
61 AGCTTCAGAG GAGTGTTGAG TGACACCTGA GGATGCGGCT GCACACACTC AGCCAAGGGC
121 CGAGTCTCAC CTGCGGTGGG GTTTCGGCTC TGCCTGGGGG CTCCATCCCT TTCAGCCACT
181 CGTGGCCTTG GGGATTTCTG GTTGTCCCCA GCTGGGACTG TTCACAGTTG TCACCTGCAG
241 ACCTGCCTCT CCCTGGCCTG AGGTTCAAAG GCCTCATCGG ATGGTCAGTA CAGTGGGGTC
301 ACCTGTTGTT TCTATACAAC AGCAGGGAAG GGGCCATGGA GCTTTTCCCT GCTGGGTGCT
361 CCTGCTTTGG CCCAGCCCAC CTTTCCTGGT GCTCCAAGCT AGGAGGCTGT GGCCCCAGCC
421 TGAGGAGGGT GTCCTGGCCT CCAGGTGTGC AGCAGGGGCT GTGTGCTGGG GGAGGTTCCA
481 GTTAGGCGAT GGGATCCTGC AGTGGTCTGG TGGCATTTCT TGGAACCAGA TTTACCTGAG
541 GAGCTCTGTC CTGCTCCCTG TGGAGGGCTC CAGATAGCTC AGAAATGACC AGCCAATGGC
601 CTTTTGTTTG GGGGCCTGAG GTCAAGAGAG CTGAGAGTAT TCGCTCGACT GAGCACATTC
661 AGGAAGATCA GGGCAGGCGT GTGGGAGGTC CCTCACTCCA CGGGACAGAG GCCCCTGGAC
721 AGCAGAGGAA ACCTACAGCT CTGGGTGAGG GGACACTTGG CTTTGGTGTT TGCACTTTAC
781 AGATCCTGCG GTCCACGAGG GGCCTCAGGA GAGGACGTGT CAGGACGTGG CTTCCCAGCC
841 TTCTGCCTTG GGCAGTGGGG GTGCTCCTGT CTGTCCTTTT CCCCCACACC CTGGACTGTG
901 CTTGGCTGTT GGTGCACATG GTTGGCACAC GGTGGGCAGA GGGCAGAGAA TGCCACTGCT
961 TGGTTATTGG TCCCCTTTGA CCAGGAAACC CAAGAGGAGA CACCTCAGTC AGCAGAAAGG
1021 CCACCTGGCT CACTGGCTCA TTCCAGGAGT GGGAGAGACG GCAGGGTCTC CTCTTTGTCC
1081 TCCGGCATCA GGAAGGGGAT GGTGTCCACT CCCCACTGTG GTGGCTTTAG GCAAGGTTCT
1141 TATTGTCTGC TCTGCCTCGG TTTCCCCATC TGGAAAATGG GGGCAGGGGT CCTGACCTAC
1201 CTCAGGTGGA ACGGTGAGCA GGGAACATGT CGGAGTCCTT CAGAGAATGT GATGTGAGGT
1261 TGGATCAACA GTGTGGGTTC CTGTCCTGTT TCCCCTTCCT CTTTGGGGCT GAGGAGGAGG
1321 TTAAAGGCCA AATGCTGTTT CCCAACACCC CAAAGTCTGC ACACGTCTCA TGAATGCATC
1381 ACATTTCTGT CATATGGATA TTAGCCATTC CGAAATCTGT GTAATCAACT TCACATTATT
1441 CAAGTTACAA ATCACTGTGT CCATAGAAAA ACTGTGCTGG TATTTGCTGG ACAAAGGGTT
1501 GGGCCCCTTT TATTTTTACC TGCCACCCAG CATCTCCCCC ACCTGCCCCT TCTGGGTGAC
1561 ACAGCCGGTA AACGGAATCA CGTATGGTTC TTTCTGTGGG TCTGTGGCAC AGCAGGAAGA
1621 GCCCGGTGCC GCCAGCACCT TGTGGAAGAC CACACATGGG TGGTCCCACA GCATGGGACC
1681 AGGCTGGCCT GAGGGATGCC CAGTTGTAAC AATGCTGCTG TCACTGTCTC ATTAAATATA
1741 CATCCTTTAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA
1801 AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA A
B:氨基酸序列 (SEQ ID NO:8)长度:131个氨基酸
1 MTSQWPFVWG PEVKRAESIR STEHIQEDQG RRVGGPSLHG TEAPGQQRKP TALGEGTLGF
61 GVCTLQILRS TRGLRRGRVR TWLPSLLPWA VGVLLSVLFP HTLDCAWLLV HMVGTRWAEG
121 RECHCLVIGP L
C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:9)
克隆号:PP6068
起始编码子:585 ATG 终止编码子:978 TGA
蛋白质分子量:14556.15
1 GA AAT TCC ACA GCT CCC GTC CTG GCC ACC CTG GAA GCT CAT CAG GCC 47
48 AAG ACC CGG ACA GAG CTT CAG AGG AGT GTT GAG TGA CAC CTG AGG ATG 95
96 CGG CTG CAC ACA CTC AGC CAA GGG CCG AGT CTC ACC TGC GGT GGG GTT 143
144 TCG GCT CTG CCT GGG GGC TCC ATC CCT TTC AGC CAC TCG TGG CCT TGG 191
192 GGA TTT CTG GTT GTC CCC AGC TGG GAC TGT TCA CAG TTG TCA CCT GCA 239
240 GAC CTG CCT CTC CCT GGC CTG AGG TTC AAA GGC CTC ATC GGA TGG TCA 287
288 GTA CAG TGG GGT CAC CTG TTG TTT CTA TAC AAC AGC AGG GAA GGG GCC 335
336 ATG GAG CTT TTC CCT GCT GGG TGC TCC TGC TTT GGC CCA GCC CAC CTT 383
384 TCC TGG TGC TCC AAG CTA GGA GGC TGT GGC CCC AGC CTG AGG AGG GTG 431
432 TCC TGG CCT CCA GGT GTG CAG CAG GGG CTG TGT GCT GGG GGA GGT TCC 479
480 AGT TAG GCG ATG GGA TCC TGC AGT GGT CTG GTG GCA TTT CTT GGA ACC 527
528 AGA TTT ACC TGA GGA GCT CTG TCC TGC TCC CTG TGG AGG GCT CCA GAT 575
576 AGC TCA GAA ATG ACC AGC CAA TGG CCT TTT GTT TGG GGG CCT GAG GTC 623
1 Met Thr Ser Gln Trp Pro Phe Val Trp Gly Pro Glu Val 13
624 AAG AGA GCT GAG AGT ATT CGC TCG ACT GAG CAC ATT CAG GAA GAT CAG 671
14 Lys Arg Ala Glu Ser Ile Arg Ser Thr Glu His Ile Gln Glu Asp Gln 29
672 GGC AGG CGT GTG GGA GGT CCC TCA CTC CAC GGG ACA GAG GCC CCT GGA 719
30 Gly Arg Arg Val Gly Gly Pro Ser Leu His Gly Thr Glu Ala Pro Gly 45
720 CAG CAG AGG AAA CCT ACA GCT CTG GGT GAG GGG ACA CTT GGC TTT GGT 767
46 Gln Gln Arg Lys Pro Thr Ala Leu Gly Glu Gly Thr Leu Gly Phe Gly 61
768 GTT TGC ACT TTA CAG ATC CTG CGG TCC ACG AGG GGC CTC AGG AGA GGA 815
62 Val Cys Thr Leu Gln Ile Leu Arg Ser Thr Arg Gly Leu Arg Arg Gly 77
816 CGT GTC AGG ACG TGG CTT CCC AGC CTT CTG CCT TGG GCA GTG GGG GTG 863
78 Arg Val Arg Thr Trp Leu Pro Ser Leu Leu Pro Trp Ala Val Gly Val 93
864 CTC CTG TCT GTC CTT TTC CCC CAC ACC CTG GAC TGT GCT TGG CTG TTG 911
94 Leu Leu Ser Val Leu Phe Pro His Thr Leu Asp Cys Ala Trp Leu Leu 109
912 GTG CAC ATG GTT GGC ACA CGG TGG GCA GAG GGC AGA GAA TGC CAC TGC 959
110 Val His Met Val Gly Thr Arg Trp Ala Glu Gly Arg Glu Cys His Cys 125
960 TTG GTT ATT GGT CCC CTT TGA CCA GGA AAC CCA AGA GGA GAC ACC TCA 1007
126 Leu Val Ile Gly Pro Leu *** 132
1008 GTC AGC AGA AAG GCC ACC TGG CTC ACT GGC TCA TTC CAG GAG TGG GAG 1055
1056 AGA CGG CAG GGT CTC CTC TTT GTC CTC CGG CAT CAG GAA GGG GAT GGT 1103
1104 GTC CAC TCC CCA CTG TGG TGG CTT TAG GCA AGG TTC TTA TTG TCT GCT 1151
1152 CTG CCT CGG TTT CCC CAT CTG GAA AAT GGG GGC AGG GGT CCT GAC CTA 1199
1200 CCT CAG GTG GAA CGG TGA GCA GGG AAC ATG TCG GAG TCC TTC AGA GAA 1247
1248 TGT GAT GTG AGG TTG GAT CAA CAG TGT GGG TTC CTG TCC TGT TTC CCC 1295
1296 TTC CTC TTT GGG GCT GAG GAG GAG GTT AAA GGC CAA ATG CTG TTT CCC 1343
1344 AAC ACC CCA AAG TCT GCA CAC GTC TCA TGA ATG CAT CAC ATT TCT GTC 1391
1392 ATA TGG ATA TTA GCC ATT CCG AAA TCT GTG TAA TCA ACT TCA CAT TAT 1439
1440 TCA AGT TAC AAA TCA CTG TGT CCA TAG AAA AAC TGT GCT GGT ATT TGC 1487
1488 TGG ACA AAG GGT TGG GCC CCT TTT ATT TTT ACC TGC CAC CCA GCA TCT 1535
1536 CCC CCA CCT GCC CCT TCT GGG TGA CAC AGC CGG TAA ACG GAA TCA CGT 1583
1584 ATG GTT CTT TCT GTG GGT CTG TGG CAC AGC AGG AAG AGC CCG GTG CCG 1631
1632 CCA GCA CCT TGT GGA AGA CCA CAC ATG GGT GGT CCC ACA GCA TGG GAC 1679
1680 CAG GCT GGC CTG AGG GAT GCC CAG TTG TAA CAA TGC TGC TGT CAC TGT 1727
1728 CTC ATT AAA TAT ACA TCC TTT AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA 1775
1776 AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA 1823
1824 AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA A 1851
4.PP6361
A:核苷酸序列(SEQ ID NO:10)长度:1630bp
1 GGTGATGGTG GTGGCAGGTG TGGTGGTGCT GATTCTAGCC TTGGTCCTAG CTTGGCTCTC
61 TACCTACGTA GCAGACAGCG GTAGCAACCA GCTCCTGGGC GCTATTGTGT CAGCAGGCGA
121 CACATCCGTC CTCCACCTGG GGCATGTGGA CCACCTGGTG GCAGGCCAAG GCAACCCCGA
181 GCCAACTGAA CTCCCCCATC CATCAGAGGA CAAGCAGGTG CAGGCAGCAG CAGTCCAGAG
241 GCCCCCCTGA GATCTGAGGA TAGCACCTGC CTCCCTCCCA GCCCTGGCCT CATCACTGTG
301 CGGCTCAAAT TCCTCAATGA TACCGAGGAG CTGGCTGTGG CTAGGCCAGA GGATACCGTG
361 GGTGCCCTGA AGAGCAAATA CTTCCCTGGA CAAGAAAGCC AGATGAAACT GATCTACCAG
421 GGCCGCCTGC TACAAGACCC AGCCCGCACA CTGCGTTCTC TGAACATTAC CGACAACTGT
481 GTGATTCACT GCCACCGCTC ACCCCCAGGG TCAGCTGTTC CAGGCCCCTC AGCCTCCTTG
541 GCCCCCTCGG CCACTGAGCC ACCCAGCCTT GGTGTCAATG TGGGCAGCCT CATGGTGCCT
601 GTCTTTGTGG TGCTGTTGGG TGTGGTCTGG TACTTCCGAA TCAATTACCG CCAATTCTTC
661 ACAGCACCTG CCACTGTCTC CCTGGTGGGA GTCACCGTCT TCTTCAGCTT CCTAGTATTT
721 GGGATGTATG GACGATAAGG ACATAGGAAG AAAATGAAAG GCATGGTCTT TCTCCTTTAT
781 GGCCTCCCCA CTTTTCCTGG CCAGAGCTGG GCCCAAGGGC CGGGGAGGGA GGGGTGGAAA
841 GGATGTGATG GAAATCTCCT CCATAGGACA CAGGAGGCAA GTATGCGGCC TCCCCTTCTC
901 ATCCACAGGA GTACAGATGT CCCTCCCGTG CGAGCACAAC TCAGGTAGAA ATGAGGATGT
961 CATCTTCCTT CACTTTTAGG GTCCTCTGAA GGAGTTCAAA GCTGCTGGCC AAGCTCAGTG
1021 GGGAGCCTGG GCTCTGAGAT TCCCTCCCAC CTGTGGTTCT GACTCTTCCC AGTGTCCTGC
1081 ATGTCTGCCC CCAGCACCCA GGGCTGCCTG CAAGGGCAGC TCAGCATGGC CCCAGCACAA
1141 CTCCGTAGGG AGCCTGGAGT ATCCTTCCAT TTCTCAGCCA AATACTCATC TTTTGAGACT
1201 GAAATCACAC TGGCGGGAAT GAAGATTGTG CCAGCCTTCT CTTATGGGCA CCTAGCCGCC
1261 TTCACCTTCT TCCTCTACCC CTTAGCAGGA ATAGGGTGTC CTCCCTTCTT TCAAAGCACT
1321 TTGCTTGCAT TTTATTTTAT TTTTTTAAGA GTCCTTCATA GAGCTCAGTC AGGAAGGGGA
1381 TGGGGCACCA AGCCAAGCCC CCAGCATTGG GAGCGGCCAG GCCACAGCTG CTGCTCCCGT
1441 AGTCCTCAGG CTGTAAGCAA GAGACAGCAC TGGCCCTTGG CCAGCGTCCT ACCCTGCCCA
1501 ACTCCAAGGA CTGGGTATGG ATCGCTGGGC CCTAGGCTCT TGCTTCTGGG GCTATTGGAG
1561 GGTCAGTGTC TGTGACTGAA TAAAGTTCCA TTTTGTGGTC CTGCAAAAAA AAAAAAAAAA
1621 AAAAAAAAAA
B:氨基酸序列(SEQ ID NO:11)长度:164个氨基酸
1 MSAPSTQGCL QGQLSMAPAQ LRREPGVSFH FSAKYSSFET EITLAGMKIV PAFSYGHLAA
61 FTFFLYPLAG IGCPPFFQST LLAFYFIFLR VLHRAQSGRG WGTKPSPQHW ERPGHSCCSR
121 SPQAVSKRQH WPLASVLPCP TPRTGYGSLG PRLLLLGLLE GQCL
C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:12)
克隆号:PP6361
起始编码子:1081 ATG 终止编码子:1573 TGA
蛋白质分子量:17998.95
1 GGT GAT GGT GGT GGC AGG TGT GGT GGT GCT GAT TCT AGC CTT GGT CCT 48
49 AGC TTG GCT CTC TAC CTA CGT AGC AGA CAG CGG TAG CAA CCA GCT CCT 96
97 GGG CGC TAT TGT GTC AGC AGG CGA CAC ATC CGT CCT CCA CCT GGG GCA 144
145 TGT GGA CCA CCT GGT GGC AGG CCA AGG CAA CCC CGA GCC AAC TGA ACT 192
193 CCC CCA TCC ATC AGA GGA CAA GCA GGT GCA GGC AGC AGC AGT CCA GAG 240
241 GCC CCC CTG AGA TCT GAG GAT AGC ACC TGC CTC CCT CCC AGC CCT GGC 288
289 CTC ATC ACT GTG CGG CTC AAA TTC CTC AAT GAT ACC GAG GAG CTG GCT 336
337 GTG GCT AGG CCA GAG GAT ACC GTG GGT GCC CTG AAG AGC AAA TAC TTC 384
385 CCT GGA CAA GAA AGC CAG ATG AAA CTG ATC TAC CAG GGC CGC CTG CTA 432
433 CAA GAC CCA GCC CGC ACA CTG CGT TCT CTG AAC ATT ACC GAC AAC TGT 480
481 GTG ATT CAC TGC CAC CGC TCA CCC CCA GGG TCA GCT GTT CCA GGC CCC 528
529 TCA GCC TCC TTG GCC CCC TCG GCC ACT GAG CCA CCC AGC CTT GGT GTC 576
577 AAT GTG GGC AGC CTC ATG GTG CCT GTC TTT GTG GTG CTG TTG GGT GTG 624
625 GTC TGG TAC TTC CGA ATC AAT TAC CGC CAA TTC TTC ACA GCA CCT GCC 672
673 ACT GTC TCC CTG GTG GGA GTC ACC GTC TTC TTC AGC TTC CTA GTA TTT 720
721 GGG ATG TAT GGA CGA TAA GGA CAT AGG AAG AAA ATG AAA GGC ATG GTC 768
769 TTT CTC CTT TAT GGC CTC CCC ACT TTT CCT GGC CAG AGC TGG GCC CAA 816
817 GGG CCG GGG AGG GAG GGG TGG AAA GGA TGT GAT GGA AAT CTC CTC CAT 864
865 AGG ACA CAG GAG GCA AGT ATG CGG CCT CCC CTT CTC ATC CAC AGG AGT 912
913 ACA GAT GTC CCT CCC GTG CGA GCA CAA CTC AGG TAG AAA TGA GGA TGT 960
961 CAT CTT CCT TCA CTT TTA GGG TCC TCT GAA GGA GTT CAA AGC TGC TGG 1008
1009 CCA AGC TCA GTG GGG AGC CTG GGC TCT GAG ATT CCC TCC CAC CTG TGG 1056
1057 TTC TGA CTC TTC CCA GTG TCC TGC ATG TCT GCC CCC AGC ACC CAG GGC 1104
1 Met Ser Ala Pro Ser Thr Gln Gly 8
1105 TGC CTG CAA GGG CAG CTC AGC ATG GCC CCA GCA CAA CTC CGT AGG GAG 1152
9 Cys Leu Gln Gly Gln Leu Ser Met Ala Pro Ala Gln Leu Arg Arg Glu 24
1153 CCT GGA GTA TCC TTC CAT TTC TCA GCC AAA TAC TCA TCT TTT GAG ACT 1200
25 Pro Gly Val Ser Phe His Phe Ser Ala Lys Tyr Ser Ser Phe Glu Thr 40
1201 GAA ATC ACA CTG GCG GGA ATG AAG ATT GTG CCA GCC TTC TCT TAT GGG 1248
41 Glu Ile Thr Leu Ala Gly Met Lys Ile Val Pro Ala Phe Ser Tyr Gly 56
1249 CAC CTA GCC GCC TTC ACC TTC TTC CTC TAC CCC TTA GCA GGA ATA GGG 1296
57 His Leu Ala Ala Phe Thr Phe Phe Leu Tyr Pro Leu Ala Gly Ile Gly 72
1297 TGT CCT CCC TTC TTT CAA AGC ACT TTG CTT GCA TTT TAT TTT ATT TTT 1344
73 Cys Pro Pro Phe Phe Gln Ser Thr Leu Leu Ala Phe Tyr Phe Ile Phe 88
1345 TTA AGA GTC CTT CAT AGA GCT CAG TCA GGA AGG GGA TGG GGC ACC AAG 1392
89 Leu Arg Val Leu His Arg Ala Gln Ser Gly Arg Gly Trp Gly Thr Lys 104
1393 CCA AGC CCC CAG CAT TGG GAG CGG CCA GGC CAC AGC TGC TGC TCC CGT 1440
105 Pro Ser Pro Gln His Trp Glu Arg Pro Gly His Ser Cys Cys Ser Arg 120
1441 AGT CCT CAG GCT GTA AGC AAG AGA CAG CAC TGG CCC TTG GCC AGC GTC 1488
121 Ser Pro Gln Ala Val Ser Lys Arg Gln His Trp Pro Leu Ala Ser Val 136
1489 CTA CCC TGC CCA ACT CCA AGG ACT GGG TAT GGA TCG CTG GGC CCT AGG 1536
137 Leu Pro Cys Pro Thr Pro Arg Thr Gly Tyr Gly Ser Leu Gly Pro Arg 152
1537 CTC TTG CTT CTG GGG CTA TTG GAG GGT CAG TGT CTG TGA CTG AAT AAA 1584
153 Leu Leu Leu Leu Gly Leu Leu Glu 6ly Gln Cys Leu *** 165
1585 GTT CCA TTT TGT GGT CCT GCA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA A 1630
5.PP6455
A:核苷酸序列(SEQ ID NO:13)长度:2331bp
1 GCAAATTATG GGTGAAATGT CCCAACTGCC GGAAGGTGAA AGTGTTCTGT GATGTAAAAT
61 TTAGGTCACA CTCTATAAAG CTTCTCCTTA TTCTATGTGT GAACAGCTAG TCTGTATCTT
121 CACCTATGCA TATTTAAAAA TCAACCTTAC GAAGGCTCTT GGCCACCATA ATCCTTCCTA
181 CCCTGTAGCA AGAGCCCAGC CTCAGACTAT GCTTCCTTCT GCCTCCGAGT GCAATGCCTT
241 CCCCCGAGTC TCCAAGGTAC CAAACCGGTC AGGGGCAGCT GAGACAGCTC TACTTGTACG
301 AGTCCTCCCC AAGCCCTTGA AATCACAGGC ATCTCTGCTG TCCCTGCCCT TTATCCACAT
361 CACTGAACAA CTAAGCACAC ACATCTGTGT AGTTTTATTT AAAGTGTTCC ATGTGTGTTT
421 GTTTACAATT AACAACATGA ATGACTGCAG TATGGATGCA GCAGAAAGGA ATGCTGAGGG
481 AGGACTCCAG TTGGAATGAG CCACTTTTCC AGGACTAGGA ATGAACTTTC CCCAGTACCA
541 ACAAGGCAGC CTCCAGGGCA AGAAATGGTA ACAGAATCCA TCCTGTTGAC AGTCAAGATG
601 GAATTACAGA GAATTCTCAC CTCTTTTTTG ACTCTCAGGT GGAAACCCCC TTCCCATGGG
661 GTGAAGCGCA GTCTGCTCCA GAGACCCACT GTTAGGGTCG GGGATGTCAC AGAAATTAAC
721 AGGGCAGCCA ATTCCCATCC AGAGGGGCCC AGGATGACCC CGAACCCTCT AGCTCAGCCC
781 CAAGCTCGGG CCAGGGAGTG AAGCCTTTGT CCCCAAGCAA CAGAGTGAGG GTCTGTCTCT
841 AACCCGGTGG GCTCCAGTGA AAGGAAAATG GCCTGGAGGT GCCCACAGGA GGGCGCCCTA
901 GTTCTGAGAC AGGTCTACGG CTCCCAGACT GCGTCCCCAT GAGTAACAGA GGGACACGCA
961 GAGGGGCATA CTGAGTGCCT ATAGGGGACT CACAGACTGC AGATGCACGC TGCGGATCCA
1021 GAAGCCGGTC AGGTAATGAG GTGCAGAGGT GTGGGGAAGA CCTGGATGCC TCCCTGGGTG
1081 CCAACCAGCC TAACCAGCCG GGGCCACCAA ACAGAAGTGC TTCTGACATT AACGCGACAC
1141 ACAGAAGGTG TGTAGGGTGG GTAGTGGAAG TGACCGCAGA GGCCTCTGGG GATTGTAGTT
1201 TTGGAGCTAG AGAGGCGGGC AAGCAGTTGG CTTCGCCCAC ACGGTGTGCC TCTCACATCT
1261 GCACAGCGCA CACAACCAAG CTTAGGAGCC GACTGTTAAG ATGCCCCAGT GACACGGACA
1321 AGTTTCTCCT CTGCAACCCA ATGAGAGCTG CTGACCACGA GAGCATCGCG GGACCGCCAA
1381 AGGATTCTGG AAAATGTGGT CCCGGGTGGC CAGTGTGCGC TGACCTTCAC CTGAAGGTGA
1441 GCTGAGCTCA CCATGCAAGT CTCCACCCTG GGGTGCCCTT CCCCAAGCAG ATGCCAGGTT
1501 GGGGCAGAAG CAGTTCAGGG AGAAGCGATG CGCTCCTGGG ACTGCCGGTT TGGGGGCAAC
1561 ATCGGCCCTG TGTCCCCTAG AGTAGGAGGG TGTACCAGGA TGGGGAACCC CAAGGCCGTT
1621 TTCAGGGAGA ACAAGATTGG CTTGAGGCAA ACTCCCGGAA TGGAGATGGG GAGAGTCTGG
1681 TCGCATTTCC CCAGGAGTTT AGGGGATGAA GGCTGGACTT GGGTGAACAG CAAAAGATCC
1741 CCTGGTGATA GTGGTGGTGA GGATCAGAGG CTTGAGCCAG AAATTCCCGA GGTGTTTGTT
1801 TGTTTTGTTT TTTTTGAGAC AGAGTCTTGA TCTGTCTCCC AGGATGTAGT GCAATGGCAT
1861 GCTCTTGGCT CATTGCAACC TCCGCCTCCC AGGTTCAGGC GATTCTCCTG CCTCAGCCTC
1921 CCAAGTAGCT GAGATTATAG GCACCTGCCA CTGTGCCCAC CTAAATTTTT TTTGTTTTTT
1981 TGTATTTTTG GTAGAGACGA TGTTTCACCA CATTGCCCAG CCTGGTCTCG AACTCCTGAC
2041 CTCAAGTGAT CCACCTGCCT CGGCCTCCCA AAGTGCTGGG ATTACAGGCA TGAGCCCCCA
2101 CACCCAGCTC ATTTTTATCT TTTAACTTAA AGGTTTTTAT TTTTCTCTAT TTTTACTCTT
2161 ACAGGTACGG CTTGAAGGAG ACTTCTGGAG GGTGGGGTGG TGTTGAAGAG AAGGCACAAT
2221 TGTCACCATT TTGTTCAACA TGGGCGTTTT CTTTGTGCAT TGATTTGCAT TTTTAAAGGT
2281 ATTCCATTAA AAATATGTTT ATCTAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA A
B:氨基酸序列(SEQ ID NO:14)长度:134个氨基酸
1 MCEQLVCIFT YAYLKINLTK ALGHHNPSYP VARAQPQTML PSASECNAFP RVSKVPNRSG
61 AAETALLVRV LPKPLKSQAS LLSLPFIHIT EQLSTHICVV LFKVFHVCLF TINNMNDCSM
121 DAAERNAEGG LQLE
C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:15)
克隆号:PP6455
起始编码子:95 ATG 终止编码子:497 TGA
蛋白质分子量:14783.53
1 G CAA ATT ATG GGT GAA ATG TCC CAA CTG CCG GAA GGT GAA AGT GTT 46
47 CTG TGA TGT AAA ATT TAG GTC ACA CTC TAT AAA GCT TCT CCT TAT TCT 94
95 ATG TGT GAA CAG CTA GTC TGT ATC TTC ACC TAT GCA TAT TTA AAA ATC 142
1 Met Cys Glu Gln Leu Val Cys Ile Phe Thr Tyr Ala Tyr Leu Lys Ile 16
143 AAC CTT ACG AAG GCT CTT GGC CAC CAT AAT CCT TCC TAC CCT GTA GCA 190
17 Asn Leu Thr Lys Ala Leu Gly His His Asn Pro Ser Tyr Pro Val Ala 32
191 AGA GCC CAG CCT CAG ACT ATG CTT CCT TCT GCC TCC GAG TGC AAT GCC 238
33 Arg Ala Gln Pro Gln Thr Met Leu Pro Ser Ala Ser Glu Cys Asn Ala 48
239 TTC CCC CGA GTC TCC AAG GTA CCA AAC CGG TCA GGG GCA GCT GAG ACA 286
49 Phe Pro Arg Val Ser Lys Val Pro Asn Arg Ser Gly Ala Ala Glu Thr 64
287 GCT CTA CTT GTA CGA GTC CTC CCC AAG CCC TTG AAA TCA CAG GCA TCT 334
65 Ala Leu Leu Val Arg Val Leu Pro Lys Pro Leu Lys Ser Gln Ala Ser 80
335 CTG CTG TCC CTG CCC TTT ATC CAC ATC ACT GAA CAA CTA AGC ACA CAC 382
81 Leu Leu Ser Leu Pro Phe Ile His Ile Thr Glu Gln Leu Ser Thr His 96
383 ATC TGT GTA GTT TTA TTT AAA GTG TTC CAT GTG TGT TTG TTT ACA ATT 430
97 Ile Cys Val Val Leu Phe Lys Val Phe His Val Cys Leu Phe Thr Ile 112
431 AAC AAC ATG AAT GAC TGC AGT ATG GAT GCA GCA GAA AGG AAT GCT GAG 478
113 Asn Asn Met Asn Asp Cys Ser Met Asp Ala Ala Glu Arg Asn Ala Glu 128
479 GGA GGA CTC CAG TTG GAA TGA GCC ACT TTT CCA GGA CTA GGA ATG AAC 526
129 Gly Gly Leu Gln Leu Glu *** 135
527 TTT CCC CAG TAC CAA CAA GGC AGC CTC CAG GGC AAG AAA TGG TAA CAG 574
575 AAT CCA TCC TGT TGA CAG TCA AGA TGG AAT TAC AGA GAA TTC TCA CCT 622
623 CTT TTT TGA CTC TCA GGT GGA AAC CCC CTT CCC ATG GGG TGA AGC GCA 670
671 GTC TGC TCC AGA GAC CCA CTG TTA GGG TCG GGG ATG TCA CAG AAA TTA 718
719 ACA GGG CAG CCA ATT CCC ATC CAG AGG GGC CCA GGA TGA CCC CGA ACC 766
767 CTC TAG CTC AGC CCC AAG CTC GGG CCA GGG AGT GAA GCC TTT GTC CCC 814
815 AAG CAA CAG AGT GAG GGT CTG TCT CTA ACC CGG TGG GCT CCA GTG AAA 862
863 GGA AAA TGG CCT GGA GGT GCC CAC AGG AGG GCG CCC TAG TTC TGA GAC 910
911 AGG TCT ACG GCT CCC AGA CTG CGT CCC CAT GAG TAA CAG AGG GAC ACG 958
959 CAG AGG GGC ATA CTG AGT GCC TAT AGG GGA CTC ACA GAC TGC AGA TGC 1006
1007 ACG CTG CGG ATC CAG AAG CCG GTC AGG TAA TGA GGT GCA GAG GTG TGG 1054
1055 GGA AGA CCT GGA TGC CTC CCT GGG TGC CAA CCA GCC TAA CCA GCC GGG 1102
1103 GCC ACC AAA CAG AAG TGC TTC TGA CAT TAA CGC GAC ACA CAG AAG GTG 1150
1151 TGT AGG GTG GGT AGT GGA AGT GAC CGC AGA GGC CTC TGG GGA TTG TAG 1198
1199 TTT TGG AGC TAG AGA GGC GGG CAA GCA GTT GGC TTC GCC CAC ACG GTG 1246
1247 TGC CTC TCA CAT CTG CAC AGC GCA CAC AAC CAA GCT TAG GAG CCG ACT 1294
1295 GTT AAG ATG CCC CAG TGA CAC GGA CAA GTT TCT CCT CTG CAA CCC AAT 1342
1343 GAG AGC TGC TGA CCA CGA GAG CAT CGC GGG ACC GCC AAA GGA TTC TGG 1390
1391 AAA ATG TGG TCC CGG GTG GCC AGT GTG CGC TGA CCT TCA CCT GAA GGT 1438
1439 GAG CTG AGC TCA CCA TGC AAG TCT CCA CCC TGG GGT GCC CTT CCC CAA 1486
1487 GCA GAT GCC AGG TTG GGG CAG AAG CAG TTC AGG GAG AAG CGA TGC GCT 1534
1535 CCT GGG ACT GCC GGT TTG GGG GCA ACA TCG GCC CTG TGT CCC CTA GAG 1582
1583 TAG GAG GGT GTA CCA GGA TGG GGA ACC CCA AGG CCG TTT TCA GGG AGA 1630
1631 ACA AGA TTG GCT TGA GGC AAA CTC CCG GAA TGG AGA TGG GGA GAG TCT 1678
1679 GGT CGC ATT TCC CCA GGA GTT TAG GGG ATG AAG GCT GGA CTT GGG TGA 1726
1727 ACA GCA AAA GAT CCC CTG GTG ATA GTG GTG GTG AGG ATC AGA GGC TTG 1774
1775 AGC CAG AAA TTC CCG AGG TGT TTG TTT GTT TTG TTT TTT TTG AGA CAG 1822
1823 AGT CTT GAT CTG TCT CCC AGG ATG TAG TGC AAT GGC ATG CTC TTG GCT 1870
1871 CAT TGC AAC CTC CGC CTC CCA GGT TCA GGC GAT TCT CCT GCC TCA GCC 1918
1919 TCC CAA GTA GCT GAG ATT ATA GGC ACC TGC CAC TGT GCC CAC CTA AAT 1966
1967 TTT TTT TGT TTT TTT GTA TTT TTG GTA GAG ACG ATG TTT CAC CAC ATT 2014
2015 GCC CAG CCT GGT CTC GAA CTC CTG ACC TCA AGT GAT CCA CCT GCC TCG 2062
2063 GCC TCC CAA AGT GCT GGG ATT ACA GGC ATG AGC CCC CAC ACC CAG CTC 2110
2111 ATT TTT ATC TTT TAA CTT AAA GGT TTT TAT TTT TCT CTA TTT TTA CTC 2158
2159 TTA CAG GTA CGG CTT GAA GGA GAC TTC TGG AGG GTG GGG TGG TGT TGA 2206
2207 AGA GAA GGC ACA ATT GTC ACC ATT TTG TTC AAC ATG GGC GTT TTC TTT 2254
2255 GTG CAT TGA TTT GCA TTT TTA AAG GTA TTC CAT TAA AAA TAT GTT TAT 2302
2303 CTA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AA 2331
6.PP6489
A:核苷酸序列(SEQ ID NO:16)长度:2571bp
1 GGTGATGTGG GGGTGGCCCA TGATGTGGGA ATGGGGGCCT GGCCGGTACC GACATCTCCA
61 GCCAGAGCTC AGGGTTGCCT CTGCCATCAT CACCTCGGCC ACATCCCCTT TCCTTCTGAT
121 CCCAGACACA TTGGGCTCTG TCTTGCCTGC TGTTCTGTCT GCCTGGAAAG CTAATGTTGT
181 TGGTGCCAAA TTCCTGAAGA GTCCTCCCTG ATGGCCCGTC CACCACGCGA AGCTGTGGAA
241 ATTGCCCGCT GCTGGGAGGA ACAGTGCCGC CCGGCCGAGT CCTGCGCGTG TGTGGAAGCG
301 GAGGCCAAGG GTTGGTATTC GTAAGGTCTG GGAGTTTGGT TTAAGGCAGA TCTTTCAATG
361 TGGGTGGCTG GTCTGATTTG GACTGGGACA TGTTTACAAT GTGTAATAAG ACTTTAAGAT
421 CAGTGGACGC AGCAGAGGGC GTGAAGCCAG CCTGATGGTG GTTTGCTGAG GGAGCAGCTT
481 GCCCAGGAGA GTGGCTTGTT GTTCTTAGAA GGACTCCCTG GGTGAGCAGG TCAAACAACT
541 TTCAGGAGCT CTGATCAGTC AAGTTGCATG CTGTTTTGCC CTCTTGGGTG GAAATTTGCT
601 GCAGTAGTCC AGTTAAAGTG TACTTGTGCA TTTCTGACAC CTCACCCTTC AGGTCCAACT
661 TAGCCTCCTC ACCAGGCCAG CTTGTCTCCT GTAGTTCTCT TGGCACCCTG TGTGTTCCTA
721 CTCAGGACTT GTCACAGTGT GTCATCACAC ACACGCAAGC ACATGCTGTG GGACATTGAT
781 GTCTTGCCCA CTGGAAGGGT TCCGTAGGGT GGAGTCAGCC CCATTTTGCT CTGCTGGCAC
841 TTAGCACGGC ATGTGGCACG TAGCAAGTAG TTAGGAAATG TTTGCAGAGG AACATGAATA
901 AGTCTTGCAC GAGGTGCCGG GGAGCTCAGA GGAGGAAGCA GCCTCCTTTT TTTCCAGGAG
961 ACCAGGGGAC GCTTTACCCA GAAGGGCCCT GCTGCTGTGG AGGGTGCAGC CTCCTTGGGG
1021 GCTGAGTGTG GAGGGCAAGC GGAGGGTAGG GCTCAGGGGC CAGGGTGATG GGTGCGGGTG
1081 GGAGGTGGAT CAGACAGCAT TGTGAGGGTA AAGGGTTGGG ATTTTAAGCA AAAGGCAGCA
1141 AAGAGCTGTT GAAGGCTTTT TGGCAGAGGC ATGTCAAGAC CAGATTTGGA GTTTCGAGAT
1201 ACTCATGTAG CTATACCATG GGGGTGGGTG AAAGCGTGGG TGGGAGAAGG CACAGGGGCT
1261 GGAGAGGAAT GGGAGGGAAG GCGTTGTGGT CACTGCTTCC TGGCAGGGGC GGGGAGGGAG
1321 CCTCAACTGG GTCTGTGGGG CAGAGGAGCC AGCACCACTC CAGGGCTCGT CCCGGGTGGG
1381 TGTGGATGGA GATCGCCACA GCCTGCGTGG CTCCCAGGGT GAGGGTCAGG CTCACAGGGA
1441 GGACACCAGG CCTCTTATCG TGGCTCCATT CTCTGTGGAC TGCCCTTGGT GGGACTAAGA
1501 GCAGGCAGGT CTCCATGTGT CCTGGACACG GCTCCTGACC CAGCACGTGT GTCCACTTTT
1561 GGGCTGTGGT GAGGGTGATT GAGGGGCAGT GTGCCAATGT AGAATGACTA TATGGCATGT
1621 TTGTGGGCTA AAGTAAGTGA ATGCTTAAAT TGACACTAAG ATGCGGTGAG CTTGATCGTG
1681 GGTCGGCCGG TTTCCATTCA GCTAAAATTC GTGAAGTGGG GGCATCACTG ACTTTTTTTG
1741 TAAAGAGAAA ATAACCTGTA AATAGGCTTT TAAAAATAGA CACTTACTCT TGCTTTTTTT
1801 GTAAATCAGA TTGACCTGTC AGTGCACTCT GGGGTCCGGC CAGCTGCGAT GATCTTTAGA
1861 CCAGTCAGCC GCCGGCTGAG CTGACACCTT TTAGATGGAA ATGGAATAAA TGCTGCACCA
1921 CATTGTTCGT GTGGGTGGTG AATGCAGGTG TTTGAAACCA TTAGCTTCTT TGCATAATTA
1981 AAAACCTTAA TTTTTTGTGA AATCTTTAAT CATAGAAGAA ATGCTTCTTT CCAGTTTGAG
2041 TGTTTCTCTT AATATTACCA TTGCTTTAAG ACAATTACCT TCAGGGCTCA TTACTTTCCT
2101 GGACAGTTTA CAGGCCAGAG TGGTCTCCAC TCAGCCACTA GATCTTAGAG GATTCTAAGA
2161 AACCCTATTC GTTAAGCCAG GTAACTCATA TATTCTGAAT CTATAAACAT GTCTGAAAAT
2221 TGTGAAACAT ACTGTAGAGT TTATAGAAGT TCTTAAAATA CATACATTGT GCCGGGTACG
2281 GTGGCTCATG CCTGTAATCC CAGCACTTTG GGAAGCCAAG GTGGGCGGAT CATGAGGTTA
2341 GGAGTTTGAG ACCAGCCTGG CCAACATGGT GGAAACATGT CTCTAATAAA AATACAAAAA
2401 TTAGCCGGGC GTAGTGGTGG GTGCCTGTAA TCCCAGCTAC TCAGGAGGCG GAGGCAGGAG
2461 GATCGCTGGA ATCCGGGAGG CAGAGGTTGC AGTGAGCGGA GATCAAGCCA TTGCATTCCA
2521 GCCTGGGCGA TAGAGCGAGA CTCCATGTTA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA A
B:氨基酸序列(SEQ ID NO:17)长度:106个氨基酸
1 MGVGESVGGR RHRGWRGMGG KALWSLLPGR GGEGASTGSV GQRSQHHSRA RPGWVWMEIA
61 TACVAPRVRV RLTGRTPGLL SWLHSLWTAL GGTKSRQVSM CPGHGS
C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:18)
克隆号:PP6489
起始编码子:1218 ATG 终止编码子:1536 TGA
蛋白质分子量:11280.36
1 GG TGA TGT GGG GGT GGC CCA TGA TGT GGG AAT GGG GGC CTG GCC GGT 47
48 ACC GAC ATC TCC AGC CAG AGC TCA GGG TTG CCT CTG CCA TCA TCA CCT 95
96 CGG CCA CAT CCC CTT TCC TTC TGA TCC CAG ACA CAT TGG GCT CTG TCT 143
144 TGC CTG CTG TTC TGT CTG CCT GGA AAG CTA ATG TTG TTG GTG CCA AAT 191
192 TCC TGA AGA GTC CTC CCT GAT GGC CCG TCC ACC ACG CGA AGC TGT GGA 239
240 AAT TGC CCG CTG CTG GGA GGA ACA GTG CCG CCC GGC CGA GTC CTG CGC 287
288 GTG TGT GGA AGC GGA GGC CAA GGG TTG GTA TTC GTA AGG TCT GGG AGT 335
336 TTG GTT TAA GGC AGA TCT TTC AAT GTG GGT GGC TGG TCT GAT TTG GAC 383
384 TGG GAC ATG TTT ACA ATG TGT AAT AAG ACT TTA AGA TCA GTG GAC GCA 431
432 GCA GAG GGC GTG AAG CCA GCC TGA TGG TGG TTT GCT GAG GGA GCA GCT 479
480 TGC CCA GGA GAG TGG CTT GTT GTT CTT AGA AGG ACT CCC TGG GTG AGC 527
528 AGG TCA AAC AAC TTT CAG GAG CTC TGA TCA GTC AAG TTG CAT GCT GTT 575
576 TTG CCC TCT TGG GTG GAA ATT TGC TGC AGT AGT CCA GTT AAA GTG TAC 623
624 TTG TGC ATT TCT GAC ACC TCA CCC TTC AGG TCC AAC TTA GCC TCC TCA 671
672 CCA GGC CAG CTT GTC TCC TGT AGT TCT CTT GGC ACC CTG TGT GTT CCT 719
720 ACT CAG GAC TTG TCA CAG TGT GTC ATC ACA CAC ACG CAA GCA CAT GCT 767
768 GTG GGA CAT TGA TGT CTT GCC CAC TGG AAG GGT TCC GTA GGG TGG AGT 815
816 CAG CCC CAT TTT GCT CTG CTG GCA CTT AGC ACG GCA TGT GGC ACG TAG 863
864 CAA GTA GTT AGG AAA TGT TTG CAG AGG AAC ATG AAT AAG TCT TGC ACG 911
912 AGG TGC CGG GGA GCT CAG AGG AGG AAG CAG CCT CCT TTT TTT CCA GGA 959
960 GAC CAG GGG ACG CTT TAC CCA GAA GGG CCC TGC TGC TGT GGA GGG TGC 1007
1008 AGC CTC CTT GGG GGC TGA GTG TGG AGG GCA AGC GGA GGG TAG GGC TCA 1055
1056 GGG GCC AGG GTG ATG GGT GCG GGT GGG AGG TGG ATC AGA CAG CAT TGT 1103
1104 GAG GGT AAA GGG TTG GGA TTT TAA GCA AAA GGC AGC AAA GAG CTG TTG 1151
1152 AAG GCT TTT TGG CAG AGG CAT GTC AAG ACC AGA TTT GGA GTT TCG AGA 1199
1200 TAC TCA TGT AGC TAT ACC ATG GGG GTG GGT GAA AGC GTG GGT GGG AGA 1247
1 Met Gly Val Gly Glu Ser Val Gly Gly Arg 10
1248 AGG CAC AGG GGC TGG AGA GGA ATG GGA GGG AAG GCG TTG TGG TCA CTG 1295
11 Arg His Arg Gly Trp Arg Gly Met Gly Gly Lys Ala Leu Trp Ser Leu 26
1296 CTT CCT GGC AGG GGC GGG GAG GGA GCC TCA ACT GGG TCT GTG GGG CAG 1343
27 Leu Pro Gly Arg Gly Gly Glu Gly Ala Ser Thr Gly Ser Val Gly Gln 42
1344 AGG AGC CAG CAC CAC TCC AGG GCT CGT CCC GGG TGG GTG TGG ATG GAG 1391
43 Arg Ser Gln His His Ser Arg Ala Arg Pro Gly Trp Val Trp Met Glu 58
1392 ATC GCC ACA GCC TGC GTG GCT CCC AGG GTG AGG GTC AGG CTC ACA GGG 1439
59 Ile Ala Thr Ala Cys Val Ala Pro Arg Val Arg Val Arg Leu Thr Gly 74
1440 AGG ACA CCA GGC CTC TTA TCG TGG CTC CAT TCT CTG TGG ACT GCC CTT 1487
75 Arg Thr Pro Gly Leu Leu Ser Trp Leu His Ser Leu Trp Thr Ala Leu 90
1488 GGT GGG ACT AAG AGC AGG CAG GTC TCC ATG TGT CCT GGA CAC GGC TCC 1535
91 Gly Gly Thr Lys Ser Arg Gln Val Ser Met Cys Pro Gly His Gly Ser 106
1536 TGA CCC AGC ACG TGT GTC CAC TTT TGG GCT GTG GTG AGG GTG ATT GAG 1583
107 *** 107
1584 GGG CAG TGT GCC AAT GTA GAA TGA CTA TAT GGC ATG TTT GTG GGC TAA 1631
1632 AGT AAG TGA ATG CTT AAA TTG ACA CTA AGA TGC GGT GAG CTT GAT CGT 1679
1680 GGG TCG GCC GGT TTC CAT TCA GCT AAA ATT CGT GAA GTG GGG GCA TCA 1727
1728 CTG ACT TTT TTT GTA AAG AGA AAA TAA CCT GTA AAT AGG CTT TTA AAA 1775
1776 ATA GAC ACT TAC TCT TGC TTT TTT TGT AAA TCA GAT TGA CCT GTC AGT 1823
1824 GCA CTC TGG GGT CCG GCC AGC TGC GAT GAT CTT TAG ACC AGT CAG CCG 1871
1872 CCG GCT GAG CTG ACA CCT TTT AGA TGG AAA TGG AAT AAA TGC TGC ACC 1919
1920 ACA TTG TTC GTG TGG GTG GTG AAT GCA GGT GTT TGA AAC CAT TAG CTT 1967
1968 CTT TGC ATA ATT AAA AAC CTT AAT TTT TTG TGA AAT CTT TAA TCA TAG 2015
2016 AAG AAA TGC TTC TTT CCA GTT TGA GTG TTT CTC TTA ATA TTA CCA TTG 2063
2064 CTT TAA GAC AAT TAC CTT CAG GGC TCA TTA CTT TCC TGG ACA GTT TAC 2111
2112 AGG CCA GAG TGG TCT CCA CTC AGC CAC TAG ATC TTA GAG GAT TCT AAG 2159
2160 AAA CCC TAT TCG TTA AGC CAG GTA ACT CAT ATA TTC TGA ATC TAT AAA 2207
2208 CAT GTC TGA AAA TTG TGA AAC ATA CTG TAG AGT TTA TAG AAG TTC TTA 2255
2256 AAA TAC ATA CAT TGT GCC GGG TAC GGT GGC TCA TGC CTG TAA TCC CAG 2303
2304 CAC TTT GGG AAG CCA AGG TGG GCG GAT CAT GAG GTT AGG AGT TTG AGA 2351
2352 CCA GCC TGG CCA ACA TGG TGG AAA CAT GTC TCT AAT AAA AAT ACA AAA 2399
2400 ATT AGC CGG GCG TAG TGG TGG GTG CCT GTA ATC CCA GCT ACT CAG GAG 2447
2448 GCG GAG GCA GGA GGA TCG CTG GAA TCC GGG AGG CAG AGG TTG CAG TGA 2495
2496 GCG GAG ATC AAG CCA TTG CAT TCC AGC CTG GGC GAT AGA GCG AGA CTC 2543
2544 CAT GTT AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA A 2571
7.PP6614
A:核苷酸序列(SEQ ID NO:19) 长度:3096bp
1 GATTCGCTAC CGCCTGGGCA CCATCCGCCC ATCTTCCTCG GTCATGAACA TGCATGAAAT
61 TTATGTAAGT CCATCCTTCC CCACAATGCT GCCATCTCCC CATGGCTCAG AACCTCAGGG
121 ATGCTGGCCC TGTGCCCTGC TCCTCCAAGG GCCTGGACCA TCCCCTACTA CAAGGCTGTG
181 TGTCCCTGGA CAAGTTACTC CCCTTCTCTG GGCCTCTGTT CCCTGCTTCC ACAGGATGTG
241 CTGTGCTGGA AGAACTGATG CTCAGATTGA ATTTCGTGGT CTTGGCATCA GCTCCCCCCT
301 GATCTCTCCA GCCTGGGAAA AATGCTGTTG GTCTCAGTAC AGCTGGGTTA GGGCCCAAGG
361 GGACAGGGGG TCACCTTGGT ATTTTGGGAA GGGAAGGACA CACACTCCTC CAGTTCTGGC
421 CAGAGGGCAG CAGTTCTCGG AAATAAATGC CGGTTCAGCG GAACCCCAAG GGAGGAGAGG
481 GCTTCTCCCT TCCCACCAGT GGGACCCTCT GGGAGAGGAA TGAAAACCAG GCCCAAAGTG
541 AAAGGGTGAG GAAGGGGAGC TTCAGCAGGC CTGGACCGGG ACATGTGCCG GAGCATTTGT
601 CCATCAGTGG CAGGCAGCGG GGAGGCAGGG GCTGGCAGGA GTGGCCCTCC CTGCGGAGAC
661 TTCGGCCTTG GGTGACCAGA CCCTGGCCCT GCCCTTATTC CCCTGGGCCT CTGGCTATTT
721 TCTGCCTCTT GCTGTTTGTG TTGGCAGACT GCCTGGTCAC GGGACCCTAC TGCCTCTTCC
781 CTCCCCTGAG GGAAAGCTAA GGCCTGAAGA AAGCTAAGGC CGATCAGAAG GTGCAGAGGA
841 AAGAGGCAGG GGTTGAGAAT GGAAAGCTGA GGGACCTGGC CTGGCCACTT CTCTGTGCCT
901 GGCCTCAGCT GCCTCATCTG GGAAGCAGGA CTAGTCACCA CCGCCACCCC GCCCCGCCCC
961 ACCACCTGAT ACCTGGGAGG CACTAAATGG TGCTTGGTTC TTCAACACAA GTCAAAATTG
1021 GAGGCAGCTG GAATCCTGCA GCAGCAGGAG GGCTCAAGAT TAAACTGCAG AAGGCCCTGG
1081 ACTTGGTGGC CCTCCAGTGC CAATGGGCAC CTGAGGGGCA GGCCAGGGCA GAGCAGGAGG
1141 CAGACAGGGC AACCTTTATC TTGCAGACAG TGCTGAACCC AGGGGAGGTG CTTCCCACAG
1201 CCTTCGAGGC CTCTGAGAAG TGGCCCAACC TGATTCATGA GCCTCTTGAC CAAGGCAACT
1261 GTGCAGGCTC CTGGGCCTTC TCCACAGCAG CTGTGGCATC CGATCGTGTC TCAATCCATT
1321 CTCTGGGACA CATGACGCCT GTCCTGTCGC CCCAGAACCT GCTGTCTTGT GACACCCACC
1381 AGCAGCAGGG CTGCCGCGGT GGGCGTCTCG ATGGTGCCTG GTGGTTCCTG CGTCGCCGAG
1441 GGTATGCAGC AACAGGGGAT GTGGGCAGAG AAGAGGGCAA GGAGCTCCGT GGGCATGGCC
1501 TGGGCCATGA TGCACTGAGT CTTTCTGCCT TTGCTCCCTC TTGCTGCCTT TGCAGGGTGG
1561 TGTCTGACCA CTGCTACCCC TTCTCGGGCC GTGAACGAGA CGAGGCTGGC CCTGCGCCCC
1621 CCTGTATGAT GCACAGCCGA GCCATGGGTC GGGGCAAGCG CCAGGCCACT GCCCACTGCC
1681 CCAACAGCTA TGTTTATAAC AATGACATCT ACCAGGTCAC TCCTGTCTAC CGCCTCGGCT
1741 CCAACGACAA GGAGATCATG AAGGAGCTGA TGGAGAATGG CCCTGTCCAA GGTAAACCCC
1801 CTTATCCAGC ACCCTGGTTC CAGAAGCTTG TGCCTGCTTG AGAGTGGGCA CAGTAGCACA
1861 AGTGGCCTGC ACAGCATTCA GCAGCATGTC CAGTAGGGCC AGGAGTAGGG GTCCCCCCCT
1921 CCCACAGGCA GCACCTGGAG GGAGCACTTA GAGCTTTGGT ATGGAGGGAC CCTGGTGCCT
1981 GGGCACATCT CAATAGACTC AGGCTCCAGT GCCTGTGCCA ACGGGCTGAG TGGACCCTAC
2041 CTTGACATCT GCCCACAGCC CTCATGGAGG TGCATGAGGA CTTCTTCCTA TACAAGGGAG
2101 GCATCTACAG CCACACGCCA GTGAGCCTTG GGAGGCCAGA GAGATACCGC CGGCATGGGA
2161 CCCACTCAGT CAAGATCACA GGATGGGGAG AGGAGACGCT GCCAGATGGA AGGACGCTCA
2221 AATACTGGAC TGCGGCCAAC TCCTGGGGCC CAGCCTGGGG CGAGAGGGGC CACTTCCGCA
2281 TCGTGCGCGG CGTCAATGAG TGCGACATCG AGAGCTTCGT GCTGGGCGTC TGGGGCCGCG
2341 TGGGCATGGA GGACATGGGT CATCACTGAG GCTGCGGGCA CCACGCGGGG TCCGGCCTGG
2401 GATCCAGGCT AAGGGCCGGC GGAAGAGGCC CCAATGGGGC GGTGACCCCA GCCTCGCCCG
2461 ACAGAGCCCG GGGCGCAGGC GGGCGCCAGG GCGCTAATCC CGGCGCGGGT TCCGCTGACG
2521 CAGCGCCCCG CCTGGGAGCC GCGGGCAGGC GAGACTGGCG GAGCCCCCAG ACCTCCCAGT
2581 GGGGACGGGG CAGGGCCTGG CCTGGGAAGA GCACAGCTGC AGATCCCAGG CCTCTGGCGC
2641 CCCCACTCAA GACTACCAAA GCCAGGACAC CTCAAGTCTC CAGCCCCACT ACCCCACCCC
2701 ACTCCTGTAT TCTTTTTTTT TTTTTTTTAG ACAGGGTCTT GCTCCGTTGC CCAGGTTGGA
2761 GTGCAGTGGC CCATCAGGGC TCACTGTAAC CTCCGACTCC TGGGTTCAAG TGACCCTCCC
2821 ACCTCAGCCT CTCAAGTAGC TGGGACTACA GGTGCACCAC CACACCTGGC TAATTTTTGT
2881 ATTTTTTGTA AAGAGGGGGG TCTCACTGTG TTGCCCAGGC TGGTCTCGAA CTCCTGGGCT
2941 CAAGCGGTCC ACCTGCCTCC GCCTCCCAAA GTGCTGGGAT TGCAGGCATG AGCCACTGCA
3001 CCCAGCCCTG TATTCTTATT CTTCAGATAT TTATTTTTCT TTTCACTGTT TTAAAATAAA
3061 ACCAAAGTAT TGATAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAA
B:氨基酸序列(SEQ ID NO:20)长度:284个氨基酸
1 MVLGSSTQVK IGGSWNPAAA GGLKIKLQKA LDLVALQCQW APEGQARAEQ EADRATFILQ
61 TVLNPGEVLP TAFEASEKWP NLIHEPLDQG NCAGSWAFST AAVASDRVSI HSLGHMTPVL
121 SPQNLLSCDT HQQQGCRGGR LDGAWWFLRR RGYAATGDVG REEGKELRGH GLGHDALSLS
181 AFAPSCCLCR VVSDHCYPFS GRERDEAGPA PPCMMHSRAM GRGKRQATAH CPNSYVYNND
241 IYQVTPVYRL GSNDKEIMKE LMENGPVQGK PPYPAPWFQK LVPA
C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:21)
克隆号:PP6614
起始编码子:987 ATG 终止编码子:1839 TGA
蛋白质分子量:30892.43
1 GA TTC GCT ACC GCC TGG GCA CCA TCC GCC CAT CTT CCT CGG TCA TGA 47
48 ACA TGC ATG AAA TTT ATG TAA GTC CAT CCT TCC CCA CAA TGC TGC CAT 95
96 CTC CCC ATG GCT CAG AAC CTC AGG GAT GCT GGC CCT GTG CCC TGC TCC 143
144 TCC AAG GGC CTG GAC CAT CCC CTA CTA CAA GGC TGT GTG TCC CTG GAC 191
192 AAG TTA CTC CCC TTC TCT GGG CCT CTG TTC CCT GCT TCC ACA GGA TGT 239
240 GCT GTG CTG GAA GAA CTG ATG CTC AGA TTG AAT TTC GTG GTC TTG GCA 287
288 TCA GCT CCC CCC TGA TCT CTC CAG CCT GGG AAA AAT GCT GTT GGT CTC 335
336 AGT ACA GCT GGG TTA GGG CCC AAG GGG ACA GGG GGT CAC CTT GGT ATT 383
384 TTG GGA AGG GAA GGA CAC ACA CTC CTC CAG TTC TGG CCA GAG GGC AGC 431
432 AGT TCT CGG AAA TAA ATG CCG GTT CAG CGG AAC CCC AAG GGA GGA GAG 479
480 GGC TTC TCC CTT CCC ACC AGT GGG ACC CTC TGG GAG AGG AAT GAA AAC 527
528 CAG GCC CAA AGT GAA AGG GTG AGG AAG GGG AGC TTC AGC AGG CCT GGA 575
576 CCG GGA CAT GTG CCG GAG CAT TTG TCC ATC AGT GGC AGG CAG CGG GGA 623
624 GGC AGG GGC TGG CAG GAG TGG CCC TCC CTG CGG AGA CTT CGG CCT TGG 671
672 GTG ACC AGA CCC TGG CCC TGC CCT TAT TCC CCT GGG CCT CTG GCT ATT 719
720 TTC TGC CTC TTG CTG TTT GTG TTG GCA GAC TGC CTG GTC ACG GGA CCC 767
768 TAC TGC CTC TTC CCT CCC CTG AGG GAA AGC TAA GGC CTG AAG AAA GCT 815
816 AAG GCC GAT CAG AAG GTG CAG AGG AAA GAG GCA GGG GTT GAG AAT GGA 863
864 AAG CTG AGG GAC CTG GCC TGG CCA CTT CTC TGT GCC TGG CCT CAG CTG 911
912 CCT CAT CTG GGA AGC AGG ACT AGT CAC CAC CGC CAC CCC GCC CCG CCC 959
960 CAC CAC CTG ATA CCT GGG AGG CAC TAA ATG GTG CTT GGT TCT TCA ACA 1007
1 Met Val Leu Gly Ser Ser Thr 7
1008 CAA GTC AAA ATT GGA GGC AGC TGG AAT CCT GCA GCA GCA GGA GGG CTC 1055
8 Gln Val Lys Ile Gly Gly Ser Trp Asn Pro Ala Ala Ala Gly Gly Leu 23
1056 AAG ATT AAA CTG CAG AAG GCC CTG GAC TTG GTG GCC CTC CAG TGC CAA 1103
24 Lys Ile Lys Leu Gln Lys Ala Leu Asp Leu Val Ala Leu Gln Cys Gln 39
1104 TGG GCA CCT GAG GGG CAG GCC AGG GCA GAG CAG GAG GCA GAG AGG GCA 1151
40 Trp Ala Pro Glu Gly Gln Ala Arg Ala Glu Gln Glu Ala Asp Arg Ala 55
1152 ACC TTT ATC TTG CAG ACA GTG CTG AAC CCA GGG GAG GTG CTT CCC ACA 1199
56 Thr Phe Ile Leu Gln Thr Val Leu Asn Pro Gly Glu Val Leu Pro Thr 71
1200 GCC TTC GAG GCC TCT GAG AAG TGG CCC AAC CTG ATT CAT GAG CCT CTT 1247
72 Ala Phe Glu Ala Ser Glu Lys Trp Pro Asn Leu Ile His Glu Pro Leu 87
1248 GAC CAA GGC AAC TGT GCA GGC TCC TGG GCC TTC TCC ACA GCA GCT GTG 1295
88 Asp Gln Gly Asn Cys Ala Gly Ser Trp Ala Phe Ser Thr Ala Ala Val 103
1296 GCA TCC GAT CGT GTC TCA ATC CAT TCT CTG GGA CAC ATG ACG CCT GTC 1343
104 Ala Ser Asp Arg Val Ser Ile His Ser Leu Gly His Met Thr Pro Val 119
1344 CTG TCG CCC CAG AAC CTG CTG TCT TGT GAC ACC CAC CAG CAG CAG GGC 1391
120 Leu Ser Pro Gln Asn Leu Leu Ser Cys Asp Thr His Gln Gln Gln Gly 135
1392 TGC CGC GGT GGG CGT CTC GAT GGT GCC TGG TGG TTC CTG CGT CGC CGA 1439
136 Cys Arg Gly Gly Arg Leu Asp Gly Ala Trp Trp Phe Leu Arg Arg Arg 151
1440 GGG TAT GCA GCA ACA GGG GAT GTG GGC AGA GAA GAG GGC AAG GAG CTC 1487
152 Gly Tyr Ala Ala Thr Gly Asp Val Gly Arg Glu Glu Gly Lys Glu Leu 167
1488 CGT GGG CAT GGC CTG GGC CAT GAT GCA CTG AGT CTT TCT GCC TTT GCT 1535
168 Arg Gly His Gly Leu Gly His Asp Ala Leu Ser Leu Ser Ala Phe Ala 183
1536 CCC TCT TGC TGC CTT TGC AGG GTG GTG TCT GAC CAC TGC TAC CCC TTC 1583
184 Pro Ser Cys Cys Leu Cys Arg Val Val Ser Asp His Cys Tyr Pro Phe 199
1584 TCG GGC CGT GAA CGA GAC GAG GCT GGC CCT GCG CCC CCC TGT ATG ATG 1631
200 Ser Gly Arg Glu Arg Asp Glu Ala Gly Pro Ala Pro Pro Cys Met Met 215
1632 CAC AGC CGA GCC ATG GGT CGG GGC AAG CGC CAG GCC ACT GCC CAC TGC 1679
216 His Ser Arg Ala Met Gly Arg Gly Lys Arg Gln Ala Thr Ala His Cys 231
1680 CCC AAC AGC TAT GTT TAT AAC AAT GAC ATC TAC CAG GTC ACT CCT GTC 1727
232 Pro Asn Ser Tyr Val Tyr Asn Asn Asp Ile Tyr Gln Val Thr Pro Val 247
1728 TAC CGC CTC GGC TCC AAC GAC AAG GAG ATC ATG AAG GAG CTG ATG GAG 1775
248 Tyr Arg Leu Gly Ser Asn Asp Lys Glu Ile Met Lys Glu Leu Met Glu 263
1776 AAT GGC CCT GTC CAA GGT AAA CCC CCT TAT CCA GCA CCC TGG TTC CAG 1823
264 Asn Gly Pro Val Gln Gly Lys Pro Pro Tyr Pro Ala Pro Trp Phe Gln 279
1824 AAG CTT GTG CCT GCT TGA GAG TGG GCA CAG TAG CAC AAG TGG CCT GCA 1871
280 Lys Leu Val Pro Ala *** 285
1872 CAG CAT TCA GCA GCA TGT CCA GTA GGG CCA GGA GTA GGG GTC CCC CCC 1919
1920 TCC CAC AGG CAG CAC CTG GAG GGA GCA CTT AGA GCT TTG GTA TGG AGG 1967
1968 GAC CCT GGT GCC TGG GCA CAT CTC AAT AGA CTC AGG CTC CAG TGC CTG 2015
2016 TGC CAA CGG GCT GAG TGG ACC CTA CCT TGA CAT CTG CCC ACA GCC CTC 2063
2064 ATG GAG GTG CAT GAG GAC TTC TTC CTA TAC AAG GGA GGC ATC TAC AGC 2111
2112 CAC ACG CCA GTG AGC CTT GGG AGG CCA GAG AGA TAC CGC CGG CAT GGG 2159
2160 ACC CAC TCA GTC AAG ATC ACA GGA TGG GGA GAG GAG ACG CTG CCA GAT 2207
2208 GGA AGG ACG CTC AAA TAC TGG ACT GCG GCC AAC TCC TGG GGC CCA GCC 2255
2256 TGG GGC GAG AGG GGC CAC TTC CGC ATC GTG CGC GGC GTC AAT GAG TGC 2303
2304 GAC ATC GAG AGC TTC GTG CTG GGC GTC TGG GGC CGC GTG GGC ATG GAG 2351
2352 GAC ATG GGT CAT CAC TGA GGC TGC GGG CAC CAC GCG GGG TCC GGC CTG 2399
2400 GGA TCC AGG CTA AGG GCC GGC GGA AGA GGC CCC AAT GGG GCG GTG ACC 2447
2448 CCA GCC TCG CCC GAC AGA GCC CGG GGC GCA GGC GGG CGC CAG GGC GCT 2495
2496 AAT CCC GGC GCG GGT TCC GCT GAC GCA GCG CCC CGC CTG GGA GCC GCG 2543
2544 GGC AGG CGA GAC TGG CGG AGC CCC CAG ACC TCC CAG TGG GGA CGG GGC 2591
2592 AGG GCC TGG CCT GGG AAG AGC ACA GCT GCA GAT CCC AGG CCT CTG GCG 2639
2640 CCC CCA CTC AAG ACT ACC AAA GCC AGG ACA CCT CAA GTC TCC AGC CCC 2687
2688 ACT ACC CCA CCC CAC TCC TGT ATT CTT TTT TTT TTT TTT TTA GAC AGG 2735
2736 GTC TTG CTC CGT TGC CCA GGT TGG AGT GCA GTG GCC CAT CAG GGC TCA 2783
2784 CTG TAA CCC CCG ACT CCC GGG TTC AAG TGA CCC TCC CAC CCC AGC CCC 2831
2832 TCA AGT AGC TGG GAC TAC AGG TGC ACC ACC ACA CCT GGC TAA TTT TTG 2879
2880 TAT TTT TTG TAA AGA GGG GGG TCC CAC TGT GTT GCC CAG GCT GGT CTC 2927
2928 GAA CTC CCG GGC TCA AGC GGT CCA CCC GCC TCC GCC TCC CAA AGT GCT 2975
2976 GGG ATT GCA GGC ATG AGC CAC TGC ACC CAG CCC TGT ATT CCT ATT CTT 3023
3024 CAG ATA TTT ATT TTT CTT TTC ACT GTT TTA AAA TAA AAC CAA AGT ATT 3071
3072 GAT AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA A 3096
8.PP6781
A:核苷酸序列(SEQ ID NO:22)长度:2028bp
1 GTTGTGCCGC TGGGGAGCCA AACGATTGGG AGTTGCCTCC ACAGAGGCCC AGAGAGGCGT
61 CAGTTTCAAA CTGGAAGAAA AAACCGCCCA CAGCAGCCTG GCACTCTTCA GAGATGATAC
121 GGGTGTCAAA TATGGCTTGG TGGGATTGGA GCCCACCAAG GTGGCCTTGA ATGTGGAGCG
181 CTTCCGGGAG TGGGCAGTGG TGCTGGCAGA CACAGCGGTC ACCAGTGGCA GACACTACTG
241 GGAAGTGACA GTGAAGCGCT CCCAGCAGTT TCCGATAGGA GTGGCAGATG TGGACATGTC
301 CCGGGATAGC TGCATTGGTG TTGATGATCA GTTCCTGGGT GTTCACCTAT GCCCAGCGCA
361 AGTGGTACAC CATGTTGGCC AACGAGAAAG CCCCAGTTGA GGGTATTGGG CAACCAGAGA
421 AGGTGGGGCT GTTGCTTGGA ATATGAAGGC CCATAAGCTG AGCCTGGTGG ATCGTGAAGC
481 CAGGTCTCTG TGAGTTCACA CGCTACAGAC AGATTTCCGG GGTCCAGTGG TGCCTGGCCT
541 TTGCTCTCTG GGATGGGGAG CTGCTGACCC ATTCAGGGCT TGAGGTGCCC GAGGGCCTCT
601 AGTATGTCCA TTACTGGAGT CCCTAATCAC GCCTTTGGCC AGCCTCCTTT TGAAAGTGTC
661 CGAAGCCTTT TTACTTTGCC TCAAGCAACC TCTAGCTCCC ACAATTCAGT GTTGGGTCCT
721 CTGTGCAATA TCATGATCAT CTTCCTCATC CCCTACCTTG TGAAAGCTAG GCATACAGCC
781 AAACCCTCCT TTTCCCCACC CACCAACACT ACTGCCAATT TCCTAGGCTA CCATGGGTGT
841 ATCTTCCTTG ACCTGCTTCC TTCAGTCCCT CTGCCTCCCT TTGCCCAGGC CTTTCTCAGA
901 CTGTATTCCA TCCTGGGGTC TTATCATTCA GCTTTGTTTG AATTTATTTA ATCACCATGA
961 TACCTCTCCC TCCCTTTGTC CACATGTAAC TTGTTCTTGG GGCTCTACCA GATGGCTGAA
1021 GAGTAAATCC TTTCTACCTC TGGCTGAAGG AGTGGTGCAG TCAATGACTT GGCCCTTTTT
1081 CTACAGCACA TTTAGAGTTT GGGCTCTGGC TCCCTCAGTA AGTGCTTTAT TAACTCAGTG
1141 TGTCAAAATG AAAACAGAGC CCTCCTTCCC CAGTAGCTCA GTGCCACAGA CCTTCAGCCC
1201 CACACAGCTG TAGCTATCCT TACCCTGAGT CCATCTACCT TAAATCTGTA CCTCTGACAC
1261 CCAGCCAGTC TGTCATAATC ATTATCCCAG TTATAACCTT GACCAAAGGG GAAGAGAGAC
1321 ACTTGGGGGA TATCTAGGGG ATGAGTGCTA GAAACTATTT ATTTATTTTT GAGACAGAGT
1381 CTCACTCTGT CACCCAGGCT GGAGTGCAGT GGCATGATCT TGGCTCACTG CAAACTCTGC
1441 CTTTTGGGTT CAAGCGACTC TCGTGCCTCA GCCTCCTGAG TAGCTAGGAT TACAGGTGTG
1501 TGCCACCATG CCCGTCTCAT TTTTATATTT TTAGTAGAGA TGGGGTTTTG CCATATTGGC
1561 CAGGCTGGTC TCGAACTCCT GGCCTCATGT GATCAGCCCA CCTTGGCCTC CCAAAGTGCT
1621 GGGATTTCAG GCGTGAGCCA CCACACCCGG CCAAAACTGT TTATTCTTGA GAAGTTCCAT
1681 CTTCATTTCT GCCACAGTTG GAACTTCCCG AGGAAGGAAG GAGGCCTGAG GTTTTGCACA
1741 ATCTGTTTCA GAGCCTGTTT AGACTCAAAC CTATGCTTCC CTTGGCAGCA GAATACACTT
1801 AACCTAAAGC AGTATTTGGA GTTGAGAAAA ACCTGGTGGG GTAAGTGAAT ATGTACTGTT
1861 TGGTAGGGTA GGTAGAGAAG CTGTGCTTTG ACCCCGTGAT TCCATCTTTT TCTACCTTCT
1921 ATGATGGTGA TGAAGCTAGA TACCCCTAGG GAAGAAAGAA GGACTGGGTT TAGCAAAAAT
1981 GATTTGGTAA TTAAAGTTTA TTTGAACACA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA
B:氨基酸序列(SEQ ID NO:23)长度:126个氨基酸
1 MGVSSLTCFL QSLCLPLPRP FSDCIPSWGL IIQLCLNLFN HHDTSPSLCP HVTCSWGSTR
61 WLKSKSFLPL AEGVVQSMTW PFFYSTFRVW ALAPSVSALL TQCVKMKTEP SFPSSSVPQT
121 FSPTQL
C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:24)
克隆号:PP6781
起始编码子:833 ATG 终止编码子:1211 TAG
蛋白质分子量:14013.62
1 G TTG TGC CGC TGG GGA GCC AAA CGA TTG GGA GTT GCC TCC ACA GAG 46
47 GCC CAG AGA GGC GTC AGT TTC AAA CTG GAA GAA AAA ACC GCC CAC AGC 94
95 AGC CTG GCA CTC TTC AGA GAT GAT ACG GGT GTC AAA TAT GGC TTG GTG 142
143 GGA TTG GAG CCC ACC AAG GTG GCC TTG AAT GTG GAG CGC TTC CGG GAG 190
191 TGG GCA GTG GTG CTG GCA GAC ACA GCG GTC ACC AGT GGC AGA CAC TAC 238
239 TGG GAA GTG ACA GTG AAG CGC TCC CAG CAG TTT CCG ATA GGA GTG GCA 286
287 GAT GTG GAC ATG TCC CGG GAT AGC TGC ATT GGT GTT GAT GAT CAG TTC 334
335 CTG GGT GTT CAC CTA TGC CCA GCG CAA GTG GTA CAC CAT GTT GGC CAA 382
383 CGA GAA AGC CCC AGT TGA GGG TAT TGG GCA ACC AGA GAA GGT GGG GCT 430
431 GTT GCT TGG AAT ATG AAG GCC CAT AAG CTG AGC CTG GTG GAT CGT GAA 478
479 GCC AGG TCT CTG TGA GTT CAC ACG CTA CAG ACA GAT TTC CGG GGT CCA 526
527 GTG GTG CCT GGC CTT TGC TCT CTG GGA TGG GGA GCT GCT GAC CCA TTC 574
575 AGG GCT TGA GGT GCC CGA GGG CCT CTA GTA TGT CCA TTA CTG GAG TCC 622
623 CTA ATC ACG CCT TTG GCC AGC CTC CTT TTG AAA GTG TCC GAA GCC TTT 670
671 TTA CTT TGC CTC AAG CAA CCT CTA GCT CCC ACA ATT CAG TGT TGG GTC 718
719 CTC TGT GCA ATA TCA TGA TCA TCT TCC TCA TCC CCT ACC TTG TGA AAG 766
767 CTA GGC ATA CAG CCA AAC CCT CCT TTT CCC CAC CCA CCA ACA CTA CTG 814
815 CCA ATT TCC TAG GCT ACC ATG GGT GTA TCT TCC TTG ACC TGC TTC CTT 862
1 Met Gly Val Ser Ser Leu Thr Cys Phe Leu 10
863 CAG TCC CTC TGC CTC CCT TTG CCC AGG CCT TTC TCA GAC TGT ATT CCA 910
11 Gln Ser Leu Cys Leu Pro Leu Pro Arg Pro Phe Ser Asp Cys Ile Pro 26
911 TCC TGG GGT CTT ATC ATT CAG CTT TGT TTG AAT TTA TTT AAT CAC CAT 958
27 Ser Trp Gly Leu Ile Ile Gln Leu Cys Leu Asn Leu Phe Asn His His 42
959 GAT ACC TCT CCC TCC CTT TGT CCA CAT GTA ACT TGT TCT TGG GGC TCT 1006
43 Asp Thr Ser Pro Ser Leu Cys Pro His Val Thr Cys Ser Trp Gly Ser 58
1007 ACC AGA TGG CTG AAG AGT AAA TCC TTT CTA CCT CTG GCT GAA GGA GTG 1054
59 Thr Arg Trp Leu Lys Ser Lys Ser Phe Leu Pro Leu Ala Glu Gly Val 74
1055 GTG CAG TCA ATG ACT TGG CCC TTT TTC TAC AGC ACA TTT AGA GTT TGG 1102
75 Val Gln Ser Met Thr Trp Pro Phe Phe Tyr Ser Thr Phe Arg Val Trp 90
1103 GCT CTG GCT CCC TCA GTA AGT GCT TTA TTA ACT CAG TGT GTC AAA ATG 1150
91 Ala Leu Ala Pro Ser Val Ser Ala Leu Leu Thr Gln Cys Val Lys Met 106
1151 AAA ACA GAG CCC TCC TTC CCC AGT AGC TCA GTG CCA CAG ACC TTC AGC 1198
107 Lys Thr Glu Pro Ser Phe Pro Ser Ser Ser Val Pro Gln Thr Phe Ser 122
1199 CCC ACA CAG CTG TAG CTA TCC TTA CCC TGA GTC CAT CTA CCT TAA ATC 1246
123 Pro Thr Gln Leu *** 127
1247 TGT ACC TCT GAC ACC CAG CCA GTC TGT CAT AAT CAT TAT CCC AGT TAT 1294
1295 AAC CTT GAC CAA AGG GGA AGA GAG ACA CTT GGG GGA TAT CTA GGG GAT 1342
1343 GAG TGC TAG AAA CTA TTT ATT TAT TTT TGA GAC AGA GTC TCA CTC TGT 1390
1391 CAC CCA GGC TGG AGT GCA GTG GCA TGA TCT TGG CTC ACT GCA AAC TCT 1438
1439 GCC TTT TGG GTT CAA GCG ACT CTC GTG CCT CAG CCT CCT GAG TAG CTA 1486
1487 GGA TTA CAG GTG TGT GCC ACC ATG CCC GTC TCA TTT TTA TAT TTT TAG 1534
1535 TAG AGA TGG GGT TTT GCC ATA TTG GCC AGG CTG GTC TCG AAC TCC TGG 1582
1583 CCT CAT GTG ATC AGC CCA CCT TGG CCT CCC AAA GTG CTG GGA TTT GAG 1630
1631 GCG TGA GCC ACC ACA CCC GGC CAA AAC TGT TTA TTC TTG AGA AGT TCC 1678
1679 ATC TTC ATT TCT GCC ACA GTT GGA ACT TCC CGA GGA AGG AAG GAG GCC 1726
1727 TGA GGT TTT GCA CAA TCT GTT TCA GAG CCT GTT TAG ACT CAA ACC TAT 1774
1775 GCT TCC CTT GGC AGC AGA ATA CAC TTA ACC TAA AGC AGT ATT TGG AGT 1822
1823 TGA GAA AAA CCT GGT GGG GTA AGT GAA TAT GTA CTG TTT GGT AGG GTA 1870
1871 GGT AGA GAA GCT GTG CTT TGA CCC TGT GAT TCC ATC TTT TTC TAC CTT 1918
1919 CTA TGA TGG TGA TGA AGC TAG ATA CCC CTA GGG AAG AAA GAA GGA CTG 1966
1967 GGT TTA GCA AAA ATG ATT TGG TAA TTA AAG TTT ATT TGA ACA CAA AAA 2014
2015 AAA AAA AAA AAA AA 2028
9.PP6832
A:核苷酸序列(SEQ ID NO:25)长度:1692bp
1 GGGCCGGTCT TGCAGAGTAG CTGCGGTGAG TGGGCGTGTG CGCCGAGCGG TCTGGCCCAA
61 GGGCTGGGGG CCGGCCGAGG GTCTTCGGGA GCAGGCCGCA GGGCGCGGAG AGATCCTGGG
121 ATCGCCGTCC GCCGCTGCTA CCCGGCATGT CGGCGGAGGC CTCGGGCCCG GCTGCCGCCG
181 CGGCCCCGTC CCTGGAAGCC CCCAAGCCCT CGGGTCTCGA GCCTGGCCCC GCCGCCTACG
241 GTCTCAAGCC GCTGACCCCG AACAGCAAAT ACGTGAAGCT GAACGTGGGC GGCTCGTTGC
301 ACTACACCAC GCTGCGCACC CTCACGGGAC AGGACACCAT GCTCAAAGCC ATGTTCAGCG
361 GCCGCGTGGA GGTGCTGACC GATGCCGGAG GTTGGGTGCT GATTGACCGG AGCGGCCGTC
421 ACTTTGGTAC AATCCTCAAT TACCTGCGGG ATGGGTCTGT GCCACTGCCG GAGAGTACGA
481 GAGAACTGGG GGAGCTGCTG GGCGAAGCAC GCTACTACCT GGTGCAGGGC CTGATTGAGG
541 ACTGCCAGCT GGCGCTGCAG CAAAAAAGGG AGACGCTGTC CCCGCTGTGC CTCATCCCCA
601 TGGTGACATC TCCCCGGGAG GAGCAGCAGC TCCTGGCCAG CACCTCCAAG CCCGTGGTGA
661 AGCTCCTGCA CAACCGCAGT AACAACAAGT ACTCCTACAC CAGCACTTCA GATGACAACC
721 TACTTAAGAA CATCGAGCTG TTCGACAAGC TGGCCCTGCG CTTCCACGGG CGGCTACTCT
781 TCCTCAAGGA TGTCCTGGGG GACGAGATCT GCTGCTGGTC TTTCTACGGG CAGGGCCGCA
841 AAATCGCCGA GGTGTGCTGC ACCTCCATTG TCTATGCTAC GGAGAAGAAG CAGACCAAGG
901 TGGAATTTCC AGAGGCCCGG ATCTTCGAGG AGACCCTGAA CATCCTCATC TACGAGACTC
961 CCCGGGGCCC AGACCCAGCC CTCCTGGAGG CCACAGGGGG AGCAGCTGGA GCTGGTGGGG
1021 CTGGCCGCGG GGAGGATGAA GAGAACCGAG AGCACCGTGT CCGCAGGATC CATGTCCGGC
1081 GCCATATCAC CCACGACGAG CGTCCTCATG GCCAACAAAT TGTCTTCAAG GACTGACCTC
1141 TGACCCTCCC CCTGCCTTCC TCTTGCCTTG GGACCCAGTC CCTCTCTCTT TCCCTCCCCT
1201 TCCCAGACTT TTGCCCCGGC TCTGCTGGCC AAGTCGTGGG TCCTCCTCTG TCCCTTCATT
1261 GCATGGCACA GCTCACTTTG GCCCTTCTCC ACCCATCCCA ACCCCATTGC TAACAACATG
1321 GTACATTCCG GCCCCACCAC TCAGAGCCTT CCGAAGCCAA CACTTGTCCC CACCCTGGCC
1381 CTGCGTCCTT CCCTCTCCAG CTGGTTAAGA GGGATTTAGA ATTCCCTTTC TCTTTTTTTA
1441 GTGCATCGTC CATGCCAAAG TGTGCGGCCC TTCCTGACAT CACCACAGTC TGAGCAGCCT
1501 CCCGCGTCCT GCAGGGTAGTCCGCCCCCTC CTCCCCACCA TCCTCCCTAC CTCCTTAACT
1561 TTGTACTAGA CTGGCCTGGG CCTGCCCAGC TCAGCGTTAT CAGTCTGTTT CATATTATTT
1621 ATTATTTTAA TTTTCTATTA AATTATTGAA ATAAAGTTAA GTTGAGAAAC TGAAAAAAAA
1681 AAAAAAAAAA AA
B:氨基酸序列(SEQ ID NO:26)长度:329个氨基酸
1 MSAEASGPAA AAAPSLEAPK PSGLEPGPAA YGLKPLTPNS KYVKLNVGGS LHYTTLRTLT
61 GQDTMLKAMF SGRVEVLTDA GGWVLIDRSG RHFGTILNYL RDGSVPLPES TRELGELLGE
121 ARYYLVQGLI EDCQLALQQK RETLSPLCLI PMVTSPREEQ QLLASTSKPV VKLLHNRSNN
181 KYSYTSTSDD NLLKNIELFD KLALRFHGRL LFLKDVLGDE ICCWSFYGQG RKIAEVCCTS
241 IVYATEKKQT KVEFPEARIF EETLNILIYE TPRGPDPALL EATGGAAGAG GAGRGEDEEN
301 REHRVRRIHV RRHITHDERP HGQQIVFKD
C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:27)
克隆号:PP6832
起始编码子:147 ATG 终止编码子:1134 TGA
蛋白质分子量:36355.48
1 GG GCC GGT CTT GCA GAG TAG CTG CGG TGA GTG GGC GTG TGC GCC GAG 47
48 CGG TCT GGC CCA AGG GCT GGG GGC CGG CCG AGG GTC TTC GGG AGC AGG 95
96 CCG CAG GGC GCG GAG AGA TCC TGG GAT CGC CGT CCG CCG CTG CTA CCC 143
144 GGC ATG TCG GCG GAG GCC TCG GGC CCG GCT GCC GCC GCG GCC CCG TCC 191
1 Met Ser Ala Glu Ala Ser Gly Pro Ala Ala Ala Ala Ala Pro Ser 15
192 CTG GAA GCC CCC AAG CCC TCG GGT CTC GAG CCT GGC CCC GCC GCC TAC 239
16 Leu Glu Ala Pro Lys Pro Ser Gly Leu Glu Pro Gly Pro Ala Ala Tyr 31
240 GGT CTC AAG CCG CTG ACC CCG AAC AGC AAA TAC GTG AAG CTG AAC GTG 287
32 Gly Leu Lys Pro Leu Thr Pro Asn Ser Lys Tyr Val Lys Leu Asn Val 47
288 GGC GGC TCG TTG CAC TAC ACC ACG CTG CGC ACC CTC ACG GGA CAG GAC 335
48 Gly Gly Ser Leu His Tyr Thr Thr Leu Arg Thr Leu Thr Gly Gln Asp 63
336 ACC ATG CTC AAA GCC ATG TTC AGC GGC CGC GTG GAG GTG CTG ACC GAT 383
64 Thr Met Leu Lys Ala Met Phe Ser Gly Arg Val Glu Val Leu Thr Asp 79
384 GCC GGA GGT TGG GTG CTG ATT GAC CGG AGC GGC CGT CAC TTT GGT ACA 431
80 Ala Gly Gly Trp Val Leu Ile Asp Arg Ser Gly Arg His Phe Gly Thr 95
432 ATC CTC AAT TAC CTG CGG GAT GGG TCT GTG CCA CTG CCG GAG AGT ACG 479
96 Ile Leu Asn Tyr Leu Arg Asp Gly Ser Val Pro Leu Pro Glu Ser Thr 111
480 AGA GAA CTG GGG GAG CTG CTG GGC GAA GCA CGC TAC TAC CTG GTG CAG 527
112 Arg Glu Leu Gly Glu Leu Leu Gly Glu Ala Arg Tyr Tyr Leu Val Gln 127
528 GGC CTG ATT GAG GAC TGC CAG CTG GCG CTG CAG CAA AAA AGG GAG ACG 575
128 Gly Leu Ile Glu Asp Cys Gln Leu Ala Leu Gln Gln Lys Arg Glu Thr 143
576 CTG TCC CCG CTG TGC CTC ATC CCC ATG GTG ACA TCT CCC CGG GAG GAG 623
144 Leu Ser Pro Leu Cys Leu Ile Pro Met Val Thr Ser Pro Arg Glu Glu 159
624 CAG CAG CTC CTG GCC AGC ACC TCC AAG CCC GTG GTG AAG CTC CTG CAC 671
160 Gln Gln Leu Leu Ala Ser Thr Ser Lys Pro Val Val Lys Leu Leu His 175
672 AAC CGC AGT AAC AAC AAG TAC TCC TAC ACC AGC ACT TCA GAT GAC AAC 719
176 Asn Arg Ser Asn Asn Lys Tyr Ser Tyr Thr Ser Thr Ser Asp Asp Asn 191
720 CTA CTT AAG AAC ATC GAG CTG TTC GAC AAG CTG GCC CTG CGC TTC CAC 767
192 Leu Leu Lys Asn Ile Glu Leu Phe Asp Lys Leu Ala Leu Arg Phe His 207
768 GGG CGG CTA CTC TTC CTC AAG GAT GTC CTG GGG GAC GAG ATC TGC TGC 815
208 Gly Arg Leu Leu Phe Leu Lys Asp Val Leu Gly Asp Glu Ile Cys Cys 223
816 TGG TCT TTC TAC GGG CAG GGC CGC AAA ATC GCC GAG GTG TGC TGC ACC 863
224 Trp Ser Phe Tyr Gly Gln Gly Arg Lys Ile Ala Glu Val Cys Cys Thr 239
864 TCC ATT GTC TAT GCT ACG GAG AAG AAG CAG ACC AAG GTG GAA TTT CCA 911
240 Ser Ile Val Tyr Ala Thr Glu Lys Lys Gln Thr Lys Val Glu Phe Pro 255
912 GAG GCC CGG ATC TTC GAG GAG ACC CTG AAC ATC CTC ATC TAC GAG ACT 959
256 Glu Ala Arg Ile Phe Glu Glu Thr Leu Asn Ile Leu Ile Tyr Glu Thr 271
960 CCC CGG GGC CCA GAC CCA GCC CTC CTG GAG GCC ACA GGG GGA GCA GCT 1007
272 Pro Arg Gly Pro Asp Pro Ala Leu Leu Glu Ala Thr Gly Gly Ala Ala 287
1008 GGA GCT GGT GGG GCT GGC CGC GGG GAG GAT GAA GAG AAC CGA GAG CAC 1055
288 Gly Ala Gly Gly Ala Gly Arg Gly Glu Asp Glu Glu Asn Arg Glu His 303
1056 CGT GTC CGC AGG ATC CAT GTC CGG CGC CAT ATC ACC CAC GAC GAG CGT 1103
304 Arg Val Arg Arg Ile His Val Arg Arg His Ile Thr His Asp Glu Arg 319
1104 CCT CAT GGC CAA CAA ATT GTC TTC AAG GAC TGA CCT CTG ACC CTC CCC 1151
320 Pro His Gly Gln Gln Ile Val Phe Lys Asp *** 330
1152 CTG CCT TCC TCT TGC CTT GGG ACC CAG TCC CTC TCT CTT TCC CTC CCC 1199
1200 TTC CCA GAC TTT TGC CCC GGC TCT GCT GGC CAA GTC GTG GGT CCT CCT 1247
1248 CTG TCC CTT CAT TGC ATG GCA CAG CTC ACT TTG GCC CTT CTC CAC CCA 1295
1296 TCC CAA CCC CAT TGC TAA CAA CAT GGT ACA TTC CGG CCC CAC CAC TCA 1343
1344 GAG CCT TCC GAA GCC AAC ACT TGT CCC CAC CCT GGC CCT GCG TCC TTC 1391
1392 CCT CTC CAG CTG GTT AAG AGG GAT TTA GAA TTC CCT TTC TCT TTT TTT 1439
1440 AGT GCA TCG TCC ATG CCA AAG TGT GCG GCC CTT CCT GAC ATC ACC ACA 1487
1488 GTC TGA GCA GCC TCC CGC GTC CTG CAG GGT AGT CCG CCC CCT CCT CCC 1535
1536 CAC CAT CCT CCC TAC CTC CTT AAC TTT GTA CTA GAC TGG CCT GGG CCT 1583
1584 GCC CAG CTC AGC GTT ATC AGT CTG TTT CAT ATT ATT TAT TAT TTT AAT 1631
1632 TTT CTA TTA AAT TAT TGA AAT AAA GTT AAG TTG AGA AAC TGA AAA AAA 1679
1680 AAA AAA AAA AAA A 1692
10.PP6933
A:核苷酸序列(SEQ ID NO:28)长度:1649bp
1 GCTGGAGGAG CCGGGCCGAG GCCGCGGCGG AGGCCGCGGC TGGTACTGGG AGGGTGGCAG
61 GGAGGGACGG GGAAGGAAGA TGGCGACGTC GGGGGCGAAC GGGCCTGGTT CGGCCACGGC
121 CTCGGCTTCC AATCCGCGCA AATTTAGTGA GAAGATTGCG CTGCAGAAGC AGCGTCAGGC
181 TTCCCTGAGC AGTCCTCAGC CCCAGCTTCA GGGCTCCCAC AGCCACCCCT CTCTGCCTGC
241 CTCCTCCTTG GCCCGCCATG TACTGCCCAC CACCTCCCTG GGCCACCCCT CACTCAGTGC
301 TCCGGCTCTC TCCTCCTCCT CTTCCTCCTC CTCCACTTCA TCTCCTGTTT TGGGCGCCCC
361 CTCTTACCCT GCTTCTACCC CTGGGGCTCC CCCCACCACC GCCGTGTGCC CCTCAGCCCC
421 CTGAGTTTGC TCGCGGGCCC AGCCGACGCC AGAAGGTCCC AACAGCAGCT GCCCAAACAG
481 TTTTCGCCAA CAATGTCACC CACCTTGTCT TCCATCACTC AGGGCGTCCC CCTGGATACC
541 AGTAAACTGT CCACTGACCA GCGGTTACCC CCATACCCAT ACAGCTCCCC AAGTCTGGTT
601 CTGCCTACCC AGCCCCACAC CCCAAAGTCT CTACAGCAGC CAGGGCTGCC CTCTCAGTCT
661 TGTTCAGTGC AGTCCTCAGG TGGGCAGCCC CCAGGCAGGC AGTCTCATTA TGGGACACCG
721 TACCCACCTG GGCCCAGTGG GCATGGGCAA CAGTCTTACC ACCGGCCAAT GAGTGACTTC
781 AACCTGGGGA ATCTGGAGCA GTTCAGCATG GAGAGCCCAT CAGCCAGCCT GGTGCTGGAT
841 CCCCCTGGCT TTTCTGAAGG GCCTGGATTT TTAGGGGGTG AGGGGCCAAT GGGTGGCCCC
901 CAGGATCCCC ACACCTTCAA CCACCAGAAC TTGACCCACT GTTCCCGCCA TGGCTCAGGG
961 CCTAACATCA TCCTCACAGG GGACTCCTCT CCAGGTTTCT CTAAGGAGAT TGCAGCAGCC
1021 CTGGCCGGAG TGCCTGGCTT TGAGGTGTCA GCAGCTGGAT TGGAGCTAGG GCTTGGGCTA
1081 GAAGATGAGC TGCGCATGGA GCCACTGGGC CTGGAAGGGC TAAACATGCT GAGTGACCCC
1141 TGTGCCCTGC TGCCTGATCC TGCTGTGGAG GAGTCATTCC GCAGTGACCG GCTCCAATGA
1201 GGGCACCTCA TCACCATCCC TCTTCTTGGC CCCATCCCCC ACCACCATTC CTTTCCTCCC
1261 TTCCCCCTGG CAGGTAGAGA CTCTACTCTC TGTCCCCAGA TCCTCTTTCT AGCATGAATG
1321 AAGGATGCCA AGAATGAGAA AAAGCAAGGG GTTTGTCCAG GTGGCCCCTG AATTCTGCGC
1381 AAGGGATGGG CCTGGGGGAA CTCAAGGGAG GGCCTAAAGC ACTTGTAACT TTGAACCGTC
1441 TGTCTGGAGG TCAGAGCCTG TTGGAAAGCA GGGGTAGAGG GGAGCCCTGG AAGCAGGGCT
1501 TTTCCGGATG CCTAGGGGTG GGCAGTGCCA GCCCCTCCTC ACCACTCTTC CCCTTGCAGT
1561 GGAGGAGAGA GCCAGAGTGG ATACTATTTT TTATTAAATA TATTATTATA TGTTAATAAA
1621 AAAATCATAT CAAAAAAAAA AAAAAAAAA
B:氨基酸序列(SEQ ID NO:29)长度:235个氨基酸
1 MSPTLSSITQ GVPLDTSKLS TDQRLPPYPY SSPSLVLPTQ PHTPKSLQQP GLPSQSCSVQ
61 SSGGQPPGRQ SHYGTPYPPG PSGHGQQSYH RPMSDFNLGN LEQFSMESPS ASLVLDPPGF
121 SEGPGFLGGE GPMGGPQDPH TFNHQNLTHC SRHGSGPNII LTGDSSPGFS KEIAAALAGV
181 PGFEVSAAGL ELGLGLEDEL RMEPLGLEGL NMLSDPCALL PDPAVEESFR SDRLQ
C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:30)
克隆号:PP6933
起始编码子:493 ATG 终止编码子:1198 TGA
蛋白质分子量:24632.01
1 GCT GGA GGA GCC GGG CCG AGG CCG CGG CGG AGG CCG CGG CTG GTA CTG 48
49 GGA GGG TGG CAG GGA GGG ACG GGG AAG GAA GAT GGC GAC GTC GGG GGC 96
97 GAA CGG GCC TGG TTC GGC CAC GGC CTC GGC TTC CAA TCC GCG CAA ATT 144
145 TAG TGA GAA GAT TGC GCT GCA GAA GCA GCG TCA GGC TTC CCT GAG CAG 192
193 TCC TCA GCC CCA GCT TCA GGG CTC CCA CAG CCA CCC CTC TCT GCC TGC 240
241 CTC CTC CTT GGC CCG CCA TGT ACT GCC CAC CAC CTC CCT GGG CCA CCC 288
289 CTC ACT CAG TGC TCC GGC TCT CTC CTC CTC CTC TTC CTC CTC CTC CAC 336
337 TTC ATC TCC TGT TTT GGG CGC CCC CTC TTA CCC TGC TTC TAC CCC TGG 384
385 GGC TCC CCC CAC CAC CGC CGT GTG CCC CTC AGC CCC CTG AGT TTG CTC 432
433 GCG GGC CCA GCC GAC GCC AGA AGG TCC CAA CAG CAG CTG CCC AAA CAG 480
481 TTT TCG CCA ACA ATG TCA CCC ACC TTG TCT TCC ATC ACT CAG GGC GTC 528
1 Met Ser Pro Thr Leu Ser Ser Ile Thr Gln Gly Val 12
529 CCC CTG GAT ACC AGT AAA CTG TCC ACT GAC CAG CGG TTA CCC CCA TAC 576
13 Pro Leu Asp Thr Ser Lys Leu Ser Thr Asp Gln Arg Leu Pro Pro Tyr 28
577 CCA TAC AGC TCC CCA AGT CTG GTT CTG CCT ACC CAG CCC CAC ACC CCA 624
29 Pro Tyr Ser Ser Pro Ser Leu Val Leu Pro Thr Gln Pro His Thr Pro 44
625 AAG TCT CTA CAG CAG CCA GGG CTG CCC TCT CAG TCT TGT TCA GTG CAG 672
45 Lys Ser Leu Gln Gln Pro Gly Leu Pro Ser Gln Ser Cys Ser Val Gln 60
673 TCC TCA GGT GGG CAG CCC CCA GGC AGG CAG TCT CAT TAT GGG ACA CCG 720
61 Ser Ser Gly Gly Gln Pro Pro Gly Arg Gln Ser His Tyr Gly Thr Pro 76
721 TAC CCA CCT GGG CCC AGT GGG CAT GGG CAA CAG TCT TAC CAC CGG CCA 768
77 Tyr Pro Pro Gly Pro Ser Gly His Gly Gln Gln Ser Tyr His Arg Pro 92
769 ATG AGT GAC TTC AAC CTG GGG AAT CTG GAG CAG TTC AGC ATG GAG AGC 816
93 Met Ser Asp Phe Asn Leu Gly Asn Leu Glu Gln Phe Ser Met Glu Ser 108
817 CCA TCA GCC AGC CTG GTG CTG GAT CCC CCT GGC TTT TCT GAA GGG CCT 864
109 Pro Ser Ala Ser Leu Val Leu Asp Pro Pro Gly Phe Ser Glu Gly Pro 124
865 GGA TTT TTA GGG GGT GAG GGG CCA ATG GGT GGC CCC CAG GAT CCC CAC 912
125 Gly Phe Leu Gly Gly Glu Gly Pro Met Gly Gly Pro Gln Asp Pro His 140
913 ACC TTC AAC CAC CAG AAC TTG ACC CAC TGT TCC CGC CAT GGC TCA GGG 960
141 Thr Phe Asn His Gln Asn Leu Thr His Cys Ser Arg His Gly Ser Gly 156
961 CCT AAC ATC ATC CTC ACA GGG GAC TCC TCT CCA GGT TTC TCT AAG GAG 1008
157 Pro Asn Ile Ile Leu Thr Gly Asp Ser Ser Pro Gly Phe Ser Lys Glu 172
1009 ATT GCA GCA GCC CTG GCC GGA GTG CCT GGC TTT GAG GTG TCA GCA GCT 1056
173 Ile Ala Ala Ala Leu Ala Gly Val Pro Gly Phe Glu Val Ser Ala Ala 188
1057 GGA TTG GAG CTA GGG CTT GGG CTA GAA GAT GAG CTG CGC ATG GAG CCA 1104
189 Gly Leu Glu Leu Gly Leu Gly Leu Glu Asp Glu Leu Arg Met Glu Pro 204
1105 CTG GGC CTG GAA GGG CTA AAC ATG CTG AGT GAC CCC TGT GCC CTG CTG 1152
205 Leu Gly Leu Glu Gly Leu Asn Met Leu Ser Asp Pro Cys Ala Leu Leu 220
1153 CCT GAT CCT GCT GTG GAG GAG TCA TTC CGC AGT GAC CGG CTC CAA TGA 1200
221 Pro Asp Pro Ala Val Glu Glu Ser Phe Arg Ser Asp Arg Leu Gln *** 236
1201 GGG CAC CTC ATC ACC ATC CCT CTT CTT GGC CCC ATC CCC CAC CAC CAT 1248
1249 TCC TTT CCT CCC TTC CCC CTG GCA GGT AGA GAC TCT ACT CTC TGT CCC 1296
1297 CAG ATC CTC TTT CTA GCA TGA ATG AAG GAT GCC AAG AAT GAG AAA AAG 1344
1345 CAA GGG GTT TGT CCA GGT GGC CCC TGA ATT CTG CGC AAG GGA TGG GCC 1392
1393 TGG GGG AAC TCA AGG GAG GGC CTA AAG CAC TTG TAA CTT TGA ACC GTC 1440
1441 TGT CTG GAG GTC AGA GCC TGT TGG AAA GCA GGG GTA GAG GGG AGC CCT 1488
1489 GGA AGC AGG GCT TTT CCG GAT GCC TAG GGG TGG GCA GTG CCA GCC CCT 1536
1537 CCT CAC CAC TCT TCC CCT TGC AGT GGA GGA GAG AGC CAG AGT GGA TAC 1584
1585 TAT TTT TTA TTA AAT ATA TTA TTA TAT GTT AAT AAA AAA ATC ATA TCA 1632
1633 AAA AAA AAA AAA AAA AA 1649
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考,就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解,在阅读了本发明的上述讲授内容之后,本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改,这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
Claims (10)
1.一种分离的具有抑癌功能的人蛋白多肽,其特征在于,它是具有选自下组的氨基酸序列的多肽:SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29。
2.如权利要求1所述的多肽,其特征在于,该多肽的氨基酸序列选自下组:SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:29。
3.一种分离的多核苷酸,其特征在于,选自下组:
(a)编码如权利要求1所述多肽的多核苷酸;
(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。
4.如权利要求3所述的多核苷酸,其特征在于,该多核苷酸编码的多肽具有选自下组的氨基酸序列:SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29。
5.如权利要求3所述的多核苷酸,其特征在于,该多核苷酸的序列选自下组:
SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:30的编码区序列或全长序列。
6.一种载体,其特征在于,它含有权利要求3所述的多核苷酸。
7.一种遗传工程化的宿主细胞,其特征在于,它是选自下组的一种宿主细胞:
(a)用权利要求6所述的载体转化或转导的宿主细胞;
(b)用权利要求3所述的多核苷酸转化或转导的宿主细胞。
8.一种具有抑癌功能的人蛋白活性的多肽的制备方法,其特征在于,该方法包含:
(a)在适合表达具有抑癌功能的人蛋白的条件下,培养权利要求7所述的宿主细胞;
(b)从培养物中分离出具有抑癌功能的人蛋白活性的多肽。
9.一种能与权利要求1所述的具有抑癌功能的人蛋白多肽特异性结合的抗体。
10.一种药物组合物,其特征在于,它含有安全有效量的权利要求1所述的多肽以及药学上可接受的载体。
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