CN1194010C - 具有抑制癌细胞生长功能的人蛋白及基编码序列 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一类新的具有抑癌功能的人蛋白，编码此多肽的多核苷酸和经重组技术产生该多肽的方法。本发明还公开了此多肽用于治疗多种疾病如癌症等的方法。本发明还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明还公开了编码这类新的具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸的用途。

Description

具有抑制癌细胞生长功能的人蛋白及其编码序列

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明涉及新的编码具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸，以及此多核苷酸编码的多肽。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的用途和制备。

背景技术

人基因组学研究目前是国际上的热点，除人染色体DNA大规模测序，表达序列测序(EST)的方法外，还缺少从功能开始的筛选具有功能基因的高通量的方法。

癌症是危害人类健康的主要疾病之一。为了有效地治疗和预防肿瘤，目前人们已越来越关注肿瘤的基因治疗。因此，本领域迫切需要开发研究具有抑癌功能的人蛋白及其激动剂/抑制剂。

发明内容

本发明的目的是提供一类新的具有抑癌功能的人蛋白多肽以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一目的是提供编码这些多肽的多核苷酸。

本发明的另一目的是提供生产这些多肽的方法以及该多肽和编码序列的用途。

在本发明的第一方面，提供新颖的分离出的具有抑癌功能的蛋白多肽，它包含具有选自下组的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：8、SEQ IDNO：11、SEQ ID NO：14；或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。

较佳地，该多肽是具有选自下组的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：14。

在本发明的第二方面，提供了一种分离的多核苷酸，它包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少85％相同性：(a)编码上述的具有抑癌功能的蛋白多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地，该多核苷酸编码的多肽具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：8、SEQ IDNO：11、SEQ ID NO：14。更佳地，该多核苷酸的序列选自下组：SEQ ID NO：3、SEQ IDNO：6、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：15的编码区序列或全长序列。

在本发明的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。

在本发明的第四方面，提供了制备具有抑癌功能的蛋白活性的多肽的制备方法，该方法包含：(a)在适合表达具有抑癌功能的蛋白的条件下，培养上述被转化或转导的宿主细胞；(b)从培养物中分离出具有抑癌功能的蛋白活性的多肽。

在本发明的第五方面，提供了与上述的具有抑癌功能的蛋白多肽特异性结合的抗体。还提供了可用于检测的核酸分子，它含有上述的多核苷酸中连续的10-800个核苷酸。

在本发明的第六方面，提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的本发明的具有抑癌功能的蛋白多肽以及药学上可接受的载体。这些药物组合物可治疗癌症以及细胞异常增殖等病症。

本发明的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。

具体实施方式

本发明采用大规模cDNA克隆转染癌细胞，在获得具有抑癌作用的基础上，经测序证明为新的基因，进一步得到全长cDNA克隆。DNA转染试验证明，本发明的具有抑癌功能的蛋白对癌细胞(肝癌细胞)具有抑制克隆形成的作用，其抑制率在50％或50％以上。

如本文所用，“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和多肽是没有分离纯化的，但同样的多聚核苷酸或多肽如从天然状态中同存在的其他物质中分开，则为分离纯化的。

如本文所用，“分离的具有抑癌功能的蛋白或多肽”是指具有抑癌功能的蛋白多肽基本上不含天然与其相关的其它蛋白、脂类、糖类或其它物质。本领域的技术人员能用标准的蛋白质纯化技术纯化具有抑癌功能的蛋白。基本上纯的多肽在非还原聚丙烯酰胺凝胶上能产生单一的主带。具有抑癌功能的蛋白多肽的纯度能用氨基酸序列分析。

本发明的多肽可以是重组多肽、天然多肽、合成多肽，优选重组多肽。本发明的多肽可以是天然纯化的产物，或是化学合成的产物，或使用重组技术从原核或真核宿主(例如，细菌、酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞)中产生。根据重组生产方案所用的宿主，本发明的多肽可以是糖基化的，或可以是非糖基化的。本发明的多肽还可包括或不包括起始的甲硫氨酸残基。

本发明还包括具有抑癌功能的人蛋白的片段、衍生物和类似物。如本文所用，术语“片段”、“衍生物”和“类似物”是指基本上保持本发明的天然具有抑癌功能的人蛋白相同的生物学功能或活性的多肽。本发明的多肽片段、衍生物或类似物可以是(i)有一个或多个保守或非保守性氨基酸残基(优选保守性氨基酸残基)被取代的多肽，而这样的取代的氨基酸残基可以是也可以不是由遗传密码编码的，或(ii)在一个或多个氨基酸残基中具有取代基团的多肽，或(iii)成熟多肽与另一个化合物(比如延长多肽半衰期的化合物，例如聚乙二醇)融合所形成的多肽，或(iv)附加的氨基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽(如前导序列或分泌序列或用来纯化此多肽的序列或蛋白原序列)。根据本文的教导，这些片段、衍生物和类似物属于本领域熟练技术人员公知的范围。

本发明的多核苷酸可以是DNA形式或RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因组DNA或人工合成的DNA。DNA可以是单链的或是双链的。DNA可以是编码链或非编码链。以SP24蛋白(在本申请中，蛋白质的命名采用其克隆编号)为例，编码成熟多肽的编码区序列可以与SEQ ID NO：3所示的编码区序列相同或者是简并的变异体。如本文所用，“简并的变异体”在本发明中是指编码具有SEQ ID NO：2的蛋白质，但与SEQ ID NO：3所示的编码区序列有差别的核酸序列。以PP13蛋白(在本申请中，蛋白质的命名采用其克隆编号)为例，编码成熟多肽的编码区序列可以与SEQ ID NO：6所示的编码区序列相同或者是简并的变异体。如本文所用，“简并的变异体”在本发明中是指编码具有SEQ IDNO：5的蛋白质，但与SEQ ID NO：6所示的编码区序列有差别的核酸序列。对于其他具有抑癌功能的蛋白，可依此类推。对于其他具有抑癌功能的蛋白，可依此类推。

编码成熟多肽的多核苷酸包括：只编码成熟多肽的编码序列；成熟多肽的编码序列和各种附加编码序列；成熟多肽的编码序列(和任选的附加编码序列)以及非编码序列。

术语“编码多肽的多核苷酸”可以是包括编码此多肽的多核苷酸，也可以是还包括附加编码和/或非编码序列的多核苷酸。

本发明还涉及上述多核苷酸的变异体，其编码与本发明有相同的氨基酸序列的多肽或多肽的片段、类似物和衍生物。此多核苷酸的变异体可以是天然发生的等位变异体或非天然发生的变异体。这些核苷酸变异体包括取代变异体、缺失变异体和插入变异体。如本领域所知的，等位变异体是一个多核苷酸的替换形式，它可能是一个或多个核苷酸的取代、缺失或插入，但不会从实质上改变其编码的多肽的功能。

本发明还涉及与上述的序列杂交且两个序列之间具有至少50％，较佳地至少70％，更佳地至少80％相同性的多核苷酸。本发明特别涉及在严格条件下与本发明所述多核苷酸可杂交的多核苷酸。在本发明中，“严格条件”是指：(1)在较低离子强度和较高温度下的杂交和洗脱，如0.2×SSC，0.1％SDS，60℃；或(2)杂交时加有变性剂，如50％(v/v)甲酰胺，0.1％小牛血清/0.1％Ficoll，42℃等；或(3)仅在两条序列之间的相同性至少在95％以上，更好是97％以上时才发生杂交。并且，可杂交的多核苷酸编码的多肽与SEQ IDNO：2所示的成熟多肽有相同的生物学功能和活性。

本发明还涉及与上述的序列杂交的核酸片段。如本文所用，“核酸片段”的长度至少含15个核苷酸，较好是至少30个核苷酸，更好是至少50个核苷酸，最好是至少100个核苷酸以上。核酸片段可用于核酸的扩增技术(如PCR)以确定和/或分离编码具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸。

本发明中的多肽和多核苷酸优选以分离的形式提供，更佳地被纯化至均质。

本发明的DNA序列能用几种方法获得。例如，用本领域熟知的杂交技术分离DNA。这些技术包括但不局限于：1)用探针与基因组或cDNA文库杂交以检出同源性核苷酸序列，和2)表达文库的抗体筛选以检出具有共同结构特征的克隆的DNA片段。

编码具有抑癌功能的蛋白的特异DNA片段序列产生也能用下列方法获得：1)从基因组DNA分离双链DNA序列；2)化学合成DNA序列以获得所需多肽的双链DNA。

上述提到的方法中，分离基因组DNA最不常用。当需要的多肽产物的整个氨基酸序列已知时，DNA序列的直接化学合成是经常选用的方法。如果所需的氨基酸的整个序列不清楚时，DNA序列的直接化学合成是不可能的，选用的方法是cDNA序列的分离。分离感兴趣的cDNA的标准方法是从高表达该基因的供体细胞分离mRNA并进行逆转录，形成质粒或噬菌体cDNA文库。提取mRNA的方法已有多种成熟的技术，试剂盒也可从商业途径获得(Qiagene)。而构建cDNA文库也是通常的方法(Sambrook，et al.，Molecular Cloning，A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory.New York，1989)。还可得到商业供应的cDNA文库，如Clontech公司的不同cDNA文库。当结合使用聚合酶反应技术时，即使极少的表达产物也能克隆。

可用常规方法从这些cDNA文库中筛选本发明的基因。这些方法包括(但不限于)：(1)DNA-DNA或DNA-RNA杂交；(2)标志基因的功能出现或丧失；(3)测定具有抑癌功能的蛋白的转录本的水平；(4)通过免疫学技术或测定生物学活性，来检测基因表达的蛋白产物。上述方法可单用，也可多种方法联合应用。

在第(1)种方法中，杂交所用的探针是与本发明的多核苷酸的任何一部分同源，其长度至少15个核苷酸，较好是至少30个核苷酸，更好是至少50个核苷酸，最好是至少100个核苷酸。此外，探针的长度通常在2kb之内，较佳地为1kb之内。此处所用的探针通常是在本发明的基因DNA序列信息的基础上化学合成的DNA序列。本发明的基因本身或者片段当然可以用作探针。DNA探针的标记可用放射性同位素，荧光素或酶(如碱性磷酸酶)等。

在第(4)种方法中，检测具有抑癌功能的蛋白基因表达的蛋白产物可用免疫学技术如Westem印迹法，放射免疫沉淀法，酶联免疫吸附法(ELISA)等。

应用PCR技术扩增DNA/RNA的方法(Saiki，et al.Science 1985；230：1350-1354)被优选用于获得本发明的基因。特别是很难从文库中得到全长的cDNA时，可优选使用RACE法(RACE-cDNA末端快速扩增法)，用于PCR的引物可根据本文所公开的本发明的序列信息适当地选择，并可用常规方法合成。可用常规方法如通过凝胶电泳分离和纯化扩增的DNA/RNA片段。

如上所述得到的本发明的基因，或者各种DNA片段等的核苷酸序列的测定可用常规方法如双脱氧链终止法(Sanger et al.PNAS，1977，74：5463-5467)。这类核苷酸序列测定也可用商业测序试剂盒等。为了获得全长的cDNA序列，测序需反复进行。有时需要测定多个克隆的cDNA序列，才能拼接成全长的cDNA序列。

本发明也涉及包含本发明的多核苷酸的载体，以及用本发明的载体或具有抑癌功能的蛋白编码序列经基因工程产生的宿主细胞，以及经重组技术产生本发明所述多肽的方法。

通过常规的重组DNA技术，可利用本发明的多聚核苷酸序列可用来表达或生产重组的具有抑癌功能的蛋白多肽(Science，1984；224：1431)。一般来说有以下步骤：

(1).用本发明的编码具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸(或变异体)，或用含有该多核苷酸的重组表达载体转化或转导合适的宿主细胞；

(2).在合适的培养基中培养的宿主细胞；

(3).从培养基或细胞中分离、纯化蛋白质。

本发明中，具有抑癌功能的人蛋白多核苷酸序列可插入到重组表达载体中。术语“重组表达载体”指本领域熟知的细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒如腺病毒、逆转录病毒或其他载体。在本发明中适用的载体包括但不限于：在细菌中表达的基于T7的表达载体(Rosenberg，et al.Gene，1987，56：125)；在哺乳动物细胞中表达的pMSXND表达载体(Lee and Nathans，J Bio Chem.263：3521，1988)和在昆虫细胞中表达的来源于杆状病毒的载体。总之，只要能在宿主体内复制和稳定，任何质粒和载体都可以用。表达载体的一个重要特征是通常含有复制起点、启动子、标记基因和翻译控制元件。

本领域的技术人员熟知的方法能用于构建含具有抑癌功能的人蛋白编码DNA序列和合适的转录/翻译控制信号的表达载体。这些方法包括体外重组DNA技术、DNA合成技术、体内重组技术等(Sambroook，et al。Molecular Cloning，a Laboratory Manual，coldSpring Harbor Laboratory.New York，1989)。所述的DNA序列可有效连接到表达载体中的适当启动子上，以指导mRNA合成。这些启动子的代表性例子有：大肠杆菌的lac或trp启动子；λ噬菌体PL启动子；真核启动子包括CMV立即早期启动子、HSV胸苷激酶启动子、早期和晚期SV40启动子、反转录病毒的LTRs和其他一些已知的可控制基因在原核或真核细胞或其病毒中表达的启动子。表达载体还包括翻译起始用的核糖体结合位点和转录终止子。

此外，表达载体优选地包含一个或多个选择性标记基因，以提供用于选择转化的宿主细胞的表型性状，如真核细胞培养用的二氢叶酸还原酶、新霉素抗性以及绿色荧光蛋白(GFP)，或用于大肠杆菌的四环素或氨苄青霉素抗性。

包含上述的适当DNA序列以及适当启动子或者控制序列的载体，可以用于转化适当的宿主细胞，以使其能够表达蛋白质。

宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或是高等真核细胞，如哺乳动物细胞。代表性例子有：大肠杆菌，链霉菌属；鼠伤寒沙门氏菌的细菌细胞；真菌细胞如酵母；植物细胞；果蝇S2或Sf9的昆虫细胞；CHO、COS或Bowes黑素瘤细胞的动物细胞等。

本发明的多核苷酸在高等真核细胞中表达时，如果在载体中插入增强子序列时将会使转录得到增强。增强子是DNA的顺式作用因子，通常大约有10到300个碱基对，作用于启动子以增强基因的转录。可举的例子包括在复制起始点晚期一侧的100到270个碱基对的SV40增强子、在复制起始点晚期一侧的多瘤增强子以及腺病毒增强子等。

本领域一般技术人员都清楚如何选择适当的载体、启动子、增强子和宿主细胞。

用重组DNA转化宿主细胞可用本领域技术人员熟知的常规技术进行。当宿主为原核生物如大肠杆菌时，能吸收DNA的感受态细胞可在指数生长期后收获，用CaCl₂法处理，所用的步骤在本领域众所周知。可供选择的是用MgCl₂。如果需要，转化也可用电穿孔的方法进行。当宿主是真核生物，可选用如下的DNA转染方法：磷酸钙共沉淀法，常规机械方法如显微注射、电穿孔、脂质体包装等。

获得的转化子可以用常规方法培养，表达本发明的基因所编码的多肽。根据所用的宿主细胞，培养中所用的培养基可选自各种常规培养基。在适于宿主细胞生长的条件下进行培养。当宿主细胞生长到适当的细胞密度后，用合适的方法(如温度转换或化学诱导)诱导选择的启动子，将细胞再培养一段时间。

在上面的方法中的重组多肽可包被于细胞内、细胞外或在细胞膜上表达或分泌到细胞外。如果需要，可利用其物理的、化学的和其它特性通过各种分离方法分离和纯化重组的蛋白。这些方法是本领域技术人员所熟知的。这些方法的例子包括但并不限于：常规的复性处理、用蛋白沉淀剂处理(盐析方法)、离心、渗透破菌、超处理、超离心、分子筛层析(凝胶过滤)、吸附层析、离子交换层析、高效液相层析(HPLC)和其它各种液相层析技术及这些方法的结合。

重组的具有抑癌功能的人蛋白或多肽有多方面的用途。这些用途包括(但不限于)：直接做为药物治疗具有抑癌功能的蛋白功能低下或丧失所致的疾病，和用于筛选促进或对抗具有抑癌功能的蛋白功能的抗体、多肽或其它配体。例如，抗体可用于激活或抑制具有抑癌功能的人蛋白的功能。用表达的重组具有抑癌功能的人蛋白筛选多肽库可用于寻找有治疗价值的能抑制或刺激具有抑癌功能的人蛋白功能的多肽分子。

本发明也提供了筛选药物以鉴定提高(激动剂)或阻遏(拮抗剂)具有抑癌功能的人蛋白的药剂的方法。激动剂提高具有抑癌功能的人蛋白刺激细胞增殖等生物功能，而拮抗剂阻止和治疗与细胞过度增殖有关的紊乱如各种癌症。例如，能在药物的存在下，将哺乳动物细胞或表达具有抑癌功能的人蛋白的膜制剂与标记的具有抑癌功能的人蛋白一起培养。然后测定药物提高或阻遏此相互作用的能力。

具有抑癌功能的人蛋白的拮抗剂包括筛选出的抗体、化合物、受体缺失物和类似物等。具有抑癌功能的人蛋白的拮抗剂可以与具有抑癌功能的人蛋白结合并消除其功能，或是抑制具有抑癌功能的人蛋白的产生，或是与多肽的活性位点结合使多肽不能发挥生物学功能。具有抑癌功能的人蛋白的拮抗剂可用于治疗用途。

在筛选作为拮抗剂的化合物时，可以将具有抑癌功能的蛋白加入生物分析测定中，通过测定化合物影响具有抑癌功能的蛋白和其受体之间的相互作用来确定化合物是否是拮抗剂。用上述筛选化合物的同样方法，可以筛选出起拮抗剂作用的受体缺失物和类似物。

本发明的多肽可直接用于疾病治疗，例如，各种恶性肿瘤、和细胞异常增殖等。

本发明的多肽，及其片段、衍生物、类似物或它们的细胞可以用来作为抗原以生产抗体。这些抗体可以是多克隆或单克隆抗体。多克隆抗体可以通过将此多肽直接注射动物的方法得到。制备单克隆抗体的技术包括杂交瘤技术，三瘤技术，人B-细胞杂交瘤技术，EBV-杂交瘤技术等。

可以将本发明的多肽和拮抗剂与合适的药物载体组合后使用。这些载体可以是水、葡萄糖、乙醇、盐类、缓冲液、甘油以及它们的组合。组合物包含安全有效量的多肽或拮抗剂以及不影响药物效果的载体和赋形剂。这些组合物可以作为药物用于疾病治疗。

本发明还提供含有一种或多种容器的药盒或试剂盒，容器中装有一种或多种本发明的药用组合物成分。与这些容器一起，可以有由制造、使用或销售药品或生物制品的政府管理机构所给出的指示性提示，该提示反映出生产、使用或销售的政府管理机构许可其在人体上施用。此外，本发明的多肽可以与其它的治疗化合物结合使用。

药物组合物可以以方便的方式给药，如通过局部、静脉内、腹膜内、肌内、皮下、鼻内或皮内的给药途径。具有抑癌功能的蛋白以有效地治疗和/或预防具体的适应症的量来给药。施用于患者的具有抑癌功能的蛋白的量和剂量范围将取决于许多因素，如给药方式、待治疗者的健康条件和诊断医生的判断。

具有抑癌功能的人蛋白的多聚核苷酸也可用于多种治疗目的。基因治疗技术可用于治疗由于具有抑癌功能的蛋白的无表达或异常/无活性的具有抑癌功能的蛋白的表达所致的细胞增殖、发育或代谢异常。重组的基因治疗载体(如病毒载体)可设计成表达变异的具有抑癌功能的蛋白，以抑制内源性的具有抑癌功能的蛋白活性。例如，一种变异的具有抑癌功能的蛋白可以是缩短的、缺失了信号传导功能域的具有抑癌功能的蛋白，虽可与下游的底物结合，但缺乏信号传导活性。因此重组的基因治疗载体可用于治疗具有抑癌功能的蛋白表达或活性异常所致的疾病。来源于病毒的表达载体如逆转录病毒、腺病毒、腺病毒相关病毒、单纯疱疹病毒、细小病毒等可用于将具有抑癌功能的蛋白基因转移至细胞内。构建携带具有抑癌功能的蛋白基因的重组病毒载体的方法可见于已有文献(Sambrook，et al.)。另外重组具有抑癌功能的人蛋白基因可包装到脂质体中转移至细胞内。

抑制具有抑癌功能的人蛋白mRNA的寡聚核苷酸(包括反义RNA和DNA)以及核酶也在本发明的范围之内。核酶是一种能特异性分解特定RNA的酶样RNA分子，其作用机制是核酶分子与互补的靶RNA特异性杂交后进行核酸内切作用。反义的RNA和DNA及核酶可用已有的任何RNA或DNA合成技术获得，如固相磷酸酰胺化学合成法合成寡核苷酸的技术已广泛应用。反义RNA分子可通过编码该RNA的DNA序列在体外或体内转录获得。这种DNA序列已整合到载体的RNA聚合酶启动子的下游。为了增加核酸分子的稳定性，可用多种方法对其进行修饰，如增加两侧的序列长度，核糖核苷之间的连接应用磷酸硫酯键或肽键而非磷酸二酯键。

多聚核苷酸导入组织或细胞内的方法包括：将多聚核苷酸直接注入到体内组织中；或在体外通过载体(如病毒、噬菌体或质粒等)先将多聚核苷酸导入细胞中，再将细胞移植到体内等。

本发明的多肽还可用作肽谱分析，例如，多肽可用物理的、化学或酶进行特异性切割，并进行一维或二维或三维的凝胶电泳分析。

本发明还提供了针对具有抑癌功能的人蛋白抗原决定簇的抗体。这些抗体包括(但不限于)：多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、Fab片段和Fab表达文库产生的片段。

抗具有抑癌功能的人蛋白的抗体可用于免疫组织化学技术中，检测活检标本中的具有抑癌功能的人蛋白。

与具有抑癌功能的人蛋白结合的单克隆抗体也可用放射性同位素标记，注入体内可跟踪其位置和分布。这种放射性标记的抗体可作为一种非创伤性诊断方法用于肿瘤细胞的定位和判断是否有转移。

本发明中的抗体可用于治疗或预防与具有抑癌功能的人蛋白相关的疾病。给予适当剂量的抗体可以刺激或阻断具有抑癌功能的入蛋白的产生或活性。

抗体也可用于设计针对体内某一特殊部位的免疫毒素。如具有抑癌功能的人蛋白高亲和性的单克隆抗体可与细菌或植物毒素(如白喉毒素，蓖麻蛋白，红豆碱等)共价结合。一种通常的方法是用巯基交联剂如SPDP，攻击抗体的氨基，通过二硫键的交换，将毒素结合于抗体上，这种杂交抗体可用于杀灭具有抑癌功能的人蛋白阳性的细胞。

多克隆抗体的生产可用具有抑癌功能的人蛋白或多肽免疫动物，如家兔，小鼠，大鼠等。多种佐剂可用于增强免疫反应，包括但不限于弗氏佐剂等。

具有抑癌功能的人蛋白单克隆抗体可用杂交瘤技术生产(Kohler and Milstein.Nature，1975，256：495-497)。将人恒定区和非人源的可变区结合的嵌合抗体可用已有的技术生产(Morrison et al，PNAS，1985，81：6851)。而已有的生产单链抗体的技术(U.S.PatNo.4946778)也可用于生产抗具有抑癌功能的人蛋白的单链抗体。

能与具有抑癌功能的人蛋白结合的多肽分子可通过筛选由各种可能组合的氨基酸结合于固相物组成的随机多肽库而获得。筛选时，必须对具有抑癌功能的人蛋白分子进行标记。

本发明还涉及定量和定位检测具有抑癌功能的人蛋白水平的诊断试验方法。这些试验是本领域所熟知的，且包括FISH测定和放射免疫测定。试验中所检测的具有抑癌功能的人蛋白水平，可以用作解释具有抑癌功能的人蛋白在各种疾病中的重要性和用于诊断具有抑癌功能的蛋白起作用的疾病。

具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸可用于具有抑癌功能的蛋白相关疾病的诊断和治疗。在诊断方面，具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸可用于检测具有抑癌功能的蛋白的表达与否或在疾病状态下具有抑癌功能的蛋白的异常表达。如具有抑癌功能的蛋白DNA序列可用于对活检标本的杂交以判断具有抑癌功能的蛋白的表达异常。杂交技术包括Southern印迹法，Northern印迹法、原位杂交等。这些技术方法都是公开的成熟技术，相关的试剂盒都可从商业途径得到。本发明的多核苷酸的一部分或全部可作为探针固定在微阵列(Microarray)或DNA芯片(又称为“基因芯片”)上，用于分析组织中基因的差异表达分析和基因诊断。用具有抑癌功能的蛋白特异的引物进行RNA-聚合酶链反应(RT-PCR)体外扩增也可检测具有抑癌功能的蛋白的转录产物。

检测具有抑癌功能的蛋白基因的突变也可用于诊断具有抑癌功能的蛋白相关的疾病。具有抑癌功能的蛋白突变的形式包括与正常野生型具有抑癌功能的蛋白DNA序列相比的点突变、易位、缺失、重组和其它任何异常等。可用已有的技术如Southern印迹法、DNA序列分析、PCR和原位杂交检测突变。另外，突变有可能影响蛋白的表达，因此用Northern印迹法、Western印迹法可间接判断基因有无突变。

本发明的序列对染色体鉴定也是有价值的。该序列会特异性地针对某条人染色体具体位置且并可以与其杂交。目前，需要鉴定染色体上的各基因的具体位点。现在，只有很少的基于实际序列数据(重复多态性)的染色体标记物可用于标记染色体位置。根据本发明，为了将这些序列与疾病相关基因相关联，其重要的第一步就是将这些DNA序列定位于染色体上。

简而言之，根据cDNA制备PCR引物(优选15-35bp)，可以将序列定位于染色体上。然后，将这些引物用于PCR筛选含各条人染色体的体细胞杂合细胞。只有那些含有相应于引物的人基因的杂合细胞会产生扩增的片段。

体细胞杂合细胞的PCR定位法，是将DNA定位到具体染色体的快捷方法。使用本发明的的寡核苷酸引物，通过类似方法，可利用一组来自特定染色体的片段或大量基因组克隆而实现亚定位。可用于染色体定位的其它类似策略包括原位杂交、用标记的流式分选的染色体预筛选和杂交预选，从而构建染色体特异的cDNA库。

将cDNA克隆与中期染色体进行荧光原位杂交(FISH)，可以在一个步骤中精确地进行染色体定位。此技术的综述，参见Verma等，Human Chromosomes：a Manual of BasicTechniques，Pergamon Press，New York(1988)。

一旦序列被定位到准确的染色体位置，此序列在染色体上的物理位置就可以与基因图数据相关联。这些数据可见于例如，V.Mckusick，Mendelian Inheritance in Man(可通过与Johns Hopkins University Welch Medical Library联机获得)。然后可通过连锁分析，确定基因与业已定位到染色体区域上的疾病之间的关系。

接着，需要测定患病和未患病个体间的cDNA或基因组序列差异。如果在一些或所有的患病个体中观察到某突变，而该突变在任何正常个体中未观察到，则该突变可能是疾病的病因。比较患病和未患病个体，通常涉及首先寻找染色体中结构的变化，如从染色体水平可见的或用基于cDNA序列的PCR可检测的缺失或易位。根据目前的物理作图和基因定位技术的分辨能力，被精确定位至与疾病有关的染色体区域的cDNA，可以是50至500个潜在致病基因间之一种(假定1兆碱基作图分辨能力和每20kb对应于一个基因)。

本发明的具有抑癌功能的蛋白核苷酸全长序列或其片段通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。对于PCR扩增法，可根据本发明所公开的有关核苷酸序列，尤其是开放阅读框序列来设计引物，并用市售的cDNA库或按本领域技术人员已知的常规方法所制备的cDNA库作为模板，扩增而得有关序列。当序列较长时，常常需要进行两次或多次PCR扩增，然后再将各次扩增出的片段按正确次序拼接在一起。

一旦获得了有关的序列，就可以用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是将其克隆入载体，再转入细胞，然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。

此外，还可用人工合成的方法来合成有关序列，尤其是片段长度较短时。通常，通过先合成多个小片段，然后再进行连接可获得序列很长的片段。

目前，已经可以完全通过化学合成来编码本发明蛋白(或其片段，或其衍生物)的DNA序列。然后可将该DNA序列引入本领域中的各种DNA分子(如载体)和细胞中。此外，还可通过化学合成将突变引入本发明蛋白序列中。

此外，由于本发明的具有抑癌功能的蛋白具有源自人的天然氨基酸序列，因此，与来源于其他物种的同族蛋白相比，预计在施用于人时将具有更高的活性和/或更低的副作用(例如在人体内的免疫原性更低或没有)。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York：Cold Spring Harbor LaboratoryPress，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例1：cDNA基因的获得及对癌细胞克隆形成的抑制作用

SP24来自于从GIBCO BRL公司购得的肝cDNA文库(cat，No.10422-012)，PP13，PP578，PP905，PP1579是通过用常规方法构建的人胎盘cDNA文库而获得。方法如下：取3、6、10月龄的胎盘组织，用Trizol试剂(GIBCO BRL公司)按厂方说明书提取总RNA，用mRNA提纯试剂盒(Pharmacia公司)提取mRNA。用pCMV-script TMXR cDNA文库构建试剂盒(Stratagene公司)构建上述mRNA的cDNA文库。其中反转录酶改用MMLV-RT-Superscript II(GIBCO BRL)，反转录反应在42℃进行。转化XL 10-Gold感受细胞，获得了1×10⁶cfu/μg cDNA滴度的cDNA文库。第一轮随机挑取cDNA克隆，其后以高丰度cDNA克隆和已证明有抑癌细胞生长功能的cDNA克隆为探针，杂交筛选cDNA文库，挑取弱阳性及阴性克隆。用Qiagen 96孔板质粒抽提试剂盒，按厂家说明书进行质粒DNA的提取。质粒DNA和空载体同时转染肝癌细胞系7721。100ng DNA酒精沉淀干燥后，加6μl H₂O溶解，待转染。每份DNA样品中加0.74μl脂质体及9.3μl无血清培液，混匀后，室温放置10分钟。每管中加150μl无血清培液，均分加入3孔生长于96孔板的7721细胞中，37℃放置2小时，每孔再加50μl无血清培液，37℃24小时。每孔换100μl全培液，37℃24小时，换含G418的全培液100μl，37℃24～48小时，边观察，边换G418浓度不等的培液。约2～3次后，直到镜检细胞有克隆形成，计数。发现以上克隆有抑制细胞克隆形成作用，结果如下表所示。

                   cDNA克隆转染细胞(7721)克隆形成情况

cDNA克隆名称	cDNA克隆数(三个重复)			空载体克隆数(三个重复)
							SP24	1	1	1	5	6	14
PP13	2	1	1	50	26	31
							PP578	3	2	2	20	17	16
PP905	21	14	24	57	54	40
							PP1579	12	10	6	27	25	26

对cDNA克隆采用双脱氧终止法，在ABI377 DNA自动测序仪上测定其一端近500bp的核苷酸序列。分析后，确定为新基因克隆，进行另一端测序。如仍未获得全长cDNA序列，则设计引物，再次进行测序，直到获得全长序列(SEQ ID NO：1、4、7、10、13)。

实施例2：从胎盘cDNA中PCR获得全长基因：

取3、6、10月龄的胎盘组织，用Trizol试剂(GIBCO BRL公司)按厂方说明书提取总RNA，用mRNA提纯试剂盒(pharmacia公司)提取mRNA。用MMLV-RT-SuperscriptII(GIBCO BRL)反转录酶在42℃进行反转录反应，获得胎盘cDNA。利用各个基因的转异引物(如下表所示)，按90℃3分钟1个循环；94℃30秒，60℃30秒，72℃1分钟，共35个循环；72℃10分钟，1个循环进行PCR扩增，获得含有完整开放阅读框序列的各蛋白基因的扩增产物。扩增产物经测序验证，与实施例1测得的序列相符，随后用常规技术将扩增产物转入宿主细胞，获得重组蛋白。

                         基因特异引物

克隆名称	特异引物1(5′→3′)	特异引物2(5′→3′)
			SP24	CCATCCTAATACGACTCACTATAGGGC	CGAGGTTGCCCTTGCAACACAAGAT
PP13	AACTCCCTCCCGCCAGCCCTTTA	TTTACAGGCAGTGCGTGGCTGCT
			PP578	CAACATGAAGAAGCTGGCGTCGG	TGTGGAGAGGTGAAAACTGCGGC
PP905	AAGGCAGAACTCCCAAGGTGCCA	GTTCAAGCGCAATTTTGCCACCA
			PP1579	TGGGACCCAGAGATACATGGGCA	CACAGGCAGTTCACCAACACCTGG

实施例3：cDNA克隆序列分析

1.SP24蛋白

A：核苷酸序列：SP24(SEQ ID NO：1)长度：1738bp

   1  TTCTTGGGGT CTTGGCTGTG CACGCCCCAA TAAGCCTGGT GTCTATGTTC

  51  GTGTTTCAAG GTTTGTTACT TGGATTGAGG GAGTGATGAG AAATAATTAA

 101  TTGGACGGGA GACAGAGTGA CGCACTGACT CACCTAGAGG CTGGGACGTG

 151  GGTAGGGATT TAGCATGCTG GAAATAACTG GCAGTAATCA AACGAAGACA

 201  CTGTCCCCAG CTACCAGCTA CGCCAAACCT CGGCATTTTT TGTGTTATTT

 251  TCTGACTGCT GGATTCTGTA GTAAGGTGAC ATAGCTATGA CATTTGTTAA

 301  AAATAAACTC TGTACTTAAC TTTGATTTGA ATAAAAAAAA GGCCAAACAA

 351  GTTTTAGAAC CTCTACTGGC TGATGCCAAC ATCATCAGAG ATGAACTGTT

 401  CTTACCAGAA ACTTCTCTGC TCCTGACACC CCACCTCTCC CCAGAAGAGA

 451  AGAAGGAGAG TGGCCACGTT GATTCAGCCA AGCACCTCCA GGAGGTCCCC

 501  TCTGGATGTC CCATGAGGCT GCCCCTCAGC CACAGCCCAG AGCACGTGGA

 551  GATGGCTTTG CTCAGCAACA TCCTAGCGGC CTATTCCTTT GTCTCAGAAA

 601  ATCCTGAGCG AGCAGCTCTG TGCTTTGTTT CTGGCGTGTG CATCGGGCTG

 651  GTGCTGACCC TGGCTGCTCT GGTGATAAGG ATCTCTTGCC ACACAGACTG

 701  CAGGCGGCGT CCCGGGAAGA AGTTCCTGCA GGACAGAGAG AGCAGCAGCG

 751  ACAGCAGCGA CAGCGAGGAT GGCAGTGAGG ACACCGTGTC CGATCTCTCC

 801  GTGCGGAGAC ACCGCCGCTT CGAGAGGACT TTGAACAAGA ATGTGTTCAC

 851  CTCTGCGGAG GAGCTGGAGC GCGCCCAGCG GCTGGAGGAG CGCGAGCGCA

 901  TCATCAGGGA GATCTGGATG AATGGCCAGC CTGAGGTGCC CGGGACCAGG

 951  AGCCTGAATC GCTACTATTA GGGAGCAGCA GGACCCCGGA AACCACTGGA

1001  GGCCGCCTGG AAAGAGAGCG TCTGCAGGGA CAGTGGGCAC AAGGAACTGA

1051  ACCCAGCTCT GCTAATATTG TGATTTCAGA GAAAAAGCAG GACATGCCCC

1101  TTTTCTAGCC AGGAGGATTG CTCCTTTTTG GCCAAATGTA TGGAGAAGTA

1151  GAAAAATCAA AGCAGTTCAT CACCCTTTCC AGGTCTCGGA ATGGTGCTGA

1201  AAAATCCTCT CCAACACTGT GGATGGAGAT CGGAGAAACG CGACTGTGGT

1251  TTCTCTTGAT TTCTGAGGAT CTCAGAAGTT TCAGCAGACT TCCTTGCTCT

1301  GTGTTATTCC TTTGCAAAAG GAAAGATCAT TATAGCATGA GGGCTGGGAA

1351  TAGCAGGGTG AACTTAACCC AATAAATGCA ATTTCCTAAA TGACTTCATG

1401  CTATGGAGGT GATTCTGATT CAAATAGCAT GATCCATGCT TATTATTTAA

1451  GGCTGATTTT TAAAATCTTG TGTTGCAAGG GCAACCTCGT CCATTTTAAC

1501  TGGCACCTCA GGGATTAAAA TCCTACTTTT TAGTGTAGTT CCCACCTCAT

1551  TCATGAAAAT GAATAGAACT ATTGTATTAT GGGAGATGTG TCAGTGAACT

1601  AGAAAATGTC AATAACCTCA AAGGATGAAG GGTTTTTATT TTAAATAGTT

1651  TATAAAATAT ATATTGACAT GCATATTTGA AAATGCTGCA TAAAAATAAA

1701  AGTGGTGTGT TTTCAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAA

B.氨基酸序列：SP24(SEQ ID NO：2)长度：152个氨基酸

  1  MRLPLSHSPE HVEMALLSNI LAAYSFVSEN PERAALCFVS GVCIGLVLTL

 51  AALVIRISCH TDCRRRPGKK FLQDRESSSD SSDSEDGSED TVSDLSVRRH

101  RRFERTLNKN VFTSAEELER AQRLEERERI IREIWMNGQP EVPGTRSLNR

151  YY

C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO：3)

克隆号：SP24

起始编码子：513 ATG  终止编码子：971 TAG

蛋白质分子量：17408.71

  1   TT CTT GGG GTC TTG GCT GTG CAC GCC CCA ATA AGC CTG GTG TCT ATG     47

 48  TTC GTG TTT CAA GGT TTG TTA CTT GGA TTG AGG GAG TGA TGA GAA ATA     95

 96  ATT AAT TGG ACG GGA GAC AGA GTG ACG CAC TGA CTC ACC TAG AGG CTG    143

144  GGA CGT GGG TAG GGA TTT AGC ATG CTG GAA ATA ACT GGC AGT AAT CAA    191

192  ACG AAG ACA CTG TCC CCA GCT ACC AGC TAC GCC AAA CCT CGG CAT TTT    239

240  TTG TGT TAT TTT CTG ACT GCT GGA TTC TGT AGT AAG GTG ACA TAG CTA    287

288  TGA CAT TTG TTA AAA ATA AAC TCT GTA CTT AAC TTT GAT TTG AAT AAA    335

336  AAA AAG GCC AAA CAA GTT TTA GAA CCT CTA CTG GCT GAT GCC AAC ATC    383

384  ATC AGA GAT GAA CTG TTC TTA CCA GAA ACT TCT CTG CTC CTG ACA CCC    431

432  CAC CTC TCC CCA GAA GAG AAG AAG GAG AGT GGC CAC GTT GAT TCA GCC    479

480  AAG CAC CTC CAG GAG GTC CCC TCT GGA TGT CCC ATG AGG CTG CCC CTC    527

  1                                              Met Arg Leu Pro Leu      5

528  AGC CAC AGC CCA GAG CAC GTG GAG ATG GCT TTG CTC AGC AAC ATC CTA    575

  6  Ser His Ser Pro Glu His Val Glu Met Ala Leu Leu Ser Asn Ile Leu     21

576  GCG GCC TAT TCC TTT GTC TCA GAA AAT CCT GAG CGA GCA GCT CTG TGC    623

 22  Ala Ala Tyr Ser Phe Val Ser Glu Asn Pro Glu Arg Ala Ala Leu Cys     37

624  TTT GTT TCT GGC GTG TGC ATC GGG CTG GTG CTG ACC CTG GCT GCT CTG    671

 38  Phe Val Ser Gly Val Cys Ile Gly Leu Val Leu Thr Leu Ala Ala Leu     53

672  GTG ATA AGG ATC TCT TGC CAC ACA GAC TGC AGG CGG CGT CCC GGG AAG    719

 54  Val Ile Arg Ile Ser Cys His Thr Asp Cys Arg Arg Arg Pro Gly Lys     69

720  AAG TTC CTG CAG GAC AGA GAG AGC AGC AGC GAC AGC AGC GAC AGC GAG    767

 70  Lys Phe Leu Gln Asp Arg Glu Ser Ser Ser Asp Ser Ser Asp Ser Glu     85

768  GAT GGC AGT GAG GAC ACC GTG TCC GAT CTC TCC GTG CGG AGA CAC CGC    815

 86  Asp Gly Ser Glu Asp Thr Val Ser Asp Leu Ser Val Arg Arg His Arg    101

816  CGC TTC GAG AGG ACT TTG AAC AAG AAT GTG TTC ACC TCT GCG GAG GAG    863

102  Arg Phe Glu Arg Thr Leu Asn Lys Asn Val Phe Thr Ser Ala Glu Glu    117

 864  CTG GAG CGC GCC CAG CGG CTG GAG GAG CGC GAG CGC ATC ATC AGG GAG     911

 118  Leu Glu Arg Ala Gln Arg Leu Glu Glu Arg Glu Arg Ile Ile Arg Glu     133

 912  ATC TGG ATG AAT GGC CAG CCT GAG GTG CCC GGG ACC AGG AGC CTG AAT     959

 134  Ile Trp Met Asn Gly Gln Pro Glu Val Pro Gly Thr Arg Ser Leu Asn     149

 960  CGC TAC TAT TAG GGA GCA GCA GGA CCC CGG AAA CCA CTG GAG GCC GCC    1007

 150  Arg Tyr Tyr ***                                                     153

1008  TGG AAA GAG AGC GTC TGC AGG GAC AGT GGG CAC AAG GAA CTG AAC CCA    1055

1056  GCT CTG CTA ATA TTG TGA TTT CAG AGA AAA AGC AGG ACA TGC CCC TTT    1103

1104  TCT AGC CAG GAG GAT TGC TCC TTT TTG GCC AAA TGT ATG GAG AAG TAG    1151

1152  AAA AAT CAA AGC AGT TCA TCA CCC TTT CCA GGT CTC GGA ATG GTG CTG    1199

1200  AAA AAT CCT CTC CAA CAC TGT GGA TGG AGA TCG GAG AAA CGC GAC TGT    1247

1248  GGT TTC TCT TGA TTT CTG AGG ATC TCA GAA GTT TCA GCA GAC TTC CTT    1295

1296  GCT CTG TGT TAT TCC TTT GCA AAA GGA AAG ATC ATT ATA GCA TGA GGG    1343

1344  CTG GGA ATA GCA GGG TGA ACT TAA CCC AAT AAA TGC AAT TTC CTA AAT    1391

1392  GAC TTC ATG CTA TGG AGG TGA TTC TGA TTC AAA TAG CAT GAT CCA TGC    1439

1440  TTA TTA TTT AAG GCT GAT TTT TAA AAT CTT GTG TTG CAA GGG CAA CCT    1487

1488  CGT CCA TTT TAA CTG GCA CCT CAG GGA TTA AAA TCC TAC TTT TTA GTG    1535

1536  TAG TTC CCA CCT CAT TCA TGA AAA TGA ATA GAA CTA TTG TAT TAT GGG    1583

1584  AGA TGT GTC AGT GAA CTA GAA AAT GTC AAT AAC CTC AAA GGA TGA AGG    1631

1632  GTT TTT ATT TTA AAT AGT TTA TAA AAT ATA TAT TGA CAT GCA TAT TTG    1679

1680  AAA ATG CTG CAT AAA AAT AAA AGT GGT GTG TTT TCA AAA AAA AAA AAA    1727

1728  AAA AAA AAA AA                                                     1738

2.PP13蛋白

A：核苷酸序列(SEQ ID NO：4)长度：1784bp

  1  TGGTGGCGCA TGTCTGTAAT CCCAGCTACT CGGGAAGCTG AGGCAGGAGA

 51  ATCGCTTGAA CCCAGGAAGC GGAGGTTGCA GTGAGCCGAG ATCGCGCCAC

101  TGCACTCCAA CCTGGGCAAC AATACAAGAC TCCATCTGAA AAAAAAAAGA

151  TCACACAGGA AAACAGAAGT TCGATTTTAC GTCGTACACT GCTGTAATTT

201  CAGCACATGT GGACTCGTGT AACCAACACC ATAACCTTCC ATCACCCCTG

251  AAACTCCCTC CCGCCAGCCC TTTAGGGTTG CCCCTCCCCC CGAACCCCAC

301  CAGCCCCTGG TGACCACTGA TCTGTCCTCC AACCCATAGT GTTTTTCCGG

351  GAATGTCACA AAAACAGAAG CCGACCATGG GTCACCTTTC TGGCGCCTTT

401  CTCCCCGCAC AAAGTCTTTG TCCTTGTGAA GTTGTRACGT GCCAAACGCT

451  TGTCCCTTTT TCCTGCTGGG TAATACTCCC GGTGCCGCCC TTGCTGTTCG

501  TCGATGCACA TCTGGCTGCT TTTCGCTGGC TGCGAGCGGA GCTGCTAGGG

551  ACATGGCCAC GGGGCTGTGA GAGCGGAGTT TCCTCTCTCC GGTGACCCTG

601  AGCTGCGCCT TTCTCAGCCG CCTCCCGAGG CCCCAGGCGC TCTGCGGGGG

651  CTCTGGCGGG GTTGGTGGGG GTGGGCGTTC TCGTTGTTTC AGCGGCGCTG

701  CCCCAGGCCC TGCGGGAGGG ACCGTGGGAC CCGAGACATC CCCGCCTGGC

751  CTCCGCTCCC CACCCGGGAG TGGGGCTCGC ACCCCCCCAA CCTCGGGTAA

801  AGACGCTTCT GGAAGGAAGG GCGCCCCGCG GACCCCGCCC AACCCTGCCC

851  AGCCCAGCCC AGCCCAGCCC AGCCCTTCCC GGGGCGGCGG CGCGGGAAGC

901  AGGCGGCGGC GCACGGGCGT CGTCATGGCA ACCCCACCGG CTCCGGGGGC

951  CGGGACCGCT GCCCCCTCCG CCCCTCGACC CCGCCCCCCG CCCTTCCTGG

1001  CTGCGGCTGG ACCCGGCTGC GCGGGGCGCG AGGCTGCCTT TCCCGGGATC

1051  ACCAGGGACC ACCCGGCGCG CTCCCCGGGA ATCCGCACCC CTGGCCCCAG

1101  CGCTCCGGAG CGACCCGGGT CAGCCCCTGG CTGCCTGCAA TGGGCCCCCG

1151  GGCGAACCCC GGGCGGACCC AGGAGTGAGC ACCCGGTGCG CGGCAACGAT

1201  GATCCCGCAA GGGAAGCTCA CGGGAGGCAG GAGCTGTGGC AGCCGCCCCA

1251  GGATGGGGCG CGGGGAGCGC GCTGAGCTGT CCTTTCCCGC AGCGGCCCCG

1301  CGGTTGAAGC GTGGGCTTGG GTTTTGGTTT TTCTTCTGTG GCAACAGTTC

1351  TGTTGAGATA TTACTCGCCT GCCATACAAC TCACCCATTT TAAAAGTACA

1401  CCTCAGGGGT CCTGCGTGTA TTGACAAACC CGCCGCCGTC ACCACAGCCA

1451  ATTTCAGAAC ATTTTCATCT CTTCAAAAGA AACCCTGTAC CCTTCAGCTG

1501  TCACCCTCCT GGTCCCCATC CGGTCCTCGT CCCGCCCTCA GCAGCCACGC

1551  ACTGCCTGTA AAGTCCCCTG TCCTGCCCTG TAGGTGGAAT CTATACCTTG

1601  GGGTCTGTTC TGACGTTCAC CTAACAGCCT TTCCAGGCTC AGCTGTGCTA

1651  TTGTATGGAC CAGGGGGTTG TTTTGTTTTT GTTGTTTGTT GATTGTGTGT

1701  GTGTGTGTGT GTGTGTGTGT GAGCCTGGCG TGGTTGCGGG CGCCTATAAT

1751  CCCAGCTGCT CAGGAGGCTG AGGCAGGAGG ATCA

B：氨基酸序列(SEQ ID NO：5)长度：116个氨基酸

 1  MATPPAPGAG TAAPSAPRPR PPPFLAAAGP GCAGREAAFP GITRDHPARS PGIRTPGPSA

61  PERPGSAPGC LQWAPGRTPG GPRSEHPVRG NDDPAREAHG RQELWQPPQD GARGAR

C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO：6)

克隆号：PP13

起始编码子：925 ATG       终止编码子：1273 TGA

蛋白质分子量：11777

   1  TGG TGG CGC ATG TCT GTA ATC CCA GCT ACT CGG GAA GCT GAG GCA GGA      48

  49  GAA TCG CTT GAA CCC AGG AAG CGG AGG TTG CAG TGA GCC GAG ATC GCG      96

  97  CCA CTG CAC TCC AAC CTG GGC AAC AAT ACA AGA CTC CAT CTG AAA AAA     144

 145  AAA AGA TCA CAC AGG AAA ACA GAA GTT CGA TTT TAC GTC GTA CAC TGC     192

 193  TGT AAT TTC AGC ACA TGT GGA CTC GTG TAA CCA ACA CCA TAA CCT TCC     240

 241  ATC ACC CCT GAA ACT CCC TCC CGC CAG CCC TTT AGG GTT GCC CCT CCC     288

 289  CCC GAA CCC CAC CAG CCC CTG GTG ACC ACT GAT CTG TCC TCC AAC CCA     336

 337  TAG TGT TTT TCC GGG AAT GTC ACA AAA ACA GAA GCC GAC CAT GGG TCA     384

 385  CCT TTC TGG CGC CTT TCT CCC CGC ACA AAG TCT TTG TCC TTG TGA AGT     432

 433  TGT RAC GTG CCA AAC GCT TGT CCC TTT TTC CTG CTG GGT AAT ACT CCC     480

 481  GGT GCC GCC CTT GCT GTT CGT CGA TGC ACA TCT GGC TGC TTT TCG CTG     528

 529  GCT GCG AGC GGA GCT GCT AGG GAC ATG GCC ACG GGG CTG TGA GAG CGG     576

 577  AGT TTC CTC TCT CCG GTG ACC CTG AGC TGC GCC TTT CTC AGC CGC CTC     624

 625  CCG AGG CCC CAG GCG CTC TGC GGG GGC TCT GGC GGG GTT GGT GGG GGT     672

 673  GGG CGT TCT CGT TGT TTC AGC GGC GCT GCC CCA GGC CCT GCG GGA GGG     720

 721  ACC GTG GGA CCC GAG ACA TCC CCG CCT GGC CTC CGC TCC CCA CCC GGG     768

 769  AGT GGG GCT CGC ACC CCC CCA ACC TCG GGT AAA GAC GCT TCT GGA AGG     816

 817  AAG GGC GCC CCG CGG ACC CCG CCC AAC CCT GCC CAG CCC AGC CCA GCC     864

 865  CAG CCC AGC CCT TCC CGG GGC GGC GGC GCG GGA AGC AGG CGG CGG CGC     912

 913  ACG GGC GTC GTC ATG GCA ACC CCA CCG GCT CCG GGG GCC GGG ACC GCT     960

   1                  Met Ala Thr Pro Pro Ala Pro Gly Ala Gly Thr Ala      12

 961  GCC CCC TCC GCC CCT CGA CCC CGC CCC CCG CCC TTC CTG GCT GCG GCT    1008

  13  Ala Pro Ser Ala Pro Arg Pro Arg Pro Pro Pro Phe Leu Ala Ala Ala      28

1009  GGA CCC GGC TGC GCG GGG CGC GAG GCT GCC TTT CCC GGG ATC ACC AGG    1056

  29  Gly Pro Gly Cys Ala Gly Arg Glu Ala Ala Phe Pro Gly Ile Thr Arg      44

1057  GAC CAC CCG GCG CGC TCC CCG GGA ATC CGC ACC CCT GGC CCC AGC GCT    1104

  45  Asp His Pro Ala Arg Ser Pro Gly Ile Arg Thr Pro Gly Pro Ser Ala      60

1105  CCG GAG CGA CCC GGG TCA GCC CCT GGC TGC CTG CAA TGG GCC CCC GGG    1152

  61  Pro Glu Arg Pro Gly Ser Ala Pro Gly Cys Leu Gln Trp Ala Pro Gly      76

1153  CGA ACC CCG GGC GGA CCC AGG AGT GAG CAC CCG GTG CGC GGC AAC GAT    1200

  77  Arg Thr Pro Gly Gly Pro Arg Ser Glu His Pro Val Arg Gly Asn Asp      92

1201  GAT CCC GCA AGG GAA GCT CAC GGG AGG CAG GAG CTG TGG CAG CCG CCC    1248

  93  Asp Pro Ala Arg Glu Ala His Gly Arg Gln Glu Leu Trp Gln Pro Pro     108

1249  CAG GAT GGG GCG CGG GGA GCG CGC TGA GCT GTC CTT TCC CGC AGC GGC    1296

 109  Gln Asp Gly Ala Arg Gly Ala Arg ***                                 117

1297  CCC GCG GTT GAA GCG TGG GCT TGG GTT TTG GTT TTT CTT CTG TGG CAA    1344

1345  CAG TTC TGT TGA GAT ATT ACT CGC CTG CCA TAC AAC TCA CCC ATT TTA    1392

1393  AAA GTA CAC CTC AGG GGT CCT GCG TGT ATT GAC AAA CCC GCC GCC GTC    1440

1441  ACC ACA GCC AAT TTC AGA ACA TTT TCA TCT CTT CAA AAG AAA CCC TGT    1488

1489  ACC CTT CAG CTG TCA CCC TCC TGG TCC CCA TCC GGT CCT CGT CCC GCC    1536

1537  CTC AGC AGC CAC GCA CTG CCT GTA AAG TCC CCT GTC CTG CCC TGT AGG    1584

1585  TGG AAT CTA TAC CTT GGG GTC TGT TCT GAC GTT CAC CTA ACA GCC TTT    1632

1633  CCA GGC TCA GCT GTG CTA TTG TAT GGA CCA GGG GGT TGT TTT GTT TTT    1680

1681  GTT GTT TGT TGA TTG TGT GTG TGT GTG TGT GTG TGT GTG TGA GCC TGG    1728

1729  CGT GGT TGC GGG CGC CTA TAA TCC CAG CTG CTC AGG AGG CTG AGG CAG    1776

1777  GAG GAT CA                                                         1784

D.Blastp结果

Query＝PP13(116个氨基酸)

＞SP_IN：Q19218 Q19218 caenorhabditis elegans.f08g5.4 protein.11/1999

              长度＝299个氨基酸

分值＝36.7bits(83)，预计值＝0.054

相同性＝33/74(44％)，相似性＝36/74(48％)，缺口＝7/74(9％)

Query：44  RDHPARSPGIRTPGPSAPERPGSAPGCLQWAPGRTPGGPRSEHPVRGNDDP-AREAHGRQ 102

           +D PA  PG   PGP+ PE    APG    APG  PG P  +   RG   P A  A G Q

Sbjct：164 QDGPAGQPG--APGPAGPEGDAGAPGD-AGAPG-APGAP-GQDGQRGTGLPGAPGAPGPQ 218

Query：103-ELWQPPQDGARGA 115

               P QDGA GA

Sbjct：219 GPSGNPGQDGAAGA 232

＞SP_IN：Q20087 Q20087 caenorhabditis elegans.similar to cuticular collagen.5/1999

              长度＝299个氨基酸

分值＝36.7bits(83)，预计值＝0.054

相同性＝30/84(35％)，相似性＝36/84(42％)，缺口＝13/84(15％)

Query：36  EAAFPGITRDHPARSPGIRTPGPSAPERPGSAPGCLQWAPGRTPGGP----RSEHPVRGN 91

           E   PG+    P +      PGP  P  P  APG    APG TPG P    +SE  + G

Sbjct：167 EPGSPGL----PGQDAAPGEPGPKGPPGPPGAPG----APG-TPGEPGVPAQSEPLIPGE 217

Query：92  DDPAREAHGRQELWQPPQDGARGA 115

             P  EA  +     P Q GA G+

Sbjct：218 PGPPGEAGPQGPPGSPGQPGADGS 241

3.PP578蛋白

A：核苷酸序列(SEQ ID NO：7)长度：1458bp

   1  CGCGGAGGGC TGGTGCCCCG CAGCAGGTGG GCGGGGTGCG GTTGGCGGCG

  51  GCGGCTGGGC CGGGGGCTGC CGGCTGCGCT CGGGCCGTGC GCGGCGGCCG

 101  TGCGGGCACG CCATGGACTT CAACATGAAG AAGCTGGCGT CGGACGCGGG

 151  CATCTTCTTC ACCCGGGCGG TGCAGTTCAC GGAGGAGAAA TTTGGCCAGG

 201  CTGAGAAGAC TGAGCTTGAT GCCCACTTTG AAAACCTTCT GGCCCGGGCA

 251  GACAGCACCA AGAACTGGAC AGAGAAGATC TTGAGGCAGA CAGAGGTGCT

 301  GCTGCAGCCC AACCCCAGTG CCCGAGTGGA GGAGTTCCTG TATGAGAAGC

 351  TGGACAGGAA GGTCCCCTCA AGGGTCACCA ACGGGGAGCT GCTGGCTCAG

 401  TACATGGCAG ACGCGGCCAG TGAGCTGGGG CCGACCACCC CCTATGGGAA

 451  GACACTGATC AAGGTGGCAG AAGCTTGAAA AGCAACTGGG AGCCCGCGGA

 501  GAGGGATTTT ATCCACACGG CCTCCATCAG CTTCCTCACA CCCTTGCGCA

 551  ACTTCCTGGA GGGGGACTGG AAGACCATCT CGAAGGAGAG GCGGCTCCTC

 601  CAAAACCGGC GTCTGGACTT GGATGCCTGC AAAGCGAGGC TGAAGAAGGC

 651  CAAGGCTGCA GAAGCCAAAG CCACGACGGT GCCTGACTTT CAGGAGACTA

 701  GACCTCGTAA TTACATTCTC TCGGCCAGCG CCTCCGCGCT CTGGAATGAT

 751  GAAGTGGACA AGGCCGAGCA GGAGCTCCGC GTGGCCCAGA CAGAGTTTGA

 801  CCGGCAAGCA GAAGTGACCC GTCTCTTGCT GGAGGGAATC AGTAGCACTC

 851  ACGTGAACCA CCTGCGCTGC CTCCACGAGT TCGTCAAGTC TCAGACAACC

 901  TACTACGCAC ATGCTACCGC CACATGCTGG ACTTGCAGAA GCAGCTGGGC

 951  AGATTTCCCG GCACCTTCGT GGGCACCACA GAGCCCGCCT CCCCACCCCT

1001  GAGCAGCACC TCACCCACCA CTGCTGCGGC CACTATGCCT GTGGTGCCCT

1051  CTGTGGCCAG CCTGGCCCCT CCGGGGGAGG CCTCGCTCTG CCTGGAAGAG

1101  GTGGCCCCCC CTGCCAGTGG GACCCGCAAA GCTCGGGTGC TCTATGACTA

1151  CGAGGCAGCC GACAGCAGTG AGCTGGCCCT GCTGGCTGAT GAGCTCATCA

1201  CTGTTTACAG CCTGCCTGGC ATGGACCCTG ACTGGCTCAT TGGCGAGAGA

1251  GGCAACAAGA AGGGCAAGGT CCCTGTCACC TACTTGGAAC TGCTCAGCTA

1301  GCTCAAGCCA AGTCCAGCGG CCGCAGTTTT CACCTCTCCA CACTCACTTT

1351  TTATCTGGTG TTTTTACTTC TGCCTGCGTT TGCTCTCTAG CCAATAAACC

1401  GTCCTTGTGT GCGAGTCCAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA

1451  AAAAAAAA

B：氨基酸序列(SEQ ID NO：8)长度：125个氨基酸

  1  MLDLQKQLGR FPGTFVGTTE PASPPLSSTS PTTAAATMPV VPSVASLAPP GEASLCLEEV

 61  APPASGTRKA RVLYDYEAAD SSELALLADE LITVYSLPGM DPDWLIGERG NKKGKVPVTY

121  LELLS

C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO：9)

克隆号：PP578

起始编码子：924 ATG    终止编码子：1301 TAG

蛋白质分子量：13102

   1   CG CGG AGG GCT GGT GCC CCG CAG CAG GTG GGC GGG GTG CGG TTG GCG      47

  48  GCG GCG GCT GGG CCG GGG GCT GCC GGC TGC GCT CGG GCC GTG CGC GGC      95

  96  GGC CGT GCG GGC ACG CCA TGG ACT TCA ACA TGA AGA AGC TGG CGT CGG     143

 144  ACG CGG GCA TCT TCT TCA CCC GGG CGG TGC AGT TCA CGG AGG AGA AAT     191

 192  TTG GCC AGG CTG AGA AGA CTG AGC TTG ATG CCC ACT TTG AAA ACC TTC     239

 240  TGG CCC GGG CAG ACA GCA CCA AGA ACT GGA CAG AGA AGA TCT TGA GGC     287

 288  AGA CAG AGG TGC TGC TGC AGC CCA ACC CCA GTG CCC GAG TGG AGG AGT     335

 336  TCC TGT ATG AGA AGC TGG ACA GGA AGG TCC CCT CAA GGG TCA CCA ACG     383

 384  GGG AGC TGC TGG CTC AGT ACA TGG CAG ACG CGG CCA GTG AGC TGG GGC     431

 432  CGA CCA CCC CCT ATG GGA AGA CAC TGA TCA AGG TGG CAG AAG CTT GAA     479

 480  AAG CAA CTG GGA GCC CGC GGA GAG GGA TTT TAT CCA CAC GGC CTC CAT     527

 528  CAG CTT CCT CAC ACC CTT GCG CAA CTT CCT GGA GGG GGA CTG GAA GAC     575

 576  CAT CTC GAA GGA GAG GCG GCT CCT CCA AAA CCG GCG TCT GGA CTT GGA     623

 624  TGC CTG CAA AGC GAG GCT GAA GAA GGC CAA GGC TGC AGA AGC CAA AGC     671

 672  CAC GAC GGT GCC TGA CTT TCA GGA GAC TAG ACC TCG TAA TTA CAT TCT     719

 720  CTC GGC CAG CGC CTC CGC GCT CTG GAA TGA TGA AGT GGA CAA GGC CGA     767

 768  GCA GGA GCT CCG CGT GGC CCA GAC AGA GTT TGA CCG GCA AGC AGA AGT     815

 816  GAC CCG TCT CTT GCT GGA GGG AAT CAG TAG CAC TCA CGT GAA CCA CCT     863

 864  GCG CTG CCT CCA CGA GTT CGT CAA GTC TCA GAC AAC CTA CTA CGC ACA     911

 912  TGC TAC CGC CAC ATG CTG GAC TTG CAG AAG CAG CTG GGC AGA TTT CCC     959

   1                  Met Leu Asp Leu Gln Lys Gln Leu Gly Arg Phe Pro      12

 960  GGC ACC TTC GTG GGC ACC ACA GAG CCC GCC TCC CCA CCC CTG AGC AGC    1007

  13  Gly Thr Phe Val Gly Thr Thr Glu Pro Ala Ser Pro Pro Leu Ser Ser      28

1008  ACC TCA CCC ACC ACT GCT GCG GCC ACT ATG CCT GTG GTG CCC TCT GTG    1055

  29  Thr Ser Pro Thr Thr Ala Ala Ala Thr Met Pro Val Val Pro Ser Val      44

1056  GCC AGC CTG GCC CCT CCG GGG GAG GCC TCG CTC TGC CTG GAA GAG GTG    1103

  45  Ala Ser Leu Ala Pro Pro Gly Glu Ala Ser Leu Cys Leu Glu Glu Val      60

1104  GCC CCC CCT GCC AGT GGG ACC CGC AAA GCT CGG GTG CTC TAT GAC TAC    1151

  61  Ala Pro Pro Ala Ser Gly Thr Arg Lys Ala Arg Val Leu Tyr Asp Tyr      76

1152  GAG GCA GCC GAC AGC AGT GAG CTG GCC CTG CTG GCT GAT GAG CTC ATC    1199

  77  Glu Ala Ala Asp Ser Ser Glu Leu Ala Leu Leu Ala Asp Glu Leu Ile      92

1200  ACT GTT TAC AGC CTG CCT GGC ATG GAC CCT GAC TGG CTC ATT GGC GAG    1247

  93  Thr Val Tyr Ser Leu Pro Gly Met Asp Pro Asp Trp Leu Ile Gly Glu     108

1248  AGA GGC AAC AAG AAG GGC AAG GTC CCT GTC ACC TAC TTG GAA CTG CTC    1295

 109  Arg Gly Asn Lys Lys Gly Lys Val Pro Val Thr Tyr Leu Glu Leu Leu     124

1296  AGC TAG CTC AAG CCA AGT CCA GCG GCC GCA GTT TTC ACC TCT CCA CAC    1343

 125  Ser ***                                                             126

1344  TCA CTT TTT ATC TGG TGT TTT TAC TTC TGC CTG CGT TTG CTC TCT AGC    1391

1392  CAA TAA ACC GTC CTT GTG TGC GAG TCC AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA    1439

1440  AAA AAA AAA AAA AAA AAA A                                          1458

4.PP905蛋白

A：核苷酸序列(SEQ ID NO：10)长度：2356bp

   1  GCACTGCTTA GTGGACCTCA TTTAATCTTC CCAATAATCC AGTGAAGTGG

  51  GTGTTACTAT CCCATTGACA GGAAAGAAAT CTGAGCTGCA GAGATAAGGC

 101  AGAACTCCCA AGGTGCCACC AAGGCTCAGA CACACAGATT CTCAGAGGAA

 151  GTGTGGACTC ACAGGTGGGC AATGCCTAGC AGAGGCAAAG ATATAGAGGT

 201  AAGGGAGTTC CTTACTTACT ATATCTTACA AAGATATAGA GGTAAGGGAG

 251  TTCCTTACTT ACTATATCTT ACAAAGATAT AGAGGTAAGG GAGTTCCTCT

 301  GAATCTGGGT GGCCAGATTC AGCTTCCCAC CCAACCCTGG GTCCCCAGGA

 351  GGTGGTGTCA AGAGAGGCCA TGGCCTGGGA TGCGGGCCCT TCTTCCTCCC

 401  AGAACACTGG CCTGAATCAG CCAGCTCTTG GCACACACAG CCAGGTCCAC

 451  AGGCACAACT GTTCCTTGGG GCCCCTGAGG GCAGGGGGTG TGCTGGGGCT

 501  GTGGCTTGTA ATGTCTGGAG TGAGTGCAGG CTCAGATCAG GGCGAGGCTG

 551  CTTGTCCAGA GAGGCAGAAA ATTCTCCAAC AGAAGACCCC CAAGGCGGAG

 601  GGCCCTGGGG CTGGACTCCT GGAGGTTGTT CTGAGCTTAC CCTGTGGACG

 651  GATTGGAGGG TGGCCCTCCT TCCCCACAAG GATCAAGAGG GGGTGGGGGA

 701  TGGTGGGAGG GCAATCTGGC CAGGCGAACC TGCGGGGGAG GCTCCCGCCC

 751  TCCCCAGTCC CACCATCTCA GCCCCGCAGC CTCTTTCTCC CTGGAGACAG

 801  CCAGGTGCGG CCCAGGATCC CGGGAAAGGC AGGGGAGGGG GTGGCGTCTT

 851  CGCTCCTCAG GCGCTGGCCC GGCCCAGAGG GGACAGGAAG CCAGGACACC

 901  GGGGATTGTC TCTCGCAACC GCAGCCCAGC CCCAGTCCGG GAGGAAGTTC

 951  TGCCCGGCGC TCTCCGCCGG TGCCTCCCTG GTTATATTGT TGAACAGGAA

1001  ACCCGGCAGC GCGGGAGCCG CACAGTCGAG GAGGGAGCGC GGGACGCCGA

1051  GCCCACGCGC GCCTGCCGGG GCAAGTGGAG GCGAAGCCGG CGAGCGGACG

1101  CCCCGAGGGT CGGGGAAGGA ACCGAGGTCC GGTCCCCTTC TTATCCAGCC

1151  CGAGACATCG AGCTCCGGTG GGCGTCCCTG CGCTGGGAAT CCCGCTCGGA

1201  GTTTTTCCAG GCCCGGCCGG GCTGCTCCGG GAAAGGCCCT GCTCCTGTTC

1251  CGCGCAGCCT CTCCGGCCTC GCCCCTGGAA ACCCCGCCCA GGGCGATGGT

1301  AGGGGCCTAA CCTGCAGCCA CCGCCGGCTC CGCCCACCCA GCCCATGGGC

1351  TCCCTGAGGC CCGCCCAGCC GACGAAAACG CCGCGGCTGC GATGGCGGCG

1401  GACGTGGTGG GGGACGTGTA CGTGCTGGTG GAGCACCCCT TCGAGTACAC

1451  CGGCAAGGAC GGGCGCCGCG TGGCCATCCG GCCGAATGAG CGCTACCGGC

1501  TGCTGCGGCG CAACACCGAG CACTGGTGGC ACGTGCGGCG TGAGCCCGGC

1551  GGCCGCCCCT TCTACCTGCC TGCGCAGTAC GTGCGCGAGC TGCCCGCGCT

1601  GGGCAACCCT GCCGCCGCCG CGCCGCCAGG TCCCCACCCG AGCCCCGCGG

1651  CCCCTGAGCC GCTCGCCTAC GACTACCGGT TTGTGAGCGC GGCGGCGACC

1701  GCGGGCCCCG ACGGCGCCCC CGAGGAGTCC GGAGGCCGAG CCAGCTCCCT

1751  GTGCGGCCCT GCGCAACGCG GCGCCGCGAC CCAGCGCAGC AGCCTGGCGC

1801  CCGGCCTGCC AGCCTGCCTG TACCTGCGGC CCGCGGCGCC CGTGCGGCCC

1851  GCGCAGTCCC TGAACGACCT GGCCTGCGCC GCCGTCTCGC CTCCCGCCGG

1901  CCTCCTAGGA AGCAGCGGCA GCTTCAAGGC CTGCAGCGTG GCGGGCTCCT

1951  GGGTGTGCCC GCGGCCTCTG GCGCGCAGCG ACTCAGAGAA CGTCTACGAG

2001  GTCATCCAGG ACTTGCACGT CCCGCCGCCG GAGGAGAGCG CAGAGCAGGT

2051  ACCTCCCCGG GCGCTGGGGC GCGGAGGCGG GTGGCGCGCT AGGGACCGCG

2101  CCCGCACGGA GCCGGGGCGC AAGGAGACCC GCTCCGCTCA GCGTCGGGCA

2151  CGACGCCCAC CTCTGTCCGA AGACTTCGGA TGAGCTCCCT CTCCCCAACC

2201  GCGAAACGTG AGGGGTGCAC GCCCGCAGTC CCTCATCAGC AATTCCCAAG

2251  CTCCAAAGCT CCCTGGAAGC CCAGAGGCTT TTCGTAATCC AATTGGTGGC

2301  AAAATTGCGC TTGAACTGAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA

2351 AAAAAA

B：氨基酸序列(SEQ ID NO：11)长度：263个氨基酸

  1  MAADVVGDVY VLVEHPFEYT GKDGRRVAIR PNERYRLLRR NTEHWWHVRR EPGGRPFYLP

 61  AQYVRELPAL GNPAAAAPPG PHPSPAAPEP LAYDYRFVSA AATAGPDGAP EESGGRASSL

121  CGPAQRGAAT QRSSLAPGLP ACLYLRPAAP VRPAQSLNDL ACAAVSPPAG LLGSSGSFKA

181  CSVAGSWVCP RPLARSDSEN VYEVIQDLHV PPPEESAEQV PPRALGRGGG WRARDRARTE

241  PGRKETRSAQ RRARRPPLSE DFG

C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO：12)

克隆号：PP905

起始编码子：1392 ATG    终止编码子：2183 TGA

蛋白质分子量：28217

   1   GC ACT GCT TAG TGG ACC TCA TTT AAT CTT CCC AAT AAT CCA GTG AAG      47

  48  TGG GTG TTA CTA TCC CAT TGA CAG GAA AGA AAT CTG AGC TGC AGA GAT      95

  96  AAG GCA GAA CTC CCA AGG TGC CAC CAA GGC TCA GAC ACA CAG ATT CTC     143

 144  AGA GGA AGT GTG GAC TCA CAG GTG GGC AAT GCC TAG CAG AGG CAA AGA     191

 192  TAT AGA GGT AAG GGA GTT CCT TAC TTA CTA TAT CTT ACA AAG ATA TAG     239

 240  AGG TAA GGG AGT TCC TTA CTT ACT ATA TCT TAC AAA GAT ATA GAG GTA     287

 288  AGG GAG TTC CTC TGA ATC TGG GTG GCC AGA TTC AGC TTC CCA CCC AAC     335

 336  CCT GGG TCC CCA GGA GGT GGT GTC AAG AGA GGC CAT GGC CTG GGA TGC     383

 384  GGG CCC TTC TTC CTC CCA GAA CAC TGG CCT GAA TCA GCC AGC TCT TGG     431

 432  CAC ACA CAG CCA GGT CCA CAG GCA CAA CTG TTC CTT GGG GCC CCT GAG     479

 480  GGC AGG GGG TGT GCT GGG GCT GTG GCT TGT AAT GTC TGG AGT GAG TGC     527

 528  AGG CTC AGA TCA GGG CGA GGC TGC TTG TCC AGA GAG GCA GAA AAT TCT     575

 576  CCA ACA GAA GAC CCC CAA GGC GGA GGG CCC TGG GGC TGG ACT CCT GGA     623

 624  GGT TGT TCT GAG CTT ACC CTG TGG ACG GAT TGG AGG GTG GCC CTC CTT     671

 672  CCC CAC AAG GAT CAA GAG GGG GTG GGG GAT GGT GGG AGG GCA ATC TGG     719

 720  CCA GGC GAA CCT GCG GGG GAG GCT CCC GCC CTC CCC AGT CCC ACC ATC     767

 768  TCA GCC CCG CAG CCT CTT TCT CCC TGG AGA CAG CCA GGT GCG GCC CAG     815

 816  GAT CCC GGG AAA GGC AGG GGA GGG GGT GGC GTC TTC GCT CCT CAG GCG     863

 864  CTG GCC CGG CCC AGA GGG GAC AGG AAG CCA GGA CAC CGG GGA TTG TCT     911

 912  CTC GCA ACC GCA GCC CAG CCC CAG TCC GGG AGG AAG TTC TGC CCG GCG     959

 960  CTC TCC GCC GGT GCC TCC CTG GTT ATA TTG TTG AAC AGG AAA CCC GGC    1007

1008  AGC GCG GGA GCC GCA CAG TCG AGG AGG GAG CGC GGG ACG CCG AGC CCA    1055

1056  CGC GCG CCT GCC GGG GCA AGT GGA GGC GAA GCC GGC GAG CGG ACG CCC    1103

1104  CGA GGG TCG GGG AAG GAA CCG AGG TCC GGT CCC CTT CTT ATC CAG CCC    1151

1152  GAG ACA TCG AGC TCC GGT GGG CGT CCC TGC GCT GGG AAT CCC GCT CGG    1199

1200  AGT TTT TCC AGG CCC GGC CGG GCT GCT CCG GGA AAG GCC CTG CTC CTG    1247

1248  TTC CGC GCA GCC TCT CCG GCC TCG CCC CTG GAA ACC CCG CCC AGG GCG    1295

1296  ATG GTA GGG GCC TAA CCT GCA GCC ACC GCC GGC TCC GCC CAC CCA GCC    1343

1344  CAT GGG CTC CCT GAG GCC CGC CCA GCC GAC GAA AAC GCC GCG GCT GCG    1391

1392  ATG GCG GCG GAC GTG GTG GGG GAC GTG TAC GTG CTG GTG GAG CAC CCC    1439

   1  Met Ala Ala Asp Val Val Gly Asp Val Tyr Val Leu Val Glu His Pro      16

1440  TTC GAG TAC ACC GGC AAG GAC GGG CGC CGC GTG GCC ATC CGG CCG AAT    1487

  17  Phe Glu Tyr Thr Gly Lys Asp Gly Arg Arg Val Ala Ile Arg Pro Asn      32

1488  GAG CGC TAC CGG CTG CTG CGG CGC AAC ACC GAG CAC TGG TGG CAC GTG    1535

  33  Glu Arg Tyr Arg Leu Leu Arg Arg Asn Thr Glu His Trp Trp His Val      48

1536  CGG CGT GAG CCC GGC GGC CGC CCC TTC TAC CTG CCT GCG CAG TAC GTG    1583

  49  Arg Arg Glu Pro Gly Gly Arg Pro Phe Tyr Leu Pro Ala Gln Tyr Val      64

1584  CGC GAG CTG CCC GCG CTG GGC AAC CCT GCC GCC GCC GCG CCG CCA GGT    1631

  65  Arg Glu Leu Pro Ala Leu Gly Asn Pro Ala Ala Ala Ala Pro Pro Gly      80

1632  CCC CAC CCG AGC CCC GCG GCC CCT GAG CCG CTC GCC TAC GAC TAC CGG    1679

  81  Pro His Pro Ser Pro Ala Ala Pro Glu Pro Leu Ala Tyr Asp Tyr Arg      96

1680  TTT GTG AGC GCG GCG GCG ACC GCG GGC CCC GAC GGC GCC CCC GAG GAG    1727

  97  Phe Val Ser Ala Ala Ala Thr Ala Gly Pro Asp Gly Ala Pro Glu Glu     112

1728  TCC GGA GGC CGA GCC AGC TCC CTG TGC GGC CCT GCG CAA CGC GGC GCC    1775

 113  Ser Gly Gly Arg Ala Ser Ser Leu Cys Gly Pro Ala Gln Arg Gly Ala     128

1776  GCG ACC CAG CGC AGC AGC CTG GCG CCC GGC CTG CCA GCC TGC CTG TAC    1823

 129  Ala Thr Gln Arg Ser Ser Leu Ala Pro Gly Leu Pro Ala Cys Leu Tyr     144

1824  CTG CGG CCC GCG GCG CCC GTG CGG CCC GCG CAG TCC CTG AAC GAC CTG    1871

 145  Leu Arg Pro Ala Ala Pro Val Arg Pro Ala Gln Ser Leu Asn Asp Leu     160

1872  GCC TGC GCC GCC GTC TCG CCT CCC GCC GGC CTC CTA GGA AGC AGC GGC    1919

 161  Ala Cys Ala Ala Val Ser Pro Pro Ala Gly Leu Leu Gly Ser Ser Gly     176

1920  AGC TTC AAG GCC TGC AGC GTG GCG GGC TCC TGG GTG TGC CCG CGG CCT    1967

 177  Ser Phe Lys Ala Cys Ser Val Ala Gly Ser Trp Val Cys Pro Arg Pro     192

1968  CTG GCG CGC AGC GAC TCA GAG AAC GTC TAC GAG GTC ATC CAG GAC TTG    2015

 193  Leu Ala Arg Ser Asp Ser Glu Asn Val Tyr Glu Val Ile Gln Asp Leu     208

2016  CAC GTC CCG CCG CCG GAG GAG AGC GCA GAG CAG GTA CCT CCC CGG GCG    2063

 209  His Val Pro Pro Pro Glu Glu Ser Ala Glu Gln Val Pro Pro Arg Ala     224

2064  CTG GGG CGC GGA GGC GGG TGG CGC GCT AGG GAC CGC GCC CGC ACG GAG    2111

 225  Leu Gly Arg Gly Gly Gly Trp Arg Ala Arg Asp Arg Ala Arg Thr Glu     240

2112  CCG GGG CGC AAG GAG ACC CGC TCC GCT CAG CGT CGG GCA CGA CGC CCA    2159

 241  Pro Gly Arg Lys Glu Thr Arg Ser Ala Gln Arg Arg Ala Arg Arg Pro     256

2160  CCT CTG TCC GAA GAC TTC GGA TGA GCT CCC TCT CCC CAA CCG CGA AAC    2207

 257  Pro Leu Ser Glu Asp Phe Gly ***                                     264

2208  GTG AGG GGT GCA CGC CCG CAG TCC CTC ATC AGC AAT TCC CAA GCT CCA    2255

2256  AAG CTC CCT GGA AGC CCA GAG GCT TTT CGT AAT CCA ATT GGT GGC AAA    2303

2304  ATT GCG CTT GAA CTG AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA    2351

2352  AAA AA                                                             2356

5.PP1579蛋白

A：核苷酸序列(SEQ ID NO：13)长度：1784bp

   1  AAAAAAAAAA AAAAAAAGTT TCTATACATT CATAAAGTTT CAAGATTTGG

  51  GGGTGTGTTT TCACTTCTCC ATCGTCATGG ACTCCAATCT GCCATCTATT

 101  TCCAAGGCCC TTCCAGGTCC TGTGTCCCTC AGCTAGTGGT ATGCTTCACT

 151  TGGGACCCAG AGATACATGG GCATTATAGT TCAAATTATA ATTAAGTTTA

 201  GAACTCTATT GAGACAGAAG AAAGAAAACA GAGCTAAGGT GAAATATCTC

 251  TGATAATCTG TGTTGGTTAA TATCTAGGAT CCTAGTACCA GATATGTTGG

 301  AGTGTGAGCT GGTGTCTTCT GCCTGTAAGA CACTACCTCT CTAGCAACTG

 351  AATTTAGCAA ATACAATCGT AATCCCAGCA TGTTAGGGAG GCCAGGGTGG

 401  GCAGATCATC TGAGGTCGGG AGTTCAAGAC CAGCCTGGCC AACATGGGGA

 451  AACCCTGTCT CTACTAAAAA TACAAAACTT AGCTGGGTGT GGTGGCACGC

 501  GCATGTGTGT ACACACACAC ACCCCCCTGT AATCCCAGCT ACTCGGAAGG

 551  CTGGGGCACA AGAATCGCGT GAAACCATGA GGCGGAGGTT GAAGTGAGCC

 601  ACCGTGCCAG CTGAGAATCC TTTTTACTTC TCCAACTTCT GTTGGCCACC

 651  TGCATTCCTT GGCTTGTGGC CCTTCCTCCA ACTTCGGCAG AGCATCTTCA

 701  AACGTTGCCC TGGCTCCCTT ATCACGTCAC CTCCTGCTGG CTTTGACTCT

 751  CAGCTCCCTC TTATGAGGAT CCCTGTGATT GCTGGACCTA CCCAAATAAA

 801  CCAGGATATA AACCATCTTA AGATGCTCAG TCACCTCTAC GAGGTCCCTT

 851  TTGCTCGCAG GTGCCAGGAG TTGGGACTTG GACATCTTTA GGGGAGGCCA

 901  TTCTTCTGTC CACCACACCA CCCCATGATT CCATTTCCAT GTCACCACTG

 951  TCTCTAAGTG TGTCTAACCC ACGGCTCAAG AGTCAAAGGT GCATCACAGC

1001  AGTGAGAACT CACAGGTTCG GGTTTGCTTT CTTCCTGTGG TTGATTTCTA

1051  GGCTTTGGAA CTGCGACATA ACTAGCGATG GCTGCTGCGA TCTCACAAAG

1101  CTTCTCCAAG AAAAATCAAG CCTGTTGTGT TTGGATCTGG GGCTGAATCA

1151  CATAGGAGTT AAGGGAATGA AGTTCCTGTG TGAGGCTTTG AGGAAACCAC

1201  TGTGCAACTT GAGATGTCTG TGGTTGTGGG GATGTTCCAT CCCTCCGTTC

1251  AGTTGTGAAG ACCTCTGCTC TGCCCTCAGC TGCAACCAGA GCCTGTCACT

1301  CTGGACCTGG GTCAGAATCC CTTGGGGTCT AGTGGAGTGA AGATGCTGTT

1351  TGAAACCTTG ACATGTTCCA GTGGCACCCT CCGGACACTC AGGTTGAAAA

1401  TAGATGACTT TAATGATGAA CTCAATAAGC TGCTGGAAGA AATAGAAGAA

1451  AAAAACCCAC AACTGATTAT TGATACTGAG AAACATCATC CCTGGGCAGA

1501  AAGGCCTTCT TCTCATGACT TCATGATCTG AATCCCCCCG AGTCATTCAT

1551  TCTCCATGAA GTCATCGATT TTCCAGGTGT TGGTGAACTG CCTGTGACTC

1601  CTCTCCTCCC CGGCCCCTAC CCCTCAGGGA TAATGAGTTC ATTGCTGGGC

1651  TAGATGTTTT AGCCATGATT CTGCCTCTGT TTTATACCTG CACACATCCT

1701  TATCTTTGTT ACATATGAAA TATCTGTATC ACGGGTATAT TGAGAGAAAT

1751  AAAGGTGAGA GCATTCAAAA AAAAAAAAAA AAAA

B：氨基酸序列(SEQ ID NO：14)长度：134个氨基酸

  1  MSPLSLSVSN PRLKSQRCIT AVRTHRFGFA FFLWLISRLW NCDITSDGCC DLTKLLQEKS

 61  SLLCLDLGLN HIGVKGMKFL CEALRKPLCN LRCLWLWGCS IPPFSCEDLC SALSCNQSLS

121  LWTWVRIPWG LVE

C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO：15)

克隆号：PP1579

起始编码子：939 ATG    终止编码子：1340 TGA

蛋白质分子量：15125

   1   AA AAA AAA AAA AAA AAA GTT TCT ATA CAT TCA TAA AGT TTC AAG ATT      47

  48  TGG GGG TGT GTT TTC ACT TCT CCA TCG TCA TGG ACT CCA ATC TGC CAT      95

  96  CTA TTT CCA AGG CCC TTC CAG GTC CTG TGT CCC TCA GCT AGT GGT ATG     143

 144  CTT CAC TTG GGA CCC AGA GAT ACA TGG GCA TTA TAG TTC AAA TTA TAA     191

 192  TTA AGT TTA GAA CTC TAT TGA GAC AGA AGA AAG AAA ACA GAG CTA AGG     239

 240  TGA AAT ATC TCT GAT AAT CTG TGT TGG TTA ATA TCT AGG ATC CTA GTA     287

 288  CCA GAT ATG TTG GAG TGT GAG CTG GTG TCT TCT GCC TGT AAG ACA CTA     335

 336  CCT CTC TAG CAA CTG AAT TTA GCA AAT ACA ATC GTA ATC CCA GCA TGT     383

 384  TAG GGA GGC CAG GGT GGG CAG ATC ATC TGA GGT CGG GAG TTC AAG ACC     431

 432  AGC CTG GCC AAC ATG GGG AAA CCC TGT CTC TAC TAA AAA TAC AAA ACT     479

 480  TAG CTG GGT GTG GTG GCA CGC GCA TGT GTG TAC ACA CAC ACA CCC CCC     527

 528  TGT AAT CCC AGC TAC TCG GAA GGC TGG GGC ACA AGA ATC GCG TGA AAC     575

 576  CAT GAG GCG GAG GTT GAA GTG AGC CAC CGT GCC AGC TGA GAA TCC TTT     623

 624  TTA CTT CTC CAA CTT CTG TTG GCC ACC TGC ATT CCT TGG CTT GTG GCC     671

 672  CTT CCT CCA ACT TCG GCA GAG CAT CTT CAA ACG TTG CCC TGG CTC CCT     719

 720  TAT CAC GTC ACC TCC TGC TGG CTT TGA CTC TCA GCT CCC TCT TAT GAG     767

 768  GAT CCC TGT GAT TGC TGG ACC TAC CCA AAT AAA CCA GGA TAT AAA CCA     815

 816  TCT TAA GAT GCT CAG TCA CCT CTA CGA GGT CCC TTT TGC TCG CAG GTG     863

 864  CCA GGA GTT GGG ACT TGG ACA TCT TTA GGG GAG GCC ATT CTT CTG TCC     911

 912  ACC ACA CCA CCC CAT GAT TCC ATT TCC ATG TCA CCA CTG TCT CTA AGT     959

   1                                      Met Ser Pro Leu Ser Leu Ser       7

 960  GTG TCT AAC CCA CGG CTC AAG AGT CAA AGG TGC ATC ACA GCA GTG AGA    1007

   8  Val Ser Asn Pro Arg Leu Lys Ser Gln Arg Cys Ile Thr Ala Val Arg      23

1008  ACT CAC AGG TTC GGG TTT GCT TTC TTC CTG TGG TTG ATT TCT AGG CTT    1055

  24  Thr His Arg Phe Gly Phe Ala Phe Phe Leu Trp Leu Ile Ser Arg Leu      39

1056  TGG AAC TGC GAC ATA ACT AGC GAT GGC TGC TGC GAT CTC ACA AAG CTT    1103

  40  Trp Asn Cys Asp Ile Thr Ser Asp Gly Cys Cys Asp Leu Thr Lys Leu      55

1104  CTC CAA GAA AAA TCA AGC CTG TTG TGT TTG GAT CTG GGG CTG AAT CAC    1151

  56  Leu Gln Glu Lys Ser Ser Leu Leu Cys Leu Asp Leu Gly Leu Asn His      71

1152  ATA GGA GTT AAG GGA ATG AAG TTC CTG TGT GAG GCT TTG AGG AAA CCA    1199

  72  Ile Gly Val Lys Gly Met Lys Phe Leu Cys Glu Ala Leu Arg Lys Pro      87

1200  CTG TGC AAC TTG AGA TGT CTG TGG TTG TGG GGA TGT TCC ATC CCT CCG    1247

  88  Leu Cys Asn Leu Arg Cys Leu Trp Leu Trp Gly Cys Ser Ile Pro Pro     103

1248  TTC AGT TGT GAA GAC CTC TGC TCT GCC CTC AGC TGC AAC CAG AGC CTG    1295

 104  Phe Ser Cys Glu Asp Leu Cys Ser Ala Leu Ser Cys Asn Gln Ser Leu     119

1296  TCA CTC TGG ACC TGG GTC AGA ATC CCT TGG GGT CTA GTG GAG TGA AGA    1343

 120  Ser Leu Trp Thr Trp Val Arg Ile Pro Trp Gly Leu Val Glu ***         134

1344  TGC TGT TTG AAA CCT TGA CAT GTT CCA GTG GCA CCC TCC GGA CAC TCA    1391

1392  GGT TGA AAA TAG ATG ACT TTA ATG ATG AAC TCA ATA AGC TGC TGG AAG    1439

1440  AAA TAG AAG AAA AAA ACC CAC AAC TGA TTA TTG ATA CTG AGA AAC ATC    1487

1488  ATC CCT GGG CAG AAA GGC CTT CTT CTC ATG ACT TCA TGA TCT GAA TCC    1535

1536  CCC CGA GTC ATT CAT TCT CCA TGA AGT CAT CGA TTT TCC AGG TGT TGG    1583

1584  TGA ACT GCC TGT GAC TCC TCT CCT CCC CGG CCC CTA CCC CTC AGG GAT    1631

1632  AAT GAG TTC ATT GCT GGG CTA GAT GTT TTA GCC ATG ATT CTG CCT CTG    1679

1680  TTT TAT ACC TGC ACA CAT CCT TAT CTT TGT TAC ATA TGA AAT ATC TGT    1727

1728  ATC ACG GGT ATA TTG AGA GAA ATA AAG GTG AGA GCA TTC AAA AAA AAA    1775

1776  AAA AAA AAA                                                        1784

D.Blastp结果

Query＝PP1579(133个氨基酸)

＞SP_FUN：Q06149 Q06149 saccharomyces cerevisiae(baker′s yeast).

             putative 81.3kd transcriptional regulatory protein.11/1999

             长度＝701个氨基酸

分值＝34.8bits(78)，预计值＝0.27

相同性＝27/91(29％)，相似性＝41/91(44％)，缺口＝9/91(9％)

Query：31  FFLWLISRLWNCDITSDGCCDLTKLLQEKSSLL--CLDLGLNHIGVKGMKFLCEALRKPL 88

           F L  IS + NC   +DG  D T+ +   + L  C+ LGLN I     K+      +

Sbjct：287 FLLSYISVMINC---TDGVWDATQGVDLINELCQGCISLGLNDID----KWYLNESEETK 339

Query：89  CNLRCLWLWGCSIPPFSCEDLCSALSCNQSL 119

            NLRC+W W   +   +  D+ +  S +  L

Sbjct：340 QNLRCIWFWALFLDVSTSYDIGNPPSISDDL 370

＞SP_IN：Q19857 Q19857 caenorhabditis elegans.f28c1.3 protein(片段).5/1999

                    长度＝631个氨基酸

分值＝34.8bits(78)，预计值＝0.27

相同性＝22/70(31％)，相似性＝34/70(48％)，缺口＝4/70(5％)

Query：54  KLLQEKSSLLCLDLGLNHIGVKGMKFLCEALRK----PLCNLRCLWLWGCSIPPFSCEDL 109

           +L+   SSL  LDL  N IG  G++ +C+ LR        +L  + LW  ++   S + L

Sbjct：276 QLITSNSSLQLLDLRNNSIGDSGVRHICDGLRHREAVEKSSLSAMVLWNNNVTGASMDSL 335

Query：110 CSALSCNQSL 119

             AL  N  +

Sbjct：336 AEALIENTKI 345

分值＝32.1bits(71)，预计值＝1.8

相同性＝16/46(34％)，相似性＝27/46(57％)

Query：39  LWNCDITSDGCCDLTKLLQEKSSLLCLDLGLNHIGVKGMKFLCEAL 84

           LWN ++T      L + L E + +  L++G N++GV+G+  L  AL

Sbjct：322 LWNNNVTGASMDSLAEALIENTKIETLNIGNNNLGVEGIARLKPAL 367

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (10)

1.一种分离的具有抑癌功能的人多肽，其特征在于，它含有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：14，且所述的多肽对培养的肝癌细胞系7721的克隆形成具有抑制作用。

2.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，该多肽的氨基酸序列选自下组：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：14。

3.一种分离的多核苷酸，其特征在于，它选自下组：

(a)编码如权利要求1所述多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。

4.如权利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，该多核苷酸编码的多肽具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：14。

5.如权利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，该多核苷酸的序列选自下组：

SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：15的编码区序列或全长序列。

6.一种载体，其特征在于，它含有权利要求3所述的多核苷酸。

7.一种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于，它是选自下组的一种宿主细胞：

(a)用权利要求6所述的载体转化或转导的宿主细胞；

(b)用权利要求3所述的多核苷酸转化或转导的宿主细胞。

8.一种具有抑癌功能的人蛋白活性的多肽的制备方法，其特征在于，该方法包含：

(a)在适合表达具有抑癌功能的人蛋白的条件下，培养权利要求7所述的宿主细胞；

(b)从培养物中分离出具有抑癌功能的人蛋白活性的多肽，所述的多肽对培养的肝癌细胞系7721的克隆形成具有抑制作用。

9.一种能与权利要求1所述的具有抑癌功能的人多肽特异性结合的抗体，其中所述的多肽对培养的肝癌细胞系7721的克隆形成具有抑制作用。

10.一种药物组合物，其特征在于，它含有安全有效量的权利要求1所述的多肽以及药学上可接受的载体。