CN1166686C

CN1166686C - 具有抑制癌细胞生长功能的人蛋白及其编码序列

Info

Publication number: CN1166686C
Application number: CNB001156802A
Authority: CN
Inventors: 顾健人; 杨胜利
Original assignee: Shanghai Cancer Institute
Current assignee: Shanghai Cancer Institute
Priority date: 2000-05-15
Filing date: 2000-05-15
Publication date: 2004-09-15
Anticipated expiration: 2020-05-15
Also published as: CN1323802A

Abstract

本发明公开了一类新的具有抑癌功能的人蛋白，编码此多肽的多核苷酸和经重组技术产生该多肽的方法。本发明还公开了此多肽用于治疗多种疾病如癌症等的方法。本发明还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明还公开了编码这类新的具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸的用途。

Description

具有抑制癌细胞生长功能的人蛋白及其编码序列

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明涉及新的编码具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸，以及此多核苷酸编码的多肽。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的用途和制备。

人基因组学研究目前是国际上的热点，除人染色体DNA大规模测序，表达序列测序(EST)的方法外，还缺少从功能开始的筛选具有功能基因的高通量的方法。

癌症是危害人类健康的主要疾病之一。为了有效地治疗和预防肿瘤，目前人们已越来越关注肿瘤的基因治疗。因此，本领域迫切需要开发研究具有抑癌功能的人蛋白及其激动剂/抑制剂。

本发明的目的是提供一类新的具有抑癌功能的人蛋白多肽以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一目的是提供编码这些多肽的多核苷酸。

本发明的另一目的是提供生产这些多肽的方法以及该多肽和编码序列的用途。

在本发明的第一方面，提供新颖的分离出的具有抑癌功能的蛋白多肽，它包含具有选自下组的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：8、SEQ IDNO：11、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：17；或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。

较佳地，该多肽是具有选自下组的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：17。

在本发明的第二方面，提供了一种分离的多核苷酸，它包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少85％相同性：(a)编码上述的具有抑癌功能的蛋白多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地，该多核苷酸编码的多肽具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：8、SEQ IDNO：11、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：17。更佳地，该多核苷酸的序列选自下组：SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：18的编码区序列或全长序列。

在本发明的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。

在本发明的第四方面，提供了制备具有抑癌功能的蛋白活性的多肽的制备方法，该方法包含：(a)在适合表达具有抑癌功能的蛋白的条件下，培养上述被转化或转导的宿主细胞；(b)从培养物中分离出具有抑癌功能的蛋白活性的多肽。

在本发明的第五方面，提供了与上述的具有抑癌功能的蛋白多肽特异性结合的抗体。还提供了可用于检测的核酸分子，它含有上述的多核苷酸中连续的10-800个核苷酸。

在本发明的第六方面，提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的本发明的具有抑癌功能的蛋白多肽以及药学上可接受的载体。这些药物组合物可治疗癌症以及细胞异常增殖等病症。

本发明的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。

本发明采用大规模cDNA克隆转染癌细胞，在获得具有抑癌作用的基础上，经测序证明为新的基因，进一步得到全长cDNA克隆。DNA转染试验证明，本发明的具有抑癌功能的蛋白对癌细胞(肝癌细胞)具有抑制克隆形成的作用，其抑制率在50％或50％以上。

如本文所用，“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和多肽是没有分离纯化的，但同样的多聚核苷酸或多肽如从天然状态中同存在的其他物质中分开，则为分离纯化的。

如本文所用，“分离的具有抑癌功能的蛋白或多肽”是指具有抑癌功能的蛋白多肽基本上不含天然与其相关的其它蛋白、脂类、糖类或其它物质。本领域的技术人员能用标准的蛋白质纯化技术纯化具有抑癌功能的蛋白。基本上纯的多肽在非还原聚丙烯酰胺凝胶上能产生单一的主带。具有抑癌功能的蛋白多肽的纯度能用氨基酸序列分析。

本发明的多肽可以是重组多肽、天然多肽、合成多肽，优选重组多肽。本发明的多肽可以是天然纯化的产物，或是化学合成的产物，或使用重组技术从原核或真核宿主(例如，细菌、酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞)中产生。根据重组生产方案所用的宿主，本发明的多肽可以是糖基化的，或可以是非糖基化的。本发明的多肽还可包括或不包括起始的甲硫氨酸残基。

本发明还包括具有抑癌功能的人蛋白的片段、衍生物和类似物。如本文所用，术语“片段”、“衍生物”和“类似物”是指基本上保持本发明的天然具有抑癌功能的人蛋白相同的生物学功能或活性的多肽。本发明的多肽片段、衍生物或类似物可以是(i)有一个或多个保守或非保守性氨基酸残基(优选保守性氨基酸残基)被取代的多肽，而这样的取代的氨基酸残基可以是也可以不是由遗传密码编码的，或(ii)在一个或多个氨基酸残基中具有取代基团的多肽，或(iii)成熟多肽与另一个化合物(比如延长多肽半衰期的化合物，例如聚乙二醇)融合所形成的多肽，或(iv)附加的氨基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽(如前导序列或分泌序列或用来纯化此多肽的序列或蛋白原序列)。根据本文的教导，这些片段、衍生物和类似物属于本领域熟练技术人员公知的范围。

本发明的多核苷酸可以是DNA形式或RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因组DNA或人工合成的DNA。DNA可以是单链的或是双链的。DNA可以是编码链或非编码链。以PP2703蛋白(在本申请中，蛋白质的命名采用其克隆编号)为例，编码成熟多肽的编码区序列可以与SEQ ID NO：3所示的编码区序列相同或者是简并的变异体。如本文所用，“简并的变异体”在本发明中是指编码具有SEQ ID NO：2的蛋白质，但与SEQ IDNO：3所示的编码区序列有差别的核酸序列。以PP3227蛋白(在本申请中，蛋白质的命名采用其克隆编号)为例，编码成熟多肽的编码区序列可以与SEQ ID NO：6所示的编码区序列相同或者是简并的变异体。如本文所用，“简并的变异体”在本发明中是指编码具有SEQ ID NO：5的蛋白质，但与SEQ ID NO：6所示的编码区序列有差别的核酸序列。对于其他具有抑癌功能的蛋白，可依此类推。对于其他具有抑癌功能的蛋白，可依此类推。

编码成熟多肽的多核苷酸包括：只编码成熟多肽的编码序列；成熟多肽的编码序列和各种附加编码序列；成熟多肽的编码序列(和任选的附加编码序列)以及非编码序列。

术语“编码多肽的多核苷酸”可以是包括编码此多肽的多核苷酸，也可以是还包括附加编码和/或非编码序列的多核苷酸。

本发明还涉及上述多核苷酸的变异体，其编码与本发明有相同的氨基酸序列的多肽或多肽的片段、类似物和衍生物。此多核苷酸的变异体可以是天然发生的等位变异体或非天然发生的变异体。这些核苷酸变异体包括取代变异体、缺失变异体和插入变异体。如本领域所知的，等位变异体是一个多核苷酸的替换形式，它可能是一个或多个核苷酸的取代、缺失或插入，但不会从实质上改变其编码的多肽的功能。

本发明还涉及与上述的序列杂交且两个序列之间具有至少50％，较佳地至少70％，更佳地至少80％相同性的多核苷酸。本发明特别涉及在严格条件下与本发明所述多核苷酸可杂交的多核苷酸。在本发明中，“严格条件”是指：(1)在较低离子强度和较高温度下的杂交和洗脱，如0.2×SSC，0.1％SDS，60℃；或(2)杂交时加有变性剂，如50％(v/v)甲酰胺，0.1％小牛血清/0.1％Ficoll，42℃等；或(3)仅在两条序列之间的相同性至少在95％以上，更好是97％以上时才发生杂交。并且，可杂交的多核苷酸编码的多肽与SEQ IDNO：2所示的成熟多肽有相同的生物学功能和活性。

本发明还涉及与上述的序列杂交的核酸片段。如本文所用，“核酸片段”的长度至少含15个核苷酸，较好是至少30个核苷酸，更好是至少50个核苷酸，最好是至少100个核苷酸以上。核酸片段可用于核酸的扩增技术(如PCR)以确定和/或分离编码具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸。

本发明中的多肽和多核苷酸优选以分离的形式提供，更佳地被纯化至均质。

本发明的DNA序列能用几种方法获得。例如，用本领域熟知的杂交技术分离DNA。这些技术包括但不局限于：1)用探针与基因组或cDNA文库杂交以检出同源性核苷酸序列，和2)表达文库的抗体筛选以检出具有共同结构特征的克隆的DNA片段。

编码具有抑癌功能的蛋白的特异DNA片段序列产生也能用下列方法获得：1)从基因组DNA分离双链DNA序列；2)化学合成DNA序列以获得所需多肽的双链DNA。

上述提到的方法中，分离基因组DNA最不常用。当需要的多肽产物的整个氨基酸序列已知时，DNA序列的直接化学合成是经常选用的方法。如果所需的氨基酸的整个序列不清楚时，DNA序列的直接化学合成是不可能的，选用的方法是cDNA序列的分离。分离感兴趣的cDNA的标准方法是从高表达该基因的供体细胞分离mRNA并进行逆转录，形成质粒或噬菌体cDNA文库。提取mRNA的方法已有多种成熟的技术，试剂盒也可从商业途径获得(Qiagene)。而构建cDNA文库也是通常的方法(Sambrook，et al.，Molecular Cloning，A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory.New York，1989)。还可得到商业供应的cDNA文库，如Clontech公司的不同cDNA文库。当结合使用聚合酶反应技术时，即使极少的表达产物也能克隆。

可用常规方法从这些cDNA文库中筛选本发明的基因。这些方法包括(但不限于)：(1)DNA-DNA或DNA-RNA杂交；(2)标志基因的功能出现或丧失；(3)测定具有抑癌功能的蛋白的转录本的水平；(4)通过免疫学技术或测定生物学活性，来检测基因表达的蛋白产物。上述方法可单用，也可多种方法联合应用。

在第(1)种方法中，杂交所用的探针是与本发明的多核苷酸的任何一部分同源，其长度至少15个核苷酸，较好是至少30个核苷酸，更好是至少50个核苷酸，最好是至少100个核苷酸。此外，探针的长度通常在2kb之内，较佳地为1kb之内。此处所用的探针通常是在本发明的基因DNA序列信息的基础上化学合成的DNA序列。本发明的基因本身或者片段当然可以用作探针。DNA探针的标记可用放射性同位素，荧光素或酶(如碱性磷酸酶)等。

在第(4)种方法中，检测具有抑癌功能的蛋白基因表达的蛋白产物可用免疫学技术如Western印迹法，放射免疫沉淀法，酶联免疫吸附法(ELISA)等。

应用PCR技术扩增DNA/RNA的方法(Saiki，et al.Science 1985；230：1350-1354)被优选用于获得本发明的基因。特别是很难从文库中得到全长的cDNA时，可优选使用RACE法(RACE-cDNA末端快速扩增法)，用于PCR的引物可根据本文所公开的本发明的序列信息适当地选择，并可用常规方法合成。可用常规方法如通过凝胶电泳分离和纯化扩增的DNA/RNA片段。

如上所述得到的本发明的基因，或者各种DNA片段等的核苷酸序列的测定可用常规方法如双脱氧链终止法(Sanger et al.PNAS，1977，74：5463-5467)。这类核苷酸序列测定也可用商业测序试剂盒等。为了获得全长的cDNA序列，测序需反复进行。有时需要测定多个克隆的cDNA序列，才能拼接成全长的cDNA序列。

本发明也涉及包含本发明的多核苷酸的载体，以及用本发明的载体或具有抑癌功能的蛋白编码序列经基因工程产生的宿主细胞，以及经重组技术产生本发明所述多肽的方法。

通过常规的重组DNA技术，可利用本发明的多聚核苷酸序列可用来表达或生产重组的具有抑癌功能的蛋白多肽(Science，1984；224：1431)。一般来说有以下步骤：

(1).用本发明的编码具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸(或变异体)，或用含有该多核苷酸的重组表达载体转化或转导合适的宿主细胞；

(2).在合适的培养基中培养的宿主细胞；

(3).从培养基或细胞中分离、纯化蛋白质。

本发明中，具有抑癌功能的人蛋白多核苷酸序列可插入到重组表达载体中。术语“重组表达载体”指本领域熟知的细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒如腺病毒、逆转录病毒或其他载体。在本发明中适用的载体包括但不限于：在细菌中表达的基于T7的表达载体(Rosenberg，et al.Gene，1987，56：125)；在哺乳动物细胞中表达的pMSXND表达载体(Lee and Nathans，J Bio Chem.263：3521，1988)和在昆虫细胞中表达的来源于杆状病毒的载体。总之，只要能在宿主体内复制和稳定，任何质粒和载体都可以用。表达载体的一个重要特征是通常含有复制起点、启动子、标记基因和翻译控制元件。

本领域的技术人员熟知的方法能用于构建含具有抑癌功能的人蛋白编码DNA序列和合适的转录/翻译控制信号的表达载体。这些方法包括体外重组DNA技术、DNA合成技术、体内重组技术等(Sambroook，et al.Molecular Cloning，a Laboratory Manual，coldSpring Harbor Laboratory.New York，1989)。所述的DNA序列可有效连接到表达载体中的适当启动子上，以指导mRNA合成。这些启动子的代表性例子有：大肠杆菌的lac或trp启动子；λ噬菌体P_L启动子；真核启动子包括CMV立即早期启动子、HSV胸苷激酶启动子、早期和晚期SV40启动子、反转录病毒的LTRs和其他一些已知的可控制基因在原核或真核细胞或其病毒中表达的启动子。表达载体还包括翻译起始用的核糖体结合位点和转录终止子。

此外，表达载体优选地包含一个或多个选择性标记基因，以提供用于选择转化的宿主细胞的表型性状，如真核细胞培养用的二氢叶酸还原酶、新霉素抗性以及绿色荧光蛋白(GFP)，或用于大肠杆菌的四环素或氨苄青霉素抗性。

包含上述的适当DNA序列以及适当启动子或者控制序列的载体，可以用于转化适当的宿主细胞，以使其能够表达蛋白质。

宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或是高等真核细胞，如哺乳动物细胞。代表性例子有：大肠杆菌，链霉菌属；鼠伤寒沙门氏菌的细菌细胞；真菌细胞如酵母；植物细胞；果蝇S2或Sf9的昆虫细胞；CHO、COS或Bowes黑素瘤细胞的动物细胞等。

本发明的多核苷酸在高等真核细胞中表达时，如果在载体中插入增强子序列时将会使转录得到增强。增强子是DNA的顺式作用因子，通常大约有10到300个碱基对，作用于启动子以增强基因的转录。可举的例子包括在复制起始点晚期一侧的100到270个碱基对的SV40增强子、在复制起始点晚期一侧的多瘤增强子以及腺病毒增强子等。

本领域一般技术人员都清楚如何选择适当的载体、启动子、增强子和宿主细胞。

用重组DNA转化宿主细胞可用本领域技术人员熟知的常规技术进行。当宿主为原核生物如大肠杆菌时，能吸收DNA的感受态细胞可在指数生长期后收获，用CaCl₂法处理，所用的步骤在本领域众所周知。可供选择的是用MgCl₂。如果需要，转化也可用电穿孔的方法进行。当宿主是真核生物，可选用如下的DNA转染方法：磷酸钙共沉淀法，常规机械方法如显微注射、电穿孔、脂质体包装等。

获得的转化子可以用常规方法培养，表达本发明的基因所编码的多肽。根据所用的宿主细胞，培养中所用的培养基可选自各种常规培养基。在适于宿主细胞生长的条件下进行培养。当宿主细胞生长到适当的细胞密度后，用合适的方法(如温度转换或化学诱导)诱导选择的启动子，将细胞再培养一段时间。

在上面的方法中的重组多肽可包被于细胞内、细胞外或在细胞膜上表达或分泌到细胞外。如果需要，可利用其物理的、化学的和其它特性通过各种分离方法分离和纯化重组的蛋白。这些方法是本领域技术人员所熟知的。这些方法的例子包括但并不限于：常规的复性处理、用蛋白沉淀剂处理(盐析方法)、离心、渗透破菌、超处理、超离心、分子筛层析(凝胶过滤)、吸附层析、离子交换层析、高效液相层析(HPLC)和其它各种液相层析技术及这些方法的结合。

重组的具有抑癌功能的人蛋白或多肽有多方面的用途。这些用途包括(但不限于)：直接做为药物治疗具有抑癌功能的蛋白功能低下或丧失所致的疾病，和用于筛选促进或对抗具有抑癌功能的蛋白功能的抗体、多肽或其它配体。例如，抗体可用于激活或抑制具有抑癌功能的人蛋白的功能。用表达的重组具有抑癌功能的人蛋白筛选多肽库可用于寻找有治疗价值的能抑制或刺激具有抑癌功能的人蛋白功能的多肽分子。

本发明也提供了筛选药物以鉴定提高(激动剂)或阻遏(拮抗剂)具有抑癌功能的人蛋白的药剂的方法。激动剂提高具有抑癌功能的人蛋白刺激细胞增殖等生物功能，而拮抗剂阻止和治疗与细胞过度增殖有关的紊乱如各种癌症。例如，能在药物的存在下，将哺乳动物细胞或表达具有抑癌功能的人蛋白的膜制剂与标记的具有抑癌功能的人蛋白一起培养。然后测定药物提高或阻遏此相互作用的能力。

具有抑癌功能的人蛋白的拮抗剂包括筛选出的抗体、化合物、受体缺失物和类似物等。具有抑癌功能的人蛋白的拮抗剂可以与具有抑癌功能的人蛋白结合并消除其功能，或是抑制具有抑癌功能的人蛋白的产生，或是与多肽的活性位点结合使多肽不能发挥生物学功能。具有抑癌功能的人蛋白的拮抗剂可用于治疗用途。

在筛选作为拮抗剂的化合物时，可以将具有抑癌功能的蛋白加入生物分析测定中，通过测定化合物影响具有抑癌功能的蛋白和其受体之间的相互作用来确定化合物是否是拮抗剂。用上述筛选化合物的同样方法，可以筛选出起拮抗剂作用的受体缺失物和类似物。

本发明的多肽可直接用于疾病治疗，例如，各种恶性肿瘤、和细胞异常增殖等。

本发明的多肽，及其片段、衍生物、类似物或它们的细胞可以用来作为抗原以生产抗体。这些抗体可以是多克隆或单克隆抗体。多克隆抗体可以通过将此多肽直接注射动物的方法得到。制备单克隆抗体的技术包括杂交瘤技术，三瘤技术，人B-细胞杂交瘤技术，EBV-杂交瘤技术等。

可以将本发明的多肽和拮抗剂与合适的药物载体组合后使用。这些载体可以是水、葡萄糖、乙醇、盐类、缓冲液、甘油以及它们的组合。组合物包含安全有效量的多肽或拮抗剂以及不影响药物效果的载体和赋形剂。这些组合物可以作为药物用于疾病治疗。

本发明还提供含有一种或多种容器的药盒或试剂盒，容器中装有一种或多种本发明的药用组合物成分。与这些容器一起，可以有由制造、使用或销售药品或生物制品的政府管理机构所给出的指示性提示，该提示反映出生产、使用或销售的政府管理机构许可其在人体上施用。此外，本发明的多肽可以与其它的治疗化合物结合使用。

药物组合物可以以方便的方式给药，如通过局部、静脉内、腹膜内、肌内、皮下、鼻内或皮内的给药途径。具有抑癌功能的蛋白以有效地治疗和/或预防具体的适应症的量来给药。施用于患者的具有抑癌功能的蛋白的量和剂量范围将取决于许多因素，如给药方式、待治疗者的健康条件和诊断医生的判断。

具有抑癌功能的人蛋白的多聚核苷酸也可用于多种治疗目的。基因治疗技术可用于治疗由于具有抑癌功能的蛋白的无表达或异常/无活性的具有抑癌功能的蛋白的表达所致的细胞增殖、发育或代谢异常。重组的基因治疗载体(如病毒载体)可设计成表达变异的具有抑癌功能的蛋白，以抑制内源性的具有抑癌功能的蛋白活性。例如，一种变异的具有抑癌功能的蛋白可以是缩短的、缺失了信号传导功能域的具有抑癌功能的蛋白，虽可与下游的底物结合，但缺乏信号传导活性。因此重组的基因治疗载体可用于治疗具有抑癌功能的蛋白表达或活性异常所致的疾病。来源于病毒的表达载体如逆转录病毒、腺病毒、腺病毒相关病毒、单纯疱疹病毒、细小病毒等可用于将具有抑癌功能的蛋白基因转移至细胞内。构建携带具有抑癌功能的蛋白基因的重组病毒载体的方法可见于已有文献(Sambrook，et al.)。另外重组具有抑癌功能的人蛋白基因可包装到脂质体中转移至细胞内。

抑制具有抑癌功能的人蛋白mRNA的寡聚核苷酸(包括反义RNA和DNA)以及核酶也在本发明的范围之内。核酶是一种能特异性分解特定RNA的酶样RNA分子，其作用机制是核酶分子与互补的靶RNA特异性杂交后进行核酸内切作用。反义的RNA和DNA及核酶可用已有的任何RNA或DNA合成技术获得，如固相磷酸酰胺化学合成法合成寡核苷酸的技术已广泛应用。反义RNA分子可通过编码该RNA的DNA序列在体外或体内转录获得。这种DNA序列已整合到载体的RNA聚合酶启动子的下游。为了增加核酸分子的稳定性，可用多种方法对其进行修饰，如增加两侧的序列长度，核糖核苷之间的连接应用磷酸硫酯键或肽键而非磷酸二酯键。

多聚核苷酸导入组织或细胞内的方法包括：将多聚核苷酸直接注入到体内组织中；或在体外通过载体(如病毒、噬菌体或质粒等)先将多聚核苷酸导入细胞中，再将细胞移植到体内等。

本发明的多肽还可用作肽谱分析，例如，多肽可用物理的、化学或酶进行特异性切割，并进行一维或二维或三维的凝胶电泳分析。

本发明还提供了针对具有抑癌功能的人蛋白抗原决定簇的抗体。这些抗体包括(但不限于)：多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、Fab片段和Fab表达文库产生的片段。

抗具有抑癌功能的人蛋白的抗体可用于免疫组织化学技术中，检测活检标本中的具有抑癌功能的人蛋白。

与具有抑癌功能的人蛋白结合的单克隆抗体也可用放射性同位素标记，注入体内可跟踪其位置和分布。这种放射性标记的抗体可作为一种非创伤性诊断方法用于肿瘤细胞的定位和判断是否有转移。

本发明中的抗体可用于治疗或预防与具有抑癌功能的人蛋白相关的疾病。给予适当剂量的抗体可以刺激或阻断具有抑癌功能的人蛋白的产生或活性。

抗体也可用于设计针对体内某一特殊部位的免疫毒素。如具有抑癌功能的人蛋白高亲和性的单克隆抗体可与细菌或植物毒素(如白喉毒素，蓖麻蛋白，红豆碱等)共价结合。一种通常的方法是用巯基交联剂如SPDP，攻击抗体的氨基，通过二硫键的交换，将毒素结合于抗体上，这种杂交抗体可用于杀灭具有抑癌功能的人蛋白阳性的细胞。

多克隆抗体的生产可用具有抑癌功能的人蛋白或多肽免疫动物，如家兔，小鼠，大鼠等。多种佐剂可用于增强免疫反应，包括但不限于弗氏佐剂等。

具有抑癌功能的人蛋白单克隆抗体可用杂交瘤技术生产(Kohler and Milstein.Nature，1975，256：495-497)。将人恒定区和非人源的可变区结合的嵌合抗体可用已有的技术生产(Morrison et al，PNAS，1985，81：6851)。而已有的生产单链抗体的技术(U.S.PatNo.4946778)也可用于生产抗具有抑癌功能的人蛋白的单链抗体。

能与具有抑癌功能的人蛋白结合的多肽分子可通过筛选由各种可能组合的氨基酸结合于固相物组成的随机多肽库而获得。筛选时，必须对具有抑癌功能的人蛋白分子进行标记。

本发明还涉及定量和定位检测具有抑癌功能的人蛋白水平的诊断试验方法。这些试验是本领域所熟知的，且包括FISH测定和放射免疫测定。试验中所检测的具有抑癌功能的人蛋白水平，可以用作解释具有抑癌功能的人蛋白在各种疾病中的重要性和用于诊断具有抑癌功能的蛋白起作用的疾病。

具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸可用于具有抑癌功能的蛋白相关疾病的诊断和治疗。在诊断方面，具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸可用于检测具有抑癌功能的蛋白的表达与否或在疾病状态下具有抑癌功能的蛋白的异常表达。如具有抑癌功能的蛋白DNA序列可用于对活检标本的杂交以判断具有抑癌功能的蛋白的表达异常。杂交技术包括Southern印迹法，Northern印迹法、原位杂交等。这些技术方法都是公开的成熟技术，相关的试剂盒都可从商业途径得到。本发明的多核苷酸的一部分或全部可作为探针固定在微阵列(Microarray)或DNA芯片(又称为“基因芯片”)上，用于分析组织中基因的差异表达分析和基因诊断。用具有抑癌功能的蛋白特异的引物进行RNA-聚合酶链反应(RT-PCR)体外扩增也可检测具有抑癌功能的蛋白的转录产物。

检测具有抑癌功能的蛋白基因的突变也可用于诊断具有抑癌功能的蛋白相关的疾病。具有抑癌功能的蛋白突变的形式包括与正常野生型具有抑癌功能的蛋白DNA序列相比的点突变、易位、缺失、重组和其它任何异常等。可用已有的技术如Southern印迹法、DNA序列分析、PCR和原位杂交检测突变。另外，突变有可能影响蛋白的表达，因此用Northern印迹法、Western印迹法可间接判断基因有无突变。

本发明的序列对染色体鉴定也是有价值的。该序列会特异性地针对某条人染色体具体位置且并可以与其杂交。目前，需要鉴定染色体上的各基因的具体位点。现在，只有很少的基于实际序列数据(重复多态性)的染色体标记物可用于标记染色体位置。根据本发明，为了将这些序列与疾病相关基因相关联，其重要的第一步就是将这些DNA序列定位于染色体上。

简而言之，根据cDNA制备PCR引物(优选15-35bp)，可以将序列定位于染色体上。然后，将这些引物用于PCR筛选含各条人染色体的体细胞杂合细胞。只有那些含有相应于引物的人基因的杂合细胞会产生扩增的片段。

体细胞杂合细胞的PCR定位法，是将DNA定位到具体染色体的快捷方法。使用本发明的的寡核苷酸引物，通过类似方法，可利用一组来自特定染色体的片段或大量基因组克隆而实现亚定位。可用于染色体定位的其它类似策略包括原位杂交、用标记的流式分选的染色体预筛选和杂交预选，从而构建染色体特异的cDNA库。

将cDNA克隆与中期染色体进行荧光原位杂交(FISH)，可以在一个步骤中精确地进行染色体定位。此技术的综述，参见Verma等，Human Chromosomes：a Manual of BasicTechniques，Pergamon Press，New York(1988)。

一旦序列被定位到准确的染色体位置，此序列在染色体上的物理位置就可以与基因图数据相关联。这些数据可见于例如，V.Mckusick，Mendelian Inheritance in Man(可通过与Johns Hopkins University Welch Medical Library联机获得)。然后可通过连锁分析，确定基因与业已定位到染色体区域上的疾病之间的关系。

接着，需要测定患病和未患病个体间的cDNA或基因组序列差异。如果在一些或所有的患病个体中观察到某突变，而该突变在任何正常个体中未观察到，则该突变可能是疾病的病因。比较患病和未患病个体，通常涉及首先寻找染色体中结构的变化，如从染色体水平可见的或用基于cDNA序列的PCR可检测的缺失或易位。根据目前的物理作图和基因定位技术的分辨能力，被精确定位至与疾病有关的染色体区域的cDNA，可以是50至500个潜在致病基因间之一种(假定1兆碱基作图分辨能力和每20kb对应于一个基因)。

本发明的具有抑癌功能的蛋白核苷酸全长序列或其片段通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。对于PCR扩增法，可根据本发明所公开的有关核苷酸序列，尤其是开放阅读框序列来设计引物，并用市售的cDNA库或按本领域技术人员已知的常规方法所制备的cDNA库作为模板，扩增而得有关序列。当序列较长时，常常需要进行两次或多次PCR扩增，然后再将各次扩增出的片段按正确次序拼接在一起。

一旦获得了有关的序列，就可以用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是将其克隆入载体，再转入细胞，然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。

此外，还可用人工合成的方法来合成有关序列，尤其是片段长度较短时。通常，通过先合成多个小片段，然后再进行连接可获得序列很长的片段。

目前，已经可以完全通过化学合成来编码本发明蛋白(或其片段，或其衍生物)的DNA序列。然后可将该DNA序列引入本领域中的各种DNA分子(如载体)和细胞中。此外，还可通过化学合成将突变引入本发明蛋白序列中。

此外，由于本发明的具有抑癌功能的蛋白具有源自人的天然氨基酸序列，因此，与来源于其他物种的同族蛋白相比，预计在施用于人时将具有更高的活性和/或更低的副作用(例如在人体内的免疫原性更低或没有)。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York：Cold Spring Harbor LaboratoryPress，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例1：cDNA基因的获得及对癌细胞克隆形成的抑制作用

PP2703，PP3227，PP3564，PP3686，PP3774，PP3781是通过用常规方法构建人胎盘cDNA文库而获得的。取3、6、10月龄的胎盘组织，用Trizol试剂(GIBCO BRL公司)按厂方说明书提取总RNA，用mRNA提纯kit(pharmacia公司)提取mRNA。用pCMV-script TMXR cDNA文库构建kit(Seratagene公司)构建上述mRNA的cDNA文库。其中反转录酶改用MMLV-RT-Superscript II(GIBCO BRL)，反转录反应在42℃进行。转化XL 10-Gold感受细胞，获得了1×10⁶cfu/μg cDNA滴度的cDNA文库。第一轮随机挑取cDNA克隆，其后以高丰度cDNA克隆和已证明有抑癌细胞生长功能的cDNA克隆为探针，杂交筛选cDNA文库，挑取弱阳性及阴性克隆。用Qiagen 96孔板质粒抽提kit，按厂家说明书进行质粒DNA的提取。质粒DNA和空载体同时转染肝癌细胞系7721。100ng DNA酒精沉淀干燥后，加6μl H₂O溶解，待转染。每份DNA样品中加0.74μl脂质体及9.3μl无血清培液，混匀后，室温放置10分钟。每管中加150μl无血清培液，均分加入3孔生长于96孔板的7721细胞中，37℃放置2小时，每孔再加50μl无血清培液，37℃ 24小时。每孔换100μl全培液，37℃24小时，换含G418的全培液100μl，37℃ 24～48小时，边观察，边换G418浓度不等的培液。约2～3次后，直到镜检细胞有克隆形成，计数。发现以上克隆有抑制细胞克隆形成作用，结果如下表所示。

cDNA克隆转染细胞(7721)克隆形成情况

cDNA克隆名称	cDNA克隆数(三个重复)			空载体克隆数(三个重复)
cDNA克隆名称	cDNA克隆数(三个重复)			空载体克隆数(三个重复)			PP2703	0	0	0	12	23	28
PP3227	0	1	2	12	18	20	PP2703	0	0	0	12	23	28
PP3227	0	1	2	12	18	20	PP3564	9	12	8	28	35	25
PP3686	10	9	5	38	32	35	PP3564	9	12	8	28	35	25
PP3686	10	9	5	38	32	35	PP3774	0	0	0	24	27	20
PP3781	4	0	12	24	27	20	PP3774	0	0	0	24	27	20

对cDNA克隆采用双脱氧终止法，在ABI377 DNA自动测序仪上测定其一端近500bp的核苷酸序列。分析后，确定为新基因克隆，进行另一端测序，仍未获得全长cDNA序列，设计引物，再次进行测序，直到获得全长序列(SEQ ID NO：1、4、7、10、13、16)。

实施例2：从胎盘cDNA中PCR获得全长基因：

取3、6、10月龄的胎盘组织，用Trizol试剂(GIBCO BRL公司)按厂方说明书提取总RNA，用mRNA提纯试剂盒(Pharmacia公司)提取mRNA。用MMLV-RT-Superscript II(GIBCO BRL)反转录酶在42℃进行反转录反应，获得胎盘cDNA。利用各个基因的转异引物(如下表所示)，按90℃ 3分钟1个循环；94℃ 30秒，60℃30秒，72℃ 1分钟，共35个循环；72℃ 10分钟，1个循环进行PCR扩增，获得含有完整开放阅读框序列的各蛋白基因的扩增产物。扩增产物经测序验证，与实施例1测得的序列相符，随后用常规技术将扩增产物转入宿主细胞，获得重组蛋白。

基因特异引物

克隆名称	特异引物1(5′→3′)	特异引物2(5′→3′)
克隆名称	特异引物1(5′→3′)	特异引物2(5′→3′)	PP2703	CGTTGACGGCGATTTTGCGTTCT	GCCCCCGCCTCACTCTGAGACTT
PP3227	GCTGCATGCTACATGCCAAACAGG	GGGAAGTGGAAGAGGGGGTCAGC	PP2703	CGTTGACGGCGATTTTGCGTTCT	GCCCCCGCCTCACTCTGAGACTT
PP3227	GCTGCATGCTACATGCCAAACAGG	GGGAAGTGGAAGAGGGGGTCAGC	PP3564	CTCCCTGAGCCTTTGACCCCAGA	TTACAGGCGCCCACTGCCAC
PP3686	ATCCAGGACATCGAGGGAGCCAG	AACTGGGGACTGGGGAGAGGACC	PP3564	CTCCCTGAGCCTTTGACCCCAGA	TTACAGGCGCCCACTGCCAC
PP3686	ATCCAGGACATCGAGGGAGCCAG	AACTGGGGACTGGGGAGAGGACC	PP3774	GGGCCATGGTGGTTTGGATTGAG	GCAGCAGGCCTGGTATCTTTGCC
PP3781	AGATCCCTGCCAGGTCCCTCTCC	TCTCAGGCCCCTGCAGTTTAGCC	PP3774	GGGCCATGGTGGTTTGGATTGAG	GCAGCAGGCCTGGTATCTTTGCC

实施例3：cDNA克隆序列分析

1.PP2703

A：核苷酸序列：PP2703(SEQ ID NO：1)长度：2518bp

1 GGGATTTTCT GCTCCGGTTG GTGAGCGCGC CTGCGCGTTG ACGGCGATTT

51 TGCGTTCTGA GGCTGCAGCG TCGGCATCTT GAGCTGCCGG TTCGCGAGTT

101 CGAGGCCAGG TTCCGCCTGT CGTGGGTTCG CACCCCGGAC GCGATGCTAT

151 TCGACAAGGT GAAAGCGTTC TCGGTGCAGT TGGACGGCGC GACCGCGGGC

201 GTCGAGCCCG TGTTTAGCGG CGGCCAGGCC GTGGCGGGCC GGGTGCTGCT

251 GGAGCTGTCA AGCGCCGCGC GTGTGGGTGC CCTGAGGCTG CGCGCGCGGG

301 GCCGCGCCCA CGTGCACTGG ACCGAGTCGC GCAGCGCGGG CTCGAGCACG

351 GCTTACACGC AGAGCTACAG TGAACGCGTG GAGGTCGTGA GCCACCGCGC

401 CACGCTCCTG GCGCCAGATA CCGGGGAGAC CACGACGCTG CCTCCTGGGC

451 GCCATGAGTT CCTGTTCAGC TTCCAGCTGC CCCCGACCCT GGTGACATCC

501 TTCGAGGGCA AACACGGTAG TGTCCGCTAC TGTATCAAGG CCACCCTGCA

551 CCGGCCCTGG GTCCCAGCAC GCCGGGCAAG GAAGGTGTTC ACTGTCATCG

601 AGCCTGTGGA CATCAACACG CCAGCCCTGC TGGCACCTCA AGCGGGGGCT

651 CGGGAAAAGG TTGCCCGATC CTGGTACTGT AACCGTGGCC TAGTCTCCCT

701 TTCGGCCAAG ATCGACCGCA AGGGCTACAC CCCAGGAGAG GTCATCCCTG

751 TCTTTGCCGA GATCGACAAC GGCTCCACAC GTCCTGTGCT GCCTCGGGCA

801 GCCGTGGTGC AGACACAGAC GTTCATGGCC CGAGGCGCCC GAAAGCAGAA

851 ACGGGCAGTG GTGGCCAGCC TCGCGGGCGA GCCGGTGGGC CCCGGGCAGC

901 GGGCGCTGTG GCAGGGCCGG GCACTGCGGA TCCCCCCAGT GGGTCCTTCC

951 ATCCTGCACT GCCGCGTTCT ACACGTGGAC TACGCACTCA AGGTCTGTGT

1001 GGATATCCCA GGAACGTCCA AGCTGCTGCT GGAGCTGCCA CTGGTGATCG

1051 GCACCATTCC CTTGCACCCT TTTGGCAGCC GTTCCTCCAG CGTGGGCAGC

1101 CACGCCAGCT TCCTGCTGGA CTGGAGGCTG GGGGCCTTGC CGGAGCGGCC

1151 TGAGGCTCCT CCTGAGTACT CGGAGGTGGT AGCCGACACT GAGGAGGCAG

1201 CCTTGGGGCA GAGCCCCTTC CCGCTTCCGC AGGACCCCGA CATGAGCCTT

1251 GAAGGCCCGT TCTTCGCCTA CATCCAAGAG TTCCGCTACC GCCCGCCACC

1301 CCTGTACTCT GAGGAGGATC CAAACCCACT CTTGGGGGAC ATGAGGCCGC

1351 GCTGCATGAC TTGCTGAACG GCACAGGGAC CCCTCGAGGA ACAAGGTTGC

1401 ACACCAGCTT TCAGCCACCA TGACTGTGGG GAGTGGCTGG ACCAAGGGCT

1451 GACCTCCCCG ACTGCATCAA AGTTGGGGAA CCAAGTCTCA GAGTGAGGCG

1501 GGGGCCTTTC GGATATCACA TGGGACAGAG GAAGAGCCCG GCTGGAATCT

1551 GACTTACCTG GACCGCTGTC CTTGTGAGGC ATTGAATGCC CAGTGCAGTA

1601 TCCGAGAGAC TGTTTAATAA CCTGTCTTCC CAGCCAATTG GTGGTGCTGG

1651 AATCCCCTAG GAGCCTTCAG TCTGGGAGAA ACAGAGCCAG ACATAGACAG

1701 TTCCAGCATC ACAGAACCAG AAGAAGAGAC CTGCAACTGT GAGAGTCCAG

1751 ACAGGAAGCA GAGAAGGCGT CCTTGCGGAA AGGGCATTTT AGCTGAGGCT

1801 TTGGAGTACG AATAGGAGCT CAGCAGGCAG ACGAATGAGG AATAAAGGTC

1851 AGAGAAGGTC AGAGCTGAGT GACGTTTGGA ATCCACCCCG TTTATTGTAG

1901 AACTGGGGGT TCAGAGGGCA GGTGCCTCAG AGTTGAGGCC ACACAGTGAG

1951 GTCTGGTGGG TGAAAGGACC CAGGAACGAG GCGTTCAGGA AAGCAGGTTG

2001 TCAGAGCTAT GTGGAGTCTG TGGGTGGCAG GGGCAGCCGC TCCAGCCTTT

2051 GAAGACTTTG AAAGCCAGAG ATTCCTGGCG CAGGCTTGGA CTTCCTGGGA

2101 GCTCCTCCAA GTACCCAGGG GCATCAGAGC TGCCTGGGTG TTACATGGCC

2151 CAGGGAACCC AGGTTCAGGG TAGGACAGGC AAGACCAGAT ACCCAATGTG

2201 CAAAGTGAAA ACACTGGGCT CCCTGTTAAA CGATGAAGAA TTCAAGACAG

2251 TGACAGCATT ACGTCACCCC TGGGGACAGA GGTCAGCCTA AGGTGACACA

2301 CGGGGACTAC TGTGCTTCCG GAGGCTCCCT GTGTCCTGGA GGAGAAAAGC

2351 ATTAGAGGGG GCAGCTGGAC AAGCTCCCAA CTGCAGAGTC CCAGCCCTGG

2401 CTGGGGCAGG GCCCCGGCCT GGGACTCAGC ATTTCTGATA TGCCTTAAGA

2451 ATTCATTCTG TTTTGTACAA TTATTTTTTA AAAGTAAACG TGTGGAGAAA

2501 GAAAAAAAAA AAAAAAAA

B.氨基酸序列：PP2703(SEQ ID NO：2)长度：407个氨基酸

1 MLFDKVKAFS VQLDGATAGV EPVFSGGQAV AGRVLLELSS AARVGALRLR

51 ARGRAHVHWT ESRSAGSSTA YTQSYSERVE VVSHRATLLA PDTGETTTLP

101 PGRHEFLFSF QLPPTLVTSF EGKHGSVRYC IKATLHRPWV PARRARKVFT

151 VIEPVDINTP ALLAPQAGAR EKVARSWYCN RGLVSLSAKI DRKGYTPGEV

201 IPVFAEIDNG STRPVLPRAA VVQTQTFMAR GARKQKRAVV ASLAGEPVGP

251 GQRALWQGRA LRIPPVGPSI LHCRVLHVDY ALKVCVDIPG TSKLLLELPL

301 VIGTIPLHPF GSRSSSVGSH ASFLLDWRLG ALPERPEAPP EYSEVVADTE

351 EAALGQSPFP LPQDPDMSLE GPFFAYIQEF RYRPPPLYSE EDPNPLLGDM

401 RPRCMTC

C.核苷酸及氨基酸组合序列

克隆号：PP2703(SEQ ID NO：3)

起始编码子：144 ATG 终止编码子：1367 TGA

蛋白质分子量：44376.53

1 GG GAT TTT CTG CTC CGG TTG GTG AGC GCG CCT GCG CGT TGA CGG CGA 47

48 TTT TGC GTT CTG AGG CTG CAG CGT CGG CAT CTT GAG CTG CCG GTT CGC 95

96 GAG TTC GAG GCC AGG TTC CGC CTG TCG TGG GTT CGC ACC CCG GAC GCG 143

144 ATG CTA TTC GAC AAG GTG AAA GCG TTC TCG GTG CAG TTG GAC GGC GCG 191

1 Met Leu Phe Asp Lys Val Lys Ala Phe Ser Val Gln Leu Asp Gly Ala 16

192 ACC GCG GGC GTC GAG CCC GTG TTT AGC GGC GGC CAG GCC GTG GCG GGC 239

17 Thr Ala Gly Val Glu Pro Val Phe Ser Gly Gly Gln Ala Val Ala Gly 32

240 CGG GTG CTG CTG GAG CTG TCA AGC GCC GCG CGT GTG GGT GCC CTG AGG 287

33 Arg Val Leu Leu Glu Leu Ser Ser Ala Ala Arg Val Gly Ala Leu Arg 48

288 CTG CGC GCG CGG GGC CGC GCC CAC GTG CAC TGG ACC GAG TCG CGC AGC 335

49 Leu Arg Ala Arg Gly Arg Ala His Val His Trp Thr Glu Ser Arg Ser 64

336 GCG GGC TCG AGC ACG GCT TAC ACG CAG AGC TAC AGT GAA CGC GTG GAG 383

65 Ala Gly Ser Ser Thr Ala Tyr Thr Gln Ser Tyr Ser Glu Arg Val Glu 80

384 GTC GTG AGC CAC CGC GCC ACG CTC CTG GCG CCA GAT ACC GGG GAG ACC 431

81 Val Val Ser His Arg Ala Thr Leu Leu Ala Pro Asp Thr Gly Glu Thr 96

432 ACG ACG CTG CCT CCT GGG CGC CAT GAG TTC CTG TTC AGC TTC CAG CTG 479

97 Thr Thr Leu Pro Pro Gly Arg His Glu Phe Leu Phe Ser Phe Gln Leu 112

480 CCC CCG ACC CTG GTG ACA TCC TTC GAG GGC AAA CAC GGT AGT GTC CGC 527

113 Pro Pro Thr Leu Val Thr Ser Phe Glu Gly Lys His Gly Ser Val Arg 128

528 TAC TGT ATC AAG GCC ACC CTG CAC CGG CCC TGG GTC CCA GCA CGC CGG 575

129 Tyr Cys Ile Lys Ala Thr Leu His Arg Pro Trp Val Pro Ala Arg Arg 144

576 GCA AGG AAG GTG TTC ACT GTC ATC GAG CCT GTG GAC ATC AAC ACG CCA 623

145 Ala Arg Lys Val Phe Thr Val Ile Glu Pro Val Asp Ile Asn Thr Pro 160

624 GCC CTG CTG GCA CCT CAA GCG GGG GCT CGG GAA AAG GTT GCC CGA TCC 671

161 Ala Leu Leu Ala Pro Gln Ala Gly Ala Arg Glu Lys Val Ala Arg Ser 176

672 TGG TAC TGT AAC CGT GGC CTA GTC TCC CTT TCG GCC AAG ATC GAC CGC 719

177 Trp Tyr Cys Asn Arg Gly Leu Val Ser Leu Ser Ala Lys Ile Asp Arg 192

720 AAG GGC TAC ACC CCA GGA GAG GTC ATC CCT GTC TTT GCC GAG ATC GAC 767

193 Lys Gly Tyr Thr Pro Gly Glu Val Ile Pro Val Phe Ala Glu Ile Asp 208

768 AAC GGC TCC ACA CGT CCT GTG CTG CCT CGG GCA GCC GTG GTG CAG ACA 815

209 Ash Gly Ser Thr Arg Pro Val Leu Pro Arg Ala Ala Val Val Gln Thr 224

816 CAG ACG TTC ATG GCC CGA GGC GCC CGA AAG CAG AAA CGG GCA GTG GTG 863

225 Gln Thr Phe Met Ala Arg Gly Ala Arg Lys Gln Lys Arg Ala Val Val 240

864 GCC AGC CTC GCG GGC GAG CCG GTG GGC CCC GGG CAG CGG GCG CTG TGG 911

241 Ala Ser Leu Ala Gly Glu Pro Val Gly Pro Gly Gln Arg Ala Leu Trp 256

912 CAG GGC CGG GCA CTG CGG ATC CCC CCA GTG GGT CCT TCC ATC CTG CAC 959

257 Gln Gly Arg Ala Leu Arg Ile Pro Pro Val Gly Pro Ser Ile Leu His 272

960 TGC CGC GTT CTA CAC GTG GAC TAC GCA CTC AAG GTC TGT GTG GAT ATC 1007

273 Cys Arg Val Leu His Val Asp Tyr Ala Leu Lys Val Cys Val Asp Ile 288

1008 CCA GGA ACG TCC AAG CTG CTG CTG GAG CTG CCA CTG GTG ATC GGC ACC 1055

289 Pro Gly Thr Ser Lys Leu Leu Leu Glu Leu Pro Leu Val Ile Gly Thr 304

1056 ATT CCC TTG CAC CCT TTT GGC AGC CGT TCC TCC AGC GTG GGC AGC CAC 1103

305 Ile Pro Leu His Pro Phe Gly Ser Arg Ser Ser Ser Val Gly Ser His 320

1104 GCC AGC TTC CTG CTG GAC TGG AGG CTG GGG GCC TTG CCG GAG CGG CCT 1151

321 Ala Ser Phe Leu Leu Asp Trp Arg Leu Gly Ala Leu Pro Glu Arg Pro 336

152 GAG GCT CCT CCT GAG TAC TCG GAG GTG GTA GCC GAC ACT GAG GAG GCA 1199

337 Glu Ala Pro Pro Glu Tyr Ser Glu Val Val Ala Asp Thr Glu Glu Ala 352

1200 GCC TTG GGG CAG AGC CCC TTC CCG CTT CCG CAG GAC CCC GAC ATG AGC 1247

353 Ala Leu Gly Gln Ser Pro Phe Pro Leu Pro Gln Asp Pro Asp Met Ser 368

1248 CTT GAA GGC CCG TTC TTC GCC TAC ATC CAA GAG TTC CGC TAC CGC CCG 1295

369 Leu Glu Gly Pro Phe Phe Ala Tyr Ile Gln Glu Phe Arg Tyr Arg Pro 384

1296 CCA CCC CTG TAC TCT GAG GAG GAT CCA AAC CCA CTC TTG GGG GAC ATG 1343

385 Pro Pro Leu Tyr Ser Glu Glu Asp Pro Asn Pro Leu Leu Gly Asp Met 400

1344 AGG CCG CGC TGC ATG ACT TGC TGA ACG GCA CAG GGA CCC CTC GAG GAA 1391

401 Arg Pro Arg Cys Met Thr Cys *** 408

1392 CAA GGT TGC ACA CCA GCT TTC AGC CAC CAT GAC TGT GGG GAG TGG CTG 1439

1440 GAC CAA GGG CTG ACC TCC CCG ACT GCA TCA AAG TTG GGG AAC CAA GTC 1487

1488 TCA GAG TGA GGC GGG GGC CTT TCG GAT ATC ACA TGG GAC AGA GGA AGA 1535

1536 GCC CGG CTG GAA TCT GAC TTA CCT GGA CCG CTG TCC TTG TGA GGC ATT 1583

1584 GAA TGC CCA GTG CAG TAT CCG AGA GAC TGT TTA ATA ACC TGT CTT CCC 1631

1632 AGC CAA TTG GTG GTG CTG GAA TCC CCT AGG AGC CTT CAG TCT GGG AGA 1679

1680 AAC AGA GCC AGA CAT AGA CAG TTC CAG CAT CAC AGA ACC AGA AGA AGA 1727

1728 GAC CTG CAA CTG TGA GAG TCC AGA CAG GAA GCA GAG AAG GCG TCC TTG 1775

1776 CGG AAA GGG CAT TTT AGC TGA GGC TTT GGA GTA CGA ATA GGA GCT CAG 1823

1824 CAG GCA GAC GAA TGA GGA ATA AAG GTC AGA GAA GGT CAG AGC TGA GTG 1871

1872 ACG TTT GGA ATC CAC CCC GTT TAT TGT AGA ACT GGG GGT TCA GAG GGC 1919

1920 AGG TGC CTC AGA GTT GAG GCC ACA CAG TGA GGT CTG GTG GGT GAA AGG 1967

1968 ACC CAG GAA CGA GGC GTT CAG GAA AGC AGG TTG TCA GAG CTA TGT GGA 2015

2016 GTC TGT GGG TGG CAG GGG CAG CCG CTC CAG CCT TTG AAG ACT TTG AAA 2063

2064 GCC AGA GAT TCC TGG CGC AGG CTT GGA CTT CCT GGG AGC TCC TCC AAG 2111

2112 TAC CCA GGG GCA TCA GAG CTG CCT GGG TGT TAC ATG GCC CAG GGA ACC 2159

2160 CAG GTT CAG GGT AGG ACA GGC AAG ACC AGA TAC CCA ATG TGC AAA GTG 2207

2208 AAA ACA CTG GGC TCC CTG TTA AAC GAT GAA GAA TTC AAG ACA GTG ACA 2255

2256 GCA TTA CGT CAC CCC TGG GGA CAG AGG TCA GCC TAA GGT GAC ACA CGG 2303

2304 GGA CTA CTG TGC TTC CGG AGG CTC CCT GTG TCC TGG AGG AGA AAA GCA 2351

2352 TTA GAG GGG GCA GCT GGA CAA GCT CCC AAC TGC AGA GTC CCA GCC CTG 2399

2400 GCT GGG GCA GGG CCC CGG CCT GGG ACT CAG CAT TTC TGA TAT GCC TTA 2447

2448 AGA ATT CAT TCT GTT TTG TAC AAT TAT TTT TTA AAA GTA AAC GTG TGG 2495

2496 AGA AAG AAA AAA AAA AAA AAA AA 2518

2.PP3227

A：核苷酸序列：PP3227(SEQ ID NO：4)长度：1384bp

1 ATCAACATTG TCTGTAATTC AGCTTATGTT GTAAACGTAG CCAGTCACAT

51 TCACATGGAA ACTGCTACAG TTAAAAGTAC ACTAGACCCA GAACTGCTTA

101 ATTTGTTTCA CTTATTCTCA AATGCTGCAT GCTACATGCC AAACAGGTGA

151 GACAGCTGGT CATGTACAGT GACATTGTCT GTCATCATTT GCTCATATGG

201 GGATACTTAA ACAATTAAAA ACTGACAATG GACTCGCTTA TACTAGTCAT

251 GCTTTTCAAA ATTTCTTATA GCTTTGGGCT ATAACCCATA AAATTGGAAT

301 TCCTTATAAT CCTAAAGGAC AAGGCATTGT AGAGCAGGCA CATTGAACAT

351 TACAACACAT GTTGAAAAGA CGAAAGGGGT ATAGGAGGCC AACTACCACC

401 TCAATCAAAA CTACATTTAG CCTTATTTAC TTCACATTTT TGGACTCCTG

451 GTACAGATGG TAAGACTCCA GCAGAAAGAC ATTGGCAAGT GTTAGAGGAA

501 AAGAGGAAAG TTTATCTGAA AGCATTATGG AAATCCCTGG AAGGACAATG

551 GAAAGGTTGG GTGGATTTAC TGACGTGGAG AAGAGGGTAT GCTTGTGTTT

601 TCACAGGAGA TGGACAAGCC GTGTGGGTGC CCTCAAGGTG TGTGCAACCA

651 TGGAATGGGA GACTGGAGGA ACCCAGGGTG GCCAACCATG GGTCCGGTCC

701 CTCTGGTGTG AGCCATGAGC CAGCTGAGCC TGAGTGCGAA GACGGAGAGA

751 AGGCCGACCA CAGTCATGAC ATCAACCCCC ATAACCTGGG GACAACTCAA

801 GAAAACCACA CAGGAGGCTG AGAAACTACT GGAGCACCAG GGACAGTCTG

851 TAAAGTTGGA TGGACCACCA ATGGGAAAAT GAGAGCTGCC CACCCTGGCC

901 TTACACTCCT TCAATTAATA CATAAACAGA AAGGAGGATA TACAGAGAGC

951 CAAAGGCCCA TGGGACGTGA CCAACATTCC ACTGAGTCTA TACGATCAAA

1001 CAGCAAACTG TTTATCATGA ATACAGAATG TGGGCAAACT CATGACTGTG

1051 CCTGCCCCAG AAGGTTTGCT GAGGGCAATT GCTTCCTGAC GCCAAGCTCC

1101 TTGAGGTTAT CTATTGGGAC ATCCAGAGAA TGCAGTCTTG CAAGCCTACT

1151 CTGGACCGAG CAGCTGACCC CCTCTTCCAC TTCCCTTCAC ACTATCTCTT

1201 TTGCCTAATA AATACGGAAG GCTGTGTACA AGGTCAGGTC CCTTGTCCAC

1251 TAGAGGCAAG GTGCTTCCTG ACCCTTCTTC CAAATATAAA AAAAAAAAAA

1301 AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA

1351 AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAA

B.氨基酸序列：PP3227(SEQ ID NO：5)长度：109个氨基酸

1 MRAAHPGLTL LQLIHKQKGG YTESQRPMGR DQHSTESIRS NSKLFIMNTE

51 CGQTHDCACP RRFAEGNCFL TPSSLRLSIG TSRECSLASL LWTEQLTPSS

101 TSLHTISFA

C.核苷酸及氨基酸组合序列

克隆号：PP3227(SEQ ID NO：6)

起始编码子：879 ATG 终止编码子：1208 TAA

蛋白质分子量：12067.06

1 AT CAA CAT TGT CTG TAA TTC AGC TTA TGT TGT AAA CGT AGC CAG TCA 47

48 CAT TCA CAT GGA AAC TGC TAC AGT TAA AAG TAC ACT AGA CCC AGA ACT 95

96 GCT TAA TTT GTT TCA CTT ATT CTC AAA TGC TGC ATG CTA CAT GCC AAA 143

144 CAG GTG AGA CAG CTG GTC ATG TAC AGT GAC ATT GTC TGT CAT CAT TTG 191

192 CTC ATA TGG GGA TAC TTA AAC AAT TAA AAA CTG ACA ATG GAC TCG CTT 239

240 ATA CTA GTC ATG CTT TTC AAA ATT TCT TAT AGC TTT GGG CTA TAA CCC 287

288 ATA AAA TTG GAA TTC CTT ATA ATC CTA AAG GAC AAG GCA TTG TAG AGC 335

336 AGG CAC ATT GAA CAT TAC AAC ACA TGT TGA AAA GAC GAA AGG GGT ATA 383

384 GGA GGC CAA CTA CCA CCT CAA TCA AAA CTA CAT TTA GCC TTA TTT ACT 431

432 TCA CAT TTT TGG ACT CCT GGT ACA GAT GGT AAG ACT CCA GCA GAA AGA 479

480 CAT TGG CAA GTG TTA GAG GAA AAG AGG AAA GTT TAT CTG AAA GCA TTA 527

528 TGG AAA TCC CTG GAA GGA CAA TGG AAA GGT TGG GTG GAT TTA CTG ACG 575

576 TGG AGA AGA GGG TAT GCT TGT GTT TTC ACA GGA GAT GGA CAA GCC GTG 623

624 TGG GTG CCC TCA AGG TGT GTG CAA CCA TGG AAT GGG AGA CTG GAG GAA 671

672 CCC AGG GTG GCC AAC CAT GGG TCC GGT CCC TCT GGT GTG AGC CAT GAG 719

720 CCA GCT GAG CCT GAG TGC GAA GAC GGA GAG AAG GCC GAC CAC AGT CAT 767

768 GAC ATC AAC CCC CAT AAC CTG GGG ACA ACT CAA GAA AAC CAC ACA GGA 815

816 GGC TGA GAA ACT ACT GGA GCA CCA GGG ACA GTC TGT AAA GTT GGA TGG 863

864 ACC ACC AAT GGG AAA ATG AGA GCT GCC CAC CCT GGC CTT ACA CTC CTT 911

1 Met Arg Ala Ala His Pro Gly Leu Thr Leu Leu 11

912 CAA TTA ATA CAT AAA CAG AAA GGA GGA TAT ACA GAG AGC CAA AGG CCC 959

12 Gln Leu Ile His Lys Gln Lys Gly Gly Tyr Thr Glu Ser Gln Arg Pro 27

960 ATG GGA CGT GAC CAA CAT TCC ACT GAG TCT ATA CGA TCA AAC AGC AAA 1007

28 Met Gly Arg Asp Gln His Ser Thr Glu Ser Ile Arg Ser Asn Ser Lys 43

1008 CTG TTT ATC ATG AAT ACA GAA TGT GGG CAA ACT CAT GAC TGT GCC TGC 1055

44 Leu Phe Ile Met Asn Thr Glu Cys Gly Gln Thr His Asp Cys Ala Cys 59

1056 CCC AGA AGG TTT GCT GAG GGC AAT TGC TTC CTG ACG CCA AGC TCC TTG 1103

60 Pro Arg Arg Phe Ala Glu Gly Asn Cys Phe Leu Thr Pro Ser Ser Leu 75

1104 AGG TTA TCT ATT GGG ACA TCC AGA GAA TGC AGT CTT GCA AGC CTA CTC 1151

76 Arg Leu Ser Ile Gly Thr Ser Arg Glu Cys Ser Leu Ala Ser Leu Leu 91

1152 TGG ACC GAG CAG CTG ACC CCC TCT TCC ACT TCC CTT CAC ACT ATC TCT 1199

92 Trp Thr Glu Gln Leu Thr Pro Ser Ser Thr Ser Leu His Thr Ile Ser 107

1200 TTT GCC TAA TAA ATA CGG AAG GCT GTG TAC AAG GTC AGG TCC CTT GTC 1247

108 Phe Ala *** 110

1248 CAC TAG AGG CAA GGT GCT TCC TGA CCC TTC TTC CAA ATA TAA AAA AAA 1295

1296 AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA 1343

1344 AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AA 1384

3.PP3564

A：核苷酸序列(SEQ ID NO：7)长度：1009bp

1 GTTCAAGTGT TAGAATGGAG AGCTGGAGTT CGTTCAGAAT AGTGCTGTGT

51 GTTACCACGT CTCCCCTGCA CCCCATTCCT ACCTTGTAGC TCATGACCAT

101 TGTGTATAGC ATTTCTACAC TTTGTTTCTT GGTCCTTGGC AATAAAAAGA

151 ATGATCTCCC TGAGCCTTTG ACCCCAGATA AACCCCTCCC AATTAATGCA

201 TTTTCATTTC CTACTGATAC AAGGCCTGGA GAGGGCTGTT GGGGGCCCTC

251 AGGGAGGGTT CAACTCTGAG ACGAGAACTG CCTTGGTGAA GGCAAGTTCA

301 AGCACCACTT GAGACTGGGG GCAGCATGGA GTAGGGCAGG GCTACGGGGA

351 TACACGGTGC ACCCTGCAAC TTATACCTGA GCCCAGTACA ACAAAGGTGA

401 CGGGTGGTGT AGGTACACAC CCAGAGATGG AGCACTGCAG ATCAGCAACC

451 TCAGCCCCAC CTGGGAATTC GCTGGAAATG CAGGCTCAAG CCCCTCCCCA

501 CACCTGGTGA ATGAGAGAGC CCCAGCCTGA CCCAAGCCCA GGGCGACTCC

551 CATACCCTGA AGCCTGGGGC ATGCTGGGCA GCACCGGTGC CCAAATCTGG

601 CTGGTGGACA GAAGCACCTG GAGAGTTGGA GAGCTTTTTA AAAAGACATC

651 TCTCAGCACT TCCCTCTCTG CAGATTCTGA CTCAATTAAA GAATATCTCC

701 TCCAGGTGTG GTGGCTCACA CCTGTAATCC CAGCACTTTG GGAAGCCGAG

751 GTGGATGGAC CACGATGTCA GGAGTTCAAG ACCAGCCTGG CCAACATGGT

801 GAAACCCCAT CTCTCCTAAA GATACAAAAA AAATTAGCCA GGCGTGGCAG

851 TGGGCGCCTG TAATCCCAGC TACTCAGGAG ACTGAGGCAG AGAATTGCTT

901 GAAGCCAGAG GCAGAGGTTG CAATGAGCCG GGATCACGCC ACTGAACTCC

951 AGCCTGGGTG ACAGAGTGAG ACTCTTGTCT CCAAAAAAAA AAAAAAAAAA

1001 AAAAAAAAA

B：氨基酸序列(SEQ ID NO：8)长度：102个氨基酸

1 MREPQPDPSP GRLPYPEAWG MLGSTGAQIW LVDRSTWRVG ELFKKTSLST SLSADSDSIK

61 EYLLQVWWLT PVIPALWEAE VDGPRCQEFK TSLANMVKPH LS

C.核苷酸及氨基酸组合序列

克隆号：PP3564(SEQ ID NO：9)

起始编码子：511 ATG 终止编码子：819 TAA

蛋白质分子量：11514

1 GTT CAA GTG TTA GAA TGG AGA GCT GGA GTT CGT TCA GAA TAG TGC TGT 48

49 GTG TTA CCA CGT CTC CCC TGC ACC CCA TTC CTA CCT TGT AGC TCA TGA 96

97 CCA TTG TGT ATA GCA TTT CTA CAC TTT GTT TCT TGG TCC TTG GCA ATA 144

145 AAA AGA ATG ATC TCC CTG AGC CTT TGA CCC CAG ATA AAC CCC TCC CAA 192

193 TTA ATG CAT TTT CAT TTC CTA CTG ATA CAA GGC CTG GAG AGG GCT GTT 240

241 GGG GGC CCT CAG GGA GGG TTC AAC TCT GAG ACG AGA ACT GCC TTG GTG 288

289 AAG GCA AGT TCA AGC ACC ACT TGA GAC TGG GGG CAG CAT GGA GTA GGG 336

337 CAG GGC TAC GGG GAT ACA CGG TGC ACC CTG CAA CTT ATA CCT GAG CCC 384

385 AGT ACA ACA AAG GTG ACG GGT GGT GTA GGT ACA CAC CCA GAG ATG GAG 432

433 CAC TGC AGA TCA GCA ACC TCA GCC CCA CCT GGG AAT TCG CTG GAA ATG 480

481 CAG GCT CAA GCC CCT CCC CAC ACC TGG TGA ATG AGA GAG CCC CAG CCT 528

1 Met Arg Glu Pro Gln Pro 6

529 GAC CCA AGC CCA GGG CGA CTC CCA TAC CCT GAA GCC TGG GGC ATG CTG 576

7 Asp Pro Ser Pro Gly Arg Leu Pro Tyr Pro Glu Ala Trp Gly Met Leu 22

577 GGC AGC ACC GGT GCC CAA ATC TGG CTG GTG GAC AGA AGC ACC TGG AGA 624

23 Gly Ser Thr Gly Ala Gln Ile Trp Leu Val Asp Arg Ser Thr Trp Arg 38

625 GTT GGA GAG CTT TTTAAA AAG ACA TCT CTC AGC ACT TCC CTC TCT GCA 672

39 Val Gly Glu Leu Phe Lys Lys Thr Ser Leu Ser Thr Ser Leu Ser Ala 54

673 GAT TCT GAC TCA ATT AAA GAA TAT CTC CTC CAG GTG TGG TGG CTC ACA 720

55 Asp Ser Asp Ser Ile Lys Glu Tyr Leu Leu Gln Val Trp Trp Leu Thr 70

721 CCT GTA ATC CCA GCA CTT TGG GAA GCC GAG GTG GAT GGA CCA CGA TGT 768

71 Pro Val Ile Pro Ala Leu Trp Glu Ala Glu Val Asp Gly Pro Arg Cys 86

769 CAG GAG TTC AAG ACC AGC CTG GCC AAC ATG GTG AAA CCC CAT CTC TCC 816

87 Gln Glu Phe Lys Thr Ser Leu Ala Asn Met Val Lys Pro His Leu Ser 102

817 TAA AGA TAC AAA AAA AAT TAG CCA GGC GTG GCA GTG GGC GCC TGT AAT 864

103 *** 103

865 CCC AGC TAC TCA GGA GAC TGA GGC AGA GAA TTG CTT GAA GCC AGA GGC 912

913 AGA GGT TGC AAT GAG CCG GGA TCA CGC CAC TGA ACT CCA GCC TGG GTG 960

961 ACA GAG TGA GAC TCT TGT CTC CAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA 1008

1009 A 1009

4.PP3686

A：核苷酸序列(SEQ ID NO：10)长度：1880bp

1 CCAGCCTCAG CTGGCCACCA GGCCGTGGAT CCAGGACATC GAGGGAGCCA

51 GCGCCAAGGA CCTTTGCAGC GCGTCTTCGG TTGTGTCCCC GTCTTTTGTA

101 CCAACAGGGG AGAAGCCATG TGAGCAAGTC CAGTTCCAGC CCAACACAGT

151 GAACACTTTG GCCTGCCCGC TCCTCTCCAA CCTGGCGACC CGACTCTGGC

201 TACGCAACGG GGCCCCCGTC AATGCCTCGG CCTCCTGCCA CGTGCTACCC

251 ACTGGGGACC TGCTGCTGGT GGGCACCCAA CAGCTGGGGG AGTTCCAGTG

301 CTGGTCACTA GAGGAGGGCT TCCAGCAGCT GGTAGCCAGC TACTGCCCAG

351 AGGTGGTGGA GGACGGGGTG GCAGACCAAA CAGATGAGGG TGGCAGTGTA

401 CCCGTCATTA TCAGCACATC GCGTGTGAGT GCACCAGCTG GTGGCAAGGC

451 CAGCTGGGGT GCAGACAGGT CCTACTGGAA GGAGTTCCTG GTGATGTGCA

501 CGCTCTTTGT GCTGGCCGTG CTGCTCCCAG TTTTATTCTT GCTCTACCGG

551 CACCGGAACA GCATGAAAGT CTTCCTGAAG CAGGGGGAAT GTGCCAGCGT

601 GCACCCCAAG ACCTGCCCTG TGGTGCTGCC CCCTGAGACC CGCCCACTCA

651 ACGGCCTAGG GCCCCCTAGC ACCCCGCTCG ATCACCGAGG GTACCAGTCC

701 CTGTCAGACA GCCCCCCGGG GGCCCGAGTC TTCACTGAGT CAGAGAAGAG

751 GCCACTCAGC ATCCAAGACA GCTTCGTGGA GGTATCCCCA GTGTGCCCCC

801 GGCCCCGGGT CCGCCTTGGC TCGGAGATCC GTGACTCTGT GGTGTGAGAG

851 CTGACTTCCA GAGGACGCTG CCCTGGCTTC AGGGGCTGTG AATGCTCGGA

901 GAGGGTCAAC TGGACCTCCC CTCCGCTCTG CTCTTCGTGG AACACGACCG

951 TGGTGCCCGG CCCTTGGGAG CCTTGGGGCC AGCTGGCCTG CTGCTCTCCA

1001 GTCAAGTAGC GAAGCTCCTA CCACCCAGAC ACCCAAACAG CCGTGGCCCC

1051 AGAGGTCCTG GCCAAATATG GGGGCCTGCC TAGGTTGGTG GAACAGTGCT

1101 CCTTATGTAA ACTGAGCCCT TTGTTTAAAA AACAATTCCA AATGTGAAAC

1151 TAGAATGAGA GGGAAGAGAT AACATGGCAT GCAGCACACA CGGCTGCTCC

1201 AGTTCATGGC CTCCCAGGGG TGCTGGGGAT GCATCCAAAG TGGTTGTCTG

1251 AGACAGAGTT GGAAACCCTC ACCAACTGGC CTCTTCACCT TCCACATTAT

1301 CCCGCTGCCA CCGGCTGCCC TGTCTCACTG CAGATTCAGG ACCAGCTTGG

1351 GCTCCGTGCG TTCTGCCTTG CCAGTCAGCC GAGGATGTAG TTGTTGCTGC

1401 CGTCGTCCCA CCACCTCAGG GACCAGAGGG CTAGGTTGGC ACTGCGGCCC

1451 TCACCAGGTC CTGGGCTCGG ACCCAACTCC TGGACCTTTC CAGCCTGTAT

1501 CAGGCTGTGG CCACACGAGA GGACAGCGCG AGCTCAGGAG AGATTTCGTG

1551 ACAATGTACG CCTTTCCCTC AGAATTCAGT GAAGAGACTG TCGCCTGCCT

1601 TCCTCCGTTG TTGCGTGAGA ACCCGTGTGC CCCTTCCCAC CATATCCACC

1651 CTCGCTCCAT CTTTGAACTC AAACACGAGG AACTAACTGC ACCCTGGTCC

1701 TCTCCCCAGT CCCCAGTTCA CCCTCCATCC CTCACCTTCC TCCACTCTAA

1751 GGGATATCAA CACTGCCCAG CACAGGGGCC CTGAATTTAT GTGGTTTTTA

1801 TATATTTTTT AATAAGATGC ACTTTATGTC ATTTTTTAAT AAAGTCTGAA

1851 GAATTACTGT TTAAAAAAAA AAAAAAAAAA

B：氨基酸序列(SEQ ID NO：11)长度：201个氨基酸

1 MQHTRLLQFM ASQGCWGCIQ SGCLRQSWKP SPTGLFTFHI IPLPPAALSH CRFRTSLGSV

61 RSALPVSRGC SCCCRRPTTS GTRGLGWHCG PHQVLGSDPT PGPFQPVSGC GHTRGQRELR

121 RDFVTMYAFP SEFSEETVAC LPPLLRENPC APSHHIHPRS IFELKHEELT APWSSPQSPV

181 HPPSLTFLHS KGYQHCPAQG P

C.核苷酸及氨基酸组合序列

克隆号：PP3686(SEQ ID NO：12)

起始编码子：1179 ATG 终止编码子：1784 TGA

蛋白质分子量：22155

1 CC AGC CTC AGC TGG CCA CCA GGC CGT GGA TCC AGG ACA TCG AGG GAG 47

48 CCA GCG CCA AGG ACC TTT GCA GCG CGT CTT CGG TTG TGT CCC CGT CTT 95

96 TTG TAC CAA CAG GGG AGA AGC CAT GTG AGC AAG TCC AGT TCC AGC CCA 143

144 ACA CAG TGA ACA CTT TGG CCT GCC CGC TCC TCT CCA ACC TGG CGA CCC 191

192 GAC TCT GGC TAC GCA ACG GGG CCC CCG TCA ATG CCT CGG CCT CCT GCC 239

240 ACG TGC TAC CCA CTG GGG ACC TGC TGC TGG TGG GCA CCC AAC AGC TGG 287

288 GGG AGT TCC AGT GCT GGT CAC TAG AGG AGG GCT TCC AGC AGC TGG TAG 335

336 CCA GCT ACT GCC CAG AGG TGG TGG AGG ACG GGG TGG CAG ACC AAA CAG 383

384 ATG AGG GTG GCA GTG TAC CCG TCA TTA TCA GCA CAT CGC GTG TGA GTG 431

432 CAC CAG CTG GTG GCA AGG CCA GCT GGG GTG CAG ACA GGT CCT ACT GGA 479

480 AGG AGT TCC TGG TGA TGT GCA CGC TCT TTG TGC TGG CCG TGC TGC TCC 527

528 CAG TTT TAT TCT TGC TCT ACC GGC ACC GGA ACA GCA TGA AAG TCT TCC 575

576 TGA AGC AGG GGG AAT GTG CCA GCG TGC ACC CCA AGA CCT GCC CTG TGG 623

624 TGC TGC CCC CTG AGA CCC GCC CAC TCA ACG GCC TAG GGC CCC CTA GCA 671

672 CCC CGC TCG ATC ACC GAG GGT ACC AGT CCC TGT CAG ACA GCC CCC CGG 719

720 GGG CCC GAG TCT TCA CTG AGT CAG AGA AGA GGC CAC TCA GCA TCC AAG 767

768 ACA GCT TCG TGG AGG TAT CCC CAG TGT GCC CCC GGC CCC GGG TCC GCC 815

816 TTG GCT CGG AGA TCC GTG ACT CTG TGG TGT GAG AGC TGA CTT CCA GAG 863

864 GAC GCT GCC CTG GCT TCA GGG GCT GTG AAT GCT CGG AGA GGG TCA ACT 911

912 GGA CCT CCC CTC CGC TCT GCT CTT CGT GGA ACA CGA CCG TGG TGC CCG 959

960 GCC CTT GGG AGC CTT GGG GCC AGC TGG CCT GCT GCT CTC CAG TCA AGT 1007

1008 AGC GAA GCT CCT ACC ACC CAG ACA CCC AAA CAG CCG TGG CCC CAG AGG 1055

1056 TCC TGG CCA AAT ATG GGG GCC TGC CTA GGT TGG TGG AAC AGT GCT CCT 1103

1104 TAT GTA AAC TGA GCC CTT TGT TTA AAA AAC AAT TCC AAA TGT GAA ACT 1151

1152 AGA ATG AGA GGG AAG AGA TAA CAT GGC ATG CAG CAC ACA CGG CTG CTC 1199

1 Met Gln His Thr Arg Leu Leu 7

1200 CAG TTC ATG GCC TCC CAG GGG TGC TGG GGA TGC ATC CAA AGT GGT TGT 1247

8 Gln Phe Met Ala Ser Gln Gly Cys Trp Gly Cys Ile Gln Ser Gly Cys 23

1248 CTG AGA CAG AGT TGG AAA CCC TCA CCA ACT GGC CTC TTC ACC TTC CAC 1295

24 Leu Arg Gln Ser Trp Lys Pro Ser Pro Thr Gly Leu Phe Thr Phe His 39

1296 ATT ATC CCG CTG CCA CCG GCT GCC CTG TCT CAC TGC AGA TTC AGG ACC 1343

40 Ile Ile Pro Leu Pro Pro Ala Ala Leu Ser His Cys Arg Phe Arg Thr 55

1344 AGC TTG GGC TCC GTG CGT TCT GCC TTG CCA GTC AGC CGA GGA TGT AGT 1391

56 Ser Leu Gly Ser Val Arg Ser Ala Leu Pro Val Ser Arg Gly Cys Ser 71

1392 TGT TGC TGC CGT CGT CCC ACC ACC TCA GGG ACC AGA GGG CTA GGT TGG 1439

72 Cys Cys Cys Arg Arg Pro Thr Thr Ser Gly Thr Arg Gly Leu Gly Trp 87

1440 CAC TGC GGC CCT CAC CAG GTC CTG GGC TCG GAC CCA ACT CCT GGA CCT 1487

88 His Cys Gly Pro His Gln Val Leu Gly Ser Asp Pro Thr Pro Gly Pro 103

1488 TTC CAG CCT GTA TCA GGC TGT GGC CAC ACG AGA GGA CAG CGC GAG CTC 1535

104 Phe Gln Pro Val Ser Gly Cys Gly His Thr Arg Gly Gln Arg Glu Leu 119

1536 AGG AGA GAT TTC GTG ACA ATG TAC GCC TTT CCC TCA GAA TTC AGT GAA 1583

120 Arg Arg Asp Phe Val Thr Met Tyr Ala Phe Pro Ser Glu Phe Ser Glu 135

1584 GAG ACT GTC GCC TGC CTT CCT CCG TTG TTG CGT GAG AAC CCG TGT GCC 1631

136 Glu Thr Val Ala Cys Leu Pro Pro Leu Leu Arg Glu Asn Pro Cys Ala 151

1632 CCT TCC CAC CAT ATC CAC CCT CGC TCC ATC TTT GAA CTC AAA CAC GAG 1679

152 Pro Ser His His Ile His Pro Arg Ser Ile Phe Glu Leu Lys His Glu 167

1680 GAA CTA ACT GCA CCC TGG TCC TCT CCC CAG TCC CCA GTT CAC CCT CCA 1727

168 Glu Leu Thr Ala Pro Trp Ser Ser Pro Gln Ser Pro Val His Pro Pro 183

1728 TCC CTC ACC TTC CTC CAC TCT AAG GGA TAT CAA CAC TGC CCA GCA CAG 1775

184 Ser Leu Thr Phe Leu His Ser Lys Gly Tyr Gln His Cys Pro Ala Gln 199

1776 GGG CCC TGA ATT TAT GTG GTT TTT ATA TAT TTT TTA ATA AGA TGC ACT 1823

200 Gly Pro *** 202

1824 TTA TGT CAT TTT TTA ATA AAG TCT GAA GAA TTA CTG TTT AAA AAA AAA 1871

1872 AAA AAA AAA 1880

5.PP3774

A：核苷酸序列(SEQ ID NO：13)长度：1747bp

1 CCGGGTCCGC TGCCTGGCGC TGCGGGCGGC GGGCCATGGT GGTTTGGATT

51 GAGCCGGGCC CGGCCGGGGC GCCGAGTCGG AGGGGGTGGC AGTGAGCGGC

101 GGCAGAGGCT ACGGGGCTCG GTTTGGCTGA CTGGGGAGTC GGCAGGCGGC

151 AGGAACCATG CGAGGCCAGC GGAGCCTGCT GCTGGGCCCG GCCCGCCTCT

201 GCCTCCGCCT CCTTCTGCTG CTGGGTTACA GGCGCCGCTG TCCACCTCTA

251 CTCCGGGGTC TAGTACAGCG CTGGCGCTAC GGCAAGGTCT GCCTGCGCTC

301 CCTGCTCTAC AACTCCTTTG GGGGCAGTGA CACCGCTGTT GATGCTGCCT

351 TTGAGCCTGT CTACTGGCTG GTAGACAACG TGATCCGCTG GTTTGGAGTG

401 GTGTTCGTGG TCCTGGTGAT CGTGCTGACA GGCTCCATTG TAGCTATCGC

451 CTACCTGTGT GTCCTGCCTC TCATCCTCCG AACCTACTCA GTGCCACGAC

501 TCTGCTGGCA TTTCTTCTAT AGCCACTGGA ATCTGATCCT GATTGTCTTC

551 CACTACTACC AGGCCATCAC CACTCCGCCT GGGTACCCAC CCCAGGGCAG

601 GAATGATATC GCCACCGTCT CCATCTGTAA GAAGTGCATT TACCCCAAGC

651 CAGCCCGAAC ACACCACTGC AGCATCTGCA ACAGGTGTGT GCTGAAGATG

701 GATCACCACT GCCCCTGGCT AAACAATTGT GTGGGCCACT ATAACCATCG

751 GTACTTCTTC TCTTTCTGCT TTTTCATGAC TCTGGGCTGT GTCTACTGCA

801 GCTATGGAAG TTGGGACCTT TTCCGGGAGG CTTATGCTGC CATTGAGACT

851 TATCACCAGA CCCCACCACC CACCTTCTCC TTTCGAGAAA GGATGACTCA

901 CAAGAGTCTT GTCTACCTCT GGTTCCTGTG CAGTTCTGTG GCACTTGCCC

951 TGGGTGCCCT AACTGTATGG CATGCTGTTC TCATCAGTCG AGGTGAGACT

1001 AGCATCGAAA GGCACATCAA CAAGAAGGAG AGACGTCGGC TACAGGCCAA

1051 GGGCAGAGTA TTTAGGAATC CTTACAACTA CGGCTGCTTG GACAACTGGA

1101 AGGTATTCCT GGGTGTGGAT ACAGGAAGGC ACTGGCTTAC TCGGGTGCTC

1151 TTACCTTCTA GTCACTTGCC CCATGGGAAT GGAATGAGCT GGGAGCCCCC

1201 TCCCTGGGTG ACTGCTCACT CAGCCTCTGT GATGGCAGTG TGAGCTGGAC

1251 TGTGTCAGCC ACGACTCGAG CACTCATTCT GCTCCCTATG TTATTTCAAG

1301 GGCCTCCAAG GGCAGCTTTT CTCAGAATCC TTGATCAAAA AGAGCCAGTG

1351 GGCCTGCCTT AGGGTACCAT GCAGGACAAT TCAAGGACCA GCCTTTTTAC

1401 CACTGCAGAA GAAAGACACA ATGTGGAGAA ATCTTAGGAC TGACATCCCT

1451 TTACTCAGGC AAACAGAAGT TCCAACCCCA GACTAGGGGT CAGGCAGCTA

1501 GCTACCTACC TTGCCCAGTG CTGACCCGGA CCTCCTCCAG GATACAGCAC

1551 TGGAGTTGGC CACCACCTCT TCTACTTGCT GTCTGAAAAA ACACCTGACT

1601 AGTACAGCTG AGATCTTGGC TTCTCAACAG GGCAAAGATA CCAGGCCTGC

1651 TGCTGAGGTC ACTGCCACTT CTCACATGCT GCTTAAGGGA GCACAAATAA

1701 AGGTATTCGA TTTTTAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAA

B：氨基酸序列(SEQ ID NO：14)长度：361个氨基酸

1 MRGQRSLLLG PARLCLRLLL LLGYRRRCPP LLRGLVQRWR YGKVCLRSLL YNSFGGSDTA

61 VDAAFEPVYW LVDNVIRWFG VVFVVLVIVL TGSIVAIAYL CVLPLILRTY SVPRLCWHFF

121 YSHWNLILIV FHYYQAITTP PGYPPQGRND IATVSICKKC IYPKPARTHH CSICNRCVLK

181 MDHHCPWLNN CVGHYNHRYF FSFCFFMTLG CVYCSYGSWD LFREAYAAIE TYHQTPPPTF

241 SFRERMTHKS LVYLWFLCSS VALALGALTV WHAVLISRGE TSIERHINKK ERRRLQAKGR

301 VFRNPYNYGC LDNWKVFLGV DTGRHWLTRV LLPSSHLPHG NGMSWEPPPW VTAHSASVMA

361 V

C.核苷酸及氨基酸组合序列

克隆号：PP3774(SEQ ID NO：15)

起始编码子：158 ATG 终止编码子：1243 TGA

蛋白质分子量：41792

1 C CGG GTC CGC TGC CTG GCG CTG CGG GCG GCG GGC CAT GGT GGT TTG 46

47 GAT TGA GCC GGG CCC GGC CGG GGC GCC GAG TCG GAG GGG GTG GCA GTG 94

95 AGC GGC GGC AGA GGC TAC GGG GCT CGG TTT GGC TGA CTG GGG AGT CGG 142

143 CAG GCG GCA GGA ACC ATG CGA GGC CAG CGG AGC CTG CTG CTG GGC CCG 190

1 Met Arg Gly Gln Arg Ser Leu Leu Leu Gly Pro 11

191 GCC CGC CTC TGC CTC CGC CTC CTT CTG CTG CTG GGT TAC AGG CGC CGC 238

12 Ala Arg Leu Cys Leu Arg Leu Leu Leu Leu Leu Gly Tyr Arg Arg Arg 27

239 TGT CCA CCT CTA CTC CGG GGT CTA GTA CAG CGC TGG CGC TAC GGC AAG 286

28 Cys Pro Pro Leu Leu Arg Gly Leu Val Gln Arg Trp Arg Tyr Gly Lys 43

287 GTC TGC CTG CGC TCC CTG CTC TAC AAC TCC TTT GGG GGC AGT GAC ACC 334

44 Val Cys Leu Arg Ser Leu Leu Tyr Asn Ser Phe Gly Gly Ser Asp Thr 59

335 GCT GTT GAT GCT GCC TTT GAG CCT GTC TAC TGG CTG GTA GAC AAC GTG 382

60 Ala Val Asp Ala Ala Phe Glu Pro Val Tyr Trp Leu Val Asp Asn Val 75

383 ATC CGC TGG TTT GGA GTG GTG TTC GTG GTC CTG GTG ATC GTG CTG ACA 430

76 Ile Arg Trp Phe Gly Val Val Phe Val Val Leu Val Ile Val Leu Thr 91

431 GGC TCC ATT GTA GCT ATC GCC TAC CTG TGT GTC CTG CCT CTC ATC CTC 478

92 Gly Ser Ile Val Ala Ile Ala Tyr Leu Cys Val Leu Pro Leu Ile Leu 107

479 CGA ACC TAC TCA GTG CCA CGA CTC TGC TGG CAT TTC TTC TAT AGC CAC 526

108 Arg Thr Tyr Ser Val Pro Arg Leu Cys Trp His Phe Phe Tyr Ser His 123

527 TGG AAT CTG ATC CTG ATT GTC TTC CAC TAC TAC CAG GCC ATC ACC ACT 574

124 Trp Asn Leu Ile Leu Ile Val Phe His Tyr Tyr Gln Ala Ile Thr Thr 139

575 CCG CCT GGG TAC CCA CCC CAG GGC AGG AAT GAT ATC GCC ACC GTC TCC 622

140 Pro Pro Gly Tyr Pro Pro Gln Gly Arg Asn Asp Ile Ala Thr Val Ser 155

623 ATC TGT AAG AAG TGC ATT TAC CCC AAG CCA GCC CGA ACA CAC CAC TGC 670

156 Ile Cys Lys Lys Cys Ile Tyr Pro Lys Pro Ala Arg Thr His His Cys 171

671 AGC ATC TGC AAC AGG TGT GTG CTG AAG ATG GAT CAC CAC TGC CCC TGG 718

172 Ser Ile Cys Asn Arg Cys Val Leu Lys Met Asp His His Cys Pro Trp 187

719 CTA AAC AAT TGT GTG GGC CAC TAT AAC CAT CGG TAC TTC TTC TCT TTC 766

188 Leu Asn Asn Cys Val Gly His Tyr Asn His Arg Tyr Phe Phe Ser Phe 203

767 TGC TTT TTC ATG ACT CTG GGC TGT GTC TAC TGC AGC TAT GGA AGT TGG 814

204 Cys Phe Phe Met Thr Leu Gly Cys Val Tyr Cys Ser Tyr Gly Ser Trp 219

815 GAC CTT TTC CGG GAG GCT TAT GCT GCC ATT GAG ACT TAT CAC CAG ACC 862

220 Asp Leu Phe Arg Glu Ala Tyr Ala Ala Ile Glu Thr Tyr His Gln Thr 235

863 CCA CCA CCC ACC TTC TCC TTT CGA GAA AGG ATG ACT CAC AAG AGT CTT 910

236 Pro Pro Pro Thr Phe Ser Phe Arg Glu Arg Met Thr His Lys Ser Leu 251

911 GTC TAC CTC TGG TTC CTG TGC AGT TCT GTG GCA CTT GCC CTG GGT GCC 958

252 Val Tyr Leu Trp Phe Leu Cys Ser Ser Val Ala Leu Ala Leu Gly Ala 267

959 CTA ACT GTA TGG CAT GCT GTT CTC ATC AGT CGA GGT GAG ACT AGC ATC 1006

268 Leu Thr Val Trp His Ala Val Leu Ile Ser Arg Gly Glu Thr Ser Ile 283

1007 GAA AGG CAC ATC AAC AAG AAG GAG AGA CGT CGG CTA CAG GCC AAG GGC 1054

284 Glu Arg His Ile Asn Lys Lys Glu Arg Arg Arg Leu Gln Ala Lys Gly 299

1055 AGA GTA TTT AGG AAT CCT TAC AAC TAC GGC TGC TTG GAC AAC TGG AAG 1102

300 Arg Val Phe Arg Asn Pro Tyr Asn Tyr Gly Cys Leu Asp Asn Trp Lys 315

1103 GTA TTC CTG GGT GTG GAT ACA GGA AGG CAC TGG CTT ACT CGG GTG CTC 1150

316 Val Phe Leu Gly Val Asp Thr Gly Arg His Trp Leu Thr Arg Val Leu 331

1151 TTA CCT TCT AGT CAC TTG CCC CAT GGG AAT GGA ATG AGC TGG GAG CCC 1198

332 Leu Pro Ser Ser His Leu Pro His Gly Asn Gly Met Ser Trp Glu Pro 347

1199 CCT CCC TGG GTG ACT GCT CAC TCA GCC TCT GTG ATG GCA GTG TGA GCT 1246

348 Pro Pro Trp Val Thr Ala His Ser Ala Ser Val Met Ala Val *** 362

1247 GGA CTG TGT CAG CCA CGA CTC GAG CAC TCA TTC TGC TCC CTA TGT TAT 1294

1295 TTC AAG GGC CTC CAA GGG CAG CTT TTC TCA GAA TCC TTG ATC AAA AAG 1342

1343 AGC CAG TGG GCC TGC CTT AGG GTA CCA TGC AGG ACA ATT CAA GGA CCA 1390

1391 GCC TTT TTA CCA CTG CAG AAG AAA GAC ACA ATG TGG AGA AAT CTT AGG 1438

1439 ACT GAC ATC CCT TTA CTC AGG CAA ACA GAA GTT CCA ACC CCA GAC TAG 1486

1487 GGG TCA GGC AGC TAG CTA CCT ACC TTG CCC AGT GCT GAC CCG GAC CTC 1534

1535 CTC CAG GAT ACA GCA CTG GAG TTG GCC ACC ACC TCT TCT ACT TGC TGT 1582

1583 CTG AAA AAA CAC CTG ACT AGT ACA GCT GAG ATC TTG GCT TCT CAA CAG 1630

1631 GGC AAA GAT ACC AGG CCT GCT GCT GAG GTC ACT GCC ACT TCT CAC ATG 1678

1679 CTG CTT AAG GGA GCA CAA ATA AAG GTA TTC GAT TTT TAA AAA AAA AAA 1726

1727 AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA 1747

D.Blastp结果

Query＝PP3774 (361个氨基酸)

>SP_IN：Q18585 Q18585 caenorhabditis elegans.cosmid c43h6.11/1999

长度＝306

分值＝122bits(304)，预计值＝3e-27

相同性＝76/222(34％)，相似性＝107/222(47％)，缺口＝18/222(8％)

Query：126 LILIVFHYYQAITTPPGYPPQGRNDIATVSICKKCIYPKPARTHHCSICNRCVLKMDHHC 185

L I +HYY+A T PP P D S C KC Y K HHCS+C +CVL MDHHC

Sbjct：78 LFNIQYHYYKARTIPPVANPGEEGD----SFCSKCNYWKSDNAHHCSVCEKCVLGMDHHC 133

Query：186 PWLNNCVGHYNHRYFFSFCFFMTLGC---VYCSYGSWD--LFREA----YAAIETYHQTP 236

W+N CVG +NHR+FF F +TL + Y S+ LF E+ Y H

Sbjct：l34 IWINQCVGLHNHRHFFLFIANLTLAAATIIIAGYQSFSDHLFLESSQTTYCTTILEHAPL 193

Query：237 PPTFSFRERMTHKSLVYLWFLCSSVALALGALTVWHAVLISRGETSIERHINKKERRRLQ 296

+ S+V+ +L + + +G LT W+ LIS G T I+ ++

Sbjct：194 QDIICDYDGFARTSVVFCYLLSGILLVMVGGLTSWNIYLISIGCTYIDYLKLTGSKKNTS 253

Query：297 AKGRVFRNPYNYGCLDNWKVFLGVDTGRHWLTRVLLPSSHLP 338

A+ R+ N G NW+ FLG+ R+ V++P++ P

Sbjct：254 ARKRL-----NKGFKANWRNFLGLRRNRTFFKCVIMPTALPP 290

>SP_IN：017549 017549 caenorhabditis elegans.m18.8 protein.11/1999

长度＝447

分值＝105bits(259)，预计值＝5e-22

相同性＝60/173(34％)，相似性＝87/173(49％)，缺口＝9/173(5％)

Query：124 WNLILIVFHYYQAITTPPGYPPQGRN-----DIATVSICKKCIYPKPARTHHCSICNRCV 178

WN L + + + A PGY P+G D + C C K R+HHCS C+RC

Sbjct：71 WNY-LTIGNLFNASFFGPGYVPRGWRPENAADEKKLQFCVPCNGFKVPRSHHCSKCDRCC 129

Query：179 LKMDHHCPWLNNCVGHYNHRYFFSFCFFMTLGCVYCSY--GSWDLFREAYAAIETYHQTP 236

+KMDHHCPW+NNCVGH NH+YF F FF +GC++ + GS L+ +A +

Sbjct：130 MKMDHHCPWINNCVGHRNHQYFLRFLFFSVVGCIHSTIIDGS-ALYHAIFAGWYQKYGDG 188

Query：237 PPTFSFRERMTHKSLVYLWFLCSSVALALGALTVWHAVLISRGETSIERHINK 289

++ +LV+ + +VALAL L+ + R IE +I +

Sbjct：189 TEPIILLTPISFIALVFAIAMAIAVALALTFLFITQLRYVIRNRNGIEDYIRE 241

6.PP3781

A：核苷酸序列(SEQ ID NO：16)长度：1431bp

1 GTTTCTGGAG TCCTGGGAAG GTGTCTGCCT GGCCGCGCTG CCAGATCAGT

51 ACATCTTTTG TAAAAACCCT GAAATGGGCA GGGAAGAAAA CAGGGATTTC

101 CCCTCTCTAG ATCCCTGCCA GGTCCCTCTC CAGGAGGCCC CTCTGCTCTC

151 CTGAAGGGTG GTCCCTGAGG GTCTGCCCAG CCTTGGCACG AGAGGTTGGT

201 TCCAGCCCCT GGCAGGGCTT CCTTCCAAGG GCCCCTGCAG CCTACAAACT

251 GGGCCTCGGG CGACTCAAAA TAAGTGCTCT TGGGGGTGGC TCTACCCCAT

301 TACCTCCCCC AGCCACAACT CCTGGCCTTC GACTTCTGGC TGGGTTAGCC

351 AGACCCTGGT TTCTCTACCC TGATGTTGCA TGAGACCTGG TAACAGTGTC

401 TCCCTCCCAG CTCCTTGCCA AAGCCTCTGT TGAGACCTGG GCTTCTTGTA

451 GCCCCTTCTC CCTCTGGCCA GCTGCACAGC CTGTGGGAGG TGCCCGGCCC

501 AGGCTGGGTG TGGGGGAAGC TGGTCCCTGC TGTGGGTGGC GCTGGGGACC

551 TAGGGGCTCC TTCTGAGGTT GGCCTTGTGG CTCTGGGCTG TATGCCTCTG

601 GGGTGTAGGG AAGAGGCGGG AGGAGTCATG GGGATGGGGA GCGGCAAGGG

651 GGAGAGAGGG GCCCTCGACA AAGGCTTGGG AAATGAGGGG AGGTGGAGGC

701 AGGGCAGGGG AAGCGAAGAG TCAGCCTTGG AGAGAGCACC CTGGGGCCTC

751 CGTGTCGGGG TACACCCAGC ACTTTGCGAC CTGCGGCCCA GCAGGCGCGG

801 AGGATGGCGG GGAGGAAGCC AGCAGCCCCT GTGTTTACTG TCGTCAGAAA

851 GGTCTTGTGT TTTGGTTTTG GGGTTTTTGT TTTGTTTGTG TTTTGTTTGG

901 CTTGTTTGTT TTTTAAGGGG AAAAAAGTTT GTAATTATTT CATCCAAATC

951 TCCCGTTATA TATCTGTGAA TAATAAGAGA TTTTATAATA GCAAGAAAAT

1001 GATGTATATT TTAGTTTGTT GACAAATAAG TCATCATGAT CACGAAGGAC

1051 ACTGAGAAAA AAATAATTTA GAACCCTGGT TTTTGTGAAT TTTTTTGTTT

1101 TGTGTTTCTT TGTTTTGAGA TTTGTGTTTG GTTTGGTTTT TGCACTGCAC

1151 TAAGGCAGGA GGGTTGGAGG GCTGGGTGCA GCCTGGGAGT CCGATGGTTT

1201 TCAGCAGGAG ACGGGGTGTC CCCTGCAGGG GGCTAAACTG CAGGGGCCTG

1251 AGATTAGCTG TGAACATGTG GGAGCCCGAT GCATGTGGGT CAGGGATCTG

1301 GGGGCCCCCC CAGCTGGCGG GAACCCCAAA TGGACACAAA CTGTACATTT

1351 GCCAATGGGT TTTTTTTCAG ACCATGGTTT TTACTTGCAA ATAAACCTGA

1401 GTTTCTTTTC TGCAAAAAAA AAAAAAAAAA A

B：氨基酸序列(SEQ ID NO：17)长度：125个氨基酸

1 MPLGCREEAG GVMGMGSGKG ERGALDKGLG NEGRWRQGRG SEESALERAP WGLRVGVHPA

61 LCDLRPSRRG GWRGGSQQPL CLLSSERSCV LVLGFLFCLC FVWLVCFLRG KKFVIISSKS

121 PVIYL

C.核苷酸及氨基酸组合序列

克隆号：PP3781(SEQ ID NO：18)

起始编码子：592 ATG 终止编码子：969 TGA

蛋白质分子量：13596

1 GTT TCT GGA GTC CTG GGA AGG TGT CTG CCT GGC CGC GCT GCC AGA TCA 48

49 GTA CAT CTT TTG TAA AAA CCC TGA AAT GGG CAG GGA AGA AAA CAG GGA 96

97 TTT CCC CTC TCT AGA TCC CTG CCA GGT CCC TCT CCA GGA GGC CCC TCT 144

145 GCT CTC CTG AAG GGT GGT CCC TGA GGG TCT GCC CAG CCT TGG CAC GAG 192

193 AGG TTG GTT CCA GCC CCT GGC AGG GCT TCC TTC CAA GGG CCC CTG CAG 240

241 CCT ACA AAC TGG GCC TCG GGC GAC TCA AAA TAA GTG CTC TTG GGG GTG 288

289 GCT CTA CCC CAT TAC CTC CCC CAG CCA CAA CTC CTG GCC TTC GAC TTC 336

337 TGG CTG GGT TAG CCA GAC CCT GGT TTC TCT ACC CTG ATG TTG CAT GAG 384

385 ACC TGG TAA GAG TGT GTC CCT CCC AGC TCC TTG CCA AAG CCT CTG TTG 432

433 AGA CCT GGG CTT CTT GTA GCC CCT TCT CCC TCT GGC CAG CTG CAC AGC 480

481 CTG TGG GAG GTG CCC GGC CCA GGC TGG GTG TGG GGG AAG CTG GTC CCT 528

529 GCT GTG GGT GGC GCT GGG GAC CTA GGG GCT CCT TCT GAG GTT GGC CTT 576

577 GTG GCT CTG GGC TGT ATG CCT CTG GGG TGT AGG GAA GAG GCG GGA GGA 624

1 Met Pro Leu Gly Cys Arg Glu Glu Ala Gly Gly 11

625 GTC ATG GGG ATG GGG AGC GGC AAG GGG GAG AGA GGG GCC CTC GAC AAA 672

12 Val Met Gly Met Gly Ser Gly Lys Gly Glu Arg Gly Ala Leu Asp Lys 27

673 GGC TTG GGA AAT GAG GGG AGG TGG AGG CAG GGC AGG GGA AGC GAA GAG 720

28 Gly Leu Gly Asn Glu Gly Arg Trp Arg Gln Gly Arg Gly Ser Glu Glu 43

721 TCA GCC TTG GAG AGA GCA CCC TGG GGC CTC CGT GTC GGG GTA CAC CCA 768

44 Ser Ala Leu Glu Arg Ala Pro Trp Gly Leu Arg Val Gly Val His Pro 59

769 GCA CTT TGC GAC CTG CGG CCC AGC AGG CGC GGA GGA TGG CGG GGA GGA 816

60 Ala Leu Cys Asp Leu Arg Pro Ser Arg Arg Gly Gly Trp Arg Gly Gly 75

817 AGC CAG CAG CCC CTG TGT TTA CTG TCG TCA GAA AGG TCT TGT GTT TTG 864

76 Ser Gln Gln Pro Leu Cys Leu Leu Ser Ser Glu Arg Ser Cys Val Leu 91

865 GTT TTG GGG TTT TTG TTT TGT TTG TGT TTT GTT TGG CTT GTT TGT TTT 912

92 Val Leu Gly Phe Leu Phe Cys Leu Cys Phe Val Trp Leu Val Cys Phe 107

913 TTA AGG GGA AAA AAG TTT GTA ATT ATT TCA TCC AAA TCT CCC GTT ATA 960

108 Leu Arg Gly Lys Lys Phe Val Ile Ile Ser Ser Lys Ser Pro Val Ile 123

961 TAT CTG TGA ATA ATA AGA GAT TTT ATA ATA GCA AGA AAA TGA TGT ATA 1008

124 Tyr Leu *** 126

1009 TTT TAG TTT GTT GAC AAA TAA GTC ATC ATG ATC ACG AAG GAC ACT GAG 1056

1057 AAA AAA ATA ATT TAG AAC CCT GGT TTT TGT GAA TTT TTT TGT TTT GTG 1104

1105 TTT CTT TGT TTT GAG ATT TGT GTT TGG TTT GGT TTT TGC ACT GCA CTA 1152

1153 AGG CAG GAG GGT TGG AGG GCT GGG TGC AGC CTG GGA GTC CGA TGG TTT 1200

1201 TCA GCA GGA GAC GGG GTG TCC CCT GCA GGG GGC TAA ACT GCA GGG GCC 1248

1249 TGA GAT TAG CTG TGA ACA TGT GGG AGC CCG ATG CAT GTG GGT CAG GGA 1296

1297 TCT GGG GGC CCC CCC AGC TGG CGG GAA CCC CAA ATG GAC ACA AAC TGT 1344

1345 ACA TTT GCC AAT GGG TTT TTT TTC AGA CCA TGG TTT TTA CTT GCA AAT 1392

1393 AAA CCT GAG TTT CTT TTC TGC AAA AAA AAA AAA AAA AAA 1431

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims

1.一种分离的具有抑癌功能的人蛋白，其特征在于，它是具有选自下组的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：14、SEQID NO：17。

2.如权利要求1所述的蛋白，其特征在于，该多肽的氨基酸序列选自下组：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：14。

3.一种分离的多核苷酸，其特征在于，它含有一核苷酸序列，该核苷酸序列选自下组：

(a)编码如权利要求1所述蛋白的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。

4.如权利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，该多核苷酸编码的多肽具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：17。

5.如权利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，该多核苷酸的序列选自下组：

SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：18的编码区序列或全长序列。

6.一种载体，其特征在于，它含有权利要求3所述的多核苷酸。

7.一种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于，它是选自下组的一种宿主细胞：

(a)用权利要求6所述的载体转化或转导的宿主细胞；

(b)用权利要求3所述的多核苷酸转化或转导的宿主细胞。

8.一种具有抑癌功能的人蛋白活性的多肽的制备方法，其特征在于，该方法包含：

(a)在适合表达具有抑癌功能的人蛋白的条件下，培养权利要求7所述的宿主细胞；

(b)从培养物中分离出具有抑癌功能的人蛋白活性的多肽。

9.一种能与权利要求1所述的具有抑癌功能的人蛋白特异性结合的抗体。

10.一种药物组合物，其特征在于，它含有安全有效量的权利要求1所述的蛋白以及药学上可接受的载体。