CN1190446C

CN1190446C - 具有促进小鼠nih/3t3细胞转化功能的新的人蛋白及其编码序列

Info

Publication number: CN1190446C
Application number: CNB021116458A
Authority: CN
Inventors: 顾健人; 杨胜利
Original assignee: SHANGHAI XINSHIJIE GENE TECHN DEVELOPMENT Co Ltd
Current assignee: SHANGHAI XINSHIJIE GENE TECHN DEVELOPMENT Co Ltd
Priority date: 2002-05-13
Filing date: 2002-05-13
Publication date: 2005-02-23
Anticipated expiration: 2022-05-13
Also published as: CN1458169A

Abstract

本发明公开了一类新的具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白，编码此多肽的多核苷酸和经重组技术产生该多肽的方法。本发明还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明还公开了编码这类新的具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白的多核苷酸的用途。

Description

具有促进小鼠NIH/3T3细胞转化功能的新的人蛋白及其编码序列

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明涉及新的编码具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白的多核苷酸，以及此多核苷酸编码的多肽。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的用途和制备。

背景技术

人基因组学研究目前是国际上的热点，除人染色体DNA大规模测序，表达序列测序(EST)的方法外，还缺少从功能开始的筛选具有功能基因的高通量的方法。

癌症是危害人类健康的主要疾病之一。为了有效地治疗和预防肿瘤，目前人们已越来越关注肿瘤的基因治疗。因此，本领域迫切需要开发研究与癌细胞生长相关的人蛋白及其激动剂/抑制剂。

发明内容

本发明的目的是提供一类新的具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白多肽以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一目的是提供编码这些多肽的多核苷酸。

本发明的另一目的是提供生产这些多肽的方法以及该多肽和编码序列的用途。

在本发明的第一方面，提供新颖的分离出的具有促进3T3细胞转化功能的蛋白多肽，它包含具有选自下组的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO：3、6、9；或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。

较佳地，该多肽是具有选自下组的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO：3、6、9。

在本发明的第二方面，提供了一种分离的多核苷酸，它包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少85％相同性：(a)编码上述的具有促进3T3细胞转化功能的蛋白多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地，该多核苷酸编码的多肽具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：3、6、9。更佳地，该多核苷酸的序列选自下组：SEQ ID NO：2、5、8的编码区序列或全长序列。

在本发明的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。

在本发明的第四方面，提供了制备具有促进3T3细胞转化功能的蛋白活性的多肽的制备方法，该方法包含：(a)在适合表达具有促进3T3细胞转化功能的蛋白的条件下，培养上述被转化或转导的宿主细胞；(b)从培养物中分离出具有促进3T3细胞转化功能的蛋白活性的多肽。

在本发明的第五方面，提供了与上述的具有促进3T3细胞转化功能的蛋白多肽特异性结合的抗体。还提供了可用于检测的核酸分子，它含有上述的多核苷酸中连续10个核苷酸至全长核苷酸，较佳地它含有连续的约15-1000个核苷酸。

在本发明的第六方面，提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的本发明的具有促进3T3细胞转化功能的蛋白多肽以及药学上可接受的载体。这些药物组合物可用于促进细胞的生长。本发明还提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的针对本发明的具有促进3T3细胞转化功能的蛋白多肽的拮抗剂(如抗体)以及药学上可接受的载体。该药物组合物可治疗癌症以及细胞异常增殖等病症。

本发明的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。

具体实施方式

3T3细胞是一种小鼠成纤维细胞(J.Cell.Biol.，17：299，1963)(也称为NIH/3T3细胞)。在癌症研究领域中，常将外源基因(尤其是人基因)引入3T3细胞，观察其对3T3细胞生长的影响情况。通常认为，对3T3细胞生长(或恶性转化或转染)有影响的基因是癌症相关基因，其中对3T3细胞生长或转化有抑制作用的基因大多是抑癌基因，而对3T3细胞生长或转化有促进作用的基因大多是(原)癌基因。

本发明采用大规模cDNA克隆转染小鼠胚胎成纤维细胞3T3，在获得具有促进生长作用的基础上，经测序证明为新的基因，进一步得到全长cDNA克隆。DNA转染试验证明，本发明的具有促进3T3细胞转化功能的蛋白对3T3细胞具有促进克隆形成的作用，其促进率≥50％。

如本文所用，“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和多肽是没有分离纯化的，但同样的多聚核苷酸或多肽如从天然状态中同存在的其他物质中分开，则为分离纯化的。

如本文所用，“分离的具有促进3T3细胞转化功能的蛋白或多肽”是指具有促进3T3细胞转化功能的蛋白多肽基本上不含天然与其相关的其它蛋白、脂类、糖类或其它物质。本领域的技术人员能用标准的蛋白质纯化技术纯化具有促进3T3细胞转化功能的蛋白。基本上纯的多肽在非还原聚丙烯酰胺凝胶上能产生单一的主带。

本发明的多肽可以是重组多肽、天然多肽、合成多肽，优选重组多肽。本发明的多肽可以是天然纯化的产物，或是化学合成的产物，或使用重组技术从原核或真核宿主(例如，细菌、酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞)中产生。根据重组生产方案所用的宿主，本发明的多肽可以是糖基化的，或可以是非糖基化的。本发明的多肽还可包括或不包括起始的甲硫氨酸残基。

本发明还包括具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白的片段、衍生物和类似物。如本文所用，术语“片段”、“衍生物”和“类似物”是指基本上保持本发明的天然具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白相同的生物学功能或活性的多肽。本发明的多肽片段、衍生物或类似物可以是(i)有一个或多个保守或非保守性氨基酸残基(优选保守性氨基酸残基)被取代的多肽，而这样的取代的氨基酸残基可以是也可以不是由遗传密码编码的，或(ii)在一个或多个氨基酸残基中具有取代基团的多肽，或(iii)成熟多肽与另一个化合物(比如延长多肽半衰期的化合物，例如聚乙二醇)融合所形成的多肽，或(iv)附加的氨基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽(如前导序列或分泌序列或用来纯化此多肽的序列或蛋白原序列)。根据本文的教导，这些片段、衍生物和类似物属于本领域熟练技术人员公知的范围。

本发明的多核苷酸可以是DNA形式或RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因组DNA或人工合成的DNA。DNA可以是单链的或是双链的。DNA可以是编码链或非编码链。以PP14212蛋白(在本申请中，蛋白质的命名采用其克隆编号)为例，编码成熟多肽的编码区序列可以与SEQ ID NO：2所示的编码区序列相同或者是简并的变异体。如本文所用，“简并的变异体”对于PP14212而言是指编码具有SEQ ID NO：3的蛋白质，但与SEQ ID NO：2所示的编码区序列有差别的核酸序列。再以FP7030蛋白(在本申请中，蛋白质的命名采用其克隆编号)为例，编码成熟多肽的编码区序列可以与SEQ ID NO：5所示的编码区序列相同或者是简并的变异体。如本文所用，“简并的变异体”对于FP7030而言是指编码具有SEQ ID NO：6的蛋白质，但与SEQID NO：5所示的编码区序列有差别的核酸序列。对于本发明其他具有促进3T3细胞转化功能的蛋白，依此类推。

编码成熟多肽的多核苷酸包括：只编码成熟多肽的编码序列；成熟多肽的编码序列和各种附加编码序列；成熟多肽的编码序列(和任选的附加编码序列)以及非编码序列。

术语“编码多肽的多核苷酸”可以是包括编码此多肽的多核苷酸，也可以是还包括附加编码和/或非编码序列的多核苷酸。

本发明还涉及上述多核苷酸的变异体，其编码与本发明有相同的氨基酸序列的多肽或多肽的片段、类似物和衍生物。此多核苷酸的变异体可以是天然发生的等位变异体或非天然发生的变异体。这些核苷酸变异体包括取代变异体、缺失变异体和插入变异体。如本领域所知的，等位变异体是一个多核苷酸的替换形式，它可能是一个或多个核苷酸的取代、缺失或插入，但不会从实质上改变其编码的多肽的功能。

本发明还涉及与上述的序列杂交且两个序列之间具有至少50％，较佳地至少70％，更佳地至少80％相同性的多核苷酸。本发明特别涉及在严格条件下与本发明所述多核苷酸可杂交的多核苷酸。在本发明中，“严格条件”是指：(1)在较低离子强度和较高温度下的杂交和洗脱，如0.2×SSC，0.1％SDS，60℃；或(2)杂交时加有变性剂，如50％(v/v)甲酰胺，0.1％小牛血清/0.1％Ficoll，42℃等；或(3)仅在两条序列之间的相同性至少在95％以上，更好是97％以上时才发生杂交。并且，可杂交的多核苷酸编码的多肽与SEQ ID NO：3所示的成熟多肽(以PP14212蛋白为例)有相同的生物学功能和活性。

本发明还涉及与上述的序列杂交的核酸片段。如本文所用，“核酸片段”的长度至少含15个核苷酸，较好是至少30个核苷酸，更好是至少50个核苷酸，最好是至少100个核苷酸以上。核酸片段可用于核酸的扩增技术(如PCR)以确定和/或分离编码具有促进3T3细胞转化功能的蛋白的多聚核苷酸。

本发明中的多肽和多核苷酸优选以分离的形式提供，更佳地被纯化至均质。

本发明的DNA序列能用几种方法获得。例如，用本领域熟知的杂交技术分离DNA。这些技术包括但不局限于：1)用探针与基因组或cDNA文库杂交以检出同源性核苷酸序列，和2)表达文库的抗体筛选以检出具有共同结构特征的克隆的DNA片段。

编码具有促进3T3细胞转化功能的蛋白的特异DNA片段序列产生也能用下列方法获得：1)从基因组DNA分离双链DNA序列；2)化学合成DNA序列以获得所需多肽的双链DNA。

当需要的多肽产物的整个氨基酸序列已知时，DNA序列的直接化学合成是经常选用的方法。如果所需的氨基酸的整个序列不清楚时，DNA序列的直接化学合成是不可能的，选用的方法是cDNA序列的分离。分离感兴趣的cDNA的标准方法是从高表达该基因的供体细胞分离mRNA并进行逆转录，形成质粒或噬菌体cDNA文库。提取mRNA的方法已有多种成熟的技术，试剂盒也可从商业途径获得(Qiagene)。而构建cDNA文库也是通常的方法(Sambrook，et al.，Molecular Cloning，ALaboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory.New York，1989)。还可得到商业供应的cDNA文库，如Clontech公司的不同cDNA文库。当结合使用聚合酶反应技术时，即使极少的表达产物也能克隆。

可用常规方法从这些cDNA文库中筛选本发明的基因。这些方法包括(但不限于)：(1)DNA-DNA或DNA-RNA杂交；(2)标志基因的功能出现或丧失；(3)测定具有促进3T3细胞转化功能的蛋白的转录本的水平；(4)通过免疫学技术或测定生物学活性，来检测基因表达的蛋白产物。上述方法可单用，也可多种方法联合应用。

在第(1)种方法中，杂交所用的探针是与本发明的多核苷酸的任何一部分同源，其长度至少15个核苷酸，较好是至少30个核苷酸，更好是至少50个核苷酸，最好是至少100个核苷酸。此外，探针的长度通常在2kb之内，较佳地为1kb之内。此处所用的探针通常是在本发明的基因DNA序列信息的基础上化学合成的DNA序列。本发明的基因本身或者片段当然可以用作探针。DNA探针的标记可用放射性同位素，荧光素或酶(如碱性磷酸酶)等。

在第(4)种方法中，检测具有促进3T3细胞转化功能的蛋白基因表达的蛋白产物可用免疫学技术如Western印迹法，放射免疫沉淀法，酶联免疫吸附法(ELISA)等。

应用PCR技术扩增DNA/RNA的方法(Saiki，et al.Science1985；230：1350-1354)被优选用于获得本发明的基因。特别是很难从文库中得到全长的cDNA时，可优选使用RACE法(RACE-cDNA末端快速扩增法)，用于PCR的引物可根据本文所公开的本发明的序列信息适当地选择，并可用常规方法合成。可用常规方法如通过凝胶电泳分离和纯化扩增的DNA/RNA片段。

如上所述得到的本发明的基因，或者各种DNA片段等的核苷酸序列的测定可用常规方法如双脱氧链终止法(Sanger et al.PNAS，1977，74：5463-5467)。这类核苷酸序列测定也可用商业测序试剂盒等。为了获得全长的cDNA序列，测序需反复进行。有时需要测定多个克隆的cDNA序列，才能拼接成全长的cDNA序列。

本发明也涉及包含本发明多核苷酸的载体，以及用本发明的载体或具有促进3T3细胞转化功能的蛋白编码序列经基因工程产生的宿主细胞，以及经重组技术产生本发明所述多肽的方法。

通过常规的重组DNA技术(Science，1984；224：1431)，可利用本发明的多聚核苷酸序列可用来表达或生产重组的具有促进3T3细胞转化功能的蛋白多肽。一般来说有以下步骤：

(1).用本发明的编码具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白的多核苷酸(或变异体)，或用含有该多核苷酸的重组表达载体转化或转导合适的宿主细胞；

(2).在合适的培养基中培养的宿主细胞；

(3).从培养基或细胞中分离、纯化蛋白质。

本发明中，具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白多核苷酸序列可插入到重组表达载体中。术语“重组表达载体”指本领域熟知的细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒如腺病毒、逆转录病毒或其他载体。在本发明中适用的载体包括但不限于：在细菌中表达的基于T7的表达载体(Rosenberg，et al.Gene，1987，56：125)；在哺乳动物细胞中表达的pMSXND表达载体(Lee and Nathans，J Bio Chem.263：3521，1988)和在昆虫细胞中表达的来源于杆状病毒的载体。总之，只要能在宿主体内复制和稳定，任何质粒和载体都可以用。表达载体的一个重要特征是通常含有复制起点、启动子、标记基因和翻译控制元件。

本领域的技术人员熟知的方法能用于构建含具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白编码DNA序列和合适的转录/翻译控制信号的表达载体。这些方法包括体外重组DNA技术、DNA合成技术、体内重组技术等(Sambroook，et al)。所述的DNA序列可有效连接到表达载体中的适当启动子上，以指导mRNA合成。这些启动子的代表性例子有：大肠杆菌的lac或trp启动子；λ噬菌体P_L启动子；真核启动子包括CMV立即早期启动子、早期和晚期SV40启动子和其他一些已知的可控制基因在原核或真核细胞或其病毒中表达的启动子。表达载体还包括翻译起始用的核糖体结合位点和转录终止子。

此外，表达载体优选地包含一个或多个选择性标记基因，以提供用于选择转化的宿主细胞的表型性状，如真核细胞培养用的二氢叶酸还原酶、新霉素抗性以及绿色荧光蛋白(GFP)，或用于大肠杆菌的四环素或氨苄青霉素抗性。

包含上述的适当DNA序列以及适当启动子或者控制序列的载体，可以用于转化适当的宿主细胞，以使其能够表达蛋白质。

宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或是高等真核细胞，如哺乳动物细胞。代表性例子有：大肠杆菌，链霉菌属；鼠伤寒沙门氏菌的细菌细胞；真菌细胞如酵母；植物细胞；果蝇S2或Sf9的昆虫细胞；CHO、COS或Bowes黑素瘤细胞的动物细胞等。

本发明的多核苷酸在高等真核细胞中表达时，如果在载体中插入增强子序列时将会使转录得到增强。增强子是DNA的顺式作用因子，通常大约有10到300个碱基对，作用于启动子以增强基因的转录。可举的例子包括在复制起始点晚期一侧的100到270个碱基对的SV40增强子、在复制起始点晚期一侧的多瘤增强子以及腺病毒增强子等。

本领域一般技术人员都清楚如何选择适当的载体、启动子、增强子和宿主细胞。

用重组DNA转化宿主细胞可用本领域技术人员熟知的常规技术进行。当宿主为原核生物如大肠杆菌时，能吸收DNA的感受态细胞可在指数生长期后收获，用CaCl₂法处理，所用的步骤在本领域众所周知。可供选择的是用MgCl₂。如果需要，转化也可用电穿孔的方法进行。当宿主是真核生物，可选用如下的DNA转染方法：磷酸钙共沉淀法，常规机械方法如显微注射、电穿孔、脂质体包装等。

获得的转化子可以用常规方法培养，表达本发明的基因所编码的多肽。根据所用的宿主细胞，培养中所用的培养基可选自各种常规培养基。在适于宿主细胞生长的条件下进行培养。当宿主细胞生长到适当的细胞密度后，用合适的方法(如温度转换或化学诱导)诱导选择的启动子，将细胞再培养一段时间。

在上面的方法中的重组多肽可包被于细胞内、细胞外或在细胞膜上表达或分泌到细胞外。如果需要，可利用其物理的、化学的和其它特性通过各种分离方法分离和纯化重组的蛋白。这些方法是本领域技术人员所熟知的。这些方法的例子包括但并不限于：常规的复性处理、用蛋白沉淀剂处理(盐析方法)、离心、渗透破菌、超处理、超离心、分子筛层析(凝胶过滤)、吸附层析、离子交换层析、高效液相层析(HPLC)和其它各种液相层析技术及这些方法的结合。

重组的具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白或多肽有多方面的用途。这些用途包括(但不限于)：直接做为药物治疗具有促进3T3细胞转化功能的蛋白功能低下或丧失所致的疾病，和用于筛选促进或对抗具有促进3T3细胞转化功能的蛋白功能的抗体、多肽或其它配体。例如，该抗体可用于治疗癌症或细胞异常增殖。用重组表达的本发明蛋白筛选多肽库可用于寻找有治疗价值的能抑制或刺激具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白功能的多肽分子。

本发明也提供了筛选药物以鉴定提高(激动剂)或阻遏(拮抗剂)具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白的药剂的方法。激动剂提高具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白刺激细胞增殖等生物功能，而拮抗剂阻止和治疗与细胞过度增殖有关的紊乱如各种癌症。

具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白的拮抗剂包括筛选出的抗体、化合物、受体缺失物和类似物等。具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白的拮抗剂可以与具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白结合并消除其功能，或是抑制具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白的产生，或是与多肽的活性位点结合使多肽不能发挥生物学功能。具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白的拮抗剂可用于治疗用途。

在筛选作为拮抗剂的化合物时，可以将具有促进3T3细胞转化功能的蛋白加入生物分析测定中，通过测定化合物影响具有促进3T3细胞转化功能的蛋白和其受体之间的相互作用来确定化合物是否是拮抗剂。用上述筛选化合物的同样方法，可以筛选出起拮抗剂作用的受体缺失物和类似物。

本发明蛋白的拮抗剂可直接用于疾病治疗，例如，各种恶性肿瘤、和细胞异常增殖等。

本发明的多肽，及其片段、衍生物、类似物或它们的细胞可以用来作为抗原以生产抗体。这些抗体可以是多克隆或单克隆抗体。多克隆抗体可以通过将此多肽直接注射动物的方法得到。制备单克隆抗体的技术包括杂交瘤技术，三瘤技术，人B-细胞杂交瘤技术，EBV-杂交瘤技术等。

可以将本发明的多肽和拮抗剂与合适的药物载体组合后使用。这些载体可以是水、葡萄糖、乙醇、盐类、缓冲液、甘油以及它们的组合。组合物包含安全有效量的多肽或拮抗剂以及不影响药物效果的载体和赋形剂。这些组合物可以作为药物用于疾病治疗。

本发明还提供含有一种或多种容器的药盒或试剂盒，容器中装有一种或多种本发明的药用组合物成分。与这些容器一起，可以有由制造、使用或销售药品或生物制品的政府管理机构所给出的指示性提示，该提示反映出生产、使用或销售的政府管理机构许可其在人体上施用。此外，本发明的多肽可以与其它的治疗化合物结合使用。

药物组合物可以以方便的方式给药，如通过局部、静脉内、腹膜内、肌内、皮下、鼻内或皮内的给药途径。具有促进3T3细胞转化功能的蛋白或其特异性抗体，可按有效地治疗和/或预防具体的适应症的量来给药。施用于患者的具有促进3T3细胞转化功能的蛋白的量和剂量范围将取决于许多因素，如给药方式、待治疗者的健康条件和诊断医生的判断。

具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白的多聚核苷酸也可用于多种治疗目的。基因治疗技术可用于治疗由于具有促进3T3细胞转化功能的蛋白的无表达或异常/无活性的具有促进3T3细胞转化功能的蛋白的表达所致的细胞发育或代谢异常。重组的基因治疗载体(如病毒载体)可设计成表达变异的具有促进3T3细胞转化功能的蛋白，以抑制内源性的具有促进3T3细胞转化功能的蛋白活性。例如，一种变异的具有促进3T3细胞转化功能的蛋白可以是缩短的、缺失了信号传导功能域的具有促进3T3细胞转化功能的蛋白，虽可与下游的底物结合，但缺乏信号传导活性。因此重组的基因治疗载体可用于治疗具有促进3T3细胞转化功能的蛋白表达或活性异常所致的疾病。来源于病毒的表达载体如逆转录病毒、腺病毒、腺病毒相关病毒、单纯疱疹病毒、细小病毒等可用于将具有促进3T3细胞转化功能的蛋白基因转移至细胞内。构建携带具有促进3T3细胞转化功能的蛋白基因的重组病毒载体的方法可见于已有文献(Sambrook，et al.)。另外重组具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白基因可包装到脂质体中转移至细胞内。

抑制具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白mRNA的寡聚核苷酸(包括反义RNA和DNA)以及核酶也在本发明的范围之内。核酶是一种能特异性分解特定RNA的酶样RNA分子，其作用机制是核酶分子与互补的靶RNA特异性杂交后进行核酸内切作用。反义的RNA和DNA及核酶可用已有的任何RNA或DNA合成技术获得，如固相磷酸酰胺化学合成法合成寡核苷酸的技术已广泛应用。反义RNA分子可通过编码该RNA的DNA序列在体外或体内转录获得。这种DNA序列已整合到载体的RNA聚合酶启动子的下游。为了增加核酸分子的稳定性，可用多种方法对其进行修饰，如增加两侧的序列长度，核糖核苷之间的连接应用磷酸硫酯键或肽键而非磷酸二酯键。

多聚核苷酸导入组织或细胞内的方法包括：将多聚核苷酸直接注入到体内组织中；或在体外通过载体(如病毒、噬菌体或质粒等)先将多聚核苷酸导入细胞中，再将细胞移植到体内等。由于本发明蛋白具有促进3T3细胞转化的功能，因此本发明蛋白编码序列的反义序列，可被引入细胞以抑制细胞的异常增殖(如癌变)。

本发明还提供了针对具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白抗原决定簇的抗体。这些抗体包括(但不限于)：多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、Fab片段和Fab表达文库产生的片段。

抗具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白的抗体可用于免疫组织化学技术中，检测活检标本中的具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白。

与具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白结合的单克隆抗体也可用放射性同位素标记，注入体内可跟踪其位置和分布。这种放射性标记的抗体可作为一种非创伤性诊断方法用于肿瘤细胞的定位和判断是否有转移。

本发明中的抗体可用于治疗或预防与具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白相关的疾病。给予适当剂量的抗体可以阻断具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白的产生或活性，从而抑制癌细胞的生长和/或细胞的异常增殖。

抗体也可用于设计针对体内某一特殊部位的免疫毒素。如具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白高亲和性的单克隆抗体可与细菌或植物毒素(如白喉毒素，蓖麻蛋白，红豆碱等)共价结合。一种通常的方法是用巯基交联剂如SPDP，攻击抗体的氨基，通过二硫键的交换，将毒素结合于抗体上，这种杂交抗体可用于杀灭有关的阳性细胞(如癌细胞)。

多克隆抗体的生产可用具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白或多肽免疫动物，如家兔，小鼠，大鼠等。多种佐剂可用于增强免疫反应，包括但不限于弗氏佐剂等。

具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白单克隆抗体可用杂交瘤技术生产(Kohlerand Milstein.Nature，1975，256：495-497)。将人恒定区和非人源的可变区结合的嵌合抗体可用已有的技术生产(Morrison et al，PNAS，1985，81：6851)。而已有的生产单链抗体的技术(U.S.Pat No.4946778)也可用于生产抗具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白的单链抗体。

能与具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白结合的多肽分子可通过筛选由各种可能组合的氨基酸结合于固相物组成的随机多肽库而获得。筛选时，必须对具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白分子进行标记。

本发明还涉及定量和定位检测具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白水平的诊断试验方法。这些试验为本领域所熟知，且包括FISH测定和放射免疫测定。试验中所检测的具有促进3T3细胞转化功能的蛋白水平，可以用作解释具有促进3T3细胞转化功能的蛋白在各种疾病中的重要性和用于诊断具有促进3T3细胞转化功能的蛋白起作用的疾病。

具有促进3T3细胞转化功能的蛋白的多聚核苷酸可用于具有促进3T3细胞转化功能的蛋白相关疾病的诊断和治疗。在诊断方面，具有促进3T3细胞转化功能的蛋白的多聚核苷酸可用于检测具有促进3T3细胞转化功能的蛋白的表达与否或在疾病状态下具有促进3T3细胞转化功能的蛋白的异常表达。如具有促进3T3细胞转化功能的蛋白DNA序列可用于对活检标本的杂交以判断具有促进3T3细胞转化功能的蛋白的表达异常。杂交技术包括Southern印迹法，Northern印迹法、原位杂交等。这些技术方法都是公开的成熟技术，相关的试剂盒都可从商业途径得到。本发明的多核苷酸的一部分或全部可作为探针固定在微阵列(Microarray)或DNA芯片(即基因芯片)上，用于分析组织中基因的差异表达分析和基因诊断。用具有促进3T3细胞转化功能的蛋白特异的引物进行RNA-聚合酶链反应(RT-PCR)体外扩增也可检测具有促进3T3细胞转化功能的蛋白的转录产物。

检测具有促进3T3细胞转化功能的蛋白基因的突变也可用于诊断具有促进3T3细胞转化功能的蛋白相关的疾病。具有促进3T3细胞转化功能的蛋白突变的形式包括与正常野生型具有促进3T3细胞转化功能的蛋白DNA序列相比的点突变、易位、缺失、重组和其它任何异常等。可用已有的技术如Southern印迹法、DNA序列分析、PCR和原位杂交检测突变。另外，突变有可能影响蛋白的表达，因此用Northern印迹法、Western印迹法可间接判断基因有无突变。

本发明的序列对染色体鉴定也是有价值的。这些序列会特异性地针对某条人染色体具体位置且并可以与其杂交。目前，需要鉴定染色体上的各基因的具体位点。然而现在只有很少的基于实际序列数据(重复多态性)的染色体标记物可用于标记染色体位置。为了将这些序列与疾病相关基因相关联。第一步就是将本发明DNA序列定位于染色体上。

简而言之，根据cDNA制备PCR引物(优选15-35bp)，可以将序列定位于染色体上。然后，将这些引物用于PCR筛选含各条人染色体的体细胞杂合细胞。只有那些含有相应于引物的人基因的杂合细胞会产生扩增的片段。

体细胞杂合细胞的PCR定位法，是将DNA定位到具体染色体的快捷方法。使用本发明的的寡核苷酸引物，通过类似方法，可利用一组来自特定染色体的片段或大量基因组克隆而实现亚定位。可用于染色体定位的其它类似策略包括原位杂交、用标记的流式分选的染色体预筛选和杂交预选，从而构建染色体特异的cDNA库。

将cDNA克隆与中期染色体进行荧光原位杂交(FISH)，可以在一个步骤中精确地进行染色体定位。此技术的综述，参见Verma等，Human Chromosomes：a Manualof Basic Techniques，Pergamon Press，New York(1988)。

一旦序列被定位到准确的染色体位置，此序列在染色体上的物理位置就可以与基因图数据相关联。这些数据可见于例如，V.Mckusick，Mendelian Inheritance inMan(可通过与Johns Hopkins University Welch Medical Library联机获得)。然后可通过连锁分析，确定基因与业已定位到染色体区域上的疾病之间的关系。

接着，需要测定患病和未患病个体间的cDNA或基因组序列差异。如果在一些或所有的患病个体中观察到某突变，而该突变在任何正常个体中未观察到，则该突变可能是疾病的病因。比较患病和未患病个体，通常涉及首先寻找染色体中结构的变化，如从染色体水平可见的或用基于cDNA序列的PCR可检测的缺失或易位。

本发明的具有促进3T3细胞转化功能的蛋白核苷酸全长序列或其片段通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。对于PCR扩增法，可根据本发明所公开的有关核苷酸序列，尤其是开放阅读框序列来设计引物，并用市售的cDNA库或按本领域技术人员已知的常规方法所制备的cDNA库作为模板，扩增而得有关序列。当序列较长时，常常需要进行两次或多次PCR扩增，然后再将各次扩增出的片段按正确次序拼接在一起。

一旦获得了有关的序列，就可以用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是将其克隆入载体，再转入细胞，然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。

此外，还可用人工合成的方法来合成有关序列，尤其是片段长度较短时。通常，通过先合成多个小片段，然后再进行连接可获得序列很长的片段。

目前，已经可以完全通过化学合成来编码本发明蛋白(或其片段，或其衍生物)的DNA序列。然后可将该DNA序列引入本领域中的各种DNA分子(如载体)和细胞中。此外，还可通过化学合成将突变引入本发明蛋白序列中。

此外，由于本发明的具有促进3T3细胞转化功能的蛋白具有源自人的天然氨基酸序列，因此，与来源于其他物种的同族蛋白相比，预计在施用于人时将具有更高的活性和/或更低的副作用(例如在人体内的免疫原性更低或没有)。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York：Cold SpringHarbor Laboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。注意，在核苷酸和氨基酸组合序列中，(1)给出的是起始和终止编码子第一个核苷酸的位置，(2)分子量单位是道尔顿。

实施例1：cDNA基因的获得及对小鼠NIH/3T3细胞克隆形成的促进作用

PP14212是通过用常规方法构建人胎盘cDNA文库获得的；FP7030和FP7915来自于用常规方法构建的人胎儿cDNA文库。取3、6、10月龄的胎盘组织(PP克隆)或胎儿组织(FP克隆)，用Trizol试剂(GIBCO BRL公司)按厂方说明书提取总RNA，用mRNA提纯试剂盒(Pharmacia公司)提取mRNA。用pCMV-script TMXRcDNA文库构建试剂盒(Stratagene公司)构建上述mRNA的cDNA文库。其中反转录酶改用MMLV-RT-Superscript II(GIBCO BRL)，反转录反应在42℃进行。转化XL 10-Gold感受细胞，获得了1×10⁶cfu/μg滴度的cDNA文库。第一轮随机挑取cDNA克隆，其后以高丰度cDNA克隆和已证明有抑制癌细胞生长功能的cDNA克隆为探针，杂交筛选cDNA文库，挑取弱阳性及阴性克隆。用Qiagen 96孔板质粒抽提试剂盒，按厂家说明书进行质粒DNA的提取。质粒DNA和空载体同时转染小鼠NIH/3T3细胞。100ng DNA酒精沉淀干燥后，加6μl H₂O溶解，待转染。每份DNA样品中加0.74μl脂质体及9.3μl无血清培液，混匀后，室温放置10分钟。每管中加150μl无血清培液，均分加入3孔生长于96孔板的小鼠NIH/3T3细胞中，37℃放置2小时，每孔再加50μl无血清培液，37℃ 24小时。每孔换100μl全培液，37℃ 24小时，换含G418的全培液100μl，37℃ 24-48小时，边观察，边换G418浓度不等的培液。约2-3次后，直到镜检细胞有克隆形成，计数。发现上述克隆有促进细胞克隆形成作用，结果如下表所示。

cDNA克隆转染细胞(3T3)克隆形成情况

cDNA克隆名称	cDNA克隆数(三个重复)			空载体克隆数(三个重复)
cDNA克隆名称	cDNA克隆数(三个重复)			空载体克隆数(三个重复)			PP14212	40	51	48	38	37	35
FP7030	58	60	67	21	28	20	PP14212	40	51	48	38	37	35
FP7030	58	60	67	21	28	20	FP7915	60	65	69	12	18	17

对cDNA克隆采用双脱氧终止法，在ABI377 DNA自动测序仪上测定其一端近500bp的核苷酸序列。分析后，确定为新基因克隆，进行另一端测序，仍未获得全长cDNA序列，设计引物，再次进行测序，直到获得全长序列(SEQ ID NO：1、4、7)。

实施例2：从胎盘或胎儿cDNA中PCR获得全长基因：

取3、6、9月龄的胎盘组织(PP克隆)或胎儿组织(FP克隆)，用Trizol试剂(GIBCO BRL公司)按厂方说明书提取总RNA，用mRNA提纯试剂盒(Pharmacia公司)提取mRNA。用MMLV-RT-Superscript II(GIBCO BRL)，反转录酶在42℃进行反转录反应，获得胎盘或胎儿cDNA。利用各个基因的特异引物(如下表所示)，按97℃ 3′1个循环。94℃ 30″60℃ 30″72℃ 1′35个循环，72℃ 10′1个循环进行PCR扩增，获得含有完整开放阅读框序列的各蛋白基因的扩增产物。扩增产物经测序验证，与实施例1测得的序列相符，随后用常规技术将扩增产物转入宿主细胞，获得重组蛋白(SEQ ID NO：3、6、9)。

基因特异引物

克隆名称	特异引物1(5′→3′)	SEQ IDNO：	特异引物2(3′→5′)	SEQ IDNO：
克隆名称	特异引物1(5′→3′)	SEQ IDNO：	特异引物2(3′→5′)	SEQ IDNO：	PP14212	(44)tgtgaacaccttgagccttg	10	(1555)tgcaacctctgcctcaca	11
FP7030	(79)tcagcgtgtgcagtctctct	12	(3587)tttttgagtggccaaagtcc	13	PP14212	(44)tgtgaacaccttgagccttg	10	(1555)tgcaacctctgcctcaca	11
FP7030	(79)tcagcgtgtgcagtctctct	12	(3587)tttttgagtggccaaagtcc	13	FP7915	(31)gcactgtgtgtttggacagc	14	(3396)tatccttccgccacaaaaac	15

注：括号内为引物在各基因DNA序列中的对应位置。

实施例3：cDNA克隆序列分析

1.PP14212蛋白

A：核苷酸序列(SEQ ID NO：1)长度：1637个碱基

B：氨基酸序列(SEQ ID NO：3)长度：288个氨基酸

C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO：2)克隆号和蛋白名称：PP14212

起始编码子：64 ATG终止编码子：928 TAG蛋白质分子量：31640.56Da

2.FP7030蛋白

A：核苷酸序列(SEQ ID NO：4)长度：3600个碱基

B：氨基酸序列(SEQ ID NO：6)长度：307个氨基酸

C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO：5)克隆号和蛋白名称：FP7030

起始编码子：585 ATG终止编码子：1506 TGA蛋白质分子量：32581.89Da

3.FP7915蛋白

A：核苷酸序列(SEQ ID NO：7)长度：3491个碱基

B：氨基酸序列(SEQ ID NO：9)长度：178个氨基酸

C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO：8)克隆号和蛋白名称：FP7915

起始编码子：336 ATG终止编码子：870 TGA蛋白质分子量：19443.65Da

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

序列表

<110>上海新世界基因技术开发有限公司

<120>具有促进小鼠NIH/3T3细胞转化功能的新的人蛋白及其编码序列

<130>022537

<160>15

<170>PatentIn version 3.0

<210>1

<211>1637

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>1

gggctttcaa cccccacctc agcccagcaa ttcgtttgga gcatgtgaac accttgagcc 60

ttgatgagtt ccagtatgtg gtatattatg cagagcattc agagcaaata ctctctctcc 120

gagcgcttaa tccgaacaat tgctgccatc cgttccttcc cacatgataa tgtagaggac 180

ctcatcagag ggggagcaga tgtgaactgc actcatggca cactgaagcc cttgcactgt 240

gcctgtatgg tgtcagatgc tgactgtgtg gagttacttc tggaaaaagg agccgaggtg 300

aatgccctgg atgggtataa ccgaacagcc ctccactatg cagcagagaa agatgaggct 360

tgtgtggagg tcctattgga gtatggtgca aaccccaatg ctttggatgg caacagagat 420

accccacttc actgggcagc ctttaagaac aatgctgagt gtgtgcgggc tctcctagag 480

agcggggcct ctgtcaatgc cctggattac aacaatgata caccgctcag ctgggctgcc 540

atgaagggaa atcttgagag tgtcagcatc cttctggatt atggcgcaga ggtcagagtc 600

atcaacctaa taggccagac acccatctcc cgcctggtgg ctctgctagt caggggactt 660

ggaacagaga aagaggactc ttgctttgag ctcctccaca gagctgttgg acactttgaa 720

ttgaggaaaa atggcaccat gccacgagag gtggccagag acccgcagct atgtgaaaaa 780

ctgactgttc tgtgctcagc tccaggaact ctaaaaacac tcgctcgcta tgccgtgcgc 840

cgtagcctgg gactccagta tctccccgat gcagtgaagg gccttccact gccagcttct 900

ttgaaggaat acctgttact tttagaatag ccggagaaga tgtttgcacc atcgtgcagg 960

cagctctggg tgaggttgtc cctgcagtac tccttgtcac agaaaacaga aaaacagttg 1020

ttcctgttgt gtggtttata gatttcgaag caacatgtca caacaataac ctccatagca 1080

cctccccttc ccaaaccaaa caacccaaca aaaaaaatcc ctcacttttg ttttctgttt 1140

attgcttacc tggcttttta tattgcattt tgcaaaagaa gaggtctccc tcaatcctcc 1200

cctttaggga aggagtcaac agtgtaacta aatttctcta ggaagatgga aagtacttaa 1260

ataatgtgtg tgtggttttc tttggggacg tggttaacgg tccagaagaa tcccttctag 1320

aaagcatttt aggccagcca tggtggctca cgtctgtaat cccaggactt tgggaggctg 1380

aggcaggtgg atcacctgag gtcaggagtt cgagcccagc ctgaccaata tgatgaaacc 1440

ccgtctctac taaaaataca aaaattagct gggcatggtg gcatgcgcct gtaatcccag 1500

ctactcagga ggctgagaca gaagaatcgc ttgaacctgt gaggcagagg ttgcagtgag 1560

ccaagatcgc gccattgcac tccagcctgg acaacaagag caaaactgtc tcaaaaaaaa 1620

aaaaaaaaaa aaaaaaa 1637

<210>2

<211>1637

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>CDS

<222>(64)..(927)

<400>2

gggctttcaa cccccacctc agcccagcaa ttcgtttgga gcatgtgaac accttgagcc 60

ttg atg agt tcc agt atg tgg tat att atg cag agc att cag agc aaa 108

Met Ser Ser Ser Met Trp Tyr Ile Met Gln Ser Ile Gln Ser Lys

1 5 10 15

tac tct ctc tcc gag cgc tta atc cga aca att gct gcc atc cgt tcc 156

Tyr Ser Leu Ser Glu Arg Leu Ile Arg Thr Ile Ala Ala Ile Arg Ser

20 25 30

ttc cca cat gat aat gta gag gac ctc atc aga ggg gga gca gat gtg 204

Phe Pro His Asp Asn Val Glu Asp Leu Ile Arg Gly Gly Ala Asp Val

35 40 45

aac tgc act cat ggc aca ctg aag ccc ttg cac tgt gcc tgt atg gtg 252

Asn Cys Thr His Gly Thr Leu Lys Pro Leu His Cys Ala Cys Met Val

50 55 60

tca gat gct gac tgt gtg gag tta ctt ctg gaa aaa gga gcc gag gtg 300

Ser Asp Ala Asp Cys Val Glu Leu Leu Leu Glu Lys Gly Ala Glu Val

65 70 75

aat gcc ctg gat ggg tat aac cga aca gcc ctc cac tat gca gca gag 348

Asn Ala Leu Asp Gly Tyr Asn Arg Thr Ala Leu His Tyr Ala Ala Glu

80 85 90 95

aaa gat gag gct tgt gtg gag gtc cta ttg gag tat ggt gca aac ccc 396

Lys Asp Glu Ala Cys Val Glu Val Leu Leu Glu Tyr Gly Ala Asn Pro

100 105 110

aat gct ttg gat ggc aac aga gat acc cca ctt cac tgg gca gcc ttt 444

Asn Ala Leu Asp Gly Asn Arg Asp Thr Pro Leu His Trp Ala Ala Phe

115 120 125

aag aac aat gct gag tgt gtg cgg gct ctc cta gag agc ggg gcc tct 492

Lys Asn Asn Ala Glu Cys Val Arg Ala Leu Leu Glu Ser Gly Ala Ser

130 135 140

gtc aat gcc ctg gat tac aac aat gat aca ccg ctc agc tgg gct gcc 540

Val Asn Ala Leu Asp Tyr Asn Asn Asp Thr Pro Leu Ser Trp Ala Ala

145 150 155

atg aag gga aat ctt gag agt gtc agc atc ctt ctg gat tat ggc gca 588

Met Lys Gly Asn Leu Glu Ser Val Ser Ile Leu Leu Asp Tyr Gly Ala

160 165 170 175

gag gtc aga gtc atc aac cta ata ggc cag aca ccc atc tcc cgc ctg 636

Glu Val Arg Val Ile Asn Leu Ile Gly Gln Thr Pro Ile Ser Arg Leu

180 185 190

gtg gct ctg cta gtc agg gga ctt gga aca gag aaa gag gac tct tgc 684

Val Ala Leu Leu Val Arg Gly Leu Gly Thr Glu Lys Glu Asp Ser Cys

195 200 205

ttt gag ctc ctc cac aga gct gtt gga cac ttt gaa ttg agg aaa aat 732

Phe Glu Leu Leu His Arg Ala Val Gly His Phe Glu Leu Arg Lys Asn

210 215 220

ggc acc atg cca cga gag gtg gcc aga gac ccg cag cta tgt gaa aaa 780

Gly Thr Met Pro Arg Glu Val Ala Arg Asp Pro Gln Leu Cys Glu Lys

225 230 235

ctg act gtt ctg tgc tca gct cca gga act cta aaa aca ctc gct cgc 828

Leu Thr Val Leu Cys Ser Ala Pro Gly Thr Leu Lys Thr Leu Ala Arg

240 245 250 255

tat gcc gtg cgc cgt agc ctg gga ctc cag tat ctc ccc gat gca gtg 876

Tyr Ala Val Arg Arg Ser Leu Gly Leu Gln Tyr Leu Pro Asp Ala Val

260 265 270

aag ggc ctt cca ctg cca gct tct ttg aag gaa tac ctg tta ctt tta 924

Lys Gly Leu Pro Leu Pro Ala Ser Leu Lys Glu Tyr Leu Leu Leu Leu

275 280 285

gaa tagccggaga agatgtttgc accatcgtgc aggcagctct gggtgaggtt 977

Glu

gtccctgcag tactccttgt cacagaaaac agaaaaacag ttgttcctgt tgtgtggttt 1037

atagatttcg aagcaacatg tcacaacaat aacctccata gcacctcccc ttcccaaacc 1097

aaacaaccca acaaaaaaaa tccctcactt ttgttttctg tttattgctt acctggcttt 1157

ttatattgca ttttgcaaaa gaagaggtct ccctcaatcc tcccctttag ggaaggagtc 1217

aacagtgtaa ctaaatttct ctaggaagat ggaaagtact taaataatgt gtgtgtggtt 1277

ttctttgggg acgtggttaa cggtccagaa gaatcccttc tagaaagcat tttaggccag 1337

ccatggtggc tcacgtctgt aatcccagga ctttgggagg ctgaggcagg tggatcacct 1397

gaggtcagga gttcgagccc agcctgacca atatgatgaa accccgtctc tactaaaaat 1457

acaaaaatta gctgggcatg gtggcatgcg cctgtaatcc cagctactca ggaggctgag 1517

acagaagaat cgcttgaacc tgtgaggcag aggttgcagt gagccaagat cgcgccattg 1577

cactccagcc tggacaacaa gagcaaaact gtctcaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1637

<210>3

<211>288

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>3

Met Ser Ser Ser Met Trp Tyr Ile Met Gln Ser Ile Gln Ser Lys Tyr

1 5 10 15

Ser Leu Ser Glu Arg Leu Ile Arg Thr Ile Ala Ala Ile Arg Ser Phe

20 25 30

Pro His Asp Asn Val Glu Asp Leu Ile Arg Gly Gly Ala Asp Val Asn

35 40 45

Cys Thr His Gly Thr Leu Lys Pro Leu His Cys Ala Cys Met Val Ser

50 55 60

Asp Ala Asp Cys Val Glu Leu Leu Leu Glu Lys Gly Ala Glu Val Asn

65 70 75 80

Ala Leu Asp Gly Tyr Asn Arg Thr Ala Leu His Tyr Ala Ala Glu Lys

85 90 95

Asp Glu Ala Cys Val Glu Val Leu Leu Glu Tyr Gly Ala Asn Pro Asn

100 105 110

Ala Leu Asp Gly Asn Arg Asp Thr Pro Leu His Trp Ala Ala Phe Lys

115 120 125

Asn Asn Ala Glu Cys Val Arg Ala Leu Leu Glu Ser Gly Ala Ser Val

130 135 140

Asn Ala Leu Asp Tyr Asn Asn Asp Thr Pro Leu Ser Trp Ala Ala Met

145 150 155 160

Lys Gly Asn Leu Glu Ser Val Ser Ile Leu Leu Asp Tyr Gly Ala Glu

165 170 175

Val Arg Val Ile Asn Leu Ile Gly Gln Thr Pro Ile Ser Arg Leu Val

180 185 190

Ala Leu Leu Val Arg Gly Leu Gly Thr Glu Lys Glu Asp Ser Cys Phe

195 200 205

Glu Leu Leu His Arg Ala Val Gly His Phe Glu Leu Arg Lys Asn Gly

210 215 220

Thr Met Pro Arg Glu Val Ala Arg Asp Pro Gln Leu Cys Glu Lys Leu

225 230 235 240

Thr Val Leu Cys Ser Ala Pro Gly Thr Leu Lys Thr Leu Ala Arg Tyr

245 250 255

Ala Val Arg Arg Ser Leu Gly Leu Gln Tyr Leu Pro Asp Ala Val Lys

260 265 270

Gly Leu Pro Leu Pro Ala Ser Leu Lys Glu Tyr Leu Leu Leu Leu Glu

275 280 285

<210>4

<211>3600

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>4

gctttcttct ctctctgtta tctctcttgt cgtctttttg tccttatctt ggtctctctg 60

cttctatttc tacctctctc agcgtgtgca gtctctcttt ccctgtatgt ctactgtctt 120

tctccgagtc tctcttcttc tccccgcccc cctcactccc ctttctccgt ccctctctgt 180

ctctgcgcct ttctcgccct cactttctcc cctcctgcct gctccgggcc tgcccccacc 240

gcgcgccggt tcaggggaac gtgtgcggag cgattgtcct gggggacatt tgatggatta 300

gagcgccgag cggttccatt gctaggggac cacctgatct ccagcctgcg tcccatataa 360

agccggcagc cggagtgctg agcgcagctc ccgcgatccc ctgtctgcgc gccgccgccg 420

ccaagcccga gcccgagccg gggccgccgc caccggtgcc ggctccgagc ggcctcccgc 480

gctccagccc gctgggagct gtccagtgct gaaaacccgc gcggacacag ccgatcgcgc 540

ccggccggcc gcctccccgc accgagcccc gcgccggccg cgccatgccg cgctccttcc 600

tggtaaagaa gatcaaaggg gacggcttcc agtgcagcgg ggtgccggcc cccacctacc 660

accccttgga gacagcctac gtgctgcctg gcgcccgggg gcctcccggg gacaacgggt 720

acgccccgca ccgcctgccc ccgagcagct acgatgcgga ccagaagccg ggcctggagc 780

tggccccggc cgagcccgcg tacccgccgg cggcgccgga ggagtacagc gaccccgaaa 840

gcccgcagtc gagcctgtcg gcgcgctact tccgagggga ggcggcagtg accgacagct 900

actccatgga cgccttcttc atctcggacg ggcgctcgcg gcggcggcgg ggcgggggcg 960

gcggggacgc ggggggctcg ggagacgcgg ggggcgccgg ggggcgcgcg gggcgcgcgg 1020

gggcgcaggc gggcggcggg caccggcacg cgtgcgccga gtgcggcaag acctacgcca 1080

cgtcgtcgaa cctgagccgc cacaagcaga cgcaccgcag cctggacagc cagctggcgc 1140

gcaaatgccc gacgtgcggc aaggcctacg tgtccatgcc cgcgctcgcc atgcacctgc 1200

tcacgcacaa cctgcgccac aagtgcggcg tctgcggcaa ggccttctcg cggccctggc 1260

tgctgcaggg tcacatgcgc tcgcacaccg gcgaaaagcc gttcggctgc gcgcactgcg 1320

gcaaggcctt cgccgaccgc tccaacctgc gcgcgcacat gcagacgcac tcggccttca 1380

agcactaccg ctgccgccag tgcgacaaga gcttcgcgct caagtcctac ctccacaagc 1440

actgcgaggc ggcctgcgcc aaggcggccg agccaccccc gccgaccccc gccggcccgg 1500

ccagctgagc cttccgcctc gccctcgcgc ccggaactcg ctctccacgc gccccgggcc 1560

ccctacctgc gcccgcagcg ccctcgccca gccccggctg cgtttccctg cccatgaccc 1620

tctcgtgggg acccccggcc cggcccggaa cttttctccc caacccccaa acccacgact 1680

cacttccaca ccgtcttccc cagcgtcccc cgacccactt catcctttcc ggccatccct 1740

cggaccttga cccccctgtc cgcgccttca aggctcccaa ctcaggcacc aggtccgcac 1800

ctctcccgcg ccccagagcc ggaaatttct ccctcccaga ccccgcgctg ctcttctaac 1860

ttctagatct tttctctcgc ttctcagctg aatctctctg accattcctc tactggagcc 1920

cccaatgaaa gccgcaaacc tatacccttg acgcccatac ctgcctcagt ttccccatcc 1980

acacctggac gcaggccctg ccgccctgag accacagtcc aaccccagac catccctctg 2040

gcctctgctg aatctcccag agtgtgtcca tctggggatc taatcttcac ccttcttgaa 2100

gtctccgatc tgtccctgat cccatccatg ctcaggcctt aggtctggcc attcacacac 2160

acacacaccc ccacacccca ctcccacaca cagttcctac tgtcttcagt ccatggggat 2220

ctcatcaccc actcccagcc ccagctccag ctgccctcac ctctctagca gctctcaccc 2280

ctctgagtct acctaacctg gagggggctt gaggggcact tcagggccct gccccctaat 2340

gtaacccctc tctcaccccg gcacaacctg ggcttccaca gtctggagct gccctacccc 2400

cagattctct gagcactttc ccccatcccc agggccacag atccccttcc ttacttgttg 2460

gggggaggtc tggagcacct cgccaatgcc cttcccccat ccggctgggt ccttccagtt 2520

atttatttgt gtatttattt atttatctat ttattattct atttaatctc ttggcctcac 2580

ccagggaccg tctggcttcc ccagctggac tgggaggtca ggaagccagg caaggagagg 2640

gacagcacag gccacagagg gctgccccca ccacacacac ccccgcgtct cgggagaaac 2700

ccaccctctt cagagcctgc actcgctaag gaaggggact cgagaatggg ggggcagctt 2760

gctgaccctc aactgggggg gtgagggagc atcaggaggt ccaggcgtgg ggcaggtccc 2820

caccttcctg aaccttcccc tgccactcca ggcggcccgg agagaggagc ctcttcgatt 2880

tgtttcctgt ttattcttct tcccgaggga ccccaggttc cagggaccga ctgagccccg 2940

gacccgctgg ggcctctggc ctgctccccg ggaggggcgc tctctcccgg ccatgtctat 3000

gcaactctcc cggacagagg ggccgggctg ccagccaccc gcccgttggc cgccactacc 3060

tcctccgctg cgcttttgca tgcccgggcg aggaccgaag cacacacctc cacgcgcacg 3120

ggccctggcc ccctccgctt taagcacacg cctctgcccc attgctctgc agccagcttg 3180

ggggcaggag tcctggactc tcagatcctc ctctcccctc ctcttagcca caaaagaggg 3240

gggagactgg aggcacccct gcagcagggg cacttcccta gggctccaga ggggtgaatg 3300

ggcctttgct cagctccagg cccagcggga agggaggctg cagggatggt gggagggaga 3360

ggggtagcag aagcaattat ggaggcgttg accctgtaaa tagcaacttc tgacagcaat 3420

aattttccat gcatgctaag ccttttggcc atattttgta tgagcgcttg gcgctcctcc 3480

tccgtcctat cccaactcac ccccaaaccc ccatcccttc cccacctcca gcagtattac 3540

ttgtaacgca attcagggat attaaaggga ctttggccac tcaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3600

<210>5

<211>3600

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>CDS

<222>(585)..(1505)

<400>5

gctttcttct ctctctgtta tctctcttgt cgtctttttg tccttatctt ggtctctctg 60

cttctatttc tacctctctc agcgtgtgca gtctctcttt ccctgtatgt ctactgtctt 120

tctccgagtc tctcttcttc tccccgcccc cctcactccc ctttctccgt ccctctctgt 180

ctctgcgcct ttctcgccct cactttctcc cctcctgcct gctccgggcc tgcccccacc 240

gcgcgccggt tcaggggaac gtgtgcggag cgattgtcct gggggacatt tgatggatta 300

gagcgccgag cggttccatt gctaggggac cacctgatct ccagcctgcg tcccatataa 360

agccggcagc cggagtgctg agcgcagctc ccgcgatccc ctgtctgcgc gccgccgccg 420

ccaagcccga gcccgagccg gggccgccgc caccggtgcc ggctccgagc ggcctcccgc 480

gctccagccc gctgggagct gtccagtgct gaaaacccgc gcggacacag ccgatcgcgc 540

ccggccggcc gcctccccgc accgagcccc gcgccggccg cgcc atg ccg cgc tcc 596

Met Pro Arg Ser

1

ttc ctg gta aag aag atc aaa ggg gac ggc ttc cag tgc agc ggg gtg 644

Phe Leu Val Lys Lys Ile Lys Gly Asp Gly Phe Gln Cys Ser Gly Val

5 10 15 20

ccg gcc ccc acc tac cac ccc ttg gag aca gcc tac gtg ctg cct ggc 692

Pro Ala Pro Thr Tyr His Pro Leu Glu Thr Ala Tyr Val Leu Pro Gly

25 30 35

gcc cgg ggg cct ccc ggg gac aac ggg tac gcc ccg cac cgc ctg ccc 740

Ala Arg Gly Pro Pro Gly Asp Asn Gly Tyr Ala Pro His Arg Leu Pro

40 45 50

ccg agc agc tac gat gcg gac cag aag ccg ggc ctg gag ctg gcc ccg 788

Pro Ser Ser Tyr Asp Ala Asp Gln Lys Pro Gly Leu Glu Leu Ala Pro

55 60 65

gcc gag ccc gcg tac ccg ccg gcg gcg ccg gag gag tac agc gac ccc 836

Ala Glu Pro Ala Tyr Pro Pro Ala Ala Pro Glu Glu Tyr Ser Asp Pro

70 75 80

gaa agc ccg cag tcg agc ctg tcg gcg cgc tac ttc cga ggg gag gcg 884

Glu Ser Pro Gln Ser Ser Leu Ser Ala Arg Tyr Phe Arg Gly Glu Ala

85 90 95 100

gca gtg acc gac agc tac tcc atg gac gcc ttc ttc atc tcg gac ggg 932

Ala Val Thr Asp Ser Tyr Ser Met Asp Ala Phe Phe Ile Ser Asp Gly

105 110 115

cgc tcg cgg cgg cgg cgg ggc ggg ggc ggc ggg gac gcg ggg ggc tcg 980

Arg Ser Arg Arg Arg Arg Gly Gly Gly Gly Gly Asp Ala Gly Gly Ser

120 125 130

gga gac gcg ggg ggc gcc ggg ggg cgc gcg ggg cgc gcg ggg gcg cag 1028

Gly Asp Ala Gly Gly Ala Gly Gly Arg Ala Gly Arg Ala Gly Ala Gln

135 140 145

gcg ggc ggc ggg cac cgg cac gcg tgc gcc gag tgc ggc aag acc tac 1076

Ala Gly Gly Gly His Arg His Ala Cys Ala Glu Cys Gly Lys Thr Tyr

150 155 160

gcc acg tcg tcg aac ctg agc cgc cac aag cag acg cac cgc agc ctg 1124

Ala Thr Ser Ser Asn Leu Ser Arg His Lys Gln Thr His Arg Ser Leu

165 170 175 180

gac agc cag ctg gcg cgc aaa tgc ccg acg tgc ggc aag gcc tac gtg 1172

Asp Ser Gln Leu Ala Arg Lys Cys Pro Thr Cys Gly Lys Ala Tyr Val

185 190 195

tcc atg ccc gcg ctc gcc atg cac ctg ctc acg cac aac ctg cgc cac 1220

Ser Met Pro Ala Leu Ala Met His Leu Leu Thr His Asn Leu Arg His

200 205 210

aag tgc ggc gtc tgc ggc aag gcc ttc tcg cgg ccc tgg ctg ctg cag 1268

Lys Cys Gly Val Cys Gly Lys Ala Phe Ser Arg Pro Trp Leu Leu Gln

215 220 225

ggt cac atg cgc tcg cac acc ggc gaa aag ccg ttc ggc tgc gcg cac 1316

Gly His Met Arg Ser His Thr Gly Glu Lys Pro Phe Gly Cys Ala His

230 235 240

tgc ggc aag gcc ttc gcc gac cgc tcc aac ctg cgc gcg cac atg cag 1364

Cys Gly Lys Ala Phe Ala Asp Arg Ser Asn Leu Arg Ala His Met Gln

245 250 255 260

acg cac tcg gcc ttc aag cac tac cgc tgc cgc cag tgc gac aag agc 1412

Thr His Ser Ala Phe Lys His Tyr Arg Cys Arg Gln Cys Asp Lys Ser

265 270 275

ttc gcg ctc aag tcc tac ctc cac aag cac tgc gag gcg gcc tgc gcc 1460

Phe Ala Leu Lys Ser Tyr Leu His Lys His Cys Glu Ala Ala Cys Ala

280 285 290

aag gcg gcc gag cca ccc ccg ccg acc ccc gcc ggc ccg gcc agc 1505

Lys Ala Ala Glu Pro Pro Pro Pro Thr Pro Ala Gly Pro Ala Ser

295 300 305

tgagccttcc gcctcgccct cgcgcccgga actcgctctc cacgcgcccc gggcccccta 1565

cctgcgcccg cagcgccctc gcccagcccc ggctgcgttt ccctgcccat gaccctctcg 1625

tggggacccc cggcccggcc cggaactttt ctccccaacc cccaaaccca cgactcactt 1685

ccacaccgtc ttccccagcg tcccccgacc cacttcatcc tttccggcca tccctcggac 1745

cttgaccccc ctgtccgcgc cttcaaggct cccaactcag gcaccaggtc cgcacctctc 1805

ccgcgcccca gagccggaaa tttctccctc ccagaccccg cgctgctctt ctaacttcta 1865

gatcttttct ctcgcttctc agctgaatct ctctgaccat tcctctactg gagcccccaa 1925

tgaaagccgc aaacctatac ccttgacgcc catacctgcc tcagtttccc catccacacc 1985

tggacgcagg ccctgccgcc ctgagaccac agtccaaccc cagaccatcc ctctggcctc 2045

tgctgaatct cccagagtgt gtccatctgg ggatctaatc ttcacccttc ttgaagtctc 2105

cgatctgtcc ctgatcccat ccatgctcag gccttaggtc tggccattca cacacacaca 2165

cacccccaca ccccactccc acacacagtt cctactgtct tcagtccatg gggatctcat 2225

cacccactcc cagccccagc tccagctgcc ctcacctctc tagcagctct cacccctctg 2285

agtctaccta acctggaggg ggcttgaggg gcacttcagg gccctgcccc ctaatgtaac 2345

ccctctctca ccccggcaca acctgggctt ccacagtctg gagctgccct acccccagat 2405

tctctgagca ctttccccca tccccagggc cacagatccc cttccttact tgttgggggg 2465

aggtctggag cacctcgcca atgcccttcc cccatccggc tgggtccttc cagttattta 2525

tttgtgtatt tatttattta tctatttatt attctattta atctcttggc ctcacccagg 2585

gaccgtctgg cttccccagc tggactggga ggtcaggaag ccaggcaagg agagggacag 2645

cacaggccac agagggctgc ccccaccaca cacacccccg cgtctcggga gaaacccacc 2705

ctcttcagag cctgcactcg ctaaggaagg ggactcgaga atgggggggc agcttgctga 2765

ccctcaactg ggggggtgag ggagcatcag gaggtccagg cgtggggcag gtccccacct 2825

tcctgaacct tcccctgcca ctccaggcgg cccggagaga ggagcctctt cgatttgttt 2885

cctgtttatt cttcttcccg agggacccca ggttccaggg accgactgag ccccggaccc 2945

gctggggcct ctggcctgct ccccgggagg ggcgctctct cccggccatg tctatgcaac 3005

tctcccggac agaggggccg ggctgccagc cacccgcccg ttggccgcca ctacctcctc 3065

cgctgcgctt ttgcatgccc gggcgaggac cgaagcacac acctccacgc gcacgggccc 3125

tggccccctc cgctttaagc acacgcctct gccccattgc tctgcagcca gcttgggggc 3185

aggagtcctg gactctcaga tcctcctctc ccctcctctt agccacaaaa gaggggggag 3245

actggaggca cccctgcagc aggggcactt ccctagggct ccagaggggt gaatgggcct 3305

ttgctcagct ccaggcccag cgggaaggga ggctgcaggg atggtgggag ggagaggggt 3365

agcagaagca attatggagg cgttgaccct gtaaatagca acttctgaca gcaataattt 3425

tccatgcatg ctaagccttt tggccatatt ttgtatgagc gcttggcgct cctcctccgt 3485

cctatcccaa ctcaccccca aacccccatc ccttccccac ctccagcagt attacttgta 3545

acgcaattca gggatattaa agggactttg gccactcaaa aaaaaaaaaa aaaaa 3600

<210>6

<211>307

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>6

Met Pro Arg Ser Phe Leu Val Lys Lys Ile Lys Gly Asp Gly Phe Gln

1 5 10 15

Cys Ser Gly Val Pro Ala Pro Thr Tyr His Pro Leu Glu Thr Ala Tyr

20 25 30

Val Leu Pro Gly Ala Arg Gly Pro Pro Gly Asp Asn Gly Tyr Ala Pro

35 40 45

His Arg Leu Pro Pro Ser Ser Tyr Asp Ala Asp Gln Lys Pro Gly Leu

50 55 60

Glu Leu Ala Pro Ala Glu Pro Ala Tyr Pro Pro Ala Ala Pro Glu Glu

65 70 75 80

Tyr Ser Asp Pro Glu Ser Pro Gln Ser Ser Leu Ser Ala Arg Tyr Phe

85 90 95

Arg Gly Glu Ala Ala Val Thr Asp Ser Tyr Ser Met Asp Ala Phe Phe

100 105 110

Ile Ser Asp Gly Arg Ser Arg Arg Arg Arg Gly Gly Gly Gly Gly Asp

115 120 125

Ala Gly Gly Ser Gly Asp Ala Gly Gly Ala Gly Gly Arg Ala Gly Arg

130 135 140

Ala Gly Ala Gln Ala Gly Gly Gly His Arg His Ala Cys Ala Glu Cys

145 150 155 160

Gly Lys Thr Tyr Ala Thr Ser Ser Asn Leu Ser Arg His Lys Gln Thr

165 170 175

His Arg Ser Leu Asp Ser Gln Leu Ala Arg Lys Cys Pro Thr Cys Gly

180 185 190

Lys Ala Tyr Val Ser Met Pro Ala Leu Ala Met His Leu Leu Thr His

195 200 205

Asn Leu Arg His Lys Cys Gly Val Cys Gly Lys Ala Phe Ser Arg Pro

210 215 220

Trp Leu Leu Gln Gly His Met Arg Ser His Thr Gly Glu Lys Pro Phe

225 230 235 240

Gly Cys Ala His Cys Gly Lys Ala Phe Ala Asp Arg Ser Asn Leu Arg

245 250 255

Ala His Met Gln Thr His Ser Ala Phe Lys His Tyr Arg Cys Arg Gln

260 265 270

Cys Asp Lys Ser Phe Ala Leu Lys Ser Tyr Leu His Lys His Cys Glu

275 280 285

Ala Ala Cys Ala Lys Ala Ala Glu Pro Pro Pro Pro Thr Pro Ala Gly

290 295 300

Pro Ala Ser

305

<210>7

<211>3491

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>7

gacccccatc acccccaggt cgccctgcag gcactgtgtg tttggacagc tggaagcaga 60

gctcggcctg tgacctgcct ggtccagcaa ctggaccttc tggaggtgag cctgggagtg 120

gccgagcaga ggaaatcacc cccatgggag gtaggggagg ggtgaggccc cccccaccag 180

gttctggaat gttccgtggg ctggatcctg gagaacccac ttctctgggc tccagaaagg 240

caagggcaat gtttctttga cctgagaaag caaagcagcc ccccgacatc cttccacaca 300

ctcatcccct ctggtgggga gccgggggga cacatatgag atggacaggg tgggggccca 360

caccccaggc tactcggaca gcaggggtca atcccgacgg ctggagaaac ctcaggcccc 420

aagtgcacca atggcccaga tggctggaga cctcttcctt tgtctcctct gtctccaaga 480

tccaggagcc caggctcagc ctgcgaacca cctggccctg gccctggagg gggatgggga 540

gggtctgtga ccatcctggg gggtatctgc gcccccttct tctacctggg gacaagggcg 600

cgaagtccca tgcagccccc atgcagcctc acgtgcctga cgatgggagc caggccagcc 660

cctcacacgg gtgctcctgg gcagcctctc tggtagcctg gacgagtcac cccaggggca 720

catgctccag gcagccccct cacctcaggg ggcatgggag gcgctggggg tcttcagctg 780

gtgatggggt gactgacgag gatcagcccc aaccccgggg tcctctggcc gctggcaacc 840

ggagcactcc cccagttgga gctgaaccat gactccagtc cttcccaaga gatggtgggg 900

aatcgtcacc atggctggag tcccgcagac tgggcaggcc agacaggccc ttggaggagg 960

ctggtgggat ccgagtgggc agaggggaga cggaggaggg aaaggcagcc ccagcctgcg 1020

gtggtgcttg tcctgggcgg gaggggccct gctgtcactg acgtgggaac caccgagtca 1080

ccggaggggc aggggcagag gggtctcggt ggaaaggggg tccccagagg ccttgggaga 1140

cgggggaggt gcctagggct ctctggcctt ggtctctacc agctcaacga gggctttgtt 1200

ccaggggccc ctgggtccct ctgcctccaa caatctgggc tgcgttttct gagcacctac 1260

tgtgtgctgg gtgtgggcgt ccgggcaggc actgactaag ccttgtccct ccccagagtc 1320

acagtgagac acacagccac atcctgtaaa tgaagacctc gtggctcaga gaggtcaggt 1380

aacttcccca aagcctgtct ggcctcccag caccatccct agtcccagag ggaggtggaa 1440

tgaaggcagg gctaaggcca ggctgcatgg aggcagaggc acctgccggc ctgcaggacc 1500

aaaggttcta ttggaggcag tgcctgggca gacaaaggcc ctcagattca caagctgaag 1560

ccctagcacc cagggcccca gtgtgctact gtgtttggag acaggtaaag gttgtcaagg 1620

taagacaggg tggccctgat ccaatatgac tggcgtcctt gtaagaagag gagattggga 1680

cagacacgcc ccgagggatg gccatgtgag ggcgcctcag gaagacggtg tgcaagagcg 1740

ggaagcgggg cctcggaaga gccagccctt ggatctcggg cttccaggag aatcagttcc 1800

tgcagttgaa gccaccaggg tctgtgcaac tttgtcacag ctgcccgagc tgacaaattc 1860

acctgactta agccccccgc cccacccgac cacagtgtca cccagatgct tggcaggtgc 1920

tgtggcaggg gctgggtccc tgctcgacct tcgggtgccg gggtgtcccg tataagagca 1980

gcacagccac cgccacggcc actcgcagtt ccaggctccg ggcagcatct gggaccccag 2040

ttcctgttgt gagaggctcc ccactgccat cccaccccct gcaaggtgcc tcggagagcg 2100

gctggaggct gacgggtcga ggcctgggtt ttacggtcct gcctgggttt ctgtgtggcc 2160

tggggctgcc taccatcttt ccctctctgg tcccccctac tctcatatac caggctgggt 2220

gactggggcc caggagcggc ccccccctcc tctgggcttc ctggtggcac ccctggcctg 2280

acagcccctg ggaaggcctc ccctctccat ctcggggccc gagcccggcc ccacctgctg 2340

agctgcagcc tccaaggcct ccttcgcacg cgtgtcagct ctgacctcag ggctccccac 2400

gcgtgttccc ctctaggaag gcccccccag gggctcccca aaatcctgtc ctccctgaag 2460

cacctgttct tcgtgctcct ccatgagggc ccgcacgggg ccgctgaccg cagtctcagt 2520

cacagcctgg gagcgcctgg aggttggggg gcagcaggcg ctcagtcagt cctcgggtca 2580

ccatggatgg ccttgctgtg tgatccacac tgaggcccag tggtcagctg gggggctgga 2640

caggaggcag ccacttcctg gcctggctgg tgactcacag gcccgtttct gggaaaactc 2700

ccacccaccc ccactcaatc cggatggcgc agagctcgct gtggggacca gctgtgggaa 2760

gtgcattgat gattaggggc cgggtctggg ggtggggtaa ggcgggagcc ggggcggagg 2820

gtggggtggg gttgttggga cgtctccacc agaygcctgc ctgggctgct gagctgtgca 2880

tcccgtgtgc cctgacgctc cacatgctcc ctcaccgggc aggggtcggs ggccccgaat 2940

atcatcacag sgagaccaca cgaygcttcc tgcctgaacc ccttcctcag gtccctcacg 3000

cttcaagggg tgcctggccc cagcctcgcc ttgcccagcc ttgccaaggc cagcacagcc 3060

caggagtaag ccagagaaaa gaaaatgcca ttcggaaaat cctaaggaag agaggatgca 3120

tttcctcgtc tccacgtgga agcggatcac cctaaaggtc ttcatcctgg tctttttcat 3180

gctgaggagg ctggggagga gaaggaagag gaggggctgg tcttgctgac ccaggagcag 3240

cagagaaagg agaaaatcca cgtgcagggg ctggccagcg ctgggcttct cgggaatgga 3300

atcacacacg gactgtggcg tacacatcac aactttaaac cccgtccgta ctgaagcctg 3360

cgtccgaatt tcttctgttt ttgtggcgga aggataaata ttccattgta aaaaaaaaaa 3420

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3480

aaaaaaaaaa a 3491

<210>8

<211>3491

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>CDS

<222>(336)..(869)

<400>8

gacccccatc acccccaggt cgccctgcag gcactgtgtg tttggacagc tggaagcaga 60

gctcggcctg tgacctgcct ggtccagcaa ctggaccttc tggaggtgag cctgggagtg 120

gccgagcaga ggaaatcacc cccatgggag gtaggggagg ggtgaggccc cccccaccag 180

gttctggaat gttccgtggg ctggatcctg gagaacccac ttctctgggc tccagaaagg 240

caagggcaat gtttctttga cctgagaaag caaagcagcc ccccgacatc cttccacaca 300

ctcatcccct ctggtgggga gccgggggga cacat atg aga tgg aca ggg tgg 353

Met Arg Trp Thr Gly Trp

1 5

ggg ccc aca ccc cag gct act cgg aca gca ggg gtc aat ccc gac ggc 401

Gly Pro Thr Pro Gln Ala Thr Arg Thr Ala Gly Val Asn Pro Asp Gly

10 15 20

tgg aga aac ctc agg ccc caa gtg cac caa tgg ccc aga tgg ctg gag 449

Trp Arg Asn Leu Arg Pro Gln Val His Gln Trp Pro Arg Trp Leu Glu

25 30 35

acc tct tcc ttt gtc tcc tct gtc tcc aag atc cag gag ccc agg ctc 497

Thr Ser Ser Phe Val Ser Ser Val Ser Lys Ile Gln Glu Pro Arg Leu

40 45 50

agc ctg cga acc acc tgg ccc tgg ccc tgg agg ggg atg ggg agg gtc 545

Ser Leu Arg Thr Thr Trp Pro Trp Pro Trp Arg Gly Met Gly Arg Val

55 60 65 70

tgt gac cat cct ggg ggg tat ctg cgc ccc ctt ctt cta cct ggg gac 593

Cys Asp His Pro Gly Gly Tyr Leu Arg Pro Leu Leu Leu Pro Gly Asp

75 80 85

aag ggc gcg aag tcc cat gca gcc ccc atg cag cct cac gtg cct gac 641

Lys Gly Ala Lys Ser His Ala Ala Pro Met Gln Pro His Val Pro Asp

90 95 100

gat ggg agc cag gcc agc ccc tca cac ggg tgc tcc tgg gca gcc tct 689

Asp Gly Ser Gln Ala Ser Pro Ser His Gly Cys Ser Trp Ala Ala Ser

105 110 115

ctg gta gcc tgg acg agt cac ccc agg ggc aca tgc tcc agg cag ccc 737

Leu Val Ala Trp Thr Ser His Pro Arg Gly Thr Cys Ser Arg Gln Pro

120 125 130

cct cac ctc agg ggg cat ggg agg cgc tgg ggg tct tca gct ggt gat 785

Pro His Leu Arg Gly His Gly Arg Arg Trp Gly Ser Ser Ala Gly Asp

135 140 145 150

ggg gtg act gac gag gat cag ccc caa ccc cgg ggt cct ctg gcc gct 833

Gly Val Thr Asp Glu Asp Gln Pro Gln Pro Arg Gly Pro Leu Ala Ala

155 160 165

ggc aac cgg agc act ccc cca gtt gga gct gaa cca tgactccagt 879

Gly Asn Arg Ser Thr Pro Pro Val Gly Ala Glu Pro

170 175

ccttcccaag agatggtggg gaatcgtcac catggctgga gtcccgcaga ctgggcaggc 939

cagacaggcc cttggaggag gctggtggga tccgagtggg cagaggggag acggaggagg 999

gaaaggcagc cccagcctgc ggtggtgctt gtcctgggcg ggaggggccc tgctgtcact 1059

gacgtgggaa ccaccgagtc accggagggg caggggcaga ggggtctcgg tggaaagggg 1119

gtccccagag gccttgggag acgggggagg tgcctagggc tctctggcct tggtctctac 1179

cagctcaacg agggctttgt tccaggggcc cctgggtccc tctgcctcca acaatctggg 1239

ctgcgttttc tgagcaccta ctgtgtgctg ggtgtgggcg tccgggcagg cactgactaa 1299

gccttgtccc tccccagagt cacagtgaga cacacagcca catcctgtaa atgaagacct 1359

cgtggctcag agaggtcagg taacttcccc aaagcctgtc tggcctccca gcaccatccc 1419

tagtcccaga gggaggtgga atgaaggcag ggctaaggcc aggctgcatg gaggcagagg 1479

cacctgccgg cctgcaggac caaaggttct attggaggca gtgcctgggc agacaaaggc 1539

cctcagattc acaagctgaa gccctagcac ccagggcccc agtgtgctac tgtgtttgga 1599

gacaggtaaa ggttgtcaag gtaagacagg gtggccctga tccaatatga ctggcgtcct 1659

tgtaagaaga ggagattggg acagacacgc cccgagggat ggccatgtga gggcgcctca 1719

ggaagacggt gtgcaagagc gggaagcggg gcctcggaag agccagccct tggatctcgg 1779

gcttccagga gaatcagttc ctgcagttga agccaccagg gtctgtgcaa ctttgtcaca 1839

gctgcccgag ctgacaaatt cacctgactt aagccccccg ccccacccga ccacagtgtc 1899

acccagatgc ttggcaggtg ctgtggcagg ggctgggtcc ctgctcgacc ttcgggtgcc 1959

ggggtgtccc gtataagagc agcacagcca ccgccacggc cactcgcagt tccaggctcc 2019

gggcagcatc tgggacccca gttcctgttg tgagaggctc cccactgcca tcccaccccc 2079

tgcaaggtgc ctcggagagc ggctggaggc tgacgggtcg aggcctgggt tttacggtcc 2139

tgcctgggtt tctgtgtggc ctggggctgc ctaccatctt tccctctctg gtccccccta 2199

ctctcatata ccaggctggg tgactggggc ccaggagcgg cccccccctc ctctgggctt 2259

cctggtggca cccctggcct gacagcccct gggaaggcct cccctctcca tctcggggcc 2319

cgagcccggc cccacctgct gagctgcagc ctccaaggcc tccttcgcac gcgtgtcagc 2379

tctgacctca gggctcccca cgcgtgttcc cctctaggaa ggccccccca ggggctcccc 2439

aaaatcctgt cctccctgaa gcacctgttc ttcgtgctcc tccatgaggg cccgcacggg 2499

gccgctgacc gcagtctcag tcacagcctg ggagcgcctg gaggttgggg ggcagcaggc 2559

gctcagtcag tcctcgggtc accatggatg gccttgctgt gtgatccaca ctgaggccca 2619

gtggtcagct ggggggctgg acaggaggca gccacttcct ggcctggctg gtgactcaca 2679

ggcccgtttc tgggaaaact cccacccacc cccactcaat ccggatggcg cagagctcgc 2739

tgtggggacc agctgtggga agtgcattga tgattagggg ccgggtctgg gggtggggta 2799

aggcgggagc cggggcggag ggtggggtgg ggttgttggg acgtctccac cagaygcctg 2859

cctgggctgc tgagctgtgc atcccgtgtg ccctgacgct ccacatgctc cctcaccggg 2919

caggggtcgg sggccccgaa tatcatcaca gsgagaccac acgaygcttc ctgcctgaac 2979

cccttcctca ggtccctcac gcttcaaggg gtgcctggcc ccagcctcgc cttgcccagc 3039

cttgccaagg ccagcacagc ccaggagtaa gccagagaaa agaaaatgcc attcggaaaa 3099

tcctaaggaa gagaggatgc atttcctcgt ctccacgtgg aagcggatca ccctaaaggt 3159

cttcatcctg gtctttttca tgctgaggag gctggggagg agaaggaaga ggaggggctg 3219

gtcttgctga cccaggagca gcagagaaag gagaaaatcc acgtgcaggg gctggccagc 3279

gctgggcttc tcgggaatgg aatcacacac ggactgtggc gtacacatca caactttaaa 3339

ccccgtccgt actgaagcct gcgtccgaat ttcttctgtt tttgtggcgg aaggataaat 3399

attccattgt aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3459

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aa 3491

<210>9

<211>178

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>9

Met Arg Trp Thr Gly Trp Gly Pro Thr Pro Gln Ala Thr Arg Thr Ala

1 5 10 15

Gly Val Asn Pro Asp Gly Trp Arg Asn Leu Arg Pro Gln Val His Gln

20 25 30

Trp Pro Arg Trp Leu Glu Thr Ser Ser Phe Val Ser Ser Val Set Lys

35 40 45

Ile Gln Glu Pro Arg Leu Ser Leu Arg Thr Thr Trp Pro Trp Pro Trp

50 55 60

Arg Gly Met Gly Arg Val Cys Asp His Pro Gly Gly Tyr Leu Arg Pro

65 70 75 80

Leu Leu Leu Pro Gly Asp Lys Gly Ala Lys Ser His Ala Ala Pro Met

85 90 95

Gln Pro His Val Pro Asp Asp Gly Ser Gln Ala Ser Pro Ser His Gly

100 105 110

Cys Ser Trp Ala Ala Ser Leu Val Ala Trp Thr Ser His Pro Arg Gly

115 120 125

Thr Cys Ser Arg Gln Pro Pro His Leu Arg Gly His Gly Arg Arg Trp

130 135 140

Gly Ser Ser Ala Gly Asp Gly Val Thr Asp Glu Asp Gln Pro Gln Pro

145 150 155 160

Arg Gly Pro Leu Ala Ala Gly Asn Arg Ser Thr Pro Pro Val Gly Ala

165 170 175

Glu Pro

<210>10

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<221>misc_feature

<223>引物

<400>10

tgtgaacacc ttgagccttg 20

<210>11

<211>18

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<221>misc_feature

<223>引物

<400>11

tgcaacctct gcctcaca 18

<210>12

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<221>misc_feature

<223>引物

<400>12

tcagcgtgtg cagtctctct 20

<210>13

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<221>misc_feature

<223>引物

<400>13

tttttgagtg gccaaagtcc 20

<210>14

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<221>misc_feature

<223>引物

<400>14

gcactgtgtg tttggacagc 20

<210>15

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<221>misc_feature

<223>引物

<400>15

tatccttccg ccacaaaaac 20

Claims

1.一种分离的具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白，其特征在于，它是选自下组的氨基酸序列之一所示的多肽：SEQ ID NO：3、6、9。

2.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，该多肽是SEQ ID NO：6或9氨基酸序列所示的多肽。

3.一种分离的多核苷酸，其特征在于，它选自下组：

(a)编码如权利要求1所述多肽的多核苷酸；或

(b)与多核苷酸(a)完全互补的多核苷酸。

4.如权利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，该多核苷酸编码的多肽的氨基酸序列选自下组之一：SEQ ID NO：3、6、9。

5.如权利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，该多核苷酸的序列是选自下组之一：

SEQ ID NO：2、5、8的编码区序列或全长序列。

6.一种载体，其特征在于，它含有权利要求3所述的多核苷酸。

7.一种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于，它是选自下组的一种宿主细胞：

(a)用权利要求6所述的载体转化或转导的宿主细胞；

(b)用权利要求3所述的多核苷酸转化或转导的宿主细胞。

8.一种具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白活性的多肽的制备方法，其特征在于，该方法包含：

(a)在适合表达具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白的条件下，培养权利要求7所述的宿主细胞；和

(b)从培养物中分离出具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白活性的多肽。