CN1861805A - 甘油三磷酸脱氢酶基因与原发性高血压的相关性 - Google Patents

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CN1861805A
CN1861805A CN 200510025750 CN200510025750A CN1861805A CN 1861805 A CN1861805 A CN 1861805A CN 200510025750 CN200510025750 CN 200510025750 CN 200510025750 A CN200510025750 A CN 200510025750A CN 1861805 A CN1861805 A CN 1861805A
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hypertension
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snp
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张怡
张奎星
朱鼎良
高平进
王谷亮
黄薇
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NANFANG RESEARCH CENTRE STATE HUMAN GENE GROUP
Shanghai Research Institute Of Hypertension
Original Assignee
NANFANG RESEARCH CENTRE STATE HUMAN GENE GROUP
Shanghai Research Institute Of Hypertension
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Abstract

本发明公开了一种检测原发性高血压易感性的方法,它包括检测个体的甘油三磷酸脱氢酶基因GPD2、转录本和/或蛋白与正常相比是否存在变异,存在变异就表明该个体患原发性高血压的可能性大于正常人群。本发明还公开了相应的检测试剂盒。

Description

甘油三磷酸脱氢酶基因与原发性高血压的相关性
技术领域
本发明涉及分子生物学和医学领域。更具体地涉及人甘油三磷酸脱氢酶基因(glycerol-3-phosphate dehydrogenase 2,GPD2)的单核苷酸多态性(singlenucleotide polymorphism,SNP)及其与原发性高血压的相关性。本发明还涉及检测这些SNP的方法和试剂盒。
背景技术
原发性高血压(essential hypertension,EH)是最常见的心血管疾病,其发病率逐年上升,并可引起严重的心、脑、肾并发症,是脑卒中和冠心病的主要危险因素。EH是一种由遗传因素和环境因素相互作用而发病的多基因病,寻找EH相关基因进而阐明高血压发病的遗传机制已经成为目前研究的热点(HarrapSB.Hypertension:genes versus environment.Lancet,1994,344:169-171)。
定位克隆法是研究EH遗传机制的主要研究之一,即利用一定数量的覆盖整个基因组的微卫星引物,对大样本家系或同胞对进行连锁分析,而将EH易感基因位点定位到某一染色体区域。上海市高血压研究所已完成对上海地区汉族高血压家系的全基因扫描,研究提示2q14-q23区域与高血压存在紧密连锁关系(Zhu DL,Wang HY,Xiong MM,et al.Linkage of hypertension tochromosome 2q14-q23 in Chinese families.J Hypertens 2001;19:55-61),然而并没有确定该区域内哪个基因为EH易感基因。GPD2基因即是该定位区域内的众多候选基因之一,但目前没有证实GPD2基因与原发性高血压相关性的报道,更没有证实GPD2基因的SNP与原发性高血压相关性的报道。
综上所述,为了最终实现治疗高血压,本领域迫切需要寻找原发性高血压易感基因,并开发检测原发性高血压的方法、试剂盒,以及相关的治疗药物。
发明内容
本发明的目的就是提供一种辅助性诊断(尤其是早期诊断)高血压等高血压的方法及检测试剂盒。
本发明的另一目的是提供一种新的治疗高血压的方法。
在本发明的第一方面,提供了一种对个体的高血压易感性进行辅助性诊断的方法,它包括步骤:
检测该个体的GPD2基因、转录本和/或蛋白,并与正常的GPD2基因、转录本和/或蛋白相比较,
存在差异就表明该个体患高血压的可能性高于正常人群。
在另一优选例中,检测的是GPD2的基因或转录本,并与正常GPD2核苷酸序列比较差异。
在另一优选例中,所述的差异是选自下组的单核苷酸多态性:
115330位A→G;
135053位G→A;
其中,核苷酸位置编号基于SEQ ID NO:1。
在本发明的第二方面,提供了一种检测样品是否存在GPD2基因的单核苷酸多态性的方法,包括步骤:
(a)用GPD2基因特异性引物扩增样品的GPD2基因,得到扩增产物;和
(b)检测扩增产物中是否存在选自下组的单核苷酸多态性:
115330位A→G;
135053位G→A;
其中,核苷酸位置编号基于SEQ ID NO:1。
在另一优选例中,所述的单核苷酸多态性是115330位AG。
在本发明的第三方面,提供了一种药物组合物,它含有安全有效量的GPD2蛋白以及药学上可接受的载体。
还提供了一种GPD2基因和蛋白的用途,它们被用于(a)制备辅助性检测的试剂;或(b)制备治疗高血压的药物。
在本发明的第四方面,提供了一种用于辅助性检测高血压的试剂盒,它包括特异性扩增GPD2基因或转录本的引物和说明书。
在另一优选例中,所述的试剂盒还含有选自下组的试剂:
(a)与突变部位结合的探针;
(b)识别突变位点的限制性内切酶。
在另一优选例中,所述的突变选自:
115330位A→G;
135053位G→A;
其中,核苷酸位置编号基于SEQ ID NO:1。
更佳地,所述的单核苷酸多态性是115330位AG。
附图说明
图1显示了GPD2的一种SNP图像(以SNP04为例)的测序结果。
具体实施方式
本发明人经过多年研究,首次发现和证明了GPD2基因与高血压密切相关,而且发现了它的新功能:GPD2的改变将导致高血压,其中关联研究结果显示,在GPD2第115330位的SNP04(A/G)在病例和对照组中的分布存在显著性差异(P<0.05),该SNP多态可改变氨基酸编码进而可能影响基因表达产物的功能,因此与高血压发病存在密切的相关性。基于此发现,本发明提供了利用检测GPD2基因、转录本或蛋白是否存在突变,从而为诊断高血压提供辅助性或早期参考指标的方法和试剂盒。
GPD2基因的总长度为149000bp。其详细序列可参见网址http://genome.ucsc.edu/或http://www.ncbi.nlm.nih.gov/,或参见SEQ IDNO:1。
基于本发明的新发现,GPD2蛋白或多肽有多方面的新用途。这些用途包括(但不限于):直接做为药物治疗GPD2蛋白功能低下或丧失所致的疾病(如高血压),和用于筛选促进GPD2蛋白功能的物质,如抗体、多肽或其它配体。用表达的重组人GPD2蛋白筛选多肽库可用于寻找有治疗价值的能刺激人GPD2蛋白功能的多肽分子。
另一方面,本发明还包括对人GPD2 DNA或是其片段编码的多肽具有特异性的多克隆抗体和单克隆抗体,尤其是单克隆抗体。这里,“特异性”是指抗体能结合于人GPD2基因产物或片段。较佳地,指那些能与人GPD2基因产物或片段结合但不识别和结合于其它非相关抗原分子的抗体。本发明中抗体包括那些能够结合并抑制人GPD2蛋白的分子,也包括那些并不影响人GPD2蛋白功能的抗体。
本发明不仅包括完整的单克隆或多克隆抗体,而且还包括具有免疫活性的抗体片段,如Fab’或(Fab)2片段;抗体重链;抗体轻链;遗传工程改造的单链Fv分子;或嵌合抗体。
本发明的抗体可以通过本领域内技术人员已知的各种技术进行制备。例如,纯化的人GPD2基因产物或者其具有抗原性的片段,可被施用于动物以诱导多克隆抗体的产生。与之相似的,表达人GPD2蛋白或其具有抗原性的片段的细胞可用来免疫动物来生产抗体。多种佐剂可用于增强免疫反应,包括但不限于弗氏佐剂等。
本发明的抗体也可以是单克隆抗体。此类单克隆抗体可以利用杂交瘤技术来制备。本发明的抗体包括能阻断人GPD2蛋白功能的抗体以及不影响人GPD2蛋白功能的抗体。本发明的各类抗体可以利用人GPD2基因产物的片段或功能区,通过常规免疫技术获得。这些片段或功能区可以利用重组方法制备或利用多肽合成仪合成。与人GPD2基因产物的未修饰形式结合的抗体可以用原核细胞(例如E.Coli)中生产的基因产物来免疫动物而产生;与翻译后修饰形式结合的抗体(如糖基化或磷酸化的蛋白或多肽),可以用真核细胞(例如酵母或昆虫细胞)中产生的基因产物来免疫动物而获得。
抗人GPD2蛋白的抗体可用于免疫组织化学技术中,检测活检标本中的人GPD2蛋白。一种优选的抗GPD2抗体是不识别正常GPD2但识别突变GPD2的抗体,或者识别正常GPD2但不识别突变GPD2的抗体。利用该抗体对正常和异常GPD2蛋白的特异性差异,可以方便地进行蛋白质水平的高血压易感性检测。
利用本发明GPD2蛋白,通过各种常规筛选方法,可筛选出与GPD2蛋白发生相互作用的物质,如抑制剂、激动剂或拮抗剂等。
本发明GPD2蛋白及其抗体、抑制剂、激动剂、拮抗剂等,当在治疗上进行施用(给药)时,可提供不同的效果。通常,可将这些物质配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的水性载体介质中,其中pH通常约为5-8,较佳地pH约为6-8,尽管pH值可随被配制物质的性质以及待治疗的病症而有所变化。配制好的药物组合物可以通过常规途径进行给药,其中包括(但并不限于):肌内、静脉内、或皮下给药。
正常的GPD2多肽可直接用于疾病治疗,例如,用于高血压治疗。在使用本发明GPD2蛋白时,还可同时使用其他治疗高血压的药剂。
本发明还提供了一种药物组合物,它含有安全有效量的本发明GPD2蛋白以及药学上可接受的载体或赋形剂。这类载体包括(但并不限于):盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其组合。药物制剂应与给药方式相匹配。本发明的药物组合物可以被制成针剂形式,例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他辅剂的水溶液通过常规方法进行制备。诸如片剂和胶囊之类的药物组合物,可通过常规方法进行制备。药物组合物如针剂、溶液、片剂和胶囊宜在无菌条件下制造。活性成分的给药量是治疗有效量,例如每天约0.1微克/千克体重-约10毫克/千克体重。此外,本发明的多肽还可与其他治疗剂一起使用。
使用药物组合物时,是将安全有效量的GPD2蛋白或其拮抗剂、激动剂施用于哺乳动物,其中该安全有效量通常至少约0.1微克/千克体重,而且在大多数情况下不超过约10毫克/千克体重,较佳地该剂量是约0.1微克/千克体重-约100微克/千克体重。当然,具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素,这些都是熟练医师技能范围之内的。
人GPD2蛋白的多聚核苷酸也可用于多种治疗目的。基因治疗技术可用于治疗由于GPD2蛋白的无表达或异常/无活性的GPD2蛋白的表达所致的细胞增殖、发育或代谢异常。构建携带GPD2基因的重组病毒载体的方法可见于已有文献(Sambrook,et al.)。另外重组人GPD2基因可包装到脂质体中,然后再转移至细胞内。
多聚核苷酸导入组织或细胞内的方法包括:将多聚核苷酸直接注入到体内组织中;或在体外通过载体(如病毒、噬菌体或质粒等)先将多聚核苷酸导入细胞中,再将细胞移植到体内等。
本发明还涉及定量和定位检测人GPD2蛋白水平的诊断试验方法。这些试验是本领域所熟知的,且包括FISH测定和放射免疫测定。
一种检测检测样品中是否存在GPD2蛋白的方法是利用GPD2蛋白的特异性抗体进行检测,它包括:将样品与GPD2蛋白特异性抗体接触;观察是否形成抗体复合物,形成了抗体复合物就表示样品中存在GPD2蛋白。
GPD2蛋白的多聚核苷酸可用于GPD2蛋白相关疾病的诊断和治疗。在诊断方面,GPD2蛋白的多聚核苷酸可用于检测GPD2蛋白的表达与否或在疾病状态下GPD2蛋白的异常表达。如GPD2 DNA序列可用于对活检标本的杂交以判断GPD2蛋白的表达异常。杂交技术包括Southern印迹法,Northern印迹法、原位杂交等。这些技术方法都是公开的成熟技术,相关的试剂盒都可从商业途径得到。本发明的多核苷酸的一部分或全部可作为探针固定在微阵列(microarray)或DNA芯片(又称为“基因芯片”)上,用于分析组织中基因的差异表达分析和基因诊断。用GPD2蛋白特异的引物进行RNA-聚合酶链反应(RT-PCR)体外扩增也可检测GPD2蛋白的转录产物。
检测GPD2基因的突变也可用于诊断高血压。检测可以针对cDNA,也可针对基因组DNA。GPD2蛋白突变的形式包括与正常野生型GPD2 DNA序列相比的点突变、易位、缺失、重组和其它任何异常等。一类优选的突变是表2所示的SNP。可用已有的技术如Southern印迹法、DNA序列分析、PCR和原位杂交检测突变。另外,突变有可能影响蛋白的表达,因此用Northern印迹法、Western印迹法可间接判断基因有无突变。
本发明的主要优点在于:
首次用实验证实了GPD2的改变与高血压的密切相关性,进而提供了辅助性诊断高血压(或易感性)的方法和试剂盒。本发明可以为临床诊断(尤其是早期诊断)高血压提供极为有价值的辅助性参考指标,从而有利于实现早诊断、早预防、早得益。
下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。应理解,这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件如Sambrook等人,分子克隆:实验室手册(New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989)中所述的条件,或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1
1对象与方法
1.1研究对象
1.1.1中国人SNP发现和确认样本
样本为来自24个核心汉族高血压家系、无亲缘关系的24例原发性高血压病人。
1.1.2SNP分型和关联分析研究样本
所有受试者均为汉族。原发性高血压组(EH组)和正常血压组(NT组)各300例,均来自中国上海地区,彼此无亲缘关系。EH组为上海市瑞金医院高血压科住院病人,均为汉族,无亲缘关系。平均年龄为57.32±11.75岁。入选标准:
收缩压140mmHg和/或舒张压90mmHg,或正在接受抗高血压药物治疗至少一年以上;
在30岁之前或60岁以后发病者除外;
临床上除外继发性高血压,如原发性醛固酮增多症、嗜铬细胞瘤、肾性高血压等。
NT组为上海地区40岁以上居民,均为汉族,无亲缘关系。平均年龄56.39±6.45岁。收缩压<140mmHg且舒张压<90mmHg,无服用抗高血压药物史,排除肝、肾功能障碍、甲状腺疾病、糖尿病、冠心病史。
1.2实验方法
1.2.1DNA提取
常规酚-氯仿法提取外周血白细胞DNA,并标化DNA浓度值至20ng/μl。
1.2.2PCR及测序引物的设计
根据GenBank中GPD2的基因组序列,应用prime3软件(美国麻省理工生物医学白头研究所,http://www-gonome.wi.mit.edu/cgi-bin/primer/primer3_www.cgi)设计引物。具体引物如下表所示。
                             表1  引物序列表
  引物名称   位置   序列(5’-3’)  SEQ ID NO:
  GPD2P1   上游   taaacaatcgcctctgagcat  2
  下游   gagcaatgattctcacccttg  3
  GPD2P2   上游   cagactgactcattggacttgg  4
  下游   agcatgcccagcttacttgtt  5
  GPD2P3   上游   agtgggaagcctgctgttc  6
  下游   ggactggaaagcctgagcta  7
  GPD2P4   上游   gcggacgagtgtctcctct  8
  下游   ctcttcccgacttcctcctc  9
  GPD2E1   上游   gtatccgggcaggaggtg  10
  下游   cttctgctggtgggaagaaat  11
  GPD2E2   上游   tttgagttgcagtatacacattgg  12
  下游   acacacagttctccaggatca  13
  GPD2E3   上游   cccaaggcagttggtcctat  14
  下游   aatgcatgctgagcttgtacc  15
  GPD2E4   上游   ctaccctggagaagtgccttt  16
  下游   gaactgacacacctctcctgaa  17
  GPD2E5   上游   gagggagctatcctcactcaga  18
  下游   aatacgacctcctttgccttt  19
  GPD2E6   上游   ttcagctaggttggtgtcaaa  20
  下游   cgtgcacgtgtgtttgtgt  21
  GPD2E7   上游   gtagatgcctggctgagaatg  22
  下游   gcgtggcataaatgaaagaga  23
  GPD2E8   上游   tgctcaggtcacttagtgtgg  24
  下游   aaacttcccaagtctggtttg  25
  GPD2E9   上游   tctttcttgtttgcatatttgaga  26
  下游   aggcacaagaggacaagtgtg  27
  GPD2E10   上游   tttgcctcttttgcttcctct  28
  下游   aaaataacaaggtagtatctcatacctgc  29
  GPD2E11   上游   tgacttaaattgtcctgccaga  30
  下游   tggcagcagtgagagattagg  31
  GPD2E12   上游   ctaagcattcgaagcccaagt  32
  下游   ttggaaagacatagtagtcctggtt  33
  GPD2E13   上游   ctgctggaggaccagagagta  34
  下游   ggcctaacaatattaaacacacacaa  35
  GPD2E14-15   上游   tgctggttagataagtaaggatcaa  36
  下游   ttgtagaaaaccctagatgagaaaa  37
  GPD2E16   上游   gagatggggtttctccatgtt  38
  下游   ctggcttcgagctttcttctt  39
  GPD2E17-1   上游   atacctgcctcttcccctctt  40
  下游   tggcaaatacaccaacacctt  41
  GPD2E17-2   上游   ccaattccagtggaccgtagt  42
  下游   tgcatgtcacaaaatgtctcc  43
1.2.3GPD2基因的调控区和编码区分段体外扩增
以提取的DNA为模板,用Taq酶,在GeneAmp 9700 PCR仪上以Touchdown程序进行PCR扩增。反应条件为:94℃预变性2分钟,94℃变性30秒,63℃退火40秒,72℃延伸40秒,共10个循环,每个循环退火温度递减0.5℃;以后94℃变性30秒,58℃退火40秒,72℃延伸40秒,共30个循环;最后72℃延伸7分钟。PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳验证。
1.2.4SNP的发现和检测
PCR产物经Resin树脂纯化后,用ABI-PRISMTM 377 DNA测序仪(美国应用生物系统公司appliedbiosystems(ABI)进行荧光标记末端终止法双向测序,用Polyphred软件(美国华盛顿大学http://droog.mbt.washington.edu/Polyphred.html)进行序列的判读和SNP确认。
1.2.5SNP基因分型和关联分析
用直接单向测序法进行SNP基因分型,即在300个高血压病人和300个正常血压对照组中进行分型和关联分析。
1.3统计学方法
SNPs各基因型在病人和正常血压对照中分布的比较采用R×C表χ2检验。P<0.05认为有统计学差别。
2.结果
2.1GPD2基因SNP的发现和分布
GPD2的基因共有17个外显子,测序总长度是8586bp,共发现8个SNP,包括启动子区3个,编码区2个,内含子2个,3’UTR1个。其中编码区、内含子区和3’UTR的7个SNP(SNP02,SNP03,SNP04,SNP05,SNP06,SNP07和SNP08)都是新发现的SNP。GPD2基因SNP分布情况见表2。测序确认杂合子图像见图1。
           表2  中国人GPD2基因SNP的种类及其分布
SNP名称   在基因序列中的位置 基因区域   等位基因 检测引物
  SNP01   1916   Promoter   A/G   GPD2E1
  SNP02   1980   Promoter   G/C   GPD2E1
  SNP03   2153   Promoter   T/G   GPD2E1
  SNP04   115330   Exon   A/G   GPD2E7
  SNP05   115377   intron   C/A   GPD2E7
  SNP06   134882   intron   A/G   GPD2E11
  SNP07   135053   Exon   G/A   GPD2E11
  SNP08   148671   3’UTR   G/C   GPD2E17-2
说明:
(1)表中第一列为SNP的名称;第二列为SNP在GPD2基因序列中的位置;第三列为SNP所属基因区域,exon为外显子区,intron为内含子区;第四列为在等位基因中SNP的两个碱基;第五列为测序所用引物。
(2)SNP02,SNP03,SNP04(图1),SNP05,SNP06,SNP07,SNP08为新发现的SNP。
2.2SNP位点的基因分型
在300例EH和300例NT中,对SNP04进行基因分型和关联分析。
结果提示,SNP04等位基因分布在两组中有显著差异(P<0.05)(表3)表明该SNP与高血压显著相关。
                        表3  SNP05基因分型和关联分析结果
                     基因型                  等位基因频率
EHNT 300300   AA204227   AG8767   GG96   A0.8250.868   G0.1750.132   χ24.34   p0.037
EH,原发性高血压NT,正常血压对照
3.讨论
高血压是遗传因素与多种环境因素相互作用而导致的多基因疾病,其遗传机制的研究已经成为目前的研究热点。迄今研究者已经成功地确定了几种单基因遗传性高血压的候选基因,但占高血压约95%的原发性高血压的遗传方式和易感基因仍未确认。定位克隆法是研究EH遗传机制的主要研究之一,上海市高血压研究所已完成对上海地区汉族高血压家系的全基因扫描,研究提示2q14-q23区域与高血压存在紧密连锁关系,GPD2即为该定位区域内的众多候选基因之一。
由于多基因疾病表现型的复杂性、相关基因的微效性和人群的遗传异质性,其相关基因定位克隆研究一直是一个很大的挑战。在原发性高血压候选基因中筛选多态性标记,然后在病例-对照中进行相关分析是目前寻找疾病相关基因的重要方法之一。SNP数量多、分布广、密度高,是进行遗传连锁分析和关联研究最理想的遗传标记。人的GPD2基因位于2号染色体上(2q24),编码线粒体的甘油三磷酸脱氢酶,有17个外显子,表达于肾脏、心脏等多种器官(Ferrer J,Aoki M,Behn P,et al.Mitochondrial glycerol-3-phosphatedehydrogenase.Cloning of an alternatively spliced human islet-cell cDNA,tissuedistribution,physical mapping,and identification of a polymorphic genetic marker.Diabetes 1996;45(2):262-6)。本研究首次对中国汉族人群进行了GPD2基因的SNP检测,发现了位于启动子区的3个SNP、编码区的2个SNP、内含子区的2个SNP和5’UTR区的1个SNP。除启动子区外的其余7个SNP均尚未被收录于NCBI的SNP数据库(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/SNP)中。本研究发现编码区的SNP04是一个非同义的SNP,通过A/G碱基的改变,导致了编码的氨基酸由精氨酸(Arg)变为组氨酸(His),提示这一SNP可能改变基因的功能。在上海地区汉族中,通过病例-对照分析,进行它与高血压间的相关性研究。结果表明该SNP的G等位基因在高血压病例中的频率为17.5%,在正常人中为13.2%,在高血压病例中的频率显著高于正常人(P<0.05),提示GPD2基因该SNP与原发性高血压发生相关。
实施例2
原发性高血压易感性辅助检测试剂盒
制备一试剂盒,它含有:
PCR反应液         含Taq酶dNTP镁离子PCR反应缓冲液
名称              序列(5’→3’)                    编号             浓度
正向引物          gtagatgcctggctgagaatg             SEQ ID NO:22    干粉20D
反向引物          gcgtggcataaatgaaagaga             SEQ ID NO:23    干粉20D
PCR反应液         含Taq酶dNTP镁离子PCR反应缓冲液
抽取待检测男性病人的血液3ml,使用常规方法(或使用特定的试剂盒)从血液中提取DNA。将高血压检测试剂盒中的PCR引物稀释到1μmol/μl,以所提取的DNA为模板与所提供的引物进行PCR反应。PCR产物纯化后,用ABI-PRISMTM 377 DNA测序仪进行荧光标记末端终止法双向测序,用Polyphred软件进行序列的判读和SNP确认。检测结果图1所示。其中,含C表示高血压易感性高于正常人群。
用本实施例的试剂盒对近百例待测对象进行了SNP04的检测,对于检测发现存在115330位A→G的3个对象,再对其进行血压测量,结果证实2位具有115330位A→G的人的血压高于正常人。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考,就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解,在阅读了本发明的上述讲授内容之后,本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改,这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
                          序列表
<110>上海市高血压研究所
     国家人类基因组南方研究中心
<120>甘油三磷酸脱氢酶基因与原发性高血压的相关性
<130>052514
<160>1
<170>PatentIn version 3.1
<210>1
<211>149000
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>1
aaggaagttt ttaaaggaaa agaagaggca gtttctaaat tgtttaccaa taatttacat    60
aaaaaaacaa actattaatt gtctatagat tgttcttcgt atcacaaatt ccaggaacat   120
gaagatatgg ttgggtagtc agtcatgaac aaaatgcctt taaacaatcg cctctgagca   180
tgagtgtggg gggtgcaact tatgtcccat attcaaggtc tctctgggcc tgataaattt   240
tgcatacctc acattgctca aatgctctga actatttttc ttttctcaac tacaatttcc   300
tttttctggt tgctcatgat tcaactgggg gagcttttaa accgtggttc tcaaacttta   360
atgtgcatca gaactaccca aagggcttgt taaatctggg tagctcagcc ccagccccag   420
agtctatgaa tcaggtcact ggagtacagt ttctgtcaag ttctcaggtg atgctgatgc   480
tgcgggctcc agtgactaca cttttagagc cagttttaaa atacaaggac ttgcagatcc   540
cacgtccaga ctgactcatt ggacttgggg atggaaatct ggcattccac ccctccctgc   600
cccctccccc caattttaat gtgtccaagg gtgagaatca ttgctcctct gtggactatg   660
gatggttccc tgaagttact gagtttggga tttaataaat atatgcattc ctctgggtca   720
actacaggaa ttctgcggta tttaaggaca ttaaatgagt gacttaatac tttatttaaa   780
aaaataccac tgctttttgg ttcacactaa ttttcttcct tcttttggaa aggcatttcc   840
gtccatctcc tggatatttt ccaataccac gatagaaagg ttattagtac agcacccaga   900
ggtcttcgga gcaaagctgt taaagaagtg gggtccattt gagccccaac tttgccttcc   960
ttaggtcccc ttgggcttgt ctagccctag gagttccaac aagtaagctg ggcatgctca  1020
gtgggcaggg tcgttttttt tttttgggtg gcggggggtt gcaagtggga agcctgctgt  1080
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gcctagggaa gcctgccggc cgggaggtac agagtaggag aagccagatc ccagggcgga  1380
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tgctaaaaca aaactgttag tattttgcat gtgttccaag tttaaagaga tgtgaagttt  2940
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ctactgacca ctctagtccc agtcctacag ttcttgctgg ctaccacatg acatctggat  3060
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tagatatttt aaaagatttg atgattattg tgcataactc atgttggcaa actattataa    3540
ctctgaactt atcctgtttg gttgttttct ttcatctcta gcgtgtaagt tctatgagag    3600
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aaatttgggc aaagaattct tgcatgttgt gcatgaatta tccgtacatt tttttcggtt    4080
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gaagggaagc aattttcaga tcagtatcta atttctcagt tttagttttt gaatgtgatg    4200
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aaaaaaaaaa aaagtgcctt gagcacatta aaggacaaaa aatgatgcat taagatttgc   148140
ttttagaggc agggtgattt actagatgga tgtagttttt gtggcagtgt tgaaatacct   148200
gcctcttccc ctcttttgga aacgtttaaa aattagactc ttcttatctg agctgtagta   148260
cttgttaagg tttttgatgg agcacttaat tacctctgtc tgctgcaatt ctaacgatta   148320
tgatgccatg aagaagagag taagttggcc tgcgttctga atctgttgca tattttctct   148380
ttaagctgat gagtgctatt caaaaaggaa gggtatctgg aagccggctt gctatactaa   148440
tgaaaactgc agaagagaac ctcgacagaa gagttccaat tccagtggac cgtagttgtg   148500
gaggattgtg agtctgggca gtaaatccac agccaacaaa catagaaacg acaaatcacc   148560
atgtaacaac cagagatgac tgaaaccact ctgaaataat gaatgtggat agctgccttt   148620
tttaacacta gaaaacattc caaaacttta aggtgttggt gtatttgcca gctttatttg   148680
ctgtacttta tttgtatttg ccattcagtc tagcttttaa gtatattttt ttctttttct   148740
cattttcaat gcacattagt tttgcatctg ttttgtgacc tgttagatgt gacacattct   148800
ctttttgttt attcccttat tctaaatgag ttctaaaaac ataatatttt ggcaaaaatt   148860
gaaaaaagct ggagacattt tgtgacatgc atacagatag catgtgttat taaaaagagt   148920
tgcctattga aatgatcatg tttctggaga aattaagctt atagacagca tgtgttatta   148980
aaaagagtta cctattgaaa                                               149000

Claims (10)

1.一种对个体的高血压易感性进行辅助性诊断的方法,其特征在于,它包括步骤:
检测该个体的GPD2基因、转录本和/或蛋白,并与正常的GPD2基因、转录本和/或蛋白相比较,
存在差异就表明该个体患高血压的可能性高于正常人群。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,检测的是GPD2的基因或转录本,并与正常GPD2核苷酸序列比较差异。
3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的差异是选自下组的单核苷酸多态性:
    115330位A→G;
    135053位G→A;
其中,核苷酸位置编号基于SEQ ID NO:1。
4.一种检测样品是否存在GPD2基因的单核苷酸多态性的方法,其特征在于,包括步骤:
(a)用GPD2基因特异性引物扩增样品的GPD2基因,得到扩增产物;和
(b)检测扩增产物中是否存在选自下组的单核苷酸多态性:
    115330位A→G;
    135053位G→A;
其中,核苷酸位置编号基于SEQ ID NO:1。
5.如权利要求4所述的方法,其特征在于,所述的单核苷酸多态性是115330位A G。
6.一种GPD2基因和蛋白的用途,其特征在于,用于制备辅助性检测的试剂。
7.一种用于辅助性检测高血压的试剂盒,其特征在于,它包括特异性扩增GPD2基因或转录本的引物和说明书。
8.如权利要求7所述的试剂盒,其特征在于,它还含有选自下组的试剂:
(a)与突变部位结合的探针;
(b)识别突变位点的限制性内切酶。
9.如权利要求8所述的试剂盒,其特征在于,所述的突变选自:
    115330位A→G;
    135053位G→A;
其中,核苷酸位置编号基于SEQ ID NO:1。
10.如权利要求9所述的试剂盒,其特征在于,所述的单核苷酸多态性是115330位A G。
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