CN1723800A - 一种具有抗疲劳和抗氧化功能的保健品及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种具有抗疲劳和抗氧化功能的保健品及制备方法。该保健品是由主要含银杏叶、肉苁蓉、山药、人参活性成分以及其他辅料制成的口服制剂。本发明在传统中医药学的经典理论指导下，运用了现代中药学制剂工艺，提供了同时解除疲劳和抗氧化，效果显著的保健品。

Description

一种具有抗疲劳和抗氧化功能的保健品及制备方法

技术领域

本发明涉及保健品领域。具体涉及一种具有抗疲劳和抗氧化功能的保健品及制备方法。

背景技术

随着社会的发展，人们的工作压力日益加重，所以人们一直期待着能在日常生活的不经意之中，同时能获得既缓解体力疲劳又抵抗自身氧化的具有双重保健作用的保健品，以提高身体素质，改善生活质量。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于在传统中医药学的经典理论指导下，运用现代中药学制剂工艺，提供一种能同时解除疲劳和抗氧化的保健品。

本发明公开的具有抗疲劳和抗氧化功能的保健品由主要含银杏叶、肉苁蓉、山药、人参活性成分以及其他辅料制成的口服制剂。

本发明各活性成分占总活性成分重量百分比含量为：银杏叶16-32％、肉苁蓉32-56％、山药16-32％、人参2-5％。

本发明所述其他辅料包括各种营养成分，食品添加剂和药用辅料等，如：维生素E及紫苏油等。

本发明所要解决的另一技术问题在于公开上述具有抗疲劳和抗氧化功能保健品的制备方法。

本发明上述保健品的制备包括下列步骤：

1.银杏叶和山药、肉苁蓉和人参分成二组，分别洗净，切成片或丝，用水和/或乙醇浸泡，回流提取；

2.将上述二组提取液合并离心分离，上清液浓缩，喷雾干燥，即得混合粉；

3.将上述混合粉按常规方法制成各种口服制剂；

4.用分光光度计检测制剂中总黄酮含量以芦丁计不小于2021mg/100g，粗多糖以葡萄糖计不小于404.2mg/100g，总皂甙以人参皂甙苷Re计不小于853.5mg/100g。

在本发明保健品配方中银杏叶是主要原料之一，有实验研究报道以适量游泳和疲劳游泳的小鼠通过灌服银杏叶提取物建立动物实验模型，观察其心肌线粒体的抗氧化酶的活力和脂质过氧化水平。灌服银杏叶提取物的小鼠通过适量游泳和疲劳游泳后，抗氧化酶(SOD)的活力均显著高于各自的对照组，丙二醛(MDA)的含量均显著低于各自的对照组。结果提示，通过服用银杏叶提取物可减轻由运动产生的内源性自由基对小鼠的伤害，银杏叶提取物具有较强的抗自由基损伤和抗脂质过氧化损伤的作用，是天然的自由基清除剂。

许多研究已表明，机体内活性氧、自由基过量会引起脂质过氧化、蛋白质变性、酶失活、多糖降解、DNA链断裂、生物结构受损、细胞解体乃至机体病变和死亡。因此，清除过量活性氧、自由基，其生理意义重大。银杏叶黄酮W和H都具有较强的清除活性氧和自由基的作用，是一种功能较多的抗氧化剂。

肉苁蓉为多年生寄生草本植物，味甘酸、性温，具有补肾益精，润燥滑肠等功能。药理实验表明，小鼠游泳实验是一种负荷性强体力活动，直到动物体力消耗殆尽而下沉。实验组给小鼠口饲肉苁蓉煎液，能延长缺氧小鼠的存活时间，因而肉苁蓉对心脏和脑组织缺氧有明显的保护作用。说明肉苁蓉煎剂可能有增强体质，对抗运动性疲劳的作用，而使小鼠游泳时间明显延长。在肉苁蓉的抗氧化作用的动物实验中，采用邻苯三酚自氧化、硫代巴比妥酸(TBA)和荧光法，分别测定小鼠心、肝、脑、肾组织中SOD活性、MDA及脂褐质含量。结果：肉苁蓉总甙GCS(125mg/kg，250mg/kg)组能显著提高脑、肾组织中SOD活性，250mg/kg组提高心、肝组织中SOD活性，并显著降低各组织MDA及脂褐质含量。结果提示GCS能有效地提高机体组织抗氧化能力，防止组织脂质过氧化损伤。

山药是常用的中药，具有补肺养胃、生津益肺、补肾涩精之功。实验证明中医药在清除体内自由基、提高机体抗氧化能力方面具有较大优势，已有不少发现，山药就具有较好的抗氧化作用，山药多糖能明显提高衰老模型小鼠血红细胞中SOD活力及血CAT活力，提高机体抗氧化活性，抑制脂褐质等的形成，使衰老模型小鼠血、脑匀浆和肝匀浆中LPO水平明显降低。这和中医临床认为的山药具有补中益气及古代文献记载的轻身延年等作用相一致。从而提示山药多糖的抗氧化作用可能是山药补益抗衰的部分机理。

人参皂甙是中药人参的重要化学成分，其水解产物包括人参二醇、人参三醇、齐墩果酸等多种皂甙元。强制运动负荷时机体的对抗是疲劳抑制的生理机制起作用，负荷终止后是疲劳恢复的生理机制作用的原理，动物实验表明人参及其配伍具有明显的抗疲劳作用。有实验表明人参Rb组皂苷50mg/Kg、100mg/Kg、200mg/Kg剂量组对急性心肌梗死24h大鼠均可明显缩小其心肌梗死面积，降低血清CK、LDH活性，并明显降低血清LPO含量，提高SOD、CAT及GSH-Px活性，可以得出结论：人参Rb组皂苷对大鼠急性心肌梗死具有明显保护作用，可能与其对抗氧自由基引发的脂质过氧化反应，增强体内抗氧化酶活性，减少自由基对心肌的氧化损伤有关。另实验证明，人参可使血浆和组织中的MDA降低，红细胞的SOD活性增强，说明人参具有抗氧化作用。

抗氧化剂通过控制自由基来促进人体免疫系统。自由基是氧的一些不稳定形式，会损害人体的一些重要脂肪，从而损伤人体细胞。维生素E、C和A等抗氧化性物质可以控制这些自由基，保护人体免疫系统，从而可以缓解人们心理和生理上的压力。维生素E通过减少疲劳性游泳运动时小白鼠的MDA生成和提高SOD活性，对机体起到一定保护作用。另外，维生素E的抗氧化功能表现在维生素E能通过自身被氧化成生育醌，从而将ROO-转变成化学性质不活泼的ROOH，中断脂类过氧化的连锁反应，有效抑制脂类的过氧化作用，保护细胞免受不饱和脂肪酸氧化产生的毒性物质的伤害，在防止衰老、肿瘤等方面起着重要作用，若在本发明保健品中添加维生素E，则可进一步增强抗疲劳和抗氧化作用。

综上所述，以上配方，每味都有现代药理基础及临床研究依据，以银杏叶为君药，以肉苁蓉、山药为臣辅之，佐以人参，组方符合中医药理论，其制剂可达到缓解体力疲劳和抗氧化的保健功能。

对本发明保健品杏灵牌力能保软胶囊进行食品安全性毒理学评价试验，证明安全无毒：

1.急性经口毒性试验：SD大鼠和昆明种小鼠的急性经口LD50均大于15g/kg.bw，判属无毒类。

2.遗传毒性试验：Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小鼠精子畸形试验三项遗传毒性试验结果均为阴性，表明本检品无致突变作用。

3.大鼠30天喂养试验：大鼠30天喂养试验中(最高剂量为人体推荐摄入量的100倍)，受试物未引起大鼠整体健康状况、生理生化功能和器官组织形态学等各项重要指标的异常变化，初步估计最大无作用剂量大于3.3g/kg.bw(人体推荐摄入量的100倍)。

对本发明保健品杏灵牌力能保软胶囊进行抗疲劳抗氧化功效试验：

1.缓解体力疲劳功能动物试验：

杏灵牌力能保软胶囊按人体推荐剂量的10、20、30倍经口灌胃给予受试动物30天。结果显示：杏灵牌力能保软胶囊对小鼠体重无不良影响：0.66g/kg.bw剂量组小鼠负重游泳时间显著长于对照组(P＜0.05)；1.00g/kg.bw剂量组小鼠肝糖原含量显著高于对照组(P＜0.01)、尿素氮含量显著低于对照组(P＜0.05)。三个剂量组小鼠游泳后20min的血乳酸含量显著低于对照组(P＜0.05)。按评价标准，杏灵牌力能保软胶囊具有缓解体力疲劳的作用。

2.抗氧化功能动物试验

采用老龄鼠进行实验，设0.17g/kg.bw、0.34g/kg.bw和0.68g/kg三个剂量组(分别相当于人体推荐摄入量的5、10和20倍)，同时设一个老龄对照和年轻对照组。结果表明：受试物高剂量组的红细胞MDA含量显著低于对照组，全血中GSH-Px的活力显著高于对照组(P＞0.05)。按评价标准，杏灵牌力能保软胶囊抗氧化功能动物实验结果为阳性。

3.抗氧化功能人体试食试验：

杏灵牌力能保软胶囊抗氧化作用人体试食试验结果表明，试验期间受试者的精神、饮食、睡眠、大小便等未见异常，表明本检品对人体无不良影响。试验组受试者在试验后的SOD活性显著高于试验前(P＜0.05)亦显著高于对照组(P＜0.05)。试食组试验后MDA含量和GSH-Px活性与试验前比较无显著变化，与对照组比较亦无显著差异。按评价标准，杏灵牌力能保软胶囊有抗氧化功能。

具体实施方式

实施例1缓解体力疲劳功能动物试验

1.材料与方法

1.1.样品

1.1.杏灵牌力能保软胶囊，褐色油膏状，由上海杏灵科技药业股份有限公司提供，人体推荐剂量为2.0g/人/日。

1.2.试验动物及饲养

ICR雄性小白鼠，体重为18g-22g。

1.3.实验方法

将体重为18g-22g的ICR雄性小白鼠随机分为空白对照组、三个杏灵牌力能保软胶囊试验组，试验组动物分别按人体推荐剂量2.0g/日(0.033g/kg.bw)的10倍、20倍、30倍(0.33g/kg.bw、0.66g/kg.bw、1.0g/kg.bw)连续灌胃给予受试物，每天一次，共30天。空白对照组动物每天用蒸馏水灌胃，各组动物灌胃30天后分别进行以下实验。

1.3.1.负重游泳实验

末次给予受试样品30min后，将尾根部负荷5％体重铅皮的小鼠置于游泳箱中游泳。箱中水深不少于30cm，水温25℃±1℃，记录小鼠自游泳开始至死亡的时间。

1.3.2.血乳酸测定

末次给样30min后，将动物置温度为30℃的水中不负重游泳10min，并于游泳前、游泳后立即休息20min后各采眼球血20μL测定乳酸含量。并按以下公式计算血乳酸曲线下面积，以判断运动后血乳酸变化情况。

血乳酸曲线下面积＝5×(游泳前血乳酸值+3×游泳后0min血乳酸值+2×游泳后休息20min血乳酸值)

1.3.3.血清尿素氮测定

末次给受试样品30min后，将小鼠置温度为30℃的水中不负重游泳90min，休息60min后采眼球血0.5mL，血凝固后取血清用二乙酰-肟法测定血清尿素氮含量。

1.3.4.肝糖原测定

于末次给样后30min处死动物，取肝脏经生理盐水漂洗后用滤纸吸干后置于冰面上的平皿内，迅速称取肝脏100mg，测定肝糖原含量(蒽酮法)。

1.4.实验数据统计

采用PEMS统计软件3.0版对实验数据进行方差分析，方差不齐者使用秩和检验。

2.结果

2.1.杏灵牌力能保软胶囊对小鼠体重的影响：见表1-4。

表1-4显示，杏灵牌力能保软胶囊三个剂量组小鼠初始体重、中期体重及试验结束时体重与对照组比较，差异均无显著性(P＞0.05)。

表1 杏灵牌力能保软胶囊对小鼠体重的影响(负重游泳试验组)

组别	剂量(g/kg.bw)	动物数(只)	初始体重(g)( X±S)	中期体重(g)( X±S)	结束体重(g)( X±S)
						对照组	0	10	18.8±0.4	32.2±2.2	36.9±2.8
低剂量组	0.33	10	18.9±0.3	32.8±1.2	35.9±3.5
						中剂量组	0.66	10	18.8±0.4	32.4±1.8	35.8±1.9
高剂量组	1.00	10	18.8±0.4	32.7±2.7	37.7±3.3

表2杏灵牌力能保软胶囊对小鼠体重的影响(血乳酸含量测定组)

组别	剂量(g/kg.bw)	动物数(只)	初始体重(g)( X±S)	中期体重(g)( X±S)	结束体重(g)( X±S)
						对照组	0	12	19.2±0.4	33.6±1.9	38.3±2.4
低剂量组	0.33	12	19.1±0.3	33.2±2.1	37.8±2.7
						中剂量组	0.66	12	19.2±0.4	32.4±2.7	35.7±2.9
高剂量组	1.00	12	19.2±0.4	33.2±2.2	37.8±2.9

表3杏灵牌力能保软胶囊对小鼠体重的影响(肝糖原含量测定组)

组别	剂量(g/kg.bw)	动物数(只)	初始体重(g)( X±S)	中期体重(g)( X±S)	结束体重(g)( X±S)
						对照组	0	12	20.3±0.5	34.7±1.6	39.8±1.5
低剂量组	0.33	12	20.2±0.4	34.1±2.1	38.6±2.3
						中剂量组	0.66	12	20.2±0.4	33.2±1.5	37.8±2.3
高剂量组	1.00	12	20.2±0.4	34.2±1.7	39.4±2.2

表4杏灵牌力能保软胶囊对小鼠体重的影响(尿素氮含量测定组)

组别	剂量(g/kg.bw)	动物数(只)	初始体重(g)( X±S)	中期体重(g)( X±S)	结束体重(g)( X±S)
						对照组	0	11	21.2±0.4	34.8±2.1	38.8±2.2
低剂量组	0.33	11	21.3±0.5	33.5±3.2	37.7±2.6
						中剂量组	0.66	11	21.3±0.5	33.5±2.3	38.3±2.7
高剂量组	1.00	11	21.2±0.4	35.3±1.8	39.8±2.5

2.2.杏灵牌力能保软胶囊对小鼠负重游泳时间的影响，结果见表5。

表5杏灵牌力能保软胶囊对小鼠负重游泳时间的影响

组别	剂量(g/kg.bw)	动物数(只)	负重游泳时间(s)( X±S)
				对照组	0	10	191.5±51.1
低剂量组	0.33	10	255.6±78.1
				中剂量组	0.66	10	286.4±56.8*

高剂量组

1.00

10

242.1±70.5

^*与照组比较，P＜0.05

表5中显示，该检品各剂量组小鼠的负重游泳时间均长于对照组，中剂量组与对照组比较有显著差异(P＜0.05)，即杏灵牌力能保软胶囊可延长小鼠负重游泳时间。

2.3.杏灵牌力能保软胶囊对小鼠血乳酸含量的影响，见表6。

表6杏灵牌力能保软胶囊对小鼠血乳酸含量的影响

组别	剂量(g/kg.bw)	动物数(只)	血乳酸含量(mmol/L)( X±S)			血乳酸曲线下面积
							游泳前	游泳后0min	游泳后20min
			对照组低剂量组中剂量组高剂量组	00.330.661.00	12121212					3.35±1.193.73±1.762.83±1.692.92±1.55	5.05±1.444.93±1.354.26±0.874.75±1.50	2.54±1.091.66±0.58*1.58±0.38*1.52±0.48*	117.83±32.48109.23±27.2293.77±18.24101.06±32.41

^*与照组比较，P＜0.05

杏灵牌力能保软胶囊三个剂量组小鼠游泳前、游泳后0min血乳酸含量及三个时点血乳酸曲线下面积与对照组比较，差异均无显著性(P＞0.05)，三个剂量组小鼠游泳后20min血乳酸含量显著低于对照组(P＜0.01)，即杏灵牌力能保软胶囊对小鼠游泳后20min血乳酸含量有降低作用，但对血乳酸曲线下面积无明显作用。

2.4.杏灵牌力能保软胶囊对小鼠肝糖原含量的影响，见表7。

表7杏灵牌力能保软胶囊对小鼠肝糖原含量的影响

组别	剂量(g/kg.bw)	动物数(只)	肝糖原含量(mg/100g)( X±S)
				对照组	0	12	1982.28±1114.77
低剂量组	0.33	12	1700.63±1251.83
				中剂量组	0.66	12	2483.41±646.84
高剂量组	1.00	12	3567.00±1086.69**

^**与对照组比较，P＜0.05

表7显示，杏灵牌力能保软胶囊1.00g/kg.bw剂量组小鼠肝糖原含量显著高于对照组(P＜0.01)。即杏灵牌力能保软胶囊对小鼠肝糖原含量有升高作用。

2.5.杏灵牌力能保软胶囊对小鼠血清尿素氮含量的影响，见表8。

表8杏灵牌力能保软胶囊对小鼠血清尿素氮含量的影响

组别	剂量(g/kg.bw)	动物数(只)	血清尿素氮含量(mmol/L)( X±S)
				对照组	0	11	8.28±1.04
低剂量组	0.33	11	9.25±1.11
				中剂量组	0.66	11	8.31±0.84
高剂量组	1.00	11	7.34±0.85*

^*与对照组比较，P＜0.05

表8显示，杏灵牌力能保软胶囊1.00g/kg.bw剂量组小鼠血清尿素氮含量显著低于对照组(P＜0.05)，即本品(杏灵牌力能保软胶囊)对小鼠血清尿素氮含量有降低作用。

3.小结

杏灵牌力能保软胶囊按人体推荐剂量的10、20、30倍经口灌胃给予受试动物30天。结果显示：杏灵牌力能保软胶囊对小鼠体重无不良影响；0.66g/kg.bw剂量组小鼠负重游泳时间显著长于对照组(P＜0.05)；1.00g/kg.bw剂量组小鼠肝糖原含量显著高于对照组(P＜0.01)、尿素氮含量显著低于对照组(P＜0.05)。三个剂量组小鼠游泳前、游泳后0min血乳酸含量及三个时点血乳酸曲线下面积与对照组比较，差异均无显著性(P＞0.05)，三个剂量组小鼠游泳后20min血乳酸含量显著低于对照组(P＜0.05)。按评价标准，杏灵牌力能保软胶囊具有缓解体力疲劳的作用。

实施例2抗氧化功能动物试验

1.材料和方法

1.1.样品

杏灵牌力能保软胶囊，批号：20030505，送检品为褐色油膏状，由上海杏灵科技药业股份有限公司提供。送检方推荐成人服用剂量为0.5g×4/日/人。试验时样品用食用植物油配制和稀释后给小鼠灌胃。

1.2.实验动物

昆明种雌性小鼠共50只，其中12月龄以上小鼠40只，体重范围44-55克，8周少龄小鼠10只，平均体重19.2±1.0克。

1.3.剂量分组

以杏灵牌力能保软胶囊人体推荐量的5倍、10倍和20倍设三个剂量组，即0.17g/kg.bw、0.34g/kg.bw和0.68 g/kg.bw，另设老龄鼠对照组和少龄鼠对照组。杏灵牌力能保软胶囊用植物油配制，按0.5％给动物灌胃。

1.4.实验方法

对各剂量组小鼠，每日按0.5ml/100g.bw(即100克体重灌0.5ml)体积给动物灌胃给予受试物，老龄对照和年轻组对照组动物均按0.5ml/100g.bw给予食用植物油，连续40天，试验结束时按南京建成生物工程研究所购买的MDA、SOD和GSH-Px试剂盒说明书测定动物红细胞中的MDA含量、SOD活力以及全血中的GSH-Px活力。

1.5.实验数据统计

采用各实验组与对照组均数比较的方差分析对数据进行处理。所用软件为PEMS3.0《中国医学百科全书·医学统计学》统计软件包(第三版)。

2.结果

2.1.杏灵牌力能保软胶囊对实验鼠体重的影响

由表9可见：在整个实验期间，老龄鼠各组体重均无显著差异(P＞0.05)。

         表9杏灵牌力能保软胶囊对小鼠各实验阶段体重的影响

剂量(g/kg.bw)	初期体重		中期体重		结束体重
							动物数(只)	体重(g)	动物数(只)	体重(g)	动物数(只)	体重(g)
	老龄鼠对照0.170.340.68	10101010	49.0±2.749.5±3.247.9±2.649.7±2.5	10101010	49.1±4.049.0±4.549.4±4.048.5±4.1	10101010							50.2±4.548.6±4.748.8±4.948.3±3.4

2.2.杏灵牌力能保软胶囊对红细胞脂质过氧化作用的影响

表10杏灵牌力能保软胶囊对小鼠红细胞MDA含量的影响

剂量(g/kg.bw)	动物数(只)	MDA含量(nmol/ml)
			少龄鼠对照组	10	5.4±0.66
老龄鼠对照组	10	7.4±0.92*
			0.17	10	6.94±0.93
0.34	10	6.80±0.92
			0.68	10	5.52±0.75#

^*与少龄鼠对照组比较有显著差异(P＜0.05)。^#表示与老龄鼠对照组比较有显著差异(P＜0.05)。

表10显示，老龄鼠对照组红细胞MDA含量显著高于少龄鼠对照组(P＜0.05)，受试物高剂量组(0.68g/kg.bw)与老龄鼠对照组相比，MDA含量显著降低(P＜0.05)。

2.3.杏灵牌力能保软胶囊对小鼠红细胞超氧化物歧化酶的影响

表11杏灵牌力能保软胶囊对小鼠红细胞SOD的影响

剂量(g/kg.bw)	动物数(只)	SOD活力(NU/ml)
			少龄鼠对照组	10	3423.8±161.9
老龄鼠对照组	10	3058.4±277.5*
			0.17	10	3131.9±136.8
0.34	10	3102.1±167.7
			0.68	10	3154.3±214.3

^*与少龄鼠对照组比较有显著差异(P＜0.05)。

由表11可见，老龄鼠对照组红细胞SOD活力显著低于少龄鼠对照组(P＜0.05)，而受试物各剂量组与老龄鼠对照组相比，SOD活力无显著增高(P＞0.05)。

2.4.杏灵牌力能保软胶囊对小鼠全血谷胱甘肽过氧化物酶的影响

表12杏灵牌力能保软胶囊对小鼠全血GSH-Px的影响

剂量(g/kg.bw)	动物数(只)	GSH-Px酶活力单位#
			少龄鼠对照组	10	216.1±12.8
老龄鼠对照组	10	196.9±12.7*
			0.17	10	195.3±12.5
0.34	10	204.7±14.5
			0.68	10	213.2±15.7#

^*与少龄鼠对照组比较有显著差异(P＜0.05)。^#与老龄鼠对照组比较，(P＜0.05＝。

^#酶活力单位定义：规定1ml全血每分钟扣除非酶反应1g(GSH)的作用降低后，使1g(GSH)的降低值为一个酶活力单位。

表12显示，老龄鼠对照组红细胞GSH-Px活力显著高于少龄鼠对照组(P＜0.05)，受试物高剂量组(0.68g/kg.bw)与老龄鼠对照组相比，GSH-Px活力显著增加(P＜0.05)。

3.结论

杏灵牌力能保软胶囊抗氧化功能动物试验红细胞中MDA含量和全血中的GSH-Px活力为阳性结果，按评价标准，杏灵牌力能保软胶囊的抗氧化功能动物实验结果为阳性。

实施例3抗氧化功能人体试食试验

1.材料与方法

1.1.样品：杏灵牌力能保软胶囊由上海杏灵科技药业股份有限公司提供，批号：20030505。包装规格为0.5g×100粒/瓶，人体推荐摄入量为2g/人/日。

1.2.受试人群：按自愿原则选择符合下述标准者。

1.2.1.受试者的选择标准：选龄在45-65岁，身体健康状况良好，无明显脑、心、肝、肺、肾、血液疾患，无长期服药史，志愿受试并保证配合的中老年人。

1.2.2.受试者排除标准：

孕期或哺乳期妇女；合并有心血管、肝、肾和造血系统等严重疾病患者；30天服用过与受试功能有关的物品者；未按规定服用受试样品者；资料不全无法判定功效或安全性者。

1.3.试验设计及分组：

受试者随机分为试食组(50人)和对照组(52人)，尽可能考虑影响结果的主要因素如年龄、性别、生活饮食习惯等，以保证组间的可比性。采用自身前后对照和组间对照两种研究方法。

1.4.服用剂量及时间：试食组每人每日口服2次，每次2粒，连续服用3个月。对照组不作任何处理。试验期间受试者不改变原来的生活和饮食习惯，正常饮食。

1.5.观察指标

1.5.1.一般状况：包括受试者的精神、睡眠、饮食、大小便、血压等。

1.5.2.安全性指标：血常规、尿常规、大便常规、X线胸部透视、腹部B超、心电图、肝功能、肾功能等。

1.5.3.功效性指标：

1.5.3.1.过氧化脂质含量：观察试验前后MDA的变化情况。使用南京建成生物工程研究所试剂盒及推荐方法进行测定。

1.5.3.2.超氧化物歧化酶：观察试验前后SOD的变化情况。使用南京建成生物工程研究所试剂盒及推荐方法进行测定。

1.5.3.3.谷胱甘肽过氧化物酶：观察试验前后GSH-PX的变化情况。使用南京建成生物工程研究所试剂盒及推荐方法进行测定。

1.6.实验数据统计分析：

使用医学百科全书统计软件包(PEMS3.0)进行统计分析。各指标试验前后差异的比较采用配对t检验。试验前、后试食组和对照组组间差异的比较采用两样本均数t检验，方差不齐时采用t’检验。

2.结果

2.1.一般状况：试验期间受试者的精神、饮食、睡眠、大小便等均未见异常。

2.2.安全性指标观察结果：试验前受试者心率、血压、心电图，X线胸部透视、腹部B超、血常规、血生化指标等均在正常范围。试验后血常规及血生化指标与实验前比较均未见异常。

2.3.功效性指标观察结果：

2.3.1.试验前后过氧化脂质(MDA)含量变化情况，见表13。试验前试食组与对照组比较MDA含量无显著差异；试食组试验后与试验前比较MDA含量无显著变化，与对照组比较亦无显著差异。

      表13试验前后MDA含量变化情况(X±SD)

项目	对照组(N＝52)		试食组(N＝50)
					试验前	试验后	试验前	试验后
	MDA(μmol/ml)	1.75±0.86	1.83±0.58	1.84±0.68					1.77±0.31

2.3.2.试验前后超氧化物歧化酶(SOD)活性变化情况，见表14。试验前试食组与对照组比较SOD活性无显著性差异；试食组试验后SOD活性与试验前比较显著增高(P＜0.05)，与对照组比较亦有显著差异(P＜0.05)。

   表14试验前后SOD活性变化情况(X±SD)

项目	对照组(N＝52)		试食组(N＝50)
					试验前	试验后	试验前	试验后
	SOD(Nu/ml)	2490.6±389.6	2380.3±577.3	2431.7±476.8					2576.9±192.6#*

注：自身前后比较：^#P＜0.01；组间比较：^*P＜0.01

2.3.2.试验前后谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性变化情况，见表15。试验前试食组与对照组比较GSH-Px活性无显著差异；试食组试验后与试验前比较GSH-Px活性无显著变化，与对照组比较亦无显著差异。

     表15试验前后GSH-Px活性变化情况(X±SD)

项目	对照组(N＝52)		试食组(N＝50)
					试验前	试验后	试验前	试验后
	GSH-Px(U/ml)	107.34±24.89	110.50±23.51	112.67±31.03					109.65±39.68

3.小结

杏灵牌力能保软胶囊抗氧化作用人体试食试验结果表明，试验期间受试者的精神、饮食、睡眠、大小便等未见异常，体检亦未见异常，表明本发明制剂对人体无不良影响；试验组受试者在试验后的SOD活性显著高于试验前(P＜0.05)，亦显著高于对照组(P＜0.05)；试食组试验后MDA含量和GSH-Px活性与试验前比较无显著变化，与对照组比较亦无显著差异。按评价标准，杏灵牌力能保软胶囊有抗氧化功能。

实施例4

银杏叶                555g

肉苁蓉                1110g

山药                  800g

人参                  64g

维生素E               16g

紫苏油                540g

蜂蜡                  30g

大豆磷脂              30g

1.中药提取：银杏叶和山药、肉苁蓉和人参分二组，经过鉴定检验(按中国药典一部的规定)、分别经过洗净、切成片或丝，称重，投入多功能提取罐中，加入12倍量的70％的乙醇，浸泡2小时后，加热回流1小时，残渣加10倍量水再同法提取1小时，合并两次提取液；

2.管式高速离心机：用于高速离心(8000转/分)；上清液减压浓缩至比重为1.15(60℃)；

3.喷雾干燥：药液进行喷雾干燥，其参数为：转速18000转/分钟、进风温度185℃、出风温度85℃、出粉的水分≤3.5％；

4.混合：将上述喷雾干燥粉过筛(200目)后混合均匀，得混合粉280g；

5.混匀：与软胶囊的基质及原料中脂溶性成分(维生素E、紫苏油、蜂蜡、大豆磷脂)混合并且强力搅拌，得混悬物(即：内容物)1000g；

6.灭菌处理：上述混悬物进行微波灭菌处理，微波频率2450MHz，灭菌时间5min；

7.压制：灭菌好的混悬粉进行功效成分含量、理化、微生物的测定，测得总黄酮2046mg/100g，总皂甙869.7mg/100g，粗多糖415.7mg/100g，将上述的内容物制成软胶囊；

8.干燥：将成形的软胶囊进行干燥(≤60℃)，得成品，每粒0.5g。

实施例5制剂中总黄酮测定

1.芦丁标准对照品溶液：精密称取在105℃减压干燥至恒重的芦丁对照品15.0mg，加甲醇溶解并定容至100mL，配成150μg/mL芦丁标准溶液。

2.标准曲线

精密吸取标准芦丁标准溶液0.0、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00mL，相当于芦丁0、75、150、300、450、600μg移入10mL刻度比色管中，各加30％乙醇至5ml，各加5％NaNO₂溶液0.3ml，摇匀放置5min，各加10％Al(NO₃)₃溶液0.3ml，摇匀，再放置6min，加1.0mol/LNaOH溶液2ml，用30％乙醇定容至刻度，摇匀放置10-20min，在510nm波长处，以零管溶液作空白分别测定吸光度，以吸光度对浓度进行回归，绘制标准曲线。

3.供试品溶液的制备

称取1.0g样品，(实施例4方法制得内容物)用滤纸包紧，置于平底烧瓶中，加入50-100mL70％乙醇，浸润后，在80℃水浴下回流2h，至黄酮类化合物基本提取完全。粗提液冷却后，减压抽滤，并用少量25％乙醇溶液洗涤滤渣，合并滤液。在50℃下减压蒸馏，除去其中的乙醇，直至烧瓶内溶液呈无醇味。倒出烧瓶内溶液，并用30mL热水分3次洗涤烧瓶，抽滤后，将滤液倒入分液漏斗中，以75mL氯仿分3次萃取脱脂，待完全分层后，收集各次下层水溶液并定容至50mL。

称取1-2g经预处理的聚酰胺树脂粉末，湿法装柱，用水饱和。吸取上述脱脂后的水溶液1-2mL，沿层析柱慢慢滴入柱内，放置一定时间，待测液被充分吸附后，用70％乙醇或甲醇洗脱，流速为1.0mL/min，至流出液基本无色，一般收集10mL即可。上述洗出液用洗脱剂定容后即可用于测定。

4.样品测定

精密吸取样品提取液1.00ml于10ml比色管中，按标准曲线制备操作步骤于510nm处进行吸光度的测定。

5.计算

$X=\frac{m1\×V2}{m\×V2\×106}\×100=2046\mathrm{mg}/100g$

式中：X：样品中总黄酮的含量(以芦丁计)，mg/100g；

m1：依据标准曲线计算出被测液中黄酮含量，μg；

m：试样的质量，g；

V1：待测液分取的体积，mL；

V2：待测液的总体积，mL。

实施例6制剂中粗多糖测定

1.葡萄糖标准液：准确称取1.0000g经过98-100℃干燥至恒重的葡萄糖(AR)，加水溶解后以水稀释至1000ml，此溶液1ml含1mg葡萄糖，用前稀释10倍(0.1mg/ml)，现用现配。

2.标准曲线

精密移取葡萄糖标准溶液0、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.60mL，分置于具塞试管中。加蒸馏水补充至体积2.00mL，再加苯酚溶液1.00mL，摇匀，依次加入浓硫酸5.00mL，摇匀，置沸水浴2min，取出置室温，于波长485nm处测定吸收度。以含糖量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

3.供试品溶液的制备

样品提取：称取样品2.0g，(实施例4方法制得内容物)置于100mL容量瓶中，加水80mL左右，于沸水浴上加热2h，冷却至室温后补加水至刻度，混匀后，过滤，弃去初滤液，收集余下滤液供沉淀多糖。

准确吸取以上终滤液5.00mL，置于50mL离心管中，加入无水乙醇20 mL，混匀5min后，以3000r/min离心5min，弃去上清液。残渣用80％(体积分数)乙醇溶液数毫升洗涤，离心后弃去上清液，反复操作3-4次。残渣用水溶解并定容至5.0mL，混匀后，供沉淀葡聚糖。

准确吸取以上终溶液2.00mL，置于20mL离心管中，加入100g/L氢氧化钠溶液2.0mL、铜试液溶液2.0mL，沸水浴中煮沸加热2min，冷却，以3000r/min离心5min，弃去上清液。残渣用洗涤液数毫升洗涤，离心后弃去上清液，反复操作3次，残渣用10％(体积分数)硫酸溶液2.0mL溶解并转移至50mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。

4.样品测定

吸取供试品溶液1.00ml，加水补充至2.00ml，再加苯酚溶液1.00ml，摇匀，依次加入浓硫酸5.00ml，摇匀，置沸水浴2min，取出置室温，于波长485nm处测定吸收度。

5.计算

粗多糖(以葡萄糖计) $\mathrm{mg}/100\mathrm{ml}=\frac{m\×50}{10.00\×1.0\×1000}\×100=415.7\mathrm{mg}/100g$

式中：

m：为测定溶液相当葡萄糖的量，μg。

实施例7制剂中总皂苷的测定

1.人参皂苷Re标准溶液：精确称取人参皂苷Re标准品20.0mg，用甲醇溶解并定容至10.0mL，即每1mL含人参皂苷Re2.0mg。

2.样品处理

称取样品2.0g，(实施例4方法制得内容物)置于100mL容量瓶中，加水80mL左右，于沸水浴上加热2h，冷却至室温后补加水至刻度，混匀后，以PT-大孔吸附树脂柱进行层析分离，将样品溶液上柱，用15mL水洗柱，以洗去糖分等水溶性杂质，弃去洗脱液，再用20mL85％乙醇洗脱总皂甙，收集洗脱液于蒸发皿中，于水浴上蒸干。

显色：

在上述已挥干的蒸发皿中准确加入0.2mL5％香草醛冰乙酸溶液，转动蒸发皿，使残杂溶解，再加0.8mL高氯酸，混匀后移入10mL比色管中，塞紧盖子于60℃以下的水浴上加温15min取出，冷却后准确加入冰乙酸5.0mL，摇匀后以1.0cm比色皿于560nm处与人参皂苷Re标准管同时比色。

3.标准曲线的绘制

吸取人参皂苷Re标准溶液(2.0mg/mL)0、20、40、60、80、100μL(相当于人参皂苷Re0、40、80、120、160、200μg)，于10mL比色管中，用氮气吹干，同A1.3.2显色步骤测定吸光度。并绘制标准曲线。

4.结果计算

$X=\frac{m\×V_1\×100}{V_2\×1000}=869.7\mathrm{mg}/100g$

式中：X：样品中总皂苷(以人参皂苷Re计)，mg/100ml；

V₁：样品提取液总体积，ml；

V₂：样品提取液测定用用体积，ml；

M：从标准曲线查得待测液中人参皂苷Re量，μg。

实施例8片剂制备

将干燥银杏叶200g，山药250g为一组，肉苁蓉360g，人参40g为一组，采用同实施例4的制备方法提取，获得喷雾干燥粉。取喷雾干燥粉100g，加淀粉100g低取代羟丙基纤维素40g，分别过80目筛，混合均匀，以稀乙醇为润湿剂制粒，干燥整粒，外加润滑剂硬脂酸镁少量，压片，每片0.3g。

实施例9口服液制备

取按实施例4方法制得的喷雾干燥粉100g加羧甲基纤维素10g，糖精2g，苯甲酸钠2g，溶于8L蒸馏水中，加香精适量，搅拌、溶解、过滤分装，消毒灭菌，包装即得。

Claims (4)

1、一种具有抗疲劳和抗氧化功能的保健品，其特征在于所述的保健品是由主要含银杏叶、肉苁蓉、山药、人参活性成分以及其他辅料制成的口服制剂。

2、根据权利要求1所述的具有抗疲劳和抗氧化功能的保健品，其特征在于其中各活性成分占总活性成分重量百分比含量为：银杏叶16-32％、肉苁蓉32-56％、山药16-32％、人参2-5％。

3、根据权利要求1所述的具有抗疲劳和抗氧化功能的保健品，其特征在于其中所述的其他辅料包括各种营养成分，食品添加剂和药用辅料。

4、根据权利要求1所述的具有抗疲劳和抗氧化功能的保健品的制备方法，其特征在于该保健品的制备包括下列步骤：

1)银杏叶和山药、肉苁蓉和人参分成二组，分别洗净，切成片或丝，用水和/或乙醇浸泡，回流提取；

2)将上述二组提取液合并离心分离，上清液浓缩，喷雾干燥，即得混合粉；

3)将上述混合粉按常规方法制成各种口服制剂；

4)用分光光度计检测制剂中总黄酮含量以芦丁计不小于2021mg/100g，粗多糖以葡萄糖计不小于404.2mg/100g，总皂甙以人参皂甙苷Re计不小于853.5mg/100g。