CN1714862A - 肝癌相关基因dlk1及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了人类基因DLK1(Delta like 1homolog)及其编码蛋白在诊治肝癌方面的应用。人类DLK1基因定位于染色体的14q32上，其编码了一个含有383个氨基酸的蛋白质。DLK1基因在肝癌中的表达较癌旁组织中明显增加。根据本发明公开的人类肝癌相关基因DLK1及其编码蛋白，对其进行深入的研究有可能发现肝癌发病的新机制，同时，它们也可能作为肝癌治疗的新的靶点，并且可为进一步开发针对肝癌的药物提供重要的参考价值。

Description

肝癌相关基因DLK1及其应用

技术领域

本发明涉及分子生物学和基因工程领域，具体地，本发明涉及一种人类肝癌相关基因DLK1(Delta like 1 homolog)及其编码序列的应用。

背景技术

目前我国有慢性肝炎患者约1200万例，每年死于肝病约30万，其50％为原发性肝癌，约占全世界肝癌死亡人数的45％左右。绝大多数与HBV、HCV感染有关。肝癌发病率在我国居2-3位，主要在青壮年男性发病，在华东地区的发病率明显高于其他地区，近年来，有持续上升趋势。在上海，肝癌的发病率居第三位，仅次于肺癌和胃癌。最新资料显示这个比例还有继续上升的趋势。现在，肝癌，特别是肝炎病毒引起的肝癌已经严重危害了我国人民生命安全。因此，非常有必要对肝癌发生的分子机制作深入的研究。

随着人类基因组测序的完成，基因组学的研究重点已经转移到以解析基因功能为主的功能基因组学研究。功能基因组学的重点是以疾病为中心，全力解决人类疾病相关基因研究中的重大科学问题。肝癌在我国素有“国病”之称，经过半个世纪的探索，对于肝癌的早期诊断和治疗虽然有了一定的认识，但肝癌预后仍然很差，特别是对其发病机制的了解及治疗药物的新靶点方面，更是知之甚少。因此，寻找与肿瘤相关的基因，特别是寻找新的抑癌基因是近年来肿瘤研究的热点。

DLK1基因定位于染色体14q32上。DLK1是在胞外区域包含6个EGF样重复序列的糖基化Delta样跨膜蛋白。DLK1首先是在脂肪前体细胞中发现，与脂肪细胞的分化紧密相关。DLK1基因具有抑制脂肪前体细胞向脂肪细胞分化的功能。近年来，有研究发现DLK1在神经母细胞瘤细胞和小细胞肺癌细胞株等肿瘤细胞中存在表达，表明DLK1基因可能与肿瘤发生相关；同时在老鼠的胎肝细胞和胆汁淤积引起的肝纤维化细胞中均发现DLK1的表达。在我们的前期肝癌及癌旁表达谱分析的研究中，发现DLK1基因在肝癌中的表达较癌旁组织中明显增加，提示DLK1基因可能对肝癌的发生相关。

发明内容

本发明的目的在于提供一种肝癌相关基因DLK1、其编码的蛋白以及该基因和该蛋白的应用。

本发明的上述目的是通过如下技术方案来实现的：

本发明提供了一种蛋白多肽在制备治疗原发性肝癌的药物中的应用，所述蛋白多肽具有与SEQ ID NO.2所示氨基酸序列至少70％同源性的序列。优选的，所述的蛋白多肽是含有SEQ ID NO.2序列的多肽。

本发明还提供了一种多核苷酸序列在制备治疗原发性肝癌的药物中的应用，所述的多核苷酸是具有：

SEQ ID NO：1所示的编码序列；

或者与SEQ ID NO：1中154-1305位核苷酸序列具有至少70％同源性的序列；

或者在中度严紧条件下与SEQ ID NO：1所示序列杂交的序列。

优选的，所述的多核苷酸编码具有SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的多肽。

本发明还提供了一种用于诊断和治疗肝癌的试剂盒，所述试剂盒含有下列(I)-(V)中任一所示的序列或者它们的连续片段，

(I)SEQ ID NO：1所示的编码序列；

(II)与SEQ ID NO：1中154-1305位核苷酸序列具有至少70％同源性的序列；

(III)在中度严紧条件下与SEQ ID NO：1所示序列杂交的序列；

(IV)具有与SEQ ID NO.2所示氨基酸序列至少70％同源性的序列；

(V)含有SEQ ID NO.2序列的多肽。

在本发明的再一方面，还提供了一种用于诊断和治疗肝癌的生物芯片，所述生物芯片的载体上含有下列(i)-(v)的序列或者它们的连续片段，

(i)SEQ ID NO：1所示的编码序列；

(ii)与SEQ ID NO：1中154-1305位核苷酸序列具有至少70％同源性的序列；

(iii)在中度严紧条件下与SEQ ID NO：1所示序列杂交的序列；

(iv)具有与SEQ ID NO.2所示氨基酸序列至少70％同源性的序列；

(v)含有SEQ ID NO.2序列的多肽。

根据本发明公开的人类肝癌相关基因DLK1及其编码蛋白，对其进行深入的研究有可能发现肝癌发病的新机制，同时，它们也可能作为肝癌治疗的新的靶点，并且可为进一步开发针对肝癌的药物提供重要的参考价值。

附图说明

图1为通过RT-PCR验证DLK1基因在肝癌/癌旁组织中的表达差异的电泳结果图，N为癌旁组织，C为癌组织；

图2为通过Northern验证DLK1基因在肝癌/癌旁组织中的表达差异结果图，N为癌旁组织，C为癌组织；

图3为Northern检测DLK1基因在人的各组织中的分布的结果图；

图4为Northern检测DLK1基因在12种肝癌细胞株以及正常肝和胎肝中的表达丰度结果图；

图5为7402细胞株克隆的Western Blotting的鉴定结果图，Mock1为74023.1B-DLK，D4为74023.1B-DLK，V1为74023.1B，V2为74023.0，D5为74023.0-DLK，Mock2为7402 3.0-DLK；

图6为MHCC-H细胞株克隆的Western Blotting的鉴定结果图，V1为MHCC-H3.0-DLK，C2为MHCC-H 3.0-DLK，7C3为MHCC-H 3.0-DLK，7B4为MHCC-H 3.0-DLK，Mock为MHCC-H 3.0；

图7为DLK1再表达7402稳定细胞株的生长曲线图；

图8为DLK1再表达MHCC-H稳定细胞株的生长曲线图。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York：Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例1

肝组织RNA的抽提

抽提RNA试剂采用TRIzol reagent(GIBCO/BRL)，该试剂是基于酸性酚一步抽提法生产的。用于抽提RNA所用的器皿和水均要进行无RNA酶处理，以保证实验中无RNA酶的环境。

将碾杵和匀浆器等器皿在200℃干烤4h，去除RNA酶，冷却；加入液氮中预冷，将组织从液氮中迅速取出，碾成粉末；用刮匙将组织放入预先加入TRIzol试剂的匀浆器中，匀浆数分钟；将匀浆后的液体转入无RNA酶的离心管中，加入氯仿后，4℃离心分层；将上层水相转入一无RNA酶的离心管中，加异丙醇，4℃离心沉淀RNA；用75％乙醇洗涤沉淀2次；用无RNA酶的去离子水溶解沉淀。抽提的RNA质量鉴定：紫外分光光度计测定260/280比值(比值均在1.7～2.0)；并在MOPS  醛变性胶中观察有无降解。

超低温保存。

实施例2

cDNA的合成

反转录(RT)

        总RNA                1μg

        oligo dT(10pmol/l)   1μl

        H₂O               补至12μl

70℃变性3分钟，置于冰上冷却；

        再加入5×Buffer       4μl

        DTT                  2μl

        dNTP                 1μl

        SuperScript II       1μl

42℃反应1小时，70℃变性15分钟，置于冰上冷却。

实施例3

PCR扩增

以β-actin作内对照，反应混合物中各成分为：β-actin(F)引物、β-actin(R)引物、DLK1(F)引物、DLK1(R)引物、10×Buffer、MgCl₂、dNTP、Taq DNA聚合酶、cDNA模板分别为0.2、0.2、0.4、0.4、1.0、1.0、0.2、0.1和5μLcDNA模板，最后补充ddH₂O使反应体系为10μL。PCR的反应条件是94℃变性5min；然后每个循环94℃30s、53℃30s、72℃30s，共30个循环；最后72℃延伸7min。

实施例4

RT-PCR技术检测DLK1基因在肝癌及其癌旁组织中的表达

利用RT-PCR技术检测DLK1基因在27对肝癌/癌旁组织中的表达，27例肝癌及癌旁组织均为HBV阳性的原发性肝癌的手术病人。手术切除的肝脏一经离体，迅速切取病灶及周围正常组织，放入液氮中(-80℃)保存。发现肝癌组织DLK1的表达明显高于癌旁组织。结果见图1。

实施例5

Northern检测DLK1基因在肝癌及其癌旁组织中的表达

利用Northern技术检测DLK1基因在10对肝癌/癌旁组织中的表达，其中用28sRNA作为参照，发现部分病例中，癌旁组织的DLK1的表达量明显高于肝癌组织，结果见图2，该结果与RT-PCR的结果一致。

实施例6

DLK1基因在人体正常组织中的表达

为了解DLK1基因在人体各组织中的表达。分别提取人的各组织的总RNA，包括脑、心、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺、外周淋巴组织。Northern检测DLK1基因在人各组织中的表达。由图可以看出在胎盘的表达量最高。结果见图3。

实施例7

不同肝癌细胞株中DLK1基因的表达

为了了解DLK1基因在肝癌细胞株中的表达，利用Northern技术检测DLK1基因在12种肝癌细胞株(7402、7405、7701、7703、7721、Hep3B、HepG2、MHCC-L、MHCC-H、Huh-7、LO2、SK-HEP)以及正常肝(normal liver)和胎肝(fetal liver)中的表达，同时，也以28sRNA作为对照。结果见图4。

实施例8

MHCC-H和7402对G418敏感度的测定

我们所选用的肝癌细胞株7402和MHCC-H经RT-PCR和Northern-blot验证均不表达DLK1基因。因此，我们选用这两种细胞株建立DLK1稳定表达细胞株，以研究DLK1基因对肝癌细胞增殖的影响。由于我们利用pcDNA3.0、pcDNA3.1B、pcDNA3.0+DLK1和pcDNA3.1B+DLK1转染7402和MHCC-H以后，将通过载体中的G418抗性基因筛选克隆，因此我们分别测定了MHCC-H和7402对抗G418的最佳浓度，最佳浓度是在10-14天内杀死所有细胞的最低浓度。结果显示：7402的最佳G418浓度为600ug/ml，而MHCC-H为500ug/ml。

为了鉴定DLK1基因编码的蛋白在细胞内表达情况，待细胞在35mm培养皿中长至95％时，我们对细胞裂解产物中DLK1蛋白的含量进行了Western Blot鉴定。结果(见图5和图6)显示：阳性克隆中DLK1是大量表达的，而转染了DLK1基因但是在细胞中没有表达的mock(转了DLK1基因但是在细胞中没有表达)和以相应载体的空载为对照的细胞则没有表达。进一步说明我们在不表达DLK1的肝癌细胞株7402和MHCC-H中实现了表达了DLK1基因，建立了表达DLK1基因的稳定细胞株。其中，图5中Mock1为7402 3.1B-DLK，D4为7402 3.1B-DLK，V1为7402 3.1B，V2为7402 3.0，D5为7402 3.0-DLK，Mock2为7402 3.0-DLK；图6中V1为MHCC-H 3.0-DLK，C2为MHCC-H 3.0-DLK，7C3为MHCC-H 3.0-DLK，7B4为MHCC-H 3.0-DLK，Mock为MHCC-H 3.0。

实施例9

细胞生长的变化

将待测生长曲线的细胞接种于96孔板中，密度为7-8×10³/孔。将待测孔的培养液换成每100ul中含10ul的cck8的培养液，置于37℃，5％CO₂的培养箱中培养1小时。连续测定7天。在酶标仪上测量波长为450nm时的吸光率。

连续7天的数据绘制成细胞生长曲线图。结果见图7和图8。

无论是阳性克隆或者mock或者以空载质粒为对照，它们的生长曲线的走向是相似的，无明显的变化。因此DLK1基因对7402细胞生长没有显著的影响(见图7)、DLK1基因对MHCC-H细胞生长没有显著的影响(见图8)。

实施例10

DLK1基因用于制备生物芯片

用获取的DLK1基因的核苷酸序列设计引物，扩增出全长的DLK1基因或该基因的部分片断，用作生物芯片点样的样品。

用英国的BioRobotics自动点膜仪将样品点在8×12cm尼龙膜上，每一标本点4个点，每点的DNA量约为10ng。阳性对照是重复4次点样的人β-actin基因，阴性对照是重复4次点样的λ噬菌体DNA。

含有DLK1基因的芯片可用于肝癌的诊断和药物筛选。

                              序列表

<110>上海人类基因组研究中心

<120>肝癌相关基因DLK1及其应用

<130>NP-1304

<160>2

<170>PatentIn version 3.2

<210>1

<211>1547

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>CDS

<222>(154)..(1305)

<400>1

gagagcgcag cgcgcagccc ggtgcagccc tggctttccc ctcgctgcgc gcccgcgccc   60

cctttcgcgt ccgcaaccag aagcccagtg cggcgccagg agccggaccc gcgcccgcac   120

cgctcccggg accgcgaccc cggccgccca gag atg acc gcg acc gaa gcc ctc    174

                                     Met Thr Ala Thr Glu Ala Leu

                                     1               5

ctg cgc gtc ctc ttg ctc ctg ctg gct ttc ggc cac agc acc tat ggg     222

Leu Arg Val Leu Leu Leu Leu Leu Ala Phe Gly His Ser Thr Tyr Gly

        10                  15                  20

gct gaa tgc ttc ccg gcc tgc aac ccc caa aat gga ttc tgc gag gat     270

Ala Glu Cys Phe Pro Ala Cys Asn Pro Gln Asn Gly Phe Cys Glu Asp

    25                  30                  35

gac aat gtt tgc agg tgc cag cct ggc tgg cag ggt ccc ctt tgt gac     318

Asp Asn Val Cys Arg Cys Gln Pro Gly Trp Gln Gly Pro Leu Cys Asp

40                  45                  50                  55

cag tgc gtg acc tct ccc ggc tgc ctt cac gga ctc tgt gga gaa ccc     366

Gln Cys Val Thr Ser Pro Gly Cys Leu His Gly Leu Cys Gly Glu Pro

                60                  65                  70

ggg cag tgc att tgc acc gac ggc tgg gac ggg gag ctc tgt gat aga      414

Gly Gln Cys Ile Cys Thr Asp Gly Trp Asp Gly Glu Leu Cys Asp Arg

            75                  80                  85

gat gtt cgg gcc tgc tcc tcg gcc ccc tgt gcc aac aac ggg acc tgc      462

Asp Val Arg Ala Cys Ser Ser Ala Pro Cys Ala Asn Asn Gly Thr Cys

        90                  95                 100

gtg agc ctg gac gat ggc ctc tat gaa tgc tcc tgt gcc ccc ggg tac      510

Val Ser Leu Asp Asp Gly Leu Tyr Glu Cys Ser Cys Ala Pro Gly Tyr

    105                 110                 115

tcg gga aag gac tgc cag aaa aag gac ggg ccc tgt gtg atc aac ggc      558

Ser Gly Lys Asp Cys Gln Lys Lys Asp Gly Pro Cys Val Ile Asn Gly

120                 125                 130                 135

tcc ccc tgc cag cac gga ggc acc tgc gtg gat gat gag ggc cgg gcc      606

Ser Pro Cys Gln His Gly Gly Thr Cys Val Asp Asp Glu Gly Arg Ala

                140                 145                 150

tcc cat gcc tcc tgc ctg tgc ccc cct ggc ttc tca ggc aat ttc tgc     654

Ser His Ala Ser Cys Leu Cys Pro Pro Gly Phe Ser Gly Asn Phe Cys

            155                 160                 165

gag atc gtg gcc aac agc tgc acc ccc aac cca tgc gag aac gac ggc      702

Glu Ile Val Ala Asn Ser Cys Thr Pro Asn Pro Cys Glu Asn Asp Gly

        170                 175                 180

gtc tgc act gac atc ggg ggc gac ttc cgc tgc cgg tgc cca gcc ggc      750

Val Cys Thr Asp Ile Gly Gly Asp Phe Arg Cys Arg Cys Pro Ala Gly

    185                 190                 195

ttc atc gac aag acc tgc agc cgc ccg gtg acc aac tgc gcc agc agc      798

Phe Ile Asp Lys Thr Cys Ser Arg Pro Val Thr Asn Cys Ala Ser Ser

200                 205                 210                 215

ccg tgc cag aac ggg ggc acc tgc ctg cag cac acc cag gtg agc tac     846

Pro Cys Gln Asn Gly Gly Thr Cys Leu Gln His Thr Gln Val Ser Tyr

                220                 225                 230

gag tgt ctg tgc aag ccc gag ttc aca ggt ctc acc tgt gtc aag aag     894

Glu Cys Leu Cys Lys Pro Glu Phe Thr Gly Leu Thr Cys Val Lys Lys

            235                 240                 245

cgc gcg ctg agc ccc cag cag gtc acc cgt ctg ccc aac ggc tat ggg      942

Arg Ala Leu Ser Pro Gln Gln Val Thr Arg Leu Pro Asn Gly Tyr Gly

        250                 255                 260

ctg gcc tac cgc ctg acc cct ggg gtg cac gag ctg ccg gtg cag cag     990

Leu Ala Tyr Arg Leu Thr Pro Gly Val His Glu Leu Pro Val Gln Gln

    265                 270                 275

ccg gag cac cgc atc ctg aag gtg tcc atg aaa gag ctc aac aag aaa     1038

Pro Glu His Arg Ile Leu Lys Val Ser Met Lys Glu Leu Asn Lys Lys

280                 285                 290                 295

acc cct ctc ctc acc gag ggc cag gcc atc tgc ttc acc atc ctg ggc     1086

Thr Pro Leu Leu Thr Glu Gly Gln Ala Ile Cys Phe Thr Ile Leu Gly

                300                 305                 310

gtg ctc acc agc ctg gtg gtg ctg ggc act gtg ggt atc gtc ttc ctc     1134

Val Leu Thr Ser Leu Val Val Leu Gly Thr Val Gly Ile Val Phe Leu

            315                 320                 325

aac aag tgc gag acc tgg gtg tcc aac ctg cgc tac aac cac atg ctg     1182

Asn Lys Cys Glu Thr Trp Val Ser Asn Leu Arg Tyr Asn His Met Leu

        330                 335                 340

cgg aag aag aag aac ctg ctg ctt cag tac aac agc ggg gag gac ctg     1230

Arg Lys Lys Lys Asn Leu Leu Leu Gln Tyr Asn Ser Gly Glu Asp Leu

    345                 350                 355

gcc gtc aac atc atc ttc ccc gag aag atc gac atg acc acc ttc agc     1278

Ala Val Asn Ile Ile Phe Pro Glu Lys Ile Asp Met Thr Thr Phe Ser

360                 365                 370                 375

aag gag gcc ggc gac gag gag atc taa gcagcgttcc cacagccccc           1325

Lys Glu Ala Gly Asp Glu Glu Ile

                380

tctagattct tggagttcct cagagcttac tatacgcggt ctgtcctaat ctttgtggtg   1385

ttcgctatct cttgtgtcaa atctggtgaa cgctacgctt acatatattg tctttgtgct   1445

gctgtgtgac aaacgcaatg caaaaacaat cctctttctc tctcttaatg catgatacag   1505

aataataata agaatttcat ctttaaaaaa aaaaaaaaaa aa                      1547

<210>2

<211>383

<212>PRT

<213>Homo sapiens

<400>2

Met Thr Ala Thr Glu Ala Leu Leu Arg Val Leu Leu Leu Leu Leu Ala

1               5                   10                  15

Phe Gly His Ser Thr Tyr Gly Ala Glu Cys Phe Pro Ala Cys Asn Pro

            20                  25                  30

Gln Asn Gly Phe Cys Glu Asp Asp Asn Val Cys Arg Cys Gln Pro Gly

        35                  40                  45

Trp Gln Gly Pro Leu Cys Asp Gln Cys Val Thr Ser Pro Gly Cys Leu

    50                  55                  60

His Gly Leu Cys Gly Glu Pro Gly Gln Cys Ile Cys Thr Asp Gly Trp

65                  70                  75                  80

Asp Gly Glu Leu Cys Asp Arg Asp Val Arg Ala Cys Ser Ser Ala Pro

                85                  90                  95

Cys Ala Asn Asn Gly Thr Cys Val Ser Leu Asp Asp Gly Leu Tyr Glu

            100                 105                 110

Cys Ser Cys Ala Pro Gly Tyr Ser Gly Lys Asp Cys Gln Lys Lys Asp

        115                 120                 125

Gly Pro Cys Val Ile Asn Gly Ser Pro Cys Gln His Gly Gly Thr Cys

    130                 135                 140

Val Asp Asp Glu Gly Arg Ala Ser His Ala Ser Cys Leu Cys Pro Pro

145                 150                 155                 160

Gly Phe Ser Gly Asn Phe Cys Glu Ile Val Ala Asn Ser Cys Thr Pro

                165                 170                 175

Asn Pro Cys Glu Asn Asp Gly Val Cys Thr Asp Ile Gly Gly Asp Phe

            180                 185                 190

Arg Cys Arg Cys Pro Ala Gly Phe Ile Asp Lys Thr Cys Ser Arg Pro

        195                 200                 205

Val Thr Asn Cys Ala Ser Ser Pro Cys Gln Asn Gly Gly Thr Cys Leu

    210                 215                 220

Gln His Thr Gln Val Ser Tyr Glu Cys Leu Cys Lys Pro Glu Phe Thr

225                 230                 235                 240

Gly Leu Thr Cys Val Lys Lys Arg Ala Leu Ser Pro Gln Gln Val Thr

                245                 250                 255

Arg Leu Pro Asn Gly Tyr Gly Leu Ala Tyr Arg Leu Thr Pro G1y Val

            260                 265                 270

His Glu Leu Pro Val Gln Gln Pro Glu His Arg Ile Leu Lys Val Ser

        275                 280                 285

Met Lys Glu Leu Asn Lys Lys Thr Pro Leu Leu Thr Glu Gly Gln Ala

    290                 295                 300

Ile Cys Phe Thr Ile Leu Gly Val Leu Thr Ser Leu Val Val Leu Gly

305                 310                 315                 320

Thr Val Gly Ile Val Phe Leu Asn Lys Cys Glu Thr Trp Val Ser Asn

                325                 330                 335

Leu Arg Tyr Asn His Met Leu Arg Lys Lys Lys Asn Leu Leu Leu Gln

            340                 345                 350

Tyr Asn Ser Gly Glu Asp Leu Ala Val Asn Ile Ile Phe Pro Glu Lys

        355                 360                 365

Ile Asp Met Thr Thr Phe Ser Lys Glu Ala Gly Asp Glu Glu Ile

    370                 375                 380

Claims (6)

1.一种蛋白多肽在制备治疗原发性肝癌的药物中的应用，其特征在于，所述蛋白多肽具有与SEQ ID NO.2所示氨基酸序列至少70％同源性的序列。

2.如权利要求1所述的一种蛋白多肽在制备治疗原发性肝癌的药物中的应用，其特征在于，所述的蛋白多肽是含有SEQ ID NO.2序列的多肽。

3.一种多核苷酸序列在制备治疗原发性肝癌的药物中的应用，其特征在于，所述的多核苷酸是具有SEQ ID NO：1所示的编码序列，或者与SEQ ID NO：1中的154-1305位核苷酸序列至少有70％同源性的序列，或者在中度严紧条件下与SEQ ID NO：1所示序列杂交的序列。

4.如权利要求3所述的一种多核苷酸序列在制备治疗原发性肝癌的药物中的应用，其特征在于，所述的多核苷酸编码具有SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的多肽。

5.一种用于诊断和治疗肝癌的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒含有下列(I)-(V)的序列或者它们的连续片段，

(I)SEQ ID NO：1所示的编码序列；

(II)与SEQ ID NO：1中的154-1305位核苷酸序列至少有70％同源性的序列；

(III)在中度严紧条件下与SEQ ID NO：1所示序列杂交的序列；

(IV)具有与SEQ ID NO.2所示氨基酸序列至少70％同源性的序列；

(V)含有SEQ ID NO.2序列的多肽。

6.一种用于诊断和治疗肝癌的生物芯片，其特征在于：所述生物芯片的载体上含有下列(I)-(V)的序列或者它们的连续片段，

(i)SEQ ID NO：1所示的编码序列；

(ii)与SEQ ID NO：1中的154-1305位核苷酸序列至少有70％同源性的序列；

(iii)在中度严紧条件下与SEQ ID NO：1所示序列杂交的序列；

(iv)具有与SEQ ID NO.2所示氨基酸序列至少70％同源性的序列；

(v)含有SEQ ID NO.2序列的多肽。

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