CN1208462C - 一个人类锌指蛋白家族新基因znf325 - Google Patents
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Abstract
一个人类锌指蛋白家族新基因ZNF325，涉及一种人类基因，它的cDNA全长2697bp，位于染色体7p22，编码的蛋白质全长462个氨基酸，含15个C2H2型的锌指；ZNF325在成人和胚胎时期广泛表达，说明该基因对人类早期胚胎正常发育和对人体各组织的正常功能起重要作用。
Description
技术领域：
本发明涉及一种人类基因，具体是锌指蛋白家族的一个人类新基因ZNF325的cDNA全长克隆，及其它在成人各器官中的表达和在不同发育阶段人类胚胎各器官中的表达。
背景技术：
锌指蛋白家族是一个巨大的超基因家族，它们广泛的存在于各种物种中，包括酵母，果蝇，爪蟾，鼠和人。锌指蛋白家族一般具有该家族的特征性结构-----锌指蛋白结构域，是最先在果蝇中被确立的、为中枢神经系统和肌肉等组织分化所必需的调控因子(Postigo et al.1997)。锌指蛋白基因zfh-1在早期果蝇胚胎的中胚层以及晚期胚胎的多种中胚层衍生结构中表达，参与调节表达eve基因的心脏前体细胞(EPC)的形成；还与tinman基因一同调节包括性腺中胚层在内的外侧中胚层的进一步分化(Lai Z C.，et al，1999)。zfh-1在脊椎动物中的同源基因也有相似的功能。如锌指蛋白基因ZEB的表达产物ZEB-1和ZEB-2蛋白，在肌肉、中枢神经系统、T淋巴细胞等组织中均有表达，而最近发现ZEB蛋白包含两个独立的区域，分别调节哺乳动物肌细胞和淋巴细胞的分化(Postigo et al.1997)。
锌指蛋白基因家族也是人类最大的基因家族之一，很多目前已知的人类转录调控因子都是锌指蛋白成员(Gou et al.，2001)。典型的锌指蛋白为C2H2型，即Zn++离子与两个半胱氨基酸残基和两个组氨酸残基形成配位键。除了这四个氨基酸残基外，还有两个芳香族氨基酸残基和一个亮氨酸残基也高度保守。配位结构加上Phe和Leu所形成的疏水核心，确定了锌指的基本结构和形状。锌指的三维结构包含两个短的β-折叠和一个α-螺旋。研究表明锌指结构对于维持DNA结构域的结构是必需的，在很多情况下它还与DNA直接相互作用(Coppin et al.，2002)。人们认为这种锌指结构在蛋白质结合到核苷酸上时起作用，在细胞的分化和繁殖过程中，它可以激活或者抑制基因的表达，如锌指蛋白ZEB-1，snail，hFOG等，而且，这种锌指结构可以识别相同的DNA序列，如ZEB-1和snail的锌指结构可以识别它们各自靶位点的E-BOX和E-BOX类似序列(Burke et al，.2002)。
研究表明锌指蛋白基因在生物发育过程中充当持家基因或调节因子的角色，也有很多锌指蛋白在人类早期胚胎发育过程中起着重要的作用。如ZNF174是某些生长因子基因的负调节子(Williams et al.，1995)；AJ18参与骨的发育(Jheon et al.，2001)；Hsal1，WT1，以及TR-alpha-1等锌指蛋白与心脏功能和疾病有关，HFHZ可能对心脏肥大的病理起重要作用(Dai and Liew，1998)。锌指蛋白GATA4和hFOG2参与心脏的形成和疾病的发生(Crispino et al.，2001)。许多锌指蛋白参与某些肿瘤的形成，如WT1(Dennis et al.，2002)和RB基因(Lee，et al.，1987)。同时，在模型动物果蝇中，锌指蛋白Zfh1参与调节eve基因的表达，控制心脏前体细胞(EPC)的形成，对果蝇心脏的特异分化是必需的(Su et al.，1999)。
发明内容：
本发明的目的在于提供一个人类锌指蛋白家族新基因ZNF325的全长cDNA序列，分析它在成人各器官及人类胚胎不同发育阶段中的表达，以探索该基因在人类胚胎发育过程中和成体发育中所起的作用。
本发明以本实验室提取的脑部mRNA反转录所得的cDNA文库为模板，根据C2H2型锌指结构及相邻锌指间的保守序列区域设计兼并引物A1和A2，进行PCR扩增，所得PCR扩增产物经琼脂糖凝胶点泳分离，与pUCm-T(SANGONG)载体相连接后转化进入大肠杆菌DH5α，转化后进一步测序分析。把所得的序列用Blastn去搜索dbEST发现是EST AU125576的部分序列，把ESTAU125576用blastn EST去搜索Genbank，我们发现了一个包括EST AU125576的EST群，它们由ESTs BG957653，BE568216，AV708178，AU125576 andAU131235组成，这个EST群属于一个新基因。以胚胎脑文库为模板，分别用四对引物5’-RACE anti-sense-outer/UPM，5’-RACEanti-sense-inner/UPM；3’-RACE sense-outer/NUP，3’-RACEsense-inner/NUP进行5`-RACE和3`-RACE快速扩增末端，其中5’-RACEanti-sense-outer，5’-RACE anti-sense-inner；3’-RACE sense-outer，3’-RACE sense-inner是基因特异引物，UPM和NUP由SMART RACE试剂盒提供，RACE反应分别得到了930bp和318bp的目的片段，经T-载体克隆、测序，它们为该基因的5`端和3`端，将它们拼接为全长cDNA，共2697bp，至此，我们得到了新基因的全长cDNA，经国际人类基因命名委员会批准命名为ZNF325。
ZNF325此基因位于染色体7p22，长2697个碱基，含5个外显子，在基因组DNA上长15kb。其开放阅读框前5’端上游含924bp的非编码区，从925bp到2313bp为开放阅读框，2313bp后为3’端非编码序列。它编码的蛋白质全长462个氨基酸，含15个C2H2型的锌指，它是一种典型的锌指结构域，由#-X-C-X(1-5)-C-X3-#-X5-#-X2-H-X(3-6)-[H/C]组成，其中X代表任何一种氨基酸，最后一个氨基酸是组氨酸或半胱氨酸，#代表对锌指结构起重要稳定折叠作用的氨基酸位置。
ZNF325的基因序列已递交到GenBank，受理号为AF505656。用JELLYFISH程序的ALIGNMENT分析其与锌指蛋白家族的其它锌指蛋白的同源发现，ZNF325与RBAK同源度高达71％(见图1)。RBAK是人们发现的第一个与RB相互作用的转录抑制因子(Skkapek et al.，2000)。而RB是一个能抑制E2F转录因子家族成员激活的基因表达的抑癌基因。
Northern Bolt分析表明该基因在成人的各个组织中普遍表达。进行8种正常人体组织mRNA的Northern杂交分析，结果为2.7kb的ZNF325 mRNA在成人的各个组织中普遍表达(见图2A)，此结果表明ZNF325在成体中的表达不具有细胞特异性，它可能对人体各个组织的正常功能都起重要作用。
进行16周，18周，20.5周，22周，23周和24周的人体胚胎各种组织总RNA膜的Northern杂交分析，结果表明该基因在人体不同发育时期的胚胎的表达情况与在成体的表达情况相似，ZNF325 mRNA在胚胎时期广泛表达(见图2B-2G)，说明ZNF325可能对人类早期胚胎的正常发育起了重要作用。它的结构和表达特征预示着它编码的是一个具DNA结合功能的转录调控因子。
本发明的优点：
1.提供了一个人类新基因ZNF325基因的全长cDNA序列，并描述了其编码的蛋白产物与重要基因RBAK的同源性，证明了该基因是C2H2型锌指蛋白基因家族的成员之一。
2.该基因编码的蛋白产物为锌指蛋白，是一种转录调控因子，并且在人类成体和胚胎组织中广泛表达，说明该基因作为转录因子在胚胎发育早期起了很重要的作用，并将这种作用延续到了成体时期。
本发明通过以下附图和实施例作进一步阐述，但并不限制本发明的范围。
附图说明：
图1.ZNF325与RBAK蛋白质的同源比较。
图2.ZNF325在人类组织的Northern杂交。
图2A，2B，2C，2D，2E，2F，2G分别为成人组织，16周，18周，20.5周，22周，23周，24周胚胎组织。
图中：1胃 2肾 3骨骼肌 4肺 5脑 5′大脑 5″小脑 6肠 7肝 8心脏 9肾上腺 10胰腺 11脾 12肺 13胆囊 14膀胱 15舌
具体实施方式：人类锌指蛋白家族新基因ZNF325的克隆，测序及其表达。
1.兼并引物进行PCR扩增筛选新基因
根据C2H2型锌指结构及相邻锌指间的保守序列区域设计兼并引物A1和A2A1： sense 5’-GRNGARAARCCNUMY-3’A2： antisense 5’-RTGDATNCGNTGRTGVAW-3’PCR反应以脑cDNA文库为模板，反应条件：先94℃变性4分钟，然后94℃变性30秒、50℃ 30秒、72℃ 30秒共30个循环，最后72℃ 延伸7分钟，扩增的带，进行T-载体连接，转化，任意挑选转化子去测序。
测序结果去进行dbEST检索，发现该片段是EST AU125576的部分片段，用此EST进行Blastn nr检索得到一新基因，再进行dbEST检索。
2.ZNF325全长cDNA的克隆
以检索获得的cDNA序列设计RACE引物：
5’-RACE anti-sense-outer 5’-CTGATGCACAGTAAGGGTTCC-3’
5’-RACE anti-sense-inner 5’-AGGTCCGACATCTGGAGAAAGGC-3’
3’-RACE sense-outer 5’-TGATGTATAGTGAGATAGGACC-3’
3’-RACE sense-inner 5’-TCAGAGAAGCCTTCCCACATC-3’
利用CLONTECH公司的SMART RACE试剂盒做5′端和3′端CLONTECH公司提供的引物：
MUP：5′-CTAATACGACTCACTATAGGGCAAGCAGTGGTATCAAC
GCAGAGT-3′
5′-CTAATACGACTCACTATAGGGC-3′
NUP：5′-AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT-3′
具体操作按该公司protocol进行。将RACE产物克隆入T载体并测序获得ZNF325的5`端和3`端序列，反应分别得到了930bp和318bp的目的片段，将它们拼接后得到ZNF325全长cDNA，共2697bp，至此，我们得到了新基因的全长cDNA。
3.Northern杂交
(1)组织总RNA的提取(按王雁云等，一种快速的总RNA提取方法，生命科学研究，5(1)：88-90(2001)进行)。
(2)总RNA的电泳及转膜，均按《现代分子生物学实验技术》介绍的方法进行(卢圣栋主编，第二版)。
(3)Northern杂交
将从CLONTECH公司买的成人组织mRNA膜和转有20ug人体胚胎多种组织以及总胚胎组织的总RNA的尼龙膜，放入培养皿中，加入变性的经42℃预热的快速杂交液10ml(Clontech公司)，在42℃条件下预杂交30分钟，加入变性的同位素标记的ZNF325的cDNA片段，42℃杂交过夜。用2XSSC，0.05％SDS，42℃洗两次，15分钟/次；0.1XSSC，0.1％SDS，42℃洗两次，15分钟/次。
(4)-80℃曝光3天，洗X光片。
(5)用0.1×SSC和0.5％SDS在95℃洗10分钟膜用β-actin cDNA重新标记，做Northern杂交进行阳性对照。
ZNF325 cDNA的核苷酸序列和编码的氨基酸序列：
accaggtctg gtctacagtc gactaagtcg gtcggcccgg gcccctctgg agcanaangg 60
ccttggtgag gcggacagga agggacctcg cgagcagacg cgcgcccgcg acagcaatcc 120
cgccccggcc tgtcgggagc ggtggggcag aggctgcgga gccccaggag gatctgcctc 180
cgctttcaca gtcctccaga tttttccaag agcagcagaa aatgaataaa tccctggggc 240
cagtgtcatt caaggacgtg gctgtggact tcacccagga ggaatggcag cagctggatc 300
ctgagcagaa gataacttac agggatgtga tgctggagaa ctacagcaat ctagtttctg 360
tggggtatca cattatcaaa ccggatgtta tcagcaagtt ggagcaagga gaagagccat 420
ggatagtaga aggagaattc ctacttcaga gctatccaga tgaagtctgg caaactgatg 480
acctaataga gagaatccag gaagaggaaa ataaaccttc aaggcaaact gtgttcattg 540
agaccctgat tgaagagaga ggtaatgttc ctggtaaaac ttttgatgta gaaacgaacc 600
ctgttccttc aagaaaaata gcctataaaa atagcctctg tgactcatgt gaaaagtgtt 660
taacgtctgt ttcagaatat attagtagtg atggaagcta tgcaagaatg aaagctgatg 720
aatgtagtgg attgtgggaa atcactcctc catattaagc ttgagaaaac tcatccagga 780
gatcnagctt atgatttaat caaaatgggg aaccttatac cctaaattga anaagtntta 840
tcaaaaattc gtattttgga gaaacctttt gaatatattg aatgccagaa agccttccaa 900
aaggacactg tttttgttaa tcac atg gaa gaa aag ccc tat aag 945
Met Glu Glu Lys Pro Tyr Lys
1 5
tgg aat gga tct gaa ata gcc ttt ctc cag atg tcg gac ctc act 990
Trp Asn Gly Ser Glu Ile Ala Phe Leu Gln Met Ser Asp Leu Thr
10 15 20
gta cat cag aca tct cat atg gaa atg aag ccc tat gaa tgc agt 1035
Val His Gln Thr Ser His Met Glu Met Lys Pro Tyr Glu Cys Ser
25 30 35
gaa tgt ggg aaa tcc ttc tgt aaa aag tca aaa ttt att ata cat 1080
Glu Cys Gly Lys Ser Phe Cys Lys Lys Ser Lys Phe Ile Ile His
40 45 50
cag agg act cac aca gga gag aaa cct tac gaa tgt aat cag tgt 1125
Gln Arg Thr His Thr Gly Glu Lys Pro Tyr Glu Cys Asn Gln Cys
55 60 65
ggg aaa tcc ttc tgc cag aag gga acc ctt act gtg cat cag aga 1170
Gly Lys Ser Phe Cys Gln Lys Gly Thr Leu Thr Val His Gln Arg
70 75 80
aca cac aca ggg gag aag ccc tat gaa tgt aat gaa tgt ggg aag 1215
Thr His Thr Gly Glu Lys Pro Tyr Glu Cys Asn Glu Cys Gly Lys
85 90 95
aac ttt tac cag aag tta cac ctc att cag cat cag aga act cac 1260
Asn Phe Tyr Gln Lys Leu His Leu Ile Gln His Gln Arg Thr His
100 105 110
tca gga gag aag ccc tat gaa tgt agt tat tgt gga aaa tcc ttt 1305
Ser Gly Glu Lys Pro Tyr Glu Cys Ser Tyr Cys Gly Lys Ser Phe
115 120 125
tgc cag aag aca cac ctc aca caa cat cag aga aca cat tca gga 1350
Cys Gln Lys Thr His Leu Thr Gln His Gln Arg Thr His Ser Gly
130 135 140
gag aga cct tat gtt tgt cat gac tgt ggg aaa acc ttc tcg cag 1395
Glu Arg Pro Tyr Val Cys His Asp Cys Gly Lys Thr Phe Ser Gln
145 150 155
aag tca gca ctt aat gac cat cag aaa att cac aca ggt gtg aaa 1440
Lys Ser Ala Leu Asn Asp His Gln Lys Ile His Thr Gly Val Lys
160 165 170
ctc tac aag tgt agt gaa tgt ggg aaa tgc ttc tgc cgc aag tct 1485
Leu Tyr Lys Cys Ser Glu Cys Gly Lys Cys Phe Cys Arg Lys Ser
175 180 185
act ctc acg acc cac ctg agg acc cac aca gga gag aaa ccg tat 1530
Thr Leu Thr Thr His Leu Arg Thr His Thr Gly Glu Lys Pro Tyr
190 195 200
gaa tgt aat gag tgt gga aaa ttc ttc tct cgg ttg tca tat ctc 1575
Glu Cys Asn Glu Cys Gly Lys Phe Phe Ser Arg Leu Ser Tyr Leu
205 210 215
act gta cat tat aga act cat tca gga gag aaa ccc tat gaa tgt 1620
Thr Val His Tyr Arg Thr His Ser Gly Glu Lys Pro Tyr Glu Cys
220 225 230
aat gaa tgt gga aaa acc ttc tac ctg aat tca gcc ctc atg aga 1665
Asn Glu Cys Gly Lys Thr Phe Tyr Leu Asn Ser Ala Leu Met Arg
235 240 245
cat cag aga gtg cac aca gga gag aaa cct tac gaa tgt aat gaa 1710
His Gln Arg Val His Thr Gly Glu Lys Pro Tyr Glu Cys Asn Glu
250 255 260
tgt gga aag tta ttc tcc cag ttg tca tac ctc act atc cat cat 1755
Cys Gly Lys Leu Phe Ser Gln Leu Ser Tyr Leu Thr Ile His His
265 270 275
aga act cat tca gga gta aaa ccc tat gaa tgt agt gaa tgt ggg 1800
Arg Thr His Ser Gly Val Lys Pro Tyr Glu Cys Ser Glu Cys Gly
280 285 290
aaa acc ttc tac cag aac tca gcc ctt tgt aga cat cgg aga ata 1845
Lys Thr Phe Tyr Gln Asn Ser Ala Leu Cys Arg His Arg Arg Ile
295 300 305
cac aaa gga gag aag ccc tat gaa tgc tat ata tgt gga aaa ttc 1890
His Lys Gly Glu Lys Pro Tyr Glu Cys Tyr Ile Cys Gly Lys Phe
310 315 320
ttc tct cag atg tca tac ctc act ata cat cat aga att cat tca 1935
Phe Ser Gln Met Ser Tyr Leu Thr Ile His His Arg Ile His Ser
325 330 335
gga gag aag ccc tat gaa tgt agt gaa tgt ggg aaa acc ttc tgc 1980
Gly Glu Lys Pro Tyr Glu Cys Ser Glu Cys Gly Lys Thr Phe Cys
340 345 350
cag aat tca gcc ctt aat cga cat cag aga aca cac aca gga gag 2025
Gln Asn Ser Ala Leu Asn Arg His Gln Arg Thr His Thr Gly Glu
355 360 365
aaa gcc tac gaa tgt tat gaa tgt ggg aag tgc ttc tct cag atg 2070
Lys Ala Tyr Glu Cys Tyr Glu Cys Gly Lys Cys Phe Ser Gln Met
370 375 380
tcc tat ctc act ata cat cat cga att cat tca gga gag aaa ccc 2115
Ser Tyr Leu Thr Ile His His Arg Ile His Ser Gly Glu Lys Pro
385 390 395
ttt gaa tgt aat gag tgt gga aaa gcc ttc tct cgg atg tca tac 2160
Phe Glu Cys Asn Glu Cys Gly Lys Ala Phe Ser Arg Met Ser Tyr
400 405 410
ctc act gta cat tat aga act cat tca gga gag aaa ccc tat gag 2205
Leu Thr Val His Tyr Arg Thr His Ser Gly Glu Lys Pro Tyr Glu
415 420 425
tgt act gaa tgt gga aaa aaa ttc tac cac aaa tca gca ttc aac 2250
Cys Thr Glu Cys Gly Lys Lys Phe Tyr His Lys Ser Ala Phe Asn
430 435 440
agc cat cag aga att cat agg aga ggc aat atg aat gta ata gat 2295
Ser His Gln Arg Ile His Arg Arg Gly Asn Met Asn Val Ile Asp
445 450 455
gtg gga agg ctt ctc tgaagtcaga cctcatttta tatcagagaa 2340
Val Gly Arg Leu Leu
460 462
ccctttcagt atagtgaatc agaaactcct gcctgaagtc aaacaccttg tacatcagag 2400
agttcacaca ggttagtgtg gacatcccct tgtgtgttgg actcataatc tgaagactca 2461
cagaatggaa accatgatta taacaagacc acatggtata acaatactag actatagaca 2520
agtaaaaatt tataaatatt aagaatgtat atacatgtca ccatggattg gaactgtttt 2580
gcatatcagg gaaatcatag ccaaggggaa atctatcagt ataaggaatg tggaagacat 2640
aatcctttgg aaactgttaa tactaaaaga tatgtttctg atacaatagc aaacttg 2697
ZNF325 cDNA的全长核苷酸序列
accaggtctg gtctacagtc gactaagtcg gtcggcccgg gcccctctgg agcanaangg 60
ccttggtgag gcggacagga agggacctcg cgagcagacg cgcgcccgcg acagcaatcc 120
cgccccggcc tgtcgggagc ggtggggcag aggctgcgga gccccaggag gatctgcctc 180
cgctttcaca gtcctccaga tttttccaag agcagcagaa aatgaataaa tccctggggc 240
cagtgtcatt caaggacgtg gctgtggact tcacccagga ggaatggcag cagctggatc 300
ctgagcagaa gataacttac agggatgtga tgctggagaa ctacagcaat ctagtttctg 360
tggggtatca cattatcaaa ccggatgtta tcagcaagtt ggagcaagga gaagagccat 420
ggatagtaga aggagaattc ctacttcaga gctatccaga tgaagtctgg caaactgatg 480
acctaataga gagaatccag gaagaggaaa ataaaccttc aaggcaaact gtgttcattg 540
agaccctgat tgaagagaga ggtaatgttc ctggtaaaac ttttgatgta gaaacgaacc 600
ctgttccttc aagaaaaata gcctataaaa atagcctctg tgactcatgt gaaaagtgtt 660
taacgtctgt ttcagaatat attagtagtg atggaagcta tgcaagaatg aaagctgatg 720
aatgtagtgg attgtgggaa atcactcctc catattaagc ttgagaaaac tcatccagga 780
gatcnagctt atgatttaat caaaatgggg aaccttatac cctaaattga anaagtntta 840
tcaaaaattc gtattttgga gaaacctttt gaatatattg aatgccagaa agccttccaa 900
aaggacactg tttttgttaa tcacatggaa gaaaagccct ataagtggaa tggatctgaa 960
atagcctttc tccagatgtc ggacctcact gtacatcaga catctcatat ggaaatgaag 1020
ccctatgaat gcagtgaatg tgggaaatcc ttctgtaaaa agtcaaaatt tattatacat 1080
cagaggactc acacaggaga gaaaccttac gaatgtaatc agtgtgggaa atccttctgc 1140
cagaagggaa cccttactgt gcatcagaga acacacacag gggagaagcc ctatgaatgt 1200
aatgaatgtg ggaagaactt ttaccagaag ttacacctca ttcagcatca gagaactcac 1260
tcaggagaga agccctatga atgtagttat tgtggaaaat ccttttgcca gaagacacac 1320
ctcacacaac atcagagaac acattcagga gagagacctt atgtttgtca tgactgtggg 1380
aaaaccttct cgcagaagtc agcacttaat gaccatcaga aaattcacac aggtgtgaaa 1440
ctctacaagt gtagtgaatg tgggaaatgc ttctgccgca agtctactct cacgacccac 1500
ctgaggaccc acacaggaga gaaaccgtat gaatgtaatg agtgtggaaa attcttctct 1560
cggttgtcat atctcactgt acattataga actcattcag gagagaaacc ctatgaatgt 1620
aatgaatgtg gaaaaacctt ctacctgaat tcagccctca tgagacatca gagagtgcac 1680
acaggagaga aaccttacga atgtaatgaa tgtggaaagt tattctccca gttgtcatac 1740
ctcactatcc atcatagaac tcattcagga gtaaaaccct atgaatgtag tgaatgtggg 1800
aaaaccttct accagaactc agccctttgt agacatcgga gaatacacaa aggagagaag 1860
ccctatgaat gctatatatg tggaaaattc ttctctcaga tgtcatacct cactatacat 1920
catagaattc attcaggaga gaagccctat gaatgtagtg aatgtgggaa aaccttctgc 1980
cagaattcag cccttaatcg acatcagaga acacacacag gagagaaagc ctacgaatgt 2040
tatgaatgtg ggaagtgctt ctctcagatg tcctatctca ctatacatca tcgaattcat 2100
tcaggagaga aaccctttga atgtaatgag tgtggaaaag ccttctctcg gatgtcatac 2160
ctcactgtac attatagaac tcattcagga gagaaaccct atgagtgtac tgaatgtgga 2220
aaaaaattct accacaaatc agcattcaac agccatcaga gaattcatag gagaggcaat 2280
atgaatgtaa tagatgtggg aaggcttctc tgaagtcaga cctcatttta tatcagagaa 2340
ccctttcagt atagtgaatc agaaactcct gcctgaagtc aaacaccttg tacatcagag 2400
agttcacaca ggttagtgtg gacatcccct tgtgtgttgg actcataatc tgaagactca 2460
cagaatggaa accatgatta taacaagacc acatggtata acaatactag actatagaca 2520
agtaaaaatt tataaatatt aagaatgtat atacatgtca ccatggattg gaactgtttt 2580
gcatatcagg gaaatcatag ccaaggggaa atctatcagt ataaggaatg tggaagacat 2640
aatcctttgg aaactgttaa tactaaaaga tatgtttctg atacaatagc aaacttg 2697
Claims (2)
1、一个人类锌指蛋白家族基因ZNF325，其特征在于该基因的cDNA核苷酸序列如下：
accaggtctg gtctacagtc gactaagtcg gtcggcccgg gcccctctgg agcanaangg 60
ccttggtgag gcggacagga agggacctcg cgagcagacg cgcgcccgcg acagcaatcc 120
cgccccggcc tgtcgggagc ggtggggcag aggctgcgga gccccaggag gatctgcctc 180
cgctttcaca gtcctccaga tttttccaag agcagcagaa aatgaataaa tccctggggc 240
cagtgtcatt caaggacgtg gctgtggact tcacccagga ggaatggcag cagctggatc 300
ctgagcagaa gataacttac agggatgtga tgctggagaa ctacagcaat ctagtttctg 360
tggggtatca cattatcaaa ccggatgtta tcagcaagtt ggagcaagga gaagagccat 420
ggatagtaga aggagaattc ctacttcaga gctatccaga tgaagtctgg caaactgatg 480
acctaataga gagaatccag gaagaggaaa ataaaccttc aaggcaaact gtgttcattg 540
agaccctgat tgaagagaga ggtaatgttc ctggtaaaac ttttgatgta gaaacgaacc 600
ctgttccttc aagaaaaata gcctataaaa atagcctctg tgactcatgt gaaaagtgtt 660
taacgtctgt ttcagaatat attagtagtg atggaagcta tgcaagaatg aaagctgatg 720
aatgtagtgg attgtgggaa atcactcctc catattaagc ttgagaaaac tcatccagga 780
gatcnagctt atgatttaat caaaatgggg aaccttatac cctaaattga anaagtntta 840
tcaaaaattc gtattttgga gaaacctttt gaatatattg aatgccagaa agccttccaa 900
aaggacactg tttttgttaa tcacatggaa gaaaagccct ataagtggaa tggatctgaa 960
atagcctttc tccagatgtc ggacctcact gtacatcaga catctcatat ggaaatgaag 1020
ccctatgaat gcagtgaatg tgggaaatcc ttctgtaaaa agtcaaaatt tattatacat 1080
cagaggactc acacaggaga gaaaccttac gaatgtaatc agtgtgggaa atccttctgc 1140
cagaagggaa cccttactgt gcatcagaga acacacacag gggagaagcc ctatgaatgt 1200
aatgaatgtg ggaagaactt ttaccagaag ttacacctca ttcagcatca gagaactcac 1260
tcaggagaga agccctatga atgtagttat tgtggaaaat ccttttgcca gaagacacac 1320
ctcacacaac atcagagaac acattcagga gagagacctt atgtttgtca tgactgtggg 1380
aaaaccttct cgcagaagtc agcacttaat gaccatcaga aaattcacac aggtgtgaaa 1440
ctctacaagt gtagtgaatg tgggaaatgc ttctgccgca agtctactct cacgacccac 1500
ctgaggaccc acacaggaga gaaaccgtat gaatgtaatg agtgtggaaa attcttctct 1560
cggttgtcat atctcactgt acattataga actcattcag gagagaaacc ctatgaatgt 1620
aatgaatgtg gaaaaacctt ctacctgaat tcagccctca tgagacatca gagagtgcac 1680
acaggagaga aaccttacga atgtaatgaa tgtggaaagt tattctccca gttgtcatac 1740
ctcactatcc atcatagaac tcattcagga gtaaaaccct atgaatgtag tgaatgtggg 1800
aaaaccttct accagaactc agccctttgt agacatcgga gaatacacaa aggagagaag 1860
ccctatgaat gctatatatg tggaaaattc ttctctcaga tgtcatacct cactatacat 1920
catagaattc attcaggaga gaagccctat gaatgtagtg aatgtgggaa aaccttctgc 1980
cagaattcag cccttaatcg acatcagaga acacacacag gagagaaagc ctacgaatgt 2040
tatgaatgtg ggaagtgctt ctctcagatg tcctatctca ctatacatca tcgaattcat 2100
tcaggagaga aaccctttga atgtaatgag tgtggaaaag ccttctctcg gatgtcatac 2160
ctcactgtac attatagaac tcattcagga gagaaaccct atgagtgtac tgaatgtgga 2220
aaaaaattct accacaaatc agcattcaac agccatcaga gaattcatag gagaggcaat 2280
atgaatgtaa tagatgtggg aaggcttctc tgaagtcaga cctcatttta tatcagagaa 2340
ccctttcagt atagtgaatc agaaactcct gcctgaagtc aaacaccttg tacatcagag 2400
agttcacaca ggttagtgtg gacatcccct tgtgtgttgg actcataatc tgaagactca 2461
cagaatggaa accatgatta taacaagacc acatggtata acaatactag actatagaca 2520
agtaaaaatt tataaatatt aagaatgtat atacatgtca ccatggattg gaactgtttt 2580
gcatatcagg gaaatcatag ccaaggggaa atctatcagt ataaggaatg tggaagacat 2640
aatcctttgg aaactgttaa tactaaaaga tatgtttctg atacaatagc aaacttg 2697
2、按照权利要求1所述的一个人类锌指蛋白家族基因ZNF325，其特征在于与该基因的第925～2310核苷酸对应的氨基酸序列如下：
Met Glu Glu Lys Pro Tyr Lys Trp Asn Gly Ser Glu Ile Ala Phe Leu
1 5 10 15
Gln Met Ser Asp Leu Thr Val His Gln Thr Ser His Met Glu Met Lys
20 25 30
Pro Tyr Glu Cys Ser Glu Cys Gly Lys Ser Phe Cys Lys Lys Ser Lys
35 40 45
Phe Ile Ile His Gln Arg Thr His Thr Gly Glu Lys Pro Tyr Glu Cys
50 55 60
Asn Gln Cys Gly Lys Ser Phe Cys Gln Lys Gly Thr Leu Thr Val His
65 70 75 80
Gln Arg Thr His Thr Gly Glu Lys Pro Tyr Glu Cys Asn Glu Cys Gly
85 90 95
Lys Asn Phe Tyr Gln Lys Leu His Leu Ile Gln His Gln Arg Thr His
100 105 110
Ser Gly Glu Lys Pro Tyr Glu Cys Ser Tyr Cys Gly Lys Ser Phe Cys
115 120 125
Gln Lys Thr His Leu Thr Gln His Gln Arg Thr His Ser Gly Glu Arg
130 135 140
Pro Tyr Val Cys His Asp Cys Gly Lys Thr Phe Ser Gln Lys Ser Ala
145 150 155 160
Leu Asn Asp His Gln Lys Ile His Thr Gly Val Lys Leu Tyr Lys Cys
165 170 175
Ser Glu Cys Gly Lys Cys Phe Cys Arg Lys Ser Thr Leu Thr Thr His
180 185 190
Leu Arg Thr His Thr Gly Glu Lys Pro Tyr Glu Cys Asn Glu Cys Gly
195 200 205
Lys Phe Phe Ser Arg Leu Ser Tyr Leu Thr Val His Tyr Arg Thr His
210 215 220
Ser Gly Glu Lys Pro Tyr Glu Cys Asn Glu Cys Gly Lys Thr Phe Tyr
225 230 235 240
Leu Asn Ser Ala Leu Met Arg His Gln Arg Val His Thr Gly Glu Lys
245 250 255
Pro Tyr Glu Cys Asn Glu Cys Gly Lys Leu Phe Ser Gln Leu Ser Tyr
260 265 270
Leu Thr Ile His His Arg Thr His Ser Gly Val Lys Pro Tyr Glu Cys
275 280 285
Ser Glu Cys Gly Lys Thr Phe Tyr Gln Asn Ser Ala Leu Cys Arg His
290 295 300
Arg Arg Ile His Lys Gly Glu Lys Pro Tyr Glu Cys Tyr Ile Cys Gly
305 310 315 320
Lys Phe Phe Ser Gln Met Ser Tyr Leu Thr Ile His His Arg Ile His
325 330 335
Ser Gly Glu Lys Pro Tyr Glu Cys Ser Glu Cys Gly Lys Thr Phe Cys
340 345 350
Gln Asn Ser Ala Leu Asn Arg His Gln Arg Thr His Thr Gly Glu Lys
355 360 365
Ala Tyr Glu Cys Tyr Glu Cys Gly Lys Cys Phe Ser Gln Met Ser Tyr
370 375 380
Leu Thr Ile His His Arg Ile His Ser Gly Glu Lys Pro Phe Glu Cys
385 390 395 400
Asn Glu Cys Gly Lys Ala Phe Ser Arg Met Ser Tyr Leu Thr Val His
405 410 415
Tyr Arg Thr His Ser Gly Glu Lys Pro Tyr Glu Cys Thr Glu Cys Gly
420 425 430
Lys Lys Phe Tyr His Lys Ser Ala Phe Asn Ser His Gln Arg Ile His
435 440 445
Arg Arg Gly Asn Met Asn Val Ile Asp Val Gly Arg Leu Leu
450 455 460
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