CN1900279A - 诱导细胞凋亡的多核苷酸及其编码的多肽和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一类新的编码具有诱导细胞凋亡功能的人蛋白的多核苷酸,及其编码的多肽,多肽的抗体。本发明还公开了这类新的多核苷酸在宿主细胞中外源表达诱导细胞凋亡的应用。本发明还公开了所述多肽、抗体在制备预防和治疗与人体细胞凋亡相关的疾病,尤其在开发如艾滋病、神经系统的退行性病变等自身免疫疾病和肿瘤的药物上的用途。

Description

诱导细胞凋亡的多核苷酸及其编码的多肽和用途
技术领域
本发明属于生物技术领域,涉及基因表达调控领域,具体地说,本发明涉及一类新的编码具有诱导细胞凋亡功能的人蛋白的多核苷酸,及其编码的多肽,多肽的抗体。本发明还涉及这类新的多核苷酸在宿主细胞中外源表达诱导细胞凋亡的应用。本发明还涉及所述多肽、抗体在制备预防和治疗与人体细胞凋亡相关的疾病,尤其在开发如艾滋病、神经系统的退行性病变等自身免疫疾病和肿瘤的药物上的用途。
背景技术
人体内的细胞注定是要死亡的,有些死亡是生理性的,有些死亡则是病理性的,有关细胞死亡过程的研究,近年来已成为生物学、医学研究的一个热点,到目前为此,人们已经知道细胞的死亡起码有两种方式,即细胞坏死与细胞凋亡。细胞坏死是早已被认识到的一种细胞死亡方式,而细胞凋亡则是近年逐渐被认识的一种细胞死亡方式,细胞凋亡是细胞的一种基本生物学现象,在多细胞生物清除不需要的或异常的细胞中起着必要的作用。它在生物体的进化、内环境的稳定以及多个系统的发育中起着重要的作用。细胞凋亡不仅是一种特殊的细胞死亡类型,而且具有重要的生物学意义及复杂的分子生物学机制。
凋亡是多基因严格控制的过程。这些基因在种属之间非常保守,如Bcl-2家族、caspase家族、癌基因如C-myc、抑癌基因P53等,随着分子生物学技术的发展对多种细胞凋亡的过程有了相当的认识,但是迄今为止凋亡过程确切机制尚不完全清楚。
细胞凋亡之所以成为人们研究的一个热点,在很大程度上决定于细胞凋亡与临床疾病的密切关系。这种关系不仅表现在凋亡及其机制的研究,阐明了一大类免疫病的发病机制,而且由此可以导致疾病新疗法的出现,特别是细胞凋亡与肿瘤及艾滋病之间的密切关系倍受人们重视。
1)HIV病毒感染造成CD4+T细胞减少是通过细胞凋亡机制
HIV感染引起艾滋病,其主要的发病机制是HIV感染后特异性地破坏CD4+T细胞,使CD4+T以及与其相关的免疫功能缺陷,易导致机会性感染及肿瘤,但HIV感染后怎样特异性破坏CD4+T细胞呢?近年认为,CD4+T淋巴细胞绝对数显著减少的原因,主要是通过细胞凋亡机制造成的。这不仅阐明了AIDS是CD4+T细胞减少的主要原因,同时也为AIDS的治疗研究指明了一个重要的探索方向。
2)从细胞凋亡角度看,肿瘤的发生是由于凋亡受阻所致
一般认为恶性转化的肿瘤细胞是因为失控生长,过度增殖,从细胞凋亡的角度看则认为是肿瘤的凋亡机制受到抑制而不能正常进行细胞死亡清除的结果。因此,从细胞凋亡角度来设计对肿瘤的治疗方法就是重建肿瘤细胞的凋亡信号传导系统,即抑制肿瘤细胞的生存基因的表达,激活死亡基因的表达。
3)细胞凋亡的研究将给自身免疫病带来真正的突破
自身免疫病包括一大类难治性的免疫紊乱而造成的疾病,自身反应性T淋巴细胞及产生抗体的B淋巴细胞是引起自身免疫病的主要免疫病理机制,正常情况下,免疫细胞的活化是一个极为复杂的过程。在自身抗原的刺激作用下,识别自身抗原的免疫细胞被活化,从而通过细胞凋亡的机制而得到清除。但如这一机制发生障碍,那么识别自身抗原的免疫活性细胞的清除就会产生障碍,造成淋巴细胞增殖性的自身免疫疾患。
4)神经系统的退行性病变
目前知道老年性痴呆是神经细胞凋亡的加速而产生的。阿尔茨海默病(AD)是一种不可逆的退行性神经疾病,淀粉样前体蛋白(APP)、早老蛋白-1(PS1)及早老蛋白-2(PS2)的突变导致家族性阿尔茨海默病(FAD)。研究证明PS参与了神经细胞凋亡的调控,PS1、PS2的过表达能增强细胞对凋亡信号的敏感性。Bcl-2基因家族两个成员Bcl-xl和Bcl-2参与对细胞凋亡的调节。
既然很多疾病的发生和发展与细胞凋亡失调相关,那么对某些疾病进行治疗性细胞凋亡干预是合乎逻辑的。许多基因与促进或抑制肿瘤细胞凋亡有关,因此通过各种途径的基因转移诱导体内肿瘤细胞凋亡是研究肿瘤治疗的新尝试,治疗价值是不可估量的。相反,用增强细胞对凋亡的耐受性就可以治疗一些退行性变性疾病,因此,凋亡相关基因的发现及其机理研究对于进一步探讨凋亡机制及今后疾病的基因治疗具有重要意义。
发明内容
人基因组学研究目前是国际上的热点,除大规模测序的方法外,还缺少从功能研究开始的高通量筛选具有一定功能的基因的方法。针对这种现状及现有药物或试剂的不足,本发明的目的是提供一类新的编码具有诱导细胞凋亡的人蛋白的多核苷酸NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13。
本发明的另一目的是提供这类多核苷酸所编码的多肽。
本发明的另一目的是提供含有这类多核苷酸的载体,和这类多核苷酸及其载体转化或转导的宿主细胞。
本发明的另一目的是提供这类多核苷酸所编码的多肽的抗体和用于检测的核酸分子。
本发明的另一目的是提供这类新的多核苷酸在宿主细胞中外源表达诱导细胞凋亡的应用。
本发明的另一目的是提供生产这些多核苷酸和其编码的多肽的方法以及该多核苷酸及其编码的多肽的用途。
为实现上述目的,本发明采用以下技术方案:
在本发明的第一方面,提供新颖的分离的多核苷酸,它包含编码具有诱导细胞凋亡功能的蛋白的核苷酸序列,该核苷酸序列选自:(a)与编码含有SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:26的氨基酸序列的多肽的多核苷酸有至少70%相似性的多核苷酸;(b)编码含有与SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:26的氨基酸序列有至少70%相似性的氨基酸序列的多肽的多核苷酸;(c)与(a)或(b)的多核苷酸互补的多核苷酸。
较佳地,该多核苷酸编码的多肽具有选自下组的氨基酸序列:SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:26。
较佳地,该多核苷酸的序列与选自下组的核苷酸序列有至少85%相似性:(a)SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25的编码区序列或全长序列;(b)在遗传密码简并范围内相应于(a)中提到的序列的至少一个序列;(c)与(a)或(b)中提到的序列互补的序列杂交的至少一个序列。
更佳地,该多核苷酸的序列选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25的编码区序列或全长序列。
在本发明的第二方面,提供了上述核苷酸所编码的多肽,它包含具有选自下组中的氨基酸序列的多肽:SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQID NO:12、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:26;或与以上任一氨基酸序列具有至少90%以上相似性的多肽,或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。
较佳地,该多肽是具有选自下组的氨基酸序列的多肽:SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ IDNO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:16、SEQID NO:18、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:26。
在本发明的第三方面,提供了含有上述多核苷酸的载体,以及被该载体转化或转导的宿主细胞,还提供了被上述多核苷酸转化或转导的宿主细胞。
在本发明的第四方面,提供了与上述多肽特异性结合的抗体,还提供了可用于检测的核酸分子,它含有上述任一多核苷酸中8-100个连续的核苷酸。
在本发明的第五方面,提供了上述多核苷酸在宿主细胞中外源表达诱导细胞凋亡的应用。
在本发明的第六方面,提供了上述多核苷酸和多肽在制备预防和/或治疗与人体细胞凋亡有关的疾病的药物中的用途。较佳地,在制备预防和/或治疗与人体细胞凋亡有关的如艾滋病、神经系统的退行性病变等自身免疫疾病和肿瘤的药物中的用途。
在本发明地第七方面,提供了一种药物组合物,它含有安全有效量的本发明中的具有诱导人体细胞凋亡功能的多肽及药学上可接受的载体。
在本发明的第八方面,提供了一种自身免疫疾病或肿瘤的体外检测方法,利用上述抗体或核酸片段来检测宿主样品中的多肽的存在或水平。
本发明的其他方面由于本文的技术的公开,对本领域技术人员而言是显而易见的。
如本文所用,“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质,原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多核苷酸和多肽是没有分离纯化的,但同样的多核苷酸或多肽如果从天然状态中与共同存在的其他物质分开,则为分离纯化的。这样的多核苷酸可能是某一载体的一部分,也可能这样的多核苷酸或多肽是某一组合物的一部分,既然载体或组合物不是它们的天然环境的成分,这些多核苷酸或多肽仍然是分离的。
如本文所用,“相似性”是指核苷酸或多肽序列比对过程中用来描述检测序列和目标序列之间相同DNA碱基或氨基酸残基顺序所占比例的高低,是一种直接的数量关系,通过部分相同或相似的百分比来度量核苷酸序列或者多肽序列之间相似的程度,此相似性百分比可以通过本领域已有的比对方法来计算,例子有两两序列间的比对方法FASTA程序(Pearson,W.R.and Lipman,D.J.1988.Improved tools for biological sequence comparison.Proc.Natl.Acad.Sci.85:2444-2448),BLAST程序(Altschul,S.F.,et al.1990 Basic local alignment search tool.J.Mol.Biol.215:403-410)等,或多序列比对方法CLUSTAL W(CORPET,F.1998 Multiple sequencealignment with hierarchical clustering.Nucleic Acids Res.,16:10881-10890)等。同源序列是指从某一共同祖先经趋异进化而形成的不同序列,根据相似性百分比可以判断比对序列间的同源性。当基因或蛋白质间相似程度很高时,表示它们具有一段共同的进化历程,从而判断它们会具有相似的生物学功能。当具有至少50%的相似程度时,比较容易推测检测序列和目标序列可能是同源序列。较佳地,具有至少70%的相似程度;更佳地,具有至少85%的相似程度;最佳地,具有至少90%的相似程度。而当相似性程度低于20%时,就难以确定或者根本无法确定其是否具有同源性。
本发明的多核苷酸包括其互补链可以是DNA形式或RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因组DNA或人工合成的DNA。DNA可以是单链的或是双链的。DNA可以是编码链或非编码链。如本文所用,“编码具有诱导细胞凋亡功能的多肽的多核苷酸”可以是包括编码此多肽的多核苷酸,也可以是还包括附加编码序列和/或非编码序列的多核苷酸。以NIAG1所编码的多肽为例,编码成熟多肽的编码区序列可以与SEQ ID NO:1所示的编码区序列相同或者是遗传密码简并的变异体。如本文所用,“遗传密码简并”是指一个氨基酸有几个密码子的现象。例如在本发明中NIAG1所编码的多肽的遗传密码简并的变异体指编码具有SEQ ID NO:2的多肽的核苷酸,且此核苷酸与SEQ IDNO:1所示的编码区序列有差别。对于其他具有诱导人体细胞凋亡功能的多肽,可依此类推。
本发明还涉及上述多核苷酸的变异体,它编码与本发明有相同的氨基酸序列的多肽或多肽的片段、类似物和衍生物。该多核苷酸的变异体可以是天然发生的等位变异体或非天然发生的变异体。这些核苷酸变异体包括取代变异体、缺失变异体和插入变异体。如本领域所知的,等位变异体是一个多核苷酸的替换形式,它可能是一个或多个核苷酸的取代、缺失或插入,但不会从实质上改变其编码的多肽的功能。
本发明还涉及与本发明所述多核苷酸序列的互补序列杂交且两个序列间具有至少50%,较佳地至少70%,更佳地至少80%相同性的多核苷酸。本发明特别涉及在严格条件下与此多核苷酸序列的互补序列可杂交的多核苷酸。在本发明中,“严格条件”是指:(1)在较低离子强度和较高温度下的杂交和洗脱,如0.2×SSC,0.1%SDS,60℃;或(2)杂交时加有变性剂,如50%(v/v)甲酰胺,0.1%小牛血清/0.1%Ficoll,42℃等;或(3)仅在两条序列之间的相同性至少在95%以上,更好的是在97%以上时才发生杂交。并且,可杂交的多核苷酸编码的多肽与本发明所述的多肽有相同的生物学功能和活性。
本发明的多核苷酸序列能用本领域已有的方法获得。这些技术包括但不局限于:(1)通过杂交技术分离DNA序列;(2)人工化学合成DNA序列;(3)通过构建cDNA文库大规模获得所需的多核苷酸;(4)PCR扩增技术。
第一种方法是先构建基因组文库或者cDNA文库,然后通过分子杂交等技术从基因组文库或cDNA文库中筛选出目的基因或序列。当生物基因组比较小时,此方法较易成功;当生物基因组很大时,构建其完整的基因组文库较困难,再从庞大的文库中去克隆目的基因的工程量也很大。
第二种方法是按设计好的序列一次合成100-200bp长的DNA片段,再用这些合成的片段组合连接成完整的基因。这种合成长的基因序列的方法的价格十分昂贵。此方法主要用于合成作为引物、接头等的核酸片段。
第三种方法是用本领域通常的方法构建cDNA文库,多次测序后,结合生物信息学分析技术(Ota et al.Nat Genet.2004 Jan;36(1):40-5),大规模获得目的cDNA克隆。生物信息学分析技术包括但不限于用BLAST或BLAT与已有的公共数据库比对,如refseq数据库等;用Phred算法评估测序质量;用计算转录起始密码子ATG的出现概率的ATGpr算法筛选全长cDNA序列等。
第四种方法用PCR技术扩增DNA/RNA的方法(Saiki,et al.Science 1985;230:1350-1354)。用于PCR的引物可根据本文所公开的本发明的序列信息适当地选择,并可用常规方法合成。可用常规方法如通过凝胶电泳分离和纯化扩增的DNA/RNA片段。本发明优选应用的方法是两步法通量化RT-PCR技术在混合cDNA文库中扩增得到大量的cDNA克隆。混合cDNA文库包括现有的cDNA文库和肿瘤文库。
本发明的基因,或者各种DNA片段等核苷酸序列的测定可用常规方法,如双脱氧链终止法(Sanger et al.PNAS,1977,74:5463-5467);也可用商业测序试剂盒等。为了获得全长的cDNA序列,测序需要反复进行。有时需要测定多个克隆的cDNA序列,才能拼接成全长的cDNA序列。
本发明的多肽可以是重组多肽、天然多肽、合成多肽,优选重组多肽。本发明的多肽可以是天然纯化的产物,或是化学合成的产物,或使用重组技术从原核或真核宿主(如细菌、酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞)中产生。本发明的多肽可以是糖基化的,也可以是非糖基化的。本发明的多肽可以包括或不包括起始的甲硫氨酸残基。
本发明还包括具有诱导人体细胞凋亡功能的多核苷酸编码的人蛋白多肽的片段、衍生物和类似物。术语“片段”、“衍生物”和“类似物”是指基本上保持与本发明的天然具有诱导人体细胞凋亡功能的人蛋白多肽相同的生物学功能或活性的多肽。本发明的多肽片段、衍生物和类似物可以是:(a)有一个或多个保守或非保守性氨基酸残基(优先保守性氨基酸残基)被取代的多肽,而这样取代的氨基酸残基可以是也可以不是由遗传密码编码的,或(b)在一个或多个氨基酸残基中具有取代基团的多肽,或(c)成熟多肽与另一个化合物(比如延长多肽半衰期的化合物)融合所形成的多肽,或(d)附加的氨基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽(如前导序列或分泌序列或用来纯化此多肽的序列或蛋白原序列)。
本发明的多肽可以通过常规的重组DNA技术,利用本发明的多核苷酸序列来表达或生产重组的具有诱导人体细胞凋亡功能的蛋白多肽(Science,1984;224:1431)。包括以下步骤:
(1)用本发明的多核苷酸(或其变异体),或用含有此多核苷酸的表达载体转化或转导合适的宿主细胞;
(2)在合适的培养基中培养步骤(1)得到的宿主细胞;
(3)从培养基或细胞中分离、纯化所需的蛋白多肽。
本发明中的多核苷酸和多肽优选以分离的形式提供,更佳地被纯化至均质。
本发明也涉及包含本发明所述多核苷酸的载体。本发明中,编码具有诱导人体细胞凋亡功能的人蛋白多肽的多核苷酸序列可以插入到重组表达载体中。术语“重组表达载体”指本领域熟知的细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒,如腺病毒、逆转录病毒,或者其他载体。在本发明中适用的载体可以是原核表达载体,也可以是真核表达载体,如在细菌中表达的基于T7的表达载体(Rosenberg,et al.Gene,1987,56:125),在哺乳动物细胞中高表达的真核表达载体pcDNATM3.1/myc-hisB(-)(Invitrogen),pcDNA3.1/V5-His-TOPO(Invitrogen,以下缩写为pcDT)。本发明优选pcDT,它可以直接与PCR产物连接来构建真核表达载体,大大提高了规模化生产的效率。只要能在宿主体内复制和稳定,任何质粒和载体都可以应用。表达载体的一个重要特征是通常含有复制起点、启动子、标记基因和翻译控制元件。用本领域的技术人员熟知的方法来构建含有本发明所述多核苷酸序列和转录/翻译控制信号的表达载体即可。这些方法包括体外重组DNA技术、DNA合成技术、体内重组DNA技术等(Sambrook,et al.Molecular Cloning,a Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory.New York,1989)。
本发明的多核苷酸序列可有效地连接到表达载体中的适当的启动子上来指导mRNA合成。这些启动子的代表性例子有:大肠杆菌的lac或trp启动子;λ噬菌体的PL启动子;真核启动子包括CMV立即早期启动子、HSV胸苷激酶启动子、早期和晚期SV40启动子、反转录病毒的LTRs和其他一些已知的可控制基因在原核或真核细胞或其病毒中表达的启动子。表达载体还包括翻译起始用的核糖体结合位点和转录终止子。表达载体优选的包含一个或多个选择性标记基因,以提供用于选择转化的宿主细胞的表型性状,如用于大肠杆菌的四环素或氨苄青霉素抗性、或真核细胞培养用的绿色荧光蛋白(GFP)、新霉素抗性及二氢叶酸还原酶。
本发明还涉及用上述载体或者本发明的多核苷酸经基因工程产生的宿主细胞。本发明的载体和多核苷酸可以用于转化适当的宿主细胞,以使其能够表达具有诱导人体细胞凋亡功能的蛋白质。宿主细胞可以是原核细胞,如细菌细胞;或是低等真核细胞,如酵母细胞;或是高等真核细胞,如哺乳动物细胞。代表性例子有:大肠杆菌;植物细胞;果蝇S2或Sf9的昆虫细胞;CHO、COS或Bowes黑素瘤细胞的动物细胞;293T、Hela细胞等。
本发明的多核苷酸在高等真核细胞中表达时,如果在载体中插入增强子序列时将会使转录增强。增强子是DNA的顺式作用因子,通常有10-300个碱基对,作用于启动子以增强基因的转录。例子有:在复制起始点下游的100-270个碱基对的SV40增强子、在复制起始点下游的多瘤增强子以及腺病毒增强子等。
本领域的普通技术人员都知道如何选择适当的载体、启动子、增强子和宿主细胞。
用重组DNA转化宿主细胞可用本领域技术人员熟知的常规技术进行。当宿主细胞为原核细胞如大肠杆菌时,能吸收DNA的感受态细胞可在指数生长期后收集,用CaCl2法处理,所用步骤是本领域众所周知的。可供选择的是MgCl2处理,也可用电穿孔的方法处理。当宿主是真核细胞时,可选择以下转染方法:磷酸钙共沉淀法、常规机械方法如显微注射、电穿孔、脂质体包装等。获得的转化子可以用常规方法培养,来表达本发明的多核苷酸所编码的多肽。根据所选的宿主细胞选择合适的常规培养基,在适于宿主细胞生长的条件下培养。当宿主细胞生长到适当的细胞密度后,用适当的方法如温度转化或化学诱导,来诱导选择的启动子,将细胞再培养一段时间。
上述方法中的重组多肽可包被于细胞内、细胞外或在细胞膜上表达或分泌到细胞外。如果需要,可利用其物理的、化学的和其他特性通过各种分离方法分离和纯化重组多肽。这些方法是本领域技术人员所熟知的,如常规的复性处理,用蛋白沉淀剂处理(盐析方法)、离心、渗透破菌、超声波处理、超离心、分子筛层析(凝胶过滤)、吸附层析、离子交换层析、高效液相层析和其它各种液相层析技术或这些方法的结合。
本发明还涉及与本发明多核苷酸的任何一部分同源的核酸片段。如本文所用,“核酸片段”的长度至少含有15个核苷酸,较好的是至少30个核苷酸,更好的是至少50个核苷酸,最好的是至少100个核苷酸。此核酸片段通常是在本发明的核苷酸序列信息的基础上化学合成的DNA序列。上述核酸片段可以用于PCR扩增技术(如作为引物)以确定和/或分离编码具有诱导人体细胞凋亡功能的多核苷酸;也可以作为杂交所用的探针。也可以用于RNA干扰技术。本发明的多核苷酸的一部分或全部也可作为探针固定在微阵列(Microarray)或DNA芯片上,用于分析组织中基因的差异表达和基因诊断。探针的标记可用放射性同位素,荧光素或酶(如碱性磷酸酶)等。
本发明的多肽可以直接作为药物治疗疾病,如艾滋病、神经系统的退行性病变等自身免疫疾病和肿瘤等;还可用于筛选促进或对抗具有诱导细胞凋亡的功能的蛋白的抗体、多肽或其它配体,例如,筛选可用于促进或抑制本发明的蛋白的功能的抗体。用表达的重组的本发明的蛋白来筛选多肽库,用于寻找有治疗价值的能够促进或抑制本发明的蛋白的功能的多肽分子。
本发明的多肽可以单独使用或者与合适的药物载体组合后使用。组合物包含安全有效量的多肽或拮抗剂及不影响药物效果的载体和赋型剂。这些载体可以是水、葡萄糖、乙醇、盐类、缓冲液、甘油及它们的组合。药物组合物可以以方便的方式给药,如通过局部、静脉内、腹膜内、肌内、皮下、鼻内或皮内的给药途径。给药于患者的用量取决于许多因素,如给药方式、待治疗者的健康条件和诊断医生的判断。
本发明的多肽也可以通过在活体表达这些多肽来使用。例如患者的细胞可以通过在体外用编码本发明多肽的基因进行基因工程操作,然后将工程细胞提供给患者,使工程细胞在体内高表达这种多肽,从而达到治疗的目的。
具有诱导细胞凋亡功能的人蛋白的多核苷酸也可用于多种治疗目的。可用在基因治疗技术中来治疗由于具有诱导细胞凋亡的功能的人蛋白表达异常或活性异常导致的疾病。重组的基因治疗载体(如病毒载体)可设计成表达变异的具有诱导细胞凋亡功能的人蛋白,来抑制内源性的具有诱导细胞凋亡功能的人蛋白的活性。重组的具有诱导细胞凋亡功能的人蛋白基因也可包装到脂质体中转移至细胞内。
抑制本发明多肽mRNA的寡聚核苷酸(包括反义RNA和DNA)以及核酸也在本发明的范围之内。反义RNA和DNA以及核酸可用本领域已有的方法合成。为了增加核酸分子的稳定性,可用多种方法对其进行修饰,如增加两侧的序列长度,核糖核苷间的连接用磷酸硫酯键或肽键。
本发明的多肽及其片段、衍生物、类似物或表达它们的细胞可以作为抗原来生产抗体。这些抗体包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、Fab片段和Fab表达文库产生的抗体。本发明的多肽的抗体可用本领域公知的抗体制备方法来生产。例子有:单克隆抗体可用杂交瘤技术生产(Kohler and Milstein.Nature,1975,256:495-497)。多克隆抗体的生产可用本发明的多肽免疫动物,如家兔、小鼠、大鼠等。多种佐剂可用于增强免疫反应,包括但不限于弗氏佐剂。将人恒定区和非人源的可变区结合的嵌合抗体可用已有的技术产生(Morrison etal.PNAS,1985,81:6851)。单链抗体也可用已有的技术生产(U.S.Pat No.4946778)。
本发明的抗体可用于免疫组织化学技术中,检测活体标本中的具有诱导细胞凋亡功能的蛋白。还可以在临床上用于与具有诱导细胞凋亡功能的人蛋白相关的疾病的临床诊断、治疗、疗效评价等。例如用放射性同位素标记与本发明的多肽结合的单克隆抗体,然后注入体内跟踪其位置和分布,可以作为一种非创伤性诊断方法来定位肿瘤细胞,或判断肿瘤细胞是否转移。本发明中的抗体还可以用于治疗或预防与具有诱导细胞凋亡功能的人蛋白相关的疾病。给予适当剂量的抗体可以刺激或阻断具有诱导细胞凋亡功能的人蛋白的产生或活性。
本发明还涉及定量和定位检测具有诱导细胞凋亡功能的蛋白水平的诊断试验方法。这些试验是本领域所熟知的,且包括FISH测定和放射免疫测定。实验中检测的具有诱导细胞凋亡功能的蛋白水平,可以用作解释具有诱导细胞凋亡功能的蛋白在各种疾病中的重要性和用于诊断具有诱导细胞凋亡功能的蛋白起作用的疾病。
具有诱导细胞凋亡功能的蛋白的多核苷酸可用于具有诱导细胞凋亡功能的蛋白相关疾病的诊断和治疗。在诊断方面,具有诱导细胞凋亡功能的蛋白的多核苷酸可用于检测具有诱导细胞凋亡功能的蛋白的表达与否,或在疾病状态下具有诱导细胞凋亡功能的蛋白的异常表达。如具有诱导细胞凋亡功能的蛋白的DNA序列可用于对活检标本的杂交以判断具有诱导细胞凋亡功能的蛋白的表达异常。杂交技术是本领域已公开的成熟技术,包括Southern印迹法、Northern印迹法、原位杂交等,相关的试剂盒可以从商业途径获得。本发明的多核苷酸的一部分或全部可作为探针固定在微阵列(Microarray)或DNA芯片上,用于分析组织中基因的差异表达和基因诊断。用具有诱导细胞凋亡功能的蛋白特异的引物进行RNA-聚合酶链式反应(RT-PCR)体外扩增也可以检测具有诱导细胞凋亡功能的蛋白的转录产物。
检测具有诱导细胞凋亡功能的蛋白基因的突变也可用于诊断具有诱导细胞凋亡功能的蛋白相关的疾病。具有诱导细胞凋亡功能的蛋白基因的突变形式包括与正常野生型的具有诱导细胞凋亡功能的蛋白的DNA序列相比的点突变、易位、缺失、重组和其它任何异常等。可用本领域已有的技术如Southern印迹法、DNA序列分析、PCR和原位杂交检测突变。另外,突变有可能影响蛋白的表达,因此用Northern印迹法、Westen印迹法可间接判断基因有无突变。
基因NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13在实验中所有用到的正常组织、胎儿组织、肿瘤组织中都有表达,说明其为人体自身重要的凋亡相关基因;在不同的组织中表达量高低有差别,说明其在不同的组织中发挥功能的程度不同。
以下对本发明的实施方案进一步详细说明。
本发明通过对NCBI的refseq数据库进行人功能未知预测基因检索,获得人未知功能基因序列,进一步利用Human_est数据库通过BLASTn方法进行序列校正,根据校正后得到的序列设计基因特异引物,从混合人组织cDNA文库中通过两步法通量化RT-PCR技术扩增得到目的基因的编码区cDNA片段。此编码区cDNA片段与pcDT重组构建真核表达载体。采用pRL家族海肾荧光素酶报告基因法检测本发明中的基因诱导细胞凋亡的功能。pRL载体组成性地表达海肾荧光素酶,在其它转染条件相同的情况下,海肾荧光素酶活性的强弱可以反映出待检基因对于细胞状态的影响,如细胞数目、细胞存活率等。将与pcDT空质粒相比海肾荧光素酶活性明显降低的基因挑选出来。将这些基因单独转染细胞后,利用LIVE/DEADViability/Cytotoxicity Kit(L-3224)染料对细胞进行染色,进一步观察并验证细胞存活状态。该试剂盒中的试验证明,Calcein-AM是一种胞浆荧光标记物,本身无荧光,渗入细胞后细胞内酯酶催化生成的水溶性绿色荧光物质不易透出细胞,用于活细胞染色。EthD-1不能进入活细胞但能进入膜已破损的死细胞,并结合于DNA上,产生一种红色荧光,用于死细胞染色。通过荧光显微镜观察红绿荧光的比例即可反映出细胞的存活状况。进而通过流式细胞实验检测所选基因对细胞的影响,均获得阳性结果,均程度不同的对所转染细胞有诱导凋亡的效果。实验表明本发明的多肽具有显著、稳定的诱导细胞凋亡作用。
由于采用了以上技术方案,本发明具有如下优点:
1、提供了规模化克隆和筛选新基因的技术平台。
2、提供了人类新功能基因NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13的cDNA序列及其编码多肽;
3、首次发现人类新功能基因NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13具有诱导细胞凋亡的作用,并且高效、稳定;
4、NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13在机体多数正常细胞表达,说明其为自身重要的细胞凋亡相关调控分子。
5、基于上述的4个优点,本发明为进一步研究凋亡机制,以及开发治疗如艾滋病、神经系统的退行性病变等自身免疫疾病和肿瘤等的新药物,为开创新的临床诊断、疗效评价及预后指标奠定必要的基础。
附图说明
图1、真核表达载体pcDT-NIAGx的构建示意图
(NIAGx选自NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13)
图2、pRL家族海肾荧光素酶基因报告质粒结构图
图3、NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13外源表达对pRL荧光素酶表达的影响
图4、NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13外源表达对细胞存活的影响(明场:10×)
图5、NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13外源表达对细胞存活的影响(Calcein AM及EthD-1染色:10×)
图6、NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13外源表达诱导细胞凋亡(流式细胞计数实验)
具体实施方式
下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件,如《分子克隆实验指南》(2002年第三版[美]萨姆布鲁克等箸,科学出版社)中所述的条件,或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1、两步法通量化RT-PCR技术扩增目的基因
(1)对NCBI的refseq数据库进行人功能未知预测基因检索,获得人未知功能基因序列,并利用Human_est数据库通过BLASTn方法进行序列校正,最终得到的序列设定为下组序列:SEQID NO.1、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ IDNO:25。根据此类序列设计基因NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13的特异引物:
  基因名称   上游引物(5′-3′)   下游引物(5′-3′)
  NIAG1NIAG2NIAG3NIAG4NIAG5NIAG6NIAG7NIAG8NIAG9NIAG10NIAG11NIAG12NIAG13   gtcgacgctgcttcgttgtgtcgtgaggctgaggtgcagcctcggttaaacactggtcgttctgtgtccgtcgccatgacagacttcatcgtcatgcagagcgtcggaggtcgctgctatgatccgcctcggttaaacactggtcgttctgtcccatgaggctgccccattgatgcacccattccagtgatgccaggtcgttggaggtgggtggccgaagcagaagacgcaaccatcaatcccgtctccctgagggaacgctaagtagtgtgtc   gcctcctggagtgtggtggtcgtgaaacgtggttagtctcgtaaaatgttctgtcactcttactaggattcgcctggttgagtggcaggtgaggccgtcactccgtgtgcgcgccttactggatcacacacagtttcttctgtcactcttactaggattcgcctccctaatagtagcgattcaggctctctccaggtctcggtgtagcggaggagggagctacaactcgggcagactctcaagatattcacaaccttgggaccaagtagtgccatttacgaagtctacatggtgttaattgctgg
(2)用上述引物,按目的基因的表达谱在现有的cDNA文库和肿瘤文库中选择模板,进行初扩。现有的文库包括12种人体正常组织(心、胰、睾丸、卵巢、前列腺、结肠、小肠、骨骼肌、胸腺、淋巴结、扁桃体、白细胞);6种人肿瘤组织(肺癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌、结肠癌、乳腺癌);和8种胎儿组积(胎肺、胎心、胎肝、胎脾、胎肾、胎脑、胎骨骼肌、胎胸腺)的cDNA文库(Clonetch,K1420-1,1241-1)。初扩反应条件如下:
50μl PCR反应:
 cDNA混合库5’,3’引物10×Pyrobest buffer2.5mM dNTPsPyrobest双蒸水  各1.0μl终浓度为2pmol/μl5μl4μl1μl补足至50μl
PCR延伸时间根据所扩目的基因的最长片段,按50sec/Kb的原则进行扩增:
94℃5分钟; 94℃30秒,64℃30秒,72℃50sec/Kb;72℃10分钟;4℃∞
                          28个循环
初扩产物纯化到30μl,以去除PCR反应体系中大量的引物及dNTPs等,并浓缩整个体系,得到对应目的基因序列的二级扩增库,作为二扩(大扩)的模板。
(3)将(2)中的纯化产物作为模板,分别对每个目的基因进行二扩,反应条件如下:50μl PCR(每个基因)反应:
  一扩纯化产物5’,3’引物10×Ex-Taq buffer2.5mM dNTPEx-Taq双蒸水   1.6μl终浓度为2pmol/μl5μl4μl0.5μl补足至50μl
PCR延伸时间根据所扩目的基因的最长片段,按50sec/Kb的原则进行扩增:
94℃5分钟; 94℃30秒,64℃30秒,72℃50sec/Kb;72℃10分钟;4℃∞
                            30个循环
得到的PCR产物取10μl上样电泳,挑选有扩增条带的PCR产物,进行等体积纯化(40μl)。通过两步PCR反应扩增出非单一条带的基因用Qiagen胶回收试剂盒切胶回收目的片段。扩增的结果表明,这些组织的细胞中都存在基因NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13的cDNA,说明NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13在这些组织的细胞中都产生了基因NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13的转录产物,有较广的表达图谱,在多种组织中参与转录因子的调节。
实施例2、目的基因真核表达载体的构建
将二扩纯化产物和真核表达载体pcDNA3.1/V5-His-TOPO(Invitrogen,缩写为pcDT),按照试剂盒制造厂商建议的条件进行连接反应。连接产物电击法转化大肠杆菌DH5α,转化物在含氨苄青霉素的固体LB平板培养基上生长,挑选生长的单一克隆菌落,提取质粒,用EcoRI酶切,酶切产物用琼脂糖凝胶电泳鉴定,挑选有插入片段的阳性克隆,通过测序(ABI PRISM 3700 DNA分析仪)选出正确的正向插入克隆,各自命名为NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13。
同时收集培养液,用SDS-PAGE分析沉淀蛋白,获得NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13多肽。
NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13蛋白分析结果显示:NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13蛋白序列如下组序列:SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:26所示。
实施例3、海肾荧光素酶报告基因法测定目的基因诱导细胞凋亡的作用
用目的基因和pRL家族海肾荧光素酶报告基因载体共转染人胚胎肾293T细胞,通过检测海肾荧光素酶的活性来测定目的基因对于细胞状态的影响,如细胞数目、细胞存活率等。将与pcDT空质粒相比海肾荧光素酶活性明显降低的基因筛选出来。具体操作步骤如下:
(1)细胞培养:将1.2×104个293T细胞(ATCC Number:CRL-11268)用含10%胎牛血清的DMEM(Dulbecco’s modified Eagle’s medium)培养基(Hyclone,SH0022.02)铺在96孔细胞培养板(Costar,3599)上(100μl培养液/孔),在5%CO2,37℃的细胞培养箱(SANYO,MCO-15AC)中培养24小时。
(2)制备转染工作液:用2.5μl生理盐水稀释20ng pRL家族海肾荧光素酶报告基因载体和80ng待检基因,轻轻混匀,室温放置;同样用2.5μl生理盐水稀释0.04μl VigoFect转染试剂(威格拉斯生物技术(北京)有限公司),轻轻混匀,室温放置5分钟;将稀释的VigoFect转染试剂逐滴加入稀释的待检基因与报告基因混合液中,轻轻混匀,是为转染工作液,室温放置15分钟。
(3)转染:将转染工作液轻轻混匀,逐滴加入至(1)中铺好细胞的96孔细胞培养板中,置于37℃,5%CO2的细胞培养箱中培养24小时。
(4)检测:转染24小时后,将96孔板的细胞以800转/分钟(Eppendorf Centrifuge,5810R)离心5分钟,弃上清。每孔加入40μl细胞裂解液,混匀后将96孔板置于-80℃冰箱1小时以上。将96孔板从-80℃解冻后恢复至室温,每孔吸取10μl细胞裂解液移至白色酶标板,用微孔板酶标仪(Genios Pro,Tecan)检测海肾荧光素酶活性。海肾荧光素酶底物用量为每孔25μl。
pRL载体是将海肾荧光素酶基因与基础性表达的启动子偶联,提供组成性表达的海肾荧光素酶。实验过程中条件的改变会影响海肾荧光素酶的表达,这些因素包括细胞存活状况(细胞数目、细胞健康状况等)、转染效率、细胞裂解效率及检测效率等。在实验系统误差的前提下,同一块96孔板的转染及检测效率基本近似,因此,海肾荧光素酶活性的明显降低可以反映出细胞存活状况的改变,我们以pcDT质粒作为对照,将与pRL质粒共转染后引起海肾荧光素酶活性明显降低的基因筛选出来。
结果如图3所示:基因NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13与pcDT比较,明显降低了海肾荧光素酶活性。表明基因NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13可改变转染细胞的存活状况。
实施例4、利用染料观察细胞存活状况
用实施例3中筛选出的基因单独转染293T细胞后,利用LIVE/DEADViability/Cytotoxicity Kit (Molecular Probe,L-3224)对细胞进行染色,按产品说明书所述进行操作,于倒置荧光显微镜(Zeiss,Axiovert 200M)下观察细胞存活状况(包括明场及荧光激发状态)。具体操作步骤如下:
本实验用96孔细胞培养板(Costar,3599)操作,每个待检基因设置3个平行重复孔,分别以pcDT空质粒和Bax质粒做为空载体和阳性对照。下述步骤中的用量均为单孔用量。
(1)细胞培养:将1.2×104个293T细胞用含10%胎牛血清的DMEM培养基铺在96孔细胞培养板上(100μl培养液/孔),置37℃,5%CO2的细胞培养箱中培养24小时。
(2)制备转染工作液:用2.5μl生理盐水稀释160ng待检基因,轻轻混匀,室温放置;同样用2.5μl生理盐水稀释0.04μl VigoFect转染试剂,轻轻混匀,室温放置5分钟;将稀释的VigoFect转染试剂逐滴加入至稀释的待检基因溶液中,轻轻混匀,是为转染工作液,室温放置15分钟。
(3)转染:将转染工作液轻轻混匀,逐滴加入至(1)中铺好细胞的96孔细胞培养板中,轻轻混匀,置37℃,5%CO2细胞培养箱中培养24-48小时。
(4)镜检:转染24-48小时后,用Zeiss显微镜观察细胞形态改变。待检质粒分别与pcDT和Bax比较。结果如图4所示,转染NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13基因30小时后,所转染的细胞基础状态较差,体积缩小,连接消失,核质浓缩色暗,且偏于一侧。
(5)染色:用5ml PBS稀释10μl 2mM EthD-1(死细胞易染)储存液至浓度为4μm,充分混匀;用5ml PBS溶液稀释2.5μl 4mM Calcein AM(活细胞染料)储存液,充分混匀;两种染料终浓度分别为1μM Calcein AM和2μM EthD-1。弃去转染细胞的培养液,用温育的PBS(37℃)洗涤两遍。加入50μl稀释好的染料,置37℃,CO2培养箱中孵育30分钟至1小时。
(6)镜检:弃去染料,用PBS洗涤一遍,加入100μl PBS,用Zeiss倒置荧光显微镜观察。Calcein AM激发光波长为485±10nm,发射光为530±12.5nm;EthD-1激发光波长为530±12.5nm,发射光为645±20nm。
结果如图5所示,基因NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13与空载体比较,相同视野中所转染细胞的存活状态明显不佳,红染细胞(EthD-1染色细胞,发红色荧光)较多,而绿染细胞(Calcein AM染色细胞,发绿色荧光)较少,与阳性对照Bax效果接近,说明NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13可明显改变细胞存活状态,并在不同程度上诱导所转染细胞坏死或凋亡。
实施例5、流式细胞实验
用实施例3中筛选出的基因单独转染293T细胞后,利用流式细胞仪检测待检质粒的诱导细胞调亡的功能。具体操作步骤如下:
(1)细胞培养:将293T细胞(1×105)用含10%胎牛血清的DMEM培养基铺在24孔细胞培养板(Costar,3599)上,置37℃,5%CO2的细胞培养箱中培养16小时。
(2)制备转染工作液:用8μl生理盐水稀释500ng待检质粒,轻轻混匀,室温放置:同样用8μl生理盐水稀释0.16μl VigoFect转染试剂,轻轻混匀,室温放置5分钟;将稀释的VigoFect转染试剂逐滴加入至稀释的待检质粒溶液中,轻轻混匀,室温放置15分钟。
(3)转染:将转染工作液轻轻混匀,逐滴加入至细胞培养板(500μl培养液/孔)中,轻轻混匀,置37℃,5%CO2培养箱中培养24-48小时。
(4)制备单细胞悬液,流式细胞仪检测
转染后24和48小时收获细胞。吸出培养基,加入100μl胰酶(Hyclone,SH30042.01),37℃消化3分钟,再加入200μl含10%胎牛血清的DMEM培养基中和胰酶,吹吸数次使形成单细胞,移入流式管(FALCON,352052),1500转每分钟(Eppendorf Centrifuge,5810R)室温离心5分钟,弃去上清。加入3ml PBS重悬细胞,1500转每分钟室温离心5分钟,弃去上清。重复上述洗细胞一次,并重悬于200μl Binding buffer(10mM Hepes,140mM NaCl,1mM MgCl2,5mM KCl,2.5mM CaCl2),加入终浓度为1μg/ml FITC-Annexin-V(北京宝赛生物技术有限公司,CX1001-2),室温避光反应30分钟,再加入终浓度为1μg/ml PI(北京宝赛生物技术有限公司,CX1001-2)。检测使用流式细胞仪(FACSCalibur,BD,USA)。FITC标记的Annexin-V发绿色荧光,可以特异性结合于凋亡细胞特有的外翻于细胞膜外的磷脂酰丝氨酸,PI可以穿透死亡细胞的细胞膜,进而将细胞核染成红色。Annexin-V与PI双阴性的细胞即为活细胞,其余为死亡细胞。
结果如图6所示,不管是转染24小时还是48小时,NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13与空载体比较均有阳性结果,与阳性对照Bax作用相似,只是各个基因作用程度不一,而48小时诱导细胞凋亡的效果比24小时更为显著。说明NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13可以不同程度上诱导细胞调亡。
实施例6、抗体制备
抗原选用原核细胞或真核细胞表达的NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13蛋白全长或部分肽段,也可以合成多肽作为抗原。
多克隆抗体的制备:免疫动物选用成年雄性新西兰兔或BALb/c小鼠,初次免疫用200ug(新西兰兔)或20ug(BALb/c小鼠)抗原与等体积弗氏完全佐剂(FCA)充分乳化后,于背部皮下多点注射。初次免疫后21、42、63天,用弗氏不完全佐剂(FIA)完全乳化的抗原蛋白,各加强免疫1次,用量同前。每次免疫后7~10天,ELISA方法检测血清效价,达到1×10-4时,放血分离血清.Western blot鉴定抗体特异性。
单克隆抗体制备:免疫BALb/c小鼠同前,取脾脏制成B细胞悬液,与对数生长期的骨髓瘤细胞SP2/0融合,通过HAT(H:次黄嘌呤;A:氨基喋呤;T:胸腺嘧啶核苷)选择性培养,获得杂交细胞系,再通过ELISA方法检测抗体效价,筛选出特定的杂交瘤细胞系,并得到单克隆抗体。
序列表
<110>北京诺赛基因组研究中心有限公司
<120>诱导细胞凋亡的多核苷酸及其编码多肽和用途
<130>
<160>26
<170>PatentIn version 3.3
<210>1
<211>1515
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(217)..(804)
<400>1
cggaggagag cgcaggagga aacagtaccg gctggaggcc ggtcttgcag gagcggggga     60
ctgctggggg cggggcttgg tggtgactgc tggcggggcg gggcctgggg ctcagagggg     120
tgggctttgg agatcagagg gtcgacgctg cttcgttgcc tggactctgg tttccgccct     180
ggagcaagcc ggggcctggt cggcagctgg gccgcc atg gag tcc acg ctg ggc       234
                                        Met Glu Ser Thr Leu Gly
                                         1               5
gcg ggc atc gtg ata gcc gag gcg cta cag aac cag cta gcc tgg ctg       282
Ala Gly Ile Val Ile Ala Glu Ala Leu Gln Asn Gln Leu Ala Trp Leu
            10                  15                  20
gag aac gtg tgg ctc tgg atc acc ttt ctg ggc gat ccc aag atc ctc       330
Glu Asn Val Trp Leu Trp Ile Thr Phe Leu Gly Asp Pro Lys Ile Leu
        25                   30                 35
ttt ctg ttc tac ttc ccc gcg gcc tac tac gcc tcc cgc cgt gtg ggc       378
Phe Leu Phe Tyr Phe Pro Ala Ala Tyr Tyr Ala Ser Arg Arg Val Gly
    40                  45                  50
atc gcg gtg ctc tgg atc agc ctc atc acc gag tgg ctc aac ctc atc       426
Ile Ala Val Leu Trp Ile Ser Leu Ile Thr Glu Trp Leu Asn Leu Ile
55                  60                  65                  70
ttc aag tgg ttt ctt ttt gga gac agg ccc ttt tgg tgg gtc cat gag       474
Phe Lys Trp Phe Leu Phe Gly Asp Arg Pro Phe Trp Trp Val His Glu
                75                  80                  85
tct ggt tac tac agc cag gct cca gcc cag gtt cac cag ttc ccc tct      522
Ser Gly Tyr Tyr Ser Gln Ala Pro Ala Gln Val His Gln Phe Pro Ser
            90                  95                  100
tct tgt gag act ggt cca ggc agc cct tct gga cac tgc atg atc aca      570
Ser Cys Glu Thr Gly Pro Gly Ser Pro Ser Gly His Cys Met Ile Thr
        105                 110                 115
gga gca gcc ctc tgg ccc ata atg acg gcc ctg tct tcg cag gtg gcc      618
Gly Ala Ala Leu Trp Pro Ile Met Thr Ala Leu Ser Ser Gln Val Ala
    120                 125                 130
act cgg gcc cgc agg cgc tgt cct ggg ctg gct gat gac tcc ccg agt      666
Thr Arg Ala Arg Arg Arg Cys Pro Gly Leu Ala Asp Asp Ser Pro Ser
135                 140                 145                 150
gcc tat gga gcg gga gct aag ctt cta tgg gtt gac tgc act ggc cct      714
Ala Tyr Gly Ala Gly Ala Lys Leu Leu Trp Val Asp Cys Thr Gly Pro
                155                 160                 165
cat gct agg cac cag cct cat cta ttg gac cct ctt tac act ggg cct      762
His Ala Arg His Gln Pro His Leu Leu Asp Pro Leu Tyr Thr Gly Pro
            170                 175                 180
gga tct ttc ttg gtc cat cag cct agc ctt caa gtg gtg tga              804
Gly Ser Phe Leu Val His Gln Pro Ser Leu Gln Val Val
        185                 190                 195
gcggcctgag tggatacacg tggatagccg gccctttgcc tccctgagcc gtgactcagg    864
ggctgccctg ggcctgggca ttgccttgca ctctccctgc tatgcccagg tgcgtcgggc    924
acagctggga aatggccaga agatagcctg ccttgtgctg gccatggggc tgctgggccc    984
cctggactgg ctgggccacc cccctcagat cagcctcttc tacattttca atttcctcaa    1044
gtacaccctc tggccatgcc tagtcctggc cctcgtgccc tgggcagtgc acatgttcag    1104
tgcccaggaa gcaccgccca tccactcttc ctgacttctt gtgtgcctcc ctttcctttc    1164
cctcccacaa agccaacact ctgtgaccac cacactccag gaggcagccc catccccttc    1224
cagcccctaa gtaggccctc ccctccctaa atctgcttcc gcaccacctg gtcttagccc    1284
caaagatggg ccttctctct cccagataag ttggtcctcc ctctgccttt cctctcaagc    1344
ccccaaagag caaaggcaac agcaagacca gcgggttctt gcaacactgt gaggggcagc    1404
cagggcggcc ccaataaagc ccttgaatac tttgaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa    1464
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa a    1515
<210>2
<211>195
<212>PRT
<213>人
<400>2
Met Glu Ser Thr Leu Gly Ala Gly Ile Val Ile Ala Glu Ala Leu Gln
1               5                   10                  15
Asn Gln Leu Ala Trp Leu Glu Asn Val Trp Leu Trp Ile Thr Phe Leu
            20                  25                  30
Gly Asp Pro Lys Ile Leu Phe Leu Phe Tyr Phe Pro Ala Ala Tyr Tyr
        35                  40                  45
Ala Ser Arg Arg Val Gly Ile Ala Val Leu Trp Ile Ser Leu Ile Thr
    50                  55                  60
Glu Trp Leu Asn Leu Ile Phe Lys Trp Phe Leu Phe Gly Asp Arg Pro
65                  70                  75                  80
Phe Trp Trp Val His Glu Ser Gly Tyr Tyr Ser Gln Ala Pro Ala Gln
                85                  90                  95
Val His Gln Phe Pro Ser Ser Cys Glu Thr Gly Pro Gly Ser Pro Ser
            100                 105                 110
Gly His Cys Met Ile Thr Gly Ala Ala Leu Trp Pro Ile Met Thr Ala
        115                 120                 125
Leu Ser Ser Gln Val Ala Thr Arg Ala Arg Arg Arg Cys Pro Gly Leu
    130                 135                 140
Ala Asp Asp Ser Pro Ser Ala Tyr Gly Ala Gly Ala Lys Leu Leu Trp
145                 150                 155                 160
Val Asp Cys Thr Gly Pro His Ala Arg His Gln Pro His Leu Leu Asp
                165                 170                 175
Pro Leu Tyr Thr Gly Pro Gly Ser Phe Leu Val His Gln Pro Ser Leu
            180                 185                 190
Gln Val Val
        195
<210>3
<211>2251
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(186)..(1598)
<400>3
gacgtcacgg tcactgacag cgtgagcccg cggcggctgc tgccatggtg gctggcggcc     60
gggtaagggt ctgagtggat ctcctgccag gccagagcgc cttcgggggc cgcggcggaa     120
ggccaggagt ttgcagccag ggcgccgggt ttgtggtctg cagtgtcgtg aggctgaggt     180
gcagc atg tct aga ctg gga gcc ctg ggt ggt gcc cgt gcc ggg ctg gga     230
      Met Ser Arg Leu Gly Ala Leu Gly Gly Ala Arg Ala Gly Leu Gly
      1               5                   10                  15
ctg ttg ctg ggt acc gcc gcc ggc ctt gga ttc ctg tgc ctc ctt tac       278
Leu Leu Leu Gly Thr Ala Ala Gly Leu Gly Phe Leu Cys Leu Leu Tyr
                20                  25                  30
agc cag cga tgg aaa cgg acc cag cgt cat ggc cgc agc cag agc ctg       326
Ser Gln Arg Trp Lys Arg Thr Gln Arg His Gly Arg Ser Gln Ser Leu
            35                  40                  45
ccc aac tcc ctg gac tat acg cag act tca gat ccc gga cgc cac gtg       374
Pro Asn Ser Leu Asp Tyr Thr Gln Thr Ser Asp Pro Gly Arg His Val
        50                  55                  60
atg ctc ctg cgg gct gtc cca ggt ggg gct gga gat gcc tca gtg ctg       422
Met Leu Leu Arg Ala Val Pro Gly Gly Ala Gly Asp Ala Ser Val Leu
    65                  70                  75
ccc agc ctt cca cgg gaa gga cag gag aag gtg ctg gac cgc ctg gac       470
Pro Ser Leu Pro Arg Glu Gly Gln Glu Lys Val Leu Asp Arg Leu Asp
80                  85                  90                  95
ttt gtg ctg acc agc ctt gtg gcg ctg cgg cgg gag gtg gag gag ctg      518
Phe Val Leu Thr Ser Leu Val Ala Leu Arg Arg Glu Val Glu Glu Leu
                100                 105                 110
aga agc agc ctg cga ggg ctt gcg ggg gag att gtt ggg gag gtc cga      566
Arg Ser Ser Leu Arg Gly Leu Ala Gly Glu Ile Val Gly Glu Val Arg
            115                 120                  125
tgc cac atg gaa gag aac cag aga gtg gct cgg cgg cga agg ttt ccg      614
Cys His Met Glu Glu Asn Gln Arg Val Ala Arg Arg Arg Arg Phe Pro
        130                 135                 140
ttt gtc cgg gag agg agt gac tcc act ggc tcc agc tct gtc tac ttc      662
Phe Val Arg Glu Arg Ser Asp Ser Thr Gly Ser Ser Ser Val Tyr Phe
    145                 150                 155
acg gcc tcc tcg gga gcc acg ttc aca gat gct gag agt gaa ggg ggt      710
Thr Ala Ser Ser Gly Ala Thr Phe Thr Asp Ala Glu Ser Glu Gly Gly
160                 165                 170                 175
tac aca aca gcc aat gcg gag tct gac aat gag cgg gac tct gac aaa      758
Tyr Thr Thr Ala Asn Ala Glu Ser Asp Asn Glu Arg Asp Ser Asp Lys
                180                 185                 190
gaa agt gag gac ggg gaa gat gaa gtg agc tgt gag act gtg aag atg      806
Glu Ser Glu Asp Gly Glu Asp Glu Val Ser Cys Glu Thr Val Lys Met
            195                 200                 205
ggg aga aag gat tct ctt gac ttg gag gaa gag gca gct tca ggt gcc      854
Gly Arg Lys Asp Ser Leu Asp Leu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Gly Ala
        210                 215                 220
tcc agt gcc ctg gag gct gga ggt tcc tca ggc ttg gag gat gtg ctg      902
Ser Ser Ala Leu Glu Ala Gly Gly Ser Ser Gly Leu Glu Asp Val Leu
    225                 230                 235
ccc ctc ctg cag cag gcc gac gag ctg cac agg ggt gat gag caa ggc      950
Pro Leu Leu Gln Gln Ala Asp Glu Leu His Arg Gly Asp Glu Gln Gly
240                 245                 250                 255
aag cgg gag ggc ttc cag ctg ctg ctc aac aac aag ctg gtg tat gga      998
Lys Arg Glu Gly Phe Gln Leu Leu Leu Asn Asn Lys Leu Val Tyr Gly
                260                 265                 270
agc cgg cag gac ttt ctc tgg cgc ctg gcc cga gcc tac agt gac atg      1046
Ser Arg Gln Asp Phe Leu Trp Arg Leu Ala Arg Ala Tyr Ser Asp Met
            275                 280                 285
tgt gag ctc act gag gag gtg agc gag aag aag tca tat gcc cta gat      1094
Cys Glu Leu Thr Glu Glu Val Ser Glu Lys Lys Ser Tyr Ala Leu Asp
        290                 295                 300
gga aaa gaa gaa gca gag gct gct ctg gag aag ggg gat gag agt gct     1142
Gly Lys Glu Glu Ala Glu Ala Ala Leu Glu Lys Gly Asp Glu Ser Ala
    305                 310                 315
gac tgt cac ctg tgg tat gcg gtg ctt tgt ggt cag ctg gct gag cat     1190
Asp Cys His Leu Trp Tyr Ala Val Leu Cys Gly Gln Leu Ala Glu His
320                 325                 330                 335
gag agc atc cag agg cgc atc cag agt ggc ttt agc ttc aag gag cat     1238
Glu Ser Ile Gln Arg Arg Ile Gln Ser Gly Phe Ser Phe Lys Glu His
                340                 345                 350
gtg gac aaa gcc att gct ctc cag cca gaa aac ccc atg gct cac ttt     1286
Val Asp Lys Ala Ile Ala Leu Gln Pro Glu Asn Pro Met Ala His Phe
            355                 360                 365
ctt ctt ggc agg tgg tgc tat cag gtc tct cac ctg agc tgg cta gaa     1334
Leu Leu Gly Arg Trp Cys Tyr Gln Val Ser His Leu Ser Trp Leu Glu
        370                 375                 380
aaa aaa act gct aca gcc ttg ctt gaa agc cct ctc agt gcc act gtg     1382
Lys Lys Thr Ala Thr Ala Leu Leu Glu Ser Pro Leu Ser Ala Thr Val
    385                 390                 395
gaa gat gcc ctc cag agc ttc cta aag gct gaa gaa cta cag cca gga     1430
Glu Asp Ala Leu Gln Ser Phe Leu Lys Ala Glu Glu Leu Gln Pro Gly
400                 405                 410                 415
ttt tcc aaa gca gga agg gta tat att tcc aag tgc tac aga gaa cta     1478
Phe Ser Lys Ala Gly Arg Val Tyr Ile Ser Lys Cys Tyr Arg Glu Leu
                420                 425                 430
ggg aaa aac tct gaa gct aga tgg tgg atg aag ttg gcc ctg gag ctg     1526
Gly Lys Asn Ser Glu Ala Arg Trp Trp Met Lys Leu Ala Leu Glu Leu
            435                 440                 445
cca gat gtc acg aag gag gat ttg gct atc cag aag gac ctg gaa gaa     1574
Pro Asp Val Thr Lys Glu Asp Leu Ala Ile Gln Lys Asp Leu Glu Glu
        450                 455                 460
ctg gaa gtc att tta cga gac taa ccacgtttca ctggccttca tgacttgatg    1628
Leu Glu Val Ile Leu Arg Asp
    465                 470
ccactattta aggtgggggg gcggggaggc ttttttcctt agaccttgct gagatcagga   1688
aaccacacaa atctgtctcc tgggtctgac tgctacccac taccactccc cattagttaa   1748
tttattctaa cctctaacct aatctagaat tggggcagta ctcatggctt ccgtttctgt   1808
tgttctctcc cttgagtaat ctcttaaaaa aatcaagatt cacacctgcc ccaggattac   1868
acatgggtag agcctgcaag acctgagacc ttccaattgc tggtgaggtg gatgaacttc   1928
aaagctatag gaacaaagca cataacttgt cactttaatc tttttcactg actaatagga   1988
ctcagtacat atagtcttaa gatcatacct tacctaccaa ggtaaaaaga gggatcagag   2048
tggcccacag acattgcttt cttatcacct atcatgtgaa ttctacctgt attccagggc   2108
tggaccactt gataacttcc agtgtcctgg cagcttttgg aatgacagca gtggtatggg   2168
gtttatgatg ctataaaaca atgtctgaaa agttgcctag aatatatttt gttacaaact   2228
tgaaataaac caaatttgat gtt                                           2251
<210>4
<211>470
<212>PRT
<213>人
<400>4
Met Ser Arg Leu Gly Ala Leu Gly Gly Ala Arg Ala Gly Leu Gly Leu
1               5                   10                  15
Leu Leu Gly Thr Ala Ala Gly Leu Gly Phe Leu Cys Leu Leu Tyr Ser
            20                  25                  30
Gln Arg Trp Lys Arg Thr Gln Arg His Gly Arg Ser Gln Ser Leu Pro
        35                  40                  45
Asn Ser Leu Asp Tyr Thr Gln Thr Ser Asp Pro Gly Arg His Val Met
    50                  55                  60
Leu Leu Arg Ala Val Pro Gly Gly Ala Gly Asp Ala Ser Val Leu Pro
65                  70                  75                  80
Ser Leu Pro Arg Glu Gly Gln Glu Lys Val Leu Asp Arg Leu Asp Phe
                85                  90                  95
Val Leu Thr Ser Leu Val Ala Leu Arg Arg Glu Val Glu Glu Leu Arg
            100                 105                 110
Ser Ser Leu Arg Gly Leu Ala Gly Glu Ile Val Gly Glu Val Arg Cys
        115                 120                 125
His Met Glu Glu Asn Gln Arg Val Ala Arg Arg Arg Arg Phe Pro Phe
    130                 135                 140
Val Arg Glu Arg Ser Asp Ser Thr Gly Ser Ser Ser Val Tyr Phe Thr
145                 150                  155                160
Ala Ser Ser Gly Ala Thr Phe Thr Asp Ala Glu Ser Glu Gly Gly Tyr
                165                 170                 175
Thr Thr Ala Asn Ala Glu Ser Asp Asn Glu Arg Asp Ser Asp Lys Glu
            180                 185                 190
Ser Glu Asp Gly Glu Asp Glu Val Ser Cys Glu Thr Val Lys Met Gly
        195                 200                 205
Arg Lys Asp Ser Leu Asp Leu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Gly Ala Ser
    210                 215                 220
Ser Ala Leu Glu Ala Gly Gly Ser Ser Gly Leu Glu Asp Val Leu Pro
225                 230                 235                 240
Leu Leu Gln Gln Ala Asp Glu Leu His Arg Gly Asp Glu Gln Gly Lys
                245                 250                 255
Arg Glu Gly Phe Gln Leu Leu Leu Asn Asn Lys Leu Val Tyr Gly Ser
            260                 265                 270
Arg Gln Asp Phe Leu Trp Arg Leu Ala Arg Ala Tyr Ser Asp Met Cys
        275                 280                 285
Glu Leu Thr Glu Glu Val Ser Glu Lys Lys Ser Tyr Ala Leu Asp Gly
    290                 295                 300
Lys Glu Glu Ala Glu Ala Ala Leu Glu Lys Gly Asp Glu Ser Ala Asp
305                 310                 315                 320
Cys His Leu Trp Tyr Ala Val Leu Cys Gly Gln Leu Ala Glu His Glu
                325                 330                 335
Ser Ile Gln Arg Arg Ile Gln Ser Gly Phe Ser Phe Lys Glu His Val
            340                 345                 350
Asp Lys Ala Ile Ala Leu Gln Pro Glu Asn Pro Met Ala His Phe Leu
        355                 360                 365
Leu Gly Arg Trp Cys Tyr Gln Val Ser His Leu Ser Trp Leu Glu Lys
    370                 375                 380
Lys Thr Ala Thr Ala Leu Leu Glu Ser Pro Leu Ser Ala Thr Val Glu
385                 390                 395                 400
Asp Ala Leu Gln Ser Phe Leu Lys Ala Glu Glu Leu Gln Pro Gly Phe
                405                 410                 415
Ser Lys Ala Gly Arg Val Tyr Ile Ser Lys Cys Tyr Arg Glu Leu Gly
            420                 425                 430
Lys Asn Ser Glu Ala Arg Trp Trp Met Lys Leu Ala Leu Glu Leu Pro
        435                 440                 445
Asp Val Thr Lys 6lu Asp Leu Ala Ile Gln Lys Asp Leu Glu Glu Leu
    450                 455                 460
Glu Val Ile Leu Arg Asp
465                 470
<210>5
<211>2310
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(148)..(675)
<400>5
cggacgcgtg gggagaggct gtttaccaga acagcataac aagggcaggt ctgactgcaa    60
ggctgggact gggaggcaga gccgccgcca agggggcctc ggttaaacac tggtcgttca    120
atcacctgca agacgaagga ggcaagg atg ctg ttg gcc tgg gta caa gca ttc    174
                              Met Leu Leu Ala Trp Val Gln Ala Phe
                              1               5
ctc gtc agc aac atg ctc cta gca gaa gcc tat gga tct gga ggg gcc      222
Leu Val Ser Asn Met Leu Leu Ala Glu Ala Tyr Gly Ser Gly Gly Ala
10                  15                  20                  25
ggc aat cac agt tac tgc cga aac ccg gac gag gac ccg cgc ggg ccc      270
Gly Asn His Ser Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Glu Asp Pro Arg Gly Pro
                30                  35                  40
tgg tgc tac gtc agt ggc gag gcc ggc gtc cct gag aaa cgg cct tgc      318
Trp Cys Tyr Val Ser Gly Glu Ala Gly Val Pro Glu Lys Arg Pro Cys
            45                  50                  55
gag gac ctg cgc tgt cca gag acc acc tcc cag gcc ctg cca gcc ttc      366
Glu Asp Leu Arg Cys Pro Glu Thr Thr Ser Gln Ala Leu Pro Ala Phe
        60                  65                  70
acg aca gaa atc cag gaa gcg tct gaa ggg cca ggt gca gat gag gtg      414
Thr Thr Glu Ile Gln Glu Ala Ser Glu Gly Pro Gly Ala Asp Glu Val
    75                  80                  85
cag gtg ttc gct cct gcc aac gcc ctg ccc gct cgg agt gag gcg gca      462
Gln Val Phe Ala Pro Ala Asn Ala Leu Pro Ala Arg Ser Glu Ala Ala
90                  95                  100                 105
gct gtg cag cca gtg att ggg atc agc cag cgg gtg cgg atg aac tcc      510
Ala Val Gln Pro Val Ile Gly Ile Ser Gln Arg Val Arg Met Asn Ser
                110                 115                 120
aag gag aaa aag gac ctg gga act ctg ggc tac gtg ctg ggc att acc      558
Lys Glu Lys Lys Asp Leu Gly Thr Leu Gly Tyr Val Leu Gly Ile Thr
            125                 130                 135
atg atg gtg atc atc att gcc atc gga gct ggc atc atc ttg ggc tac      606
Met Met Val Ile Ile Ile Ala Ile Gly Ala Gly Ile Ile Leu Gly Tyr
        140                 145                 150
tcc tac aag agg ggg aag gat ttg aaa gaa cag cat gat cag aaa gta      654
Ser Tyr Lys Arg Gly Lys Asp Leu Lys Glu Gln His Asp Gln Lys Val
    155                 160                 165
tgt gag agg gag atg cag tga atcactctgc ccttgtctgc cttcaccaac         705
Cys Glu Arg Glu Met Gln
170                 175
cccacctgtg agattgtgga tgagaagact gtcgtggtcc acaccagcca gactccagtt    765
gaccctcagg agggcagcac cccccttatg ggccaggccg ggactcctgg ggcctgagcc    825
cccccagtgg gcaggagccc atgcagacac tggtgcagga cagcccaccc tcctacagct    885
aggaggaact accactttgt gttctggtta aaaccctacc actcccccgc ttttttggcg    945
aatcctagta agagtgacag aagcaggtgg ccctgtgggc tgagggtaag gctgggtagg    1005
gtcctaacag tgctccttgt ccatcccttg gagcagattt tgtctgtgga tggagacagt    1065
ggcagctccc acagtgatgc tgctgctaag ggcttccaaa cattgcctgc acccctggaa    1125
ctgaaccagg gatagacggg gagctccccc aggctcctct gtgctttact aagatggcct    1185
cagtctccac tgtgggcttg agtggcatac actgttattc atggttaagg taaagcaggt    1245
caagggatgg cattgaaaaa atatatttag tttttaaaat atttgggatg gaactcccta    1305
ctgacctctg agaactggaa acgagtttgt acagaagtca gaactttggg ttgggaatga    1365
gatctaggtt gtggctgctg gtatgcttca gcttgctggc aatgatgtgc cttgacaacc    1425
gtgggccagg cctgggccca gggactcttc ctgtttcata aggaaaggaa gaattgcact    1485
gagcattcca cttaggaaga ggatagagaa ggatctgctc cgcctttggc cacaggagca    1545
gaggcagacc tgggatgccc cagtttctct tcagggatgg atagtgacct gtcttcattt    1605
tgcacaggta agagagtagt tagctaacct atgggaatta tactgtgggg ccttgtgagc    1665
tgcttctaag aggctaacct ggaaactaag ctcagaggca aggtaataaa gcacttcagg    1725
gcttgctccc caagtgggcc tgatttagca ggtggtcctg cgggcgtcca ggtcagcacc    1785
ttcctgtagg gcactggggc tagggtcaca gcccctaact cataaagcaa tcaaagaacc    1845
attagaaagg gctcattaag ccttttggac acaggacccc agagaggaaa aagtgacttg    1905
cccaaggtcg taagcaagct actggcatgg caagagccca gcttcctgac ggagcgcaac    1965
atttctccac tgcactgtgc tagcagctca gcagggcctc taacctgtga tgtcacactc    2025
aagaggcctt ggcagctcct agccatagag cttcctttcc agaacccttc cactgcccaa    2085
tgtggagaca ggggttagtg gggctttcta tggagccatc tgctttgggg acctagacct    2145
caggtggtct cttggtgtta gtgatgctgg agaagagaat attactggtt tctacttttc    2205
tataaaggca tttctctata tacatgtttt atatacctca ttctgacacc tgcatatagt    2265
gtgggaaatt gctctgcatt tgacttaatt aaaaaaaaaa aaaaa                    2310
<210>6
<211>175
<212>PRT
<213>人
<400>6
Met Leu Leu Ala Trp Val Gln Ala Phe Leu Val Ser Asn Met Leu Leu
1               5                   10                  15
Ala Glu Ala Tyr Gly Ser Gly Gly Ala Gly Asn His Ser Tyr Cys Arg
            20                  25                  30
Asn Pro Asp Glu Asp Pro Arg Gly Pro Trp Cys Tyr Val Ser Gly Glu
        35                  40                  45
Ala Gly Val Pro Glu Lys Arg Pro Cys Glu Asp Leu Arg Cys Pro Glu
    50                  55                  60
Thr Thr Ser Gln Ala Leu Pro Ala Phe Thr Thr Glu Ile Gln Glu Ala
65                  70                  75                  80
Ser Glu Gly Pro Gly Ala Asp Glu Val Gln Val Phe Ala Pro Ala Asn
                85                  90                  95
Ala Leu Pro Ala Arg Ser Glu Ala Ala Ala Val Gln Pro Val Ile Gly
            100                 105                 110
Ile Ser Gln Arg Val Arg Met Asn Ser Lys Glu Lys Lys Asp Leu Gly
        115                 120                 125
Thr Leu Gly Tyr Val Leu Gly Ile Thr Met Met Val Ile Ile Ile Ala
    130                 135                 140
Ile Gly Ala Gly Ile Ile Leu Gly Tyr Ser Tyr Lys Arg Gly Lys Asp
145                 150                 155                 160
Leu Lys Glu Gln His Asp Gln Lys Val Cys Glu Arg Glu Met Gln
                165                 170                 175
<210>7
<211>846
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(102)..(653)
<400>7
ggcacgaggg agcacggccc gcgggcggcg ttcgctggag ctggtggacc gggcggcggg    60
gcagaccgct ggggactgcg ggcggcgctg tgtccgtcgc c atg aca gat cag acc    116
                                              Met Thr Asp Gln Thr
                                              1               5
tat tgt gac cgc ctg gtg cag gac acg cct ttc ctg aca ggc cat ggg      164
Tyr Cys Asp Arg Leu Val Gln Asp Thr Pro Phe Leu Thr Gly His Gly
                10                  15                  20
cgc ttg agt gag cag cag gtg gac agg atc atc ctc cag ctg aac cgt      212
Arg Leu Ser Glu Gln Gln Val Asp Arg Ile Ile Leu Gln Leu Asn Arg
            25                  30                  35
tac tac cca cag atc ctt acc aac aag gag gcg gaa aag ttc cgg aac      260
Tyr Tyr Pro Gln Ile Leu Thr Asn Lys Glu Ala Glu Lys Phe Arg Asn
        40                  45                  50
ccc aag gca tcc ttg cgt gtg cgg ctc tgt gac ctc ctg agc cac ctg      308
Pro Lys Ala Ser Leu Arg Val Arg Leu Cys Asp Leu Leu Ser His Leu
    55                  60                  65
cag cgg agc ggt gag cgg gac tgc cag gag ttc tac cga gcc ctg tat      356
Gln Arg Ser Gly Glu Arg Asp Cys Gln Glu Phe Tyr Arg Ala Leu Tyr
70                  75                  80                  85
atc cat gcc cag ccc ctg cac agc cgc ctg ccc agc cgc cac gct ctg      404
Ile His Ala Gln Pro Leu His Ser Arg Leu Pro Ser Arg His Ala Leu
                90                  95                  100
cag aac tca gat tgc aca gag cta gac tcg ggc agc cag agc ggc gag      452
Gln Asn Ser Asp Cys Thr Glu Leu Asp Ser Gly Ser Gln Ser Gly Glu
            105                 110                 115
ctg agt aac agg gga ccc atg agc ttc ctg gct ggc ctg ggc ctt gct      500
Leu Ser Asn Arg Gly Pro Met Ser Phe Leu Ala Gly Leu Gly Leu Ala
        120                 125                 130
gtg gga ctg gcc ctg ctc ctg tac tgc tat ccg cca gac ccc aag ggc      548
Val Gly Leu Ala Leu Leu Leu Tyr Cys Tyr Pro Pro Asp Pro Lys Gly
    135                 140                 145
ctg cca ggg acc cgg cgc gtc ctc ggt ttc tcg cct gtc atc atc gac      596
Leu Pro Gly Thr Arg Arg Val Leu Gly Phe Ser Pro Val Ile Ile Asp
150                 155                 160                 165
aga cat gtc agc cgc tac ctg ctg gcc ttc ctg gca gat gac cta ggg      644
Arg His Val Ser Arg Tyr Leu Leu Ala Phe Leu Ala Asp Asp Leu Gly
                170                 175                 180
ggg ctc tga cagaccctgg acccagggcc tcacctgcca ctcaaccaaa              693
Gly Leu
gagtcctcga gccggcctgc caaggggact gctgcttctt tttctaaatg catatttttc    753
attatttata atttgtgtaa aaaacacacc ttcaccttac aaggtgctga ccatattaaa    813
tgttcaagtt ctctcaaaaa aaaaaaaaaa aaa                                 846
<210>8
<211>183
<212>PRT
<213>人
<400>8
Met Thr Asp Gln Thr Tyr Cys Asp Arg Leu Val Gln Asp Thr Pro Phe
1               5                   10                  15
Leu Thr Gly His Gly Arg Leu Ser Glu Gln Gln Val Asp Arg Ile Ile
            20                  25                  30
Leu Gln Leu Asn Arg Tyr Tyr Pro Gln Ile Leu Thr Asn Lys Glu Ala
        35                  40                  45
Glu Lys Phe Arg Asn Pro Lys Ala Ser Leu Arg Val Arg Leu Cys Asp
    50                  55                  60
Leu Leu Ser His Leu Gln Arg Ser Gly Glu Arg Asp Cys Gln Glu Phe
65                  70                  75                  80
Tyr Arg Ala Leu Tyr Ile His Ala Gln Pro Leu His Ser Arg Leu Pro
                85                  90                  95
Ser Arg His Ala Leu Gln Asn Ser Asp Cys Thr Glu Leu Asp Ser Gly
            100                 105                 110
Ser Gln Ser Gly Glu Leu Ser Asn Arg Gly Pro Met Ser Phe Leu Ala
        115                 120                 125
Gly Leu Gly Leu Ala Val Gly Leu Ala Leu Leu Leu Tyr Cys Tyr Pro
    130                 135                 140
Pro Asp Pro Lys Gly Leu Pro Gly Thr Arg Arg Val Leu Gly Phe Ser
145                 150                 155                 160
Pro Val Ile Ile Asp Arg His Val Ser Arg Tyr Leu Leu Ala Phe Leu
                165                 170                 175
Ala Asp Asp Leu Gly Gly Leu
            180
<210>9
<211>1753
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(211)..(786)
<400>9
gtttaggggt gggatcgggt cgggatccgg accagccaag gaagggtcca ggtgccgcgg    60
atcttgagaa ggaggcgtgg cctggcgctg ggattggcgc cggatgcacc ccgggttgtg    120
gagtttgggg atcctcatcc ggcgccctct ccccttccag gagtgcacag tctgcgggtg    180
gaccggggaa agaagacgta cttcatcgtc atg cag agc gtc ttc tac ccc gcc     234
                                 Met Gln Ser Val Phe Tyr Pro Ala
                                 1               5
ggc cgc atc tcc gag agg tat gac atc aaa ggc tgc gag gtg agc cgc     282
Gly Arg Ile Ser Glu Arg Tyr Asp Ile Lys Gly Cys Glu Val Ser Arg
    10                  15                  20
tgg gtg gat ccc gcc cct gag ggc agc ccc ctt gtt ctg gtg ctg aag      330
Trp Val Asp Pro Ala Pro Glu Gly Ser Pro Leu Val Leu Val Leu Lys
25                  30                  35                  40
gac ctc aac ttt cag ggc aag acc atc aac ctg ggg ccc cag cgg agc      378
Asp Leu Asn Phe Gln Gly Lys Thr Ile Asn Leu Gly Pro Gln Arg Ser
                45                  50                  55
tgg ttc ctc cgc cag atg gaa ctg gat acc acc ttc ctc cgg gag ctc      426
Trp Phe Leu Arg Gln Met Glu Leu Asp Thr Thr Phe Leu Arg Glu Leu
            60                  65                  70
aac gtg ctg gat tac agc ctc ctg ata gcc ttc caa cgt ctc cac gag      474
Asn Val Leu Asp Tyr Ser Leu Leu Ile Ala Phe Gln Arg Leu His Glu
        75                  80                  85
gat gag agg ggc ccg ggc agc agc ctc atc ttc cgc acg gcc agg tct      522
Asp Glu Arg Gly Pro Gly Ser Ser Leu Ile Phe Arg Thr Ala Arg Ser
    90                  95                  100
gtg caa ggg gca cag agc ccg gaa gag tcg aga gcc caa aac cgc cgg      570
Val Gln Gly Ala Gln Ser Pro Glu Glu Ser Arg Ala Gln Asn Arg Arg
105                 110                 115                 120
ctg ctg ccc gac gcc ccc aac gcc cta cac atc ctg gac ggg ccc gag      618
Leu Leu Pro Asp Ala Pro Asn Ala Leu His Ile Leu Asp Gly Pro Glu
                125                 130                 135
cag cgc tat ttc ctg ggc gtc gtg gat ctc gcc aca gtc tac ggg ctc      666
Gln Arg Tyr Phe Leu Gly Val Val Asp Leu Ala Thr Val Tyr Gly Leu
            140                 145                 150
cgc aag cgg ctg gag cac ctg tgg aag aca ctg cgc tac cca ggc cgg      714
Arg Lys Arg Leu Glu His Leu Trp Lys Thr Leu Arg Tyr Pro Gly Arg
        155                 160                 165
acc ttc tcc act gtc agc ccg gct cgc tac gcc cgt cgc ctc tgc cag      762
Thr Phe Ser Thr Val Ser Pro Ala Arg Tyr Ala Arg Arg Leu Cys Gln
    170                 175                 180
tgg gtg gag gcg cac acg gag tga cgggcgcccg gccccactct ccggatctgg     816
Trp Val Glu Ala His Thr Glu
185                 190
acgatgggct cacgccagga acgccggttc ccccgggccc gggcatctcg cctgcgcttc    876
ctcctgatgg tcgccagagg gcagcatccc ctaactaata ccgtaaccgc gcagtcccgt    936
ttgacggtgg tgccgtgccc agcatcgtgc caaggactcc cctactttag ctcatttaat    996
cctcaaaaaa tgctattatt ctctttttac agaccatgaa atggaggctc agggggtgaa    1056
gggactgatc aagatcattc agcaataaat gctggaacca ggactcaacc atggcttttg    1116
gattccggag cctgtattct taaccaccag ctcctgcagc ttggtcctca tgatctgggc    1176
aaggggggag gctgaaggct gcagccctct tgtcatccag atggggaaac tgaggcccag    1236
agactttaag gggcgtaagc acgggtaagt ggcaaggtcg gccctgagta cccaggcctc    1296
ccggccccct gctcctggcc tgatactcta gggatgcagg tgggagaagc aggggtcctg    1356
ggggctgcct ggagctctgg gaggcattct gaacggggtc tactactgat ctcaggtgag    1416
ctctgccctc ctctgaaagt cacttttctc atcagttaaa tgggggcaag ggtccgtggt    1476
ccgaccaagg tcttggcttc acagacatca ccaggagcct gcatgcccct gatcactcct    1536
tctccttcct ccaggaaact ccagcctggc ctctgacccc agttcaatcc gaccatgccc    1596
aagcccaagc gggcctttcc tccagaactg ctccggggcc tggctgtgtg actggagcaa    1656
ggtgctaaac ctctctgtgc ctcgctggtc taatctgtaa aatgaaggaa tggaaacaga    1716
cctcattaac tcattaaata tttgttgagc acctgcc                             1753
<210>10
<211>191
<212>PRT
<213>人
<400>10
Met Gln Ser Val Phe Tyr Pro Ala Gly Arg Ile Ser Glu Arg Tyr Asp
1               5                   10                  15
Ile Lys Gly Cys Glu Val Ser Arg Trp Val Asp Pro Ala Pro Glu Gly
            20                  25                  30
Ser Pro Leu Val Leu Val Leu Lys Asp Leu Asn Phe Gln Gly Lys Thr
        35                  40                  45
Ile Asn Leu Gly Pro Gln Arg Ser Trp Phe Leu Arg Gln Met Glu Leu
    50                  55                  60
Asp Thr Thr Phe Leu Arg Glu Leu Asn Val Leu Asp Tyr Ser Leu Leu
65                  70                  75                  80
Ile Ala Phe Gln Arg Leu His Glu Asp Glu Arg Gly Pro Gly Ser Ser
                85                  90                  95
Leu Ile Phe Arg Thr Ala Arg Ser Val Gln Gly Ala Gln Ser Pro Glu
            100                 105                 110
Glu Ser Arg Ala Gln Asn Arg Arg Leu Leu Pro Asp Ala Pro Asn Ala
        115                 120                 125
Leu His Ile Leu Asp Gly Pro Glu Gln Arg Tyr Phe Leu Gly Val Val
    130                 135                 140
Asp Leu Ala Thr Val Tyr Gly Leu Arg Lys Arg Leu Glu His Leu Trp
145                 150                 155                 160
Lys Thr Leu Arg Tyr Pro Gly Arg Thr Phe Ser Thr Val Ser Pro Ala
                165                 170                 175
Arg Tyr Ala Arg Arg Leu Cys Gln Trp Val Glu Ala His Thr Glu
            180                 185                 190
<210>11
<211>2686
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(78)..(1856)
<400>11
tcctcgatgc caagaagagc ctgaacctca acatcttcct gaagcaattt aagtgctcca    60
acgaggaggt cgctgct atg atc cgg gct gga gat acc acc aag ttt gat        110
                   Met Ile Arg Ala Gly Asp Thr Thr Lys Phe Asp
                   1               5                   10
gtg gag gtt ctc aaa caa ctc ctt aag ctc ctt ccc gag aag cac gag       158
Val Glu Val Leu Lys Gln Leu Leu Lys Leu Leu Pro Glu Lys His Glu
            15                  20                  25
att gaa aac ctg cgg gca ttc aca gag gag cga gcc aag ctg gcc agc       206
Ile Glu Asn Leu Arg Ala Phe Thr Glu Glu Arg Ala Lys Leu Ala Ser
        30                  35                  40
gcc gac cacttc tac ctc ctc ctg ctg gcc att ccc tgc tac cag ctg        254
Ala Asp His Phe Tyr Leu Leu Leu Leu Ala Ile Pro Cys Tyr Gln Leu
    45                  50                  55
cga atc gag tgc atg ctg ctg tgt gag ggc gcg gcc gcc gtg ctg gac       302
Arg Ile Glu Cys Met Leu Leu Cys Glu Gly Ala Ala Ala Val Leu Asp
60                  65                  70                  75
atg gtg cgg ccc aag gcc cag ctg gtg ctg gct gcc tgc gaa agc ctg       350
Met Val Arg Pro Lys Ala Gln Leu Val Leu Ala Ala Cys Glu Ser Leu
                80                  85                  90
ctc acc agc cgc cag ctg ccc atc ttc tgc cag ctg atc ctg aga att       398
Leu Thr Ser Arg Gln Leu Pro Ile Phe Cys Gln Leu Ile Leu Arg Ile
            95                  100                 105
ggg aac ttc ctc aac tac ggc agc cac acc ggt gac gcc gac ggc ttc       446
Gly Asn Phe Leu Asn Tyr Gly Ser His Thr Gly Asp Ala Asp Gly Phe
        110                 115                 120
aag atc agc aca ttg ctg aag ctc acg gag acc aag tcc cag cag aac       494
Lys Ile Ser Thr Leu Leu Lys Leu Thr Glu Thr Lys Ser Gln Gln Asn
    125                 130                 135
cgc gtg acg ctg ctg cac cac gtg ctg gag gaa gcg gaa aag agc cac       542
Arg Val Thr Leu Leu His His Val Leu Glu Glu Ala Glu Lys Ser His
140                 145                 150                 155
ccc gac ctc ctg cag ctg ccc cgg gac ctg gaa cag ccc tcg caa gca       590
Pro Asp Leu Leu Gln Leu Pro Arg Asp Leu Glu Gln Pro Ser Gln Ala
                160                 165                 170
gca ggg atc aac ctg gag atc atc cgc tca gag gcc agc tcc aac ctg       638
Ala Gly Ile Asn Leu Glu Ile Ile Arg Ser Glu Ala Ser Ser Asn Leu
            175                 180                 185
aag aag ctt ctg gag acc gag cgg aag gtg tct gcc tcc gtg gcc gag       686
Lys Lys Leu Leu Glu Thr Glu Arg Lys Val Ser Ala Ser Val Ala Glu
        190                 195                 200
gtc cag gag cag tac acc gag cgc ctc cag gcc agc atc tcg gcc ttc      734
Val Gln Glu Gln Tyr Thr Glu Arg Leu Gln Ala Ser Ile Ser Ala Phe
    205                 210                 215
cgg gca ctg gac gag ctg ttt gag gcc atc gag cag aag caa cgg gag      782
Arg Ala Leu Asp Glu Leu Phe Glu Ala Ile Glu Gln Lys Gln Arg Glu
220                 225                 230                 235
ctg gcc gac tac ctg tgt gag gac gcc cag cag ctg tcc ctg gag gac      830
Leu Ala Asp Tyr Leu Cys Glu Asp Ala Gln Gln Leu Ser Leu Glu Asp
                240                 245                 250
acg ttc agc acc atg aag gct ttc cgg gac ctt ttc ctc cgc gcc ctg      878
Thr Phe Ser Thr Met Lys Ala Phe Arg Asp Leu Phe Leu Arg Ala Leu
            255                 260                 265
aag gag aac aag gac cgg aag gag cag gcg gcg aag gca gag agg agg      926
Lys Glu Asn Lys Asp Arg Lys Glu Gln Ala Ala Lys Ala Glu Arg Arg
        270                 275                 280
aag cag cag ctg gcg gag gag gag gcg cgg cgg cct cgg gga gag gac      974
Lys Gln Gln Leu Ala Glu Glu Glu Ala Arg Arg Pro Arg Gly Glu Asp
    285                 290                 295
ggg aag cct gtc agg aag ggg ccc ggg aag cag gag gag gtg tgt gtc     1022
Gly Lys Pro Val Arg Lys Gly Pro Gly Lys Gln Glu Glu Val Cys Val
300                 305                 310                 315
atc gat gcc ctg ctg gct gac atc agg aag ggc ttc cag ctg cgg aag     1070
Ile Asp Ala Leu Leu Ala Asp Ile Arg Lys Gly Phe Gln Leu Arg Lys
                320                 325                 330
aca gcc cgg ggc cgc ggg gac acc gac ggg ggc agc aag gca gcc tcc     1118
Thr Ala Arg Gly Arg Gly Asp Thr Asp Gly Gly Ser Lys Ala Ala Ser
            335                 340                 345
atg gat ccc cca aga gcc aca gag cct gtg gcc acc agt aac cct gca     1166
Met Asp Pro Pro Arg Ala Thr Glu Pro Val Ala Thr Ser Asn Pro Ala
        350                 355                 360
gga gac ccc gtg ggc agc acg cgc tgt ccc gcc tct gag ccc ggc ctt     1214
Gly Asp Pro Val Gly Ser Thr Arg Cys Pro Ala Ser Glu Pro Gly Leu
    365                 370                 375
gat gct aca aca gcc agc gag tcc cgg ggc tgg gac ctt gta gac gcc     1262
Asp Ala Thr Thr Ala Ser Glu Ser Arg Gly Trp Asp Leu Val Asp Ala
380                 385                 390                 395
gtg acc ccc ggc cct cag ccc acc ctg gag cag ttg gag gag ggt ggt     1310
Val Thr Pro Gly Pro Gln Pro Thr Leu Glu Gln Leu Glu Glu Gly Gly
                400                 405                 410
ccg cgg ccc ctg gag agg cgt tct tcc tgg tat gtg gat gcc agc gat     1358
Pro Arg Pro Leu Glu Arg Arg Ser Ser Trp Tyr Val Asp Ala Ser Asp
            415                 420                 425
gtc cta acc act gag gat ccc cag tgc ccc cag ccc ttg gag ggg gcc     1406
Val Leu Thr Thr Glu Asp Pro Gln Cys Pro Gln Pro Leu Glu Gly Ala
        430                 435                 440
tgg ccg gtg act ctg gga gat gct cag gcc ctg aag ccc ctc aag ttc     1454
Trp Pro Val Thr Leu Gly Asp Ala Gln Ala Leu Lys Pro Leu Lys Phe
    445                 450                 455
tcc agc aac cag ccc cct gca gcc gga agt tca agg caa gat gcc aag     1502
Ser Ser Asn Gln Pro Pro Ala Ala Gly Ser Ser Arg Gln Asp Ala Lys
460                 465                 470                 475
gat ccc acg tcc ttg ctg ggc gtc ctc cag gcc gag gcc gac agc aca     1550
Asp Pro Thr Ser Leu Leu Gly Val Leu Gln Ala Glu Ala Asp Ser Thr
                480                 485                 490
agt gag ggg ctg gag gac gct gtc cac agc cgt ggt gcc aga ccc cct     1598
Ser Glu Gly Leu Glu Asp Ala Val His Ser Arg Gly Ala Arg Pro Pro
            495                 500                 505
gca gca ggc cca ggt ggg gat gag gac gag gac gag gag gac aca gcc     1646
Ala Ala Gly Pro Gly Gly Asp Glu Asp Glu Asp Glu Glu Asp Thr Ala
        510                 515                 520
cca gag tcc gca ctg gac aca tcc ctg gac aag tcc ttc tcc gag gat     1694
Pro Glu Ser Ala Leu Asp Thr Ser Leu Asp Lys Ser Phe Ser Glu Asp
    525                 530                 535
gcg gtg acc gac tcc tcg ggg tcg ggc aca ctc ccc agg gcc cgg ggc     1742
Ala Val Thr Asp Ser Ser Gly Ser Gly Thr Leu Pro Arg Ala Arg Gly
540                 545                 550                 555
cgg gcc tca aag ggg acc ggg aag cga agg aag aag cgt ccc tcc agg     1790
Arg Ala Ser Lys Gly Thr Gly Lys Arg Arg Lys Lys Arg Pro Ser Arg
                560                 565                 570
agc cag gaa gag gtt ccc cct gat tct gat gat aat aaa aca aag aaa     1838
Ser Gln Glu Glu Val Pro Pro Asp Ser Asp Asp Asn Lys Thr Lys Lys
            575                 580                 585
ctg tgt gtg atc cag taa ggcctcaggc ccaggcccaa ggccaagtga            1886
Leu Cys Val Ile Gln
        590
gagagcccag gccacaggac atgctgccat tctgccaaga gaggctcttc tgggggccag   1946
gctgggactg ggccccggaa accaaaactc cgtgccttac ccagccgggg ccctcctgga   2006
gccttcttgg ggtgttgtgg ctgggaaccc gacaggcacc agtgccctgc caggcctggt   2066
gccctcctgg accgcctgca cgtgccagcc tcccacctgc ttcctaaagg caaccctggc   2126
ccacacccgc atgcgcccgg tgcagcctgc caagggccag tcggggggtg ctgcgtcctg   2186
ccagtgtcca ccacagctct gcctgccctt cagcccagca aggtttaatc aaaatgcaat   2246
gctttgcaag tctttactgc ttggaggtgg ctgagttggg ggccctgggc aggggtaagc   2306
tggcaggcag tgccatggca ggccagggtc ccctcccatg gggtctggcc cccgttccag   2366
catgtccagc ccctgaagtt ggagttgggg gcggtctgcc tttgctgcca ctgccaggcc   2426
tctgccctgc agctgaaact tggccatcac atcaacagaa aacccctccc agtgccagct   2486
gcccagcgtg ggcaggccct ggggacaata caggtccacc tgaggggctg cagggtgaca   2546
cccagcagcc gctgccccct cactgcccac ccagcgaggg cagcctaccc gagcctgccc   2606
cctgccaggt gtgtgccctg aggctggcgg ctggatgcgt ggccaataaa aagcagacct   2666
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa                                               2686
<210>12
<211>592
<212>PRT
<213>人
<400>12
Met Ile Arg Ala Gly Asp Thr Thr Lys Phe Asp Val Glu Val Leu Lys
1               5                   10                  15
Gln Leu Leu Lys Leu Leu Pro Glu Lys His Glu Ile Glu Asn Leu Arg
             20                 25                  30
Ala Phe Thr Glu Glu Arg Ala Lys Leu Ala Ser Ala Asp His Phe Tyr
        35                  40                  45
Leu Leu Leu Leu Ala Ile Pro Cys Tyr Gln Leu Arg Ile Glu Cys Met
    50                  55                  60
Leu Leu Cys Glu Gly Ala Ala Ala Val Leu Asp Met Val Arg Pro Lys
65                  70                  75                  80
Ala Gln Leu Val Leu Ala Ala Cys Glu Ser Leu Leu Thr Ser Arg Gln
                85                  90                  95
Leu Pro Ile Phe Cys Gln Leu Ile Leu Arg Ile Gly Asn Phe Leu Asn
            100                 105                 110
Tyr Gly Ser His Thr Gly Asp Ala Asp Gly Phe Lys Ile Ser Thr Leu
        115                 120                 125
Leu Lys Leu Thr Glu Thr Lys Ser Gln Gln Asn Arg Val Thr Leu Leu
    130                 135                 140
His His Val Leu Glu Glu Ala Glu Lys Ser His Pro Asp Leu Leu Gln
145                 150                 155                 160
Leu Pro Arg Asp Leu Glu Gln Pro Ser Gln Ala Ala Gly Ile Asn Leu
                165                 170                 175
Glu Ile Ile Arg Ser Glu Ala Ser Ser Asn Leu Lys Lys Leu Leu Glu
            180                 185                 190
Thr Glu Arg Lys Val Ser Ala Ser Val Ala Glu Val Gln Glu Gln Tyr
        195                 200                 205
Thr Glu Arg Leu Gln Ala Ser Ile Ser Ala Phe Arg Ala Leu Asp Glu
    210                 215                 220
Leu Phe Glu Ala Ile Glu Gln Lys Gln Arg Glu Leu Ala Asp Tyr Leu
225                 230                 235                 240
Cys Glu Asp Ala Gln Gln Leu Ser Leu Glu Asp Thr Phe Ser Thr Met
                245                 250                 255
Lys Ala Phe Arg Asp Leu Phe Leu Arg Ala Leu Lys Glu Asn Lys Asp
            260                 265                 270
Arg Lys Glu Gln Ala Ala Lys Ala Glu Arg Arg Lys Gln Gln Leu Ala
        275                 280                 285
Glu Glu Glu Ala Arg Arg Pro Arg Gly Glu Asp Gly Lys Pro Val Arg
    290                 295                 300
Lys Gly Pro Gly Lys Gln Glu Glu Val Cys Val Ile Asp Ala Leu Leu
305                 310                 315                 320
Ala Asp Ile Arg Lys Gly Phe Gln Leu Arg Lys Thr Ala Arg Gly Arg
                325                 330                 335
Gly Asp Thr Asp Gly Gly Ser Lys Ala Ala Ser Met Asp Pro Pro Arg
            340                 345                 350
Ala Thr Glu Pro Val Ala Thr Ser Asn Pro Ala Gly Asp Pro Val Gly
        355                 360                 365
Ser Thr Arg Cys Pro Ala Ser Glu Pro Gly Leu Asp Ala Thr Thr Ala
    370                 375                 380
Ser Glu Ser Arg Gly Trp Asp Leu Val Asp Ala Val Thr Pro Gly Pro
385                 390                 395                 400
Gln Pro Thr Leu Glu Gln Leu Glu Glu Gly Gly Pro Arg Pro Leu Glu
                405                 410                 415
Arg Arg Ser Ser Trp Tyr Val Asp Ala Ser Asp Val Leu Thr Thr Glu
            420                 425                 430
Asp Pro Gln Cys Pro Gln Pro Leu Glu Gly Ala Trp Pro Val Thr Leu
        435                 440                 445
Gly Asp Ala Gln Ala Leu Lys Pro Leu Lys Phe Ser Ser Asn Gln Pro
    450                 455                 460
Pro Ala Ala Gly Ser Ser Arg Gln Asp Ala Lys Asp Pro Thr Ser Leu
465                 470                 475                 480
Leu Gly Val Leu Gln Ala Glu Ala Asp Ser Thr Ser Glu Gly Leu Glu
                485                 490                 495
Asp Ala Val His Ser Arg Gly Ala Arg Pro Pro Ala Ala Gly Pro Gly
            500                 505                 510
Gly Asp Glu Asp Glu Asp Glu Glu Asp Thr Ala Pro Glu Ser Ala Leu
        515                 520                 525
Asp Thr Ser Leu Asp Lys Ser Phe Ser Glu Asp Ala Val Thr Asp Ser
    530                 535                 540
Ser Gly Ser Gly Thr Leu Pro Arg Ala Arg Gly Arg Ala Ser Lys Gly
545                 550                 555                 560
Thr Gly Lys Arg Arg Lys Lys Arg Pro Ser Arg Ser Gln Glu Glu Val
                565                 570                 575
Pro Pro Asp Ser Asp Asp Asn Lys Thr Lys Lys Leu Cys Val Ile Gln
            580                 585                 590
<210>13
<211>2190
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(148)..(702)
<400>13
cggacgcgtg gggagaggct gtttaccaga acagcataac aagggcaggt ctgactgcaa     60
ggctgggact gggaggcaga gccgccgcca agggggcctc ggttaaacac tggtcgttca     120
atcacctgca agacgaagga ggcaagg atg ctg ttg gcc tgg gta caa gca ttc     174
                              Met Leu Leu Ala Trp Val Gln Ala Phe
                              1               5
ctc gtc agc aac atg ctc cta gca gaa gcc tat gga tct gga gag acc       222
Leu Val Ser Asn Met Leu Leu Ala Glu Ala Tyr Gly Ser Gly Glu Thr
10                  15                  20                  25
acc tcc cag gcc ctg cca gcc ttc acg aca gaa atc cag gaa gcg tct      270
Thr Ser Gln Ala Leu Pro Ala Phe Thr Thr Glu Ile Gln Glu Ala Ser
                30                  35                  40
gaa ggg cca ggt gca gat gag gtg cag gtg ttc gct cct gcc aac gcc      318
Glu Gly Pro Gly Ala Asp Glu Val Gln ValPhe Ala Pro Ala Asn Ala
            45                  50                  55
ctg ccc gct cgg agt gag gcg gca gct gtg cag cca gtg att ggg atc      366
Leu Pro Ala Arg Ser Glu Ala Ala Ala Val Gln Pro Val Ile Gly Ile
        60                  65                  70
agc cag cgg gtg cgg atg aac tcc aag gag aaa aag gac ctg gga act      414
Ser Gln Arg Val Arg Met Asn Ser Lys Glu Lys Lys Asp Leu Gly Thr
    75                  80                  85
ctg ggc tac gtg ctg ggc att acc atg atg gtg atc atc att gcc atc      462
Leu Gly Tyr Val Leu Gly Ile Thr Met Met Val Ile Ile Ile Ala Ile
90                  95                  100                  105
gga gct ggc atc atc ttg ggc tac tcc tac aag agg ggg aag gat ttg      510
Gly Ala Gly Ile Ile Leu Gly Tyr Ser Tyr Lys Arg Gly Lys Asp Leu
                110                 115                 120
aaa gaa cag cat gat cag aaa gta tgt gag agg gag atg cag cga atc      558
Lys Glu Gln His Asp Gln Lys Val Cys Glu Arg Glu Met Gln Arg Ile
            125                 130                 135
act ctg ccc ttg tct gcc ttc acc aac ccc acc tgt gag att gtg gat      606
Thr Leu Pro Leu Ser Ala Phe Thr Asn Pro Thr Cys Glu Ile Val Asp
        140                  145                150
gag aag act gtc gtg gtc cac acc agc cag act cca gtt gac cct cag      654
Glu Lys Thr Val Val Val His Thr Ser Gln Thr Pro Val Asp Pro Gln
    155                 160                 165
gag ggc acc acc ccc ctt atg ggc cag gcc ggg act cct ggg gcc tga      702
Glu Gly Thr Thr Pro Leu Met Gly Gln Ala Gly Thr Pro Gly Ala
170                 175                 180
gcccccccag tgggcaggag cccatgcaga cactggtgca ggacagccca ccctcctaca    762
gctaggagga actaccactt tgtgttctgg ttaaaaccct accactcccc cgcttttttg    822
gcgaatccta gtaagagtga cagaagcagg tggccctgtg ggctgagggt aaggctgggt    882
agggtcctaa cagtgctcct tgtccatccc ttggagcaga ttttgtctgt ggatggagac    942
agtggcagct cccacagtga tgctgctgct aagggcttcc aaacattgcc tgcacccctg   1002
gaactgaacc agggatagac ggggagctcc cccaggctcc tctgtgcttt actaagatgg   1062
cctcagtctc cactgtgggc ttgagtggca tacactgtta ttcatggtta aggtaaagca   1122
ggtcaaggga tggcattgaa aaaatatatt tagtttttaa aatatttggg atggaactcc   1182
ctactgacct ctgagaactg gaaacgagtt tgtacagaag tcagaacttt gggttgggaa   1242
tgagatctag gttgtggctg ctggtatgct tcagcttgct ggcaatgatg tgccttgaca   1302
accgtgggcc aggcctgggc ccagggactc ttcctgtttc ataaggaaag gaagaattgc   1362
actgagcatt ccacttagga agaggataga gaaggatctgctccgccttt ggccacagga    1422
gcagaggcag acctgggatg ccccagtttc tcttcaggga tggatagtga cctgtcttca   1482
ttttgcacag gtaagagagt agttagctaa cctatgggaa ttatactgtg gggccttgtg   1542
agctgcttct aagaggctaa cctggaaact aagctcagag gcaaggtaat aaagcacttc   1602
agggcttgct ccccaagtgg gcctgattta gcaggtggtc ctgcgggcgt ccaggtcagc   1662
accttcctgt agggcactgg ggctagggtc acagccccta actcataaag caatcaaaga   1722
accattagaa agggctcatt aagccttttg gacacaggac cccagagagg aaaaagtgac   1782
ttgcccaagg tcgtaagcaa gctactggca tggcaagagc ccagcttcct gacggagcgc   1842
aacatttctc cactgcactg tgctagcagc tcagcagggc ctctaacctg tgatgtcaca   1902
ctcaagaggc cttggcagct cctagccata gagcttcctt tccagaaccc ttccactgcc   1962
caatgtggag acaggggtta gtggggcttt ctatggagcc atctgctttg gggacctaga   2022
cctcaggtgg tctcttggtg ttagtgatgc tggagaagag aatattactg gtttctactt   2082
ttctataaag gcatttctct atatacatgt tttatatacc tcattctgac acctgcatat   2142
agtgtgggaa attgctctgc atttgactta attaaaaaaa aaaaaaaa                2190
<210>14
<211>184
<212>PRT
<213>人
<400>14
Met Leu Leu Ala Trp Val Gln Ala Phe Leu Val Ser Asn Met Leu Leu
1               5                   10                  15
Ala Glu Ala Tyr Gly Ser Gly Glu Thr Thr Ser Gln Ala Leu Pro Ala
            20                  25                  30
Phe Thr Thr Glu Ile Gln Glu Ala Ser Glu Gly Pro Gly Ala Asp Glu
        35                  40                  45
Val Gln Val Phe Ala Pro Ala Asn Ala Leu Pro Ala Arg Ser Glu Ala
    50                  55                  60
Ala Ala Val Gln Pro Val Ile Gly Ile Ser Gln Arg Val Arg Met Asn
65                  70                  75                  80
Ser Lys Glu Lys Lys Asp Leu Gly Thr Leu Gly Tyr Val Leu Gly Ile
                85                  90                  95
Thr Met Met Val Ile Ile Ile Ala Ile Gly Ala Gly Ile Ile Leu Gly
            100                 105                 110
Tyr Ser Tyr Lys Arg Gly Lys Asp Leu Lys Glu Gln His Asp Gln Lys
        115                 120                 125
Val Cys Glu Arg Glu Met Gln Arg Ile Thr Leu Pro Leu Ser Ala Phe
    130                 135                 140
Thr Asn Pro Thr Cys Glu Ile Val Asp Glu Lys Thr Val Val Val His
145                 150                 155                 160
Thr Ser Gln Thr Pro Val Asp Pro Gln Glu Gly Thr Thr Pro Leu Met
                165                 170                 175
Gly Gln Ala Gly Thr Pro Gly Ala
            180
<210>15
<211>1817
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(439)..(897)
<400>15
agcataacct gtttgtgaaa ctgcaaaaag gttgacatgg ctgaagcaga agatgggttg     60
gtactgaatg gttgggagag atatgtagcg gctgaccctg aaggacgttg cagcccatgc    120
tatggagacc tgattttatt ttgtaagagg tgggcaaccc ctgaagcatt ttagtgatgc    180
gaacagatgt gtctgttacc aagcaaagcc agttaaagaa ggtcacagag gaggaatgat    240
cacaaagagt ctgagaagcc aactggggcc aaacaagttt tagaacctct actggctgat    300
gccaacatca tcagagatga actgttctta ccagaaactt ctctgctcct gacaccccac    360
ctctccccag aagagaagaa ggagagtggc cacgttgatt cagccaagca cctccaggag    420
gtcccctctg gatgtccc atg agg ctg ccc ctc agc cac agc cca gag cac      471
                    Met Arg Leu Pro Leu Ser His Ser Pro Glu His
                    1               5                   10
gtg gag atg gct ttg ctc agc aac atc cta gcg gcc tat tcc ttt gtc      519
Val Glu Met Ala Leu Leu Ser Asn Ile Leu Ala Ala Tyr Ser Phe Val
            15                  20                  25
tca gaa aat cct gag cga gca gct ctg tac ttt gtt tct ggc gtg tgc      567
Ser Glu Asn Pro Glu Arg Ala Ala Leu Tyr Phe Val Ser Gly Val Cys
        30                  35                  40
atc ggg ctg gtg ctg acc ctg gct gct ctg gtg ata agg atc tct tgc      615
Ile Gly Leu Val Leu Thr Leu Ala Ala Leu Val Ile Arg Ile Ser Cys
    45                  50                  55
cac aca gac tgc agg cgg cgt ccc ggg aag aag ttc ctg cag gac aga      663
His Thr Asp Cys Arg Arg Arg Pro Gly Lys Lys Phe Leu Gln Asp Arg
60                  65                  70                  75
gag agc agc agc gac agc agc gac agc gag gat ggc agt gag gac acc      711
Glu Ser Ser Ser Asp Ser Ser Asp Ser Glu Asp Gly Ser Glu Asp Thr
                80                  85                  90
gtg tcc gat ctc tcc gtg cgg aga cac cgc cgc ttc gag agg act ttg      759
Val Ser Asp Leu Ser Val Arg Arg His Arg Arg Phe Glu Arg Thr Leu
            95                  100                 105
aac aag aat gtg ttc acc tct gcg gag gag ctg gag cgc gcc cag cgg      807
Asn Lys Asn Val Phe Thr Ser Ala Glu Glu Leu Glu Arg Ala Gln Arg
        110                 115                 120
ctg gag gag cgc gag cgc atc atc agg gag atc tgg atg aat ggc cag      855
Leu Glu Glu Arg Glu Arg Ile Ile Arg Glu Ile Trp Met Asn Gly Gln
    125                 130                 135
cct gag gtg ccc ggg acc agg agc ctg aat cgc tac tat tag              897
Pro Glu Val Pro Gly Thr Arg Ser Leu Asn Arg Tyr Tyr
140                 145                 150
ggagcagcag gaccccggaa accactggag gccgcctgga aaggagagcg tctgcaggga    957
cagtgggcac aaggaactga acccagctct gctaatattg tgatttcaga gaaaaagcag    1017
gacatgcccc ttttctagcc aggaggattg ctcctttttg gccaaatgta tggagaagta    1077
gaaaaatcaa agcagttcat caccctttcc aggtctcgga atggtgctga aaaatcctct    1137
ccaacactgt ggatggagat cggagaaacg cgactgtggt ttctcttgat ttctgaggat    1197
ctcagaagtt tcagcagact tccttgctct gtgttattcc tttgcaaaag gaaagatcat    1257
tatagcatga gggctgggaa tagcagggtg aacttaaccc aataaatgca atttcctaaa    1317
tgacttcatg ctatggaggt gattctgatt caaatagcat gatccatgct tattatttaa    1377
ggctgatttt taaaatcttg tgttgcaagg gcaacctcgt ccattttaac tggcacctca    1437
gggattaaaa tcctactttt tagtgtagtt cccacctcat tcatgaaaat gaatagaact    1497
attgtattat gggagatgtg tcagtgaact agaaaatgtc aataacctca aaggatgaag    1557
ggtttttatt ttaaatagtt tataaaatat atattgacat gcatatttga aaatgctgca    1617
taaaaataaa agtggtgtgt tttccccctc tttggagaca agaaaatttt attatgactc    1677
tagataattg tgattttaaa cactttgttt tttttttttt ttttttaatt ggatttcaaa    1737
gaaaagaatg gaaatgagag gtaaggatta aagccaaagt taggatggga attaaaaaaa    1797
taaacattac ataaaatctt                                                1817
<210>16
<211>152
<212>PRT
<213>人
<400>16
Met Arg Leu Pro Leu Ser His Ser Pro Glu His Val Glu Met Ala Leu
1               5                   10                  15
Leu Ser Asn Ile Leu Ala Ala Tyr Ser Phe Val Ser Glu Asn Pro Glu
            20                  25                  30
Arg Ala Ala Leu Tyr Phe Val Ser Gly Val Cys Ile Gly Leu Val Leu
        35                  40                  45
Thr Leu Ala Ala Leu Val Ile Arg Ile Ser Cys His Thr Asp Cys Arg
    50                  55                  60
Arg Arg Pro Gly Lys Lys Phe Leu Gln Asp Arg Glu Ser Ser Ser Asp
65                  70                  75                  80
Ser Ser Asp Ser Glu Asp Gly Ser Glu Asp Thr Val Ser Asp Leu Ser
                85                  90                  95
Val Arg Arg His Arg Arg Phe Glu Arg Thr Leu Asn Lys Asn Val Phe
            100                 105                 110
Thr Ser Ala Glu Glu Leu Glu Arg Ala Gln Arg Leu Glu Glu Arg Glu
        115                 120                 125
Arg Ile Ile Arg Glu Ile Trp Met Asn Gly Gln Pro Glu Val Pro Gly
    130                 135                 140
Thr Arg Ser Leu Asn Arg Tyr Tyr
145                 150
<210>17
<211>1868
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(403)..(870)
<400>17
agtttcggaa ccccagccag ctcacctctg cgccgctgaa cccgatccga gcctccggca    60
aaggtttttc cctcctcccc cggccgaggg cttctgccgc ccgggcaccc ccgccccgcg    120
gcgccccaca ttcccccagc ccggggccct tggcgcgtgc gctccgtgcg gctgtgctcc    180
gcgggacttt gtttgtttcc tcctcgtccc tctttgttgg gctgaacacc agcctcgtca    240
aagcccccca ctccggaggg agttcggctt ctccagcagg gcggctgcag cgcgctgccc    300
cgaccccgcc tgcggcccct cacgccgcta gtgctcccac cccgccctcc tggcaccccg    360
cctgcgtccg ttcgcccgag gaagccaacc gcgacttcat tg atg cac cca ttc       414
                                               Met His Pro Phe
                                               1
cag tgg tgt aac ggg tgt ttc tgt ggc ctg gga ctg gtt agc acc aac      462
Gln Trp Cys Asn Gly Cys Phe Cys Gly Leu Gly Leu Val Ser Thr Asn
5                   10                  15                  20
aag tcc tgc tcg atg cca ccc atc agt ttc cag gac ctt ccg ctc aac      510
Lys Ser Cys Ser Met Pro Pro Ile Ser Phe Gln Asp Leu Pro Leu Asn
                25                  30                  35
atc tat atg gtc atc ttc ggc aca ggc atc ttt gtc ttc atg ctc agc      558
Ile Tyr Met Val Ile Phe Gly Thr Gly Ile Phe Val Phe Met Leu Ser
            40                  45                  50
ctt atc ttc tgc tgc tat ttt atc agc aaa ctg cgg aac cag gca cag      606
Leu Ile Phe Cys Cys Tyr Phe Ile Ser Lys Leu Arg Asn Gln Ala Gln
        55                  60                  65
agt gag cga tac gga tat aag gag gtg gtg ctt aaa ggt gat gcc aag      654
Ser Glu Arg Tyr Gly Tyr Lys Glu Val Val Leu Lys Gly Asp Ala Lys
    70                  75                  80
aag tta caa tta tat ggg cag acc tgc gca gtc tgt ctg gaa gac ttc      702
Lys Leu Gln Leu Tyr Gly Gln Thr Cys Ala Val Cys Leu Glu Asp Phe
85                  90                  95                  100
aag ggg aag gat gag tta ggc gtg ctc ccg tgc caa cac gcc ttt cac      750
Lys Gly Lys Asp Glu Leu Gly Val Leu Pro Cys Gln His Ala Phe His
                105                 110                 115
cgc aag tgt ctg gtg aaa tgg ctg gaa gtt cgc tgt gtc tgc ccc atg      798
Arg Lys Cys Leu Val Lys Trp Leu Glu Val Arg Cys Val Cys Pro Met
            120                 125                 130
tgt aac aag ccc att gct agt ccc tca gag gcc acg cag aac att ggg     846
Cys Asn Lys Pro Ile Ala Ser Pro Ser Glu Ala Thr Gln Asn Ile Gly
        135                 140                 145
att cta ttg gat gag ctg gtg tga gtgctgccgc tacaccgaga cctggagaag     900
Ile Leu Leu Asp Glu Leu Val
    150                 155
acctcttgcc tcatggatgt ctggtccctc tgcacagctc caaccaacag gactgtaggg    960
tgatgacgat cactttccca gtgatgagaa gggtggtcta ggactgggct tctaccctca   1020
gtgcaagacc agtgccagat gtgcccccac ttcctgcctc ctgaagcctt cttccctgct   1080
actccatgct ggtggcctca cccatcaaga ccactgtctc ctggtactgg actatctacc   1140
tgccttgtcc ctgttctggg ggaaggtgtc caccccgatc aagaacatgg agaaagtcct   1200
ctttcaaggc tcccattagg aggatgagct gccttgaccc agaagggatg agacgggctc   1260
ttacctctct acaaccttcc ctccccttcc cactccttcc ggagtaaggt tagaagggaa   1320
ggaaggaaag atcaaggaac caagcgcctc cacgggaggc gagggaggct ctgtatgaaa   1380
cagaagagca gggacataaa ggaaaatgtc agtgtttaca tgggacctat ggaaacaaag   1440
gctggcgggc gccagctgac tccagagtaa gagagggccc ttcccctgcc aggacccacg   1500
gtgctatcca ttcagtctct tcctcagtta atctcggagc ttcctattcc atgttgaggt   1560
ttgtgggccc ctctagagga gggctagttc tatacttaaa ttgattccca ggggcctttt   1620
tttttttttt tttttttttt ttgatcaaaa ggggtgtggg gatgggggtg tctacggtta   1680
agcaacagat acctccttcc ctttgtaaat agtattttta tacttcatcc tcgcctctca   1740
ggctttagat acgaaatctc cagaatggaa gggggtgggg attttctgtt cctccctgga   1800
gtgggtgagg gtgggagaaa gttacatatt taaagaaaaa taaatttaat aacaagtttc   1860
tctaacct                                                            1868
<210>18
<211>155
<212>PRT
<213>人
<400>18
Met His Pro Phe Gln Trp Cys Asn Gly Cys Phe Cys Gly Leu Gly Leu
1               5                   10                  15
Val Ser Thr Asn Lys Ser Cys Ser Met Pro Pro Ile Ser Phe Gln Asp
            20                  25                  30
Leu Pro Leu Asn Ile Tyr Met Val Ile Phe Gly Thr Gly Ile Phe Val
        35                  40                  45
Phe Met Leu Ser Leu Ile Phe Cys Cys Tyr Phe Ile Ser Lys Leu Arg
    50                  55                  60
Asn Gln Ala Gln Ser Glu Arg Tyr Gly Tyr Lys Glu Val Val Leu Lys
65                  70                  75                  80
Gly Asp Ala Lys Lys Leu Gln Leu Tyr Gly Gln Thr Cys Ala Val Cys
                85                  90                  95
Leu Glu Asp Phe Lys Gly Lys Asp Glu Leu Gly Val Leu Pro Cys Gln
            100                 105                 110
His Ala Phe His Arg Lys Cys Leu Val Lys Trp Leu Glu Val Arg Cys
        115                 120                 125
Val Cys Pro Met Cys Asn Lys Pro Ile Ala Ser Pro Ser Glu Ala Thr
    130                 135                 140
Gln Asn Ile Gly Ile Leu Leu Asp Glu Leu Val
145                 150                 155
<210>19
<211>2651
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(196)..(1599)
<400>19
ggcacgaggg gacgcgataa atatgcagag cggaggcttc gcgcagcaga gcccgcgcgc    60
cgcccgctcc gggtgctgaa tccaggcgtg gggacacgag ccaggcgccg ccgccggagc    120
cagcggagcc ggggccagag ccggagcgcg tccgcgtcca cgcagccgcc ggccggccag    180
cacccagggc cctgc atg cca ggt cgt tgg agg tgg cag cga gac atg cac     231
                 Met Pro Gly Arg Trp Arg Trp Gln Arg Asp Met His
                 1               5                   10
ccg gcc cgg aag ctc ctc agc ctc ctc ttc ctc atc ctg atg ggc act     279
Pro Ala Arg Lys Leu Leu Ser Leu Leu Phe Leu Ile Leu Met Gly Thr
        15                  20                  25
gaa ctc act caa gtg ctg ccc acc aac cct gag gag agc tgg cag gtg      327
Glu Leu Thr Gln Val Leu Pro Thr Asn Pro Glu Glu Ser Trp Gln Val
    30                  35                  40
tac agc tct gcc cag gac agc gag ggc agg tgt atc tgc aca gtg gtc      375
Tyr Ser Ser Ala Gln Asp Ser Glu Gly Arg Cys Ile Cys Thr Val Val
45                  50                  55                  60
gcc cca cag cag acc atg tgt tca cgg gat gcc cgc aca aaa cag ctg      423
Ala Pro Gln Gln Thr Met Cys Ser Arg Asp Ala Arg Thr Lys Gln Leu
                65                  70                  75
agg cag cta ctg gag aag gtg cag aac atg tct caa tcc ata gag gtc      471
Arg Gln Leu Leu Glu Lys Val Gln Asn Met Ser Gln Ser Ile Glu Val
            80                  85                  90
ttg gac agg cgg acc cag aga gac ttg cag tac gtg gag aag atg gag      519
Leu Asp Arg Arg Thr Gln Arg Asp Leu Gln Tyr Val Glu Lys Met Glu
        95                  100                 105
aac caa atg aaa gga ctg gag tcc aag ttc aaa cag gtg gag gag agt      567
Asn Gln Met Lys Gly Leu Glu Ser Lys Phe Lys Gln Val Glu Glu Ser
    110                 115                 120
cat aag caa cac ctg gcc agg cag ttt aag gcg ata aaa gcg aaa atg      615
His Lys Gln His Leu Ala Arg Gln Phe Lys Ala Ile Lys Ala Lys Met
125                 130                 135                 140
gat gaa ctt agg cct ttg ata cct gtg ttg gaa gag tac aag gcc gat      663
Asp Glu Leu Arg Pro Leu Ile Pro Val Leu Glu Glu Tyr Lys Ala Asp
                145                 150                 155
gcc aaa ttg gta ttg cag ttt aaa gag gag gtc cag aat ctg acg tca      711
Ala Lys Leu Val Leu Gln Phe Lys Glu Glu Val Gln Asn Leu Thr Ser
            160                 165                 170
gtg ctt aac gag ctg caa gag gaa att ggc gcc tat gac tac gat gaa      759
Val Leu Asn Glu Leu Gln Glu Glu Ile Gly Ala Tyr Asp Tyr Asp Glu
        175                 180                 185
ctt cag agc aga gtg tcc aat ctt gaa gaa agg ctc cgt gca tgc atg      807
Leu Gln Ser Arg Val Ser Asn Leu Glu Glu Arg Leu Arg Ala Cys Met
    190                 195                 200
caa aaa cta gct tgc ggg aag ttg acg ggc atc agt gac ccc gtg act      855
Gln Lys Leu Ala Cys Gly Lys Leu Thr Gly Ile Ser Asp Pro Val Thr
205                 210                 215                 220
gtc aag acc tcc ggc tcg agg ttc gga tcc tgg atg aca gac cct ctc      903
Val Lys Thr Ser Gly Ser Arg Phe Gly Ser Trp Met Thr Asp Pro Leu
                225                 230                 235
gcc cct gaa ggc gat aac cgg gtg tgg tac atg gac ggc tat cac aac      951
Ala Pro Glu Gly Asp Asn Arg Val Trp Tyr Met Asp Gly Tyr His Asn
            240                 245                 250
aac cgc ttc gta cgt gag tac aag tcc atg gtt gac ttc atg aac acg      999
Asn Arg Phe Val Arg Glu Tyr Lys Ser Met Val Asp Phe Met Asn Thr
        255                 260                 265
gac aat ttc acc tcc cac cgt ctc ccc cac ccc tgg tcg ggc acg ggg     1047
Asp Asn Phe Thr Ser His Arg Leu Pro His Pro Trp Ser Gly Thr Gly
    270                 275                 280
cag gtg gtc tac aac ggt tct atc tacttc aac aag ttc cag agc cac      1095
Gln Val Val Tyr Asn Gly Ser Ile Tyr Phe Asn Lys Phe Gln Ser His
285                 290                 295                 300
atc atc atc agg ttt gac ctg aag aca gag acc atc ctc aag acc cgc     1143
Ile Ile Ile Arg Phe Asp Leu Lys Thr Glu Thr Ile Leu Lys Thr Arg
                305                 310                 315
agc ctg gac tat gcc ggt tac aac aac atg tac cac tac gcc tgg ggt     1191
Ser Leu Asp Tyr Ala Gly Tyr Asn Asn Met Tyr His Tyr Ala Trp Gly
            320                 325                 330
ggc cac tcg gac atc gac ctc atg gtg gac gag agc ggg ctg tgg gcc     1239
Gly His Ser Asp Ile Asp Leu Met Val Asp Glu Ser Gly Leu Trp Ala
        335                 340                 345
gtg tac gcc acc aac cag aac gct ggc aac atc gtg gtc agt agg ctg     1287
Val Tyr Ala Thr Asn Gln Asn Ala Gly Asn Ile Val Val Ser Arg Leu
    350                 355                 360
gac ccc gtg tcc ctg cag acc ctg cag acc tgg aac acg agc tac ccc     1335
Asp Pro Val Ser Leu Gln Thr Leu Gln Thr Trp Asn Thr Ser Tyr Pro
365                 370                 375                 380
aag cgc agc gcc ggg gag gcc ttc atc atc tgc ggc acg ctg tac gtc     1383
Lys Arg Ser Ala Gly Glu Ala Phe Ile Ile Cys Gly Thr Leu Tyr Val
                385                 390                 395
acc aac ggc tac tca ggg ggt acc aag gtc cac tat gca tac cag acc     1431
Thr Asn Gly Tyr Ser Gly Gly Thr Lys Val His Tyr Ala Tyr Gln Thr
            400                 405                 410
aat gcc tcc acc tat gaa tac atc gac atc cca ttc cag aac aaa tac     1479
Asn Ala Ser Thr Tyr Glu Tyr Ile Asp Ile Pro Phe Gln Asn Lys Tyr
        415                 420                 425
tcc cac atc tcc atg ctg gac tac aac ccc aag gac cgg gcc ctg tat     1527
Ser His Ile Ser Met Leu Asp Tyr Asn Pro Lys Asp Arg Ala Leu Tyr
    430                 435                 440
gcc tgg aac aac ggc cac cag atc ctc tac aac gtg acc ctc ttc cac     1575
Ala Trp Asn Asn Gly His Gln Ile Leu Tyr Asn Val Thr Leu Phe His
445                 450                 455                 460
gtc atc cgc tcc gac gag ttg tag ctccctcctc ctggaagcca agggcccacg    1629
Val Ile Arg Ser Asp Glu Leu
                465
tcctcaccac aaagggactc ctgtgaaact gctgccaaaa agataccaat aacactaaca   1689
ataccgatct tgaaaaatca tcagcagtgc ggattctgac atcgagggat ggcattacct   1749
ccgtgtttct ccctttcgag ccggcgggcc acagacgtcg gaagaaactc ccgtatttgc   1809
agctggaact gcagcccacg gcgccccggt tttcctcccc gccctgtccc tctctggtca   1869
aacaacatac taaagaggcg aggcaatgac tgttggccag ttctcaccgg ggaaaaaccc   1929
actgttagga tggcatgaac atttccttag atcgtggtca gctccgagga atgtggcgtc   1989
caggctcttt gagagccatg ggctgcaccc ggccgtaggc tagtgtaact cgcatcccat   2049
tgcagtgccg tttcttgact gtgttgctgt ctcttagatt aaccgtgctg aggctccaca   2109
tagctcctgg acctgtgtct agtacatact gaagcgatgg tcagagtgtg tagagtgaag   2169
ttgctgtgcc cacattgttt gaactcgcgt accccgtaga tacattgtgc aacgttcttc   2229
tgttattccc ttgaggtggt aacttcgtat gttcagttta tgcgatgatt gttgtaaatg   2289
caatgccgta gtttggatta ataagtggat ggtttttgtt tctaaaaaga aaaaaaaaat   2349
cagtgttcac ccttatagag acatagtcaa gttcatgttg ataataatca aaggaattac   2409
tctcttcttg ttaaattagc taaatcatgt aaccgcagat aggaagggct cacctgggga   2469
aactctggtt tccgatggga caggaaagtc atacgggcaa cagtatgcgg aaagtacgtt   2529
tttttaagta aaaaacaaag gcaaactttg tactatccag ttatctaagg aacaataaaa   2589
acattaggag aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa   2649
aa                                                              2651
<210>20
<211>467
<212>PRT
<213>人
<400>20
Met Pro Gly Arg Trp Arg Trp Gln Arg Asp Met His Pro Ala Arg Lys
1               5                   10                  15
Leu Leu Ser Leu Leu Phe Leu Ile Leu Met Gly Thr Glu Leu Thr Gln
            20                  25                  30
Val Leu Pro Thr Asn Pro Glu Glu Ser Trp Gln Val Tyr Ser Ser Ala
        35                  40                  45
Gln Asp Ser Glu Gly Arg Cys Ile Cys Thr Val Val Ala Pro Gln Gln
    50                  55                  60
Thr Met Cys Ser Arg Asp Ala Arg Thr Lys Gln Leu Arg Gln Leu Leu
65                  70                  75                  80
Glu Lys Val Gln Asn Met Ser Gln Ser Ile Glu Val Leu Asp Arg Arg
                85                  90                  95
Thr Gln Arg Asp Leu Gln Tyr Val Glu Lys Met Glu Asn Gln Met Lys
            100                 105                 110
Gly Leu Glu Ser Lys Phe Lys Gln Val Glu Glu Ser His Lys Gln His
        115                 120                 125
Leu Ala Arg Gln Phe Lys Ala Ile Lys Ala Lys Met Asp Glu Leu Arg
    130                 135                 140
Pro Leu Ile Pro Val Leu Glu Glu Tyr Lys Ala Asp Ala Lys Leu Val
145                 150                 155                 160
Leu Gln Phe Lys Glu Glu Val Gln Asn Leu Thr Ser Val Leu Asn Glu
                165                 170                 175
Leu Gln Glu Glu Ile Gly Ala Tyr Asp Tyr Asp Glu Leu Gln Ser Arg
            180                 185                 190
Val Ser Asn Leu Glu Glu Arg Leu Arg Ala Cys Met Gln Lys Leu Ala
       195                  200                 205
Cys Gly Lys Leu Thr Gly Ile Ser Asp Pro Val Thr Val Lys Thr Ser
    210                 215                 220
Gly Ser Arg Phe Gly Ser Trp Met Thr Asp Pro Leu Ala Pro Glu Gly
225                 230                 235                 240
Asp Asn Arg Val Trp Tyr Met Asp Gly Tyr His Asn Asn Arg Phe Val
                245                 250                 255
Arg Glu Tyr Lys Ser Met Val Asp Phe Met Asn Thr Asp Asn Phe Thr
            260                 265                 270
Ser His Arg Leu Pro His Pro Trp Ser Gly Thr Gly Gln Val Val Tyr
        275                 280                 285
Asn Gly Ser Ile Tyr Phe Asn Lys Phe Gln Ser His Ile Ile Ile Arg
    290                 295                 300
Phe Asp Leu Lys Thr Glu Thr Ile Leu Lys Thr Arg Ser Leu Asp Tyr
305                 310                 315                 320
Ala Gly Tyr Asn Asn Met Tyr His Tyr Ala Trp Gly Gly His Ser Asp
                325                 330                 335
Ile Asp Leu Met Val Asp Glu Ser Gly Leu Trp Ala Val Tyr Ala Thr
            340                 345                 350
Asn Gln Asn Ala Gly Asn Ile Val Val Ser Arg Leu Asp Pro Val Ser
        355                 360                 365
Leu Gln Thr Leu Gln Thr Trp Asn Thr Ser Tyr Pro Lys Arg Ser Ala
    370                 375                 380
Gly Glu Ala Phe Ile Ile Cys Gly Thr Leu Tyr Val Thr Asn Gly Tyr
385                 390                 395                 400
Ser Gly Gly Thr Lys Val His Tyr Ala Tyr Gln Thr Asn Ala Ser Thr
                405                 410                 415
Tyr Glu Tyr Ile Asp Ile Pro Phe Gln Asn Lys Tyr Ser His Ile Ser
            420                 425                 430
Met Leu Asp Tyr Asn Pro Lys Asp Arg Ala Leu Tyr Ala Trp Asn Asn
        435                 440                 445
Gly His Gln Ile Leu Tyr Asn Val Thr Leu Phe His Val Ile Arg Ser
    450                 455                 460
Asp Glu Leu
465
<210>21
<211>2087
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(106)..(1023)
<400>21
tttctccggg aaccgtgccg ggagagcgcg cggtgctgga gccgcaccgg gtggccgaag    60
cagaagactt tccggaagct gctgggggat gtctgactag ctctc atg gag ctc cac    117
                                                  Met Glu Leu His
                                                  1
tac ctt gct aag aag agc aac cag gca gac ctc tgt gat gcc agg gac      165
Tyr Leu Ala Lys Lys Ser Asn Gln Ala Asp Leu Cys Asp Ala Arg Asp
5                   10                  15                  20
tgg agt tca aga ggg ctg cct ggt gac cag gca gat aca gca gcc aca      213
Trp Ser Ser Arg Gly Leu Pro Gly Asp Gln Ala Asp Thr Ala Ala Thr
                25                   30                 35
aga gct gct ctc tgc tgt cag aaa cag tgt gca tcc acc cca aga gca      261
Arg Ala Ala Leu Cys Cys Gln Lys Gln Cys Ala Ser Thr Pro Arg Ala
            40                  45                  50
acc gag atg gaa ggg tct aaa ctt agt tct tct cca gca tcc ccc tcc      309
Thr Glu Met Glu Gly Ser Lys Leu Ser Ser Ser Pro Ala Ser Pro Ser
        55                  60                  65
tcc tct ctg caa aac agt act ctt cag cca gat gcc ttt cca cca gga      357
Ser Ser Leu Gln Asn Ser Thr Leu Gln Pro Asp Ala Phe Pro Pro Gly
    70                  75                  80
ctt ctc cac tca ggg aac aac caa ata aca gcg gaa cgg aaa gtc tgt      405
Leu Leu His Ser Gly Asn Asn Gln Ile Thr Ala Glu Arg Lys Val Cys
85                  90                  95                  100
aac tgc tgc agc cag gaa tta gaa act tct ttt acc tat gtg gac aaa      453
Asn Cys Cys Ser Gln Glu Leu Glu Thr Ser Phe Thr Tyr Val Asp Lys
                105                 110                 115
aac atc aac ttg gag cag cgg aac cgg agc tcg cca tca gca aaa ggg      501
Asn Ile Asn Leu Glu Gln Arg Asn Arg Ser Ser Pro Ser Ala Lys Gly
            120                 125                 130
cat aat cac cct ggg gag ctt ggc tgg gaa aat cca aat gag tgg tcc      549
His Asn His Pro Gly Glu Leu Gly Trp Glu Asn Pro Asn Glu Trp Ser
        135                 140                 145
caa gag gct gcc ata tct ttg ata tct gaa gag gag gat gat aca agt      597
Gln Glu Ala Ala Ile Ser Leu Ile Ser Glu Glu Glu Asp Asp Thr Ser
    150                 155                 160
tca gaa gcc acg tct tca ggg aag tct ata gac tat ggt ttc atc agc      645
Ser Glu Ala Thr Ser Ser Gly Lys Ser Ile Asp Tyr Gly Phe Ile Ser
165                 170                 175                 180
gcc atc ttg ttc ttg gtc act ggg atc ctg ctc gtg atc atc tct tac      693
Ala Ile Leu Phe Leu Val Thr Gly Ile Leu Leu Val Ile Ile Ser Tyr
                185                 190                 195
atc gtc cca cgg gaa gtg act gtg gac ccc aac act gtg gca gcc cgg      741
Ile Val Pro Arg Glu Val Thr Val Asp Pro Asn Thr Val Ala Ala Arg
            200                 205                 210
gag atg gag cgc ctg gag aag gag agt gcg agg ctg ggg gct cac ctg      789
Glu Met Glu Arg Leu Glu Lys Glu Ser Ala Arg Leu Gly Ala His Leu
        215                 220                 225
gac cgc tgt gtg att gcg ggg ctc tgc ctc ctc acg ctg ggg ggc gtc      837
Asp Arg Cys Val Ile Ala Gly Leu Cys Leu Leu Thr Leu Gly Gly Val
    230                 235                  240
atc ctg tcc tgc ttg tta atg atg tcc atg tgg aag ggg gag ctc tat      885
Ile Leu Ser Cys Leu Leu Met Met Ser Met Trp Lys Gly Glu Leu Tyr
245                 250                 255                 260
cgt cga aac aga ttt gcc tct tcc aaa gag tct gca aaa ctc tat ggt      933
Arg Arg Asn Arg Phe Ala Ser Ser Lys Glu Ser Ala Lys Leu Tyr Gly
                265                 270                 275
tct ttc aac ttc agg atg aaa acc agc acg aat gaa aac act ctg gaa      981
Ser Phe Asn Phe Arg Met Lys Thr Ser Thr Asn Glu Asn Thr Leu Glu
            280                 285                 290
ctg tcc ttg gta gag gaa gat gcg ctt gct gta cag agt taa             1023
Leu Ser Leu Val Glu Glu Asp Ala Leu Ala Val Gln Ser
        295                 300                 305
ttctggttgt gaatatcttg agagtctgcc ttggcatttt ataatatgaa aaaagttaat   1083
ttataaaaat tcacagtgca atttatttgc ctggcaagaa aagtttattt cacaaaccaa   1143
cagccagtaa gtgtttttgt tctctatgtg tcttctattt agaagaaaag ccatgtaaga   1203
tgtataagaa accacaacca gccacaccta tccttctgaa gagctgaagg ctaattaatc   1263
tgtaatggcc aagaacttct acttcgatag aaaaatattt ctaatgaccc agtctacaaa   1323
ttatttcttt tacacaaata tatgatgtta ttctttggac actaggtggt cctacacaca   1383
gtaggatcaa ttgctaatct actttgtgaa aaagaactaa gcactaatca ataataaggc   1443
ttacatctaa ttctcaaagg tgcttatcca ttttcttgct aaattatcct tcttgtaatt   1503
tggctaaaca ctaaaacatg gaatttttag tttgaatatt ttgaagtttg aggatgttgg   1563
gctttcctta ttgtaaaaaa tgttatgttt gaaattattc ctgttttcaa aaatggtaat   1623
taagtcatta ggataaactt tctaataaaa aaaaattatg taaatcattg taagaccaat   1683
gtgaatttaa accacagtgt tggtgccaga tattagccag ggtcacaggc tcttttttaa   1743
aatgaagtca aattagttac tgatataagt tttatatttt gtgattttgc catcatactg   1803
gttatctgtg ctcttgaagt ctgctggttc tcacaccagc agcaagaggc aaggcatgag   1863
acattttaaa tatatttcca gacatctaaa catctagaca ggcctgagtc atgattggct   1923
ctggtgtgct tccaggtaac atcttgttat tgctgtttgg ggaaaaccac caatagaatt   1983
gcagctagac ttttggggac tgtgcctcgc aggctgtatc acttgctgta ggccaagcaa    2043
cgagcacttc cctcatggta gcaacagtcc ttaagcccaa agcc                     2087
<210>22
<211>305
<212>PRT
<213>人
<400>22
Met Glu Leu His Tyr Leu Ala Lys Lys Ser Asn Gln Ala Asp Leu Cys
1               5                   10                  15
Asp Ala Arg Asp Trp Ser Ser Arg Gly Leu Pro Gly Asp Gln Ala Asp
            20                  25                  30
Thr Ala Ala Thr Arg Ala Ala Leu Cys Cys Gln Lys Gln Cys Ala Ser
        35                  40                  45
Thr Pro Arg Ala Thr Glu Met Glu Gly Ser Lys Leu Ser Ser Ser Pro
    50                  55                  60
Ala Ser Pro Ser Ser Ser Leu Gln Asn Ser Thr Leu Gln Pro Asp Ala
65                  70                  75                  80
Phe Pro Pro Gly Leu Leu His Ser Gly Asn Asn Gln Ile Thr Ala Glu
                85                  90                  95
Arg Lys Val Cys Asn Cys Cys Ser Gln Glu Leu Glu Thr Ser Phe Thr
            100                 105                 110
Tyr Val Asp Lys Asn Ile Asn Leu Glu Gln Arg Asn Arg Ser Ser Pro
        115                 120                 125
Ser Ala Lys Gly His Asn His Pro Gly Glu Leu Gly Trp Glu Asn Pro
    130                 135                 140
Asn Glu Trp Ser Gln Glu Ala Ala Ile Ser Leu Ile Ser Glu Glu Glu
145                 150                 155                 160
Asp Asp Thr Ser Ser Glu Ala Thr Ser Ser Gly Lys Ser Ile Asp Tyr
                165                 170                 175
Gly Phe Ile Ser Ala Ile Leu Phe Leu Val Thr Gly Ile Leu Leu Val
            180                 185                 190
Ile Ile Ser Tyr Ile Val Pro Arg Glu Val Thr Val Asp Pro Asn Thr
        195                 200                 205
Val Ala Ala Arg Glu Met Glu Arg Leu Glu Lys Glu Ser Ala Arg Leu
    210                 215                 220
Gly Ala His Leu Asp Arg Cys Val Ile Ala Gly Leu Cys Leu Leu Thr
225                 230                 235                 240
Leu Gly Gly Val Ile Leu Ser Cys Leu Leu Met Met Ser Met Trp Lys
                245                 250                 255
Gly Glu Leu Tyr Arg Arg Asn Arg Phe Ala Ser Ser Lys Glu Ser Ala
            260                 265                 270
Lys Leu Tyr Gly Ser Phe Asn Phe Arg Met Lys Thr Ser Thr Asn Glu
        275                 280                 285
Asn Thr Leu Glu Leu Ser Leu Val Glu Glu Asp Ala Leu Ala Val Gln
    290                 295                 300
Ser
305
<210>23
<211>1882
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(534)..(1505)
<400>23
ggcacgaggg ttagattagt ctgaagccgc caccagcccc aggcccccgt gcagaagaaa    60
agcgggaggg aacggcggag gccgccgctg ccctgcaccg ccctcctgga ggccacttgg    120
agagtccggc cccgaggagg ccatggccac aagtgcccac agctggcccc aggttgccag    180
cgtcgctaca gcccagacca aggcagaata atctccggat gagctggtgg caccgctgag    240
cctttggtct caccagggct tcctgttgct ggcaggcggg gtggagcgga gctgctggga    300
ggctgctgga taggagaggg gtcacggctg cggaagagga ggttcttcgg gacacccgtg    360
gatggacacg gcaaggaaac accaggccaa ccacagctgg ggataaaata gcacaaccac    420
accctgccgt ccagcgcctc ccagcctgtg ccccttccta gtaccaccag caaccatcaa    480
tcccgtctcc tcctgcctcc tctcctgcaa tccaccccgc cacgactatc gcc atg       536
                                                           Met
                                                           1
gca gcc ctg atc gca gag aac ttc cgc ttc ctg tca ctt ttc ttc aag      584
Ala Ala Leu Ile Ala Glu Asn Phe Arg Phe Leu Ser Leu Phe Phe Lys
            5                   10                  15
agc aag gat gtg atg att ttc aac ggc ctg gtg gca ctg ggc acg gtg      632
Ser Lys Asp Val Met Ile Phe Asn Gly Leu Val Ala Leu Gly Thr Val
        20                  25                  30
ggc agc cag gag ctg ttc tct gtg gtg gcc ttc cac tgc ccc tgc tcg      680
Gly Ser Gln Glu Leu Phe Ser Val Val Ala Phe His Cys Pro Cys Ser
    35                  40                  45
ccg gcc cgg aac tac ctg tac ggg ctg gcg gcc atc ggc gtg ccc gcc      728
Pro Ala Arg Asn Tyr Leu Tyr Gly Leu Ala Ala Ile Gly Val Pro Ala
50                  55                  60                  65
ctg gtg ctc ttc atc att ggc atc atc ctc aac aac cac acc tgg aac      776
Leu Val Leu Phe Ile Ile Gly Ile Ile Leu Asn Asn His Thr Trp Asn
                70                  75                  80
ctc gtg gcc gag tgc cag cac cgg agg acc aag aac tgc tcc gcc gcc      824
Leu Val Ala Glu Cys Gln His Arg Arg Thr Lys Asn Cys Ser Ala Ala
            85                  90                  95
ccc acc ttc ctc ctt cta agc tcc atc ctg gga cgt gcg gct gtg gcc      872
Pro Thr Phe Leu Leu Leu Ser Ser Ile Leu Gly Arg Ala Ala Val Ala
        100                 105                 110
cct gtc acc tgg tct gtc atc tcc ctg ctg cgt ggt gag gct tat gtc      920
Pro Val Thr Trp Ser Val Ile Ser Leu Leu Arg Gly Glu Ala Tyr Val
    115                 120                 125
tgt gct ctc agt gag ttc gtg gac cct tcc tca ctc acg gcc agg gaa      968
Cys Ala Leu Ser Glu Phe Val Asp Pro Ser Ser Leu Thr Ala Arg Glu
130                 135                 140                 145
gag cacttc cca tca gcc cac gcc act gaa atc ctg gcc agg ttc ccc      1016
Glu His Phe Pro Ser Ala His Ala Thr Glu Ile Leu Ala Arg Phe Pro
                150                 155                 160
tgc aag gag aac cct gac aac ctg tca gac ttc cgg gag gag gtc agc     1064
Cys Lys Glu Asn Pro Asp Asn Leu Ser Asp Phe Arg Glu Glu Val Ser
            165                 170                 175
cgc agg ctc agg tat gag tcc cag ctc ttt gga tgg ctg ctc atc ggc     1112
Arg Arg Leu Arg Tyr Glu Ser Gln Leu Phe Gly Trp Leu Leu Ile Gly
        180                 185                 190
gtg gtg gcc atc ctg gtg ttc ctg acc aag tgc ctc aag cat tac tgc     1160
Val Val Ala Ile Leu Val Phe Leu Thr Lys Cys Leu Lys His Tyr Cys
    195                 200                 205
tca cca ctc agc tac cgc cag gag gcc tac tgg gcg cag tac cgc gcc     1208
Ser Pro Leu Ser Tyr Arg Gln Glu Ala Tyr Trp Ala Gln Tyr Arg Ala
210                 215                 220                 225
aat gag gac cag ctg ttc cag cgc acg gcc gag gtg cac tct cgg gtg     1256
Asn Glu Asp Gln Leu Phe Gln Arg Thr Ala Glu Val His Ser Arg Val
                230                 235                 240
ctc gct gcc aac aat gtg cgc cgc ttc ttt ggc ttt gtg gcg ctc aac     1304
Leu Ala Ala Asn Asn Val Arg Arg Phe Phe Gly Phe Val Ala Leu Asn
            245                 250                 255
aag gat gat gag gaa ctg att gcc aac ttc cca gtg gaa ggc acg cag     1352
Lys Asp Asp Glu Glu Leu Ile Ala Asn Phe Pro Val Glu Gly Thr Gln
        260                 265                 270
cca cgg cca cag tgg aat gcc atc acc ggc gtc tac ttg tac cgt gag     1400
Pro Arg Pro Gln Trp Asn Ala Ile Thr Gly Val Tyr Leu Tyr Arg Glu
    275                 280                 285
aac cag ggc ctc cca ctc tac agc cgc ctg cac aag tgg gcc cag ggt     1448
Asn Gln Gly Leu Pro Leu Tyr Ser Arg Leu His Lys Trp Ala Gln Gly
290                 295                 300                 305
ctg gca ggc aac ggc gcg gcc cct gac aac gtg gag atg gcc ctg ctc     1496
Leu Ala Gly Asn Gly Ala Ala Pro Asp Asn Val Glu Met Ala Leu Leu
                310                 315                 320
ccc tcc taa ggaggtgctt cccatgctct ttgtaaatgg cactacttgg             1545
Pro Ser
tcccaaactg aaccccactg cttgctcaca tccatatcag aaggggattt ttaaaaaact   1605
gttatcttct tggccagggg aaaggaccac aaggcaatct ggggtgtgga cagacccagt   1665
agacaatgga agccccagcc agcagggcca ggtgacagtg aagctcacca gtgggctcct   1725
ttatggtact ctatgcagtt aacatgtatc tagctgcata gggacaccca gcgcagcagt   1785
gcaccactgg gaagtggcct ccagtgcagc ctctggcctt attttatata tttaaatttt   1845
tgataaagtt tttcttacta aaaggaaaaa aaaaaaa                            1882
<210>24
<211>323
<212>PRT
<213>人
<400>24
Met Ala Ala Leu Ile Ala Glu Asn Phe Arg Phe Leu Ser Leu Phe Phe
1               5                   10                  15
Lys Ser Lys Asp Val Met Ile Phe Asn Gly Leu Val Ala Leu Gly Thr
            20                  25                  30
Val Gly Ser Gln Glu Leu Phe Ser Val Val Ala Phe His Cys Pro Cys
        35                  40                  45
Ser Pro Ala Arg Asn Tyr Leu Tyr Gly Leu Ala Ala Ile Gly Val Pro
    50                  55                  60
Ala Leu Val Leu Phe Ile Ile Gly Ile Ile Leu Asn Asn His Thr Trp
65                  70                  75                  80
Asn Leu Val Ala Glu Cys Gln His Arg Arg Thr Lys Asn Cys Ser Ala
                85                  90                  95
Ala Pro Thr Phe Leu Leu Leu Ser Ser Ile Leu Gly Arg Ala Ala Val
            100                 105                 110
Ala Pro Val Thr Trp Ser Val Ile Ser Leu Leu Arg Gly Glu Ala Tyr
        115                 120                 125
Val Cys Ala Leu Ser Glu Phe Val Asp Pro Ser Ser Leu Thr Ala Arg
    130                 135                 140
Glu Glu His Phe Pro Ser Ala His Ala Thr Glu Ile Leu Ala Arg Phe
145                 150                 155                 160
Pro Cys Lys Glu Asn Pro Asp Asn Leu Ser Asp Phe Arg Glu Glu Val
                165                 170                 175
Ser Arg Arg Leu Arg Tyr Glu Ser Gln Leu Phe Gly Trp Leu Leu Ile
            180                 185                 190
Gly Val Val Ala Ile Leu Val Phe Leu Thr Lys Cys Leu Lys His Tyr
        195                 200                 205
Cys Ser Pro Leu Ser Tyr Arg Gln Glu Ala Tyr Trp Ala Gln Tyr Arg
    210                 215                 220
Ala Asn Glu Asp Gln Leu Phe Gln Arg Thr Ala Glu Val His Ser Arg
225                 230                 235                 240
Val Leu Ala Ala Asn Asn Val Arg Arg Phe Phe Gly Phe Val Ala Leu
                245                 250                 255
Asn Lys Asp Asp Glu Glu Leu Ile Ala Asn Phe Pro Val Glu Gly Thr
            260                 265                 270
Gln Pro Arg Pro Gln Trp Asn Ala Ile Thr Gly Val Tyr Leu Tyr Arg
        275                 280                 285
Glu Asn Gln Gly Leu Pro Leu Tyr Ser Arg Leu His Lys Trp Ala Gln
    290                 295                 300
Gly Leu Ala Gly Asn Gly Ala Ala Pro Asp Asn Val Glu Met Ala Leu
305                 310                 315                 320
Leu Pro Ser
<210>25
<211>673
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(135)..(467)
<400>25
cttccgagca agatggcgcc gcgggcattt cttccactgc ccgtctgagg gaacgctaag    60
tagtgtgtcc ggcgccgtgt tccagctccg cgttgttccg cgagaaagcg agaggccgag    120
cctgggctgg tgcg atg gcc gcg gtg gtg gcc aag cgg gaa ggg ccg ccg      170
                Met Ala Ala Val Val Ala Lys Arg Glu Gly Pro Pro
                1               5                   10
ttc atc agc gag gcg gcc gtg cgg ggc aac gcc gcc gtc ctg gat tat      218
Phe Ile Ser Glu Ala Ala Val Arg Gly Asn Ala Ala Val Leu Asp Tyr
        15                  20                  25
tgc cgg acc tcg gtg tca gcg ctg tcg ggg gcc acg gcc ggc atc ctc      266
Cys Arg Thr Ser Val Ser Ala Leu Ser Gly Ala Thr Ala Gly Ile Leu
    30                  35                  40
ggc ctc acc ggc ctc tac ggc ttc atc ttc tac ctg ctc gcc tcc gtc      314
Gly Leu Thr Gly Leu Tyr Gly Phe Ile Phe Tyr Leu Leu Ala Ser Val
45                  50                  55                  60
ctg ctc tcc ctg ctc ctc att ctc aag gcg gga agg agg tgg aac aaa      362
Leu Leu Ser Leu Leu Leu Ile Leu Lys Ala Gly Arg Arg Trp Asn Lys
                65                  70                  75
tat ttc aaa tca cgg aga cct ctc ttt aca gga ggc ctc atc ggg ggc      410
Tyr Phe Lys Ser Arg Arg Pro Leu Phe Thr Gly Gly Leu Ile Gly Gly
             80                 85                  90
ctc ttc acc tac gtc ctg ttc tgg acg ttc ctc tac ggc atg gtg cac      458
Leu Phe Thr Tyr Val Leu Phe Trp Thr Phe Leu Tyr Gly Met Val His
        95                  100                 105
gtc tac tga aatgggggcc cgggggactt ttttaaaaaa ccagatcggg              507
Val Tyr
    110
aggactgtgg ccagcaatta acaccatgta gacttcctta gttcttaagt ggttgaattc    567
gctgcttgtt ctgtaacgtt ataaataatt tatatctgaa gacggagagc ctgtaatatt    627
cttcagatta aatgaagcgt gagacaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaa                   673
<210>26
<211>110
<212>PRT
<213>人
<400>26
Met Ala Ala Val Val Ala Lys Arg Glu Gly Pro Pro Phe Ile Ser Glu
1               5                   10                  15
Ala Ala Val Arg Gly Asn Ala Ala Val Leu Asp Tyr Cys Arg Thr Ser
            20                  25                  30
Val Ser Ala Leu Ser Gly Ala Thr Ala Gly Ile Leu Gly Leu Thr Gly
        35                  40                  45
Leu Tyr Gly Phe Ile Phe Tyr Leu Leu Ala Ser Val Leu Leu Ser Leu
    50                  55                  60
Leu Leu Ile Leu Lys Ala Gly Arg Arg Trp Asn Lys Tyr Phe Lys Ser
65                  70                  75                  80
Arg Arg Pro Leu Phe Thr Gly Gly Leu Ile Gly Gly Leu Phe Thr Tyr
                85                  90                  95
Val Leu Phe Trp Thr Phe Leu Tyr Gly Met Val His Val Tyr
            100                 105                 110

Claims (16)

1.一种分离的多核苷酸,其特征在于,所述多核苷酸含有编码具有诱导细胞凋亡功能的多肽的核苷酸序列,该核苷酸序列选自:
(a)与编码含有SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20、SEQ IDNO:22、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:26的氨基酸序列的多肽的多核苷酸有至少70%相似性的多核苷酸;
(b)编码含有与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20、SEQ IDNO:22、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:26的氨基酸序列有至少70%相似性的氨基酸序列的多肽的多核苷酸;
(c)与(a)或(b)的多核苷酸互补的多核苷酸。
2.如权利要求1所述的多核苷酸,其特征在于,所述多核苷酸编码的多肽具有选自下组的氨基酸序列:SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ IDNO:12、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:26。
3.如权利要求1所述的多核苷酸,其特征在于,所述多核苷酸的序列与选自下组的核苷酸序列有至少85%相似性:
(a)SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ IDNO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25的编码区序列或全长序列;
(b)在遗传密码简并范围内相应于(a)中提到的序列的至少一个序列;
(c)与(a)或(b)中提到的序列互补的序列杂交的至少一个序列。
4.如权利要求3所述的多核苷酸,其特征在于,所述多核苷酸的序列选自SEQ ID NO:1、SEQ IDNO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ IDNO:15、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25的编码区序列或全长序列。
5.权利要求1所述的多核苷酸编码的多肽,其特征在于,所述多肽包含选自下组中的氨基酸序列的多肽:SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQID NO:12、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:26;或与以上任一氨基酸序列具有至少90%相似性的多肽;或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。
6.权利要求5所述的多肽,其特征在于,所述多肽具有选自下组的氨基酸序列:SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:26。
7.一种载体,其特征在于,所述载体含有权利要求1所述的多核苷酸。
8.一种遗传工程宿主细胞,其特征在于,所述宿主细胞选自:
(a)用权利要求7所述的载体转化或转导的宿主细胞;
(b)用权利要求1所述的多核苷酸转化或转导的宿主细胞。
9.一种抗体,其特征在于,所述抗体是能与权利要求5所述的多肽特异性结合的抗体。
10.一种核酸片段,其特征在于,所述核酸片段含有权利要求1所述的任一多核苷酸中8-100个连续的核苷酸。
11.权利要求1所述的多核苷酸在诱导细胞凋亡中的应用,其特征在于所述多核苷酸在宿主细胞中外源表达会诱导细胞凋亡。
12.权利要求11所述的应用,其特征在于所述的宿主细胞选自权利要求8所述的宿主细胞。
13.权利要求1所述的多核苷酸或权利要求5所述的多肽在制备预防和/或治疗与人体细胞凋亡有关的疾病的药物中的用途。
14.根据权利要求13所述的用途,其中所述疾病选自如艾滋病、神经系统的退行性病变等自身免疫疾病和肿瘤。
15.含有权利要求5所述的多肽和药学上可接受的载体的药物组合物。
16.一种自身免疫疾病或肿瘤的体外检测方法,其特征在于,利用权利要求9所述的抗体或权力要求10所述的核酸片段来检测宿主样品中的多肽的存在或水平。
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