CN1706454A - 一种具有柴胡和多霉素协同作用的抗癌药物组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种具有柴胡和多霉素协同作用的抗癌药物组合物,其特征是含有多霉素和柴胡提取物,其中多霉素和柴胡提取物的质量比是1∶26.9~1724.1,所述的柴胡提取物的制备方法是:将柴胡用溶剂浸泡提取,然后分离出上清液和沉淀物,然后将上清液去除水分后干燥,得到柴胡提取物。本发明的抗癌药物组合物,有效地抑制了癌细胞的生长,与单独使用多霉素相比,由于柴胡提取物的抗癌协同作用因而降低了多霉素的临床应用的剂量,从而降低了多霉素的毒副作用,并且调节和降低了癌细胞对多霉素抗药性增加的速率,因而提高了多霉素的使用效率,更有效地抑制了癌细胞的生长。另外本发明药物组合物可工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种抗癌药物组合物,具体来说是涉及具有柴胡和多霉素协同作用的抗癌药物组合物。
背景技术
大多数的有抗癌作用的西药是通过和癌细胞内活跃的DNA或相关的酶反应使DNA链断裂,或是形成自由基,或是改变细胞的通透性等等。然而这一类的西药在使用时存在着两个问题:一是对病人具有较强的毒副作用,比如免疫抑制作用,心脏毒性等;二是癌细胞对抗癌药物具有不断增强的抗药性。因此解决或者降低这两方面的负面效应,对不断增多的癌症病人是一个福音。其中多霉素(doxorubicin)是一种广泛应用于治疗乳腺癌,肺癌等多种恶性肿瘤细胞所引起的癌症药物,但是同样存在上面所说的两个问题。根据文献(Chou T C,Talalay P.Quantitative analysis of dose-effect relationships:the combined effects of multipledrugs or enzyme inhibitors.Adv Enzyme Regul,1984,22:27-55.)的记载,不同药物的协同作用能提高相应药物的使用效果。
中国传统中药资源非常丰富,有效和合理地开发这些生物学资源是解决目前世界上天然活性产物开发研究瓶颈的最有效的办法,研究出中药与西药的协同作用并加以应用是其中有效的途径。
柴胡是多种中药制剂中的有效成分,对治疗上呼吸道感染、寒热、胸闷、呕吐、急性水肿性胰腺炎、单纯性胃炎、急性胆囊炎、胆石症、急性肾盂、肾炎、无黄胆型肝炎都有显著疗效,广泛用于消炎,镇痛和抗病毒感染,但未见柴胡用作抗癌药物。
发明内容
本发明的目的在于开发出一种具有柴胡和多霉素协同作用的抗癌药物组合物,更有效的抑制癌细胞的生长,同时,使多霉素的毒副作用和癌细胞抗药性增加速率得以降低。
本发明将一定比例的柴胡提取物和多霉素混合,生成的抗癌药物组合物有效地抑制了癌细胞的生长,中和了多霉素的毒副作用,同时,降低癌细胞对多霉素的抗药性增加速率,从而实现了本发明的目的。
本发明涉及到一种具有柴胡和多霉素协同作用的抗癌药物组合物,其特征是含有多霉素和柴胡提取物,其中多霉素和柴胡提取物的质量比是1∶26.9~1724.1,所述的柴胡提取物的制备方法包括以下的步骤:
(1)将柴胡用溶剂浸泡提取,然后分离出上清液和沉淀物;
(2)将上清液去除水分后干燥,得到柴胡提取物。
本发明的优选条件是:所述的多霉素和柴胡提取物的质量比最好是1∶107~216,所述的柴胡提取物的制备方法中,步骤(1)所述的柴胡可以是新鲜、半干或干燥的柴胡等,所述的溶剂可以是水、甲醇、乙醇、丙酮、乙醚、氯仿或乙酸乙酯等,并最好按照每10mL溶剂加入1g干燥柴胡的比例进行浸泡,浸泡提取可以在常温或加热进行,所述的分离可以采用常规的分离方法例如离心分离等,所述的沉淀物最好再次提取,即将沉淀物在-70℃冰冻,缓慢融冰后加水煮沸,分离取出上清液,两次分离出的上清液一起进行步骤(2)的处理;步骤(2)所述的上清液去除水分和干燥可以采用通常的方法,例如可以采用减压蒸发或用溶剂乙酸乙酯、乙醚、氯仿等萃取后减压蒸馏等。
本发明的抗癌药物组合物还可以含有一种或多种药学上可接受的载体,所述的药学上可接受的载体是指药学领域常规的药物载体可以是稀释剂如水等,填充剂如淀粉、蔗糖等,粘合剂,润湿剂,甜味剂等。
本发明的药物组合物可以采用通常的方法制备,可以使用通常的药物剂型,各种剂型可以按照药物领域的常规方法制备。
本发明的抗癌药物组合物,有效地抑制了癌细胞的生长,与单独使用多霉素相比,由于柴胡提取物的抗癌协同作用从而降低了多霉素的临床应用的剂量,降低了多霉素的毒副作用,而且调节和降低了癌细胞对多霉素抗药性增加的速率,提高了多霉素的使用效率。当柴胡提取物的提取方法按比例扩大时,可以形成大规模制备用于工业化药物生产。
柴胡和多霉素在本发明的质量比范围内具有协同作用,在不同浓度下多霉素和柴胡提取物对人乳腺癌细胞生长抑制试验中发现,在柴胡提取物浓度为0.0625mg/mL时,可以观察到轻微的协同增效作用,体现在细胞抑制率上比单独使用多霉素略有增加;随着柴胡提取物浓度增加,和多霉素配成的药物组合物对人乳腺癌细胞的抑制率超过了单独使用多霉素的一倍以上,从有效抑制癌细胞又不损害正常细胞考虑,其中以0.125mg/mL柴胡提取物和0.58~1.16μg/mL多霉素的混合物(多霉素和柴胡提取物的质量比为1∶107~216)协同效果最佳。柴胡提取物和多霉素对人乳腺癌细胞均具有不同程度的细胞毒性,使用GraphPad Prism 4软件包(San Diego,CA)进行统计学分析,从八个不同浓度药物的细胞生长率中计算出供试样品的IC50值,其中柴胡提取物对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的IC50为0.226mg/mL,多霉素IC50为1.728μg/mL。而当柴胡丙酮提取物和多霉素浓度超出本发明限制的范围时,供试细胞全部死亡。
具体实施方式
以下的实施例是对本发明的进一步说明,但本发明不限于下述实施例。
下述实施例中的ER和PR双阴性的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231及ER和PR双阳性的人乳腺癌细胞株MCF-7均购自美国ATCC。
实施例1:柴胡提取物的制备
取1g新鲜柴胡,用10mL 40%丙酮常温浸泡,离心后分开上清液和沉淀物。对沉淀物再次提取,取沉淀物在-70℃冰冻,缓慢融冰后加水煮沸,再次取上清液。将两次的上清液混合后用乙酸乙酯萃取并减压蒸馏干燥,得到217mg柴胡丙酮提取物。所得柴胡丙酮提取物配成25%水溶液。
实施例2:柴胡提取物的制备
取1g干燥柴胡放入10mL水中,在常温下浸泡并煮沸,离心后分开上清液和沉淀物。将上清液用乙酸乙酯萃取后减压蒸馏干燥,得到279mg柴胡沸水提取物,再配成25%水溶液备用。
实施例3:柴胡提取物的制备
取1g干燥的柴胡,用10mL 50%乙醇浸泡3~12小时内缓慢加热到70℃,离心后分开上清液和沉淀物。对沉淀物再次提取,取沉淀物在-70℃冰冻,缓慢融冰后加水煮沸,再分离出上清液。将两次分离的上清液用乙酸乙酯萃取后减压蒸馏干燥,得到249mg柴胡乙醇提取物,并配成25%水溶液备用。
实施例4:不同浓度下多霉素和柴胡丙酮提取物对人乳腺癌细胞生长抑制试验
将人乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞培养在含10%胎牛血清、1×105U/L青霉素、100mg/L链霉素、2g NaHCO3和0.3g谷胺酰胺的RPMI1640培养液内,人乳腺癌细胞株MCF-7细胞培养在含10%胎牛血清、1×105U/L青霉素、100mg/L链霉素、2g NaHCO3和0.3g谷胺酰胺的Dulbecco改良的Eagle培养液内(DMEM;Gibco BRL Grand Island,NY),饱和湿度、37℃和5%CO2浓度下培养至对数生长期和80%融合度后,以0.25%胰酶溶液消化,用含10%新生牛血清(Gibco BRL)的相应培养液制成单细胞悬液,进行细胞计数后,将细胞浓度调整为5×104个细胞/mL.以每孔100μL接种于96孔板,培养24h.将已贴壁的细胞分组,每组2个平行孔。一组为不加药组,其余组分别加入实施例1制备的柴胡丙酮提取物或其25%的溶液和供试多霉素,柴胡提取物浓度分别调节至0.0625mg/mL、0.125mg/mL、0.250mg/mL、0.500mg/mL,多霉素浓度分别调节至0.29μg/mL,0.58μg/mL,1.16μg/mL,和2.32μg/mL,药物组分别按上述浓度进行单独和混合试验,混合浓度组合及其中的多霉素和柴胡提取物的质量比见表1。同时以不接种细胞、只加100μL培养液的孔作空白对照。然后将细胞置CO2培养箱中继续培养48~72h。每孔加20μL 5mg/mL四氮唑(MTT)无血清培养液,37℃下培养4h后去掉上清液,加入100μL DMSO,在自动酶标仪(DYNEX Technologies,Chantilly,VA)上570nm波长处测定光吸收值,计算细胞存活率,结果见表2。
表1 不同浓度的多霉素和柴胡提取物组合中多霉素和柴胡提取物的质量比
多霉素浓度(μg/mL) | 柴胡提取液的浓度(mg/mL) | |||
0.0625 | 0.125 | 0.25 | 0.5 | |
0.29 | 1∶216 | 1∶431 | 1∶862 | 1∶1724.1 |
0.58 | 1∶107.8 | 1∶216 | 1∶431 | 1∶862 |
1.16 | 1∶54 | 1∶107.8 | 1∶216 | 1∶431 |
2.32 | 1∶26.9 | 1∶54 | 1∶107.8 | 1∶216 |
表2 不同浓度下多霉素和柴胡丙酮提取物对人乳腺癌细胞生长率(%)的影响
多霉素浓度(μg/mL) | 柴胡丙酮提取物浓度(mg/mL) | ||||
0 | 0.0625 | 0.125 | 0.25 | 0.5 | |
0.0 | 100.000 | 97.479 | 102.271 | 49.417 | 0 |
0.29 | 66.485 | 58.276 | 37.813 | 8.376 | 2.486 |
0.58 | 57.163 | 43.527 | 22.259 | 12.624 | 0 |
1.16 | 32.641 | 29.336 | 15.182 | 6.158 | 0 |
2.32 | 21.598 | 17.360 | 11.825 | 0 | 0 |
实施例5:不同浓度下多霉素和柴胡水提取物对人乳腺癌细胞生长抑制试验
按照实施例4的试验方法,仅将试验药物柴胡丙酮提取物改为实施例2制得的柴胡水提取物,试验结果见表3。
表3 不同浓度下多霉素和柴胡沸水提取物对人乳腺癌细胞生长率(%)的影响
多霉素浓度(μg/mL) | 柴胡沸水提取物浓度(mg/mL) | ||||
0 | 0.0625 | 0.125 | 0.25 | 0.5 | |
0.0 | 100.000 | 99.461 | 97.553 | 59.229 | 0 |
0.29 | 63.442 | 67.259 | 41.621 | 16.843 | 0 |
0.58 | 49.785 | 51.265 | 25.326 | 10.072 | 0 |
1.16 | 35.361 | 33.167 | 17.537 | 0 | 0 |
2.32 | 20.077 | 21.493 | 14.375 | 9.436 | 0 |
实施例6:不同浓度下多霉素和柴胡乙醇提取物对人乳腺癌细胞生长抑制试验
按照实施例4的试验方法,仅将试验药物柴胡丙酮提取物改为实施例3制得的柴胡乙醇提取物,试验结果见表4。
表4 不同浓度下多霉素和柴胡乙醇提取物对人乳腺癌细胞的生长率(%)的影响
多霉素浓度(μg/mL) | 柴胡乙醇提取物浓度(mg/mL) | ||||
0 | 0.0625 | 0.125 | 0.25 | 0.5 | |
0.0 | 100.000 | 109.530 | 98.795 | 57.238 | 9.273 |
0.29 | 67.959 | 65.049 | 39.415 | 13.024 | 1.961 |
0.58 | 56.428 | 49.029 | 23.148 | 6.259 | 0 |
1.16 | 37.094 | 32.656 | 14.944 | 8.743 | 0 |
2.32 | 23.749 | 24.960 | 12.159 | 2.346 | 0 |
实施例7:柴胡提取物对多霉素协同作用综合因子分析
将实施例4~6不同浓度的多霉素和0.125mg/mL柴胡提取物的药物组合物(多霉素和柴胡提取物的质量比为1∶54~431)对人乳腺癌细胞生长抑制试验结果进行协同作用综合因子分析,其综合因子(Combination index(CI))按照文献(Chou T C,Talalay P.Quantitativeanalysis of dose-effect relationships:the combined effects of multiple drugs orenzyme inhibitors.Adv Enzyme Regul,1984,22:27-55.)总结的方法计算。按照国际公认的划分方法,CI值小于1为协同作用,等于1为增效作用,大于1为减效作用。计算结果见表5。
表5 不同浓度的柴胡提取物和多霉素的CI值对比
柴胡提取液浓度(mg/mL) | 多霉素浓度(μg/mL) | |||
0.29 | 0.58 | 1.16 | 2.32 | |
0.125 | 0.763 | 0.690 | 0.679 | 0.806 |
Claims (8)
1.一种具有柴胡和多霉素协同作用的抗癌药物组合物,其特征是组成中含有多霉素和柴胡提取物,其中多霉素和柴胡提取物的质量比是1∶26.9~1724.1,所述的柴胡提取物的制备方法包括以下的步骤:
(1)将柴胡用溶剂浸泡提取,然后分离出上清液和沉淀物;
(2)将上清液去除水分后干燥,得到柴胡提取物。
2.根据权利要求1的一种具有柴胡和多霉素协同作用的抗癌药物组合物,其特征是所述的多霉素和柴胡提取物的质量比是1∶107~216。
3.根据权利要求1的一种具有柴胡和多霉素协同作用的抗癌药物组合物,其特征是在柴胡提取物的制备方法的步骤(1)中,将得到的沉淀物再次提取,然后将两次分离出的上清液一起进行步骤(2)的处理。
4.根据权利要求3的一种具有柴胡和多霉素协同作用的抗癌药物组合物,其特征是所述的提取,方法是将沉淀物在-70℃冰冻,缓慢融冰后加水煮沸,分离取出上清液。
5.根据权利要求1的一种具有柴胡和多霉素协同作用的抗癌药物组合物,其特征是柴胡提取物制备方法的步骤(1)所述的柴胡是新鲜、半干或干燥的柴胡,所述的溶剂是水、甲醇、乙醇、丙酮、乙醚、氯仿或乙酸乙酯,并按照每10mL溶剂加入1g干燥柴胡的比例进行浸泡,浸泡提取在常温或加热进行,所述的分离采用离心分离。
6.根据权利要求1的一种具有柴胡和多霉素协同作用的抗癌药物组合物,其特征是柴胡提取物制备方法的步骤(2)所述的去除水分采用溶剂萃取,所述的干燥采用减压蒸馏的方法。
7.根据权利要求6的一种具有柴胡和多霉素协同作用的抗癌药物组合物,其特征是所述的溶剂是乙酸乙酯、乙醚或氯仿。
8.根据权利要求1~7的任一种具有柴胡和多霉素协同作用的抗癌药物组合物,其特征是组成中含有药学上可接受的载体。
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- 2005-05-27 CN CNB2005100348701A patent/CN1313104C/zh not_active Expired - Fee Related
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