CN1699427A - 地榆多糖的分离纯化方法 - Google Patents
地榆多糖的分离纯化方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1699427A CN1699427A CN 200510043873 CN200510043873A CN1699427A CN 1699427 A CN1699427 A CN 1699427A CN 200510043873 CN200510043873 CN 200510043873 CN 200510043873 A CN200510043873 A CN 200510043873A CN 1699427 A CN1699427 A CN 1699427A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- burnet polysaccharide
- polysaccharide
- great burnet
- great
- purification method
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
本发明公开一种地榆多糖的分离纯化方法，由下述步骤组成：将地榆粉碎，按1∶4～5的量浸于蒸馏水中，50～65℃水浴15～30小时；以3000～5000rpm离心10～16min，取上清液，以活性炭脱色，得地榆多糖水提物溶液；用有机溶剂以常规方式去除地榆多糖水提物溶液中的蛋白；选取内径和高度比为1∶25～50的层析柱；凝胶过滤层析，以波长为280nm检测收集液，真空冷冻干燥地榆多糖的提取液，即得地榆多糖。利用本发明制备的地榆多糖，纯度达90％以上，且本发明的方法设备及环境要求低，方法简便，成本低，灵活实用，利于推广、开发和应用。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药有效成分的分离方法，尤其涉及一种从中药地榆中分离纯化地榆多糖的方法。
背景技术
地榆多糖是中药地榆的有效成分，是从中药地榆分离得到的一种多糖，地榆多糖是α-葡萄糖苷酶的抑制剂，可用于糖尿病的治疗及减肥，对人体副作用小，与临床上使用的α-葡萄糖苷酶抑制剂的药物——阿卡波糖(Acarbose，商品名：拜糖苹，为德国拜耳公司产品)相比活性更强。
α葡萄糖苷酶(EC3.2.1.20；a-glucosidase)，是一类能够从含有α糖苷键底物催化水解葡萄糖基的酶的总称。在生理功能上主要从多糖、二糖的非还原端切下葡萄糖，人体对淀粉等食品的最终消化都依赖于小肠黏膜细胞刷状缘上α葡萄糖苷酶的作用。
α葡萄糖苷酶抑制剂是七十年代后期研究开发的一类口服降糖药物，其作用机理为：竞争性抑制α葡萄糖苷酶，抑制来自双糖、多糖、低聚糖的消化、吸收，有效推迟并减轻糖尿病人餐后血糖升高尤其是并发症的发生，取得较好的治疗效果，至今仍广泛应用。
地榆多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制作用属竞争性抑制，故可根据服用者的需要选择不同剂量，对于目前的减肥大军，尤其青年女性可避免节食的痛苦，若能解决地榆多糖的制备和配方，将会大大方便减肥者的使用，扩大地榆的利用。
经检索，关于地榆多糖的分离纯化方法目前尚无公开报道。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明要解决的问题是提供一种从中药地榆中分离纯化地榆多糖的方法。
本发明的地榆多糖的分离纯化方法，由下述步骤组成：
(1)将地榆粉碎至颗粒直径为200～300μm，与水以体积比计，按1∶4～5的量浸于蒸馏水中，50～65℃水浴15～30小时；
(2)以3000～5000rpm离心10～16min，取上清液，以活性炭脱色，得地榆多糖水提物溶液；
(3)用有机溶剂以常规方式去除地榆多糖水提物溶液中的蛋白；
(4)选取内径和高度比为1∶25～50的层析柱；向柱内加入葡聚糖凝胶，加入量为柱体积的60％～90％；
(5)凝胶过滤层析步骤(4)，洗脱液为蒸馏水，流速为0.3～0.6ml/min，以波长为280nm检测收集液，洗脱液曲线有两个吸收峰，收集第二个峰洗脱液，即为地榆多糖的提取液：
(6)以常规方法真空冷冻干燥地榆多糖的提取液，即得浅棕色的粉末——地榆多糖。
其中，步骤(1)所述水浴温度优选是60℃，水浴时间优选是20～25小时。
其中，步骤(2)所述离心速度优选是4000rpm，离心时间优选是10min。
其中，步骤(3)所述有机溶剂优选是乙醇。
其中，步骤(4)所述层析柱的内径和高度比优选为1∶30～40。
其中，步骤(4)所述向柱内加入的具有分子筛作用的物质量优选为柱体积的70％～80％。
其中，上述葡聚糖凝胶选用SephadexG-75～SephadexG-200。
其中，上述葡聚糖凝胶优选SephadexG-150。
其中，步骤(5)所述流速优选为0.4ml/min。
利用本发明提出的地榆多糖的分离纯化方法，可以制备出纯度达90％以上的地榆多糖，根本解决了地榆多糖分离难，纯度低，质量不稳定的不足，且本发明的方法设备及环境要求低，方法简便，成本低，灵活实用，利于推广、开发和应用。
采用本发明的分离纯化方法制备出的地榆多糖，经试验证实，对α葡萄糖苷酶活性有显著的抑制作用，试验结果表明：本发明方法制备出的地榆多糖对α葡萄糖苷酶活性的抑制率达99.9％，而目前临床上使用的α-葡萄糖苷酶抑制剂的药物——阿卡波糖(Acarbose，商品名：拜糖苹，为德国拜耳公司产品)对α葡萄糖苷酶活性的抑制率仅为81.5％，说明本发明的分离纯化方法已比现有方法有明显的提高，具备了商业应用和推广价值。
附图说明
图1地榆多糖凝胶过滤层析的洗脱曲线
图2大白鼠服用地榆多糖后的糖耐曲线
具体实施方式
实施例1：
(1)将地榆粉碎至颗粒直径为200～250μm，与水以质量比计，按1∶4的量浸于蒸馏水中，50℃水浴20小时；
(2)以4000rpm离心10min，取上清液，以活性炭脱色，得地榆多糖水提物溶液；
(3)用有机溶剂以常规方式去除地榆多糖水提物溶液中的蛋白；
(4)选取内径和高度比为1∶25的层析柱；向柱内加入SephadexG-100葡聚糖凝胶，加入量为柱体积的70％；
(5)凝胶过滤层析步骤(4)，洗脱液为蒸馏水，流速为0.5ml/min，以波长为280nm检测收集液，洗脱液曲线有两个吸收峰，收集第二个峰洗脱液，即为地榆多糖的提取液；(见图1)
(6)以常规方法真空冷冻干燥地榆多糖的提取液，即得浅棕色的粉末——地榆多糖。
实施例2：
(1)将地榆粉碎至颗粒直径为250～300μm，与水以质量比计，按1∶5的量浸于蒸馏水中，60℃水浴30小时；
(2)以4000rpm离心16min，取上清液，以活性炭脱色，得地榆多糖水提物溶液；
(3)用有机溶剂以常规方式去除地榆多糖水提物溶液中的蛋白；
(4)选取内径和高度比为1∶40的层析柱；向柱内加入SephadexG-150葡聚糖凝胶，加入量为柱体积的80％；
(5)凝胶过滤层析步骤(4)洗脱液为蒸馏水，流速为0.4ml/min；以波长为280nm检测收集液，洗脱液曲线有两个吸收峰，收集第二个峰洗脱液，即为地榆多糖的提取液；(见图1)
(6)以常规方法真空冷冻干燥地榆多糖的提取液，即得浅棕色的粉末——地榆多糖。
实施例3：
(1)将地榆粉碎至颗粒直径为200～250μm，与水以质量比计，按1∶4的量浸于蒸馏水中，55℃水浴25小时；
(2)以3000rpm离心15min，取上清液，以活性炭脱色，得地榆多糖水提物溶液；
(3)用有机溶剂以常规方式去除地榆多糖水提物溶液中的蛋白；
(4)选取内径和高度比为1∶50的层析柱；向柱内加入SephadexG-200葡聚糖凝胶，加入量为柱体积的85％；
(5)凝胶过滤层析步骤(4)洗脱液为蒸馏水，流速为0.3ml/min，以波长为280nm检测收集液，洗脱液曲线有两个吸收峰，收集第二个峰洗脱液，即为地榆多糖的提取液；(见图1)
(6)以常规方法真空冷冻干燥地榆多糖的提取液，即得浅棕色的粉末——地榆多糖。
实施例4：地榆多糖的活性测定
α葡萄糖苷酶活性测定：
标准反应体系：67mmol/L磷酸钾缓冲液(pH6.8)1.7ml，1mg/ml谷胱甘肽50ul，2mg/mla葡萄糖苷酶(Sigma公司产品)10ul，37℃保温10min，加入116mmol/L PNP 300ul，37℃ 10min，加入0.1mol/L碳酸钠10ml终止反应，400nm测释放的硝基酚量。
α葡萄糖苷酶活性单位：pH6.8，37℃，每分钟释放1umol/L硝基酚为一活性单位；
α葡萄糖苷酶抑制剂活性单位：pH6.8，37℃，使一酶活性单位失活为一抑制单位；
抑制率：抑制剂活力÷酶活性单位
经试验测定：本发明方法制备出的地榆多糖对α葡萄糖苷酶活性的抑制率达99.9％。
实施例5：大白鼠服用地榆多糖后的糖耐试验
用本发明方法制备出的地榆多糖，以有效量200mg的量/次，对SD大鼠灌胃后，30分钟进食，分别测定餐后30分钟、60分钟、90分钟时大鼠血糖浓度，结果发明方法制备出的地榆多糖有明显的抑制双糖、多糖、低聚糖的消化、吸收，有效推迟并减缓餐后血糖升高的作用。见图2。
实施例6：
用本发明方法制备出的地榆多糖，以有效治疗量400mg的量/天/大鼠(220g)，对SD大鼠连续灌胃10天，第10天灌胃2小时处死，取小肠黏膜，检测小肠黏膜细胞刷状缘上α葡萄糖苷酶，测得地榆多糖组对α葡萄糖苷酶活性的抑制率是对照组(灌胃生理盐水)的40％。
在体外，用不同剂量的本发明方法制备出的地榆多糖作用于大白鼠α葡萄糖苷酶，结果见表1：
表1：地榆多糖对大白鼠小肠粘膜α葡萄糖苷酶活性的抑制率
| 地榆多糖(ug) | 8 | 7 | 6 | 5 | 4 | 3 | 2.5 | 2 | 1.5 | 1 |
| 抑制率 | 99.9％ | 99.9％ | 99.9％ | 99.9％ | 99.9％ | 94％ | 76％ | 72％ | 62％ | 45％ |
Claims (9)
1.一种地榆多糖的分离纯化方法，由下述步骤组成：
(1)将地榆粉碎至颗粒直径为200～300μm，与水以质量比计，按1∶4～5的量浸于蒸馏水中，50～65℃水浴15～30小时；
(2)以3000～5000rpm离心10～16min，取上清液，以活性炭脱色，得地榆多糖水提物溶液；
(3)用有机溶剂以常规方式去除地榆多糖水提物溶液中的蛋白；
(4)选取内径和高度比为1∶25～50的层析柱；向柱内加入葡聚糖凝胶，加入量为柱体积的60％～90％；
(5)凝胶过滤层析步骤(4)，洗脱液为蒸馏水，流速为0.3～0.6ml/min，以波长为280nm检测收集液，洗脱液曲线有两个吸收峰，收集第二个峰洗脱液，即为地榆多糖的提取液；
(6)以常规方法真空冷冻干燥地榆多糖的提取液，即得浅棕色的粉末——地榆多糖。
2.如权利要求1所述的地榆多糖的分离纯化方法，其特征是，步骤(1)所述水浴温度是60℃，水浴时间是20～25小时。
3.如权利要求1所述的地榆多糖的分离纯化方法，其特征是，步骤(2)所述离心速度是4000rpm，离心时间是10min。
4.如权利要求1所述的地榆多糖的分离纯化方法，其特征是，步骤(3)所述有机溶剂是乙醇。
5.如权利要求1所述的地榆多糖的分离纯化方法，其特征是，步骤(4)所述层析柱的内径和高度比为1∶30～40。
6.如权利要求1所述的地榆多糖的分离纯化方法，其特征是，步骤(4)所述向柱内加入的具有分子筛作用的物质量为柱体积的70％～80％。
7.如权利要求1所述的地榆多糖的分离纯化方法，其特征是，所述葡聚糖凝胶选用SephadexG-75～SephadexG-200。
8.如权利要求7所述的地榆多糖的分离纯化方法，其特征是，所述葡聚糖凝胶选用SephadexG-150。
9.如权利要求1所述的地榆多糖的分离纯化方法，其特征是，步骤(5)所述流速为0.4ml/min。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200510043873 CN1275982C (zh) | 2005-06-21 | 2005-06-21 | 地榆多糖的分离纯化方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200510043873 CN1275982C (zh) | 2005-06-21 | 2005-06-21 | 地榆多糖的分离纯化方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1699427A true CN1699427A (zh) | 2005-11-23 |
| CN1275982C CN1275982C (zh) | 2006-09-20 |
Family
ID=35475690
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 200510043873 Expired - Fee Related CN1275982C (zh) | 2005-06-21 | 2005-06-21 | 地榆多糖的分离纯化方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1275982C (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102304191A (zh) * | 2011-08-24 | 2012-01-04 | 中国科学院烟台海岸带研究所 | 一种海肠废弃内脏中粗多糖的提取方法 |
-
2005
- 2005-06-21 CN CN 200510043873 patent/CN1275982C/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102304191A (zh) * | 2011-08-24 | 2012-01-04 | 中国科学院烟台海岸带研究所 | 一种海肠废弃内脏中粗多糖的提取方法 |
| CN102304191B (zh) * | 2011-08-24 | 2013-03-27 | 中国科学院烟台海岸带研究所 | 一种海肠废弃内脏中粗多糖的提取方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1275982C (zh) | 2006-09-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN1473594A (zh) | 玛咖根提取物 | |
| CN1813910A (zh) | 一种具有降糖作用的药物组合物及其制备方法 | |
| CN1274249C (zh) | 牡蛎生物活性物质的制备方法及其产品 | |
| CN111004333B (zh) | 一种改性羊肚菌多糖的制备方法及应用 | |
| CN1137900C (zh) | 黄精多糖的提取方法 | |
| CN1275982C (zh) | 地榆多糖的分离纯化方法 | |
| CN1405314A (zh) | 隐孔菌发酵产物及其制备方法和应用 | |
| CN1181208C (zh) | 由小麦麸皮生产低聚糖的方法 | |
| CN1883500A (zh) | 低分子柑桔果胶用于增强免疫功能的应用 | |
| CN110218262A (zh) | 褐藻来源的富含葡萄糖醛酸的低硫酸化杂聚糖在制备治疗2型糖尿病药物中的应用 | |
| CN1141101C (zh) | 治疗乙肝的药物及其制备方法 | |
| CN1206244C (zh) | 一种红豆杉枝叶中的提取物及提取方法 | |
| CN1278692C (zh) | 地榆多糖制剂及其制备方法与应用 | |
| CN1560061A (zh) | 怀山药提取物怀山药皂甙的提取方法 | |
| CN1287682C (zh) | 魔芋葡甘聚糖降解物与银杏叶提取物保健食品及制备方法 | |
| CN115010822A (zh) | 一种亮菌菌丝体多糖及其用途 | |
| CN110483657B (zh) | 一种半边莲均一多糖及其制备方法和应用 | |
| CN1742823A (zh) | 金莲花含化片配制方法及其适应症 | |
| CN1243772C (zh) | 蝙蝠葛碱提多糖及其提取方法和以该化合物为活性成分的药物用途 | |
| CN1237998C (zh) | 治疗小儿咳喘的泡腾片 | |
| CN1803155A (zh) | 一种治疗鼻炎的药物 | |
| CN1706406A (zh) | 一种调节血脂和保护化学性肝损伤的保健食品及其制备 | |
| CN1557824A (zh) | 蚕沙总生物碱及其制备方法 | |
| CN1883501A (zh) | 低分子柑桔果胶用于调节血糖血脂和改善脂肪肝中的应用 | |
| CN1219539C (zh) | 一种免疫调节剂及其在制药中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C17 | Cessation of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20060920 |