CN1698841A - 胡黄连总苷提取物的医药用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及从中药胡黄连中提取制备治疗和预防过敏性哮喘病、慢性阻塞性肺病和其它过敏病症的药物，胡黄连总苷具有明显的抗炎、抗过敏活性，是治疗和预防哮喘病、慢性阻塞性肺病和其它过敏病症的天然药物，疗效好，无现已有的抗哮喘类药物的毒副作用。
Description
技术领域
本发明涉及医药领域，一种有效地预防和治疗哮喘病、慢性阻塞性肺病(COPD)、过敏病症的天然植物提取物的医药用途。胡黄连总苷特别适用于治疗和预防哮喘。也可用于治疗和预防过敏性鼻炎和过敏性皮肤病。
背景技术
支气管哮喘是世界范围内最为常见的慢性呼吸道疾病，保守估计全世界至少有一亿以上的人患哮喘病，近年来，因其患病率和死亡率均呈上升的趁势。哮喘已成为严重的公共卫生问题而受到世界各国的极大关注。因此需要提供有效地治疗哮喘病的药物和方法。
近三十年来，全世界对治疗哮喘病的药物进行了大量的开发研究工作。已经开发出来的治疗哮喘病的药物有β2-肾上腺素能受体激动剂类、α-肾上腺素能受体拮抗剂类、氨茶碱类、胆碱能受体拮抗剂类、钙离子拮抗剂类、钾离子通道激动剂、糖皮质激素、细胞膜稳定剂(色甘酸钠、尼多考米钠)、抗组胺药物、白三烯受体拮抗剂、血小板活化因子(PAF)拮抗剂、特异性免疫治疗剂、非特异性免疫治疗剂等。哮喘是一种机理极为复杂的多因素疾病，是多细胞多介质参与的炎症性疾病。上述这些药物(或者治疗方法)作用机理单一(对一种或二、三种介质、因子、受体或通道起作用)，这些药物或者治疗效果不明显、或者口服无效须特殊途径给药、或者副作用大无法长期使用。目前临床上普遍采用的也是最有效的治疗方法是长期吸入糖皮质激素(轻中度吸入色甘酸钠、尼多考米钠)抗炎治疗，哮喘发作时吸入β2-肾上腺素能受体激动剂、胆碱能受体拮抗剂等支气管扩张剂。这些治疗方法对缓解哮喘症状，改善哮喘病人的生活质量有一定的效果，但没有使哮喘病的发病率和死亡率有所降低。降低哮喘病的发病率和死亡率、改善哮喘病的预后仍然缺乏有效手段(李明华等，哮喘病学，人民卫生出版社，1998，p2)。治疗哮喘病需要更有效的和更安全的药物。
慢性阻塞性肺病的病因目前还不太清楚，但与气道炎症有关是肯定的，目前使用长期吸入糖皮质激素抗炎治疗和吸入β2-肾上腺素能受体激动剂、胆碱能受体拮抗剂等支气管扩张剂治疗，是有一定的效果的。但这些药物的治疗效果并不是十分理想，寻找更有效的治疗慢性阻塞性肺病的药物是非常必要的。
发明内容
本发明涉及治疗哮喘病和其它过敏性疾病的中药药物组合物，特别涉及以中药胡黄连中所含有的环烯醚萜苷为其药物有效成分的天然药物制剂。
胡黄连是玄参科植物西藏胡黄连(picrorhiza scrophulariiflora Pennell)和印度胡黄连(picrorhiza kurroa Royle ex Benth)的根茎，均为多年生草本，具有清湿热、除骨蒸、消疳热等功效，可用于湿热泻痢、黄疸、痔疾、骨蒸朝热、小儿疳热等症。生于海拔2500-4500米的喜马拉雅山地区。文献记载，胡黄连含有环烯醚萜苷类、葫芦素及其苷、多糖、氨基酸等多种化学成分。
用于制备治疗哮喘病、治疗慢性阻塞性肺病、过敏性疾病的胡黄连提取物的胡黄连，是西藏胡黄连和印度胡黄连。是中国药典现在收载或中医传统应用的中药。
本发明的目的是提供胡黄连总苷提取物在制备治疗哮喘病、治疗慢性阻塞性肺病、过敏性疾病和炎症性疾病的药物制剂中的应用。胡黄连总苷提取物是从中药胡黄连中提取的，包括利用胡黄连的水提取物、醇提取物、水醇提取物，以及用其它溶剂从胡黄连中提取出来的物质进行制备。特别地，是指从胡黄连中提取出来的含胡黄连环烯醚萜类化学成分为有效成分的胡黄连总苷提取物，胡黄连总苷提取物主要由以下化学成分组成：胡黄连苷I(picroside I)、胡黄连苷II(picroside II)、胡黄连苷III(picrosideIII)、胡黄连苷IV(picroside IV)、胡黄连苦苷(kutkoside)和/或梓醇(catalpol)，以及其它环烯醚萜类成分、酚苷和其它微量成分，并且以胡黄连苷I，胡黄连苷II，胡黄连苦苷(kutkoside)等为主要有效成分。
所述胡黄连总苷提取物，其环烯醚萜总苷含量不低于50％。特别地，胡黄连苷I，胡黄连苷II，胡黄连苦苷含量的和不低于50％。进一步地，胡黄连苷II的含量不低于50％。
胡黄连总苷提取物是一种新型的具有治疗哮喘、治疗慢性阻塞性肺病、抗过敏药理活性的植物提取物，具有毒性小，长期使用疗效较佳等特点。
胡黄连总苷提取物是一种新型的具有抗哮喘、抗过敏药理活性的植物提取物，具有用药剂量小，毒性小，长期使用疗效较佳等特点。
环烯醚萜总苷含量大于50％，用Wistar健康小鼠做急性毒性试验，口服最大给药量为45.0g/kg，未见动物死亡；腹腔注射给药LD50为18.5～25.5g/kg，静脉注射给药LD50为2.47～3.15g/kg。
胡黄连苷I，胡黄连苷II，胡黄连苦苷含量的和不低于50％。用Wistar健康小鼠做急性毒性试验，口服最大给药量为45.0g/kg，未见动物死亡；腹腔注射给药LD50为16.8～24.6g/kg，静脉注射给药LD50为2.13～2.96g/kg。
胡黄连苷II的含量不低于50％。用Wistar健康小鼠做急性毒性试验，口服最大给药量为45.0g/kg，未见动物死亡；腹腔注射给药LD50为16.2～24.2g/kg，静脉注射给药LD50为2.10～2.90g/kg。
本发明提供的胡黄连总苷，可以与一种或多种药学上可接受的铺料成分混合，以及含胡黄连总苷的组合物中进一步含有β2-肾上腺素能受体激动剂。
本发明提供了治疗哺乳动物呼吸道免疫介导的炎性疾病的方法，所述方法包括给所述的哺乳动物施用治疗有效量的胡黄连总苷提取物，或施用含有胡黄连总苷提取物的药物组合物，或进一步含有β2-肾上腺素能受体激动剂的所述组合物。
胡黄连总苷提取物的药物组合物可以是各种形式，包括口服剂型，吸入形式以及可注射和输注的溶液。当以吸入剂或气雾剂形式使用时，胡黄连总苷提取物与药学上可接受的载体溶液或可转化成气雾剂的形式的干粉结合使用。与此类似，当以口服给药使用时，胡黄连总苷提取物与使用于口服给药的药学上可接受的载体结合使用。当用于治疗免疫介导的炎性皮肤病时，胡黄连总苷提取物可以与无毒的、药学上可接受的局部用载体结合使用。胡黄连总苷提取物可以与哮喘治疗剂，如β2-肾上腺素能受体激动剂、胆碱能受体拮抗剂、氨茶碱类、糖皮质激素、抗组胺药物等结合使用。
胡黄连总苷提取物用于预防和治疗免疫介导的炎性疾病，特别是包括哮喘在内的与呼吸道相关的疾病，以及特别是与慢性哮喘相关的应答过强和变应性鼻炎。因此本发明也提供了治疗免疫介导的炎性疾病的方法，该方法包括给有免疫介导的炎性疾病患者用治疗有效剂型和剂量的胡黄连总苷提取物。
本发明的胡黄连总苷提取物的给药量，因患者的状态、体重、给药方式等不同而异。比如在非口服情况下、肌内、静脉、肠内给药，0.050mg-500mg/kg.日，优选0.20mg-200mg/kg.日，口服情况下以胡黄连总苷生药计算1.0-200mg/kg.日，优选5.0-20mg/kg.日。
本发明的环烯醚萜总苷含量大于50％的胡黄连总苷提取物的给药量，因患者的状态、体重、给药方式等不同而异。比如在非口服情况下、肌内、静脉、肠内给药0.05mg-50mg/kg.日，优选0.1mg-10mg/kg.日，口服情况下0.1-1000mg/kg.日，优选1-100mg/kg.日。
本发明的胡黄连苷I，胡黄连苷II，胡黄连苦苷含量的和不低于50％的胡黄连总苷提取物的给药量，因患者的状态、体重、给药方式等不同而异。比如在非口服情况下、肌内、静脉、肠内给药0.01mg-20mg/kg.日，优选0.05mg-5mg/kg.日，口服情况下0.1-500mg/kg.日，优选0.5-50mg/kg.日。
本发明的胡黄连苷II的含量不低于50％的胡黄连总苷提取物的给药量，因患者的状态、体重、给药方式等不同而异。比如在非口服情况下、肌内、静脉、肠内给药0.01mg-20mg/kg.日，优选0.05mg-5mg/kg.日，口服情况下0.1-500mg/kg.日，优选0.5-50mg/kg.日。
具体实施方式
用以下的实施例对本发明作具体说明，但本发明并不限于下列实施例包含的内容。
[实施例一]取印度胡黄连20kg，用水160升煮沸提取1小时，滤取提取液，药渣再加水120升煮沸提取2小时，滤取提取液，药渣再加水120升煮沸提取2小时，滤取提取液，合并水提取液，真空浓缩至20升，加水20升，用大孔树脂分离制备得到印度胡黄连总苷提取物1.35千克。胡黄连环烯醚萜总苷含量57.5％。
印度胡黄连总苷提取物治疗哮喘病的临床研究
1、病例选择60例，男30例，女30例，年龄16-60岁，按照李明华等主编《哮喘病学》(人民卫生出版社，1998年，p165)的标准诊断，均为支气管哮喘病人。随机分成2组，每组30例，男15例，女15例；A组为治疗组，B为对照组。2、治疗方法，治疗组用印度胡黄连总苷提取物口服，每日3次，每次150mg，连续服用30天；对照组用丙酸倍氯米松气雾剂，每日2次，每次200μg，连续服用30天。3、治疗结果，治疗结束时，治疗组治愈24例，有效6例；对照组治愈11例，有效19例。治疗结束后1个月，治疗组治愈14例，有效13例；对照组治愈5例，有效18例。
[实施例二]取西藏胡黄连1kg，用水8000ml煮沸提取1小时，滤取提取液，药渣再加水6000ml煮沸提取1小时，滤取提取液，药渣再加水6000ml煮沸提取1小时，滤取提取液，合并水提取液，真空浓缩至1000ml。用大孔树脂分离制备得到西藏胡黄连总苷提取物0.088千克。胡黄连苷II含量56.5％。
卵白蛋白气雾吸入引喘试验
取200-250g豚鼠60只，雌雄各半，先于右后腿外侧肌肉注射4％卵白蛋白生理盐水溶液0.2ml/只，同时腹腔注射4％氢氧化铝凝胶0.2ml致敏。从致敏第二天起，动物随机分为2组：对照组、治疗组(200mg/kg)。治疗组用西藏胡黄连总苷提取物200mg/kg灌胃给药，共14天，末次药后，将动物放于密闭的玻璃钟罩内，待安静后，启动空气压缩机，以53kPa(400mmHg)的恒压喷入3.5％卵白蛋白生理盐水30秒钟，观察6分钟内豚鼠出现喘息性抽搐的潜伏期与发生抽搐的动物数。(徐叔云，卞如濂，陈修主编，药理实验方法学，人民卫生出版社，1991年11月第二版，1199页)。
表1、西藏胡黄连总苷提取物对药物引豚鼠喘的影响
| 组别 | 动物数(n) | 剂量(mg/kg) | 引喘潜伏期(秒) | 抽搐动物数(只) |
| 对照 | 10 | - | 61.8±32.5 | 10/10 |
| 西藏胡黄连总苷提取物 | 10 | 200 | 150.5±89.8* | 9/10 |
注：与空白对照组比较P＜0.05认为差异显著，(以*表示)。
试验结果显示，西藏胡黄连总苷提取物200mg/kg剂量能显著延长卵白蛋白生理盐水溶液引喘豚鼠的潜伏期，与对照组相比有显著差异(P＜0.05)，表明胡黄连总苷提取物具有一定的平喘作用。
被动皮肤过敏试验(PCA)
将大鼠体按重随机分为2组，10只/组，♀♂各半，分笼饲养，5只/笼。分别为空白对照组、试药组200mg/kg.d。试验采用治疗性给药西藏胡黄连总苷提取物200mg/kg.d，在抗原攻击前连续给药西藏胡黄连总苷提取物14d。
抗血清制备：将上述天花粉氢氧化铝悬液四只脚掌注射，每只脚掌注射0.1ml，共0.4ml。10-15d成熟，眼球放血约10ml，以3000转/min离心15min，取上层血清即得抗血清。
被动皮肤致敏：将试验各组大鼠背部脱毛，脊柱两侧距中线1.5cm，各取两点，每点间隔2cm，面积约1×1cm2，共4点。分别在背部皮肤内注射抗血清的不同稀释度(1∶30 1∶40)。48h后进行定量的相应抗原攻击。尾静脉注射天花粉加依文思蓝溶液1mg/kg，30min后断头处死。
观察指标：皮内注射抗血清的局部皮肤反应，并测量依文思蓝渗出的蓝斑直径大小。计算PCA抑制百分率(％)。PCA抑制百分率＝(空白对照组蓝斑直径-用药组蓝斑直径)/空白对照组蓝斑直径×100％(徐叔云，卞如濂，陈修主编，药理实验方法学，人民卫生出版社，1991年11月第二版，1197页)
表2、西藏胡黄连总苷提取物对大鼠被动皮肤过敏反应影响
| 组别 | 动物数 | 剂量mg/kg | 不同血清浓度蓝斑直径(cm) | |
| (只) | 1∶30 | 1∶40 | ||
| 空白对照 | 10 | 水 | 1.48±0.21 | 0.94±0.26 |
| 西藏胡黄连总苷提取物 | 10 | 300.0 | 0.96±0.21* | 0.64±0.20* |
| 抑制率％ | 35.1 | 31.9 | ||
注：与空白对照组比较P＜0.05认为差异显著，(以*表示)。
试验结果见表1。从表中结果可以看出，试药西藏胡黄连总苷提取物在抗血清稀释度1∶30，1∶40时，表现出显著性抑制蓝斑直径(P＜0.05)，抑制率为35.1％和31.9％。表明西藏胡黄连总苷提取物对被动皮肤过敏反应有一定的抑制作用。
迟发性足垫反应试验
将小鼠按体重随机分组，10只/组，♀♂各半，分笼饲养，5只/笼，共2组，分别为空白对照组、胡黄连总苷组。采用治疗性给药。，致敏前给药5d至致敏后继续给药5d，共10d。
致敏5d后NIH小鼠颈部s.c5％绵羊红细胞(SRBC)0.05ml/只致敏。6d后右足垫s.c5％绵羊红细胞(SRBC)0.02ml，进行攻击。左足注射等量生理盐水作对照。24h后，末次给药50min后处死动物。从踝关节部位剪下两足称重。求出两足的重量差，计算足肿胀抑制率。足肿胀抑制率＝空白对照组足肿胀程度-用药组足肿胀程度)/空白对照组足肿胀程度×100％，试验结果见表4。(徐叔云等主编，药理实验方法学，人民卫生出版社，1991年第二版，1226页，1228页)
表7、西藏胡黄连总苷提取物对绵羊红细胞
引起的小鼠迟发性足垫反应的影响
| 组别 | 动物数(只) | 剂量(mg/kg) | 足肿胀程度(g) | 抑制率(％) |
| 空白对照组 | 9 | 水 | 2.51±0.73 | --- |
| 西藏胡黄连总苷提取物 | 10 | 400.0 | 1.74±0.74* | 30.68 |
注：与空白对照组比较P＜0.05认为差异显著，(以*表示)。
从表中结果可以看出，西藏胡黄连总苷提取物与空白对照组比较表现出显著性抑制足肿胀程度(P＜0.05)，抑制率为31.47％。表明西藏胡黄连总苷提取物对抑制绵羊红细胞引起的小鼠迟发性免疫反应效果较明显。
[实施例三]取印度胡黄连1kg，用水8000ml煮沸提取1小时，滤取提取液，药渣再加水6000ml煮沸提取1小时，滤取提取液，药渣再加水6000ml煮沸提取1小时，滤取提取液，合并水提取液，真空浓缩至1000ml。用大孔树脂分离制备得到印度胡黄连总苷提取物0.088千克。胡黄连苷II含量56.5％。
卵白蛋白气雾吸入引喘试验
取200-250g豚鼠60只，雌雄各半，先于右后腿外侧肌肉注射4％卵白蛋白生理盐水溶液0.2ml/只，同时腹腔注射4％氢氧化铝凝胶0.2ml致敏。从致敏第二天起，动物随机分为2组：对照组、治疗组(200mg/kg)。治疗组用印度胡黄连总苷提取物200mg/kg灌胃给药，共14天，末次药后，将动物放于密闭的玻璃钟罩内，待安静后，启动空气压缩机，以53kPa(400mmHg)的恒压喷入3.5％卵白蛋白生理盐水30秒钟，观察6分钟内豚鼠出现喘息性抽搐的潜伏期与发生抽搐的动物数。(徐叔云，卞如濂，陈修主编，药理实验方法学，人民卫生出版社，1991年11月第二版，1199页)。
表1、印度胡黄连总苷提取物对药物引豚鼠喘的影响
| 组别 | 动物数(n) | 剂量(mg/kg) | 引喘潜伏期(秒) | 抽搐动物数(只) |
| 对照 | 10 | - | 63.7±33.6 | 10/10 |
| 印度胡黄连总苷提取物 | 10 | 200 | 158.5±91.8* | 9/10 |
注：与空白对照组比较P＜0.05认为差异显著，(以*表示)。
试验结果显示，印度胡黄连总苷提取物200mg/kg剂量能显著延长卵白蛋白生理盐水溶液引喘豚鼠的潜伏期，与对照组相比有显著差异(P＜0.05)，表明胡黄连总苷提取物具有一定的平喘作用。
被动皮肤过敏试验(PCA)
将大鼠体按重随机分为2组，10只/组，♀♂各半，分笼饲养，5只/笼。分别为空白对照组、试药组200mg/kg.d。试验采用治疗性给药印度胡黄连总苷提取物200mg/kg.d，在抗原攻击前连续给药印度胡黄连总苷提取物14d。
抗血清制备：将上述天花粉氢氧化铝悬液四只脚掌注射，每只脚掌注射0.1ml，共0.4ml。10-15d成熟，眼球放血约10ml，以3000转/min离心15min，取上层血清即得抗血清。
被动皮肤致敏：将试验各组大鼠背部脱毛，脊柱两侧距中线1.5cm，各取两点，每点间隔2cm，面积约1×1cm2，共4点。分别在背部皮肤内注射抗血清的不同稀释度(1∶30 1∶40)。48h后进行定量的相应抗原攻击。尾静脉注射天花粉加依文思蓝溶液1mg/kg，30min后断头处死。
观察指标：皮内注射抗血清的局部皮肤反应，并测量依文思蓝渗出的蓝斑直径大小。计算PCA抑制百分率(％)。PCA抑制百分率＝(空白对照组蓝斑直径-用药组蓝斑直径)/空白对照组蓝斑直径×100％(徐叔云，卞如濂，陈修主编，药理实验方法学，人民卫生出版社，1991年11月第二版，1197页)
表2、印度胡黄连总苷提取物对大鼠被动皮肤过敏反应影响
| 组别 | 动物数 | 剂量mg/kg | 不同血清浓度蓝斑直径(cm) | |
| (只) | 1∶30 | 1∶40 | ||
| 空白对照 | 10 | 水 | 1.51±0.23 | 0.95±0.23 |
| 印度胡黄连总苷提取物 | 10 | 300.0 | 0.93±0.22* | 0.62±0.21* |
| 抑制率％ | 38.4 | 34.7 | ||
注：与空白对照组比较P＜0.05认为差异显著，(以*表示)。
试验结果见表1。从表中结果可以看出，试药印度胡黄连总苷提取物在抗血清稀释度1∶30，1∶40时，表现出显著性抑制蓝斑直径(P＜0.05)，抑制率为38.4％和34.7％。表明印度胡黄连总苷提取物对被动皮肤过敏反应有一定的抑制作用。
迟发性足垫反应试验
将小鼠按体重随机分组，10只/组，♀♂各半，分笼饲养，5只/笼，共2组，分别为空白对照组、胡黄连总苷组。采用治疗性给药。，致敏前给药5d至致敏后继续给药5d，共10d。
致敏5d后NIH小鼠颈部s.c5％绵羊红细胞(SRBC)0.05ml/只致敏。6d后右足垫s.c5％绵羊红细胞(SRBC)0.02ml，进行攻击。左足注射等量生理盐水作对照。24h后，末次给药50min后处死动物。从踝关节部位剪下两足称重。求出两足的重量差，计算足肿胀抑制率。足肿胀抑制率＝空白对照组足肿胀程度-用药组足肿胀程度)/空白对照组足肿胀程度×100％，试验结果见表4。(徐叔云等主编，药理实验方法学，人民卫生出版社，1991年第二版，1226页，1228页)
表7、印度胡黄连总苷提取物对绵羊红细胞
引起的小鼠迟发性足垫反应的影响
| 组别 | 动物数(只) | 剂量(mg/kg) | 足肿胀程度(g) | 抑制率(％) |
| 空白对照组 | 9 | 水 | 2.57±0.76 | --- |
| 印度胡黄连总苷提取物 | 10 | 400.0 | 1.68±0.70* | 34.63 |
注：与空白对照组比较P＜0.05认为差异显著，(以*表示)。
从表中结果可以看出，印度胡黄连总苷提取物与空白对照组比较表现出显著性抑制足肿胀程度(P＜0.05)，抑制率为34.63％。表明印度胡黄连总苷提取物对抑制绵羊红细胞引起的小鼠迟发性免疫反应效果较明显。
Claims (10)
1、一种可用于治疗过敏性哮喘、慢性阻塞性肺病、过敏性鼻炎和其它过敏性疾病的中药。其特征是从胡黄连中提取的胡黄连总苷提取物。
2、按照权利要求1中所述的应用，其特征是胡黄连总苷提取物主要成分是胡黄连苷I、胡黄连苷II、胡黄连苦苷和/或梓醇。
3、按照权利要求1中所述的应用，其特征胡黄连总苷提取物是环烯醚萜总苷含量大于50％。
4、按照权利要求1、2或3中所述的应用，其特征是胡黄连总苷提取物胡黄连苷II的含量大于50％。
5、按照权利要求1、2、3或4中所述应用，其特征是胡黄连总苷提取物在治疗过敏性哮喘的应用。
6、按照权利要求1、2、3或4中所述应用，其特征是胡黄连总苷在治疗慢性阻塞性肺病的应用。
7、按照权利要求1、2、3或4中所述应用，其特征是胡黄连总苷提取物在治疗过敏性鼻炎和其它过敏性疾病的应用。
8、按照权利要求1、2、3、4、5、6或7中所述的应用，其特征是胡黄连总苷提取物的用量范围为0.5mg/kg-100mg/kg。
9、按照权利要求1、2、3、4、5、6、7或8中所述应用，其特征是胡黄连是西藏胡黄连。
10、按照权利要求1、2、3、4、5、6、7或8中所述应用，其特征是胡黄连是印度胡黄连。
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2005
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