CN1649610A - 一种用于加强温血动物的免疫、抗炎、抗肿瘤以及 d n a修复过程的植物水溶性提取物生物活性组分的分离纯化以及结构鉴定 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种分离“猫爪草”(Uncariatomentosa)水溶性提取物，即C－MED 100提取物的生物活性组分的方法，所述方法包括(i)从C－MED－100提取物沉淀喷雾干燥载体以获得用于薄层层析(TLC)的点样混合物；(iii)将C－MED－100提取物点样混合物点在预跑板的TLC板上并洗脱薄层板获得Rf＝0.2－0.3的荧光条带；(iv)将Rf＝0.2－0.3谱带刮下，在氨气中洗脱并将洗脱的条带冷冻干燥形成粉末；以及(v)用甲醇提取粉末以除去溶解的硅胶，浓缩甲醇溶液并将浓缩液结晶以获得生物活性组分。分离的生物活性组分为奎尼酸类似物，优选为奎尼酸内酯。本发明还提供了包含药用有效量生物活性组分和无毒惰性载体或稀释剂的药物组合物。本发明的生物活性组分可用于所有哺乳动物以加强免疫功能，治疗与免疫系统相关的失调，抑制炎性应答，治疗与炎性应答相关的失调，加强抗肿瘤应答，以及治疗与对肿瘤形成和生长的应答相关的失调。

Description

一种用于加强温血动物的免疫、抗炎、 抗肿瘤以及DNA修复过程的植物水溶性 提取物生物活性组分的分离纯化以及结构鉴定
发明背景
发明领域
本发明涉及“猫爪草”(钩藤种)水提取物生物活性组分的分离、纯化和结构鉴定。所述生物活性组分被鉴定为奎尼酸内酯。本发明同样涉及所述生物活性组分在加强温血动物免疫、抗炎、抗老化、抗肿瘤和DNA修复过程中的药物应用。
背景技术的讨论
通常称作Una de Gato或“猫爪草”的Uncaria tomentosa过去被广泛应用为天然补品，并且现在被应用于多种营养制品中以治疗多种健康失调。以本发明申请人的知识范围，所有公开在美国专利6,039,949和6,238,675B1以及授权给Pero的美国专利09/824,508(“Pero专利”)中的”猫爪草”的市售制品除水溶性提取物(“Pero提取物”)外都是基于其羟吲哚生物碱成分。这是由于在20世纪60年代早期Keplinger博士(澳大利亚)发现羟吲哚生物碱的存在(Keplinger，K.，Laus，G.，Wurm，M.，Dierich，M.P.，Teppner，H.Uncaria tomentosa(Willd.)DC.-桥亚乙基药学应用以及新的药学，毒理学和植物学结果(Uncariatomentosa(Willd.)DC.：Ethnomedicinal use and newpharmacological，toxicological and botanical results，)J.Ethanopharmacology 64：23-34，1999)。其优选实施方案中以商品名C-MED-100市售的Pero提取物是一种以水为稀释剂的“猫爪草”(Uncaria tomentosa)的树皮提取物，又名Una de Gato或“猫爪草”提取物，其与任一其他的市售形式完全不同，因为它只含微量的生物碱(＜0.05％)。反之，Pero提取物含有在Pero专利中已经描述并且受到保护的已经阐明效力的新类别活性成分-羧基烷基酯(CAEs)。C-MED-100是营养工业中不仅支持自身免疫而且加强DNA修复功能的首要产品，其关键在于减轻与老化相关的失调，诸如自身免疫性，炎性以及肿瘤疾病。这里涉及的C-MED-100提取物应该理解为包括Pero提取物，其中C-MED-100提取物是优选实施方案。
在此以前尚未实现Pero提取物活性成分的精确化学鉴定。然而，那些成分的化学以及生物学特性已经得以充分鉴定以使Pero提取物的市售制造得以标准化。(参见Pero专利)。
市售为Pero提取物的C-MED-100提取物是基于“猫爪草”的历史药物应用进行配制的，其中的重要步骤为在约95彻底热水提取约18小时。然后超滤提取物以除去高分子(＞10,000MW)有毒结合物并喷雾干燥以含8-10％的作为活性成分的羧基烷基酯(CAEs)。由于CAEs(85％)吸附在活性炭上，CAEs被表征为C-MED-100提取物的唯一活性成分。未吸附部分没观察到生物活性。使用薄层层析(TLC)作为纯化工具，活性成分在约200nm处显示UV最大吸收，并与羟胺和氯化铁反应，从而表征它们为酯(例如CAEs)。
人类每日口服250-700mg之间剂量的C-MED-100提取物已被证实是有效的。这些剂量已经显示出对包括人类的温血动物能加强抗炎、DNA修复、免疫和抗肿瘤过程。(参见Pero专利，Lamm，S.，Sheng，Y.，Pero，R.W.，补充有“猫爪草”的新水溶液提取物，C-MED-100提取物的个体对肺炎球菌疫苗的持续应答(Persistent response topneumococcal vaccine in individuals supplemented with a novel watersoluble extract of Uncaria tomentosa，C-MED-100 extract).Phytomed8：267-274，2001；Sheng，Y.，Li，L.，Holmgren，K.，Pero，R.W.，人类志愿者研究中“猫爪草”的水提取物对DNA修复的加强(DNA repairenhancement of aqueous extracts of Uncaria Tomentosa in a humanvolunteer study).Phytomed 8：275-282，2001；Sheng，Y.，Bryngelsson，C.，Pero，R.W.“猫爪草”的新的水提取物C-MED-100提取物加强的DNA修复，免疫功能以及降低的毒性(EnhancedDNA repair，immune function and reduced toxicity of C-MED-100extract，a novel aqueous extract from Uncaria tomentosa)。J.ofEthnopharmacology 69：115-126(2000))。
C-MED-100提取物中的CAEs显示出作为营养增补剂能提供营养支持，因为CAEs加强DNA修复和免疫细胞应答，所述DNA修复和免疫细胞应答随后是调节老化的重要生理学过程。(参见Pero专利，Sheng，Y.，Pero，R.W.，Wagner，H.，“猫爪草”水提取物治疗大鼠模型化疗诱导的白血球减少(Treatment of chemotherapy-inducedLEUKOPENIA in a rat model with aqueous extract from Uncariatomentosa)。Phytomedicine 7(2)：137-143(2000)如上所述)。这两个过程包括调节核转录κβ(NF-κB)。众所周知NF-KB控制(i)从程序性细胞死亡拯救细胞的核事件以及(ii)前炎性细胞因子的产生。(Beg，AA以及Baltimore，D.，NF-κB在阻止TNF-α诱导的细胞死亡中的重要作用。Science 274：782-784，1996；Wang，C-Y，Mayo，M.W.，Baldwin，A.S.，TNF-α以及癌症治疗-诱导的细胞程序性死亡：抑制NF-KB的增强作用。Science 274：784-787，1996)。因此，这个机制直接将诱导细胞程序性死亡到程序性细胞毒性与前炎细胞因子产生和炎症联系起来。
细胞程序性死亡是体内调节细胞从分裂(复制)到分化并到增强功能能力的重要生化过程。进入细胞程序性死亡的细胞不仅被刺激分化和增强功能性而且将最终死于这种“细胞程序死亡”。从而，源于C-MED-100提取物的NF-KB抑制诱导的细胞程序性死亡将(i)有效地杀死肿瘤细胞，因为它们可能通过细胞程序性死亡被迫使不进行复制并最终死亡；并且同时(ii)增强免疫细胞应答，因为更多的免疫活性细胞因为DNA修复的平行增强将被迫分化并将存活更久。
NF-kB同样发送信号到炎性细胞指导它们产生细胞因子(生长因子)。这些信号随后刺激吞噬细胞以杀死更多的侵入传染物，其至少部分由产生高水平的氧自由基得以实现。因此，抑制NF-KB具有抗炎特性因为它阻止可能对正常身体组织有害的炎性过程的过度反应。此外，因为前炎细胞因子是人类内源自由基产生的主要来源，所以通过减少可能多年聚集的基因损伤，NF-KB抑制是抗诱变的。因为产生较少的自由基，所以对DNA的损伤就更少并且对自然修复的抑制就更少。结果减缓了老化。
因此Pero提取物，优选C-MED-100提取物是抗老化修复的基本营养增补剂因为它通过NF-kB抑制防止自由基损伤，通过细胞程序性死亡诱导分化和免疫细胞应答，加强DNA修复并杀死肿瘤细胞，所述过程依次是与老化相关的重要因素。(Sheng，Y.，Pero，R.W.Amiri，A.和Bryngelsson，C-用“猫爪草”的水提取物处理诱导人类白血病细胞系的细胞程序性死亡和抑制增殖和克隆源性生长(Induction ofapoptosis and inhibition of proliferation and clonogenic growth of humanLEUKEMIC cell lines treated with aqueous extracts of UncariaTomentosa)。Anticancer Research 18：3363-3368(1998)；Sandoval-ChaconM，Thompson J H，Zhang X J，Liu X，Mannick E E，SadowickaH，Charbonet R M，Clark D A，Miller M J.“猫爪草”的抗炎作用：NF-κB的作用(Anti-inflammatory actions of cat′s claw：the role of NF-kappaB)Aliment Pharmacol Ther 12：1279-1289，1998；Sandoval M，CharbonnetRM，OKUHAMA NN，Roberts J，Krenova Z，Trentacosti，AM，MillerMJ.”猫爪草”抑制TNFα产生并清除自由基：在细胞保护中的作用(Cat′s claw inhibits TNF alpha production and scavenges free radicals：role incytoprotection。Free Radicals Biol.Med.29(1)：71-78，2000)。它对于鉴定其有效成分是有益的。通过分离和鉴定有效成分，有可能纯化组分并提高药物应用并增强其效力。
本发明涉及表征为Pero提取物活性成分的CAEs的分离、纯化和鉴定，所述CAEs被鉴定为并在结构上被阐明为奎尼酸类似物。
发明概述
如果热水提取植物种钩藤然后超滤除去大分子量(＞10,000)组分，包括例如丹宁酸的有毒结合物，在非超滤部分仍存在具有有效免疫、抗肿瘤、抗炎以及DNA修复增强特性的新的钩藤植物的植物药用制备物(例如C-MED-100提取物)，所述热水提取植物种钩藤是其药物应用的过去应用。在本发明的优选实施方案中，C-MED-100提取物被溶于水中，喷雾干燥并通过用溶于水的90％乙醇除去喷雾干燥剂(淀粉)。产生的溶液在硅胶上进行薄层层析(TLC)以鉴定给产物赋予效力的活性成分。将90％乙醇C-MED-100提取物点样在(施加于)薄层层析板(硅胶60F254)上然后在大于约95％乙醇的约1％氨气系统中进行层析。当用1％氨水洗脱并随后通过诱导细胞程序性死亡生物分析杀死肿瘤细胞的能力时，在TLC色谱中只有一个区域有生物活性(在Rf＝0.2-0.3)。Rf＝0.2-0.3化合物在大约200nm处水中显示紫外吸收最大值，吸附在活性炭上并通过与羟基胺和氯化铁反应化学表征为CAE。(Bartos，通过形成羟基胺酸进行有机化合物的比色测定，Talanta 27：583-590，1980)。
在本发明另一实施方案中，从Pero提取物分离的生物活性CAEs优选C-MED-100提取物被进一步纯化并结构上被鉴定为奎尼酸类似物。用氨水从薄层硅胶色谱板上洗脱被证明是必要的因为这样就可以紧密的结合到氧化硅上。虽然Rf＝0.2-0.3斑点基本上不含其他C-MED-100提取物组分，但是其含有相对大量的溶解的无机氧化硅。为了除去从氧化硅TLC的纯化步骤引入的无机组分，冷冻干燥1％氨水溶液然后重新溶于甲醇，留下溶解的氧化硅。Rf＝0.2-0.3斑点从甲醇中结晶并随后经化学分析被鉴定为奎尼酸。
因此，本发明的一个实施方案包括分离Pero提取物生物活性组分，优选C-MED-100提取物的方法，包括：(a)通过将提取物与蒸馏水混合从Pero提取物沉淀喷雾干燥载体并蒸发乙醇以及冷冻干燥水溶解的提取物；(b)将冷冻干燥的提取物与蒸馏水和乙醇混合以获得用于薄层层析的点样混合物；(c)将混合物点样在预跑板的薄层色谱板上并在约1％氨气和乙醇的系统中层析，由此获得Rf＝0.2-0.3的发荧光条带；(d)刮下Rf＝0.2-0.3的发荧光条带；(e)用氨水洗脱刮下的条带并冷冻干燥洗脱的刮下条带干燥形成粉末；(f)用甲醇提取粉末除去溶解的硅胶，留下甲醇溶液；(g)浓缩甲醇溶液；并(h)结晶浓缩液获得生物活性组分。
本发明的另一实施方案包括鉴定通过上述方法获得的Pero提取物，优选C-MED-100提取物的生物活性组分。在这个实施方案中，生物活性组分显示出与Pero提取物相同的特性并主要包含奎尼酸类似物。优选地，奎尼酸类似物为奎尼酸内酯。
在另一实施方案中，本发明包括含有药用有效量Pero提取物生物活性组分和无毒惰性载体或稀释剂的药物组合物。本发明还包括包含使用药物组合物的实施方案，以(i)通过抑制TNF-α产生或诱导白血球细胞程序性死亡增强免疫能力，包括施用有效量药物组合物抑制TNF-α产生或诱导白血球细胞程序性死亡；(ii)通过抑制TNF-α产生或诱导白血球细胞程序性死亡治疗与哺乳动物免疫系统相关的失调，包括施用有效量药物组合物抑制TNF-α产生或诱导白血球细胞程序性死亡；(iii)通过抑制TNF-α产生或诱导白血球细胞程序性死亡抑制哺乳动物炎性应答，包括施用有效量药物组合物抑制TNF-α或诱导白血球细胞程序性死亡；(iv)通过抑制TNF-α产生或诱导白血球细胞程序性死亡治疗与哺乳动物炎性应答相关的失调，包括施用有效量药物组合物抑制TNF-α产生或诱导白血球的细胞程序性死亡；(v)通过诱导肿瘤细胞的细胞程序性死亡增强哺乳动物的抗肿瘤应答，包括施用有效量药物组合物诱导肿瘤细胞的细胞程序性死亡；(vi)通过诱导肿瘤细胞细胞程序性死亡治疗与哺乳动物肿瘤形成和生长应答相关的失调，包括施用有效量药物组合物诱导肿瘤细胞的细胞程序性死亡；以及(vii)增强哺乳动物的DNA修复过程，并因此提供对治疗老化失调重要的抗诱变活性。
附图说明
图1显示UV吸收率相对CAE的线性回归(利用邻苯二甲酸二辛酯作为标准估算为_g/ml)。
发明详述
参考下列实施例可以最好理解本发明的方法和组合物
实例1：分离和纯化Pero提取物的生物活性组分。Pero提取物，优选C-MED-100提取物的制备方法和组合物描述在Pero专利中，其在此处引入作为参考。Pero提取物的优选实施方案C-MED-100提取物为“猫爪草”(Uncaria tomentosa)的热水提取物，如前Pero专利所述提取是在90-100进行18-24小时并超滤除去大于10,000分子量的化合物。通过用玉米淀粉(Niro F-10喷雾干燥剂)喷雾干燥提取物进一步制备市场应用的C-MED-100提取物。目前上述步骤被用于纯化C-MED-100提取物的活性组分CAEs，并且，很清楚这些过程将可以应用于任一Pero提取物。所述步骤为：
1.用于活性成分评估的C-MED-100提取物检查：C-MED-100提取物中的CAEs具有与众不同的水溶性。它们易于结合丹宁酸和聚糖聚合物，因此当干燥时难以再溶解在诸如乙醇的合适有机溶剂中。很清楚提供的参数为近似值而非严格限制值，并且优选步骤为：
(a)100mg的C-MED-100提取物溶于玻璃管的1ml蒸馏水中30分钟。在2000×g离心溶解的溶液10分钟。产生的最上层上清液专留作分析用。
(b)200μl的最上层上清液放入新玻璃管中并向其中加入4.8ml的99.7％的乙醇。产生的溶液含有悬浮在约96％乙醇中的4mg/ml的C-MED-100提取物。
(c)涡旋(混合)C-MED-100提取物/乙醇溶液并在2000×g离心除去不溶性物质。产生的第二上清液专留作分析用。
(d)用99.7％乙醇将第二层上清液从4mg/ml的C-MED-100提取物稀释到30-200μg/ml之一用于测量UV吸收率。
优选地，60和120μm/ml浓度作为双倍浓度进行检测通过UV吸收率计算CAE。
(e)用UV分光光度计测定205nm处两个浓度C-MED-100提取物(优选60和120μg/ml)的UV吸收率。因为C-MED-100提取物中的CAEs在205nm处具有最大UV吸收，CAE的数值可以通过UV吸附的值计算。显示出与UV吸附值相关CAE的以μg/ml计的数值的标准曲线显示在图1中。
(f)通过方程式y＝0.0491X+0.212最合适斜率的线性回归分析确定以μg/ml表示的CAEs的浓度，其中y＝确定的UV吸收率值并且X＝CAE的浓度(μg/ml)。然后C-MED-100提取物(优选60和120μg/ml)的两个不同浓度作为分母，因为从UV标准曲线计算的CAE作为计算C-MED-100提取物中CAE百分数计算的分母。实际上，对两个值进行平均。
(g)上述步骤已经证实好于比色步骤，包括转化CAE到异羟肟酸并与氯化铁反应。(Bartos，通过形成异羟肟酸比色测定有机化合物(Colorimetric determination of organic compounds by formation ofhydroxamic acids)，Telanta 27：583-590，1980))。上述两个步骤得到相同的CAE含量估算值。
2.用于最终纯化和分离C-MED-100提取物活性成分的分析方法。此外，提供的参数为近似值并应该被理解为示范性而非限制性值：
(i)从C-MED-100的粗水提取物沉淀喷雾干燥载体(玉米淀粉)：C-MED-100提取物的5g提取物与50ml蒸馏水和950ml的99.7％乙醇混合。在空气中蒸发乙醇并冷冻干燥产生的溶液。产率为大约1g。
(ii)硅胶薄层色谱法(TLC)纯化和分离C-MED-100提取物的活性成分：步骤1：向200mg减去剩余淀粉的C-MED-100提取物中(上述步骤1后)，添加200μl蒸馏水和200μl的95.5％乙醇。混合形成点样混合物。
步骤2：将步骤1的点样混合物点样在4块预跑板的薄层色谱板上(硅胶60F254)。
洗脱系统包含在至少95％乙醇中的约1％NH3。唯一有效成分存在于Rf＝0.2-0.3的位置。
步骤3：刮去Rf＝0.2-0.3的发荧光蓝带。用约1％氨水洗脱并冷冻干燥直至干燥。
步骤4：用甲醇提取步骤3的粉末除去溶解的硅胶。浓缩甲醇溶液并结晶有效成分。
(iii)高压液相色谱法(HPLC)定量测定有效成分：色谱柱优选为3μm的C18柱(83mm×4.3mm内径，Perkin Elmer Corp.，Norwalk，CT)。优选的溶剂梯度洗脱如下：泵B包含甲醇，泵A包含1％溶于蒸馏水的乙酸。在25分钟内梯度以1.5ml/min的流速从10％乙酸迁移到90％。在UV 254nm处检测。峰值出现在梯度迁移的18分钟时。
(iv)分光光度法检测活性成分：C-MED-100提取物的有效成分在约200nm的UV范围的水中具有最大吸收。
因此，也在大约200nm处具有最大吸收的C-MED-100提取物的粗提物以及其纯化活性组分诸如CAEs和它们相应的有机酸可以通过在这个波长UV吸附相对已知的CAE标准进行估算。
C-MED-100提取物的活性成分的生物活性分析如下：将HL-60W6899细胞在37CO2恒温箱中每微孔5000个细胞(96微孔板)微量培养5天。培养后，用盐水清洗细胞并通过MTT分析估算克隆发生。分析的结果是概括在下表1中。
实施例2：作为C-MED-100提取物的活性成分奎尼酸的分析鉴定。通过TLC分离的生物活性组分(大约1mg的样品)完全溶于约0.7ml D2O中用于NMR分析，同时未添加位移试剂。记录了下列光谱数据。
NMR 020108ta
-1：1H
-2：1H/1H-相关光谱；COSY
-3：1H/13C-相关光谱；HMBC.
-4：13C-Deptl35.
-5：1H/13C-相关光谱；HMQ
1H-光谱包含来自主要化合物的信号。在4.03、3.90和3.43ppm处的3个1H-信号为来自次甲基的信号(参见HMQC)。此外，在66.9B75.1获得13C-信号与这些质子相关，并且其化学位移显示碳结合了氧，可能为CHOH-基。如COSY光谱中一样，这3个信号彼此结合在直链中。
主要化合物也显示在与在大约40ppm处的13C-信号相关的大约1.72B 1.99ppm处的1H-信号。HMQC光谱显示这些信号为CH2-基并且COSY光谱显示每个CH2-基中的单个质子是不同的。
根据COSY光谱，两个外侧CHOH-基结合不同的CH2-基。这就得出下列部分结构：
然而，因为很多1H-1H-偶联物与正常偶联物相比更大/更小，因此似乎所述化合物的旋光度可能受到空间位阻因此建议呈环状系统。此外，因为CH2-基的13C-位移靠近40ppm，因此R1＝R2＝可能为碳原子。这就得出下列部分结构：
Figure A0381015900161
在NMR光谱中没有发现可以解释化合物中X和Y的信号。
获得NMR光谱后也进行MS-分析。通过注入引入样品。用乙腈(ACN)(50/50)稀释的D20溶液上的MS光谱产生197的质量数(负离子，M-D＝195)。然后通过温和的氮气流蒸发溶液并在H2O/ACN中重建(50/50)。在这里获得的质量数为192(负离子，M-H＝191)。最后，化合物质量数为192并包含5个可交换的质子。当结合从NMR和MS中获得的信息时，主要化合物的结构设想如下：
奎尼酸
这个结构为奎尼酸。利用
实际的的奎尼酸获得的参考光谱与从C-MED-100提取物分离并纯化的奎尼酸光谱相同。
现在被鉴定为C-MED-100提取物活性成分的奎尼酸为作为在许多芳族化合物的自然合成的中间代谢物存在的已知化合物。(Bohm，BA，莽草酸(3，4，5-三羟基-1-环己烯-1-羧酸)Shikimic acid(3，4，5-trihydroxy-1-cyclohexene-1-carboxylic acid)，Chem.Rev.65：435-466，1965)。因此，本发明公开了奎尼酸及其类似物应该存在于许多种植物中，从而使它们具有额外的营养和健康益处。
唯一已知公开奎尼酸及其类似物任一医药应用的现有技术是处理皮肤皱纹(美国专利5,656,665和5,589,505)以及作为神经酰胺酶抑制剂治疗流感(美国专利6,111,132和6,225,341)。一直没有现有技术公开奎尼酸及其类似物可能用于治疗失调，虽然C-MED-100提取物已经用于治疗诸如老化、炎症、免疫抑制、以及控制肿瘤生长和DNA修复。
因此，本发明公开的是奎尼酸及其类似物尤其是奎尼酸内酯的其它应用。而且奎尼酸没有产生对于CAE的阳性化学反应。然而，通过对这个结构的研究，很明显奎尼酸可以在加热后形成奎尼酸内酯，其接着作为CAE起反应。(Fischer，H.O.和Dangschat，G.Helv.ChimACTAL8：1200，1935)。此外，用1％氨水处理奎尼酸内酯可以将其转化回到奎尼酸。利用纯化奎尼酸证实了这个化学作用，并且确定存在于C-MED-100提取物中的活性成分在这种“猫爪草”产物的先前医药制备期间已经合成。
Figure A0381015900171
实施例3提供这种证实
实施例3：这个实施例研究了存在于实施例1和2中的生物化学知识从而确定C-MED-100提取物的有效成分实际上为奎尼酸内酯。C-MED-100，奎尼酸和奎尼酸内酯都吸附到活性炭上，并且当它们吸附其上时，C-MED-100提取物的生物活性和在200nm处的UV吸收也被消除。这个数据教导我们C-MED-100提取物的生物活性组分在200nm处具有最大吸收。TLC结果显示C-MED-100提取物只有2个组分具有这种最大吸收。当在乙醇的1％氨气中层析时位于Rf＝0.05和Rf＝0.3处的组分分别相应于奎尼酸和奎尼酸内酯。
然而，评估后，C-MED-100提取物的生物活性组分的生物活性特性几乎完全对应于奎尼酸内酯。结果，C-MED-100提取物的抗老化、抗炎、免疫和DNA修复增强和抗肿瘤特性应归于奎尼酸内酯的存在。因此本发明公开的那些特性为可归因于奎尼酸内酯。
表1说明了(i)C-MED-100提取物分离的生物活性组分，(ii)奎尼酸和(iii)奎尼酸内酯的相对生化活性：奎尼酸可以购买自Sigma(＞99％)。奎尼酸内酯(＞95)从奎尼酸通过如前所述在250℃的升华合成(Fischer，HOL，和Dangschat G.Zur konfiguration derskikimisaure.Helv.Chim Act 18：1204，1935)。系列稀释的试验化合物被加入到96-微孔平底板的HL-60白血病细胞中(0.05×106个细胞/ml)，在培养中得到直至3000μg/ml的终浓度。微量滴定板在37℃保温72小时，用20μlMTT(5mg/ml)脉冲3小时，并如前所述在540nm处用分光光度计测定显色(Schweitzer，CM等，在半固体微滴度培养系统中分光光度法测定白血病细胞的克隆发生能力。Experimentalhematology21：573-578，1993)。
表1C-MED-100提取物的活性成分与奎尼酸及其内酯的比较。
(参数为近似值。)
化学参数               C-MED-100提取                 奎尼酸
                          物活性成分
                                               奎尼酸            内酯
水中的活性炭吸附               是              是                是
水中Auv最大值                  200nm           200nm             200nm
利用A200nm检测99％乙           Rf＝0-0.05     Rf＝0-0.05
醇中大约1％氨气中TLC                           Rf＝0.2-0.3
的Rf＝0.2-0.3
形成异羟肟酸/氯化铁显色        是              没有              是
复合物
利用HL-60细胞中的IC50         40μg/ml        ＞3000μg/ml      80μg/ml
生物测定效力
1％氨水中IC50HL-60细胞        ＞300μg/ml     ＞300μg/ml       ＞300μg/ml
后的生物测定
从上述比较，很明显C-MED-100提取物中的生物活性组分实际上为奎尼酸内酯。具体地，C-MED-100提取物生物活性组分，奎尼酸和奎尼酸内酯的相对IC50值证实生物活性组分不可能是奎尼酸本身，但是必定为其类似物，诸如奎尼酸内酯或通过用1％氨气处理形成的盐。C-MED-100提取物生物活性组分和奎尼酸内酯的IC50值的差异不显著，并且可能是由于存在于C-MED-100提取物中的其它化合物的协同效应。
然而，C-MED-100提取物中活性成分奎尼酸内酯比其纯化形式更高的效力显示在C-MED-100提取物中存在其它天然存在组分，诸如奎尼酸或其铵盐的情况下奎尼酸内酯活性更强。
虽然本发明已经根据某些具体的实施方案进行了描述，但是应该认识到只要不背离本发明，本领域技术人员可以进行多种修饰和改变。因此，就意味着附属的权利要求包括所有包括在本发明的精神和范围内的这种修饰和改变。

Claims (21)

1.一种分离植物水溶性提取物生物活性组分的方法，其中所述提取物在约199nm处显示uv最大值，在低于100的温度下稳定24小时和在约121通过高压灭菌稳定长达至少20分钟，以及在约-20液态下冷冻时保持至少6月的生物活性，并且主要由分子量高达约12,000的分子组成，所述方法包括如下步骤：
(a)从所述水溶性提取物通过用第一醇溶液沉淀除去醇不溶性组分；
(b)将来自步骤(a)的所述水溶性提取物点样在预跑板的薄层层析(tlc)板上并在约1％氨气的第二醇溶液系统中对点样板进行层析分离，从而获得rf＝0.2-0.3的荧光条带；
(c)分离rf＝0.2-0.3的荧光条带；
(d)用氨水洗脱所述分离的荧光条带并干燥所述洗脱的分离荧光条带以形成粉末；
(e)用第三醇溶液提取所述粉末以除去醇不溶解的硅胶，留下所述第三醇溶液；
(f)浓缩所述第三醇溶液；以及
(g)从所述浓缩的第三醇溶液分离所述生物活性组分。
2.根据权利要求1的分离生物活性组分的方法，其中所述植物是钩藤。
3.根据权利要求的1分离生物活性组分的方法，其中所述水溶性提取物是“猫爪草”提取物。
4.一种植物水溶性提取物的生物活性组分，其中所述生物活性组分主要由一种或者多种羧基烷基酯(caes)组成。
5.权利要求4的生物活性组分，其中所述caes是奎尼酸类似物。
6.权利要求5的生物活性组分，其中所述奎尼酸类似物包括奎尼酸内酯或奎尼酸盐。
7.权利要求4的生物活性组分，其中所述caes存在奎尼酸。
8.一种药物组合物，包括：
a)药用有效量的一种或者多种羧基烷基酯(caes)以抑制tnf-α的产生或诱导白血球的细胞程序性死亡；以及
b)无毒惰性载体或稀释剂。
9.权利要求8的药物组合物，其中所述caes为奎尼酸类似物。
10.权利要求8的药物组合物，其中所述奎尼酸类似物包括奎尼酸内酯或奎尼酸盐。
11.一种给药方法，包括给哺乳动物施用权利要求8的药物组合物。
12.权利要求11的方法，进一步包括通过抑制tnf-α产生或诱导白血球的细胞程序性死亡增强哺乳动物的免疫能力，所述抑制源于给所述哺乳动物施用有效量的权利要求8的药物组合物以抑制tnf-α产生或诱导白血球的细胞程序性死亡。
13.权利要求11的方法，进一步包括通过抑制tnf-α产生或诱导白血球的细胞程序性死亡治疗与哺乳动物免疫系统相关的失调，所述抑制源于给所述哺乳动物施用有效量的权利要求8的药物组合物以抑制tnf-α产生或诱导白血球的细胞程序性死亡。
14.权利要求11的方法，进一步包括通过抑制tnf-α产生或诱导白血球的细胞程序性死亡抑制哺乳动物炎性应答，所述抑制源于给所述哺乳动物施用有效量的权利要求8的药物组合物以抑制tnf-α产生或诱导白血球的细胞程序性死亡。
15.权利要求11的方法，进一步包括通过抑制tnf-α产生或诱导白血球的细胞程序性死亡治疗与哺乳动物炎性应答相关的失调，所述抑制源于给所述哺乳动物施用有效量的权利要求8的药物组合物以抑制tnf-α产生或诱导白血球的细胞程序性死亡。
16.权利要求11的方法，进一步包括通过诱导肿瘤细胞的细胞程序性死亡增强哺乳动物的抗肿瘤应答，所述诱导源于给所述哺乳动物施用有效量的权利要求8的药物组合物以诱导肿瘤细胞的细胞程序性死亡。
17.权利要求11的方法，进一步包括通过诱导肿瘤细胞的细胞程序性死亡治疗与哺乳动物对肿瘤形成和生长的应答相关的失调，所述诱导源于给所述哺乳动物施用有效量的权利要求8的药物组合物以诱导肿瘤细胞的细胞程序性死亡。
18.权利要求11的方法，进一步包括增强哺乳动物的dna修复过程，所述增强源于给所述哺乳动物施用有效量的权利要求8的药物组合物。
19.权利要求11的方法，进一步包括通过给所述哺乳动物施用有效量的权利要求8的药物组合物治疗与哺乳动物衰老相关的失调。
20.权利要求11方法，进一步包括在有毒代谢或环境接触的衰竭后通过刺激周围血细胞的复元增强哺乳动物的免疫能力，所述刺激源于给所述哺乳动物施用权利要求8的药物组合物。
21.一种通过权利要求1的方法分离的植物水溶性提取物的生物活性组分。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102300578A (zh) * 2008-12-01 2011-12-28 延寿有限责任公司 用于改变健康、安康和寿命的方法和组合物
CN109847071A (zh) * 2017-11-30 2019-06-07 奥普特吉尼克斯有限公司 增加细胞中的端粒长度
CN113759067A (zh) * 2021-08-06 2021-12-07 北京康仁堂药业有限公司 一种薄层色谱的构建方法和鉴定方法及其应用

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002042429A2 (en) * 2000-11-03 2002-05-30 Proteotech, Inc. Methods of isolating amyloid-inhibiting compounds and use of compounds isolated from uncaria tomentosa and related plants
US6964784B2 (en) * 2002-03-07 2005-11-15 Optigenex, Inc. Method of preparation and composition of a water soluble extract of the bioactive component of the plant species uncaria for enhancing immune, anti-inflammatory, anti-tumor and dna repair processes of warm blooded animals
EP1631304A4 (en) 2003-04-04 2007-03-21 Unigen Pharmaceuticals Inc FORMULATION FOR INHIBITING CYCLOOXYGENASE (COX) AND LIPOXYGENASE (LOX) FOR SKIN CARE
PL1762219T3 (pl) † 2004-04-01 2013-06-28 Cantabria Ind Farmaceutica Sa Fotoochronne i/lub fotoimmunoochronne kompozycje do skóry i ich zastosowania
US20050226825A1 (en) * 2004-04-13 2005-10-13 Giampapa Vincent C Topical composition for preventing and treating skin damage caused by UV light exposure
US20050287227A1 (en) * 2004-04-16 2005-12-29 Ronald Pero Supplement containing carotenoid, nicotinamide, zinc, water soluble extract of uncaria species and method of the same
KR100545304B1 (ko) * 2004-09-01 2006-05-08 주식회사 유니젠 아선약을 포함하는 운카리아 속 식물, 또는 이의 황금및/또는 녹차의 배합물을 포함하는 사이클로옥시게나제및/또는 5-리폭시게나제 억제용 조성물
CA2609615A1 (en) * 2005-03-16 2006-09-28 Genetic Health Enterprises (Pty), Ltd. Medicinal compositions of salts, chelates and/or free acids of alpha hydroxyl organic acids and related processes and methods
US20090035395A1 (en) * 2007-08-01 2009-02-05 Peter Koepke Spondias mombin l. extract and methods of extracting and using such extract
US7879369B2 (en) 2007-09-18 2011-02-01 Selvamedica, Llc Combretum laurifolium Mart. extract and methods of extracting and using such extract
AU2008323683B2 (en) * 2007-11-09 2014-10-02 University Of Tennessee Research Foundation Anti-inflammatory quinic acid derivatives for oral administration
US8911774B2 (en) * 2009-05-18 2014-12-16 Cellhealth Technologies Ltd. Topical composition for anti-aging skin treatment using dual DNA repair mechanism and method of use
US9457009B2 (en) 2012-05-31 2016-10-04 The United States Of America As Represented By The Department Of Veterans Affairs Methods and compositions for preventing and treating auditory dysfunctions
ES2821528T3 (es) 2012-11-14 2021-04-26 Grace W R & Co Composiciones que contienen un material biológicamente activo y un óxido inorgánico no ordenado
EP3264918A1 (en) * 2015-03-03 2018-01-10 Nestec S.A. Compound use in promoting energy expenditure

Family Cites Families (39)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BE538512A (zh) * 1954-05-28
DE1905875A1 (de) * 1969-02-06 1970-08-20 Stark Dr Hans C Mittel,hergestellt durch die Kombination verschiedener chemischer Koerper,das die Regulierung und vorzeitige Hervorrufung der Periodenblutung bewirkt sowie im Klimakterium die Menstruation nach dem Stillstand wieder hervorruft und fuer mehrere Jahre verlaengert
US4363815A (en) * 1975-07-23 1982-12-14 Yu Ruey J Alpha hydroxyacids, alpha ketoacids and their use in treating skin conditions
US5389677B1 (en) * 1986-12-23 1997-07-15 Tristrata Inc Method of treating wrinkles using glycalic acid
US5385938B1 (en) * 1986-12-23 1997-07-15 Tristrata Inc Method of using glycolic acid for treating wrinkles
US4940803A (en) * 1988-05-23 1990-07-10 Merck & Co., Inc. Process for synthesis of 1R,2R,5R-2-hydroxy-6-oxo-7-oxabicyclo[3.2.1]-octane
EP0581980B1 (fr) * 1992-08-03 1999-03-03 Societe Des Produits Nestle S.A. Dérivés de l'acide quinique 3- et/ou 4-substitués et procédé de préparation de dérivés de l'acide quinique 3- et/ou 4-substitués
DE69607704T2 (de) * 1995-02-27 2000-12-28 Gilead Sciences, Inc. Neue selektive inhibitoren viraler oder bakterieller neuraminidasen
US6238675B1 (en) * 1997-02-27 2001-05-29 Campamed Corp. Method of preparation and composition of a water soluble extract of the plant species Uncaria for enhancing immune, anti-inflammatory and anti-tumor processes of warm blooded animals
US6039949A (en) * 1997-02-27 2000-03-21 Campamed, Inc. Method of preparation and composition of a water soluble extract of the plant species uncaria
US5843928A (en) * 1997-03-17 1998-12-01 Wisconsin Alumni Research Foundation 2-alkylidene-19-nor-vitamin D compounds
TW480247B (en) * 1997-12-12 2002-03-21 Gilead Sciences Inc Novel compounds useful as neuraminidase inhibitors and pharmaceutical compositions containing same
JPH11245503A (ja) * 1998-03-02 1999-09-14 Bando Chem Ind Ltd 水性インク吸収材及び該吸収材の層を有する積層フィルム
DK2270150T4 (da) * 1999-04-09 2019-08-26 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Fremgangsmåde til at kontrollere aktiviteten af immunologisk funktionelt molekyle.
US6723368B1 (en) * 1999-12-21 2004-04-20 Loretta M. Zapp Method for enhancing post-processing content of beneficial compounds in beverages naturally containing same
US20010047032A1 (en) * 1999-12-30 2001-11-29 Castillo Gerardo M. Polyhydroxylated aromatic compounds for the treatment of amyloidosis and alpha-synuclein fibril diseases
US6410246B1 (en) * 2000-06-23 2002-06-25 Genetastix Corporation Highly diverse library of yeast expression vectors
US7625756B2 (en) * 2000-06-28 2009-12-01 GycoFi, Inc. Expression of class 2 mannosidase and class III mannosidase in lower eukaryotic cells
US20060034830A1 (en) * 2000-06-28 2006-02-16 Gerngross Tillman U Immunoglobulins comprising predominantly a GalGlcNAcMan5GLcNAc2 glycoform
US7863020B2 (en) * 2000-06-28 2011-01-04 Glycofi, Inc. Production of sialylated N-glycans in lower eukaryotes
EP2322644A1 (en) * 2000-06-28 2011-05-18 GlycoFi, Inc. Methods for producing modified glycoproteins
US20060029604A1 (en) * 2000-06-28 2006-02-09 Gerngross Tillman U Immunoglobulins comprising predominantly a GlcNAc2Man3GlcNAc2 glycoform
US7449308B2 (en) * 2000-06-28 2008-11-11 Glycofi, Inc. Combinatorial DNA library for producing modified N-glycans in lower eukaryotes
US7795002B2 (en) * 2000-06-28 2010-09-14 Glycofi, Inc. Production of galactosylated glycoproteins in lower eukaryotes
US7598055B2 (en) * 2000-06-28 2009-10-06 Glycofi, Inc. N-acetylglucosaminyltransferase III expression in lower eukaryotes
US20060034828A1 (en) * 2000-06-28 2006-02-16 Gerngross Tillman U Immunoglobulins comprising predominantly a GlcNAcMAN5GLCNAC2 glycoform
US20060024304A1 (en) * 2000-06-28 2006-02-02 Gerngross Tillman U Immunoglobulins comprising predominantly a Man5GlcNAc2 glycoform
GB0108903D0 (en) * 2000-10-05 2001-05-30 Aventis Pharm Prod Inc Novel crystalline forms of a factor Xa inhibitor
US7064191B2 (en) * 2000-10-06 2006-06-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for purifying antibody
US6632459B2 (en) * 2000-12-11 2003-10-14 Nutricia N.V. Chlorogenic acid and an analog thereof for immune system stimulation
CA2347879A1 (en) * 2001-05-11 2002-11-11 Vanderbilt University Substituted dicinnamoylquinides and their use in augmentation of adenosine function
US20060034829A1 (en) * 2001-12-27 2006-02-16 Gerngross Tillman U Immunoglobulins comprising predominantly a MAN3GLCNAC2 glycoform
CA2471551C (en) * 2001-12-27 2014-09-30 Glycofi, Inc. Methods to engineer mammalian-type carbohydrate structures
US20060024292A1 (en) * 2001-12-27 2006-02-02 Gerngross Tillman U Immunoglobulins comprising predominantly a Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2 glycoform
US6964784B2 (en) * 2002-03-07 2005-11-15 Optigenex, Inc. Method of preparation and composition of a water soluble extract of the bioactive component of the plant species uncaria for enhancing immune, anti-inflammatory, anti-tumor and dna repair processes of warm blooded animals
US7332299B2 (en) * 2003-02-20 2008-02-19 Glycofi, Inc. Endomannosidases in the modification of glycoproteins in eukaryotes
JP4861830B2 (ja) * 2003-12-24 2012-01-25 グライコフィ， インコーポレイテッド 糖タンパク質の産生において、グリカンのマンノシルリン酸化を除去する方法
JP4932699B2 (ja) * 2004-03-17 2012-05-16 グライコフィ， インコーポレイテッド 真菌および酵母におけるシチジンモノホスフェート−シアル酸合成経路を操作する方法
JP4954866B2 (ja) * 2004-04-29 2012-06-20 グライコフィ， インコーポレイテッド 糖タンパク質の作製においてアルファ−マンノシダーゼ抵抗性グリカンを減少させるか又は排除する方法

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102300578A (zh) * 2008-12-01 2011-12-28 延寿有限责任公司 用于改变健康、安康和寿命的方法和组合物
CN109847071A (zh) * 2017-11-30 2019-06-07 奥普特吉尼克斯有限公司 增加细胞中的端粒长度
CN109847071B (zh) * 2017-11-30 2022-07-19 奥普特吉尼克斯有限公司 增加细胞中的端粒长度
CN113759067A (zh) * 2021-08-06 2021-12-07 北京康仁堂药业有限公司 一种薄层色谱的构建方法和鉴定方法及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
EP1485114A2 (en) 2004-12-15
US8372449B2 (en) 2013-02-12
US20110245337A1 (en) 2011-10-06
KR20040099300A (ko) 2004-11-26
IL163886A0 (en) 2005-12-18
US20050176825A1 (en) 2005-08-11
US7595064B2 (en) 2009-09-29
US20090281180A1 (en) 2009-11-12
US7947312B2 (en) 2011-05-24
US20030170320A1 (en) 2003-09-11
WO2003074062A3 (en) 2004-02-05
WO2003074062A2 (en) 2003-09-12
AU2003207894A1 (en) 2003-09-16
US20090298939A1 (en) 2009-12-03
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