CN1636019A - 重组抗体的组成以及制作和使用方法 - Google Patents
重组抗体的组成以及制作和使用方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1636019A CN1636019A CNA028164334A CN02816433A CN1636019A CN 1636019 A CN1636019 A CN 1636019A CN A028164334 A CNA028164334 A CN A028164334A CN 02816433 A CN02816433 A CN 02816433A CN 1636019 A CN1636019 A CN 1636019A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- antibody
- recombinant antibodies
- ser
- sequence
- cell
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 44
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title description 17
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 17
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 16
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 16
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 23
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 21
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 19
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 14
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 3
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 claims 2
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 claims 1
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 abstract description 72
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 abstract description 44
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 abstract description 18
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 abstract description 17
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 abstract 1
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 abstract 1
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 abstract 1
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 83
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 53
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 31
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 26
- 206010037742 Rabies Diseases 0.000 description 26
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 26
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 25
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 23
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 21
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 21
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 18
- 230000006870 function Effects 0.000 description 17
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 17
- 239000000047 product Substances 0.000 description 16
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 15
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 15
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 13
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 12
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 12
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 12
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 11
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 description 10
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 10
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 10
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 9
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 8
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 8
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 8
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 8
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 8
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 8
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 7
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 7
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 7
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 7
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 7
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 6
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 6
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 6
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 6
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 6
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 6
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 6
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 6
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 5
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 5
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 5
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 5
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 5
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 5
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 102220023256 rs387907547 Human genes 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 5
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthine Chemical compound O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 4
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 4
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 4
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 4
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 4
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 4
- 238000013016 damping Methods 0.000 description 4
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 4
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- -1 isopropyl ss-D-galactoside Chemical compound 0.000 description 4
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 4
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- FDPIMTJIUBPUKL-UHFFFAOYSA-N pentan-3-one Chemical compound CCC(=O)CC FDPIMTJIUBPUKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000701822 Bovine papillomavirus Species 0.000 description 3
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 3
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 3
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 3
- 108020005091 Replication Origin Proteins 0.000 description 3
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 3
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 102220369447 c.1352G>A Human genes 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 3
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 3
- 230000012447 hatching Effects 0.000 description 3
- 230000008676 import Effects 0.000 description 3
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 239000013595 supernatant sample Substances 0.000 description 3
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 3
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 3
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 3
- 206010002198 Anaphylactic reaction Diseases 0.000 description 2
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 2
- 241000958531 Lycalopex culpaeus Species 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 2
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 2
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 2
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 2
- 229960000265 cromoglicic acid Drugs 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 2
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 2
- VLARUOGDXDTHEH-UHFFFAOYSA-L disodium cromoglycate Chemical compound [Na+].[Na+].O1C(C([O-])=O)=CC(=O)C2=C1C=CC=C2OCC(O)COC1=CC=CC2=C1C(=O)C=C(C([O-])=O)O2 VLARUOGDXDTHEH-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000005611 electricity Effects 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 2
- 231100000572 poisoning Toxicity 0.000 description 2
- 230000000607 poisoning effect Effects 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 230000002064 post-exposure prophylaxis Effects 0.000 description 2
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 2
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000008521 reorganization Effects 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 2
- 229940075420 xanthine Drugs 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AWKYSZSJPJUFQS-UHFFFAOYSA-N 3,7-dihydropurine-2,6-dione;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 AWKYSZSJPJUFQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 4-isocyanato-4'-methyldiphenylmethane Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CC1=CC=C(N=C=O)C=C1 UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LPMXVESGRSUGHW-UHFFFAOYSA-N Acolongiflorosid K Natural products OC1C(O)C(O)C(C)OC1OC1CC2(O)CCC3C4(O)CCC(C=5COC(=O)C=5)C4(C)CC(O)C3C2(CO)C(O)C1 LPMXVESGRSUGHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010043137 Actomyosin Proteins 0.000 description 1
- 101710153593 Albumin A Proteins 0.000 description 1
- 101710187573 Alcohol dehydrogenase 2 Proteins 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 241001313855 Bletilla Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 108091028026 C-DNA Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 1
- 235000008733 Citrus aurantifolia Nutrition 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 206010011831 Cytomegalovirus infection Diseases 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- 108010021582 Glucokinase Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102000005731 Glucose-6-phosphate isomerase Human genes 0.000 description 1
- 108010070600 Glucose-6-phosphate isomerase Proteins 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000005548 Hexokinase Human genes 0.000 description 1
- 108700040460 Hexokinases Proteins 0.000 description 1
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 101000998953 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 1-2 Proteins 0.000 description 1
- 101001008255 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 1D-8 Proteins 0.000 description 1
- 101001047628 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 2-29 Proteins 0.000 description 1
- 101001008321 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 2D-26 Proteins 0.000 description 1
- 101001047619 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 3-20 Proteins 0.000 description 1
- 101001008263 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 3D-15 Proteins 0.000 description 1
- 241000701109 Human adenovirus 2 Species 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102100036887 Immunoglobulin heavy variable 1-2 Human genes 0.000 description 1
- 102100022964 Immunoglobulin kappa variable 3-20 Human genes 0.000 description 1
- 102000004195 Isomerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000769 Isomerases Proteins 0.000 description 1
- 241001331012 Kotonkan virus Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 101710175625 Maltose/maltodextrin-binding periplasmic protein Proteins 0.000 description 1
- 241000266847 Mephitidae Species 0.000 description 1
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 1
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- LPMXVESGRSUGHW-GHYGWZAOSA-N Ouabain Natural products O([C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O1)[C@H]1C[C@@H](O)[C@@]2(CO)[C@@](O)(C1)CC[C@H]1[C@]3(O)[C@@](C)([C@H](C4=CC(=O)OC4)CC3)C[C@@H](O)[C@H]21 LPMXVESGRSUGHW-GHYGWZAOSA-N 0.000 description 1
- 101150012394 PHO5 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000001105 Phosphofructokinases Human genes 0.000 description 1
- 108010069341 Phosphofructokinases Proteins 0.000 description 1
- 102000012288 Phosphopyruvate Hydratase Human genes 0.000 description 1
- 108010022181 Phosphopyruvate Hydratase Proteins 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 241001505332 Polyomavirus sp. Species 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 108010076039 Polyproteins Proteins 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 108010053763 Pyruvate Carboxylase Proteins 0.000 description 1
- 102000013009 Pyruvate Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020005115 Pyruvate Kinase Proteins 0.000 description 1
- 102100039895 Pyruvate carboxylase, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 101100191147 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) PHO3 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000409492 Simian enterovirus SV4 Species 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 244000166550 Strophanthus gratus Species 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 102100025237 T-cell surface antigen CD2 Human genes 0.000 description 1
- 101150006914 TRP1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108700007696 Tetrahydrofolate Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 1
- 235000011941 Tilia x europaea Nutrition 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- 102000005924 Triose-Phosphate Isomerase Human genes 0.000 description 1
- 108700015934 Triose-phosphate isomerases Proteins 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- 229930003756 Vitamin B7 Natural products 0.000 description 1
- 241000282485 Vulpes vulpes Species 0.000 description 1
- 108010027570 Xanthine phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 1
- AECBFOQMFLYGMO-UHFFFAOYSA-N [Na]C=O Chemical compound [Na]C=O AECBFOQMFLYGMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 229960003311 ampicillin trihydrate Drugs 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000036783 anaphylactic response Effects 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 238000011091 antibody purification Methods 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 125000004057 biotinyl group Chemical group [H]N1C(=O)N([H])[C@]2([H])[C@@]([H])(SC([H])([H])[C@]12[H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 208000002352 blister Diseases 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 102220369446 c.1274G>A Human genes 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000034303 cell budding Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000012832 cell culture technique Methods 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 1
- 208000035250 cutaneous malignant susceptibility to 1 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N diethylamine Chemical compound CCNCC HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- LXJXRIRHZLFYRP-UHFFFAOYSA-N glyceraldehyde 3-phosphate Chemical compound O=CC(O)COP(O)(O)=O LXJXRIRHZLFYRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004116 glycogenolysis Effects 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 101150106093 gpt gene Proteins 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 102000057593 human F8 Human genes 0.000 description 1
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-FWAVGLHBSA-N hygromycin A Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@H](C(=O)C)O[C@@H]1Oc1ccc(\C=C(/C)C(=O)N[C@@H]2[C@@H]([C@H]3OCO[C@H]3[C@@H](O)[C@@H]2O)O)cc1O YQYJSBFKSSDGFO-FWAVGLHBSA-N 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000004201 immune sera Anatomy 0.000 description 1
- 229940042743 immune sera Drugs 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 239000004571 lime Substances 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000011177 media preparation Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- HOVAGTYPODGVJG-UHFFFAOYSA-N methyl beta-galactoside Natural products COC1OC(CO)C(O)C(O)C1O HOVAGTYPODGVJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HPNSFSBZBAHARI-UHFFFAOYSA-N micophenolic acid Natural products OC1=C(CC=C(C)CCC(O)=O)C(OC)=C(C)C2=C1C(=O)OC2 HPNSFSBZBAHARI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000002715 modification method Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- HPNSFSBZBAHARI-RUDMXATFSA-N mycophenolic acid Chemical compound OC1=C(C\C=C(/C)CCC(O)=O)C(OC)=C(C)C2=C1C(=O)OC2 HPNSFSBZBAHARI-RUDMXATFSA-N 0.000 description 1
- 229960000951 mycophenolic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 101150115693 ompA gene Proteins 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000013307 optical fiber Substances 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- LPMXVESGRSUGHW-HBYQJFLCSA-N ouabain Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1C[C@@]2(O)CC[C@H]3[C@@]4(O)CC[C@H](C=5COC(=O)C=5)[C@@]4(C)C[C@@H](O)[C@@H]3[C@@]2(CO)[C@H](O)C1 LPMXVESGRSUGHW-HBYQJFLCSA-N 0.000 description 1
- 229960003343 ouabain Drugs 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 229940049547 paraxin Drugs 0.000 description 1
- 101150050446 pelB gene Proteins 0.000 description 1
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 101150009573 phoA gene Proteins 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 1
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 1
- 229920006316 polyvinylpyrrolidine Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 238000002331 protein detection Methods 0.000 description 1
- 229940036105 rabies immunoglobulin Drugs 0.000 description 1
- 229960003127 rabies vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 229940047431 recombinate Drugs 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000452 restraining effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 102220023257 rs387907546 Human genes 0.000 description 1
- 102220023258 rs387907548 Human genes 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 210000002955 secretory cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 239000011735 vitamin B7 Substances 0.000 description 1
- 235000011912 vitamin B7 Nutrition 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
本发明公开了重组抗体。描述了核酸及其编码的氨基酸序列以及他们的用途,这种氨基酸序列构成了人狂犬病毒中和抗体免疫蛋白的重链和轻链。
Description
相关申请的交叉参考
此申请要求美国第60/314,023号申请的优先权,申请日为2001年8月21日,并将该申请作为参考整合在此申请中。
发明领域
本发明涉及重组抗体,包括人单克隆狂犬病毒中和抗体的核酸及氨基酸序列。
发明背景
狂犬病是由狂犬病毒感染中枢神经系统引起的急性神经系统疾病,狂犬病毒属于棒状病毒家族。由于它的古老和可怕的自然属性,狂犬病毒在历史上非常重要,而且由于其在野外有广泛的宿主物种分布,它一直是人类以及牲畜感染的重要威胁。在世界的大部分地区,狂犬病毒在地区物种中是地方病,而不同地区的病毒变异体之间相似性很小。虽然在包括联合王国,澳大利亚,日本,以及各个岛屿上没有地方性狂犬病,英国和澳大利亚也已发现了狂犬病和蝙蝠相关的狂犬相关病毒。
狂犬病毒为子弹形状的包被颗粒,平均75×180纳米。病毒颗粒包含一条单链负链RNA基因组和5个结构蛋白:核蛋白分子(N),磷酸蛋白(NS),多聚体(L),基质蛋白(M),和病毒糖蛋白(G)。N蛋白和G蛋白都带有抗原决定簇,从而使各种狂犬病毒株带有不同的血清学特征。N决定簇在分离出的各种病毒株中高度保守,因此成为使用特异抗体进行免疫组织学检测的非常有用的靶标。另一方面,G蛋白抗原决定簇在各株病毒之间变异非常大。用疫苗产生的病毒中和抗体被检测出是抗G蛋白的。虽然已经很清楚,T细胞对G,N,NS都产生反应并在实验条件下参与免疫反应,对狂犬病毒的免疫性检测基本上限制在血清学方面,尤其是病毒中和抗体方面。
在人的狂犬病常见的地区,狗是病毒的主要宿主。当狗狂犬病基本被疫苗消除的地方,狐狸,山狗,臭鼬,浣熊,蝙蝠以及许多哺乳动物可以携带病毒。在许多地方,野生动物携带的病毒仍在蔓延。而且,狂犬病毒能被通常与狂犬病毒无关的动物如猫,兔子等传递到人或其他宿主。
狂犬病当临床症状一旦出现时几乎就是致命的,但感染者如果马上用被动和主动免疫联合治疗则可能被逆转。被动免疫包括注射从狂犬病毒免疫个体上得到的病毒中和抗体(人狂犬病免疫球蛋白,HRIG)或从超免疫马得到的中和抗体(马狂犬病免疫球蛋白,ERIG)。两者对受者均有一定的风险,包括不同病毒株的抗原特异性。
HRIC是用提取的人血清制备的,因此可能被已知的或未知的人类病原污染。另一方面,作为异种抗原制备物,ERIC可能产生严重的过敏反应。鼠单克隆抗体被试图用作暴露于病毒后的预防,但如同ERIG,对人体也有抗原性。这将导致其很快被人体清除或可能产生过敏反应。
人单克隆抗体的使用受限是因为人杂交瘤细胞系制备困难,不稳定,且在合理花费下不能产生足量的和特异性的单克隆抗体。单克隆抗体的生产成本使得人们试图寻找更经济的方法从杂交瘤中得到单克隆抗体。
组成免疫球蛋重链和轻链可变区和铰链区的Fab和Fab2区域对狂犬病毒感染无保护作用,这已经非常清楚。抗体的体内效能依赖于整个序列,也意味着只有特定抗体才表现出抗狂犬病毒活性。抗体的固定区才有免疫反应性。因此,固定区的特性才是对狂犬病毒感染有保护作用。可变区与另一抗体的固定区结合,因此不是对狂犬病毒自然产生的抗体是无效的。
在诊断,预防,治疗狂犬病毒感染中,对重组抗体产生了需求。需要制造和合成重组抗体,以及包含该抗体的药物成分和它的制造方法。
在诊断,预防,治疗攻击神经组织的病原感染中,对重组抗体产生了需求。需要制造和合成重组抗体,以及包含该抗体的药物成分和它的制造方法。
为提供更好的制剂,人的单克隆抗体的制备使用了EB病毒转化的狂犬病毒特异的人B细胞与鼠—人不均一杂交瘤细胞融合。组成编码抗体重链和轻链的cDNA克隆,使得抗体能在不同一的表达体系中表达。从而能从一个被控制的体系生产特异性中和狂犬病毒的人抗体并提纯。本发明是关于单克隆狂犬病毒中和抗体重链和轻链的核酸序列,以及编码蛋白的氨基酸序列。本发明还提供了使用此单克隆抗体作为有效治疗暴露于狂犬病毒个体的预防治疗的方法。
发明概述
本发明提供了重组抗体,该抗体的组成和制备方法。根据本发明某些方面,本发明提供了重组抗狂犬病毒的抗体已经该抗体的组成和制备方法,本发明提供了重组抗体的特异性固定区,该固定区对攻击神经系统的病原特别有效。
本发明进一步涉及分离的DNA序列,产生上述序列的重组载体,包含上述载体的宿主细胞,以及使用上述宿主细胞制备重组抗体的方法。
本发明还涉及使用该重组抗体对病原感染神经组织,特别是狂犬病,进行诊断,预防和治疗。
本发明提供分离的核酸分子,其具备一条重链核酸分子和一条轻链核酸分子,分别编码一条重链氨基酸序列和一条轻链氨基酸序列。该重链和轻链氨基酸序列即单克隆狂犬病毒中和抗体,特异性与狂犬病毒蛋白结合。
本发明包括分离的核酸分子,共编码单克隆狂犬病毒中和抗体。核酸分子是从cDNA序列重链SEQ.ID.No:1和轻链SEQ.ID.No:2得到。
本发明涉及分离的人单克隆狂犬病毒中和抗体,该抗体由cDNA克隆编码抗体的重链和轻链,在不均一表达体系中表达,且经过纯化。该分离的人单克隆狂犬病毒中和抗体的氨基酸序列为:重链SEQ.ID.No:3和轻链SEQ.ID.No:4。
本发明涉及一个融合的基因,该基因编码一个手性免疫球蛋白轻链,该手性轻链包含第一条DNA序列编码免疫球蛋白轻链可变区,该可变区属于由一个杂交瘤细胞系产生的单克隆狂犬病毒和抗体,以及第二条DNA序列编码一条人轻链固定区。本发明还包括一个表达这个融合基因的表达载体。为该表达载体提供一个宿主细胞是更远的目标。
本发明包括一个融合的基因,该基因编码一个手性免疫球蛋白重链,该手性轻链包含一个序列编码免疫球蛋白重链可变区,该可变区属于由一个杂交瘤细胞系产生的单克隆狂犬病毒和抗体,以及第二条DNA序列编码一条人重链固定区。本发明还包括一个表达这个融合基因的表达载体。为该表达载体提供一个宿主细胞是更远的目标。
本发明包括由一个从融合基因编码手性免疫球免疫球蛋白轻链和一个从融合基因编码的手性免疫球蛋白重链组合成的分离的单克隆狂犬病毒中和抗体。
本发明包括使用有效治疗剂量人单克隆狂犬病毒中和抗病毒中和抗体治疗暴露于狂犬病毒的个体的方法。该抗体由cDNA克隆编码抗体的重链和轻链,并将抗体提纯。从而防止病毒侵及中枢神经系统。
发明的详细说明
本发明包括特异性结合到不同狂犬病毒株的糖蛋白的单克隆抗体。暴露后使用单克隆抗体的治疗,或混合使用不同单克隆抗体,将在病毒入侵处中和狂犬病毒,阻止病毒入侵中枢神经系统。因此,若皮下或肌肉组织暴露于狂犬病毒,可将狂犬病特异的单克隆抗体滴到被咬部位,同时全身应用。因为病毒复制几乎被限制在神经细胞,在其进入神经细胞之前,用单克隆抗体中和并清除是一种有效的暴露后预防。
本发明的一个方面是包含抗狂犬病毒的单克隆抗体序列。大部分MAb57的可变区是已知的(cheung等,J.Virol.66:6714-6720,1992,包含在参考文献中),而固定区却还是未知的。包括固定区和可变区的整个单克隆抗体已被克隆和测叙。本发明包括了新发现的MAb57固定区核苷酸序列,核苷酸476-1413,包括固定域I(CHI)和铰链区。该序列可被用于重组抗体狂犬病毒抗体或抗其他攻击神经组织病原的抗体,如脑炎或疱疹。
本发明涉及重组抗体,编码抗体的克隆基因,克隆基因的载体和包含载体的宿主细胞。本发明还包含制备和使用重组抗体的方法。
本发明包括从MAb 57得到的重组抗体。从杂交瘤得到的MAb 57是IgG2抗体,从MAb 57得到的重组抗体是IgG1抗体。本发明涉及MAb 57得到的重组抗体,编码抗体的克隆基因,克隆基因的载体和包含载体的宿主细胞。本发明还包含制备和使用重组抗体的方法。
本发明包括抗狂犬病毒单克隆抗体MAb JA的全部重链和轻链序列。本发涉及含从MAb JA得到的重组抗体,编码抗体的克隆基因,克隆基因的载体和包含载体的宿主细胞。本发明还包含制备和使用重组抗体的方法。
本发明提供抗狂犬病毒单克隆抗体MAb JB.1的全部重链和轻链序列。本发明涉及从MAb JB得到的重组抗体,编码抗体的克隆基因,克隆基因的载体和包含载体的宿主细胞。本发明还包含制备和使用重组抗体的方法。
根据本抗体的构造,该抗体是一个单链抗体,其重链可变区和轻链可变区用一个空间基团连接,肽段为适宜。最为适宜的是一个单链抗体,其中重链可变区位于重组抗体的N端。此单链重组抗体还包含一个效应分子或一个单链,由其宿主细胞合成以帮助抗体加工。
本发明的重组抗体可被用于在感染细胞中检测狂犬病毒,应用应用免疫荧光染色法,或应用直接免疫涂点法,免疫复合物免疫沉淀法,或其他免疫反应如结合,交叉抑制或竞争放射或酶联免疫反应。
本发明还涉及该重组抗体的制作方法。本发明的重组抗体可用重组DNA技术包括在一定条件下培养宿主细胞以表达所述的抗体来制备。
最为特殊的是本发明涉及重组该抗体的制作及分离过程,包括培养宿主细胞,并用杂交载体将其转化,其载体包含一个表达体系,其中包括一个启动子和DNA编码序列,DNA编码被该启动子控制。
体外生产能提供大量的相对纯化的所需抗体。细菌、酵母菌、哺乳动物细胞培养技术已经很成熟,包括均一悬液培养如空气悬挂培养或持续搅拌培养,或固定细胞培养如在中空管中、微胶囊中、琼脂微粒或陶瓷片上。
降解序列根据遗传密码被降解,在编码过程中一些核苷酸被另一些核苷酸所代替,而不改变原先编码的氨基酸序列。此类降解序列可能因为它们有不同限制位点和/或不同的特定密码子频率,在不同的宿主中可能更合适,如大肠杆菌,而得到最佳的表达。
而且,本发明还涉及在作为混合载体的重组DNA中插入编码序列以得到目的抗体,以及复制起始点或自我复制序列,一个或多个标记序列,表达控制序列,以及更多限制位点。
载体在与宿主细胞协同作用时主要有二个功能。一个是促进编码免疫球蛋白的核酸的克隆,如提供足够的核酸(克隆载体)。另一个是给复制和表达重组基因提供合适的场所,或者作为染色体外元件,或者整合到宿主染色体中(表达载体)。一个克隆载体包括上述的重组基因,一个复制起始点或一个自我复制序列,主要标记序列,以及可能有的信号序列和一些限制位点。一个表达载体包括表达控制序列,它对重组基因的转录和翻译非常重要。
复制起始点或自我复制序列或者由载体提供,包括外源起始点如Simian病毒40(SV40)提供,或另一个病毒提供,或者由宿主细胞染色体提供。
标记物用来选择包含载体的宿主细胞。选择标记物包括对重金属抵抗的基因,如铜,或对抗生素抵抗的基因如G-418、潮霉素,或补偿宿主细胞缺陷的基因如胸腺嘧啶激酶缺失,次黄嘌呤磷酸转移酶缺失,二氢叶酸还原酶缺失等。
信号序列可能是前序列或分泌引导序列用于指导重组抗体的分泌,或剪接信号等。例如,从ompA基因,pelB基因或phoA基因得到的序列就是指导重组抗体分泌的信号序列。
作为表达控制序列,载体DNA包括一个启动子,即起始和终止转录以及固定mRNA必要的序列,可能还有增强子和其他调节序列。
基于宿主细胞的属性,多种启动序列可能被使用。作用强大而又能被调节的启动子是最有用的。Shine-Dalgarno序列就是一种起始翻译的序列。起始和终止转录及固定mRNA的必要序列一般分别位于病毒或真核cDNA的非编码5′端和3′端。增强子是刺激转录的病毒DNA序列,如Simian病毒,多瘤病毒,牛乳头瘤病毒,莫洛尼肉瘤病毒或者,尤其在鼠类,是基因组源性的。
载体DNA的多种DNA片段是联接在一起的,比如,它们可能相互连接并在功能上有相互关联。噬菌体就是一个适合在大肠杆菌中复制核表达的载体,如λ噬菌体,或质粒,如ColE1及其衍生物象pMB9,pSF2124,pBR317,pBR322以及pBR322的衍生物象pUC9,pUCK0,pHRi148和pLc24。合适的载体包括一个完整的复制子,一个标记基因,限制性内切酶的识别序列以便外源DNA和表达控制序列能被插入这些位点,可能还有信号序列和增强子。
微生物启动子是诸如λ噬菌体的强左向启动子PL,它被一个温度敏感的抑制子所控制。大肠杆菌启动子也比较合适如lac(乳糖)启动子,它被lac抑制子控制,被异丙基β-D-半乳糖苷诱导;trp(色甘酸)启动子,它被trp操控,并被色甘酸缺乏诱导;tac(杂交trp-lac)启动子,它被lac抑制子所调控。
适合在酵母中复制和表达的载体包含一个酵母复制起始和选择性的遗传标记物。一族这样的载体包括所谓的ars序列(自主复制序列)作为复制起始。这些载体在酵母细胞中存在于染色体外,并自主复制。而且,包含所有或部分2μm质粒DNA的载体也能使用。这些载体能与已存在于细胞中的2μm质粒整合,或自主复制。要得到高频转化和高拷贝数,2μm质粒尤为适用。
适合在酵母细胞中表达的表达控制序列是诸如那些高度表达的酵母基因。因此,TRP1基因,ADHI或ADH II基因,酸磷酸酶(PHO3或PHO5)基因,异细胞色素基因的启动子,或参与糖原分解通路的启动子,如烯醇酶,3磷酸甘油醛激酶(PKG),己糖激酶,丙酮酸脱羧酶,磷酸果糖激酶,葡糖六磷酸异构酶,3磷酸葡糖变位酶,丙酮酸激酶,丙糖磷酸异构酶,磷酸葡糖异构酶,和葡糖激酶基因均可被利用。
适合在哺乳动物细胞中复制和表达的载体最好具有病毒来源的启动序列,如Simian病毒(SV40),Rous肉瘤病毒(RSV)腺病毒2,牛乳头瘤病毒(BPV),乳多空病毒BK变异体(BKV),鼠或人巨细胞病毒(CMV)。反过来,这些载体可能包含哺乳动物表达产物的启动子,乳肌动蛋白,胶原蛋白,肌凝蛋白等。或通常与目标基因序列相关的天然启动子和控制序列如:免疫球蛋白H-链或L链启动子。
一些带有病毒复制系统的合适的载体能同时适应真核和原核宿主细胞。特别时带有Simian病毒启动子的载体,如:pSVgpt或pSVneo,并且还包含一个增强子,如:一个通常与免疫球蛋白基因序列相关的增强子,即鼠Ig H-或L-链增强子。
本发明使用了培养转化宿主细胞以及分离生产的DNA,用重组DNA编码重组抗体。
另外,本发明涉及用上述目的重组DNA转化宿主细胞,将编码重组抗体重链和/或编码重组抗体轻链的DNA转化如宿主细胞,也即将编码单链重组抗体的DNA转化如宿主细胞。
更确切的说,本发明涉及被一个杂交载体转化的宿主细胞,该杂交载体包含一个表达体系,其中包含一个启动子和编码重组抗体的DNA。
而且,本发明包括被一个杂交载体转化的宿主细胞,该杂交载体包含一个表达体系,其中包含一个启动子,与第一个编码信号蛋白的DNA序列连接,然后用合适的阅读框与第二个编码重组抗体的DNA序列连接。
合适的宿主细胞包括那些缺乏或少有限制性内切酶的微生物,如细菌特别是大肠杆菌:E.coli X1776,E.coli Y1090,E.coli HB101,E.coli W3110,E.coli HB 101/LM1035,E.coli JA 221,E.coli DH5.alpha,E.coli K12,E.coli CC18菌株,枯草杆菌,脂嗜热杆菌,假单孢菌,嗜血杆菌,链球菌等,酵母菌类,如酿酒酵母类:S.cerevisiae GRF18。更高级的宿主细胞包括已建立的人或动物细胞系,如人胚胎肺纤维母细胞L132,人恶性黑素瘤Bowes细胞,Hela细胞,SV40病毒转化的非洲绿猴肾细胞COS-7或中国仓鼠卵巢细胞(CHO),或淋巴来源的细胞,如淋巴瘤,骨髓瘤,杂交瘤,以及多瘤细胞如:PAI,Sp2/0或X63-Ag8.653细胞。
本发明还涉及利用杂交载体制备合适的宿主细胞并进行挑选的过程。微生物的转化方法在文献中有记载。例如,酿酒酵母(A.Jinnen et al.,Proc Natl.Acad.Sci.USA 75:1929,1978),枯草杆菌(Anagnostopoulos et al.,J.Bacteriol.81:741,1961),大肠杆菌(M.Mandel et al.,J.Mol.Biol.53:159,1970)。
大肠杆菌的转化过程包括如对细胞进行钙预处理以便增加DNA摄取,并与杂交载体一起孵育。接下来选择转化成功的细胞,如在选择性培养基中根据载体DNA的标记序列将转化细胞挑选出来。不包含载体的细胞不能在选择性培养基中生长。例如,酵母细胞的转化包括用葡糖苷酶去除酵母细胞壁,在钙离子和聚乙烯乙二醇环境中将载体与得到的酵母细胞一起孵育,将处理过的细胞用琼脂包被以重新生成细胞壁。该琼脂可以同时对转化细胞进行选择。
对更高级的真核细胞诸如哺乳动物细胞可以用转染的方法进行转化。转染是用传统的方法,例如磷酸钙沉淀,微注射,原生质体融合,电穿孔,即用短暂电脉冲瞬间增大细胞膜的通透性以导入DNA,或利用辅助物质如二乙胺乙基葡聚糖,二甲亚砜,甘油或聚乙烯甘油醛等。转染后,转染细胞在选择性培养基中被检测并选择出,培养基有:Dulbecco改良伊个尔格尔培养基(DMEM),最少必要培养基,RPMI1640培养基等,可能含有相应的抗生素。
本发明的重组抗体可被由于定性或定量检测狂犬病毒的存在。总的来说,该重组抗体可被用于任何基于狂犬病毒抗原和抗体结合反应的免疫试验。这些免疫试验包括放射,荧光,化学发光,免疫沉淀,胶乳凝集以及血凝集试验,还有免疫染色方法。
本发明的重组抗体可作为酶联衍生物用于酶联免疫反应。任何已知的酶联免疫反应均能被使用,包括可溶相(均一)酶联免疫试验,固相(不均一)酶联免疫试验,单酶免疫试验和双酶(三明治)免疫试验,直接或间接检测狂犬病毒的存在。
例如,在三明治酶联免疫反应中,用上述单克隆抗体包被合适的载体,象微滴度板或试管的塑料表面,聚苯乙烯,聚丙烯聚氯乙烯,玻璃或塑料珠,滤纸,葡聚糖,醋酸纤维素膜,硝化纤维素膜,磁化颗粒等,可以单纯用浸泡吸收,也可用戊二醛或溴化氰活化载体。然后加入含狂犬病毒的测试液和结合上可检测的酶如碱性磷酸酶的重组抗体,测试液中狂犬病毒的含量与结合的重组抗体成比例,并能被加入酶底物的方法所检测到。酶底物反应可以导致象变色那样的能被眼所看到的变化,或其他测量方法。
本发明的抗体可作为放射活性标记衍生物被用于放射免疫法(RIA)。如上述的酶联免疫反应,任何已知的放免法的改良均可以使用。
使用放射标记可在酶联免疫检测试验中用比较的方法,如125I。与检测液中狂犬病毒量相关而形成的免疫复合物量可用检测免疫复合物的放射性来得到。
对冰冻保存活或石蜡包裹组织切片的活检材料做免疫染色冰冻切片,用含有本发明中抗体的液体处理,同时该液体中含有可检测到的酶。结合的重组抗体可用合适的酶底物处理来检测,比较理想的是在重组抗体的部位经酶底物作用产生固体沉淀(染色)。在带有酶的重组抗体部位,可以用含有streptavidin和生物素-酶结合的溶液处理,从而在重组抗体部位有更高的酶浓度,因此提高了免疫染色方法的敏感性。酶底物固体沉淀可用显微镜来检测,例如荧光显微镜或染色波长光扫描光密度。
根据本发明的抗体进行狂犬病毒的检测还包括其他已知的免疫试验,例如免疫荧光反应,用抗体包裹胶乳颗粒或用抗原包裹胶乳颗粒的胶乳凝集反应,抗体包裹的或抗原包裹的红细胞的血液凝集试验,用抗体包裹光学纤维或其他将结合反应变成电或光学信号的短暂光试验等。
本发明还涉及用该重组抗体进行定性或定量检测狂犬病毒的试剂盒。另外,可选择辅剂,阳性和/或阴性对照,缓冲液,指导和对结果的描述。
该重组抗体还能被用于对可能暴露与狂犬病毒的病人进行有效的预防,和对已感染狂犬病毒的病人进行治疗。
因此,本发明还涉及有效治疗剂量的重组抗体和合适的载体。胃肠外使用的途径是最佳的。肌肉、皮下、静脉应用则需要用浓缩制剂在使用前制成等张液体溶液或悬液。油性混悬液包括植物油,注射用合成或半合成油。药物成分可能经灭菌处理并可能包含辅剂,以便保存,稳定,湿化,雾化或溶解其中成分,为调节渗透压而添加盐,为调节粘滞度而添加缓冲剂和/或其他成分如羧基纤维素钠,羧乙酰纤维素,羧甲酰纤维素钠,葡聚糖,聚乙烯吡咯烷或明胶。
本发明的药物成分包含大约0.01%到50%的有效成分。可能用剂量单位的形式包装,比如安瓿或小瓶,或呈冻干固体形式。
总的说来,对哺乳动物的有效预防和治疗剂量大约在0.5μg到250μg每公斤体重,根据抗体种类,病人状态,应用方式而不同。具体使用哪种给药方式和剂量应由医生根据病人的情况,疾病的阶段来决定。本发明的药物成分用目前已知的方法制备,如传统的混合,溶解,膏剂,冻干制作。注射制剂用最新方法在无菌条件下装入安瓿或小瓶,并密封。
在某些时候本发明涉及括鸡尾酒抗体,即同时包含两个或更多本发明中的抗体。
实施例
实施例1
细胞
用于杂交的人B细胞是从5位捐献者得到的。这些捐献者在第三次注射狂犬疫苗后7到21天抽取外周血。另外五位狂犬病免疫捐献者在加强剂量疫苗注射后10到21天抽取外周血。所有个体使用的疫苗是RabiVacTM人二倍体细胞疫苗(病毒株Pitman Moore1503-3M,Behringwerke,Marburg,FRG)。所有捐献者HIV和乙肝检测均为阴性。用鼠-人杂交不均一骨髓瘤细胞SHM-D33细胞作为杂交细胞(Teng,N.N.et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 80,7308,1983),B95-8 Epstein-Barr病毒转化的淋巴细胞作为EBV(Henderson et al.,J.Exp.Med.Vol 76,p.152,1977)病毒来源是从ATCC得到的(Rockville,MD)。
狂犬病毒
为评估所制备的抗体中和不同狂犬病毒株的能力,一些抗原性固定的试验室病毒株和两种代表病毒株被应用。Evelyn-Rokitnicki-Abelseth(ERA),鼠脑(CVS-24)或细胞培养(CVS-11)改良的,Pitman-More(PM)固定株均从Thomas Jefferson大学病毒库得到。与最近在美国发生的狂犬病毒病例相关的银毛蝙蝠狂犬病毒,属于狗狂犬病毒的山狗狂犬病毒/墨西哥狗狂犬病毒(COSRV)均从文献所述处得到(Morrimoto et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,Vol.93,p.5653,1996)。病毒的纯化和制备糖蛋白(G)和核蛋白(N)如文献中所述Dietzschold et al.,World HelthOrganization,Geneva,p.175,1996)。
外周血单核细胞可用密度梯度离心法从全血中分离得到(Amersham Pharmacia Biotech,Piscataway,NJ),具体方法见文献(Plebanski et al.,Immunology Vol.75,p.86,1992)。用单克隆抗CD2抗体包裹的磁性颗粒和磁性颗粒收集器(Dynal)去除T细胞(Dynal Inc.,Lake Success NY)。CD-2阴性细胞,大部分是B细胞,则被收集病保存起来(Swaminathan,1992)。在PRMI1640(Gibco BRL Life Technologies,Grand Island NY)中培养B95-8细胞使之融合供给10%牛胚胎血清(FBS;Gibco),然后在干冰上裂解以释放EB病毒。1000RPM离心10分钟得到上清并用0.45μm滤器过滤,得到EB病毒。在4℃8000RPM,2小时条件下浓聚病毒,7×106B细胞(悬浮在1ml B95-8培养基中)和用25mlB95-8培养基制备的病毒在37℃孵育2小时。细胞感染后,用培养液洗二遍,置与96孔平底微滴定板上(Nunc,Fisher Scientific,Pittsburgh,PA),1×104细胞每孔,在潮湿空气中37℃,5%二氧化碳和95%空气条件下培养。
人-鼠不均一杂交瘤的建立
在EB病毒转化细胞培养了四周后,取上清并用ELISA检测狂犬病毒特异抗体的存在。阳性的则被先转移到1ml的培养板,然后又转移到2ml的培养板(48或24孔培养板,Nunc)。其上清液用快速荧光聚焦抑制试验(RFFIT)检测狂犬病毒中和抗体,在文献中又详细记载(Hooper,ASM Press,WA p.755,1997)。将生产中和抗体的细胞系和SHM-D33细胞(美国菌种保藏中心,编号CRL1668)用下述方法杂交。等量的SHM-D33细胞和EB病毒转化细胞(大约每种5×106个)放入无菌的聚苯乙烯圆底试管(Falcon,Fisher Scientific),1000RPM离心10分钟。用无血清的培养液冲洗细胞二次,然后用100μl培养液制备成细胞混悬液。
试管在37℃水浴加热1分钟,再加入0.5ml热的50%(wt/vol)聚乙烯乙二醇(Sigma Chemical Co.,St.Louis,MO,cat.#P-7181),在45秒内滴入并轻轻摇晃试管。在30秒钟以上慢慢加入3ml无血清培养液,就终止了融合反应,然后再于30秒以上慢慢加入9ml培养液。试管可以被允许在室温下保持8分钟,再放入37℃水浴2分钟。用500g离心3分钟,再将细胞团柔和地在30ml Iscove改良Dulbecco培养液(IMDM;Gibco)中重新制成混悬液。内含10%FBS和0.04μM哇巴因(Sigma)以便将未融合的细胞挑选去除。将细胞混悬液以1×104每孔的浓度分于96孔平底微滴定板,并孵育。
当杂交瘤细胞克隆建立后(大约培养六周后),就可以用ELISA和RFFIT检测上清液中的狂犬病毒特异抗体产物。生产抗体的细胞用限制性稀释至少被克隆三倍。细胞倍置于96孔滴定板上,2倍稀释,从4个细胞每孔开始。扩增细胞以用于进一步的分析。
用ELISA分析狂犬病毒特异抗体
可以用固定相ELISA分析抗体特异性和型。用5*g/ml狂犬病ERA病毒,糖蛋白,或核蛋白稀释于磷酸盐缓冲液(PBS),在潮湿空间里,室温下过夜,包被平板(PolySorbTM,Nunc)。平板在加上上清样本前用5%奶粉PBS溶液浸泡并用含0.05%吐温20(PBS-Tween)的PBS冲洗。
在室温下孵育2小时后,平板用PBS-Tween冲洗以去除微结合的抗体,加入针对各种人重链同型体的不同的酶结合的或生物素结合的二级抗体,在室温下保留一小时。二级抗体通过在培养液中加入适当的底物生成可溶性终产物(3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(TMB)加入到磷酸枸橼酸缓冲液中,或p-磷酸氮苯(PNPP)加入到0.1M甘油缓冲液中,Sigma),或在加入抗生物素蛋白-磷酸碱(室温30分钟)和PNPP底物后。加入2M H2SO4后终止了过氧化物酶-TMB反应。用光度计可以读出平板的光吸收值,TMB产物用450nm波长,PNPP产物用405nm波长。
RFFIT
用前述的快速荧光聚焦抑制试验(RFFIT)(Hooper,ASM Press,WA p.1997)可以检测每个转化细胞系的上清样本是否含有狂犬病毒特异性抗体。上清样本被稀释在96孔平底板上(Nunc)。已知能感染80%-90%的指示细胞的狂犬病毒被加到每一个样本中,在37℃下孵育1小时。试验也同时包括阴性培养液和阳性狂犬病免疫血清对照样本。孵育后,30μl 1.8×106细胞每毫升的幼仓鼠肾细胞(BHK)被加入到每个孔中,在37℃下孵育过夜。然后用冰PBS溶液冲洗平底板,再于-20℃用冰乙酮固定20分钟。固定后,去除乙酮,室温干燥。为检测被感染的BHK细胞,在37℃下每个孔中加入40μl FITC抗狂犬病毒核蛋白单克隆球蛋白(Centocor,Malvern PA)。用蒸馏水冲洗滴定板三遍,然后放在荧光显微镜下观察。
用亲和层析法纯化抗体
用蛋白A柱(rProtein A SepharoseTM Fast Flow,AmershamPharmacia Biotech)来纯化IgG1抗体。简单地说,上清液通过0.45μm膜过滤,并用1N NaOH将pH调整到8.0。将上清液用100cm/小时的速度通过层析柱,然后在pH8.0用PBS冲洗,用0.1M的醋酸溶液将抗体洗脱,最后用PBS透析。
用蛋白G柱(Protein G SepharoseTM Fast Flow,AmershamPharmacia Biotech)来纯化IgG3抗体。含IgG3的上清液通过0.45μm膜过滤,并用1N NaOH将pH调整到7.0。将上清液用11cm/小时的速度通过层析柱。用PBS冲洗后,在pH3.0时用0.1M的甘油缓冲液将抗体洗脱,最后用PBS透析。
用甘露聚糖结合蛋白和前述的改良方法(Nevens et al.,J.Chromatogr,Vol.597,p.247,1992)纯化IgM抗体。简单地说,含IgM抗体的上清液用EDTA处理,用1M NaOH将pH调整到8.0,过滤并降温到4℃。在4℃将甘露聚糖结合蛋白-琼脂(Sigma)和含0.1MNa**CO3/0.5M NaCl的缓冲液一起冲入层析柱,调整pH到8.3,然后加入上清液,并在4℃孵育15分钟。再用结合缓冲液冲洗层析柱,置于室温一小时。再室温用结合抗体将IgM抗体洗脱并用PBS透析。
用如下的蛋白检测试验(Bio-Rad Laboratories,Hercules CA)来检测所制备抗体的蛋白浓度。将100μl的样本加到5ml 1/5稀释的染剂浓缩物中,再室温下孵育10分钟。阴性PBS对照和牛血清白蛋白标准剂也包括在试验中。孵育后,用595nm波长光在分光光度计中读数。对照BSA的吸光度可以计算出受试样本的蛋白浓度。所有抗体制剂的纯度可以用12.5%聚丙烯酰胺凝胶在还原状态下(SDS-PAGE)电泳来测试。纯化的抗体在SDS-PAGE上显示两条区带分别对应游离的免疫球蛋白重链和轻链。
CDNA克隆的制备、分离和测序
用RNAzol B(休斯顿Biotecx实验室)从JA杂交瘤细胞中分离出全部的RNA。以鸟粒细胞白血病病毒逆转录酶(Promega)和寡聚脱氧胸腺嘧啶引物在42摄氏度的条件下进行1个小时的逆转录酶反应。其产物的一部分可用来做聚合酶链反应(PCR)扩增,该PCR反应的引物包括重链特异性的:IgG-HF1引物(5’-ACC
ATGGAGTTTGGGCTGAG-3’(SEQ.ID.NO:5),起始密码子;下划线,附加物#Y14737),还有IgG-HR2引物(5’-AC
TCATTTACCCGGGGACAG-3’(SEQ.ID.NO:6),终止密码子;下划线,附加物#Y14737),还包括轻链特异性的:IgG-LF5引物(5’-AGC
ATGGAAGCCCCAGCTCA-3’(SEQ.ID.NO:7),起始密码子;下划线,附加物#M63438),及IgG-LR2引物(5’-CT
CTAACACTCTCCCCTGTTG-3’(SEQ.ID.NO:8),终止密码子;下划线,附加物#M63438)。扩增首先在94摄氏度60秒内经35次变性,在50摄氏度下退火60秒,在72摄氏度下以TaqDNA聚合酶(Promega)催化聚合90秒。PCR产物(重链1.4kb,轻链0.7kb)用特异性的引物制备的AmpliTaq cycle测序试剂盒(Perkin-Elmer)来纯化和测序。PCR产物被克隆进TA克隆载体,pCR2.1(Introgen)。克隆的重链和轻链cDNA用特异性的引物制备的AmpliTaq cycle测序试剂盒(Perkin-Elmer)来测序。
单克隆狂犬病毒中和抗体编码序列
本项发明提供了单克隆抗体cDNA和与之互补的单克隆抗体核酸序列。具体地说,单克隆抗体cDNA序列提供了来自JA克隆的单克隆抗体的重链(SEQ.ID.NO:1)和轻链(SEQ.ID.NO:2),而不包含内含子。
本发明也提供了单链寡聚核苷,它们可充当放大单克隆抗体编码片断的PCR引物,例如单克隆抗体的可变或超可变区就是这样的片断。该寡聚核苷序列具有一个至少包含8个核苷的可与单克隆抗体基因杂交的区域,而另一个寡聚核苷具有与处于同一单克隆抗体基因下游的某一序列反向互补的序列。这样每种寡聚核苷引导合成的方向都彼此朝向对方。上述寡聚核苷链的最适长度是10-35个核苷。
本发明提供了杂交瘤JA克隆(分别为SEQ.ID.NO:1和SEQ.ID.NO:2)产生的单克隆抗体重链和轻链的全长cDNA序列,以及其编码的重链多肽(SEQ.ID.NO:3)#1-474氨基酸和轻链多肽(SEQ.ID.NO:4)#1-234氨基酸。
确切地说,本发明涉及与杂交瘤JA克隆产生的单克隆抗体的核酸序列有关。更通俗的讲,杂交瘤JA克隆是制备单克隆抗体cDNA的基础。
单克隆狂犬病毒中和抗体的功能等价物
该项发明也包含了本说明中描述的这种抗体的功能等价物。功能等价物具有与抗体类似的结合特性,它们包括了手性单链抗体及其片断。制备这种功能等价物的方法描述于PCT申请WO 93/21319,第239,400号欧洲专利;PCT申请WO 89/09622;欧洲专利338,745;以及欧洲专利EP 332,424。
功能等价物包括其氨基酸序列与该抗体高可变区的氨基酸序列几乎相同的多肽。此处“几乎相同”的氨基酸序列定义为与另一氨基酸序列相比有至少70%,最好80%甚至90%以上的同原性,该同原性由Pearson和Lipman的FASTA方法可以测定(Proc.Natl.Inst.Acad.Sci.USA 85,2444-2448,1988)。手性抗体分子的稳定区几乎只来源于人类抗体分子的稳定区,而可变区则几乎只来源于每种稳定的异体杂交瘤所产生出的单克隆抗体的可变区序列(Champion,J.M.,等,Journal of Immunological Methods,23581-90,2000)。
单链抗体或Fv片断是一种多肽,它由抗体的重链可变区构成,该区依靠或不靠连接物与轻链可变区相连。这样,Fv构成了整个抗体的结合位点。
功能等价物还包括各种抗体片断,这些片断与完整抗体的结合特性相同或几乎相同。这种片断可能包含一个或全部两个F(ab’).sub.2 fragment的Fab亚区。最适的抗体片断包含所有的完整抗体决定区的s*互补区,但是含有较少该区,例如3个、4个或5个互补决定区的抗体片断也同样具有功能。这些功能等价物属于IgG免疫球蛋白家族及其中的亚组,但也可能属于其它任何一种免疫球蛋白及它们的亚组或者与之结合:例如IgM、IgA、IgD、或IgE。各种亚组例如IgG的亚组的重链,决定了不同的效应器功能,这样,选择所需的重链稳定区,就能产生具有所需效应器功能的手性抗体分子。最为理想的稳定区有gamma1(IgG1)、gamma3(IgG3)和gamma4(IgG4)。而轻链稳定区可以是卡帕(kappa)或(莱姆达)lambda型。
本发明包括的免疫球蛋白可以是单价、二价或多价。单价免疫球蛋白是由一条手性重链与一条手性轻链通过二硫键结合的二聚体(HL)。二价免疫球蛋白是由两个二聚体通过至少一个二硫键结合而成的四聚体(H2L2)。
标准重组DNA技术
标准重组DNA技术可查阅Cold Spring Harbor Laboratory出版社(1987)出版的《分子克隆》第二版,著者为Sambrook等,以及Green Publishing Associates/Wiley-Interscience,New York(1990)的《现代分子生物学规范》,著者为Ausubel等。
简言之,选择合适的含有所需DNA的核酸分子的细胞作为原料,例如可表达某种抗体或抗体等价物者。以标准程序从原料制备出全部的RNA。这些RNA用于指导cDNA的合成。分离RNA与合成cDNA的标准方法可见于以上列举的分子生物学手册。
可通过已知的方法来扩增cDNA。例如,以cDNA作为模板并通过PCR反应来扩增;参见Saiki et al.,Science,239,487,1998或Mullis et.al.,US Pat.No.*83195。作为PCR扩增引物的核苷序列是从已知的待扩增序列衍生出的。这种寡聚核苷可通过已知的方法合成。这些方法可参见Caruthers in science 230,281-285,1985。
上游和下游的寡聚核苷可用于做PCR扩增。针对每一特定引物对均按标准方案优化反应条件。以电泳等方法分析PCR产物,来确保cDNA的大小与两个引物之间的序列相符。
或者,编码区可被扩增为2个或多个重叠片断。重叠片断应包括一个保守位点,以便使完整的cDNA组装于此。
例如,为分离出每种异体杂交瘤细胞系产生的每种单克隆抗体的重链和轻链蛋白编码区,上游的寡聚核苷PCR引物就要与5’端的序列互补,后者包含了ATG起始密码子和其上游的至少5-10个核苷。下游的寡聚核苷引物与所需DNA的3’端序列互补。产物cDNA编码了每种单克隆抗体的全部重链与轻链,包括终止密码子。
待扩增的cDNA,例如编码抗体或抗体等价物者,可在很多种宿主细胞中通过多种克隆载体来复制。宿主细胞可以是原核细胞或真核细胞。
结合单克隆抗体cDNA的载体可由染色体、非染色体和合成的DNA序列构成。有些合适的原核细胞克隆载体包括但不仅仅限于大肠杆菌质粒,例如colE1、pCR1、pBR322、pMB9、pUC、pKSM和RP4。原核细胞载体还包括,但亦不仅限于噬菌体DNA的衍生物,例如M13和其它丝状单链DNA噬菌体。
携带拟表达单克隆抗体的cDNA的载体转染宿主细胞,如下文所述。宿主细胞以合适的培养基保存,在适宜的条件下细胞与载体得以不断复制。
手性抗体分子
一般情况下,针对手性免疫球蛋白的每一种重链和轻链成分,制备的手性抗体分子的融合基因首先包括一个DNA片断,该片断至少编码了人狂犬病毒特异性中和抗体的功能区,该功能区多为糖蛋白。可变区连接于(例如,因加入片断而使可变区的功能重排)下一个DNA片断,后者至少编码稳定区的一部分。每一融合基因都组装或插入一个表达载体当中。在适宜的条件下培养转染宿主细胞,以使融合基因得以表达,并使表达产物免疫球蛋白或其多肽链易于收获。
编码免疫球蛋白重链和轻链可变区的基因可从淋巴细胞中获得,后者能产生单克隆狂犬病毒中和抗体。例如,产生抗狂犬病毒糖蛋白单克隆抗体的异体杂交瘤细胞系就可提供这种手性抗体分子可变区。通过标准克隆技术可从人类抗体分泌细胞中获得所需的稳定区。另外,由于基因代表了两类轻链,并且特定种类的重链已被克隆,人类的稳定区从这些克隆中很容易获得。手性抗体分子的结合片断比如F(ab’).sub.2和Fab等可通过设计出的手性重链基因截取。例如,编码F(ab’).sub.2重链部分的手性基因应包括编码重链CH1区和铰链区的DNA序列。此外,这些片断还可通过对某种手性免疫球蛋白分子的酶切获得。比如,以木瓜蛋白酶和胃蛋白酶酶切可分别获得Fab和F(ab’).sub.2片断。
编码手性重链与轻链及其亚区的融合基因最好是与两种不同的表达载体组装,后者可协同转染同一种宿主细胞。每种载体包含两个可被筛选的基因,其中一种可被某种细菌系统筛选,另一种被某种真核细胞系统筛选,而每一载体所含的基因对组成不同。这些载体能在细菌环境中生产和扩增所需的融合基因,并随后协同转染真核细胞,然后再筛选这些受到转染的细胞。可在细菌环境中受到筛选的基因包括氨比西林耐药基因和氯霉素耐药基因以及此类的其它各种基因。有两种真核细胞宿主的可筛选基因受到青睐:(1)黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因(gpt);(2)Tn5磷酸转移酶基因(又称neo),但合适的基因亦不仅限于罗列的两种。Gpt的筛选是基于如下原理:该基因所编码的酶可以黄嘌呤作为底物来合成嘌呤核苷,而类似的其它内源性的酶却不具此能力。在含有黄嘌呤和霉酚酸的基质中,因后者阻断了一磷酸次黄嘌呤转化为一磷酸黄嘌呤,只有表达gpt基因的细胞能够存活。而neo的产物使抗生素G418及其它类似抗生素对真核细胞蛋白合成的抑制作用受到阻断。在真核细胞中,这两种筛选过程可同时或先后用来筛选出导入两种不同的DNA载体的免疫球蛋白链基因。
表达系统
由于基因本身可以退化,本发明的领域还包括了另一些DNA序列,后者编码的重链和轻链氨基酸序列与前述几乎相同或有等价的功能。本发明可能涉及的这些不同的DNA序列是通过在原有序列基础上删除、增加或替换不同的核苷残基来实现的,而基因经上述改变后的产物却与原来的相同或功能等价。基因表达产物本身亦可出现重链或轻链序列中的氨基酸残基的丢失、增加和替换,而其结果导致隐性改变,产生出另一种功能等价的单克隆抗体。
依照本发明,所需的核苷序列被插入适当的表达载体,该核苷序列编码了单克隆狂犬病毒中和抗体的重链和轻链及其片断或类似物。这种载体包含了使插入的蛋白编码序列转录和翻译出来所必需的成分,它们构成重组DNA分子以指导免疫球蛋白重链和轻链的表达,再进一步装配成单克隆狂犬病毒中和抗体。
理想的宿主细胞系是骨髓瘤细胞。这种细胞可以合成、组装及分泌免疫球蛋白,而后者是由转染的免疫球蛋白基因编码。此外,这种细胞还能使分泌的免疫球蛋白糖基化。最为理想的宿主细胞是本身不分泌免疫球蛋白的骨髓瘤细胞系,例如Sp2/0。这种细胞将只分泌转染的免疫球蛋白基因编码的产品。骨髓瘤细胞可在培养基中生长,也可植入小鼠的腹膜,通过腹水收获分泌的免疫球蛋白。其它的淋巴细胞如B细胞或杂交瘤细胞亦可作为合适的宿主细胞。
有数种方法使携带免疫球蛋白编码基因的载体转染淋巴细胞。一种将DNA导入淋巴细胞的理想方法是通过电打孔。按照该方法,在目标DNA存在的环境中,宿主细胞将接受一次电击。另一种导入DNA的方法是通过原生质融合。按照这种办法,含有免疫球蛋白基因重组质粒的细菌被溶解酶剥去细胞壁。产生的原生质球通过聚乙二醇处理与骨髓瘤细胞融合。融合完成后,再筛选并分离出转染成功的细胞。还有一种导入DNA的技术是通过磷酸钙沉淀。
免疫球蛋白基因也可在非淋巴细胞中表达,例如在细菌或酵母菌中。当在细菌中表达时,免疫球蛋白重链和轻链变成包涵体的一部分。所以,重链与轻链都必须先分离和提纯,然后再组装成具有功能的免疫球蛋白分子。还有其它的方法在大肠杆菌中表达出产品(参见Pluckthun,A,BioTechnology 9:545-551,1991;Skerra,A.etal.,BioTechnology 9:273-278,1991),包括以融合蛋白的形式由大肠杆菌分泌,该融合蛋白含有一段信号序列。
实施例2
已经知道两种抗狂犬病毒单克隆抗体MAb57和MAb JB.1的全部序列。上述单克隆抗体可与各种狂犬病毒株的糖蛋白特异性结合。与预防性给药一样,以单克隆抗体混合剂进行暴露后治疗,能够在伤口原位中和狂犬病毒并阻止病毒侵入中枢神经系统(CNS)。对于通过破损皮肤或粘膜暴露于狂犬病毒者,应在伤口原位注射特异性单克隆抗体混合剂,同时结合以全身给药。因为病毒复制几乎只局限于神经元细胞,所以有效的暴露后预防措施是在其侵入CNS之前以本发明提供的单克隆抗体中和与清除病毒。
抗狂犬病毒单克隆抗体混合剂可用于治疗已经暴露于病毒或者有高暴露风险的人群。对于各种可逃避中和的狂犬病毒变异株,本发明提供的单克隆抗体混合剂均能有效抑制其复制。因为混合剂中的每种单克隆抗体均特异地针对狂犬病毒不同街毒株的抗原决定基当中的一种。
人抗狂犬病毒抗体MAb JB.1的重链核苷序列为SEQ ID NO:9。人抗狂犬病毒抗体MAb JB.1的重链氨基酸序列为SEQ ID NO:10。人抗狂犬病毒抗体MAb JB.1的轻链核苷序列为SEQ ID NO:11。人抗狂犬病毒抗体MAb JB.1的轻链氨基酸序列为SEQ ID NO:12。人抗狂犬病毒抗体MAb 57的轻链核苷序列为SEQ ID NO:13。人抗狂犬病毒抗体MAb 57的轻链氨基酸序列为SEQ ID NO:14。人抗狂犬病毒抗体MAb57的重链核苷序列为SEQ ID NO:15。人抗狂犬病毒抗体MAb 57的重链氨基酸序列为SEQ ID NO:16。
序列表
<110>道格拉斯·C.·胡珀
伯恩哈德·迪奇奥德
<210>1
<211>1430
<212>DNA
<213>人类(Homo sapien)
<400>1
accatggagt ttgggctgag ctggcttttt cttgtggcta ttttaaaagg tgtccagtgt 60
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 120
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc aactatgcca tgagctgggt ccgccaggct 180
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtgcta gtggtcatag cacatatttg 240
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 300
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagatcga 360
gaggttacta tgatagttgt acttaatgga ggctttgact actggggcca gggaacccgg 420
gtcaccgtct cctccgcctc caccaagggc ccatcggtct tccccctggc accctcctcc 480
aagagcacct ctgggggcac agcggccctg ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa 540
ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgcc ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct 600
gtcctacagt cctcaggact ctactccctc agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc 660
ttgggcaccc agacctacat ctgcaacgtg aatcacaagc ccagcaacac caaggtggac 720
aagagagttg agcccaaatc ttgtgacaaa actcacacat gcccaccgtg cccagcacct 780
gaactcctgg ggggaccgtc agtcttcctc ttccccccaa aacccaagga caccctcatg 840
atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg gtggtggacg tgagccacga agaccctgag 900
gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg 960
gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac 1020
tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag gtctccaaca aagccctccc agcccccatc 1080
gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc 1140
ccatcccggg aggagatgac caagaaccag gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc 1200
tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag agcaatgggc agccggagaa caactacaag 1260
accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc tccttcttcc tctatagcaa gctcaccgtg 1320
gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg 1380
cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc ctgtccccgg gtaaatgagt 1430
<210>2
<211>708
<212>DNA
<213>人类(Homo sapien)
<400>2
agcatggaag ccccagctca gcttctcttc ctcctgctac tctggctccc agataccacc 60
ggagaaattg tgttgacaca gtctccagcc accctgtctt tgtctccagg ggaaagagcc 120
accctcgcct gcagggccag tcagactgct agcaggtact tagcctggta ccaacagaaa 180
cctggccagg ctcccagact cctcatctat gatacatcca acagggccac tggcatccca 240
gccaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tctccatcag cagcctggag 300
cctgaagatt ttgcagttta ttactgtcag cagcgtttca actggccgtg gacgttcggc 360
caagggacca aggtggaatt caaacgaact gtggctgcac catctgtctt catcttcccg 420
ccatctgatg agcagttgaa atctggaact gcctctgttg tgtgcctgct gaataacttc 480
tatcccagag aggccaaagt acagtggaag gtggataacg ccctccaatc gggtaactcc 540
caggagagtg tcacagagca ggacagcaag gacagcacct acagcctcag cagcaccctg 600
acgctgagca aagcagacta cgagaaacac aaagtctacg cctgcgaagt cacccatcag 660
ggcctgagct cgcccgtcac aaagagcttc aacaggggag agtgttag 708
<210>3
<211>474
<212>PRT
<213>人类(Homo sapien)
<400>3
Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Leu Phe Leu Val Ala Ile Leu Lys Gly
1 5 10 15
Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
35 40 45
Ser Asn Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ser Ala Ile Ser Ala Ser Gly His Ser Thr Tyr Leu Ala
65 70 75 80
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn
85 90 95
Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Lys Asp Arg Glu Val Thr Met Ile Val Val Leu Asn
115 120 125
Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Arg Val Thr Val Ser Ser
130 135 140
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
l45 150 155 160
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
165 170 175
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
180 185 190
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
195 200 205
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
210 215 220
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
225 230 235 240
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
245 250 255
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
260 265 270
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
275 280 285
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
290 295 300
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
305 310 315 320
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
325 330 335
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
340 345 350
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
355 360 365
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
370 375 380
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
385 390 395 400
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
405 410 415
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
420 425 430
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
435 440 445
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
450 455 460
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470
<210>4
<211>234
<212>PRT
<213>人类(Homo sapien)
<400>4
Met Glu Ala Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro
1 5 10 15
Asp Thr Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser
20 25 30
Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ala Cys Arg Ala Ser Gln Thr
35 40 45
Ala Ser Arg Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
50 55 60
Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Thr Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Phe
100 105 110
Asn Trp Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Phe Lys Arg
115 120 125
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
130 135 140
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
145 150 155 160
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
165 170 175
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
180 185 190
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
195 200 205
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
210 215 220
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230
<210>5
<211>20
<212>DNA
<213>人类(Homo sapien)
<400>5
accatggagt ttgggctgag 20
<210>6
<211>20
<212>DNA
<213>人类(Homo sapien)
<400>6
actcatttac ccggggacag 20
<210>7
<211>20
<212>DNA
<213>人类(Homo sapien)
<400>7
agcatggaag ccccagctca 20
<210>8
<211>21
<212>DNA
<213>人类(Homo sapien)
<400>8
ctctaacact ctcccctgtt g 21
SEQ ID NO:9
ATGGACACACTTTGCTCCACGCTCCTGCTGCTGACCATCCCTTCATGGG
TCTTGTCCCAAATTACCTTGAAGGAGACTGGTCCTACGCTGGTGAAACC
CACACAGACCCTCACGCTGACCTGCACCTTCTCGGGGTTCTCACTCAGC
ACTAGTGGAGTGGGTGTGGGCTGGATCCGTCAGCCCCCAGGAAAGGCC
CTGGAGTGGGTTACACTCATTTATTGGGATGATGATAAGCGTTACAGTCC
ATCTCTGGAGAACAGGGTCACCATCAGGAAGGACACCTCCAAAAACCAG
GTGGCTCTTACAATGACGAACATGGACCCTTTGGACACAGGCACATACT
ACTGTGCGCACAGACAACATATCAGCAGCTTCCCGTGGTTCGATTCCTG
GGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCTTCCACCAAGGGCCC
ATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCTGGGGGCAC
AGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAGCCGGTGAC
GGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGGCGGCGTGCACACCTTCCC
GGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACC
GTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTGAATC
ACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCTCAAAACCCC
ACTTGGTGACACAACTCACACATGCCCACGGTGCCCAGAGCCCAAATCT
TGTGACACACCTCCCCCGTGCCCACGGTGCCCAGAGCCCAAATCTTGTG
ACACACCTCCCCCGTGCCCACGGTGCCCAGAGCCCAAATCTTGTGACAC
ACCTCCCCCATGCCCACGGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGAGGACC
GTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGATACCCTTATGATTTCCC
GGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACC
CCGAGGTCCAGTTCAAGTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATG
CCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTGG
TCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGTAAGGAGTA
CAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACC
ATCTCCAAAACCAAAGGACAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGC
CCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCC
TGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCA
GCGGGCAGCCGGAGAACAACTACAACACCACGCCTCCCATGCTGGACT
CCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAG
GTGGCAGCAGGGGAACATCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTG
CACAACCGCTTCACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA
SEQ ID NO:10
MDTLCSTLLLLTIPSWVLSQITLKETGPTLVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSGVG
VGWIRQPPGKALEWVTLIYWDDDKRYSPSLENRVTIRKDTSKNQVALTMTN
MDPLDTGTYYCAHRQHISSFPWFDSWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPC
SRSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL
SSVVTVPSSSLGTQTYTCNVNHKPSNTKVDKRVELKTPLGDTTHTCPRCPE
PKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPAPELLG
GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFKWYVDGVEVHNA
KTKPREEQFNSTFRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKT
KGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESSGQPEN
NYNTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNIFSCSVMHEALHNRFTQKS
ISISPGK
SEQ ID NO:11
ATGGCCTGGACCGTTCTCCTCCTCGGCCTCCTCTCTCACTGCACAGGGTCTGTGACG
TCCTATGTGCTGACTCAGCCACCCTCGGTGTCAGTGGCCCCAGGAAAGACGGCCAGG
ATTAACTGTGGGGGAAACAACATTGAATATAGAAGTGTGCACTGGTACCAGCAGAAG
TCAGGCCAGGCCCCTGTAGCGGTCATCTATGATAATAGTGACCGGCCCTCAGGGATC
CCTGAGCGATTCTCTGGTTCCAAATCTGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCAGG
GTCGAAGCCGGGGATGAGGCCGACTATTACTGTCAGGTGTGGGATATTAGTAGTGAT
GTGGTCTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCC
TCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTG
GTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGAT
AGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAAC
AAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGA
AGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCT
ACAGAATGTTCATAG
SEQ ID NO:12
MAWTVLLLGLLSHCTGSVTSYVLTQPPSVSVAPGKTARINCGGNNIEYRSVHWYQQK
SGQAPVAVIYDNSDRPSGIPERFSGSKSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDISSD
VVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKAD
SSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAP
TECS
SEQ ID NO:13
ATGAGTGTCCCCACCATGGCCTGGGCTCTGCTCCTCCTCAGCCTCCTCACTCAGGGCACA
GGATCCTGGGCTCAGTCTGCCCTGACTCAGCCTCGCTCAGTGTCCGGGTCTCCTGGACAG
TCAGTCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGATATTGGTGGTTATAACTTTGTCTCC
TGGTACCAACAACACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGATGCCACTAAGCGG
CCCTCAGGGGTCCCTGATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACC
ATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGCTGCTCATATGCAGGCGAC
TACACCCCGGGCGTGGTTTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAG
GCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCC
ACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCA
ATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAAC
AGTACGCGGCCAGCAGCTACCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGC
ACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAA
TGTTCATAG
SEQ ID NO:14
MSVPTMAWALLLLSLLTQGTGSWAQSALTQPRSVSGSPGQSVTISCTGTSSDIGGYNFVSW
YQQHPGKAPKLMIYDATKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCCSYAGDYT
PGVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSP
VKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
SEQ ID NO:15
ATGGACTGGACCTGGAGGTTCCTCTTTGTGGTGGCAGCAGCTACAGGTGTCCAGTCCCAG
GTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCC
TGCAAGGCTTCTGGAGGCACCTTCAACAGGTATACTGTCAACTGGGTGCGACAGGCCCCT
GGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGCATCATCCCTATCTTGGTACAGCAAACTACGCA
CAGAGGTTCCAGGGCAGACTCACCATTACCGCGGACGAATCCACGAGCACAGCCTACATG
GAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGATGACACGGCCGTGTATTTCTGTGCGAGAGAGAATCTC
GATAATTCGGGGACTTATTATTATTTCTCAGGCTGGTTCGACCCCTGGGGCCAGGGAACC
CTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCC
TCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCC
GAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCG
GCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGC
AGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTG
GACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTCACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCA
CCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTC
ATGATCTCCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCT
GAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCG
CGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAG
GACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCC
ATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTG
CCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGC
TTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTAC
AAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACC
GTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCT
CTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCCGGGTAAATGA
SEQ ID NO:16
MDWTWRFLFVVAAATGVQSQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFNRYTVNWVRQA
PGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQRFQGRLTITADESTSTAYMELSSLRSDDTAVYFCARENLD
NSGTYYYFSGWFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEP
VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRV
EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNW
YVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKA
KGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS
DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
Claims (14)
1、一个分离的核酸分子,包含一个或多个核酸序列,这些核酸序列编码的氨基酸来序列自以下序列组成的组:SEQ ID NO:10,SEQ IDNO:12,SEQ ID NO:14,SEQ ID NO:16。
2、权利要求1所述的分离的核酸分子,包含的一个或多个核酸序列,这些序列来自下列序列所组成的组:SEQ ID NO:9,SEQ ID NO:11,SEQ ID NO:13,SEQ ID NO:15。
3、含有权利要求2中所述核酸分子的重组表达载体。
4、含有权利要求3中所述表达载体的宿主细胞。
5、一个制备分离的重组抗体的方法,包括培养权利要求4中所述的宿主细胞,以及分离它表达出的重组抗体。
6、含有权利要求1中所述核酸分子的重组表达载体。
7、含有权利要求6中所述表达载体的宿主细胞。
8、一种制备分离的重组抗体的方法,包括培养权利要求7中所述的宿主细胞,以及分离它表达出的重组抗体。
9、一个重组抗体,包含一个Mab 57的稳定区并连接于一个非Mab 57的可变区。
10、一个分离的核酸分子,它编码权利要求9中所述的重组抗体。
11、包含权利要求10中所述核酸分子的表达载体。
12、包含权利要求11中所述表达载体的宿主细胞。
13、一种制备分离的重组抗体的方法,包括培养权利要求12中所述的宿主细胞,以及分离它表达出的重组抗体。
14、如权利要求13所述的重组抗体,用该重组抗体制备的药剂来治疗暴露于某种病原微生物后的个体。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US31402301P | 2001-08-21 | 2001-08-21 | |
US60/314,023 | 2001-08-21 | ||
PCT/US2002/026584 WO2003016501A2 (en) | 2001-08-21 | 2002-08-21 | Recombinant antibodies, and compositions and methods for making and using the same |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN1636019A true CN1636019A (zh) | 2005-07-06 |
CN1636019B CN1636019B (zh) | 2010-06-16 |
Family
ID=23218208
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN028164334A Expired - Lifetime CN1636019B (zh) | 2001-08-21 | 2002-08-21 | 重组抗体的组成以及制作和使用方法 |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP1530579B1 (zh) |
CN (1) | CN1636019B (zh) |
AT (1) | ATE557040T1 (zh) |
AU (1) | AU2002332600B2 (zh) |
CA (1) | CA2457362C (zh) |
HK (1) | HK1071898A1 (zh) |
MX (1) | MXPA04001609A (zh) |
NZ (1) | NZ531291A (zh) |
RU (1) | RU2292353C2 (zh) |
WO (1) | WO2003016501A2 (zh) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101337990B (zh) * | 2008-06-25 | 2011-04-06 | 中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所 | 人源抗狂犬病毒中和性抗体及其制备方法与用途 |
CN101100663B (zh) * | 2006-07-05 | 2011-08-24 | 华北制药集团新药研究开发有限责任公司 | 重组人抗狂犬病毒单克隆抗体的制备方法 |
CN101696242B (zh) * | 2009-10-26 | 2011-12-28 | 中国人民解放军南京军区军事医学研究所 | 人源抗狂犬病毒中和抗体Fab及其制备方法和应用 |
Families Citing this family (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20040013672A1 (en) * | 2000-05-16 | 2004-01-22 | Thomas Jefferson University | Recombinant antibodies, and compositions and methods for making and using the same |
ES2442615T5 (es) | 2002-07-18 | 2023-03-16 | Merus Nv | Producción recombinante de mezclas de anticuerpos |
USRE47770E1 (en) | 2002-07-18 | 2019-12-17 | Merus N.V. | Recombinant production of mixtures of antibodies |
US20100069614A1 (en) | 2008-06-27 | 2010-03-18 | Merus B.V. | Antibody producing non-human mammals |
EP1639009B1 (en) | 2003-05-30 | 2013-02-27 | Merus B.V. | Fab library for the preparation of a mixture of antibodies |
WO2005000225A2 (en) * | 2003-06-02 | 2005-01-06 | University Of Oxford | Production of rabies antibodies in plants |
DK1737971T3 (da) | 2004-01-20 | 2017-11-13 | Merus Nv | Blandinger af bindingsproteiner |
KR101456770B1 (ko) | 2004-05-27 | 2014-10-31 | 크루셀 홀란드 비.브이. | 광견병 바이러스를 중화시킬 수 있는 결합 분자 및 그 용도 |
BRPI0617688A2 (pt) * | 2005-10-21 | 2011-06-07 | Hoffmann La Roche | método para expressão recombinante de um polipeptìdeo |
JP5410985B2 (ja) | 2006-12-05 | 2014-02-05 | クルセル ホランド ベー ヴェー | 液体抗狂犬病抗体製剤 |
NZ630551A (en) | 2012-04-20 | 2017-11-24 | Merus Nv | Methods and means for the production of ig-like molecules |
RU2682677C2 (ru) * | 2017-09-07 | 2019-03-20 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Екатеринбургский научно-исследовательский институт вирусных инфекций" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН "ЕНИИВИ" Роспотребнадзора) | Способ постэкспозиционной профилактики клещевого энцефалита |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1282703B1 (en) * | 2000-05-16 | 2008-10-15 | Thomas Jefferson University | Rabies virus-specific neutralizing human monoclonal antibodies and nucleic acids and related methods |
-
2002
- 2002-08-21 CA CA2457362A patent/CA2457362C/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-08-21 EP EP02794932A patent/EP1530579B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-08-21 CN CN028164334A patent/CN1636019B/zh not_active Expired - Lifetime
- 2002-08-21 WO PCT/US2002/026584 patent/WO2003016501A2/en active IP Right Grant
- 2002-08-21 MX MXPA04001609A patent/MXPA04001609A/es active IP Right Grant
- 2002-08-21 NZ NZ531291A patent/NZ531291A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-08-21 RU RU2004108115/13A patent/RU2292353C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2002-08-21 AU AU2002332600A patent/AU2002332600B2/en not_active Ceased
- 2002-08-21 AT AT02794932T patent/ATE557040T1/de active
-
2005
- 2005-06-01 HK HK05104601.8A patent/HK1071898A1/xx not_active IP Right Cessation
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101100663B (zh) * | 2006-07-05 | 2011-08-24 | 华北制药集团新药研究开发有限责任公司 | 重组人抗狂犬病毒单克隆抗体的制备方法 |
CN101337990B (zh) * | 2008-06-25 | 2011-04-06 | 中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所 | 人源抗狂犬病毒中和性抗体及其制备方法与用途 |
CN101696242B (zh) * | 2009-10-26 | 2011-12-28 | 中国人民解放军南京军区军事医学研究所 | 人源抗狂犬病毒中和抗体Fab及其制备方法和应用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA2457362A1 (en) | 2003-02-27 |
NZ531291A (en) | 2006-02-24 |
AU2002332600B2 (en) | 2007-03-22 |
HK1071898A1 (en) | 2005-08-05 |
CA2457362C (en) | 2012-01-17 |
CN1636019B (zh) | 2010-06-16 |
EP1530579A4 (en) | 2006-02-08 |
RU2292353C2 (ru) | 2007-01-27 |
ATE557040T1 (de) | 2012-05-15 |
MXPA04001609A (es) | 2005-03-07 |
EP1530579B1 (en) | 2012-05-09 |
RU2004108115A (ru) | 2005-09-27 |
WO2003016501A2 (en) | 2003-02-27 |
WO2003016501A3 (en) | 2005-03-24 |
EP1530579A2 (en) | 2005-05-18 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN1636019A (zh) | 重组抗体的组成以及制作和使用方法 | |
CN1267550C (zh) | 血管内皮生长因子2 | |
CN1222618C (zh) | 卡他摩拉克菌外膜蛋白-106多肽及其基因序列和用途 | |
CN1125082C (zh) | 人类趋化因子β-8,趋化因子β-1和巨噬细胞炎性蛋白-4 | |
CN1186518A (zh) | 人血管内皮生长因子2 | |
CN1087681A (zh) | 具有抗人体内病原菌感染的被动免疫力的新抗体 | |
CN1200737A (zh) | 用于人治疗的重组抗cd4抗体 | |
CN1492040A (zh) | 单克隆人天然抗体 | |
CN1222162A (zh) | 突变的无激活作用的IgG2结构域和插入该结构域的抗CD3抗体 | |
CN1146442C (zh) | 作为抗肿瘤剂的淋巴毒素-α/β复合体和抗淋巴毒素-β受体抗体 | |
CN1282372A (zh) | 哺乳动物细胞因子样多肽-10 | |
CN1422333A (zh) | 诱导细胞凋亡的多肽 | |
CN1760209A (zh) | 人白细胞介素15与Fc融合蛋白 | |
CN1190991A (zh) | 人类趋化因子β-11和人类趋化因子α-1 | |
CN1244807A (zh) | 改良疫苗 | |
CN1526072A (zh) | 埃-巴二氏病毒(ebv)肿瘤相关潜伏膜蛋白的胞外结构域的鉴定方法和与之反应的抗体试剂的选择方法 | |
CN1079166A (zh) | 用白细胞介素-10抑制移植物抗宿主病 | |
CN101062952A (zh) | 由人血清白蛋白和干扰素组成的融合蛋白及其编码基因与应用 | |
CN1948333A (zh) | 一种新的hPEBP4蛋白来源的HLA-A2限制性表位多肽及其应用 | |
CN1882610A (zh) | 产生阻断人细胞因子生物活性的人抗体的高产量方法 | |
CN1304421C (zh) | 对病毒蛋白gp120有亲合性的肽及这些肽的应用 | |
CN1518459A (zh) | 嗜酸性粒细胞疾病的治疗剂 | |
CN1192751A (zh) | 单核细胞趋化蛋白-4 | |
CN1324049C (zh) | 人源抗sars冠状病毒基因工程抗体 | |
CN1151799C (zh) | 具有佐剂作用的细菌膜组分 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
TR01 | Transfer of patent right | ||
TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20211008 Address after: No. 98, Hainan Road, economic and Technological Development Zone, Shijiazhuang, Hebei Patentee after: NORTH CHINA PHARMACEUTICAL NEW DRUG R&D Co.,Ltd. Address before: Pennsylvania, USA Patentee before: THOMAS JEFFERSON University |
|
CX01 | Expiry of patent term | ||
CX01 | Expiry of patent term |
Granted publication date: 20100616 |