CN1582713A - 芦荟凝胶、芦荟全叶凝胶、芦荟皮胶的一种处理方法及其芦荟多糖制品的制备技术 - Google Patents
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Abstract
芦荟凝胶、芦荟全叶凝胶和芦荟皮胶的一种处理方法，采用该处理方法可实现从芦荟凝胶中快速提取芦荟多糖及其它芦荟生物活性物质，该处理方法包括：对高粘性粗芦荟凝胶、芦荟全叶凝胶、芦荟皮胶进行酶解反应(enzymolysis)、微波照射(microwave irradiation)、真空浓缩、固液分离，一次循环可使芦荟凝胶浓缩2～50倍。该方法可将芦荟凝胶的粘性破坏，方便了对芦荟凝胶进行浓缩，再通过旋流分离机和离心分离机联合进行固液分离，获得不同浓缩倍数的初级液形芦荟品；对初级液形芦荟品进行冷冻干燥，获得芦荟凝胶冻干粉制品；初级液形芦荟品经乙酰化和乙醇、丙酮洗涤后，再进行真空冷冻干燥，制成初级固体芦荟多糖冻干粉制品；经酶解反应、微波照射、真空浓缩、固液分离后的粗级液形芦荟品(芦荟凝胶浓缩清液)可再经过过滤膜分离、固液分离而获得二级液形芦荟品，对二级液形芦荟品进行一酰化和乙醇洗涤，然后进行冷冻干燥制成二级芦荟多糖制品；对过滤膜分离的二级液形芦荟品再进行柱层析后获得一级液形芦荟品，对一级液形芦荟品进行一酰化和乙醇洗涤，然后进行冷冻干燥制成一级芦荟多糖制品。另外，固液分离还获得固体湿料副产物，过滤膜分离还获得液体副产物。
Description
(一)技术领域 本发明涉及一种处理芦荟凝胶进而提取芦荟生物活性物质的方法，具体讲是一种借助于酶解反应(enzymolysis)，然后再进行微波照射(microwaveirradiation)，再进行真空浓缩、固液分离，以便从芦荟凝胶、芦荟全叶凝胶和芦荟皮胶中提取芦荟多糖及其它芦荟生物活性物质的方法。
(二)背景技术 芦荟叶片中含有多种有效成分，如芦荟多糖、芦荟蒽醌衍生物、β-谷甾醇、芦荟胡萝卜苷以及蛋白质等几十种芦荟生物活性物质。其中的高活性芦荟多糖及其它芦荟生物活性物质，它们具有调节和刺激人体免疫系统的作用，因而，它广泛地用于人体的防病、治病，主要用于消炎、抗病毒、抗肿瘤，促进伤口的愈合、通便等疾病的治疗；它能促进人体皮肤的再生和保湿，因此广泛地用在化妆品中。芦荟多糖及其它芦荟生物活性物质在医药界和化妆品界有着广泛用途，一直受到人们的重视。自上世纪80年代初以来，世界上许多芦荟专家对芦荟多糖进行卓有成效的研究，包括从芦荟叶片中提取芦荟多糖及其它芦荟生物活性物质的研究；芦荟多糖及其它芦荟生物活性物质用于医疗和化妆品的研究等。在提取芦荟凝胶多糖方法的研究方面，最有成效的是美国加州的卡林顿实验室(Carrington lab inc.)。80年代末，该实验室提出用酒精沉淀法提取芦荟多糖。用这方法所提取的芦荟多糖存在着成本高，芦荟多糖制品的复水性差等缺点。90年代，该实验室公司又提出用微孔膜过滤、超滤膜过滤、柱层析、渗析、超高速离心(10万转/分至15万转/分)，伽马射线辐射来提取芦荟多糖及其它芦荟生物活性物质。美国westminster CO.的发明人Qiu Zhihua提出向芦荟品种为vera的芦荟凝胶中加入纤维素酶，进行酶解反应，分解芦荟凝胶中的纤维素，方便了提取芦荟凝胶中的芦荟多糖。但该方法仅用于提取美国的芦荟品种vera芦荟凝胶中分子量为50000以上的芦荟多糖。(见CN patent 1034313A、CNpatent 86104468、U.S patent 5902796、U.S patent 6133440、U.S patent 6001572、U.Spatent 6117847、U.S patent 6271214、Us patent 6436679、Us patent 6423328、U.S patent6436679 U.S patent 6551631)。但卡林顿实验室公司(Carrington lab inc.)提取芦荟多糖的制备技术，由于芦荟凝胶的粘性大，采用过滤膜分离技术对芦荟凝胶进行浓缩、分离操作很困难，要实现工业化生产芦荟多糖等芦荟产品必须大大地增加过滤膜设备，提高超高速离心机的转速，因此设备投资十分昂贵，生产成本很高，操作复杂，芦荟多糖的回收率低，而且难于实现提取芦荟多糖及其它芦荟生物活性物质的大工业生产，该技术不适应在中国从芦荟叶片中提取制备芦荟多糖，进行芦荟多糖的工业化生产。由于在中国的芦荟品种中含有少量的蛋白质、葡聚糖等杂质多糖，粘性较大。因此，Qui(Westminster CO.)的提取制备芦荟多糖的方法不适应从中国芦荟品种的芦荟叶片中提取芦荟多糖的制备操作，也不适用于从芦荟全叶凝胶、芦荟皮胶中提取芦荟多糖。
(三)发明内容 本发明提供一种崭新的处理芦荟凝胶、芦荟全叶凝胶、芦荟皮胶及其制备芦荟产品的方法，如制备芦荟多糖及其它芦荟生物活性物质的方法，该方法操作流程简单，设备投资少，产品质量稳定，容易实现工业化。本发明的原理是：在保温条件下和在一定的PH情况下，加入酶制剂，分解芦荟凝胶、芦荟全叶凝胶、芦荟皮胶中的部分粘性物质，如少量的蛋白质和葡聚糖等杂质，再进行瞬间高温灭酶活；然后采用超高频振荡频率(振荡频率为750MHZ-3800MHZ)对经酶分解反应之后的芦荟凝胶、芦荟全叶凝胶、芦荟皮胶进行微波照射，进一步破坏粗芦荟凝胶、粗芦荟全叶凝胶和粗芦荟皮胶的部分粘性(芦荟凝胶的粘度为500mpa.s-20mpa.s)，杀灭各种酶的活性，使粗芦荟凝胶溶液、粗芦荟全叶凝胶溶液和粗芦荟皮胶溶液的粘度下降至10mpa.s-2mpa.s/20℃左右，与水的粘度1.45mpa.s/20℃相近，从而使难于对芦荟凝胶进行分离、提纯，制备芦荟制品的操作变得容易了。
下面用酶制剂进行酶分解反应并经瞬间高温灭酶活，再经微波照射之后的芦荟凝胶、芦荟全叶凝胶、芦荟皮胶作原料，制备纯度级别不同的芦荟多糖制品的具体实施例子来说明本发明方法的具体实施方式和获得的有益效果。芦荟凝胶(包括芦荟全叶凝胶、芦荟皮胶的总称)经酶分解反应、瞬间高温灭酶活、微波照射，再根据芦荟生物活性物质和芦荟多糖在水中不同的溶解度进行真空浓缩、旋流分离、离心分离，获得各种浓缩倍数的芦荟凝胶浓缩清液，即初级液形芦荟品，把高浓缩倍数的浓缩液进行冷冻干燥，获得芦荟冻干粉制品。对固液分离获得的初级液形芦荟品中的芦荟多糖进行乙酰化处理，适时补充芦荟多糖分子中的乙酰基。这样处理以后，有少量其它芦荟生物活性物质残留在浓缩液中，其中有的芦荟生物活性物质可溶于乙醇、丙酮和乙醚，而多糖不溶于这些溶剂，通过用这些溶剂对初级液形芦荟品进行洗涤，洗去残留于浓缩液中的其它芦荟生物活性杂质，获得初级液形芦荟多糖制品。最后，把洗去其它芦荟生物活性物质的初级液形芦荟多糖进行冷冻干燥，制成了初级固体芦荟多糖制品。
将上述制备初级液形芦荟品及其它生物活性物质的制备技术同过滤膜分离技术联合操作制备二级芦荟多糖制品及其它生物活性物质。即对粗芦荟凝胶、粗芦荟全叶凝胶和粗芦荟皮胶用酶制剂进行酶分解反应，瞬间高温灭酶活，然后进行微波照射、真空浓缩，再进行旋流分离和离心分离，除去纤维素、蛋白质等杂质，所获得的芦荟多糖浓缩清液经过500KDa、10KDa、2Kda三道膜过滤浓缩，直到芦荟浓缩清液含固量达到2％左右，再进行固液分离，获得含固量为2％的芦荟浓缩清液，即二级液形芦荟品和固体湿料副产物。再对二级液形芦荟品中的芦荟多糖进行乙酰化处理。然后用乙醇、丙酮洗涤二级液形芦荟品。最后，对经乙酰化和乙醇、丙酮洗涤过的二级液形芦荟品进行真空冷冻干燥，获得高活性二级芦荟多糖固体制品。
将上述制备初级液形芦荟品的制备技术，二级液形芦荟品的制备技术同过滤膜分离技术、柱层析技术联合操作，进一步提高芦荟多糖的纯度，制备一级芦荟多糖制品。即对粗芦荟凝胶、粗芦荟全叶凝胶和粗芦荟皮胶用酶制剂进行酶分解反应、瞬间高温灭酶活、微波照射、真空浓缩、旋流分离、离心分离和三道膜进行过滤浓缩，再同柱层析技术联合操作，采用大孔树脂柱与Superrose柱串联柱层析，或者采用大孔树脂柱与琼脂糖柱串联柱层析，或者单柱柱层析(琼脂糖柱层析、聚丙烯酰胺柱层析)，然后对柱层析得到的洗脱液进行超滤膜浓缩，滤去乙酸钠等杂质，获得一级液形芦荟品。再对一级液形芦荟品中的芦荟多糖进行乙酰化，最后对乙酰化的芦荟浓缩清液进行冷冻干燥，制备一级芦荟多糖产品。
本发明提供的处理芦荟凝胶和从其中提取芦荟多糖及其它生物活性物质的方法，该方法包括对粗芦荟凝胶、粗芦荟全叶凝胶、粗芦荟皮胶用酶制剂进行酶分解反应、瞬间高温灭酶活，然后再进行微波照射的操作步骤。
本发明提供的处理芦荟凝胶(包括芦荟全叶凝胶、芦荟皮胶的总称，下述简称为芦荟凝胶)和从其中提取芦荟多糖及其它芦荟生物活性物质的操作步骤中，优选在下述制备操作条件下用酶制剂进行酶分解反应：
所用的酶制剂：酸性蛋白酶、β-葡聚糖酶。
酶解反应的温度：20℃-70℃；
酶解反应的PH值：2.5-7.0；
酶解反应的时间：1小时-20小时；
酶解反应的酶制剂用量：
酸性蛋白酶：3克/吨-30克/吨；
β-葡聚糖酶：1克/吨-10克/吨；
灭酶温度：80℃-120℃，灭酶保温时间：0.01小时-1.0小时
本发明提供的处理芦荟凝胶和从其中提取芦荟多糖及其它芦荟生物活性物质的制备操作步骤中，较优选的是在下述制备操作条件下用酶制剂进行酶分解反应：
酶解反应的酶制剂用量：
酸性蛋白酶：5克/吨-15克/吨；
β-葡聚糖酶：3克/吨-5克/吨；
酶解反应的温度：25℃-50℃；
酶解反应的PH值：3.5-4.5；
酶解反应的时间：2小时-5小时。
灭酶温度：100℃-105℃，灭酶保温时间：0.02小时-0.50小时
本发明提供的处理芦荟凝胶和从其中提取芦荟多糖及其它芦荟生物活性物质的制备操作步骤中，用酶制剂进行酶分解反应，较优选的是在下述条件下进行的微波照射：
微波频率：750MHZ----3800MHZ；
微波功率：0.1KW/米3----8KW/米3微波炉膛；
温 度：0℃----90℃；
微波照射时间：0.5----24小时。
本发明提供的处理芦荟凝胶和从其中提取芦荟多糖及其它芦荟生物活性物质的制备步骤中，在进行酶分解反应之后，较优选的是在下述条件下进行的微波照射：
微波频率：2450MHZ/950MHZ；
微波功率：1----5KW/米3微波炉膛；
温度：20℃----50℃；
微波照射时间：2小时----20小时。
在芦荟凝胶经酶分解反应、瞬间高温灭酶活又经微波照射之后，再对芦荟凝胶进行真空浓缩，真空浓缩的真空压力为500pa--50000pa，浓缩温度为20℃--50℃，获得芦荟凝胶真空浓缩物。
对获得的芦荟凝胶真空浓缩物进行固液分离，获得不同倍数的液形初级芦荟品、固体湿料副产品。
本发明提供的处理芦荟凝胶和从其中提取芦荟多糖及其它芦荟生物活性物质的制备步骤中，所采用的固液分离，优选的是先旋流分离，获得的芦荟凝胶浓缩清液和固体浓浆，然后采用离心分离把固体浓浆分离为离心清液和固体湿料副产物，旋流分离和离心分离所获得的清液合并为芦荟凝胶浓缩清液，即初级液形芦荟品。
本发明提供的处理芦荟凝胶和从其中提取芦荟多糖及其它芦荟生物活性物质的制备步骤中，真空浓缩时的真空度为500pa--50000pa。
本发明提供的处理芦荟凝胶和从其中提取芦荟多糖及其它芦荟生物活性物质的制备步骤中，优选的是对所获得的初级液形芦荟品进行过滤膜分离，获得的二级液形芦荟品。
本发明提供的处理芦荟凝胶和从其中提取芦荟多糖及其它芦荟生物活性物质的制备步骤中，更优选的是对过滤膜分离所获得的二级芦荟品进行柱层析，获得一级液形芦荟品。
本发明提供的处理芦荟凝胶和从其中提取芦荟多糖及其它芦荟生物活性物质的制备步骤中，最优选的是在下述条件下进行柱层析：选用大孔树脂柱、琼脂糖柱、Superrose或聚酰胺柱，流动相选用0.05mol--0.5mol的乙酸-乙酸钠，PH＝4.5--5.0的溶液，压力为低压柱或中压柱。
经酶分解反应、瞬间高温灭酶活、微波照射的芦荟凝胶由于粘性大大降低，极大地方便了从芦荟凝胶中提取诸如芦荟多糖及其它芦荟生物活性物质，有利于从芦荟全叶凝胶和芦荟皮胶中提取芦荟多糖及其它生物活性物质。首先芦荟全叶凝胶、芦荟皮胶的非芦荟多糖生物活性物质的含量高于芦荟凝胶，在对这两种凝胶提取芦荟多糖的制备操作中，必须增加用乙醇和丙酮洗涤芦荟浓缩清液的次数，所制备的芦荟多糖的纯度低一些，初级制品纯度约45％--50％，二级制品纯度约65％--70％，一级制品纯度约95％。其次，芦荟凝胶的芦荟多糖分子量分布大于芦荟皮胶，约1个数量级。而芦荟凝胶多糖的分子量分布稳定，皮胶中的芦荟多糖分子量分布会受气候、环境的变化而波动。但从这三种凝胶提取芦荟多糖及其它生物活性物质的制备操作流程相同。
(四)附图说明
图1说明：处理芦荟凝胶和一次循环制备初级芦荟多糖产品及其它芦荟生物活性物质的制备操作流程示意图。
用酶制剂对芦荟凝胶、芦荟全叶凝胶、芦荟皮胶进行酶分解反应、瞬间高温灭酶活、然后进行微波照射、真空浓缩，制成凝胶浓缩液；对凝胶浓缩液进行固液分离，即先旋流分离，再对旋流分离所获得的浓浆进行离心分离；旋流分离和离心分离所获得的凝胶浓缩清液进行合并，获得不同倍数的初级液形芦荟品，初级液形芦荟品经真空冷冻干燥机冷冻干燥，制成芦荟冻干粉制品；初级液形芦荟品经乙醇、丙酮洗涤后再冷冻干燥，制成初级芦荟多糖固体制品。离心分离还获得固体湿料副产物。
本工艺流程可以获得如下产品或副产物：
1.初级芦荟多糖制品；
2.芦荟冷冻干燥粉制品；
3.初级液形芦荟品；
4.固体湿料副产物。
图2说明：处理芦荟凝胶、芦荟全叶凝胶、芦荟皮胶和一次循环制备二级芦荟多糖产品及其它芦荟生物活性物质的制备操作流程示意图。
用酶制剂对芦荟凝胶、芦荟全叶凝胶、芦荟皮胶进行酶分解反应、瞬间高温灭酶活、微波照射、真空浓缩，制成芦荟凝胶浓缩液；对浓缩液进行固液分离，即先旋流分离，再对旋流分离所获得的浓浆进行离心分离，旋流分离和离心分离所获得的浓缩清液合并，获得不同倍数的初级液形芦荟品；再对初级液形芦荟品进行微滤、超滤三道过滤膜分离，获得过滤膜浓缩液，对浓缩液再进行固液分离，获得不同倍数的二级液形芦荟品；二级液形芦荟品经乙醇、丙酮洗涤后再进行冷冻干燥，制成二级芦荟多糖固体制品。离心分离还获得固体湿料副产物；过滤膜分离获得液体副产物。
本工艺流程可以获得如下产品或副产物：
1.二级芦荟多糖制品；
2.固体湿料副产物；
3.二级液形芦荟品。
4.液体副产品。
图3说明：处理芦荟凝胶和一次循环制备一级芦荟多糖制品及其它生物活性物质的制备操作流程示意图。
用酶制剂对芦荟凝胶、芦荟全叶凝胶、芦荟皮胶进行酶分解反应、瞬间高温灭酶活、然后进行微波照射、真空浓缩和固液分离制成初级液形芦荟品，再对初级液形芦荟品进行微滤、超滤三道过滤膜分离，获得芦荟凝胶浓缩液制品，对芦荟凝胶浓缩液制品再进行固液分离，获得二级液形芦荟品；对二级液形芦荟品进行柱层析，获得柱层析洗脱液，柱层析洗脱液经2KDa过滤膜分离浓缩，获得过滤膜分离的一级液形芦荟品，一级液形芦荟品经一酰化后，再用乙醇、丙酮洗涤，然后进行真空冷冻干燥，制成一级芦荟多糖冻干粉制品。固液分离还获得固体湿料副产物；过滤膜分离还获得液体副产物。
本制备操作流程可以获得如下产品或副产物：
1.一级芦荟多糖制品。
2.固体湿料副产物。
3.过滤膜分离的液体副产物。
4.一级液形芦荟品。
(五)具体实施方式
一、处理芦荟凝胶和初级芦荟多糖制品及其它生物活性物质的制备操作流程
实施例一：
用酶分解反应技术和微波真空浓缩技术从芦荟凝胶、芦荟全叶凝胶、芦荟皮胶中提取芦荟多糖，制备初级芦荟多糖制品，制备操作流程包括下列步骤：
步骤1：低温制备粗芦荟凝胶：
夏日晴天从大田采收芦荟老叶，立即用清水洗净，双氧水消毒，并立即送入-10℃～0℃的冷库中存放6～12小时，使叶温降低，达到0℃，然后刮去边刺、顶尖，去皮刮胶，把胶条放入胶体磨中铰碎，铰碎均匀后的芦荟胶经压榨机榨汁，制成粗芦荟凝胶。不去皮的叶片制成粗芦荟全叶凝胶，去凝胶后的叶皮制成粗芦荟皮胶。
步骤2：用酶制剂对粗芦荟凝胶进行酶分解：把两种酶制剂按下述用量：酸性蛋白酶：10克/吨凝胶溶液、β-葡聚糖酶3克/吨凝胶溶液的比例配制成酶制剂混合液；把粗芦荟凝胶用水泵泵入酶反应罐中并对粗芦荟凝胶溶液加温、保温到30℃～35℃，2小时～2.5小时，同时用水泵进行反应罐内循环搅拌。反应结束后对芦荟凝胶进行加温至100℃-105℃并保持2分钟，进行灭酶活。然后，把稍冷却后已温热的芦荟凝胶泵入微波真空浓缩机中进行微波照射，真空浓缩。
步骤3：用微波真空浓缩机对已经进行酶分解反应的粗芦荟凝胶进行微波照射和真空浓缩，微波真空浓缩机的微波频率950MHZ，微波功率3KW/米3，控制粗芦荟凝胶的温度20℃～50℃(控制溶液的温度和微波功率，使凝胶溶液保持呈微沸状态)，微波照射时间2～24小时，同时用水环式真空泵(真空度为-0.096～-0.099Mpa)抽气浓缩2～24小时，最终获得已灭菌和灭酶的芦荟浓缩液，其浓缩倍数可以控制在2～50倍之间。把粗芦荟浓缩液从微波照射炉膛中泵到旋流分离机的储桶中，或者把芦荟浓缩液进行冷冻干燥，制成芦荟冻干粉。
步骤4：用旋流分离机和离心分离机对2～50倍粗芦荟浓缩液进行固液分离
从旋流分离机的储桶中将粗芦荟浓缩液泵入到旋流分离机中进行固液分离，清液从出口流出并把旋流分离浓缩清液泵入浓缩清液储桶中，旋流分离机的下口放出固体物浓浆，再用离心分离机对固体物浓浆进行固液分离，获得离心浓缩清液和固体湿料副产物。离心浓缩清液泵入浓缩清液储桶中与旋流分离浓缩清液合并为初级液形芦荟品。同时获得固体湿料副产物，并存放在离心分离机的固体湿料副产物储桶中，另作处理。
步骤2、步骤3、部骤4的操作可以根据粗芦荟凝胶中杂质的含量反复多次进行酶分解反应、微波真空浓缩、旋流分离、离心分离的循环操作(一般地讲，芦荟凝胶循环操作的次数最少，芦荟皮胶循环操作的次数最多，芦荟全叶凝胶的循环操作次数居中)，最终获得2-50倍的芦荟浓缩清液。把芦荟浓缩清液进行冷冻干燥，获得芦荟冻干粉制品，不进行冷冻干燥的芦荟凝胶浓缩清液制成不同倍数的初级液形芦荟品。
步骤5：50倍初级液形芦荟品中芦荟多糖的乙酰化处理。
向50倍芦荟浓缩清液中缓慢滴加占浓缩清液总重量的1/40的乙酸酐，泵流搅拌常温反应12小时。
步骤6：对被乙酰化的50倍芦荟凝胶浓缩清液先用乙醇洗涤二次，再用丙酮洗涤一次。
步骤7：洗净后的芦荟浓缩清液经冷冻干燥机冻干制成初级芦荟多糖冻干粉制品。
步骤8：初级芦荟凝胶多糖制品的质量鉴定。
按中华人民共和国轻工行业标准QB/T2488-2000或QB/T2489-2000的方法对初级芦荟凝胶多糖制品进行质量检测。其制品质量指标如下：
水分含量：2.5％
多糖含量：60％
芦荟苷含量：120mg/kg
汞、铅、砷等未检出
经药物评估中心鉴定，没有致敏因子和毒性
*上述表中所列的芦荟多糖制品的质量均是芦荟凝胶原料的制品质量。对于芦荟全叶凝胶、芦荟皮胶制品芦荟多糖的质量指标均未列出。
*不同倍数的芦荟浓缩清液制品的质量指标和芦荟冻干粉制品的质量指标完全符合中华人民共和国轻工行业标准QB/T 2488-2000或者QB/T2489-2000所列级别的质量要求，本文未列出。
表1：处理芦荟凝胶和制备初级芦荟多糖制品及其它芦荟生物活性物质实施例二、实施例三的制备操作条件列表
| 实施例 | 酶制剂 | 微波膛 | 制品质量 | |||||||
| 酸性蛋白酶g/t | β-葡聚糖酶g/t | 微波频率MHZ | 微波功率KW/m3 | 温度℃ | 时间小时 | 真空度Mpa | 水份％ | 多糖含量％ | 芦荟苷含量mg/kg | |
| 二 | 15 | 2 | 2450 | 3.5 | 60～70 | 2～15 | 0.096～0.098 | 2.5％ | 66％ | 100 |
| 三 | 10 | 2 | 3800 | 3.0 | 60～75 | 2～15 | 0.096～0.098 | 2.5％ | 60％ | 130 |
*制备操作步骤及酶解反应时间和瞬间高温灭酶活时间、灭酶活温度同实施例一相同。
*上述表中所列的芦荟多糖产品的质量均是芦荟凝胶原料的制品质量。对于芦荟全叶凝胶、芦荟皮胶制品芦荟多糖的质量指标均未列出。
*不同倍数的芦荟浓缩清液制品的质量指标和芦荟冻干粉制品的质量指标完全符合中华人民共和国轻工行业标准QB/T 2488-2000或者QB/T2489-2000所列级别的质量要求，本文未列出。由于获得的固体湿料副产物可以用作生产其他芦荟制品的原料，因此本文未列出固体湿料副产物的质量指标。
二、二级芦荟多糖制品及其它生物活性物质的制备操作过程：
实施例四：
将酶分解技术、微波真空浓缩技术和过滤膜分离技术联合操作从芦荟凝胶、芦荟全叶凝胶、芦荟皮胶中提取芦荟多糖及其它生物活性物质，制备二级芦荟多糖制品及其它生物活性物质，制备操作流程包括下列步骤：。
步骤1：按实施例一的步骤1、步骤2、步骤3、步骤4制备50倍的芦荟浓缩清液，用无离子水对50倍芦荟浓缩清液进行稀释，获得2倍的芦荟浓缩清液。
步骤2：过滤膜分离系统的构成由150KDa微滤膜构成第一道膜，10KDa超滤膜构成第二道膜，2KDa超滤膜构成第三道膜。2倍芦荟浓缩清液经第一道膜过滤，把2倍芦荟浓缩清液分为两部分，一部分被第一道膜截流循环浓缩至含固量2％的浓缩液。另一部分透过第一道膜进入第二道膜，第二道膜过滤浓缩第一道膜过滤透过液，截流循环浓缩至含固量2％的浓缩液。第三道膜浓缩第二道膜过滤透过液，截流循环浓缩至含固量2％的浓缩液，第三道膜过滤透过液是液体副产品，液体副产品可以用作生产其他芦荟品。
步骤3：过滤膜分离浓缩液的固液分离。对经过三道膜过滤浓缩的芦荟浓缩液分别进行旋流分离和离心分离，获得二级液形芦荟品及其它生物活性物质和固体湿料副产物。固体湿料副产物另作处理，二级液形芦荟品经冷冻干燥机冻干制成芦荟冻干粉制品。
步骤4：对过滤膜分离后的二级液形芦荟品的芦荟多糖进行乙酰化处理。把步骤3中获得的二级液形芦荟品，含固量约2％。向芦荟浓缩清液中缓慢滴加占浓缩清液总重量1/80的乙酸酐，泵流搅拌常温反应12小时。
步骤5：经乙酰化后的二级液形芦荟品先用乙醇洗涤二次，再用丙酮洗涤一次。
步骤6：洗净后的二级液形芦荟品经冷冻干燥机冻干制成二级芦荟多糖冻干粉制品。
步骤7：二级芦荟凝胶多糖制品的质量鉴定。
外观：白色鳞片状固体或带轻微红色的鳞片状固体
水分：2.5％
芦荟多糖含量：80％
芦荟苷：65mg/kg
汞、铅、砷均未被检出
经药物评估，没有毒性和致敏因子。
*上述表中所列的芦荟多糖产品的质量均是芦荟凝胶原料的制品质量。对于芦荟全叶凝胶、芦荟皮胶制品芦荟多糖的质量指标均未列出。
*不同倍数的二级液形芦荟品的质量指标和芦荟冻干粉产品的质量指标完全符合中华人民共和国轻工业行标准QB/T 2488-2000或者QB/T 2489-2000所列级别的质量要求，本文未列出。由于获得的液体副产物、固体湿料副产物可以用作生产其他芦荟制品的原料，因此本文未列出液体副产物、固体湿料副产物的质量指标。
表2：制备二级芦荟多糖制品及其它生物活性物质实施例五至实施例十三的制备操作条件列表
| 实施例 | 50倍芦荟浓缩清液制备操作 | 过滤膜分离浓缩液制备操作的膜型号 | 制品质量 | |||
| 过滤膜道数 | 每道膜型号Kda | 水份％ | 多糖含量％ | 芦荟苷含量mg/kg | ||
| 五 | 按实施例一操作 | 三 | 300 10 2 | 2.5 | 80 | 60 |
| 六 | 按实施例一操作 | 三 | 500 100 2 | 2.5 | 78 | 70 |
| 七 | 按实施例一操作 | 二 | 200 2 | 2.5 | 77 | 70 |
| 八 | 按实施例一操作 | 二 | 300 2 | 2.5 | 76 | 72 |
| 九 | 按实施例二操作 | 三 | 200 10 2 | 2.5 | 79 | 68 |
| 十 | 按实施例二操作 | 三 | 500 100 2 | 2.5 | 78 | 70 |
| 十一 | 按实施例二操作 | 三 | 300 10 2 | 2.5 | 80 | 62 |
| 十二 | 按实施例二操作 | 二 | 200 2 | 2.5 | 76 | 75 |
| 十三 | 按实施例二操作 | 二 | 300 2 | 2.5 | 77 | 73 |
*制备操作步骤同实施例四相同。
*上述表中所列的芦荟多糖制品的质量均是芦荟凝胶原料的制品质量。对于芦荟全叶凝胶、芦荟皮胶制品的芦荟多糖的质量指标均未列出。
*不同倍数的芦荟浓缩清液制品的质量指标和芦荟冻干粉制品的质量指标完全符合中华人民共和国轻工行业标准QB/T 2488-2000或者QB/T 2489-2000所列级别的质量要求，本文未列出。由于获得的液体副产物、固体湿料副产物可以用做生产其他芦荟制品的原料，因此本文未列出液体副产物、固体湿料副产物的质量指标。
三、一级芦荟多糖制品的制备操作过程：
实施例十四：
将酶分解技术、微波真空浓缩技术、过滤膜分离技术和柱层析技术联合操作从芦荟凝胶、芦荟全叶凝胶和芦荟皮胶中提取芦荟多糖，制备一级芦荟多糖制品，制备操作流程包括下列步骤：
步骤1：经酶分解技术、瞬间高温灭酶活、微波照射，真空浓缩的50倍芦荟浓缩液的制备按实施例一的步骤1、步骤2、步骤3、步骤4进行操作。
步骤2：芦荟凝胶浓缩清液再进行过滤膜分离浓缩，获得含固量2％的芦荟凝胶浓缩清液，按实施例四的步骤2、步骤3操作。
步骤3：把含固量2％的过滤膜分离浓缩清液用PH＝4.5的乙酸-乙酸钠0.1mol溶液进行稀释一倍，制备柱层析液。
步骤4：大孔树脂层析柱与Superrose层析柱(或者琼脂糖层析柱)串联，进行柱层析。
步骤5：流动相为乙酸-乙酸钠0.1mol、PH＝4.5。
步骤6：洗脱液的浓缩。使用2KDa超滤膜浓缩至含固量2％的浓缩清液，获得一级液形芦荟品。
步骤7：对柱层析洗脱液的过滤膜分离浓缩清液中的芦荟多糖进行乙酰化处理。按实施例一的步骤4、步骤5操作。
步骤8：把已被乙酰化的浓缩清液进行真空冷冻干燥，获得一级白色的芦荟多糖制品。
步骤9：一级芦荟凝胶多糖产品的质量鉴定。
外观：白色鳞片状固体；
含水量：2％；
多糖含量：98％；
芦荟苷：1.2mg/kg；
无汞、铅、砷等有毒物质，无致敏因子。
*上述所列的芦荟多糖制品的质量均是芦荟凝胶原料的制品质量。对于芦荟全叶凝胶、芦荟皮胶制品芦荟多糖的质量指标均未列出。
表3：制备一级芦荟凝胶多糖制品实施例十五至实施例四十一的制备操作条件列表
| 实施例 | 50倍芦荟浓缩液制备操作 | 过滤膜分离浓缩清液制备柱层析液操作参照 | 柱层析进一步提纯技术层析柱型号 | 制品质量 | ||
| 水份％ | 多糖含量％ | 芦荟苷含量mg/kg | ||||
| 十五 | 按实施例一操作 | 实施例四 | 大孔树脂柱+琼脂糖柱 | 2 | 98 | 0.6 |
| 十六 | 按实施例一操作 | 实施例四 | 聚丙烯酰胺柱 | 2 | 95 | 1.2 |
| 十七 | 按实施例一操作 | 实施例五 | 大孔树脂柱+Superrose柱 | 2 | 97 | 0.8 |
| 十八 | 按实施例一操作 | 实施例五 | 大孔树脂柱+琼脂糖柱 | 2 | 98 | 0.5 |
| 十九 | 按实施例一操作 | 实施例五 | 聚丙烯酰胺柱 | 2 | 95 | 1.0 |
| 二十 | 按实施例一操作 | 实施例六 | 大孔树脂柱+Superrose柱 | 2 | 97 | 0.6 |
| 二十一 | 按实施例一操作 | 实施例六 | 大孔树脂柱+琼脂糖柱 | 2 | 98 | 0.5 |
| 二十二 | 按实施例一操作 | 实施例六 | 聚丙烯酰胺柱 | 2 | 95 | 1.0 |
| 二十三 | 按实施例一操作 | 实施例六 | 琼脂糖柱 | 2 | 96 | 0.9 |
| 二十四 | 按实施例二操作 | 实施例四 | 大孔树脂柱+Superrose柱 | 2 | 98 | 0.5 |
| 二十五 | 按实施例二操作 | 实施例四 | 大孔树脂柱+琼脂糖柱 | 2 | 98 | 0.4 |
| 二十六 | 按实施例二操作 | 实施例四 | 聚丙烯酰胺柱 | 2 | 96 | 0.7 |
| 二十七 | 按实施例二操作 | 实施例五 | 大孔树脂柱+Superrose柱 | 2 | 97 | 0.5 |
| 二十八 | 按实施例二操作 | 实施例五 | 大孔树脂柱+琼脂糖柱 | 2 | 98 | 0.4 |
| 二十九 | 按实施例二操作 | 实施例五 | 聚丙烯酰胺柱 | 2 | 96 | 0.7 |
| 三十 | 按实施例二操作 | 实施例五 | 琼脂糖柱 | 2 | 96 | 0.7 |
| 实施例 | 50倍芦荟浓缩液制备操作 | 过滤膜分离浓缩清液制备柱层析液制备参照 | 柱层析进一步提纯技术层析柱型号 | 制品质量 | ||
| 水份％ | 多糖含量％ | 芦荟苷含量mg/kg | ||||
| 三十一 | 按实施例二操作 | 实施例九 | 大孔树脂柱+Superrose柱 | 2 | 97 | 0.6 |
| 三十二 | 按实施例二操作 | 实施例九 | 大孔树脂柱+琼脂糖柱 | 2 | 97 | 0.7 |
| 三十三 | 按实施例二操作 | 实施例九 | 聚丙烯酰胺柱 | 2 | 95 | 1.1 |
| 三十四 | 按实施例二操作 | 实施例十 | 大孔树脂柱+Superrose柱 | 2 | 98 | 0.6 |
| 三十五 | 按实施例二操作 | 实施例十 | 大孔树脂柱+琼脂糖柱 | 2 | 98 | 0.8 |
| 三十六 | 按实施例二操作 | 实施例十 | 聚丙烯酰胺柱 | 2 | 96 | 1.5 |
| 三十七 | 按实施例二操作 | 实施例十 | 琼脂糖柱 | 2 | 96 | 1.5 |
| 三十八 | 按实施例二操作 | 实施例十一 | 大孔树脂柱+Superrose柱 | 2 | 98 | 0.4 |
| 三十九 | 按实施例二操作 | 实施例十一 | 大孔树脂柱+琼脂糖柱 | 2 | 98 | 0.5 |
| 四十 | 按实施例二操作 | 实施例十一 | 聚丙烯酰胺柱 | 2 | 96 | 0.8 |
| 四十一 | 按实施例二操作 | 实施例十一 | 琼脂糖柱 | 2 | 96 | 0.9 |
*制备操作步骤同实施例十四相同。
*上述表中所列的芦荟多糖制品的质量均是芦荟凝胶原料的制品质量。对于芦荟全叶凝胶、芦荟皮胶制品的芦荟多糖的质量指标均未列出。
*上述表中所列的芦荟多糖制品的质量均是芦荟凝胶原料的制品质量。对于芦荟全叶凝胶、芦荟皮胶制品芦荟多糖的质量指标均未列出。
本领域普通技术人员阅读说明书之后可以进行种种变更，但这些变更均在申请待批的权利要求保护范围之内。
Claims (13)
1.芦荟凝胶、芦荟全叶凝胶和芦荟皮胶的一种处理方法，该方法包括对粗芦荟凝胶、芦荟全叶凝胶和芦荟皮胶先进行酶解反应(enzymolysis)，然后进行微波照射(microwave irradiation)。
2.根据权力要求1的方法，其特征在下述条件下进行酶解反应：
(1)所用的酶制剂：酸性蛋白酶(acid proteianase)、β-葡聚糖酶(β-glucanase)；
(2)酶解反应的温度：20℃-70℃；
(3)酶解反应的PH值：2.5-7.0；
(4)酶解反应的酶制剂用量：酸性蛋白酶：3克/吨-30克/吨；β-葡聚糖酶：1克/吨-10克/吨；
(5)酶解反应的时间：1.0小时-20小时。
(6)灭酶温度：80℃-120℃，灭酶保温时间：0.01小时-1.0小时
3.根据权力要求2的方法，其特征在于下述条件下进行最合适的酶解反应：
(1)酶解反应的酶制剂用量：酸性蛋白酶：5克/吨-15克/吨；β-葡聚糖酶：2克/吨-5克/吨；
(2)酶解反应的温度：25℃-50℃；
(3)酶解反应的PH值：3.5-5.0；
(4)酶解反应的时间：2小时-5小时。
(5)灭酶温度：100℃-105℃，灭酶保温时间：0.02小时-0.5小时
4.根据权利要求1的方法，其特征在下述条件下进行微波照射：
(1)微波频率：750MHZ-3800MHZ；
(2)微波功率：0.1KW～8KW/米3微波炉膛；
(3)温度：0℃-90℃；
(4)微波照射时间：0.5-24小时；
(5)酸碱度PH：3-5。
5.根据权利要求4的方法，其特征在于在下述条件下进行微波照射：
(1)微波频率：950MHZ、2450MHZ；
(2)微波功率：1-5KW/米3微波炉膛；
(3)温度：20℃-50℃；
(4)微波照射时间：2-20小时；
(5)酸碱度PH：3-5。
6.根据权利要求1的方法，其特征在于对经酶解反应、微波照射的芦荟凝胶(包括对粗芦荟凝胶、芦荟全叶凝胶和芦荟皮胶)进行真空浓缩，对真空浓缩的芦荟凝胶浓缩液进行固液分离，获得初级液形芦荟品。
7.根据权利要求6的方法，其特征在于所说的固液分离为旋流分离和离心分离。
8.根据权利要求6的方法，其特征在于对所获得的初级液形芦荟品再进行过滤膜分离、过滤，过滤膜为500KDa～1KDa膜，过滤膜分离、过滤的道数为1～5，获得二级液形芦荟品；对二级液形芦荟品进行冷冻干燥获得固形芦荟多糖制品。
9.根据权利要求8的方法，其特征在于所说的过滤膜道数为3道，分别为300KDa、10KDa、2KDa，或者为500KDa、100KDa、2Kda，获得二级液形芦荟品；经冷冻干燥后获得固形芦荟多糖制品。
10.根据权利要求1的方法，其特征在于对所得的初级液形芦荟品进行柱层析。
11.根据权利要求8的方法，其特征在于对所得的二级液形芦荟品进行柱层析。
12.根据权利要求10的方法，其特征在于所述柱层析所使用的是大孔树脂柱、或琼脂糖柱、或Superrose、或聚酰胺柱；流动相选用0.05mol～0.5mol的乙酸-乙酸钠，PH＝4.0～5.0，压力为低压柱或中压柱，获得一级芦荟品。
13.根据权利要求11的方法，其特征在于所述柱层析所使用的是大孔树脂柱、或琼脂糖柱、或Superrose、或聚酰胺柱；流动相选用0.05mol～0.5mol的乙酸-乙酸钠，PH＝4.0～5.0，压力为低压柱或中压柱，获得一级芦荟品。
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| CNA031537308A CN1582713A (zh) | 2003-08-19 | 2003-08-19 | 芦荟凝胶、芦荟全叶凝胶、芦荟皮胶的一种处理方法及其芦荟多糖制品的制备技术 |
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|---|---|---|---|---|
| CN104673859A (zh) * | 2015-02-18 | 2015-06-03 | 浙江工业大学 | 一种酶解修饰的铜藻多糖及其应用 |
| CN105053740A (zh) * | 2015-09-23 | 2015-11-18 | 山东新希望六和集团有限公司 | 一种含有中药的48-66周龄种鸭饲料及其制备方法 |
| CN105647702A (zh) * | 2016-01-15 | 2016-06-08 | 南京科技职业学院 | 一种芦荟美肤皂的制备方法 |
| CN112606051A (zh) * | 2020-11-27 | 2021-04-06 | 盐城拉边化妆品有限公司 | 一种淡斑修复芦荟护肤凝胶制备方法 |
-
2003
- 2003-08-19 CN CNA031537308A patent/CN1582713A/zh active Pending
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