CN1557347A

CN1557347A - 治疗心脑血管疾病药物制剂及其制备方法

Info

Publication number: CN1557347A
Application number: CNA2004100002747A
Authority: CN
Inventors: 吴良信
Original assignee: Individual
Current assignee: SHENZHEN ZIFU PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2004-01-13
Filing date: 2004-01-13
Publication date: 2004-12-29
Anticipated expiration: 2024-01-13
Also published as: CN100446799C

Abstract

本发明涉及一种治疗心脑血管疾病的药物制剂及其制备方法，其采用金银花、怀牛膝、玄参、石斛为原料，通过用提取剂提取金银花、萃取，得金银花有效部分；水提取怀牛膝、玄参及石斛，醇沉淀后溶液被萃取，得怀牛膝、玄参及石斛第一有效部分；沉淀部分纯化后得怀牛膝、玄参及石斛第二有效部分；合并上述有效部分，配制成注射液，或者加入渗透压调节剂和注射用水配制成输液剂，或者加入适量的赋型剂经冷冻干燥制成的粉针制剂。本发明提供的药物制剂对治疗心脑血管疾病，尤其是治疗缺血性中风及冠心病心绞痛有很好的疗效，且毒副作用很小。

Description

治疗心脑血管疾病药物制剂及其制备方法

技术领域

本发明属于药物制剂领域，具体地说是治疗心脑血管疾病的药物制剂及其制备方法。

技术背景

心脑血管疾病是危害人类健康的大敌。我国每年心脑血管疾病的死亡率居高不下。目前尚无疗效好，且毒副作用小的有效药物治愈大多数“缺血性中风及冠心病心绞痛”的患者。

发明内容

为了克服已有技术的不足，本发明的目的是提供一种高效低毒的治疗心脑血管疾病，尤其是治疗缺血性中风及冠心病心绞痛的药物制剂。

本发明的另一个目的在于提供一种制备上述药物制剂的方法。

本发明人通过大量深入地研究，发现采用金银花、怀牛膝、玄参、石斛为原料，通过本发明的方法制备的药物制剂对治疗心脑血管疾病，尤其是治疗缺血性中风及冠心病心绞痛有很好的疗效，且毒副作用很小。

本发明提供的治疗心脑血管疾病的药物制剂是采用金银花、怀牛膝、玄参、石斛为原料，通过以下方法制备而得：

(1)将金银花用提取剂提取，用水沉淀，取滤液除去提取剂，用第一萃取剂萃取，取萃取液除去第一萃取剂，得金银花有效部分；

(2)怀牛膝、玄参、石斛加水提取，用第一低元醇沉淀；取所得滤液回收除去低元醇，用第二萃取剂萃取，取萃取液除去第二萃取剂，得怀牛膝、玄参及石斛第一有效部分；

(3)取第(2)步中用第一低元醇沉淀后的所得沉淀部分加水溶解，再用第二低元醇沉淀，取沉淀，加水溶解，超滤纯化得怀牛膝、玄参及石斛第二有效部分；

(4)合并第(1)、(2)、(3)步骤所得三种有效部分，配制成注射液，或者加入渗透压调节剂和注射用水配制成输液剂，或者加入适量的赋型剂经冷冻干燥制成的粉针制剂。

所述原料的配比可以是金银花2～8份、怀牛膝3～7份、玄参3～8份、石斛2～5份。

所述的第(1)步骤中所述的提取剂可以是本领域用于提取有效成分的常规或已知提取剂，例如：甲醇、乙醇、异丙醇、丙二醇、丙酮等，优选乙醇。所述的第一萃取剂可以是本领域用于萃取有效成分的常规或已知萃取剂，例如：甲酸乙酯、醋酸乙酯、氯仿、二氯乙烷等，优选醋酸乙酯。所述的提取、萃取等过程可以按照本领域常规或已知的方法进行。

所述的第(2)步骤中所述的第一低元醇可以是本领域通常用于沉淀水溶液中有效成分的常规或已知的低元醇，例如：甲醇、乙醇、异丙醇、丙二醇等，优选乙醇。所述的第二萃取剂可以是本领域通常用于萃取有效成分的常规或已知萃取剂，例如：戊二醇、正丁醇、氯仿、环己烷、甲苯、乙醚等，优选正丁醇。所述的提取、沉淀、萃取等过程可以按照本领域常规或已知的方法进行。

所述的第(3)步骤中所述的第二低元醇可以是本领域通常用于沉淀、纯化水溶液中有效成分的常规或已知的低元醇，例如：乙醇、异丙醇、丙二醇，优选乙醇。所述的沉淀、超滤等过程可以按照本领域常规或已知的方法进行。所述的超滤可以用截留分子量为3000和20000的膜分别进行超滤纯化。

所述的第(4)步骤中所述的渗透压调节剂可以是本领域常用的渗透压调节剂，例如：葡萄糖、氯化钠、果糖、木糖等。所述赋型剂可以是本领域制备冻干制剂常用的赋型剂，例如甘露醇、乳糖、甘氨酸等。所述注射液可以按照本领域制备注射液的常规或已知方法进行。所述输液剂可以按照本领域制备输液剂的常规或已知方法进行。所述粉针制剂可以按照本领域制备冻干粉针制剂的常规或已知方法进行。

本发明提供的治疗心脑血管疾病的药物制剂也可以通过以下方法制备：

(1)、金银花加6～12倍量的55～85％的乙醇提取2～4次，合并提取液，浓缩至每1ml相当于含生药0.7～1.5g；加水使含醇量达35～65％，冷藏，过滤，除去乙醇；用等量醋酸乙酯萃取3～6次，合并萃取液，除去醋酸乙酯，得金银花有效部分；

(2)、怀牛膝、玄参、石斛加水6～12倍量，煎煮提取2～4次，合并提取液，浓缩至每1ml相当于含生药0.5～1.5g；加乙醇沉淀使含醇量达45～85％，冷藏，过滤；取滤液除去乙醇，用等量正丁醇萃取3～6次；合并萃取液，除去正丁醇，得怀牛膝、玄参、石斛的第一有效部分；

(3)、取第(2)步中乙醇沉淀后过滤所得沉淀部分加水溶解，再用乙醇沉淀，取沉淀，加水溶解，超滤纯化得怀牛膝、玄参、石斛的第二有效部分；

(4)、合并上述第(1)、(2)、(3)步骤所得有效部分，制成注射液，或者加入注射用水和渗透压调节剂制成输液剂型，或者加入赋型剂经冷冻干燥制成的粉针制剂。

所述的加水或醇提取，可以是回流提取2～4次，每次1～3小时，每次加溶剂6～12倍量。所述的冷藏可以在常规或已知的冷藏温度下冷藏20～72小时。

本发明的冻干粉制剂在使用之前，可以把冻干制剂溶解于注射用水或其他注射液。所述的注射液可以是常规的注射液，如用于静脉输注的等渗水性介质，例如5％葡萄糖注射液或0.9％氯化钠注射液。

根据治疗过程和病人的状况，使用本发明的药物制剂的用量一般可以每日1～2支，相当每支含原药料100-200g。

本发明的药物制剂的一个重要特点是疗效好，毒性低。经药效学实验证明，本发明药物制剂对缺血性中风及冠心病心绞痛有显著治疗作用。经药理研究结果表明，其对麻醉犬心肌缺血有明显的保护作用，可明显改善麻醉犬血流动力学参数，并降低心肌耗氧量。采用双侧颈总动脉结扎造成大鼠不完全性脑缺血为模型，本发明制剂可降低脑梗塞重量、脑含水量及脑毛细血管通透性，对实验性大鼠脑缺血有明显的保护作用。本发明药物制剂经急性毒性试验、安全药理试验和过敏、刺激等试验研究未发现其有明显的毒副反应。此外，本发明药物制剂的原料丰富，制备工艺先进。

具体实施方式

下面将通过实施例对本发明作进一步的描述，这些描述并不是对本发明内容作进一步的限定。本领域的技术人员应理解，对本发明内容技术特征所做的等同替换，或相应的改进，仍属于本发明的保护范围之内。

实施例1

(1)取金银花1000g加乙醇(75％)10倍量，回流提取3次，分别2、3、2小时，合并提取液，浓缩至每1ml相当于含生药1.0g，加等量水，冷藏30小时，过滤，减压回收乙醇至浸膏中不合乙醇，用等量醋酸乙酯萃取4次，合并萃取液，减压回收醋酸乙酯，浸膏加少量注射用水，继续挥干，得金银花有效部分。

(2)取怀牛膝1000g、玄参1000g、石斛1000g混合，加水10倍量，煎煮提取3次，分别3、2、2小时，合并提取液，浓缩至每1ml相当于含生药1.0g，加乙醇沉淀使含醇量达80％，冷藏45小时，过滤，减压回收乙醇至浸膏中不含乙醇，用等量正丁醇萃取4次。合并萃取液，减压回收正丁醇，浸膏加少量注射用水，继续挥干，得怀牛膝、玄参、石斛的第一有效部分。

(3)取上一步骤中乙醇沉淀后过滤所得沉淀部分加水溶解，加乙醇沉淀使含醇量达80％，冷藏40小时，过滤，取沉淀，加水溶解，用截留分子量为3000和20000的膜分别超滤纯化得怀牛膝、玄参、石斛的第二有效部分。

(4)合并上述步骤所得的三种有效部分，加入注射用水调至400ml，用0.22μm微孔滤膜过滤，分装成每瓶10ml，熔封，经115℃，68.6Kpa热压灭菌30min，即得本发明的药物制剂注射液Z-1。

实施例2

按照实施例1的方法制备本发明药物制剂注射液Z-2，只是第(1)步骤中取金银花500g，乙醇浓度为55％，乙醇量为12倍量，浓缩后每1ml相当于含生药1.2g；第(2)步骤中取怀牛膝400g、玄参600g、石斛300g，加水12倍量，煎煮提取4次，分别3、2、2、1小时，浓缩后相当于含生药0.8g/ml，加乙醇沉淀使含醇量达75％。

实施例3

按照实施例1的方法制备本发明药物制剂注射液Z-3，只是第(1)步骤中提取剂是丙二醇，萃取剂是二氯乙烷；第(2)步骤中用异丙醇沉淀，乙醚萃取。

实施例4

(1)取金银花1000g，加乙醇(75％)10倍量提取3次(3、2、2小时)，合并提取液，浓缩至每1ml相当于含生药1.0g，加等量水，冷藏60小时，过滤，减压回收乙醇至浸膏中不含乙醇，用等量醋酸乙酯萃取4次，合并萃取液，减压回收醋酸乙酯，浸膏加少量注射用水，继续挥干，得金银花有效部分

(2)取怀牛膝1000g、玄参1000g、石斛1000g混合，加水10倍量，煎煮提取3次，合并提取液，浓缩至每1ml相当于含生药1.0g，加乙醇沉淀使含醇量达80％，冷藏72小时，过滤。减压回收滤液中乙醇至浸膏中不含乙醇，用等量正丁醇萃取4次。合并萃取液，减压回收正丁醇，浸膏加少量注射用水，继续挥干，得怀牛膝、玄参、石斛的第一有效部分。

(3)取上一步骤中乙醇沉淀后过滤所得沉淀部分加水溶解，加乙醇沉使含醇量达80％，冷藏20小时，过滤，取沉淀，加水溶解，用截留分子量为3000和20000的膜分别超滤纯化得怀牛膝、玄参、石斛的第二有效部分。

(4)合并上述有效部分，加入注射用水和36g氯化钠，溶解，加注射用水至4000ml，0.22μm微孔滤膜过滤，分装成每瓶100ml，塞入丁几胶塞，轧铝塑组合盖，经115℃，68.6Kpa热压灭菌30min，即得本发明药物制剂输液剂S-1。

实施例5

按照实施例4的方法制备本发明药物制剂输液剂S-2，只是第(1)步骤中取金银花600g，乙醇浓度为65％，乙醇量为9倍量，浓缩后每1ml相当于含生药0.7g；第(2)步骤中取怀牛膝500g、玄参500g、石斛250g，加水8倍量，煎煮提取4次，分别3、2、3、2小时，浓缩后相当于含生药0.5g/ml，加乙醇沉淀使含醇量达85％；第(4)步骤中氯化钠由100g的果糖取代。

实施例6

按照实施例4的方法制备本发明药物制剂输液剂S-3，只是第(1)步骤中取金银花1000g，乙醇浓度为85％，乙醇量为6倍量，浓缩后每1ml相当于含生药0.9g；第(2)步骤中取怀牛膝800g、玄参1000g、石斛600g，加水6倍量，煎煮提取4次，分别3、2、1、2小时，浓缩后相当于含生药1.5g/ml，加乙醇沉淀使含醇量达50％。

实施例7

按照实施例4的方法制备本发明药物制剂输液剂S-4，只是第(3)步骤中用丙二醇沉淀。

实施例8

(1)取金银花1000g加醇(75％)10倍量提取3次(2、2、2小时)，合并提取液，浓缩至每1ml相当于含生药1.0g，加等量水，冷藏30小时，过滤，减压回收滤液中乙醇至浸膏中不含乙醇，用等量醋酸乙酯萃取4次，合并萃取液，减压回收醋酸乙酯，浸膏加少量注射用水，继续挥干，得金银花有效部分。

(2)取怀牛膝1000g、玄参1000g、石斛1000g混合，加水10倍量，煎煮提取3次，合并提取液，浓缩至每1ml相当于含生药1.0g，加乙醇沉淀使含醇量达80％，冷藏35小时，过滤，减压回收滤液中乙醇至浸膏中不含乙醇，用等量正丁醇萃取4次。合并萃取液，减压回收正丁醇，浸膏加少量注射用水，继续挥干，得怀牛膝、玄参、石斛的第一有效部分。

(3)取上一步骤中乙醇沉淀后过滤所得沉淀部分加水溶解，加乙醇沉使含醇量达80％，冷藏25小时，过滤，取沉淀，加水溶解，用截留分子量为3000和20000的膜分别超滤纯化得怀牛膝、玄参、石斛的第二有效部分。

(4)合并上述有效部分，加入8g甘露醇和注射用水，溶解使终体积60ml，用0.22μm微孔滤膜过滤除菌，分装于灭菌的西林瓶，每瓶3ml，冷冻干燥，压塞，轧铝塑组合盖，即得本发明药物制剂粉针剂F-1。

实施例9

按照实施例8的方法制备本发明药物制剂粉针剂F-2，只是第(1)步骤中取金银花500g，乙醇浓度为65％，乙醇量为8倍量，浓缩后每1ml相当于含生药1.4g；第(2)步骤中取怀牛膝450g、玄参600g、石斛400g，加水9倍量，煎煮提取3次，分别3、2、1小时，浓缩后相当于含生药0.8g/ml，加乙醇沉淀使含醇量达60％；第(4)步骤中赋型剂为4g的乳糖。

实施例10 犬心脏血流动力学及心肌耗氧量试验

取体重为8～11kg的健康杂种家犬30只，雌雄兼有，雌性未孕，观察本发明药物制剂滴注给药后对麻醉犬心脏血流动力学及心肌耗氧量的影响。杂种家犬随机分为4组，每组6只，雌雄兼有，分别为空白(NS)对照组、本发明制剂大、小剂量组及口服(十二指肠给药)组。各组动物的体重分布见表1。

犬禁食(不禁水)14h后，称重，静脉注射3％的戊巴比妥钠1ml/kg进行麻醉后，进行气管插管，接动物人工呼吸机。分离右股动脉，并插入动脉插管，用充满含肝素钠25u/ml生理盐水(NS)的导管液导接通压力换能器，记录血压(收缩压SAP、舒张压DAP、平均动脉压MAP)。分离右侧股静脉，以备输液和给药。开动人工呼吸机(20～25次/min)，开胸，切开心包膜，做心包摇篮。分离升主动脉根部，放置电磁血流量计的探头，由电磁血流量计记录心输出量(CO)。由左心室心尖部插入导管至左心室腔内测量心室内压LVP，测取平均心室内压峰值LVSP。并将信号输入放大器放大后记录左心室舒张末期压(LVEDP)，输入微分器记录左心室内压最大上升速率(+dp/dt max)。于冠脉第一、第二分支间分离冠状动脉，放置适宜直径的探头测量冠脉流量(CAF)，并于犬四肢皮下插入针状电极，记录II导联心电图，测量心率(HR)。上述测量信号均输入八道生理记录仪(日本光电公司生产)记录、描记，同时将心输出量、心电、血压及心室内压的电信号同步输入信号处理系统进行记录、处理，并由微机处理后读出心室内压峰值(LVSP)、舒张末期压(LVEDP)、心室内压最大上升速率(+dp/dtmax)、及左室射血的张力-时间指数(TTI，即左室射血时间内投影在LVP曲线下积分的面积)。最后，按文献(中药药理研究方法学.北京：人民卫生出版社，1994，525～530)的公式和方法计算心脏指数(CI)、每搏输出量(SV)、心搏指数(SI)、左室作功指数(LVWI)、血管总外周阻力(TPVR)等参数。同时，于给药前及给药后30、120min由犬右侧颈外静脉插管至冠状窦取静脉血、从腹主动脉抽取动脉血，迅速用i-STAT血气分析仪测定动、静脉血的O₂分压(PO₂)及血氧饱和度(sO₂)，用文献(药理实验方法学(第2版).北京：人民卫生出版社，1994：887～889)方法计算心肌耗氧量(MVO₂ml/min·100g-1)和心肌氧摄取率。反映心肌耗氧情况的心肌耗氧指数以TTI乘以心率来表示。

口服组的犬除上述手术外，再进行十二指肠插管，以备给药。

手术完成后稳定20min左右，记录上述指标作为给药前的正常值，然后进行给药，本发明制剂Z-1大、小剂量组的给药剂量为6、3g生药/kg，均将药物混入注射用NS中制成100ml的输液静脉滴注给药，约在15min内滴完；口服组的剂量同大剂量组，将药液由插管直接注入十二指肠，同时静脉滴注100ml的NS输液。空白对照组仅滴入100ml的NS输液；记录并计算给药后各血流动力学指标及心肌耗氧量指标，结果进行给药前、后净增减值的配对t-检验统计学处理。实验结果见表1～表8。

表1：各组动物的体重分布情况 ( x±s Kg，n＝6)

组别空白对照组阳性药对照组大剂量组小剂量组口服对照组

体重 8.9±1.0 8.6±1.4 9.2±1.0 9.4±1.2 9.7±0.8

表2：对麻醉犬血压(SAP、DAP、MAP)的影响( x±s kPa，n＝6)

组给药后 (min)

指标给药前

别 5 10 20 30 60 120 180

SAP 15.35±3.59 14.62±4.10 14.76±4.04 14.82±3.76 14.38±3.52 13.22±3.75 10.07±3.29 8.62±2.86

△ / -0.73±2.17 -0.60±2.39 -0.53±2.17 -0.98±2.09 -2.13±2.53 -5.29±2.63^** -6.73±3.39^**

对

DAP 8.38±2.35 7.64±2.78 7.78±2.86 7.76±2.89 7.40±2.77 6.60±249 5.51±1.74 4.51±163

照

△ / -0.73±1.21 -0.60±1.28 -0.62±1.19 -0.98±1.24 -1.78±1.65^* -2.87±1.59^** -3.87±2.16^**

组

MAP 10.70±2.72 9.97±3.19 10.10±3.22 10.11±3.14 9.73±2.98 8.81±2.87 7.03±2.24 5.88±2.00

△ / -0.73±1.51 -0.60±1.63 -0.59±1.48 -0.98±1.50 -1.89±1.93 -3.67±1.87^** -4.82±2.54^**

SAP 16.47±2.89 17.24±2.98 16.87±3.48 15.87±3.20 15.44±3.52 14.87±3.74 11.07±4.68 8.13±4.76

大 △ / 0.78±0.86 0.40±1.24 -0.60±1.25 -1.02±1.48 -1.60±1.65 -5.40±2.49^** -8.33±2.27^***

剂 DAP 8.38±2.35 9.69±1.97 9.36±3.40 9.04±2.18 8.49±2.12 7.80±2.38 5.18±2.34 3.89±2.22

量 △ / 1.31±2.18 0.98±3.62 0.67±2.91 0.11±3.01 -0.58±3.14 -3.20±3.66 -4.49±3.24^*

组 MAP 11.99±2.00 12.21±2.21 11.86±3.22 11.32±2.46 10.81±2.58 10.15±2.80 7.14±3.11 5.30±3.05

△ 0.22±0.40 -0.13±1.64 -0.67±1.25 -1.18±1.38 -1.83±1.37^* -4.84±2.28^** -6.68±2.03^***

小 SAP 14.16±2.06 14.87±1.68 14.31±1.69 13.89±2.10 13.76±2.14 13.58±2.62 12.36±2.80 11.80±2.64

剂 △ / 0.71±2.17 0.16±2.14 -0.27±1.98 -0.40±1.79 -0.58±2.83 -1.80±4.18 -2.36±4.27

量 DAP 7.24±1.00 7.36±0.95 7.09±1.21 7.04±1.13 7.07±1.60 6.96±1.30 6.13±1.60 5.73±1.75

组 △ / 0.11±1.21 -1.16±1.54 -0.20±1.16 -1.18±1.38 -0.29±1.14 -1.11±1.61 -1.51±2.04

(3g/ MAP 9.55±1.22 9.86±1.09 9.50±1.28 9.33±1.34 9.30±1.72 9.16±1.64 8.21±1.87 7.76±2.00

Kg) △ / 0.31±1.40 -0.05±1.55 -0.22±1.24 -0.25±1.31 -0.39±1.55 -1.34±2.40 -1.79±2.76

SAP 14.98±2.02 14.49±1.61 14.44±1.70 14.36±2.06 14.29±2.58 13.89±2.73 14.18±2.34 14.40±2.69

口

△ / -0.49±0.88 -0.53±0.75 -0.62±0.63 -0.69±1.00 -1.09±1.44 -0.80±1.44 -0.58±1.77

服

DAP 9.38±1.50 9.13±1.30 8.87±1.18 8.67±1.31 8.49±1.64 7.89±1.70 8.53±1.77 8.44±1.78

组

△ / -0.24±0.56 -0.51±0.71 -0.71±0.83 -0.89±1.16 -1.49±1.39^* -0.84±1.51 -0.93±1.48

(6g/

MAP 11.24±1.62 10.92±1.38 10.73±1.32 10.56±1.53 10.42±1.92 9.89±2.00 10.41±1.95 10.43±2.07

Kg)

△ / -0.33±0.58 -0.52±0.67 -0.68±0.69 -0.82±1.05 -1.36±1.38 -0.83±1.46 -0.81±1.56

注：①给药前后净增减值比较，^*：P＜0.05，^**：P＜0.01；

②表中“△”表示为给药后的净增加值(下同)；

③大、中、小剂量组的剂量均以生药量计算，下同。

表3：对麻醉犬CO(L/min)、CAF(ml/min·100g)和

HR(beats/min)的影响( x±s，n＝6)

组指给药后(min)

给药前

别标 5 10 20 30 60 120 180

CO 0.561±0.241 0.560±0.240 0.548±0.248 0.539± 0.511±0.233 0.454±0.199 0.385±0.192 0.362±0194

△ / -0.001±0.032 -0.013±0.037 0.023±0.027 -0.050±0.028^** -0.107±0072^* -0.176±0.107^* -0.199±0.120^**

对

CAF 213.8±95.5 202.3±92.8 197.4±107.5 200.7±98.2 189.4±85.2 188.8±91.4 155.5±81.3 137.1±62.6

照

△ / -11.5±6.9^** -16.3±10.5^* -13.1±12.1^* -24.4±16.3^* -25.0±18.6^* -58.3±34.8^** -76.6±47.0^*

组

HR 180.2±18.9 190.8±25.2 195.3±24.2 202.8±25.1 209.2±26.9 214.8±24.0 222.5±27.5 226.7±27.7

△ / 10.7±9.9^* 15.2±8.9^** 22.7±10.2^** 29.0±12.2^** 34.7±12.3^*** 42.3±13.4^*** 46.5±13.6^***

CO 0.455±0.311 0.697±0.322 0.772±0.311 0.668± 0.690±0.462 0.687±0.520 0.447±0.302 0.357±0.307

大 △ / 0.242±0.101^** 0.317±0.261^* 0.213±0164^* 0.235±0.321 0.232±0.412 -0.008±0.174 -0.098±0.168

剂 CAF 140.4±24.9 258.2±97.0 334.6±128.4 2894± 216.1±42.2 200.3±68.1 162.3±63.9 135.1±28.4

量 △ / 117.8±76.7^* 194.2±117.1^** 1491±111.2^* 75.8±19.9^*** 59.9±50.1^* 21.9±57.6 -5.3±14.9

组 HR 214.0±19.0 214.8±18.8 213.2±19.7 224.7±30.0 223.8±27.3 225.3±24.7 228.0±21.5 226.2±23.4

△ / 0.8±7.4 -0.8±26.2 10.7±18.4 9.8±15.8 11.3±17.7 14.0±22.2 12.2±23.4

CO 0.939±0.251 1.280±0.339 1.268±0.397 1.250± 1.178±0.431 0.960±0.246 0.792±0.314 0.718±0.164

小 △ / 0.341±0.206^** 0.329±0.251^* 0.311±0.275^* 0.239±0.222^* 0.021±0.234 -0.148±0.278 -0.221±0.210^*

剂 CAF 195.1±59.0 283.7±137.6 292.3±122.7 314.8±104.9 286.5±90.7 229.5±64.9 178.7±63.7 177.1±87.5

量 △ / 88.6±82.9^* 97.2±67.7^* 119.7±56.6^** 91.5±49.3^** 34.4±40.1 -16.4±48.7 -18.0±51.0

组 HR 179.8±18.1 190.7±16.5 192.3±15.1 195.2±19.8 196.8±19.2 192.7±23.8 194.7±29.3 195.5±29.9

△ / 10.8±8.6^* 12.5±9.6^* 15.3±7.7^** 17.0±6.7^** 12.8±13.6 14.8±22.6 15.7±21.2

CO 0.787±0.322 0.842±0.355 0.845±0.362 0.838±0.376 0.842±0.372 0.842±0.367 0.730±0.282 0.708±0.259

△ / 0.055±0.044^* 0.058±0.072 0.052±0.080 0.055±0.102 0.055±0.103 -0.057±0.077 -0.078±0.112

口

CAF 176.7±46.0 177.1±33.0 192.8±28.4 176.7±27.3 171.7±33.7 176.5±32.2 187.5±52.3 156.9±39.8

服

△ / 0.4±26.6 16.1±4.06 0.0±50.5 -5.0±61.5 -0.2±54.4 10.8±51.5 -19.7±39.0

组

HR 165.3±21.9 166.8±21.7 169.7±25.5 169.3±23.1 168.7±19.9 174.2±18.7 177.0±15.0 179.5±17.7

△ / 1.5±2.6 4.3±6.0 4.0±2.0^** 3.3±5.5 8.8±6.4 11.7±14.6 14.2±20.6

注：给药前后净增减值比较，^*：P＜0.05，^**：P＜0.01，^***：P＜0.001。

表4：对麻醉犬LVSP、LVEDP(kPa)和

+dp/dtmax(kPa/s)的影响( x±s，n＝6)

组给药后(min)

指标给药前

别 5 10 20 30 60 120 180

LVSP 21.29±3.14 20.40±4.61 21.16±4.67 20.93±4.18 20.89±4.52 19.21±4.95 18.32±5.47 17.65±6.59

△ / -0.89±2.04 -0.13±2.35 -0.36±1.72 -0.40±2.10 -2.08±2.93 -2.97±3 23 -3.64±4.33

对

LVEDP 0.96±0.40 1.32±0.61 1.65±0.47 1.74±0.49 1.79±0.26 1.67±0.41 1.93±0.41 2.24±0.57

照

△ / 0.36±0.54 0.70±0.47^* 0.78±0.40^** 0.83±0.38^** 0.72±0.19^*** 0.98±0.22^*** 1.28±0.67^**

组

+dp/dt 508.8± 497.3±134.9 468.5±148.8 478.2±126.7 474.1±133.8 4106.±87.6 394.0±108.6 340.6±71.5

△ / -11.5±31.5 -40.3±65.3 -3.06±49.7 -34.7±69.6 -98.2±97.3 -114.8±95.4^* -168.2±138.3^*

LVSP 24.21±4.61 26.04±3.62 26.28±4.89 24.19±1.98 23.40±4.02 22.56±3.91 17.03±4.69 13.89±4.42

大 △ / 1.83±2.86 2.07±2.97 -0.03±4.35 -0.81±4.81 -1.65±5.38 -7.18±7.10 -10.32±6.34^*

剂 LVEDP 1.45±0.75 0.48±0.34 0.90±0.33 0.75±0.29 1.45±0.39 1.01±0.48 2.48±0.67 2.67±0.60

量 △ / -0.97±0.78^* -0.54±0.82 -0.70±0.51^* 0±0.81 -0.44±0.99 1.03±1.11 1.23±0.64^**

组 +dp/dt 531.6±68.3 736.3±88.6 747.2±249.4 646.1±137.4 564.4±128.9 564.8±105.0 410.3±164.8 277.8±113.0

△ / 204.7±63.1^*** 215.6±193.8^* 114.5±107.9^* 32.8±99.5 33.2±103.8 -121.3±192.2 -253.8±

LVSP 19.72±2.57 23.43±3.18 22.90±3.28 21.38±3.87 20.50±3.28 19.12±3.76 17.98±3.86 16.11±2.07

小 △ / 3.70±2.24^** 3.18±2.69^* 1.65±2.86 0.78±1.89 -0.60±3.60 -1.74±3.57 -3.61±3.25^*

剂 LVEDP 1.02±0.15 0.43±0.23 0.68±0.41 0.82±0.58 0.96±0.55 1.15±0.35 1.26±0.57 1.27±0.65

量 △ / -0.59±0.31^** -0.33±0.54 -0.20±0.62 -0.06±0.53 0.13±0.41 0.24±0.55 0.26±0.69

组 +dp/dt 481.4± 688.3±146.4 670.6±129.5 582.6±113.6 560.7±139.7 489.5±162.9 382.5±125.5 361.3±70.7

△ / 206.8±82.7^** 189.2±79.2^** 101.2±78.7^* 79.3±88.6 8.1±135.7 -98 9±111.4 -120.1±101.7^*

LVSP 22.30±0.88 21.55±2.11 21.76±1.70 21.91±2.14 21.88±1.53 22.18±1.01 20.48±2.72 20.46±2.68

△ / -0.75±1.83 -0.54±1.74 -0.39±1.87 -0.42±0.94 -0.13±0.55 -1.83±2.18 -1.85±2.39

口

LVEDP 1.49±0.63 1.34±0.49 1.79±0.30 1.31±0.39 1.09±0.65 0.99±0.64 1.52±0.54 2.07±0.76

服

△ / -0.15±0.35 0.31±0.61 -0.17±0.65 -0.39±0.83 -0.49±0.92 0.03±0.30 0.58±1.11

组

+dp/dt 464.9± 447.4±138.7 456.5±156.5 440.6±151.2 459.5±131.5 493 5±127 3 449.2±117.5 436.3±110.9

△ / -17.5±89.3 -8.5±124.4 -24.31±110.5 -5.5±65.5 28.6±68 7 -15.7±116.9 -28.6±47.7

表5：对麻醉犬CI(L/min/m²)、SV(×10^-3ml/beat)

和SI(×10^-3ml/beat/m²)的影响( x±s，n＝6)

组指给药后(min)

给药前

别标 5 10 20 30 60 120 180

CI 1.18±0.50 1.18±0.50 1.15±0.51 1.13±0.52 1.08±0.48 0.96±0.43 0.81±0.41 0.76±0.42

△ / -0.01±0.07 -0.03±0.08 -005±0.06 -0.11±0.06^** -0.22±0.14^* -0.37±0.21^** -0.42±0.24^**

对

SV 3.17±1.43 3.03±1.42 2.89±1.39 2.72±1.33 2.50±1.19 2.14±0.95 1.74±0.90 1.60±0.85

照

△ / -0.15±0.07^** -0.28±0.15^** -0.45±0.16^*** -0.67±0.28^** -1.03±0.67^* -1.43±0.80^** -1.58±0.85^**

组

SI 6.66± 6.35±2.85 6.06±2.80 5.72±2.72 5.26±2.42 4.53±2.02 3.66±1.87 3.35±1.75

△ / -0.31±0.17^** -0.59±0.32^** -0.94±0.30^*** -1.39±0.56^** -2.13±1.30^* -3.00±1.57^** -3.31±1.68^**

CI 0.93±0.61 1.43±0.61 1.59±0.62 1.37±0.73 1.41±0.92 1.40±1.04 0.91±0.58 0.72±0.59

大 △ / 0.50±0.20^** 0.66±0.56^* 0.44±0.34^* 0.48±0.86 0.47±0.85 -0.02±0.35 -0.21±0.33

剂 SV 2.19±1.57 3.33±1.70 3.71±1.69 3.14±2.01 3.21±2.23 3.13±2.36 1.98±1.38 1.60±1.41

量 △ / 1.14±0.47^** 1.52±1.43^* 0.95±0.74^* 1.02±1.35 0.94±1.65 -0.21±1.05 -0.59±1.01

组 SI 4.47±3.07 6.82±3.26 7.65±3.35 6.46±3.93 6.55±4.42 6 37±4.70 4.02±2.58 3.20±2.67

△ / 2.35±0.92^** 3.18±3.07^* 1.95±1.49^*1 2.08±2.77 1.90±3.39 -0.46±2.08 -1.27±2.00

CI 1.91±0.40 2.61±0.53 2.58±0.64 2.53±0.80 2.38±0.71 1.95±0.37 1.60±0.55 1.47±0.26

小 △ / 0.70±0.41^** 0.67±0.48^* 0.62±0.50^* 0.47±0.41^* 0.04±0.48 -0.31±0.58 -0.44±0.43

剂 SV 5.33±1.71 6.79±2.09 6.71±2.55 6.57±2.95 6.12±2.53 5.02±1.28 4.08±1.57 3.73±0.97

量 △ / 1.46±0.12^* 1.38±1.47 1.24±1.56 0.79±1.09 -0.31±1.14 -1.25±1.39 -1.60±1.32^*

组 SI 10.82±2.96 13.82±3.45 13.61±4.30 13.29±5.16 12.35±4.36 10.22±2.16 8.28±2.97 7.64±1.81

△ / 3.00±2.23^* 2.79±2.82 2.47±2.90 1.53±2.04 -0.60±2.36 -2.54±2.90 -3.18±2.63^*

CI 1.56±0.64 1.67±0.70 1.67±0.71 1.66±0.73 1.66±0.71 1.67±0.70 1.45±0.56 1.41±0.53

△ / 0.11±0.09^* 0.11±0.14 0.10±0.15 0.10±0.19 0.11±0.19 -0.11±0.15 -0.15±0.22

口

SV 4.71±1.69 5.01±1.89 4.94±1.87 4.92±2.06 5.00±2.21 4.83±2.10 4.08±1.41 3.92±1.30

服

△ / 0.29±0.28^* 0.23±0.32 0.21±0.49 0.28±0.65 0.11±0.58 -0.63±0.70 -0.79±1.01

组

SI 9.32±3.14 9.89±3.52 9.76±3.43 9.71±3.78 9.85±4.03 9.52±3.84 8.11±2.77 7.82±2.65

△ / 0.57±0.55 0.44±0.61 0.38±0.92 0.52±1.23 0.20±1.11 -1.21±1.29 -1.51±1.85

表6：对麻醉犬TPVR(×10³kPa·s/L)和

LVWI(kg·M/min/m²)的影响( x±s，n＝6)

组给药后(min)

指标给药前

别 5 10 20 30 60 120 180

TPVR 1.48±0.99 1.40±0.99 1.50±1.14 1.56±1.21 1.58±1.29 1.51±1.07 1.59±1.21 1.40±0.98

对

△ / -0.07±0.14 0.03±0.19 0.08±0.25 0.11±0.38 0.03±0.30 0.11±0.54 -0.08±0.66

照

LVWI 0.16±0.06 0.15±0.06 0.15±0.06 0.14±0.06 0.13±006 0.11±0.05 0.07±0.04 0.06±0.03

组

△ / -0.02±0.03 -0.02±004 -0.02±0.03 -0.03±0.04 -0.06±0.03^** -0.09±0.04^** -0.11±0.04^**

大 TPVR 2.01±0.82 1.21±0.44 1.11±0.67 1.26±0.58 1.32±56.3 1.44±0.94 1.47±1.15 1.54±1.34

剂 △ / -0.80±0.43^** -0.90±0.83^* -0.75±0.45^** -0.70±0.51^* -0.58±0.51^* -0.54±0.61 -0.47±0.84

量 LVWI 0.16±0.11 0.24±0.12 0.24±0.09 0.21±0.13 0.21±0.14 0.19±0.14 0.09±0.08 0.06±0.08

组 △ / 0.09±0.04^** 0.09±0.04^** 0.06±0.04^* 0.05±0.07 0.04±0.08 -0.07±0.09 -0.10±0.10

小 TPVR 0.64±0.16 0.49±0.11 0.48±0.14 0.49±0.15 0.52±0.17 0.59±0.12 0.71±0.32 0.66±0.17

剂 △ / -0.15±0.12^* -0.16±0.11^* -0.15± -0.12± -0.05±0.14 0.07±0.34 0.02±0.25

量 LVWI 0.25±0.08 0.34±0.04 0.32±0.04 0.31±0.08 0.29±0.10 0.24±0.08 0.18±0.09 0.15±0.06

组 △ / 0.09±0.06^* 0.07±0.06^* 0.06± 0.05±0.06 -0.01±0.10 -0.07±0.10 -0.09±0.10

TPVR 0.99±0.40 0.91±0.37 0.89±0.39 0.90±0.40 0.88±0.39 0.84±0.39 0.96±0.34 0.99±0.37

口

△ / -0.09±0.12 -0.10±0.12 -0.09± -0.11±0.07^* -0.15±0.08^** -0.03±0.10 0±0.19

服

LVWI 0.23±0.08 0.25±0.10 0.24±0.10 0.23±0.10 0.23±0.09 0.22±0.09 0.20±0.07 0.19±0.06

组

△ / 0.01±0.02 0.01±0.033 0.00±0.03 0±0.04 -0.02±0.05 -0.03±0.04 -0.04±0.04

表7 对麻醉犬心肌耗氧指数(TTI×心率)的影响( x±s kPa·beats，n＝6)

给药后(min)

组别给药前

5 10 20 30 60 120 180

对照 0.91±0.13 0.86±0.17 0.89±0.18 0.97±0.18 0.98±0.17 0.92±0.28 0.86±0.33 0.75±0.31

组 △ -0.05±0.10 -0.01±0.11 0.07±0.11 0.07±0.08 0.02±0.30 -0.04±0.30 -0.16±0.31

大剂 1.17±0.29 1.26±0.30 1.17±0.28 1.08±0.13 1.16±0.50 1.07±0.38 0.69±0.16 0.51±0.23

量组 △ 0.09±0.18 0±0.17 -0.09±0.27 -0.01±0.27 -0.10±0.19 -048±041^* -0.66±0.40^**

小剂 0.94±0.16 1.14±0.27 1.07±0.24 1.04±0.28 1.00±0.25 0.92±0.28 0.87±0.29 0.78±0.25

量组 △ 0.19±0.17^* 0.13±0.17 0.10±0.17 0.06±0.15 -0.02±0.20 -0.07±0.25 -0.17±0.25

口服 0.95±0.13 0 96±0.12 0.96±0.13 0.94±0.16 0.93±0.14 0.96±0.14 0.99±0.12 0.96±0.12

组 △ 0.00±0.06 0.01±0.10 -0.01±0.09 -0.02±0.11 0.01±0.07 0.04±0.06 0.01±0.080

注：给药前后净增减值比较，^*：P＜0.05。

表8 对麻醉犬心肌耗氧量(MVO₂，ml/min·100g^-1)和

心肌氧摄取率(％)的影响( x±s，n＝6)

组别指标给药前 30min 120min

MVO₂ 70.4±16.2 65.3±19.0 65.9±12.6

△ / -5.1±12.4 -4.5±14.2

对照组摄取率 41.9±8.3 45.0±14.5 58.3±13.1

△ / 3.2±7.6 16.4±7.1**

MVO2 73.1±18.2 56.1±16.7* 56.5±12.9*

△ / -17.0±15.4* -16.6±12.4*

大剂量组摄取率 55.5±14.9 40.1±7.5 48.9±12.2

△ / -15.4±10.7 -6.6±14.3

MVO₂ 73.6±20.9 61.0±17.6* 55.9±22.9*

△ / -12.6±10.0* -17.7±11.8*

小剂量组摄取率 40.5±16.4 27.3±8.9 40.8±19.0

△ / -13.2±14.5 0.3±30.7

MVO₂ 74.5±12.2 66.9±20.7 67.6±19.5

△ / -7.6±19.9 -6.9±21.9

口服组摄取率 39.9±4.2 41.5±9.1 39.0±7.3

△ / 1.6±8.2 -0.9±10.4

注：与模型组比较，^*：P＜0.05，^**：P＜0.01。

实验结果表明，对照组麻醉犬给NS后10min即引起持续性心率和左室舒张末期压不断增加，冠脉流量、心脏每搏输出量、心搏指数明显下降(P＜0.05～0.001)；30min后心输出量和心脏指数明显下降(P＜0.05～0.01)；60min后左室作功指数明显下降(P＜0.01)；120min后则引起血压和左室内压最大上升速率的明显下降，心肌氧摄取率明显增加(P＜0.05～0.01)。其余的血流动力学指标则未见显著性改变。

本发明制剂静脉滴注给药后，大剂量组麻醉犬的心率无显著性增加，与给药前比较，P＞0.05；小剂量组麻醉犬的心率在给药后30min内虽有显著性增加，但增加幅度不大，30min后则无显著性增加，表明本发明制剂可抑制因手术引起的犬心率增加。给药后5min，即引起麻醉犬的CAF明显增加，P＜0.05～0.001，药效持续达60min。给药后大、小剂量组的心输出量、左室内压最大上升速率、心脏指数、心脏每搏输出量、心搏指数、左室作功指数等均有明显增加，P＜0.05～0.01，血管总外周阻力和左室舒张末期压则明显下降，P＜0.05～0.001，作用维持了30min以上。小剂量组犬的LVSP在给药后10min内有短时间的明显上升，P＜0.05～0.001。麻醉犬的心肌耗氧量在给药后有明显下降，P＜0.05～0.01，大剂量组的心肌耗氧指数在给药120min后bn有明显下降，P＜0.05～0.01，这表明本发明制剂有一定有降低心肌耗氧量的作用。上述指标的改变，均有益于增强心功能，保护缺血心肌，减轻心脏缺血症状等。本发明制剂以静脉注射的大剂量十二指肠给药后，血管总外周阻力在给药后20～60min内明显降低。

本发明制剂静脉滴注给药后，麻醉犬的心率未见有明显的升高；30min内麻醉犬的CAF显著上升，P＜0.05，LVSP、+dp/dt3max在给药后30min内也有明显上升，P＜0.05～0.001。心输出量、心肌耗氧量等其它血流动力学指标未见有明显的改变。

综上所述，证明本发明制剂给药后能抑制麻醉犬因手术引起的心率增快，显著增加冠脉流量和心输出量，心脏指数、左室内压最大上升速率、心搏指数、每搏心输出量、平均心室内压峰压和左室作功指数等也有明显增加，血管总外周阻力和左室舒张末期压明显下降，麻醉犬的心肌耗氧量在给药后也有明显下降，表明本发明制剂能扩张外周血管，增强心功能，减少心肌耗氧量。这样，能调整缺血心肌的供-需平衡，使心脏血流供应得到改善，有利于保护缺血心肌，减轻心脏缺血症状。

实施例11 本发明制剂对麻醉犬心肌缺血的保护作用

取健康杂种家犬，观察本发明制剂静脉注射给药后，对急性心肌缺血犬心肌梗塞重量、血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸磷酸激酶(CPK-MB)活性，血清超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化脂质的分解产物丙二醛(MDA)含量等方面的影响。

36只杂种家犬，雌雄兼有，雌性未孕，经检疫及驱虫，2周后用于本实验。本发明制剂F-1含20g生药/g，2g粉/瓶。氯化硝基四氮唑蓝(NBT)：中国上海前进试剂厂产品，黄色粉末，0.25g/支，用前以磷酸盐缓冲液(pH7.4)配制成0.3％浓度；SOD及MDA测定试剂盒，南京建成生物工程研究所制；无水乙醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠等均为市售分析纯。

按每组6只、雌雄兼有，随机将实验犬分为5组：①假手术组；②缺血模型组；③本发明制剂大剂量组：按6.0g生药/kg的剂量iv给药；④本发明制剂小剂量组：按3.0g生药/kg的剂量iv给药；⑤本发明制剂口服组：按6.0g生药/kg的剂量自十二指肠给药。

动物称重后，以3.5％的戊巴比妥钠1ml/kg静脉注射麻醉后，分离右侧股动、静脉，股动脉插管并以肝素生理盐水液导与压力换能器相连，由多导生理记录仪记录动脉收缩压(SAP)及舒张压(DAP)，并根据公式：平均动脉压(MAP)＝舒张压+脉压差/3，求出MAP；股静脉插管以生理盐水(NS)静脉滴注，保持滴速约10滴/min，并于此插管滴注药物。颈部切口，分离出右颈外静脉并穿线；行气管插管，正压人工呼吸。开胸，小心剪开心包膜，做心包摇篮。在左冠状动脉前降支中上1/3处将动脉游离一小段，并穿0号丝线以备结扎，假手术组只穿线不结扎；自颈外静脉插管至冠状窦以备采取冠状静脉血标本。在动物四肢皮下插入针状电极，描记标准II导联心电图，记录心率。

动物手术后稳定15min，待血压、心率等指标稳定后，记录血压和心率，选择梗塞区附近8个标测点，并在远离梗塞区选一对照点，用八道生理记录仪描记并记录心外膜心电图(EECG)等，作为药前值，然后由右侧股静脉按组别分别给药。各静脉给药组均将药液混入100ml的0.9％氯化钠注射液中由股静脉快速静脉滴注给药，假手术组及缺血模型组滴注相同容积的NS，10min左右滴完，口服组则将药液直接注入十二指肠内。结扎冠脉后15min及给药后30、60、120、180min复测上述各指标。统计各标测点EECG的ST段与结扎前抬高的差值Δ∑ST以及ST段比结扎前抬高≥2mV的标测点数ΔNST。在给药前、给药后60min、120min及180min时分别采集冠状窦静脉血标本。实验结束后立即取出心脏，吸干净血液后称取全心重量，沿房室沟剪去心房及大血管，称取心室重量，将心室置冰箱冷冻室内冷冻约30min后沿冠状面将心室横切成厚度基本相等的5片，置于临用前配置的0.25％的NBT液，37℃水浴中染色10min，剪去各心肌片被染色的非梗塞区心肌，将未染色的梗塞区心肌以滤纸吸干水份后称重，除以心室重即得到梗塞范围占心室重的百分比。

血液标本以3000rpm的速度离心10min分离出血浆，置于-20℃冷冻保存待测CPK-MB、LDH、SOD及MDA，其中CPK-MB及LDH由日立-7060型全自动生化分析仪进行测定；SOD的测定采用快速比色法，MDA采用硫代巴比妥酸法测定，测定方法均按试剂盒说明书进行，加样处理完毕后分别以蒸馏水调零、在550nm、532nm波长处用53WB型UV/VIS紫外/可见光分光光度计测定各样本吸光度，按说明书提供的计算方法求得各样本的SOD或MDA含量。

各实验组均与缺血模型组进行二样本均数比较的t-检验统计学分析，部分指标还进行了给药前后的自身配对t-检验统计学分析。对心肌梗塞范围(以心肌梗塞区重量占心室重量的百分率表示)的影响：心肌梗塞区重量百分比按下式计算：

心肌梗塞区重量百分比(％)＝梗塞区重量(g)/心室重量(g)×100％

实验结果见下面的表，由表可见，模型组梗塞心肌重量占心室重的12.3％，而本发明制剂大剂量组、小剂量组心肌梗塞重量百分比分别比模型组明显降低，均具有显著性差异(P＜0.05～0.01)。口服组与模型组比较，无显著性差异(P＞0.05)。

表9本发明制剂对麻醉犬冠状动脉结扎所致心肌梗塞范围的影响( x±s)

体重心重心室重梗塞重梗塞重/心室重

组别

(kg) (g) (g) (g) (％)

假手术组 9.4±1.9 52.3±10.5 48.9±9.8 0 0

模型组 8.8±2.0 49.8±11.4 47.0±10.7 5.8±1.3 12.3±1.6

大剂量组 9.6±1.3 58.0±9.5 53.9±9.2 2.6±0.5^** 4.8±1.3^**

小剂量组 8.4±1.9 50.7±7.5 46.8±7.5 2.7±0.8^** 5.8±2.6^**

口服组 8.9±1.4 56.5±9.6 52.1±8.8 5.9±1.2 11.7±3.0

注：与模型组比较，^*：P＜0.05，^**：P＜0.01，下同。

心肌缺血后血压和心率的变化见下面的表，无论结扎前或结扎后不同时间点，所测得假手术组及各给药组动物的SAP、DAP、MAP及HR与缺血模型组之间均未见显著性差异。各组结扎后不同时间点SAP、DAP、MAP及HR与其自身结扎前结果比较，本发明制剂大剂量组在结扎冠脉后15min时的SAP低于该组结扎前的值；口服给药组的DAP(在给药后30、60min)及MAP(在给药后60min)也低于结扎前，均具有显著性差异(P＜0.05>，其余各组则均未见显著性差异。

表10：麻醉犬冠脉结扎后收缩压的变化( x±s，mmHg)

结扎后给药后给药后给药后给药后

组别结扎前 15min 30min 60min 120min 180min

假手术组 116.3±12.1 115.5±11.9 115.2±10.6 110.3±11.0 115.5±13.1 118.0±9.4

模型组 119.5±11.4 115.7±19.1 112.0±18.3 112.7±17.8 117.0±15.0 117.0±15.0

大剂量组 125.0±3.3 115.8±6.6^△ 127.7±12.8 127.7±10.3 129.8±20.5 138.7±29.3

小剂量组 120.0±19.1 108.3±16.0 112.0±20.2 115.0±14.4 120.2±17.6 122.8±11.3

口服组 130.8±10.9 132.5±7.4 123.8±16.3 120.3±13.0 127.7±16.6 119.7±21.0

注：与该组结扎前比较，△：P＜0.05，△△：P＜0.01，下同。

表11：麻醉犬冠脉结扎后舒张压的变化( x±s，mmHg)

结扎后给药后给药后给药后给药后

组别结扎前

15min 30min 60min 120min 180min

假手术组 68.5±12.3 65.3±13.1 67.0±12.7 63.7±14.4 66.3±12.3 66.2±14.2

模型组 69.3±16.7 60.0±22.9 57.5±21.9 59.2±24.4 68.0±24.1 64.2±24.1

大剂量组 68.2±11.3 60.7±14.0 62.5±12.0 61.7±14.3 63.3±10.7 69.3±8.8

小剂量组 64.3±17.2 59.8±15.8 52.2±15.7 51.0±12.8 60.8±14.5 64.5±8.7

口服组 83.3±15.4 72.8±10.5 61.0±16.8^△ 62.7±10.7^△ 69.8±11.2 70.7±12.8

表12：麻醉犬冠脉结扎后平均动脉压的变化( x±s，mmHg)

结扎后给药后给药后给药后给药后

组别结扎前

15min 30min 60min 120min 180min

假手术组 85.2±10.3 82.5±10.7 83.2±10.1 79.3±10.9 82.7±9.4 83.0±9.5

模型组 85.5±13.1 78.5±19.5 75.7±19.8 76.5±20.3 83.2±20.4 80.0±21.4

大剂量组 86.5±9.1 78.8±10.6 84.2±11.8 83.7±11.7 85.7±9.1 92.3±6.9

小剂量组 82.8±17.2 76.0±15.4 72.0±16.5 71.2±12.5 80.8±14.9 84.5±9.4

口服组 107.7±27.9 92.7±6.0 82.3±15.9 80.2±11.3^△ 89.2±12.0 87.2±15.2

表13：麻醉犬冠脉结扎后心率的变化( x±s，次/min)

结扎后给药后给药后给药后给药后

组别结扎前 15min 30min 60min 120min 180min

假手术组 164.0±17.1 167.0± 166.2± 167.7±19.4 172.7± 169.5±19.9

模型组 176.7±27.6 185.3± 182.8± 183.8±27.2 178.3± 179.2±31.5

大剂量组 171.5±20.9 175.7± 185.7± 189.8±18.4 186.7± 191.3±25.3

小剂量组 161.7±36.6 153.2± 165.5± 165.8±30.1 164.0± 164.0±24.1

口服组 181.5±26.8 183.5±37.5 185.3±27.2 191.0±24.5 198.2±34.7 193.2±40.3

心外膜心电图Δ∑ST及ΔNST的变化见下面的表。由表可见，模型组在结扎冠脉及滴注NS后各检测点的Δ∑ST及ΔNST均比假手术组显著增高，P＜0.05～0.01。本发明制剂大、小剂量组的Δ∑ST与模型组比较均有明显的降低，P＜0.05～0.01。表明给药后实验犬的心肌缺血症状明显缓解。

本发明制剂小剂量组和本发明制剂组的ΔNST均明显低于模型组(P＜0.05～0.01＝，大剂量组比模型组也有降低，但仅在给药后120min时有统计学差异，P＜0.05。表明给药后心肌缺血的范围明显缩小。口服组的Δ∑ST、ΔNST在给药后与模型组比较也有明显的降低。

表14：麻醉犬冠脉结扎后心外膜心电图Δ∑ST的变化( x±s，mV)

结扎后给药后给药后给药后给药后

组别 15min 30min 60min 120min 180min

假手术组 11.83±7.38^** 7.42±5.55^** 8.83±4.12^** 15.67±15.76^* 6.92±3.23^**

模型组 67.25±13.50 79.58±19.53 70.50±19.27 60.33±18.13 49.83±20.58

大剂量组 48.00±32.30 45.92±32.61^* 49.20±24.12 32.33±21.61^* 26.83±19.67

小剂量组 25.25±17.53^** 31.83±32.56^* 39.08±25.47^* 25.58±22.92^* 24.92±17.14^*

口服组 51.17±21.47 45.17±19.45^* 42.17±22.65^* 42.83±27.88 33.58±27.13

表15：麻醉犬冠脉结扎后心外膜心电图ΔNST的变化( x±s，点数)

结扎后给药后给药后给药后给药后

组别 15min 30min 60min 120min 180min

假手术组 2.33±1.86^** 1.67±1.37^** 2.00±1.27^** 2.67±2.16^** 1.33±1.03^**

模型组 8.00±0.83 8.00±0.00 7.83±0.41 7.50±1.05 6.83±1.72

大剂量组 5.50±3.02 5.83±2.64 6.00±2.61 4.83±2.40^* 4.50±2.88

小剂量组 4.17±3.06^* 4.00±2.83^** 5.33±2.34^* 4.00±3.41^* 4.33±2.73

口服组 6.67±1.63 6.33±1.21^** 6.33±1.21^* 5.50±2.07 4.83±2.86

超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量的改变见下表，由表可以看出，SOD活力单位为每毫升血清中抑制率达50％所对应的SOD量为一个亚硝酸盐单位(NU/ml)。给药后60min(即结扎冠脉75min)后，模型组的SOD活性均比假手术组及结扎前有明显降低(P＜0.01)，直至给药后180min时各组仍是这样。本发明制剂大、小剂量组及口服组SOD活性均高于模型组，其中大剂量组在给药后60、120min，小剂量组在给药后120min有统计学差异，P＜0.05～0.01；口服组的SOD活性在给药后180min也明显升高，P＜0.05。

表16：麻醉犬冠脉结扎后SOD的变化( x±s，NU/ml)

组别结扎前给药后60min 给药后120min 给药后180min

假手术组 95.1±10.3 92.4±6.9^** 89.0±1.1^** 89.1±1.7^**

模型组 96.0±11.7 30.2±11.4^△△ 21.6±11.7^△△ 23.5±12.0^△△

大剂量组 96.8±8.0 59.7±10.5^**△△ 56.2±1 7.7^**△△ 36.1±24.5^△△

小剂量组 101.5±9.6 41.3±21.0^△△ 45.0±18.4^*△△ 32.2±22.4^△△

口服组 97.6±12.6 39.2±28.6^△△ 41.9±33.3^△△ 57.6±25.5^*△△

丙二醛的含量以nmol/ml表示，除口服组血清MDA含量在给药后3小时高于该组结扎前水平外，其余各组在给药后均无明显变化，详见下表。

表17：麻醉犬冠脉结扎后血清MDA含量的变化( x±s，nmol/ml)

组别结扎前给药后60min 给药后120min 给药后180min

假手术组 4.95±2.05 5.38±1.70 4.85±1.69 4.23±0.63

模型组 5.3 6±0.45 4.76±1.75 5.10±1.70 5.74±1.86

大剂量组 5.70±2.59 4.88±1.23 5.39±0.88 5.59±1.57

小剂量组 3.99±2.05 4.77±1.56 5.64±2.52 3.72±1.61

口服组 3.77± 4.55±2.02 4.20±2.05 5.42±1.18^△

血清CPK-MB及LDH活性的改变见下表。血清CPK-MB在结扎冠脉后均有升高，在给药后180min时，模型组比该组结扎前升高达102.2％(P＜0.01)。本发明制剂小剂量组酶活性升高较少，与结扎前比，P＞0.05。MLN大剂量组的CPK-MB在给药120min后则明显升高，与结扎前比，P＜0.05。口服组的CPK-MB在给药60min后即明显升高(与结扎前比，P＜0.01。表明本发明制剂可以抑制血清CPK-MB的升高，说明麻醉犬的心肌缺血症状得到缓解。

血清LDH的变化则不甚明显，仅有本发明制剂口服组在给药后180min时明显高于该二组结扎前水平(P＜0.05)，具有显著性差异。假手术组的血清CPK-MB及LDH活性未见明显的改变。

表18：麻醉犬冠脉结扎后CPK-MB的变化( x±s，u/L)

组别结扎前给药后60min 给药后120min 给药后180min

假手术组 587.0±247.9 571.8±195.8 491.3±131.3 534.5±132.8^**

模型组 535.8±84.1 791.8±272.6 761.7±297.6 1083.5±379.9^△△

大剂量组 453.5±155.1 620.3±153.5 680.8±100.2^△ 886.7±323.4^△

小剂量组 496.5±215.0 496.7±185.7 653.2±225.7 766.2±353.5

口服组 422.0±68.6^* 871.2±268.7^△△ 583.8±95.6^△△ 898.2±267.4^△△

表19：麻醉犬冠脉结扎后LDH的变化( x±s，u/L)

组别结扎前给药后60min 给药后120min 给药后180min

假手术组 338.3±304.9 348.2±244.2 25 3.3±170.0 275.7±167.4

模型组 265.7±141.5 196.7±90.3 340.3±311.5 249.7±153.0

大剂量组 247.0±192.7 198.3±74.9 300.8±168.9 335.7±171.2

小剂量组 145.5±107.2 137.5±72.8 171.3±64.6 227.3±123.8

口服组 184.3±105.9 234.7±90.2 339.0±231.5 391.0±140.9^△

与缺血模型组比较，本发明制剂可明显降低犬心肌梗塞区重量，减少缺血区范围；还可明显降低Δ∑ST和ΔNST，说明实验犬的心肌缺血症状明显缓解，心肌缺血的范围明显缩小。本发明制剂给药后能明显抑制血清SOD的下降，同时有抑制血清CPK-MB升高的趋势。表明本发明制剂对冠脉结扎所致的麻醉犬心肌缺血具有改善作用。实验结果显示静脉给药对麻醉犬心肌缺血的改善作用要优于十二指肠给药。

实施例12 本发明制剂对对实验性大鼠脑缺血的保护作用

取健康SD大鼠，观察本发明制剂静脉注射给药后，对不完全性脑缺血大鼠脑梗塞重量、脑含水量、毛细血管通透性及脑组织超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化脂质的分解产物丙二醛(MDA)含量等方面的影响。

本发明制剂粉针剂F-1：含生药20g/g。甲酰胺溶液：苏州正兴化工研究所生产，分析纯。依文思蓝：中国医药(集团)上海化学试剂公司进口分装，用前以蒸馏水配制成2.5％溶液备用。氯化硝基四氮唑蓝(NBT)：前进试剂厂产品，用前以磷酸盐缓冲液(pH7.6)配制成0.3％浓度。SOD及MDA测定试剂盒：购自南京建成生物工程研究所。无水乙醇、冰乙酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠等均为市售分析纯。53WB型UV/VIS紫外/可见光分光光度计：上海光学仪器厂生产；JY-92-2D型超声波细胞粉碎机：宁波新芝科器研究所生产。

本发明制剂对急性不完全性脑缺血模型大白鼠脑梗塞体积及脑组织SOD和MDA含量的影响：SD大鼠70只，雌雄兼用，雌性未孕，体重255.3±44.5g，随机分为6组，每组10只。动物称重后以戊巴比妥钠30mg/kg ip麻醉后背位固定，分离出双侧颈总动脉，稳定5min后一并结扎之，造成急性不完全性脑缺血模型，假手术组动物只分离而不结扎动脉。结扎后30min从舌下静脉注入治疗药物或NS，口服组则在结扎前30min以灌胃方式给药。药物剂量为：本发明制剂高、中、低剂量组分别为18、9和4.5g生药/kg，口服组药物剂量为18g生药/kg。其中高剂量组和口服组药物用浓度为3.6g/ml的药液，中剂量组药物用浓度为1.8g/ml的药液，低剂量组所用药物为浓度1.8g/ml的药液(用NS稀释)；给药体积均为5ml/kg，NS组注射相同体积的NS。结扎后3h放血处死动物，开颅取脑，剔除嗅脑、小脑及脑干，从中线剖开前脑，滤纸吸干水份后分别称量脑湿重后待处理。

脑梗塞重量的测定：采用NBT染色法，脑组织称重后沿冠状面将其切成厚度相同的5片，将其置于临用前以磷酸盐缓冲液配制的0.3％NBT染料中37℃温育10min，正常脑组织染成棕黑色，梗塞脑组织为淡红色。将梗塞区脑组织切下并称重，计算梗塞区重量占湿重的百分比，以此反映梗塞区体积的大小。

SOD及MDA的测定：脑组织加0.9％氯化钠10ml在冰浴条件下用超声波细胞粉碎机匀浆，超声时间1秒，间隔1秒，连续破碎2min，匀浆液3500rpm离心10min后取上清液置-20℃保存待测SOD及MDA。SOD的测定采用快速比色法；MDA采用硫代巴比妥酸法测定。测定方法按试剂盒说明书，加样处理完毕后分别以蒸馏水调零、在550nm、532nm波长处以53WB型UV/VIS紫外/可见光分光光度计测定各样本吸光度，按说明书提供的计算方法求得各样本的SOD或MDA含量，并分别换算成SOD：NU/g脑湿重；MDA：nmol/g脑湿重的表示单位。

本发明制剂对急性不完全性脑缺血模型大白鼠脑指数、脑含水量及毛细血管通透性的影响：SD大鼠70只，雌雄兼用，体重264.9±38.9g，随机分为7组，每组10只。参照文献(中草药，1999；30(1)，p.40～50)的方法，动物称重后以戊巴比妥钠30mg/kgip麻醉后背位固定，分离出双侧颈总动脉，从舌下静脉注入2.5％依文思蓝50mg/kg，5min后结扎双侧颈总动脉，造成急性不完全性脑缺血模型，假手术组动物只分离而不结扎动脉。结扎后30min从舌下静脉注入治疗药物或NS(动物分组及给药剂量、方法同上)；结扎3h后放血处死动物，开颅取脑，称量全脑湿重后，剔除嗅脑、小脑及脑干，从中线剖开前脑，滤纸吸干水份后分别称量湿重后待处理。

脑指数的计算：称取全脑湿重后按以下公式计算脑指数：

脑指数＝全脑湿重(mg)×100/体重(g)

脑含水量的测定：将其中一半脑组织称取湿重后置110℃烤箱中15h烘至恒重后称取干重，按以下公式计算脑含水量：

脑含水量＝(湿重mg-干重mg)/湿重mg×100％

脑依文思蓝含量的测定：取另一半已称取湿重的脑组织，将其浸泡于5ml甲酰胺溶液中，剪成4小块，置45℃恒温箱中温育72h，待脑组织中色素全部浸出，取色素液用分光光度计在620nm处进行比色，以甲酰胺溶液调零，读取各标本色素液吸光度，根据标准曲线计算出脑内依文思蓝的含量，以μg/g脑湿重表示。

实验结果均与模型组比较进行二样本均数比较的t-检验统计学分析。实验结果见下表.

对脑梗塞体积的影响：结果显示，本发明制剂无论在高、中、低剂量下及口服时均可降低脑梗塞体积，其梗塞体积分别仅有NS组的55.3％、63.4％、60.3％和66.2％，均具有显著性差异，P＜0.01，详见表20。

缺血脑组织SOD和MDA含量的改变：NS组脑组织SOD活性比假手术组明显下降，P＜0.05，表明脑缺血后SOD活性明显降低。本发明制剂高、中剂量组大鼠的SOD水平与模型组比较明显升高，P＜0.05～0.01，低剂量组及口服组脑组织SOD活性与NS组比较略有增高，但无统计学显著性差异。大、中、小剂量组与假手术组比较也无统计学差异(P＞0.05)，表明其维持在正常水平。各组脑组织MDA含量均无明显差异(详见下表21)。

表20：本发明制剂对缺血大鼠脑梗塞体积的影响(％)

剂量动物数体重梗塞体积

组别

g·kg^-1 (只) (g) (％)

假手术组 / 10 237.1±25.0 0

NS组 / 10 253.9±56.3 25.79±6.15

18 10 262.2±42.3 14.25±3.28^**

本发明 9 10 278.2±57.4 16.33±3.47^**

制剂 4.5 10 256.5±45.3 15.55±4.44^**

18(口服) 10 244.1±30.3 17.07±4.71^**

注：与NS组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01，下同。

表21：本发明制剂对缺血大鼠脑组织SOD及MDA含量的影响

剂量动物数 SOD MDA

组别

g·kg^-1 (只) (NU/g湿重) (nmol/g湿重)

假手术组 / 10 3290.6±277.8^* 15.31±4.32

NS组 / 10 2970.0±286.4 14.37±3.84

18 10 3402.4±230.6^** 18.05±4.26

本发明 9 10 3280.0±206.8^* 15.43±6.89

制剂 4.5 10 3089.9±228.4 17.64±5.81

18(口服) 10 3035.2±327.2 12.34±1.11

本发明制剂对缺血后脑含水量及脑指数的影响：比较各组间脑指数值均无显著性差异(均为P＞0.05)。但NS组脑含水量则均高于其它各组(均为P＜0.01)，说明经药物治疗后可降低缺血脑组织的脑含水量，使其维持在正常水平，见表22。

缺血脑组织依文思蓝含量的改变：根据所得的依文思蓝含量的标准曲线直线回归方程和各标本甲酰胺液的吸光度求得其脑组织中依文思蓝含量。从表22可见，仅有本发明制剂高剂量组脑组织依文思蓝含量低于NS组(P＜0.01)。中、小剂量组与NS组无明显差异，而口服给药组含量甚至还高于NS组(P＜0.01)。

表22：本发明制剂对缺血大鼠脑指数、脑含水量及脑依文思蓝含量的影响

组别	剂量体重脑含水量脑依文思蓝含量脑指数g·kg^-1 (g) (％) (μg/g脑湿重)
组别	剂量体重脑含水量脑依文思蓝含量脑指数g·kg^-1 (g) (％) (μg/g脑湿重)	假手术组	/ 264.8±26.9 0.61±0.04 79.24±1.87^** 3.61±1.02
NS组	/ 269.3±60.0 0.68±0.10 82.13±0.62 4.17±0.55	假手术组	/ 264.8±26.9 0.61±0.04 79.24±1.87^** 3.61±1.02
NS组	/ 269.3±60.0 0.68±0.10 82.13±0.62 4.17±0.55	本发明制剂	18 259.9±32.5 0.68±0.07 79.99±0.83^ 3.37±0.67^9 265.4±32.4 0.70±0.12 79.58±1.67^ 4.10±0.684.5 258.0±41.4 0.72±0.14 80.32±0.81^ 3.76±0.7418(口服) 283.3±43.0 0.66±0.14 77.81±2.22^ 5.35±0.95^

实验结果表明，本发明制剂给药后可以减少不完全性脑缺血所造成的脑梗塞体积。脑局部缺血后，SOD活性有明显降低，本发明制剂可以抑制SOD活性的降低，从而保持其活力。此外，本发明制剂在高、中、低剂量时均可降低缺血脑组织的含水量，大剂量时还可降低脑毛细血管的通透性，这些作用均与其降低脑梗塞范围的作用有关。iv给药组的作用略优于同样剂量的口服组。

Claims

1、一种治疗心脑血管疾病的药物制剂，采用金银花、怀牛膝、玄参、石斛为原料，通过包括以下步骤的方法制得：

(3)取第(2)步中用第一低元醇沉淀后的所得沉淀部分加水溶解，再用第二低元醇沉淀，取沉淀加水溶解，超滤纯化得怀牛膝、玄参及石斛第二有效部分；

2、根据权利要求1所述的制剂，其特征在于所述原料的配比为金银花2～8份、怀牛膝3～7份、玄参3～8份及石斛2～5份。

3、根据权利要求1所述的制剂，其特征在于所述的第(1)步骤中所述的提取剂是甲醇、乙醇、异丙醇、丙二醇、和/或丙酮；所述的第一萃取剂是甲酸乙酯、醋酸乙酯、氯仿和/或二氯乙烷。

4、根据权利要求1所述的制剂，其特征在于所述的第(2)步骤中所述的第一低元醇是甲醇、乙醇、异丙醇和/或丙二醇；所述的第二萃取剂是戊二醇、正丁醇、氯仿、环己烷、甲苯和/或乙醚。

5、根据权利要求1所述的制剂，其特征在于所述的第(3)步骤中所述的第二低元醇是乙醇、异丙醇和或丙二醇；所述的超滤用截留分子量为3000和20000的膜分别进行超滤纯化。

6、根据权利要求1所述的制剂，其特征在于所述的第(4)步骤中所述的渗透压调节剂是葡萄糖、氯化钠、果糖和/或木糖；所述赋型剂是甘露醇、乳糖和/或甘氨酸。

7、一种治疗心脑血管疾病的药物制剂，采用金银花、怀牛膝、玄参、石斛为原料，通过包括以下步骤的方法制得：

(1)、金银花用乙醇提取，提取液用水沉淀，除去滤液中乙醇；用醋酸乙酯萃取，除去萃取液中醋酸乙酯，得金银花有效部分；

(2)、怀牛膝、玄参、石斛用水提取，加乙醇沉淀；除去滤液中乙醇，用正丁醇萃取，除去萃取液中正丁醇，得怀牛膝、玄参、石斛的第一有效部分；

(3)、取第(2)步中乙醇沉淀后过滤所得沉淀部分加水溶解，再用乙醇沉淀，取沉淀，加水溶解，超滤纯化得怀牛膝、玄参、石斛第二有效部分；

8、一种制备治疗心脑血管疾病的药物制剂的方法，采用金银花、怀牛膝、玄参、石斛为原料，包括以下步骤：

9、一种治疗心脑血管疾病的药物制剂，采用金银花、怀牛膝、玄参、石斛为原料，按照金银花2～8份、怀牛膝3～7份、玄参3～8份、石斛2～5份的配比，通过包括以下步骤的方法制得：

(1)、金银花加6～12倍量的55～85％的乙醇提取2～4次，合并提取液，浓缩至每1ml相当于含生药0.7～1.5g；加水使含醇量达35～65％，冷藏，过滤，除去乙醇；用醋酸乙酯萃取3～6次，合并萃取液，除去醋酸乙酯，得金银花有效部分；

(2)、怀牛膝、玄参、石斛加水6～12倍量，煎煮提取2～4次，合并提取液，浓缩至每1ml相当于含生药0.5～1.5g；加乙醇沉淀使含醇量达45～85％，冷藏，过滤；取滤液除去乙醇，用正丁醇萃取3～6次；合并萃取液，除去正丁醇，得怀牛膝、玄参、石斛的第一有效部分；

10、根据权利要求1、7或9所述的制剂在制备治疗缺血性中风及冠心病心绞痛药物的用途。