CN1554358A - 二丁酰环磷腺苷钙制剂及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于药物制剂技术领域。本发明提供了二丁酰环磷腺苷钙的制剂。本发明的制剂经临床证实对治疗冠心病有显著疗效，用药安全、无不良反应，并且起效快，有较好的应用价值。本发明提供了制备方法。

Description

二丁酰环磷腺苷钙制剂及制备方法

技术领域

本发明属药物制剂技术领域。具体涉及二丁酰环磷腺苷钙原料及制剂的制备方法。

背景技术

二丁酰环磷腺苷钙是一种新型的核苷酸类的衍生物，它作为G蛋白耦联型受体药物，在肌体内起着重要的作用，G蛋白是一类存在于细胞膜内侧的调节蛋白，是由三个不同的亚单位α、β、γ组成的三聚体，它具有调节GTP酶活性，激活磷酸脂酶C(PLC)，调节Ca2+、K+等离子通道，对鸟苷酸环化酶也有激活作用，介导多种效应，近来还发现G蛋白还介导激活磷脂酶A2(PLA2)而产生花生四烯酸(AA)，因此，作为G蛋白耦联型受体的二丁酰环磷腺苷钙在体内自然也起着重要的作用，在临床上用于治疗冠心病。蛋白功能失调可以表现为功能增强或下降，可以导致某些心血管疾病如：心绞痛、心肌梗塞、心肌炎、心源性休克、免疫遗传性疾病如：红斑狼疮、银屑病、传染性疾病和肿瘤如：肝炎、急性白血病等。而二丁酰环磷腺苷钙可以治疗因G蛋白功能失调引起的各种疾病。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于克服上述不足之处，设计一种二丁酰环磷腺苷钙的新剂型。

本发明提供了一种二丁酰环磷腺苷钙的注射剂，所述的注射剂包括粉针剂或水针剂，其中粉针剂由二丁酰环磷腺苷钙水溶液直接冻干或二丁酰环磷腺苷钙于其他药用辅料溶解混合后冻干获得；水针剂由二丁酰环磷腺苷钙和其他药用辅料组成的pH5-7.5的制剂。

本发明优选的二丁酰环磷腺苷钙粉针剂的配方组成为：二丁酰环磷腺苷钙5mg-300mg、甘露醇5mg-20mg、右旋糖苷1mg-20mg、注射用水适量构成100％的组成；

优选的水针剂配方组成为：二丁酰环磷腺苷钙5-300mg pH5-7.5、适量的等渗溶液、抗氧剂等。

本发明所述的等渗溶液为0.1-0.9％氯化钠；所述抗氧剂为亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、L-或D-抗坏血酸或谷胱甘肽。

本发明的二丁酰环磷腺苷钙制剂的临床研究情况如下：

二丁酰环磷腺苷钙对冠心病疗效的初步观察(附93例分析)

上海第二医学院附属第三人民医院冠心病小组

目前在临床上治疗冠心病的药物虽多，但其疗效均不够理想，因此，进一步探索新的有效药物，很有必要。我们用二丁酰环磷腺苷钙治疗93例冠心病患者，根据初步临床观察，取得一定成效。观察总结如下：

病例选择

93例中，男51例，女42例；年龄为39-83岁，平均为48岁，93例心绞痛患者中21例伴有心肌梗塞(其中13例为急性，8例为陈旧性)；25例伴有高血压。

观察方法

所用二丁酰环磷腺苷钙(N6-2′-O-Dibatyryl Adenosine3′5′Monophosphate简称为DBC)为淡黄色结晶粉末，每支为5～100毫克，(上海第一生化药业有限公司制)。

用法：以每支5-100毫克溶于生理盐水2毫升中，作肌肉注射，每日二次，或以5-100毫克加于生理盐水10-20毫升中作静脉推注，每日二次；或以5-100毫克溶于5％葡萄糖溶液500毫升中，作静脉滴注，每日一次。在治疗过程中同时口服氨茶硷(作为磷酸二酯酶抑制剂)0.1克，每日三次。治疗时间以15天为一个疗程，最长者达六个疗程。

治疗前后观察项目，包括症状、血压、血脂(主要为胆固醇、甘油三酯等)及心电图等变化。个别患者在给药后半小时及2小时分别作心电图，以观察用药后的短期疗效。

结果

症状的改变：93例有心绞痛胸闷症状的病例中，治疗后属显效者19例(20.4％)改善有64例(68.8％)，无效者10例(10.8％)，有效率为89.2％。

本发明的另一目的是提供了上述二丁酰环磷腺苷钙的制备方法，该方法包括下列步骤：

原料：

(1)制备季铵盐：

环磷腺苷C-AMP加入三乙胺使之溶解，然后加入无水吡啶在30-70℃减压抽去吡啶，干燥得C-AMP三乙胺盐；

(2)酰化

取C-AMP三乙铵盐，加入无水吡啶和丁酐，避光反应4-10天，待完全酰化反应后，取出反应液，加入蒸馏水，水解2-3小时，然后减压浓缩，得DBC AMP；

(3)成盐

加入无水氯化钙与DBC AMP充分混匀后，浓缩至干，用无水乙醚洗涤，干燥，得二丁酰环磷腺苷钙DBC；

原料DBC-Ca工艺操作

1.CAMP-三乙胺盐的制备

正确称取含量80％以上的CAMP 12.5g(0.036M)置入1000ml的磨口圆底烧瓶中，在冰浴内边加入0.4M三乙胺溶液100ml，使CAMP全部溶解成PH为9-9.5的淡黄色透明液，此步操作均在10℃以下进行。上述溶液先室温减压抽去过剩的三乙胺直至无嗅味为止，然后量55℃水浴继续浓缩至呈黄色油状物，加入无水吡啶50ml，振摇脱水，继续在55℃减压抽去吡啶，部分油状物变白色海绵状物质。再用无水吡啶50ml重复脱水一次，再用真空于55℃减压抽干，全部物质变海绵状物。最后移入真空干燥器在五氧化二磷上干燥过夜。

2.二丁酰环磷酸腺苷钙的制备

将已干燥的CAMP-三乙胺盐，从干燥器中取出，立即加入无水吡啶375ml，再加入重蒸馏的丁酐180ml，摇动数分钟，置35-40℃的恒温箱重密闭避光反应6-7天，第一天反应必须经常摇动，使海绵状物质全部溶解约需一天。反应液随着时间延长，颜色从淡黄色至红褐色。

5天后，测定酰化反应是否完全：取反应液0.5ml，加入蒸馏水0.5ml，置冰箱中4小时，然后再取水解液5微升进行层析。假使DBC在层析纸上呈现单点(Rf0.84)，则说明酰化反应已完全。然后从恒温箱内取出反应液，如有沉淀物，则用布氏漏斗滤除，并移至冰盐浴中，冷却至10℃以下，慢慢加入蒸馏水175ml，滴加时保持温度在10℃以下。水解结束后，将水解液置冰箱2-3小时使反应完全。

将DBC水解液约700ml，倾入1000ml的蒸馏烧瓶中，然后在40℃的水浴中水泵减压浓缩，蒸馏瓶的颈部用石棉绳包扎，收集器用冰浴冷却，先蒸出300ml后，升高水浴温度至50℃，继续用水泵减压至无溶液蒸出时，停止浓缩。弃去收集器中的溶液后，改用油泵继续浓缩至80ml左右，呈红褐色的粘稠液。

将粘稠液移入500ml的分液漏斗中，加等体积乙醚，混合均匀后，再用20℃以下蒸馏水450ml分七次抽提。每次振荡2-3分钟，静置分层，收集水液层，弃去乙醚层。水液层如前一样在40℃水泵真空浓缩，直至浓缩液呈黄色糖浆状。然后加乙醚70ml共剧烈振荡数分钟，弃去乙醚层。这样重复用乙醚抽提一次。室温抽去剩余乙醚后，用乙醇10ml溶解糖浆物，加入A.R无水氯化钙3.99g(溶解于蒸馏水4.8ml和乙醇9.6ml)，充分混匀后，室温减压浓缩至干。用无水乙醇20ml溶解，至冰浴中慢慢滴加乙醚200ml析出大量淡黄色沉淀。置冰箱中数小时。沉淀物以布氏漏斗抽滤，在无水乙醚中磨细，过滤，再用无水乙醚洗涤二次。五氧化二磷真空干燥器中过夜。得淡黄色DBC·Ca·2.3H2O约20g含量60以上。在水溶液中吸收高峰为274mμ。

本发明的二丁酰环磷腺苷钙的药物能用于心血管系统疾病治疗，并能用于免疫性疾病如红斑狼疮、牛皮癣等，还能用于治疗肿瘤、抑制肿瘤细胞、提高NK活性、并具有镇痛作用。

注射用DBC-Ca的配制

将化验合格的DBC-Ca原料依据下列公式，用双蒸馏水、加适量药用辅料如甘露醇或右旋糖苷等配成溶液，无菌过滤，分装2ml、5ml安瓿或2ml、10ml西林瓶，冰冻干燥，封口即得：

“23”为每针DBC-钙的ml重量(含量折至100％)

“0.5”为每针分装时的ml数

DBC-Ca注射液的配制

将化验合格的DBC-Ca原料用双蒸馏水溶解后加适量的等渗溶液、抗氧剂，过滤，灌装，封口，高压灭菌，检漏即得。

二丁酰环磷腺苷钙

本品为二丁酰环磷腺苷钙盐含结晶水的细粉，按干燥品计算含C₁₈H₂₃O₈N₅PCa·2·3H₂O不得低于60.0％。

性状：本品为淡黄色粉末，有特殊臭，具有吸湿性，在水或乙醇中溶解，在乙醚中不溶解。

鉴别：

(1)本品的水溶液显钙盐的各种特殊反应。

(2)取本品以稀硝酸溶解后，加钼酸铵试液。加热析出黄色沉淀(PO₄≡)。

(3)取本品约20mg，加蒸馏水1-2ml溶解，加1N NaOH试液使显碱性后，加铬酸试液(取三氧化铬0.84g，加蒸馏水7ml溶解后，再缓缓加入浓硫酸4ml，混匀即得)，用玻璃棒摩擦壁管即产生很细得沉淀(腺嘌呤)。

(4)取本品约10mg，加6N HCl 5ml，微湿溶解后，加入间苯三酚约10mg，混匀，放入沸水浴中，加热约1分钟，显玫瑰红色(戊糖)。

(5)取样品10mg，加0.4M Ba(OH)₂ 1ml，100℃水解30分钟，离心去除沉淀，取上清液10微升，进行层析Rf值从原来0.86变到0.17，说明DBC还原成AMP。

检查：

PH：取本品0.1g溶解于新沸放冷的蒸馏水10ml，PH值应为3.0-5.0。

水分：本品于室温P₂O₅真空干燥至恒量，失重不超5.0％。

热原：取本品1mg/ml(折算到100％含量的溶液)，按家兔每公斤注射1ml。

含量测定：

精密称取本品10mg，溶解在1ml蒸馏水中，用血球计算管准确吸取10微升，相当于DBC·Ca·2·3H₂O 100微克，点在新华一号滤纸上，进行上行层析，纸长30cm，溶剂系统为95％乙醇∶0.5M醋酸铵＝5∶2，约15小时后，取出阴干。然后置紫外灯光下划出紫色斑点的地位，将与对照品(标准品DBC的Rf值为0.84-0.86)相对的DBC的斑点剪下，放入试管，并加入0.01N HCl 5ml，摇匀，室温放置1小时，用分光光度计274mμ处测定其光密度值，计算含量。

作用与用途：

本品是CAMP的衍生物，是调节细胞功能的第二信使物质，有舒张平滑肌，扩张血管的作用，用于冠心病的心绞痛，心肌梗塞及心原性休克，并能改善风湿性心脏病的心悸、气急和胸闷等症状。能缓解白血病，是一种新型G蛋白耦联型受体药物，可治疗因G蛋白功能失调导致得心血管疾病、遗传性疾病、传染性疾病和肿瘤等，对治疗牛皮癣也有一定疗效。

用法与用量：

肌肉或静脉注射，每次5-300mg。对治疗牛皮癣的剂量，遵医嘱适当增加。

贮藏：避光凉处置藏。

制剂：注射用二丁酰环磷腺苷钙规格分别为每针5mg、10mg、20mg、50mg、100mg、150mg、300mg。

注射用二丁酰环磷腺苷钙检验规格

本品为二丁酰环磷腺苷钙盐的灭菌粉末，含C₁₈H₂₃O₈N₅PCa·2·3H₂O应为标示量的85-115％。

性状：本品的性状与二丁酰环磷腺苷钙相同。

鉴别：照二丁酰环磷腺苷钙项下的鉴别法试验，显相同的反应。

检查：

澄清度：取本品2支，注意开启，避免玻璃屑落入容器内，分别加蒸馏水2ml，缓缓旋动，溶解后，不得有易见的异物。

PH值：取本品1支溶解于新沸放冷的蒸馏水2ml中，PH值应为3.0-5.0。

干燥失重：取本品，置P₂O₅真空干燥器中，干燥至恒量，减失重量，不得过7.0％。

无菌试验：照无菌检查法检查。

热原：取本品1支溶解于氯化钠注射液20ml中，按家兔每公斤注射1ml。

含量测定：按照二丁酰环磷腺苷钙项下含量测定法测定，应符合标示量的规定。

作用与用途：

本品是3’，5’环化腺苷酸的衍生物，是调节细胞功能的第二信使物质，有舒张平滑肌，扩张血管的作用，用于冠心病的心绞痛，心肌梗塞，及心原性休克，并能改善风湿性心脏病的心悸、气急和胸闷等症状。能缓解白血病，是一种新型G蛋白耦联型受体药物，可治疗因G蛋白功能失调导致得心血管疾病、遗传性疾病、传染性疾病和肿瘤等，对治疗牛皮癣也有一定疗效。

用法与用量：本品5-300mg用氯化钠注射液溶解后，作肌肉注射或静脉推注；或将本品溶解于葡萄糖注射液作静脉滴注。

二丁酰环磷腺苷钙注射液检验规格

本品为二丁酰环磷腺苷钙灭菌注射液，含C₁₈H₂₃O₈N₅PCa·2·3H₂O，应为标示量得85-115％。

性状：本品为无色或几乎无色的澄明液体。

鉴别：照二丁酰环磷腺苷钙项下的鉴别法试验，显相同反应。

检查：

PH值：应为3.0-5.0

无菌试验：照无菌检验法检查

热原：按家兔每公斤注射1ml

含量测定：照二丁酰环磷腺苷钙项下含量测定法测定，应符合标示量的固定。

其它：应符合中国药典2000版注射剂项下有关的各项规定

作用与用途：

本品是3’，5’环化腺苷酸的衍生物，是调节细胞功能的第二信使物质，有舒张平滑肌，扩张血管的作用，用于冠心病的心绞痛，心肌梗塞，及心原性休克，并能改善风湿性心脏病的心悸、气急和胸闷等症状。能缓解白血病，是一种新型G蛋白耦联型受体药物，可治疗因G蛋白功能失调导致的心血管疾病、遗传性疾病、传染性疾病和肿瘤等，对治疗牛皮癣也有一定疗效。

用法与用量：本品5-300mg，作肌肉注射或静脉推注；或将本品加入葡萄糖注射液或生理盐水注射液中静脉滴注。

具体实施方式

实施例1水针剂

取二丁酰环磷腺苷钙1000mg(干品)，用注射用水80ml溶解后加0.9％浓度氯化钠溶液、亚硫酸氢钠5mg，加注射用水至100ml，pH调节至5.0-7.5，过滤、灌装、封口、高压灭菌、检漏、灯检，得成品50瓶。

实施例2

取二丁酰环磷腺苷钙5g(干品)，用注射用水2L溶解后加0.9％浓度氯化钠溶液及硫代硫酸钠12.5mg，然后加注射用水至2.5L，pH调节至5.0-7.0，过滤、灌装、压塞、高压灭菌、检漏、灯检，得成品50瓶。

实施例3粉针剂

取化验合格的DBC-Ca原料2.5g，加甘露醇100mg、右旋糖苷450mg，加蒸馏水80ml溶解，调节pH至5.0-7.5，稀释至100ml，过滤，分装至5ml西林瓶，冷冻干燥、压塞、检漏得成品50瓶。

实施例4

取化验合格的DBC-Ca原料1g，加甘露醇50g、右旋糖苷450mg，加蒸馏水20ml溶解，调节pH至5.0-7.5，稀释至25ml，过滤，分装至2ml安瓿瓶，冷冻干燥、封口、检漏得成品50支。

Claims (8)

1、一种二丁酰环磷腺苷钙的注射剂，其特征在于该注射剂为粉针剂或水针剂。

2、一种如权利要求1所述的二丁酰环磷腺苷钙的注射剂，其特征在于其中所述的粉针剂由二丁酰环磷腺苷钙水溶液直接冻干或二丁酰环磷腺苷钙与其他药用辅料溶解混合后冻干获得。

3、一种如权利要求1所述的二丁酰环磷腺苷钙的注射剂，其特征在于其中所述的水针剂由二丁酰环磷腺苷钙和药用辅料组成的pH5-7.5的制剂。

4、一种如权利要求1或2所述的二丁酰环磷腺苷钙的注射剂，其特征在于其中所述的粉针剂的配方组成为：二丁酰环磷腺苷钙5mg-300mg、甘露醇5mg-20mg、右旋糖苷1mg-20mg、注射用水适量构成100％的组成；

5、一种如权利要求1或3所述的二丁酰环磷腺苷钙的注射剂，其特征在于其中所述的水针剂配方组成为：二丁酰环磷腺苷钙5-300mgpH5-7.5、适量的等渗溶液、抗氧剂等。

6.一种如权利要求1所述的二丁酰环磷腺苷钙的注射剂的制备方法，其特征在于该方法包括下列步骤：

1)原料：

(1)制备季铵盐：

环磷腺苷C-AMP加入三乙胺使之溶解，然后加入无水吡啶在30-70℃减压抽去吡啶，干燥得C-AMP三乙胺盐；

(2)酰化

取C-AMP三乙铵盐，加入无水吡啶和丁酐，避光反应4-10天，待完全酰化反应后，取出反应液，加入蒸馏水，水解2-3小时，然后减压浓缩，得DBC AMP。

(3)成盐

加入无水氯化钙与DBC AMP充分混匀后，浓缩至干，用无水乙醚洗涤，干燥，得二丁酰环磷腺苷钙；

2)制剂：

二丁酰环磷腺苷钙水溶液直接冻干或二丁酰环磷腺苷钙与其他药用辅料溶解混合后冻干获得粉针剂；或

二丁酰环磷腺苷钙与适量等渗溶液、抗氧化剂、注射用水构成100％的组成，PH值范围在5.0-7.5之间，配制成水针剂。

7.一种如权利要求6所述的二丁酰环磷腺苷钙的注射剂的制备方法其特征在于其中所述的等渗剂为0.1-0.9％氯化钠。

8、一种如权利要求6所述的二丁酰环磷腺苷钙的注射剂的制备方法其特征在于其中所述的抗氧化剂为亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、L-或D-抗坏血酸或谷胱甘肽。