CN1546129A - 桂枝茯苓组合物的制备工艺及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种桂枝茯苓组合物新的制备工艺。并提供了桂枝茯苓组合物在治疗前列腺增生和乳腺增生的药物中的应用。在本发明制备工艺中,一种制备工艺采用牡丹皮单提,茯苓的提取投料量:细粉量优选比例为10%-30%∶70%-90%;另一种制备工艺采用多次醇提与水提相结合的方法。制备工艺稳定、可行,成品的丹皮酚含量均比原工艺高。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药组合物的制备工艺及其用途,特别是涉及一种桂枝茯苓组合物的制备工艺及其用途。
背景技术
桂枝茯苓丸出自张仲景的《金匮要略》,是中医临床常用传统名方,由桂枝,茯苓,丹皮,桃仁,芍药5味药组成,现代常用为大蜜丸,记载于《中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂》第一册,具有活血化淤,缓消肿块的功能。现有桂枝茯苓丸的改良剂型,其制备工艺在原料的浓缩过程中损失较多,浓缩的浸膏密度不利于混合,不易干燥,费工、费时,并且原料的利用率、有效成份的提取率不高。
发明内容
本发明目的在于提供一种桂枝茯苓组合物新的制备工艺。本发明另一目的在于提供桂枝茯苓组合物在治疗前列腺增生和乳腺增生的药物中的应用。
本发明目的是通过如下技术方案实现的:
具体工艺步骤如下:牡丹皮的提取方法应为药材打成粗粉2mm-1cm加水,润湿1-2小时后,流通水蒸气蒸馏提取,收集4-10倍量馏出液,冷藏静置;待析出结晶后,滤过,滤液再重蒸馏,收集2.5-3.5倍量的馏出液,冷藏静置;待析出结晶后,滤过,滤液弃去,合并两次丹皮酚结晶;阴干后粉碎成细粉,制成细颗粒,阴干,低温密闭储藏,待用;将桂枝、白芍、桃仁及处方量10%-30%的茯苓粉碎成粗粉,混匀;加入牡丹皮药渣,再加入药材3-5倍量的90%乙醇,浸泡0.5-1小时,加热回流提取1-3小时,滤过;药渣再加入原药材3-5倍量的90%7醇,回流提取1-3小时,滤过,合并滤液;药渣加入原药材5-7倍量的水,回流提取0.5-1小时,滤过;药渣再加入原药材3-5倍量的水,回流提取0.5-1小时,滤过;合并滤液,药渣弃之;醇提液和水提液分别减压浓缩,醇提液回收至无醇味;合并二浓缩液,得棕褐色粘稠膏体,相对密度在80℃为1.25;将另70%-90%处方量过100目筛的茯苓细粉与上述浸膏混匀,干燥,粉碎,烘干;加入丹皮酚细颗粒,混匀,整粒,装入胶囊,即得。
本发明桂枝茯苓组合物的制备工艺还可以是如下步骤:
取桂枝、桃仁、白芍、牡丹皮及40%-60%处方量的茯苓五味药碎成粗粉,混匀;加入70%-90%乙醇,浸泡0.5-1小时,加热回流提取1-3次,其中每次加入70%-90%乙醇的量为原药材的3-5倍,加热回流提取时间为1-3小时;滤过,合并滤液;药渣加入原药材5-7倍量的水,回流提取1-3次,其中每次回流提取时间0.5-1小时;滤过,合并滤液,药渣弃之;醇提液和水提液分别减压浓缩,醇提液回收至无醇味;合并二浓缩液,得棕褐色浸膏;将另40%-60%处方量的茯苓细粉与上述浸膏混匀,干燥,粉碎,制粒,整粒,装入胶囊,即得。
本发明桂枝茯苓组合物两种新的制备工艺其工艺稳定、可行,成品的丹皮酚含量、桂皮醛含量、芍药苷的含量均比原工艺高,提高原料的利用率、有效成份的提取率,其桂枝茯苓组合物可用于治疗前列腺增生和乳腺增生疾病。
下面实验例用于进一步说明本发明。
实验例1 不同条件下提取丹皮酚的比较
1实验方法:丹皮酚微溶于水,可随水蒸气蒸馏,冷却时又可以自馏出液中析出,同时结合有关文献,首先考察了下面三种条件下丹皮酚的得率,进行比较。
方法一、牡丹皮药材120g,加水润湿1小时后,采用流通蒸气蒸馏,收集9倍量馏出液,冷藏静置,待析出结晶后,滤过,滤液再重蒸馏,收集3倍量馏出液,冷藏静置,待析出结晶后滤过,合并两次结晶,记为A。
方法二、牡丹皮药材120g,加水润湿,再加入5%NaCL,1小时后,采用流通蒸气蒸馏,收集9倍量馏出液,冷藏静置,待析出结晶后,滤过,滤液加入上述量的NaCL再重蒸馏,收集3倍量馏出液,冷藏静置,待析出结晶后滤过,合并两次结晶,记为B。
方法三、牡丹皮药材120g,加水润湿,再加入10%NaCL,1小时后,采用流通蒸气蒸馏,收集9倍量馏出液,冷藏静置,待析出结晶后,滤过,滤液加入上述量的NaCL再重蒸馏,收集3倍量馏出液,冷藏静置,待析出结晶后滤过,合并两次结晶,记为C。
A、B、C丹皮酚结晶阴干后,置干燥器内过夜,称重,取适量按《中国药典》2000年版一部137页牡丹皮含量测定项下操作,结果如表1。
表1 牡丹皮药材提取加与不加盐的比较
项目 丹皮酚结晶重量 取样量 吸收度 丹皮酚含量 丹皮酚总量丹 皮酚提取率
结晶 g g A % g %
A 1.4858 0.00670 0.990 85.7% 1.2733 62.1
B 1.4207 0.00530 0.815 89.2% 1.2673 61.8
C 1.3818 0.00525 0.839 92.7% 1.2809 62.4
(药材按药典法测丹皮酚含量为1.71%)
2实验结果:以上三种提取方法,结晶C的丹皮酚较纯,但三种提取方法对于丹皮酚提取率相差不大,考虑到生产实际成本,采用方法一提取。即牡丹皮药材直接用流通蒸气提取,不需加盐。
实验例2 不同因素对于丹皮酚提取的影响
1选定实验因素及选取水平:对于影响牡丹皮药材提取的其它因素,本发明选定了“药材粒径”、“润湿时间”和“收集馏出液的量”等因素,同时结合生产,每个因素又选取了3个水平,见表2。
表2 因素水平表
2实验方法
按实验设计方案要求,采用L9(34)进行实验,以丹皮酚的总量为指标进行评判,结果见表3。
表3:正交试验结果表
注:①牡丹皮药材检测,丹皮酚含量为1.71%。
②本实验以1/2个处方量牡丹皮药材为实验对象。
③丹皮酚含量测定方法按《中国药典》2000年版一部137页牡丹皮含量测定项下有关规定操作。
3实验结果
表4 丹皮酚提取利用率方差分析表
方差来源 离差平方和 自由度 平均方差 F值 P值
SA 0.0137 2 0.0069 69 显著
SB 0.0015 2 0.0008 8
SC 0.0231 2 0.0116 116 特别显著
SD 0.0002 2 0.0001 1.00
F0.10(2,2)=9 F0.05(2,2)=19
由表4可知A因素有显著性差异(P<0.05),C因素有特别显著性差异(P<0.01);由表3可知,A1<A2<A3,B3<B1<B2,C1<C2<C3,所以应选择A3B2C3,但C2、C3相差不大,考虑到生产成本,本发明选用C2。即牡丹皮的提取工艺应为药材打成粗粉过10目筛,加水润湿1.5小时后,用流通蒸气蒸馏,收集7倍量馏出液,冷藏静置,待析出结晶后,滤过,滤液再重蒸馏,收集3倍量馏出液,冷藏静置,待析出结晶后滤过,合并两次结晶为所提丹皮酚结晶。
实验例3 馏出液取舍的研究
按照牡丹皮药材打成粗粉过10目筛,加水润湿1.5小时牡丹皮提取工艺,取1/2处方量的牡丹皮药材2份,进行验证,分别得丹皮酚结晶①1.5248g②1.5309g;取第一次滤液重蒸馏后剩余液、第二次滤液分别作全波长扫描,图谱峰形与丹皮酚对照品一致。
实验例4 醇提与水提工艺优选
取桂枝240g、茯苓120g、桃仁240g、白芍240g、牡丹皮240g,采用单因素考察法,以提取物中有效成分的含量为指标,对五味药材的醇提与水提工艺进行了优选。
1五味药材醇提工艺优选
桂枝中含有桂皮醛、牡丹皮中含有丹皮酚,二者皆为脂溶性有效成分。根据物质的理化性质,我们以乙醇浓度、提取次数为考察因素,以五味药材醇提物中桂皮醛及丹皮酚的含量为考核指标,经试验,优选出最佳醇提工艺。见表5、表6。
表5 乙醇浓度的优选(提取2次)
序号 | 乙醇浓度 | 桂皮醛含量(g) | 丹皮酚含量(g) |
1 | 70% | 0.24 | 0.72 |
2 | 80% | 0.41 | 1.24 |
3 | 90% | 0.62 | 1.80 |
表6 提取次数的优选(乙醇浓度为90%)
序号 | 提取次数 | 桂皮醛含量(g) | 丹皮酚含量(g) |
1 | 1次 | 0.18 | 0.65 |
2 | 2次 | 0.67 | 1.78 |
3 | 3次 | 0.70 | 1.81 |
(注:牡丹皮原药材中丹皮酚含量为1.5%,桂枝中桂皮醛含量为0.5%。)
由表5可知,选取的乙醇浓度因素中,浓度为“90%乙醇”其提取物中桂皮醛及丹皮酚为最高;表6中,提取次数对有效成分影响较大,但第二次与第三次相比,有效成分相差已较小,基本无差异,考虑到实际生产成本,优选提取次数为“2次”。通过单因素试验法,综合有效成分的含量,优选出醇提最佳工艺为“剩余的茯苓与桂枝等四味药材粉碎成粗粉,混匀,加90%乙醇提取2次”。
2水提工艺优选
白芍中含有有效成分芍药苷等水溶性有效成分。根据水溶性成分的性质,考虑到实际生产的成本,我们以水为提取溶剂,以提取次数为考察因素,以水提物中芍药苷含量为考核指标,经单因素试验表明,加水提取次数为“2次”。见表7。
表7 提取次数的优选
序号 | 提取次数 | 芍药苷的含量(g) |
1 | 1次 | 0.96 |
2 | 2次 | 2.56 |
3 | 3次 | 2.60 |
(注:白芍原药材中芍药苷含量为2.0%)
由表7可知,提取物中芍药苷的含量随着提取次数的增高而增高,但提取3次与提取2次芍药苷的含量相差已不显著,为了适应实际生产的需求,节约生产成本,优选水提取次数为“2次”。
实验例5 桂枝茯苓胶囊抗炎作用的研究
1桂枝茯苓胶囊对大鼠棉球肉芽肿的影响
受试药物:名称:桂枝茯苓胶囊
提供单位:江苏康缘药业股份有限公司
制剂、批号:桂枝茯苓浸膏粉,为棕褐色粉末.每克药粉相当于生药3.87g.批号:020420。
配制方法:临用时用蒸馏水配制成5.6%(相当于生药21.6%)、2.8%(相当于生药10.8%)和1.4%(相当于生药5.4%)的浓度。氢化考的松,扬州制药厂生产,规格5mg/m1,批号:010105
实验动物:选用成年健康SD雄性大鼠,50只,体重190±20g,由苏州大学实验动物中心提供,实验动物生产使用许可证号:SCXK(苏)2002-0021;实验动物使用许可证号:SYXK(苏)2002-0078。
实验方法:取健康SD雄性大鼠50只,随机分为5组,每组10只。分别为:正常对照组,阳性对照组(用氢化考的松肌注5mg/kg)以及桂枝茯苓胶囊大剂量组(0.56g·kg-1,相当于生药2.16g·kg-1);桂枝茯苓胶囊中剂量组(0.28g·kg-1,相当于生药1.08g·kg-1);桂枝茯苓胶囊小剂量组(0.14g·kg-1,相当于生药0.54 g·kg-1)。试验大鼠在4%水合氯醛浅麻醉下,无菌操作,将两个无菌脱脂棉球(重量10±1mg,直径6.5-8.5mm,高压灭菌)植入大鼠两侧腋窝皮下然后缝合。术后当天给药,每天一次,氢化考的松肌注0.1ml/100g体重,桂枝茯苓胶囊组灌胃1ml/100g体重,连续给药7天后,第8天脱臼处死动物,取出棉球,置60℃烤箱烘干后称重。减去原棉球重量,即为肉芽肿重量。比较各组肉芽肿重量并计算抑制率。计算抑制率的公式如下:
实验结果:大鼠给药7天后,桂枝茯苓胶囊三个剂量组对结缔组织增生均有不同程度的抑制作用。抑制率分别为26.48%,19.47%,20.25%,尤以大剂量组作用最明显(p<0.05)。同对照组相比,大剂量组的抑制作用最为明显(p<0.05)。桂枝茯苓胶囊对棉球植入大鼠体内引起的结缔组织增生有一定的抑制作用,说明桂枝茯苓胶囊具有对抗增生性炎症的作用。,结果见表8。
表8 不同剂量桂枝茯苓胶囊对大鼠棉球肉芽肿的影响(
x±SD)
组别 剂量 动物数(只) 肉芽肿重量(mg) 抑制率(%)
正常对照组 10 64.2±21.5
氢化考的松 5mg·kg-1 10 42.3±1.0** 34.11
桂枝茯苓胶囊 0.54g·kg-1 10 51.2±16.5 20.25
桂枝茯苓胶囊 1.08g·kg-1 10 51.7±8.4 19.47
桂枝茯苓胶囊 2.16g·kg-1 10 47.2±9.8* 26.48
与正常对照组相比*p<0.05;**p<0.01
2桂枝茯苓胶囊对小鼠耳廓肿胀的影响
受试药物:名称:桂枝茯苓胶囊
提供单位:江苏康缘药业股份有限公司
制剂、批号:桂枝茯苓浸膏粉,为棕褐色粉末。每克药粉相当于生药3.87g.批号:020420。
配制方法:临用时用蒸馏水配制成5.6%(相当于生药21.6%)2.8%(相当于生药10.8%)和1.4%(相当于生药5.4%)的浓度。氢化考的松,扬州制药厂生产,规格5mg/ml,批号:010105;二甲苯:苏州金诚试剂厂,批号:010110;
实验动物:选用成年健康昆明种小鼠50只,雄性,23.22±2.31g,由苏州大学实验动物中心提供,实验动物生产使用许可证号:SCXK(苏)2002-0021;实验动物使用许可证号:SYXK(苏)2002-0078。
实验方法:实验分为5组,每组10只,分别为正常对照组、阳性对照组(氢化考的松肌注10mg/kg)以及桂枝茯苓胶囊大剂量组10只(1.12g·kg-1,相当于生药4.32g·kg-1);桂枝茯苓胶囊中剂量组10只(0.56g·kg-1,相当于生药2.16g·kg-1);桂枝茯苓胶囊小剂量组10只(0.28g·kg-1,相当于生药1.08g·kg-1)。小鼠分别灌服受试药液0.2ml/10g体重,氢化考的松肌注0.02ml/10g体重,正常对照组予以等体积的蒸馏水灌胃,给药30分钟后,给致炎剂,将二甲苯0.03ml涂于小鼠右耳,左耳作为对照。2.5小时后将小鼠颈椎脱臼致死,沿耳廓基线剪下左、右耳,用直径9mm打孔器分别取下同一部位耳片,电子天平称重,每鼠右耳片重量减去左耳片重量,即为耳肿胀度,进行统计处理。
实验结果:1.08,2.16和4.32g·kg-1三个剂量的桂枝茯苓胶囊对小鼠的耳肿胀有不同程度的抑制作用。随着剂量的增加,抑制作用逐步增强,尤其是中大剂量组的桂枝茯苓胶囊抑制作用最为明显(p<0.05;p<0.01)。结果表明,三个剂量的桂枝茯苓胶囊对二甲苯引起的肿胀有抑制作用,且有一定的剂量依赖效应。见表9。
表9 不同剂量的桂枝茯苓胶囊对小鼠耳肿胀的影响(
x±SD)
组别 剂量 动物数(只) 肿胀度(mg)
正常对照组 10 18.6±3.89
氢化考的松 10mg·kg-1 10 11.2±4.47**
桂枝茯苓胶囊 1.08g·kg-1 10 15.6±5.27
桂枝茯苓胶囊 2.16g·kg-1 10 14.3±3.92*
桂枝茯苓胶囊 4.32g·kg-1 10 14.1±2.81**
与正常对照组相比 *p<0.05;**p<0.01,
实验例6 桂枝茯苓胶囊对大鼠血液流变学的影响
受试药物:名称:桂枝茯苓胶囊
提供单位:江苏康缘药业股份有限公司
制剂、批号:桂枝茯苓浸膏粉,为棕褐色粉末.每克药粉相当于生药3.87g。批号:020420。
配制方法:临用时用蒸馏水配制成5.6%(相当于生药21.6%)、2.8%(相当于生药10.8%)和1.4%(相当于生药5.4%)的浓度。
阳性药物:前列康片,浙江康恩贝制药有限公司产品,批号:020115;临用时用蒸馏水配制成17%的浓度。
丙酸睾丸素,上海第九制药厂生产,规格:25mg/ml.批号:020506;临用时用橄榄油稀释成10mg/ml浓度。
实验动物及材料:雄性SD大鼠,60只,体重237.9±30.1克,由苏州大学实验动物中心提供,实验动物生产使用许可证号:SCXK(苏)2002-0021;实验动物使用许可证号:SYXK(苏)2002-0078。
血液流变仪:北京普利生仪器中心;型号:LBY-N6
实验方法:选用健康雄性SD大白鼠60只,随机取出10只作为正常组。另50只用4%水合氯醛麻醉,在无菌条件下摘除双侧睾丸,然后缝合皮肤。一周后,将去势大鼠随机分为5组,每组10只,分别为模型组;桂枝茯苓胶囊大剂量组(0.56g·kg-1,相当于生药2.16g·kg-1);桂枝茯苓胶囊中剂量组(0.28g·kg-1,相当于生药1.08g·kg-1);桂枝茯苓胶囊小剂量组(0.14g·kg-1,相当于生药0.54g·kg-1);阳性药对照组(前列康1.7g·kg-1);实验动物分笼饲养,除正常组外,其余大鼠每日sc丙酸睾丸素(1mg/300g体重)一次,用药组同时予以灌服药液1ml/100g体重,正常组予以等体积水灌胃。大鼠每周称重一次,并调整给药量。术后7日起连续给药30日。于末次给药后4%水合氯醛(400mg/kg)麻醉,大鼠腹主动脉取血4.0ml,注入肝素处理的抗凝管,经过LBY-N6型旋转式血液流变仪测定大鼠血液流变学指标。
实验结果:给药组与模型组比较,全血粘度、全血还原粘度具有较显著性差异。桂枝茯苓胶囊大、中剂量组与模型组相比可显著降低大鼠血液粘度(P<0.05;P<0.01)。桂枝茯苓胶囊给药组可降低大鼠全血、全血还原低切,中切粘度,与模型组相比,差异非常显著(P<0.05;P<0.01)。见表10。
表10 桂枝茯苓胶囊对前列腺增生大鼠血液流变学的影响(
x±SD,n=10)
组别 剂量 全血粘度/mpas 全血还原粘度/mpas
(生药g·kg-1) 低切 中切 高切 低切 中切 高切
正常组 7.852±0.817 4.682±0.321 4.002±0.267 16.094±2.315 8.097±1.181 6.355±1.087
模型组 10.972±1.284 5.763±0.343 4.776±0.240 20.829±3.059 9.33±0.650 7.156±0.433
桂枝茯苓胶囊 2.16 9.730±0.989* 5.436±0.334* 4.559±0.280 18.299±2.271 8.542±0.978* 6.539±0.835
桂枝茯苓胶囊 1.08 9.562±1.341* 5.063±0.790* 4.232±0.764* 17.229±2.268** 7.480±1.397** 5.656±1.346**
桂枝茯苓胶囊 0.54 11.563±1.894 5.841±0.602 4.780±0.519 20.954±3.666 8.769±0.976 6.511±0.980
前列康片组 1.7 11.308±1.605 5.895±0.483 4.893±0.425 20.819±3.048 9.315±0.950 7.173±0.844
与模型组相比,*P<0.05;**P<0.01
实验例7 桂枝茯苓胶囊对雌激素造成大鼠乳腺增生模型的作用
受试药物:乳增宁:取乳增32片,用水溶解定容至100ml;桂枝茯苓胶囊大剂量:取桂枝茯苓胶囊粉29.7g,用水溶解定容至100ml;桂枝茯苓胶囊中剂量:取桂枝茯苓胶囊粉9.9g,用水溶解定容至100ml;桂枝茯苓胶囊小剂量:取桂枝茯苓胶囊粉3.3g,用水溶解定容至100ml。
试验动物:72只雌性未孕健康SD大鼠,体重180±10g,由南京中医药大学实验动物中心提供。苏动质:SCXK(苏)2002-0012。
实验方法:健康雌性未孕大鼠72只,随机分为6组,正常对照组(12只),模型组(11只),乳增宁组(1.92g/kg,11只),桂枝茯苓胶囊大剂量组(11.5g生药/kg,11只)、中剂量组(3.83g生药/kg,12只)、小剂量组(1.28g生药/kg,11只),除正常对照组外,其余各组大鼠每隔1日于前腋下交替注射苯甲酸雌二醇0.6mg/kg,共注射10次,同时分别灌胃给予各相应药物(正常对照组和模型组灌胃等体积的自来水),正常对照组则隔日注射与苯甲酸雌二醇等体积的无菌生理盐水,最后给药后24小时,球后静脉取血,分离血清,测定血清中E2、P、T、PRL水平(RIA法);取第三对乳房的乳腺,进行包埋、切片、HE染色,镜下观察其病理形态学变化,并取子宫和卵巢、胸腺及脾脏,称重并计算其脏器系数,镜下观察其病理形态学变化。
实验结果
1对乳腺组织影响的病理分级及镜下观察
乳腺病理分级:I级:乳腺小叶明显,体积增大,小叶内腺泡数量增多,导管极度扩张,腺腔内或导管内有多量分泌物;II级:乳腺小叶明显,体积增大,但无I级明显,管腔或导管扩张,腺腔内或导管内有分泌物III级:部分乳腺小叶增生,体积增大,腺腔或导管轻度扩张,腺腔内或导管内有少量分泌物;IV级(正常乳腺组织):乳腺小叶不增生,腺泡体积正常,腺腔和导管不扩张,腺腔和导管内未见明显分泌物。光镜观察结果见表11。
表11 桂枝茯苓胶囊对乳腺增生大鼠脏器系数的影响
组别 动物数n I级 II级 III级 IV级 95%置信区间
正常组 12 0 0 0 12 0.912±0.014
模型组 11 10 1 0 0 0.322±0.015**
乳增宁组 11 8 3 0 0 0.391±0.015##
大剂量组 11 6 3 2 0 0.483±0.015##
中剂量组 12 7 4 1 0 0.456±0.014##
小剂量组 11 8 2 1 0 0.402±0.015##
注:与模型组比较 #P<0.05 ##P<0.01
与正常组比较 *P<0.05 **P<0.01
由表1可见,正常组与模型组比较有显著差异,各治疗组与模型组也有显著性差异。
2对乳腺增生大鼠脏器系数的影响
表12 桂枝茯苓胶囊对乳腺增生大鼠脏器系数的影响
组别 体重(g) 胸腺系数(mg/g) 子宫卵巢系数(mg/g) 脾脏系数(mg/g)
正常组 238.7±26.0 2.24±0.47 2.42±0.78 5.95±1.61
模型组 211.9±20.6 1.63±0.56** 4.30±1.41** 6.28±1.01
乳增宁组 200.8±27.2 1.33±0.18 4.12±1.08 5.84±1.95
大剂量组 237.3±32.4 1.48±0.48 3.64±1.12 5.14±1.57
中剂量组 215.1±16.8 1.61±0.37 4.35±1.23 5.35±1.18
小剂量组 210.4±33.1 1.55±0.34 4.31±1.22 5.20±2.10
注:与模型组比较 #P<0.05 ##P<0.01
与正常组比较 *P<0.05 **P<0.01
由表12可见,正常组与模型组比较子宫系数、胸腺系数有显著差异,其中模型组的胸腺系数明显减小,而子宫卵巢系数与模型组比较明显增大,桂枝茯苓胶囊大剂量、中剂量及乳增宁组和脏器系数无显著差异。
3对乳腺增生大鼠性激素水平的影响
表13 桂枝茯苓胶囊对乳腺增生大鼠血清中性激素的影响
组别 E2(pg/ml) T(pg/ml) P(pg/ml) PRL(pg/ml)
正常组 97.55±127.37 17.73±15.93 11.76±6.95 0.87±0.38
模型组 749.05±100.92**16.70±15.61 14.62±11.40 0.87±0.42
乳增宁组 825.30±136.66 9.50±5.87 22.09±11.03 1.27±0.36##
大剂量组 844.90±113.24 12.30±11.39 27.36±5.12## 1.16±0.66
中剂量组 734.33±109.99 24.57±20.39 22.86±12.86 1.81±1.19##
小剂量组 819.08±144.47 11.90±14.82 19.83±10.34 1.96±1.40##
注:与模型组比较 #P<0.05 ##P<0.01
与正常组比较 *P<0.05 **P<0.01
由表13可见,模型组血清E2水平显著高于正常对照组,桂枝茯苓胶大剂量能升高P,与模型组比较有显著差异;乳增宁组及桂枝茯苓胶中、小剂量能升高PRL,并与模型组比较有显著性差异。
实验例8 桂枝茯苓胶囊对治疗大鼠实验性前列腺增生病理模型的实验研究受试药物:名称:桂枝茯苓胶囊
提供单位:江苏康缘药业股份有限公司
制剂、批号:桂枝茯苓浸膏粉,为棕褐色粉末.每克药粉相当于生药3.87g.批号:020420。
配制方法:临用时用蒸馏水配制成5.6%(相当于生药21.6%)、2.8%(相当于生药10.8%)和1.4%(相当于生药5.4%)的浓度。
阳性药物:前列康片,浙江康恩贝制药有限公司产品,批号:020115;临用时用蒸馏水配制成17%的浓度。
丙酸睾丸素:上海第九制药厂生产,规格:25mg/ml.批号:020506;临用时用橄榄油稀释成10mg/ml浓度。
实验动物:SD大鼠,雄性,60只,体重237.9±30.1,由苏州大学实验动物中心提供。实验动物生产使用许可证号:SCXK(苏)2002-0021;实验动物使用许可证号:SYXK(苏)2002-0078。
实验方法:选用健康雄性SD大白鼠60只,随机取出10只作为正常组。另50只用4%水合氯醛麻醉,在无菌条件下摘除双侧睾丸,然后缝合皮肤。一周后,将去势大鼠随机分为5组,每组10只,分别为模型组;桂枝茯苓胶囊大剂量组(0.56g·kg-1,相当于生药2.16g·kg-1);桂枝茯苓胶囊中剂量组(0.28g·kg-1,相当于生药1.08g·kg-1);桂枝茯苓胶囊小剂量组(0.14g·kg-1,相当于生药0.54g·kg-1);阳性药对照组(前列康1.7g·kg-1);实验动物分笼饲养,除正常组外,其余大鼠每日sc丙酸睾丸素(1mg/300g体重)一次,用药组同时予以灌服药液1ml/100g体重,正常组予以等体积水灌胃。大鼠每周称重一次,并调整给药量。术后7日起连续给药30日。于末次给药后1h处死动物,取前列腺各叶,电子天平称湿重,容积法测前列腺体积,取左右头叶称湿重并在37℃烘干后称干重,计算重量系数(即每100g大鼠体重的前列腺重量或体积)。取腹叶前列腺固定于10%福尔马林液中作常规石蜡切片,HE镜检。
实验结果
1、桂枝茯苓胶囊对大鼠前列腺重量,体积的影响
桂枝茯苓胶囊各剂量组与模型组相比,可明显减轻大鼠前列腺头叶干湿重,减轻腹叶湿重,减小前列腺体积。尤以桂枝茯苓胶囊大、中剂量组效果最为明显,同模型组相比,差异非常显著(P<0.01)。见表14、15。
表14 桂枝茯苓胶囊对大鼠实验性前列腺头叶增生的影响(
x±SD,n=10)
剂量 头叶(湿重)(mg/100g体重) 头叶(干重)(mg/100g体重)
组别
(g/kg) 左 右 左 右
正常组 20.61±5.41 24.76±6.43 3.92±0.86 4.76±1.58
模型组 69.34±13.86 70.20±11.98 13.0±2.60 12.58±3.23
桂枝茯苓胶囊 2.16 47.22±8.76** 48.77±12.50** 9.27±2.44** 9.31±2.01*
桂枝茯苓胶囊 1.08 51.04±8.13** 54.15±6.90** 9.83±1.63** 9.69±1.55*
桂枝茯苓胶囊 0.54 49.97±11.46** 50.59± 12.06** 9.29±1.50** 9.58±1.74*
阳性药组 1.7 45.58±8.10** 46.96±8.23** 9.13±2.25** 9.35±1.96*
与模型组相比,*P<0.05;**P<0.01
表15 桂枝茯苓胶囊对大鼠前列腺腹叶和体积的影响(
x±SD,n=10)
组别 剂量(g/kg) 腹叶(湿重)(mg/100g体重) 体积(cm3/100g体重)
正常 111.18±26.91 0.132±0.017
模型组 270.11±49.03 0.349±0.058
桂枝茯苓胶囊 2.16 170.40±42.10** 0.187±0.093**
桂枝茯苓胶囊 1.08 204.02±34.70** 0.262±0.040**
桂枝茯苓胶囊 0.54 265.49±84.80 0.307±0.087
与模型组相比,*P<0.05;**P<0.01
2、病理镜检结果:正常组前列腺腺体排列整齐,腺腔无扩张,腺上皮呈单层柱状,腺体间可见间质。模型组显示腺体排列紧密,上皮细胞数目增加,多呈高柱状,腺上皮高度增加,形成乳头状突入腺腔内,腺腔明显扩张,内可见分泌物。桂枝茯苓胶囊小剂量组腺体排列略为紧密,腺腔内可见乳头状增生。桂枝茯苓胶囊大剂量组,中剂量组病理结果显示,腺腔扩张不明显,增生腺上皮细胞数目明显少于模型组,且低柱状上皮多见,部分趋于恢复正常,腺腔直径与腺上皮高度同模型组相比,差异非常显著(P<0.05;P<0.01)。见表16。
表16 桂枝茯苓胶囊对大鼠前列腺腺腔直径和腺上皮高度的影响(
x±SD)
组别 剂量(g/kg) 动物数(只) 腺腔直径(μm) 腺上皮高度(μm)
正常组 10 171.0±34.14 16.9±2.23
模型组 10 287.0±51.43 27.3±3.65
桂枝茯苓胶囊 2.16 10 231.0±41.22* 21.3±3.27**
桂枝茯苓胶囊 1.08 10 243.0±34.98* 23.0±4.06*
桂枝茯苓胶囊 0.54 10 254.0±39.21 24.9±4.84
阳性药组 1.7 10 239.0±32.81* 22.5±4.35*
与模型组相比,*P<0.05;**P<0.01
实验例9 桂枝茯苓胶囊对小鼠尿生殖窦植入性前列腺增生模型的影响
受试药物:名称:桂枝茯苓胶囊
提供单位:江苏康缘药业股份有限公司
制剂、批号:桂枝茯苓浸膏粉,为棕褐色粉末.每克药粉相当于生药3.87g.批号:020420。
配制方法:临用时用蒸馏水配制成5.6%(相当于生药21.6%)、2.8%(相当于生药10.8%)和1.4%(相当于生药5.4%)的浓度。
阳性药物:前列康片,浙江康恩贝制药有限公司产品,批号:020115;临用时用蒸馏水配制成17%的浓度。
实验动物:选用成年健康昆明种小鼠60只,雄性,25.41±3.16g,由苏州大学实验动物中心提供,实验动物生产使用许可证号:SCXK(苏)2002-0021;实验动物使用许可证号:SYXK(苏)2002-0078。
实验方法:选用雄性小鼠60只,腹腔注射戊巴比妥钠麻醉(3%,60mg/kg),无菌条件下沿腹正中剖开腹壁,用镊子轻轻分离前列腺腹叶,在解剖镜下植入3个16天龄胎鼠的尿生殖窦组织,缝合腹壁肌肉、皮肤,消毒,放回鼠笼。然后进行分组,正常组10只灌服等体积生理盐水,模型组10只,桂枝茯苓胶囊大剂量组10只(1.12g·kg-1,相当于生药4.32g·kg-1);桂枝茯苓胶囊中剂量组10只(0.56g·kg-1,相当于生药2.16g·kg-1);桂枝茯苓胶囊小剂量组10只(0.28g·kg-1,相当于生药1.08g·kg-1);前列康组10只(3.4g·kg-1)。所有小鼠自由饮食,于术后第3天开始灌胃给药,给药体积0.2ml/10g体重,每日一次,连续给药30天后,断髓处死小鼠,分别取前列腺各叶,睾丸和精囊腺,用电子天平称湿重。取一侧头叶称湿重并在37℃烘干后称干重,计算重量系数(即每克小鼠体重的腺体重量)另取前列腺腹叶组织固定于10%福尔马林液,送切片镜检。
实验结果
1、桂枝茯苓胶囊对小鼠前列腺重量的影响
桂枝茯苓胶囊各剂量组与模型组相比,可明显减轻小鼠前列腺头叶干湿重,减轻腹叶湿重和精囊腺重量,尤以桂枝茯苓胶囊大、中剂量组效果最为明显,同模型组相比,差异显著(P<0.05;P<0.01)。见表17。
表17 桂枝茯苓胶囊对小鼠实验性前列腺增生的影响(
x±SD,n=10)
剂量 头叶 腹叶湿重 精囊腺 睾丸
组别
(g/kg) 湿重(mg/g) 干重(mg/g) (mg/g) (mg/g) (mg/g)
正常组 0.780±0.103 0.186±0.055 0.395±0.14 3.737±1.02 6.203±1.036
模型组 1.298±0.377 0.304±0.110 0.676±0.162 5.817±0.726 4.308±1.217
桂枝茯苓胶囊 4.32 0.844±0.095** 0.166±0.027** 0.473±0.123**4.181±0.908** 5.168±1.044
桂枝茯苓胶囊 2.16 0.935±0.147* 0.196±0.053* 0.478±0.168* 4.416±0.857** 5.383±1.407
桂枝茯苓胶囊 1.08 0.937±0.175* 0.222±0.074 0.516±0.095* 4.771±0.811** 5.289±1.062
阳性药组 3.4 0.871 ±0.136**0.188±0.043** 0.489±0.157* 4.040±0.728** 6.247±0.644**
与模型组相比,*P<0.05;**P<0.01
2、病理镜检发现
正常组前列腺腺体排列整齐,腺上皮呈单层柱状,腺腔无扩张,腺体间可见间质。模型组显示腺体增生,排列紧密,伴间质组织增生,腺腔扩张,呈高柱状的上皮细胞数目增加,形成乳头状突入腺腔内。桂枝茯苓胶囊大剂量组,中剂量组镜检切片结果显示:腺腔扩张较轻;腺上皮高度、腺腔直径明显小于模型组,差别显著(P<0.05);增生腺上皮细胞数目明显少于模型组,且低柱状上皮多见;小剂量组效果不太明显,可见较多的基底细胞,间质较多。实验结果提示:桂枝茯苓胶囊可有效治疗小鼠前列腺增生。见表18
表18 桂枝茯苓胶囊对小鼠前列腺腺腔直径和腺上皮高度的影响(
x±SD)
剂量
组别
动物数(只) 腺腔直径(μm) 腺上皮高度(μm)
(g·kg-1)
正常组 10 96.7±33.47 11.5±2.99
模型组 10 152.0±20.44 17.1±4.15
桂枝茯苓胶囊 4.32 10 127.8±22.10* 13.2±3.16*
桂枝茯苓胶囊 2.16 10 131.5±19.44* 13.6±2.80*
桂枝茯苓胶囊 1.08 10 139.0±25.14 15.0±2.87
阳性药组 3.4 10 118.0±30.48* 12.8±3.08*
与模型组相比,*P<0.05
实施例1 制备桂枝茯苓组合物的工艺
1原料组成:桂枝240g,茯苓240g,牡丹皮240g,白芍240g,桃仁240g。制成1000粒。
2制备工艺:牡丹皮的提取工艺应为药材打成粗粉过10目筛,加水润湿1.5小时后,用流通蒸气蒸馏,收集5倍量馏出液,冷藏静置,待析出结晶后,滤过,滤液再重蒸馏,收集3倍量馏出液,冷藏静置,待析出结晶后滤过,合并两次结晶为所提丹皮酚结晶。阴干后粉碎成细粉,制成细颗粒,阴干,低温密闭储藏,待用;将桂枝、白芍、桃仁及处方量20%的茯苓粉碎成粗粉,混匀;加入牡丹皮药渣,再加入药材4倍量的90%乙醇,浸泡30分钟,加热回流提取2小时,滤过,药渣再加入原药材3倍量的90%乙醇,回流提取2小时,滤过;合并滤液。药渣加入原药材6倍量的水,回流提取1小时,滤过;药渣再加入原药材4倍量的水,回流提取1小时,滤过,合并滤液,药渣弃之;醇提液和水提液分别减压浓缩,醇提液回收至无醇味。合并二浓缩液,得棕褐色粘稠膏体,相对密度为1.25(80℃);将另80%处方量的茯苓细粉(100目)与上述浸膏混匀,干燥,粉碎,制粒,烘干;加入丹皮酚细颗粒,混匀,过20目筛,即得。
实施例2 制备桂枝茯苓胶囊的工艺
1原料组成:桂枝240g,茯苓240g,牡丹皮240g,白芍240g,桃仁240g。制成1000粒。
2制备工艺:牡丹皮的提取工艺应为药材打成粗粉过10目筛,加水润湿1.5小时后,用流通蒸气蒸馏,收集9倍量馏出液,冷藏静置,待析出结晶后,滤过,滤液再重蒸馏,收集3倍量馏出液,冷藏静置,待析出结晶后滤过,合并两次结晶为所提丹皮酚结晶。阴干后粉碎成细粉,制成细颗粒,阴干,低温密闭储藏,待用;将桂枝、白芍、桃仁及处方量20%的茯苓粉碎成粗粉,混匀;加入牡丹皮药渣,再加入药材4倍量的90%乙醇,浸泡30分钟,加热回流提取2小时,滤过,药渣再加入原药材3倍量的90%乙醇,回流提取2小时,滤过;合并滤液。药渣加入原药材6倍量的水,回流提取1小时,滤过;药渣再加入原药材4倍量的水,回流提取1小时,滤过,合并滤液,药渣弃之;醇提液和水提液分别减压浓缩,醇提液回收至无醇味。合并二浓缩液,得棕褐色粘稠膏体,相对密度为1.25(80℃);将另80%处方量的茯苓细粉(100目)与上述浸膏混匀,干燥,粉碎,制粒,烘干;加入丹皮酚细颗粒,混匀,过20目筛,装入胶囊中,制成1000粒,即得。每粒重0.31g,相当于原药材1.20g。
实施例3 制备桂枝茯苓胶囊的工艺
1原料组成: 桂枝240g,茯苓240g,牡丹皮240g,白芍240g,桃仁240g。制成1000粒.
2制备工艺:取桂枝、桃仁、白芍、牡丹皮及50%处方量的茯苓五味药碎成粗粉,混匀加入药材3倍量的90%乙醇,浸泡0.5小时,加热回流提取1小时,滤过;药渣再加入原药材3倍量的90%乙醇,回流提取,滤过,合并滤液;药渣加入原药材5倍量的水,回流提取0.5小时,滤过;药渣加入原药材5倍量的水,回流提取0.5小时,滤过;合并滤液,药渣弃之;醇提液和水提液分别减压浓缩,醇提液回收至无醇味;合并二浓缩液,得棕褐色浸膏;将另50%处方量的茯苓细粉与上述浸膏混匀,干燥,粉碎,制粒,烘干,过20目筛,装入胶囊中,制成1000粒,即得。每粒重0.31g,相当于原药材1.20g。
实施例4 制备桂枝茯苓片剂的工艺
1原料组成:桂枝240g,茯苓240g,牡丹皮240g,白芍240g,桃仁240g。制成1000片。
2制备工艺:取桂枝、桃仁、白芍、牡丹皮及50%处方量的茯苓五味药碎成粗粉,混匀加入药材3倍量的90%乙醇,浸泡0.5小时,加热回流提取1小时,滤过;药渣再加入原药材3倍量的90%乙醇,回流提取,滤过,合并滤液;得桂皮醛含量0.67g,丹皮酚含量1.78g;药渣加入原药材5倍量的水,回流提取0.5小时,滤过;药渣加入原药材5倍量的水,回流提取0.5小时,滤过;芍药苷的含量2.56g,合并滤液,药渣弃之;醇提液和水提液分别减压浓缩,醇提液回收至无醇味;合并二浓缩液,得棕褐色浸膏;将另50%处方量的茯苓细粉与上述浸膏混匀,干燥,粉碎,制粒,烘干,经整粒机整粒,压片,每片重0.31g,相当于原药材1.20g。
实施例5 桂枝茯苓组合物在治疗前列腺增生的药物中的应用
桂枝240g,茯苓240g,牡丹皮240g,白芍240g,桃仁240g。制成1000粒,0.31g/粒或片,患前列腺增生疾病的患者,口服,每次3粒,每日3次。
实施例6 桂枝茯苓组合物在治疗乳腺增生的药物中的应用
桂枝240g,茯苓240g,牡丹皮240g,白芍240g,桃仁240g。制成1000粒,0.31g/粒或片,患乳腺增生疾病的患者,口服,每次3粒,每日3次。
Claims (10)
1、一种桂枝茯苓组合物的制备方法,其特征在于该方法为:
取等量桂枝、茯苓、桃仁、白芍、牡丹皮五味药;牡丹皮的提取方法为药材打成粗粉2mm-1cm,加水润湿1-2小时后,流通水蒸气蒸馏提取,收集4-10倍量馏出液,冷藏静置;待析出结晶后,滤过,滤液再重蒸馏,收集2.5-3.5倍量的馏出液,冷藏静置;待析出结晶后,滤过,滤液弃去,合并两次丹皮酚结晶;阴干后粉碎成细粉,制成细颗粒,阴干,低温密闭储藏,待用;将桂枝、白芍、桃仁及处方量10%-30%的茯苓粉碎成粗粉,混匀;加入牡丹皮药渣,再加入药材3-5倍量的90%乙醇,浸泡0.5-1小时,加热回流提取1-3小时,滤过;药渣再加入原药材2-4倍量的90%乙醇,回流提取1-3小时,滤过,合并滤液;药渣加入原药材5-7倍量的水,回流提取0.5-1小时,滤过;药渣再加入原药材3-5倍量的水,回流提取0.5-1小时,滤过;合并滤液,药渣弃之;醇提液和水提液分别减压浓缩,醇提液回收至无醇味;合并二浓缩液,得棕褐色浸膏;将另70%-90%茯苓细粉与上述浸膏混匀,干燥,粉碎,制粒,烘干;加入丹皮酚细颗粒,混匀,过20-30目筛,即得。
2、如权利要求1所述桂枝茯苓组合物的制备方法,其特征在于该方法为:
取等量桂枝、茯苓、桃仁、白芍、牡丹皮五味药;牡丹皮的提取工艺应为药材打成粗粉过10目筛,加水润湿1.5小时后,用流通蒸气蒸馏,收集5倍量馏出液,冷藏静置,待析出结晶后,滤过,滤液再重蒸馏,收集3倍量馏出液,冷藏静置,待析出结晶后滤过,合并两次结晶为所提丹皮酚结晶;阴干后粉碎成细粉,制成细颗粒,阴干,低温密闭储藏,待用;将桂枝、白芍、桃仁及处方量20%的茯苓粉碎成粗粉,混匀;加入牡丹皮药渣,再加入药材4倍量的90%乙醇,浸泡30分钟,加热回流提取2小时,滤过,药渣再加入原药材3倍量的90%乙醇,回流提取2小时,滤过;合并滤液。药渣加入原药材6倍量的水,回流提取1小时,滤过;药渣再加入原药材4倍量的水,回流提取1小时,滤过,合并滤液,药渣弃之;醇提液和水提液分别减压浓缩,醇提液回收至无醇味;合并二浓缩液,得棕褐色浸膏,相对密度在80℃时为1.25;将另80%处方量的过100目茯苓细粉与上述浸膏混匀,干燥,粉碎,制粒,烘干;加入丹皮酚细颗粒,混匀,过20目筛,即得。
3、一种桂枝茯苓组合物的制备方法,其特征在于该方法为:
取等量桂枝、茯苓、桃仁、白芍、牡丹皮五味药;取桂枝、桃仁、白芍、牡丹皮及40%-60%处方量的茯苓五味药碎成粗粉,混匀;加入70%-90%乙醇,浸泡0.5-1小时,加热回流提取1-3次,其中每次加入70%-90%乙醇的量为原药材的3-5倍,加热回流提取时间为1-3小时;滤过,合并滤液;药渣加入原药材5-7倍量的水,回流提取1-3次,其中每次回流提取时间0.5-1小时;滤过,合并滤液,药渣弃之;醇提液和水提液分别减压浓缩,醇提液回收至无醇味;合并二浓缩液,得棕褐色浸膏;将另40%-60%处方量的茯苓细粉与上述浸膏混匀,干燥,粉碎,制粒,烘干,整粒,即得。
4、如权利要求3所述桂枝茯苓组合物的制备方法,其特征为在于该方法为:
取等量桂枝、茯苓、桃仁、白芍、牡丹皮五味药;取等量桂枝、桃仁、白芍、牡丹皮及50%处方量的茯苓五味药碎成粗粉,混匀;加入90%乙醇,浸泡0.5小时,加热回流提取2次,其中每次加入90%乙醇的量为原药材的3倍,加热回流提取时间为1小时;滤过,合并滤液;药渣加入原药材5倍量的水,回流提取2次,其中每次回流提取时间0.5小时;滤过,合并滤液,药渣弃之;醇提液和水提液分别减压浓缩,醇提液回收至无醇味;合并二浓缩液,得棕褐色浸膏;将另50%处方量的茯苓细粉与上述浸膏混匀,干燥,粉碎,制粒,烘干,整粒,即得。
5、一种桂枝茯苓组合物的应用,其特征在于该桂枝茯苓组合物具有活血化瘀的功能,改善全血粘度、全血还原粘度;对结缔组织增生和急慢性炎症反应具有抑制作用。
6、如权利要求5所述的桂枝茯苓组合物的应用,其特征在于该桂枝茯苓组合物在治疗前列腺增生的药物中的应用。
7、如权利要求6所述的桂枝茯苓组合物的应用,其特征在于该桂枝茯苓组合物能控制前列腺腺腔组织扩张,降低增生腺上皮高度,减轻前列腺各叶重量及精囊腺重量,抑制结缔组织增生,降低血液粘滞度。
8、如权利要求5所述的桂枝茯苓组合物的应用,其特征在于该桂枝茯苓组合物在治疗乳腺增生的药物中的应用。
9、如权利要求8述的桂枝茯苓组合物的应用,其特征在于该桂枝茯苓组合物能影响乳腺增生的脏器系数,升高血清中催乳素、孕酮水平,对抗雌激素水平,抑制乳腺增生。
10、权利要求5-9述的桂枝茯苓组合物的应用,其特征在于该桂枝茯苓组合物可制成口服制剂,其口服制剂可选自于片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂、滴丸、口服液体制剂当中的一种。
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