CN1534010B - 丹参的水溶性提取物及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了由药用原料丹参分离得到的水溶性提取物,其提取制备方法及其用途。该水溶性提取物包含有丹参酚酸B、丹参素、原紫草酸三种丹参酚酸在内的丹参酚酸成分,并且其中所说的丹参酚酸成分的总重量比例为10-90%。该丹参水溶性提取物在制备血管紧张素转换酶抑制剂类药物、治疗高血压病、治疗高血压伴心力衰竭、治疗高血压伴糖尿病肾病的药物中的用途。
Description
技术领域
本发明涉及的是一种药用原料的提取物及其制备方法和用途。具体地说,是由药用原料丹参得到的水溶性酚酸提取物,该提取物的提取制备方法,及以该提取物作为有效药用成分的血管紧张素转换酶抑制剂药物,可作为治疗高血压、心力衰竭、糖尿病肾病等疾病的药物。
背景技术
丹参为唇形科植物丹参的干燥根茎,是临床常用中药。丹参的化学成分主要由脂溶性成分和水溶性成分两部分组成,其中脂溶性成分以丹参酮为代表,药理临床研究证实此类成分具有良好的生理活性。据《中药现代研究与应用》(第二卷)(郑虎占主编,学苑出版社出版,p1099-1110)报导,自二十世纪八十年代以来,不少学者对丹参的水溶性成分进行了系统研究,分离得到丹参酚酸A、B、C、D,丹参酚,丹参酸甲、乙、丙、原儿茶酸、丹参素、原紫草酸等多种酚酸类化学成分。《中草药现代研究》(第二卷)(中医医学科学院药物研究所编著,北京医科大学中国协和医科大学联合出版社,p492-522)也报导,大的量药理研究表明,丹参酚酸类化合物具有较强的抗脂质过氧化、抗血栓、改善血液循环等作用,丹参酚酸A和B的活性最强,对缺血缺氧,缺血再灌注引起的心脑细胞损伤有明显保护作用。公开号为CN 1378837A的中国专利文献曾公开了丹参丹酚酸类化合物在制备抗血栓,抗血小板聚集,抗神经细胞凋亡和抗艾滋病感染的药物中的应用。公开号为CN 1242364A的中国专利文献还公开了含丹参酚酸提取物治疗消化性溃疡的应用。但目前尚未见对有关丹参酚酸提取物在对血管紧张素转换酶活性方面影响的研究报道。
现有研究表明,肾素-血管紧张素广泛存在于人体内,其中约15%存在于血液循环中,85%存在于如血管壁、心脏、中枢神经系统、肾脏等组织器官中。在高血压状态时,血液循环中过多的血管紧张素II直接引起血管收缩、血压升高,而组织中过多的血管紧张素II则可产生对组织器官长期的损伤。
血管紧张素转换酶抑制剂,是指直接针对血管紧张素转换酶为作用靶点的一类新型药物。它通过抑制血管紧张素转换酶而阻止血管紧张素I向血管紧张素II生成,减慢缓激肽的降解,升高缓激肽水平,促进一氧化氮和前列腺素生成,产生舒血管效应。血管紧张素转换酶抑制剂在降低外周血管总阻力、降低血压的同时,还能扩张冠状动脉、改善心功能;能改善肾血流量和肾小球滤过率。血管紧张素转换酶抑制剂的应用对葡萄糖代谢无不良影响,并可降低胆固醇和甘油三酯,可增加胰岛素敏感性,对尿酸代谢也无不良影响,还可利钠、利尿且无低钾低镁症。此外,血管紧张素转换酶抑制剂还具有良好的心脏保护功能,对高血压引起的心力衰竭等也有特殊的疗效。血管紧张素转换酶抑制剂不仅抑制血液循环中的血管紧张素转换酶,而且还能抑制组织中的血管紧张素转换酶,从而减少机体内血管紧张素II的过度生成,从而发挥控制血压,保护靶器官的作用。鉴于血管紧张素转换酶抑制剂作用机理的上述特点,血管紧张素转换酶抑制剂目前已作为临床治疗高血压的一类新型降压药物,不仅具有降压作用强、副作用小的疗效特点,尤其对心脏、血管和肾脏等靶器官具有良好的保护作用,适用于各种程度的高血压病的治疗,现已被世界卫生组织和我国“高血压治疗指南”列为一线抗高血压药物。此外,血管紧张素转换酶抑制剂还可以同时作为临床治疗心力衰竭、肾功能衰竭及糖尿病肾病的重要治疗药物。
众所周知,高血压、心力衰竭、糖尿病肾病是目前临床中的常见病和多发病,已是目前危害人类健康的几种主要疾病。因此,从天然药物原料中筛选研究和发现具有血管紧张素转换酶抑制活性的新药,可具有良好的临床应用价值和市场前景。
发明内容
针对上述情况,本发明首先将提供一种由药用原料丹参提取得到的水溶性酚酸提取物。进一步,本发明将提供一种得到所说该提取物的提取制备方法。在此基础上,本发明还将提供以所说的该水溶性酚酸提取物作为有效药用成分的血管紧张素转换酶抑制剂类的药物,可被用作为治疗高血压、心力衰竭、糖尿病肾病等方面疾病的药物。
本发明提供了由药用原料丹参分离得到的水溶性提取物,是由药用原料
丹参中提取得到的包含有丹参酚酸B、丹参素、原紫草酸三种丹参酚酸在内的丹参酚酸成分,其中所说的丹参酚酸成分的总重量比例为10-90%,优选的是使所说的丹参总酚酸的总重量比例为30-85%。
本发明还提供了以药用原料丹参为原料,可以采用下述的基本方法分离制取得到上述所说的水溶性提取物。
以药用原料丹参为原料分离制取水溶性提取物的方法,包括:
a、将粉碎的丹参原料用含水乙醇充分浸渍提取后,对浸渍提取得到的溶液过滤并分离除去其中的乙醇后得到剩余的水提取溶液,浓缩,再用去离子水稀释,离心,备用;
b、将a步骤处理后得到的清液再用大孔树脂进行吸附,然后依次分别用水和含水乙醇分别洗涤吸附树脂,合并洗脱液,除去溶液中的乙醇并浓缩,得到浸膏状提取物,干燥得干粉。
其中浸渍提取液以10-40%的乙醇溶液为好。浸渍时所用乙醇溶液的量为药材丹参重量5-20倍,浸渍提取1-2次,每次至少为24小时的方式。洗脱液使用的所说的该含水乙醇一般可以使用体积含量为60-80%,优选的是使用体积含量为70-75%的乙醇溶液。
在上述的提取方法中,对从所说的各含醇提取溶液中除去乙醇的操作,均可以采用常规的减压蒸馏方式进行,并得到剩余的水提取物溶液部分。
在上述方法的基础上,对于所得到的该浸膏状的提取物,还可以再经常规的真空或冷冻干燥处理后,进一步得到为干粉状的提取物。
用上述方法提取制备得到的浸膏状或干粉状的产物,即为含有所说的丹参酚酸成分的棕红色水溶性提取物,味微苦。以丹参素作为对照品,采用酚类化合物与铁氰化钾-三氯化铁为显色反应,测定其中含有所说的丹参总酚酸一般可为总重量的10-90%。其中该丹参总酚酸提取物经硅胶柱正相层析分离和结构确定,其中含有丹参素(I)、丹参酚酸B(II)、原紫草酸(III)三种酚酸类成分,化学结构式如下:
以上述所说的由药用原料丹参分离得到的含有丹参酚酸成分的水溶性提取物为有效药用成分,与药学上可接受的辅助添加性成分混合后,按相应的常规药物制剂方法,可以制备成相应的血管紧张素转换酶抑制剂类的药物。例如,与在口服制剂中可以被接受的如崩解剂、赋形剂、润滑剂、粘合剂、填充剂等常用的辅助添加成份混合后,按常规的操作方法和过程,可以制成为片剂、丸剂、胶囊剂或多种相应的缓释剂、控释剂等固体口服制剂形式的药物;与常规的增溶剂、乳化剂、润湿剂、起泡或消泡剂等表面活性剂、稀释剂、防腐剂、稳定剂、矫味剂、增稠剂等混合后,按相应的常规方法,可以制成为如水剂、糖浆等液体制剂形式的口服药物;与注射剂中常规使用的适当形式的溶剂和附加剂配合和操作,即可以制备成供肌肉注射或静脉注射用的相应粉针剂、水针剂等常规的注射型药物制剂。
本发明还提供了丹参水溶性提取物在制备血管紧张素转换酶抑制剂类药物、治疗高血压病、治疗高血压伴心力衰竭、治疗高血压伴糖尿病肾病的药物中的用途。
本发明上述所说的可作为有效药用成分使用的丹参酚酸类水提取物,其原料为天然药物丹参,药源充足,提取制备的方法简便易行。实验结果显示,以该提取物在作为血管紧张素转换酶抑制剂药物的有效活性成分,可具有较强抑制血管紧张素转换酶的作用,不仅可用于高血压的治疗,还可用于高血压伴心力衰竭及高血压伴糖尿病肾病的治疗,疗效好,毒副作用小。
显然,根据本发明的上述内容,按照本领域的普通技术知识和惯用手段,在不脱离本发明上述基本技术思想前提下,还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式,对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1是本发明丹参酚酸提取物T1对血管紧张素转换酶活性影响的测定结果。其中,图中的横坐标表示丹参提取物T1的浓度,纵坐标表示血管紧张素转换酶抑制率(%)。
图2是丹参中的不同成分及丹参酚酸提取物T1对血管紧张素转换酶活性影响的测定结果。其中,图中的横坐标表示丹参不同成分及丹参酚酸提取物T1,纵坐标表示血管紧张素转换酶抑制率(%)。
具体实施方式
实施例1 本发明丹参酚酸提取物T1的制备
取1000克丹参,经粉碎后,依次用25%乙醇浸渍,每次24小时,重复浸渍2次(浸渍时,机械搅拌浸渍液1小时)。将浸渍液合并后过滤,减压蒸馏除去乙醇,得浓缩水溶液,用去离子水稀释,离心,备用。取D-140型非极性大孔树脂装柱,将上述水溶液以20毫升/分钟的流速通过该大孔树脂柱,然后用500毫升去离子水以20毫升/分钟的流速洗柱,再用75%乙醇洗脱,合并洗脱液,减压浓缩,真空干燥,得丹参酚酸提取物T1干粉39.8克(得率约4%)。以上制备的丹参酚酸提取物,为棕红色固体物质,味微苦。采用比色法,利用酚类化合物与铁氰化钾-三氯化铁为显色反应,用丹参素作为对照品,测定其中所含丹参总酚酸为总重量的55%。
实施例2 丹参酚酸提取物抑制血管紧张素转换酶活性试验
①血管紧张素转换酶的制备
取大鼠肺组织,用10mmol/1冰磷酸钾缓冲液,清洗,切成小块,用匀浆器打成匀浆。匀浆在4℃,取5000g离心10分钟,弃沉淀。上清用上述冰磷酸钾缓冲液低温下透析过夜,每次2升,换液4次。然后于4℃,40,000g
离心40分钟,弃沉淀,上清即为酶提取物,分装,保存于-20℃备用。
②丹参酚酸提取物T1对血管紧张素转换酶活性影响的测定
取10ug/ml,50ug/ml,100ug/ml不同浓度的丹参酚酸提取物T110μl与酶提取液10μl(约含总蛋白10μg),37℃反应30分钟,设空白对照为20μl缓冲液,阴性对照为10μl缓冲液与10μl酶提取液。酶与药物充分反应后,加入时性o-phthaldialdehyde,Hippuryl-histidyl-leucine(HHL)(邻苯二醛,马尿酸-组胺酰-亮氨酸)反应液120μl(以25mmol/LNaOH配制成25mmol/L贮液,1.25×硼酸钠缓冲液0.5mol/L,含NaCl 375mmol/L,pH8.3,反应液为HHL贮液与1.25×硼酸钠缓冲液1∶4混合),37℃反应15分钟,加入1N NaOH40μl终止反应。以自动进样器避光加入20mg/mlo-phthaldialdehyde(邻苯二醛)(DMSO配制)10μl,室温避光反应10分钟,自动进样器加入3N H盐酸20μl终止反应,30分钟内用荧光检测仪测定荧光强度F,激发波长405nm,发射波长535nm,以下列公式计算抑制率。以临床使用的血管紧张素转换酶抑制剂卡托普利作为阳性参考药物,其作用浓度分别为:
结果见附图1。从图1可见,本发明本发明的丹参酚酸提取物T1具有显著抑制血管紧张素转换酶的活性,其IC50为8μg。
③丹参不同成分及丹参酚酸提取物T1对血管紧张素转换酶活性影响的测定
为比较丹参水溶性成分、丹参脂溶性成分与丹参酚酸提取物T1对血管紧张素转换酶活性的作用,分别选取丹参主要水溶性成分丹参素、原儿茶醛,丹参主要脂溶性成分丹参酮I、丹参酮IIA(四种丹参单体成分标准品均购自四川省药品检验所),以及丹参酚酸提取物T1,以上药物均配制成浓度为100ug/ml溶液,参照上述血管紧张素转换酶活性测定方法进行实验,结果见图2。结果表明,丹参酚酸提取物T1对血管紧张素转换酶活性具有显著的抑制作用,抑制率为97%;丹参水溶性成分丹参素和原儿茶醛对血管紧张素转换酶活性有一定的抑制作用,抑制率分别为64%和50%;而丹参脂溶性成分丹参酮I和丹参酮IIA对血管紧张素转换酶活性几无抑制作用,抑制率分别
仅为9%和7%。
实施例3 丹参酚酸提取物T1对肾性高血压大鼠血压的影响
造模方法:雌雄SD大鼠,体重200-220克,实验动物中心提供。腹腔注射戊巴比妥30mg/kg麻醉大鼠,在大鼠左腰侧行切口,将左侧肾脏牵拉出,分离肾动脉起始部,用0.2mm银夹夹住肾动脉,使之狭窄;并以只分离肾动脉但不用银夹狭窄肾动脉作为对照(即假手术大鼠),缝合皮肤。术后每2周测定血压一次,血压测定用RBP-1B大鼠血压计(由中日友好医院研制)测定尾动脉收缩压,每次测量时,重复三次,取平均值作为当周血压,术后5周收缩压>18kPa者视为高血压大鼠。
实验大鼠分为4组:丹参酚酸提取物T1组(以下简称丹参T1组,n=6),收缩压>18kPa,每日灌胃丹参提取物T1(500mg/kg)连续4周;阳性组(n=4),收缩压>18kPa,每日灌胃雷米普利(1mg/kg)连续4周;假手术组(n=4),收缩压<14kPa,以与药物等体积生理盐水灌胃,连续4周;模型组(n=6),收缩压>18kPa,以与药物等体积生理盐水灌胃,连续4周,分别于给药后2周、给药后4周测定大鼠血压值。结果如表1所示。
表1 丹参酚酸提取物T1对肾性高血压大鼠血压的影响
注:#P<0.05,与假手术组比较;*P<0.05,与服药前比较;**P<0.01,与服药前比较
由表1结果可见,模型组与假手术组之间血压差异显著,实验开始2周后,模型组血压由19.80±4.50kPa升至20.06±3.79kPa,4周后血压稳定维持原水平并略有升高(20.30±4.09);丹参T1组2周后血压明显下降,由18.51±1.77kPa下降到15.89±2.03kPa,二者具有显著差异,4周后下降至14.15±1.28kPa,接近假手术组血压水平,与服药前比较具有极其显著差异。
以上结果显示,丹参酚酸提取物T1对肾性高血压大鼠动物血压有明显降低作用。
实施例4 丹参酚酸提取物T1对肾型高血压所致左心室肥厚的影响
按实施例3的实验操作,实验结束后称体重(BW)并剖取心脏、用生理盐水洗净血迹,去除左、右心房和右心室,称量左心室湿重(LVWW),计算LVWW/BW比值,以此评价丹参对肾型高血压所致左心室肥厚的影响。结果如表2所示。
表2 丹参酚酸提取物T1对肾型高血压所致的左心室肥厚的影响
注:**P<0.01,与模型组比较
结果可见,肾血管性高血压模型组大鼠左心室肥厚,左心室重量与体重比值LVWW/BW为2.55±0.16,丹参T1组大鼠左心室重量与体重比值LVWW/BW为1.88±0.20,两组比值之间具有非常显著的差异(P<0.01),表明丹参酚酸提取物T1能显著减轻肾性高血压大鼠左心室肥厚。
Claims (4)
1.丹参酚酸提取物,其特征在于该提取物由如下方法制备的:
取1000g丹参,经粉碎后,依次用25%乙醇浸渍,每次24小时,重复浸渍2次,浸渍时,机械搅拌浸渍液1小时;将浸渍液合并后过滤,减压蒸馏除去乙醇,得浓缩水溶液,用去离子水稀释,离心,备用;取D-140型非极性大孔树脂装柱,将上述水溶液以20毫升/分钟的流速通过该大孔树脂柱,然后用500毫升去离子水以20毫升/分钟的流速洗柱,再用75%乙醇洗脱,合并洗脱液,减压浓缩,真空干燥,得丹参酚酸提取物干粉39.8克;以上制备的丹参酚酸提取物,为棕红色固体物质,味微苦;采用比色法,利用酚类化合物与铁氰化钾-三氯化铁为显色反应,用丹参素作为对照品,测定其中所含丹参总酚酸为总重量的55%。
2.丹参酚酸提取物的制备方法,其特征在于包括如下步骤:
取1000g丹参,经粉碎后,依次用25%乙醇浸渍,每次24小时,重复浸渍2次,浸渍时,机械搅拌浸渍液1小时;将浸渍液合并后过滤,减压蒸馏除去乙醇,得浓缩水溶液,用去离子水稀释,离心,备用;取D-140型非极性大孔树脂装柱,将上述水溶液以20毫升/分钟的流速通过该大孔树脂柱,然后用500毫升去离子水以20毫升/分钟的流速洗柱,再用75%乙醇洗脱,合并洗脱液,减压浓缩,真空干燥,得丹参酚酸提取物干粉39.8克;以上制备的丹参酚酸提取物,为棕红色固体物质,味微苦;采用比色法,利用酚类化合物与铁氰化钾-三氯化铁为显色反应,用丹参素作为对照品,测定其中所含丹参总酚酸为总重量的55%。
3.如权利要求1所述的丹参酚酸提取物在制备治疗肾性高血压药物中的应用。
4.如权利要求1所述的丹参酚酸提取物在制备治疗肾性高血压所致左心室肥厚药物中的应用。
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