CN1515592A - 微生物酶法制备低分子量岩藻多糖工艺 - Google Patents

微生物酶法制备低分子量岩藻多糖工艺 Download PDF

Info

Publication number
CN1515592A
CN1515592A CNA03112609XA CN03112609A CN1515592A CN 1515592 A CN1515592 A CN 1515592A CN A03112609X A CNA03112609X A CN A03112609XA CN 03112609 A CN03112609 A CN 03112609A CN 1515592 A CN1515592 A CN 1515592A
Authority
CN
China
Prior art keywords
enzyme
fucoidin
low weight
weight molecular
technology
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CNA03112609XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN1229393C (zh
Inventor
蔡敬民
秦松
吴克
吴茜茜
刘斌
杨本宏
潘仁瑞
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hefei College
Original Assignee
Hefei College
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hefei College filed Critical Hefei College
Priority to CN 03112609 priority Critical patent/CN1229393C/zh
Publication of CN1515592A publication Critical patent/CN1515592A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN1229393C publication Critical patent/CN1229393C/zh
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Images

Landscapes

  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明是利用微生物生产岩藻多糖酶，利用该酶进一步水解生产低分子量岩藻多糖，其工艺包括：a、以褐藻为原料，将原料粉碎、过筛后用水浸提，温度在40～100℃时，搅拌浸提6～10小时，离心去除固形物，收集滤液、浓缩，去除淀粉，乙醇分级沉淀，沉淀物冷冻干燥，得到岩藻多糖粉末；b、对上述岩藻多糖实施酶解反应；c、完毕后升温使酶活丧失；d、经凝胶色谱分子筛分离，冷冻干燥得到低分子量岩藻多糖，使得岩藻多糖酶的制备更加容易，克服了利用化学法需要高温、高压、耗能的苛刻制备条件，同时避免了化学法产生糖的聚合度大小不一、纯化难度大及得率低的缺陷；酶法降解还有利于保护一些含硫侧链基团和其它支链。

Description

微生物酶法制备低分子量岩藻多糖工艺
技术领域
本发明涉及以褐藻中的岩藻多糖为原料，利用微生物岩藻多糖酶微生物酶法制备低分子量岩藻多糖工艺。
背景技术
岩藻多糖属于异多聚碳水化合物，其主要成分是L-岩藻糖，它的线性主链是岩藻吡喃环以α-1，3-糖苷键连接而成，其中还夹杂着其他糖类，如半乳糖醛酸或葡萄糖醛酸等，因材料来源而异。该糖通常在4-0基发生硫酸化作用，也可在其他位点上，因此，该多糖属于含硫多糖。在早期的动物试验中发现岩藻多糖容易产生抗原性和明显的毒副作用，如果经过部分水解，溶液的粘度会降低，并且可以降低该糖在应用中可能产生的抗原性和毒副作用。分子量大小适度的低分子量岩藻多糖可以保持原多糖的生理活性，有些还具有特定的生理活性。低分子量岩藻多糖的生物学活性除与分子量大小有关外，还与含硫量及含硫基团位点及支链结构有关。
目前中低分子量岩藻多糖的获得多以化学降解方法(酸解法)为主，采用化学方法进行部分水解，生产条件要求苛刻(高温、高压、耗能)，产生糖的聚合度大小不一，纯化难度大，得率低。采用酶法降解，则可克服这些缺点，同时酶法降解还有利于保护一些含硫侧链基团和其它支链。岩藻多糖可以通过海洋微生物和贝类产生的岩藻多糖酶水解产生较低分子量的岩藻多糖，并进一步经过岩藻糖苷酶的水解，产生岩藻糖。日本从贝类肝胰腺中提取岩藻多糖酶来制备具有生理活性低分子量岩藻多糖获得成功，如日本学者采用扇贝肝胰腺中提取纯化的岩藻多糖酶，成功地从分子量为480000的岩藻多糖中生产出分子量在50000左右的活性岩藻多糖，但是，由于贝类加工过程中肝胰腺采集及贮存较为困难，从而造成该种酶的制备难度大，限制了其在工业化生产中的应用。
我国岩藻多糖的研究工作较少，目前仅有少数几篇文章涉及到其提取和分离过程。目前，国内外还未检索到用微生物岩藻多糖酶酶法制备低分子量岩藻多糖的报道。
技术内容
本发明所要解决的技术课题是利用微生物生产岩藻多糖酶，利用该酶进一步水解作用生产低分子量岩藻多糖。
为解决上述技术课题，本发明采用了以下技术工艺：
a、以褐藻为原料，将原料粉碎、过筛后用水浸提，温度在40～100℃时，搅拌浸提6～10小时，离心去除固形物，收集滤液、浓缩，采用α-淀粉酶去除淀粉，乙醇分级沉淀，沉淀物冷冻干燥，得到岩藻多糖粉末；
b、对上述岩藻多糖实施酶解反应，温度在30～50℃时，反应时间控制在2小时以内；
c、酶解反应完毕后升温使酶活丧失；
d、经凝胶色谱分子筛分离，冷冻干燥得到低分子量岩藻多糖。
上述的制备低分子量岩藻多糖的原料用水浸提时原料与水的浸提比为1∶7～15，浸提、过滤、浓缩后加α-淀粉酶，反应温度在40～60℃反应时间1～2hr，α-淀粉酶量控制在40Iu/ml浓缩液。
上述酶制剂是由微生物分别通过固态或液态发酵方法制得的以岩藻多糖酶为主的酶制剂；用于生产岩藻多糖酶的微生物培养基原料包括褐藻及其提取物和农业有机废料中的一种或几种。
制备岩藻多糖酶的微生物发酵温度控制在25～32℃之间，时间控制在12～48小时，再经过分离得到粗酶液。
用于生产岩藻多糖的褐藻包括多囊墨角藻、海带、羊栖菜等。
用于生产岩藻多糖的温度控制在70～90℃。
酶解反应的岩藻多糖浓度控制在≤10％。
所述的酶解反应温度在35～45℃，反应完毕后温度升至100℃使酶活丧失。
所述的酶解反应的pH值控制在pH6～pH8。所述的酶解反应中岩藻多糖酶量控制在≤40Iu/g底物。
由上述技术方案可以制备岩藻多糖分子量范围在900～50000道尔顿中的任意一段低分子量岩藻多糖，可以保持原多糖的生理活性，同时还具有特定的生理活性，本发明采用的是用微生物生产岩藻多糖酶制备岩藻多糖，即通过海洋微生物产生的岩藻多糖酶水解产生较低分子量的岩藻多糖。与现有技术相比，一方面解决了采用扇贝类制备岩藻多糖酶过程中肝胰腺难以采集及贮存、运输所遇到的困难，使得岩藻多糖酶的制备更加容易；另一方面，克服利用化学法需要高温、高压、耗能的苛刻制备条件，同时避免了化学法产生糖的聚合度大小不一、纯化难度大及得率低的缺陷；酶法降解还有利于保护一些含硫侧链基团和其它支链。
本发明公开的低分子量岩藻多糖的制备工艺中酶的生产易于控制，生产量大。
附图概述
图1是岩藻多糖酶的制备工艺流程图；
图2是低分子量岩藻多糖的制备工艺流程图。
具体实施方式
1、岩藻多糖酶的制备
岩藻多糖酶的制备参见图1，具体工艺过程如下：
①岩藻多糖酶的生产原料
用于生产岩藻多糖酶的微生物培养原料主要利用褐藻(多囊墨角藻、海带、羊栖菜等)及其抽提物和农业有机废料(麸皮)。培养基以单一或复合成分均可。
②岩藻多糖酶制剂制备
用于生产低分子量岩藻多糖的酶制剂主要是岩藻多糖酶，它可以由微生物分别通过固态或液态发酵方法来生产。温度控制在25～32℃之间，时间控制在12～48小时，再经过分离得到粗酶液。
以海洋真菌为例，较为理想的是温度控制在28℃条件下进行培养24hr，再经过分离，得到粗酶液。
各种温度和时间条件下测得的数据如下表一、二：
表一
温度    时间(hr)    酶活力(单位：Iu/g干培养基)
25℃    24          24.5
28℃    24          32.5
30℃    24          27
32℃    24          17.5
表二
温度    时间(hr)    酶活力(单位：Iu/g干培养基)
28℃    12          17.5
28℃    24          33
28℃    36          24.3
28℃    48          18
2、岩藻多糖的制备
岩藻多糖的制备参见图2，具体工艺过程如下：
①原料的加工
上述的生产原料，首先应筛选去除霉变成份，并干燥保存，再经分级粉碎后，过360目筛备用。
②岩藻多糖制备
将粉碎并过筛的原料，用水浸提，温度70～90℃时，搅拌浸提6～10小时。离心去除固形物，收集滤液，浓缩，加α-淀粉酶，反应温度在40～60℃反应时间1～2hr，α-淀粉酶量控制在40Iu/ml浓缩液，淀粉酶去除淀粉，乙醇分级沉淀。沉淀物冷冻干燥，得到岩藻多糖粉末。
上述制备岩藻多糖的原料用水浸提，温度70～90℃时，搅拌浸提6～10小时的具体实施例如表三：
表三
温度    提取时间(hr)    糖的得率
40℃    10              0.5698g/20g海带≈2.8％
60℃    8               0.5892g/20g海带≈2.9％
80℃    10              0.6823g/20g海带≈3.4％
100℃   10              0.6845g/20g海带≈3.4％
3、酶法制备低分子量岩藻多糖，参见图2。
①酶解反应
酶解反应条件为：温度40℃，pH6.5，反应时间控制在2小时内，以产物聚合度为依据。反应完毕后升温至100℃，使酶活丧失。
②低分子量岩藻多糖的制备
经凝胶色谱分子筛分离，得到不同级别的低分子量岩藻多糖，冷冻干燥得到粉末。

Claims (10)

1、一种酶法制备低分子量岩藻多糖工艺，该工艺包括以下步骤：
a、以褐藻为原料，将原料粉碎、过筛后用水浸提，温度在40～100℃时，搅拌浸提6～10小时，离心去除固形物，收集滤液、浓缩，乙醇分级沉淀，沉淀物冷冻干燥，得到岩藻多糖粉末；
b、对上述岩藻多糖实施酶解反应，温度在30～50℃时，反应时间控制在2小时以内；
c、酶解反应完毕后升温使酶活丧失；
d、酶解液经凝胶色谱分子筛分离、冷冻干燥得到低分子量岩藻多糖。
2、根据权利要求1所述的酶法制备低分子量岩藻多糖工艺，其特征在于：所述的制备低分子量岩藻多糖的原料用水浸提时原料与水的浸提比为1∶7～15，浸提、过滤、浓缩后加α-淀粉酶，反应温度在40～60℃反应时间1～2hr，α-淀粉酶量控制在40Iu/ml浓缩液。
3、根据权利要求1所述的酶法制备低分子量岩藻多糖工艺，其特征在于：上述酶制剂是由微生物分别通过固态或液态发酵方法制得的以岩藻多糖酶为主的酶制剂；用于生产岩藻多糖酶的微生物培养基原料包括褐藻及其提取物和农业有机废料中的一种或几种。
4、根据权利要求1或3所述的酶法制备低分子量岩藻多糖工艺，其特征在于：制备岩藻多糖酶的微生物发酵温度控制在25～32℃之间，时间控制在12～48小时，再经过分离得到粗酶液。
5、根据权利要求1或2所述的酶法制备低分子量岩藻多糖工艺，其特征在于：用于生产岩藻多糖的褐藻包括多囊墨角藻、海带、羊栖菜等。
6、根据权利要求1所述的酶法制备低分子量岩藻多糖工艺，其特征在于：在生产岩藻多糖过程中用水浸提褐藻时的温度控制在70～90℃。
7、根据权利要求1所述的酶法制备低分子量岩藻多糖工艺，其特征在于：酶解反应的岩藻多糖浓度控制在≤10％。
8、根据权利要求1所述的酶法制备低分子量岩藻多糖工艺，其特征在于：所述的酶解反应温度在35～45℃，反应完毕后温度升至100℃使酶活丧失。
9、根据权利要求1或8所述的酶法制备低分子量岩藻多糖工艺，其特征在于：所述的酶解反应的pH值控制在pH6～pH8。
10、根据权利要求1或3或4所述的酶法制备低分子量岩藻多糖工艺，其特征在于：所述的酶解反应中岩藻多糖酶量控制在≤40Iu/g底物。
CN 03112609 2003-01-02 2003-01-02 酶法制备低分子量岩藻多糖工艺 Expired - Fee Related CN1229393C (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN 03112609 CN1229393C (zh) 2003-01-02 2003-01-02 酶法制备低分子量岩藻多糖工艺

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN 03112609 CN1229393C (zh) 2003-01-02 2003-01-02 酶法制备低分子量岩藻多糖工艺

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1515592A true CN1515592A (zh) 2004-07-28
CN1229393C CN1229393C (zh) 2005-11-30

Family

ID=34239279

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN 03112609 Expired - Fee Related CN1229393C (zh) 2003-01-02 2003-01-02 酶法制备低分子量岩藻多糖工艺

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN1229393C (zh)

Cited By (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN100429318C (zh) * 2005-10-28 2008-10-29 大连水产学院 酶法水解褐藻制备岩藻聚糖硫酸酯的方法
CN100457783C (zh) * 2005-08-25 2009-02-04 北京市绿泉科技发展有限公司 一种海藻农用产品及岩藻多糖的生产方法
CN101012286B (zh) * 2006-11-23 2010-05-19 郑婵颖 水溶性海藻粉的制造方法
CN101999517A (zh) * 2010-10-28 2011-04-06 北京资源亚太饲料科技有限公司 低分子海藻多糖微量元素螯合物的制备方法及应用
CN102030838A (zh) * 2010-10-30 2011-04-27 中国海洋大学 海洋硫酸多糖的高压水蒸气降解法
CN102911281A (zh) * 2007-02-23 2013-02-06 巴克斯特国际公司 从海藻提取物中纯化岩藻依聚糖的工艺方法
CN106832041A (zh) * 2017-04-07 2017-06-13 安徽天安生物科技股份有限公司 一种生物酶解法提取褐藻糖胶的方法
CN107014657A (zh) * 2017-05-24 2017-08-04 合肥学院 一种快速、便捷的致密丝状菌的制片方法
CN109055460A (zh) * 2018-09-13 2018-12-21 青岛高迈生物科技有限公司 一种低分子量岩藻多糖及其在制备化妆品中的应用
CN113599302A (zh) * 2021-08-23 2021-11-05 无限极（中国）有限公司 红藻多糖作为神经酰胺表达促进剂的用途及其制备方法
CN114532500A (zh) * 2022-02-18 2022-05-27 福建农林大学 一种海带活性物质的制备方法

Cited By (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN100457783C (zh) * 2005-08-25 2009-02-04 北京市绿泉科技发展有限公司 一种海藻农用产品及岩藻多糖的生产方法
CN100429318C (zh) * 2005-10-28 2008-10-29 大连水产学院 酶法水解褐藻制备岩藻聚糖硫酸酯的方法
CN101012286B (zh) * 2006-11-23 2010-05-19 郑婵颖 水溶性海藻粉的制造方法
CN102911281B (zh) * 2007-02-23 2015-04-15 巴克斯特国际公司 从海藻提取物中纯化岩藻依聚糖的工艺方法
CN102911281A (zh) * 2007-02-23 2013-02-06 巴克斯特国际公司 从海藻提取物中纯化岩藻依聚糖的工艺方法
CN101999517B (zh) * 2010-10-28 2013-11-27 北京资源亚太饲料科技有限公司 低分子海藻多糖微量元素螯合物的制备方法及应用
CN101999517A (zh) * 2010-10-28 2011-04-06 北京资源亚太饲料科技有限公司 低分子海藻多糖微量元素螯合物的制备方法及应用
CN102030838A (zh) * 2010-10-30 2011-04-27 中国海洋大学 海洋硫酸多糖的高压水蒸气降解法
CN102030838B (zh) * 2010-10-30 2012-08-01 中国海洋大学 海洋硫酸多糖的高压水蒸气降解法
CN106832041A (zh) * 2017-04-07 2017-06-13 安徽天安生物科技股份有限公司 一种生物酶解法提取褐藻糖胶的方法
CN107014657A (zh) * 2017-05-24 2017-08-04 合肥学院 一种快速、便捷的致密丝状菌的制片方法
CN109055460A (zh) * 2018-09-13 2018-12-21 青岛高迈生物科技有限公司 一种低分子量岩藻多糖及其在制备化妆品中的应用
CN109055460B (zh) * 2018-09-13 2021-06-29 青岛创通生物科技有限公司 一种低分子量岩藻多糖及其在制备化妆品中的应用
CN113599302A (zh) * 2021-08-23 2021-11-05 无限极（中国）有限公司 红藻多糖作为神经酰胺表达促进剂的用途及其制备方法
CN113599302B (zh) * 2021-08-23 2024-04-16 无限极（中国）有限公司 红藻多糖作为神经酰胺表达促进剂的用途及其制备方法
CN114532500A (zh) * 2022-02-18 2022-05-27 福建农林大学 一种海带活性物质的制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN1229393C (zh) 2005-11-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Sun et al. High-efficiency production of Tremella aurantialba polysaccharide through basidiospore fermentation
US20150252387A1 (en) Apparatus and process for fermentation of biomass hydrolysate
CN1675368A (zh) 絮凝剂用于分离水解的发酵底物中的固体残余物的用途
CN105431534A (zh) β－1，3－葡聚糖酶、多核苷酸、重组载体、转化体、β－1，3－葡聚糖酶的制造方法、酶制剂及低分子化裸藻淀粉的制造方法
CN111978421B (zh) 一种桑树桑黄多糖及其制备和用途
CN1229393C (zh) 酶法制备低分子量岩藻多糖工艺
CN86108125A (zh) 有关从含有戊聚糖的小麦和其它谷类淀粉中生产葡萄糖浆和精制淀粉的改进
CN107312807A (zh) 一种海带来源的褐藻功能寡糖的酶解制备方法
CN112587535B (zh) 葡甘寡糖系列组合物、其制备方法及应用
CN102051395A (zh) 一种利用玉米秆制备细菌纤维素的方法
CN101168570B (zh) 海带硫酸多糖的降解方法
CN1267457C (zh) 低分子量海藻硫酸多糖的制备方法
CN113621674A (zh) 利用白酒丟糟生产l-乳酸的方法
CN1086736C (zh) 卡拉胶－魔芋多糖复配胶固定化微生物载体及其应用
Yu et al. Efficient conversion of cane molasses into Tremella fuciformis polysaccharides with enhanced bioactivity through repeated batch culture
CN107236054B (zh) 一种低分子量泡叶藻聚糖的制备方法及应用
CN1300311C (zh) 壳聚糖内切酶的制备方法
CN1488364A (zh) 一种处理芦荟凝胶、芦荟全叶凝胶和芦荟皮胶的方法及其产品芦荟多糖
CN113930358B (zh) 一种可分解海带的菌株
CN105087427A (zh) 产琼胶酶的需钠弧菌及其应用
CN1827771A (zh) 一种微生物多糖及其生产方法和应用
CN102199641A (zh) 从酶解菊芋渣中提取糖的方法
CN1478887A (zh) 一种酵母基因工程菌及β-甘露聚糖酶制剂和甘露低聚糖的生产方法
RU2785450C1 (ru) Способ получения из Ahnfeltia tobuchiensis агарозы, используемой в качестве основы питательных сред
CN116555094B (zh) 一株溶藻弧菌属多糖降解菌及其培养方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20051130

Termination date: 20170102