CN1511539A

CN1511539A - 山茱萸提取物及其制备方法和用途

Info

Publication number: CN1511539A
Application number: CNA2003101103168A
Authority: CN
Inventors: 林李; 李林; 赵玲; 张兰; 叶翠飞; 魏海峰
Original assignee: Xuanwu Hospital
Current assignee: Xuanwu Hospital
Priority date: 2002-12-30
Filing date: 2003-12-30
Publication date: 2004-07-14
Anticipated expiration: 2023-12-30
Also published as: CN100364545C

Abstract

本发明公开了山茱萸提取物及其制备方法，还公开了该提取物的药物新用途。该提取物中含有莫诺苷25－50％、马钱素25－40％。所述的新用途涉及在制备治疗缺血性血管病的药物的应用，所说的缺血性血管病包括动、静脉系统病损引起的血管痉挛、血栓形成或血管闭塞，或者所造成的器官局部循环或功能障碍。临床上主要指动脉硬化，短暂性缺血发作，各种组织器官梗塞，或周围血管缺血、闭塞等。还涉及治疗缺血性血管病的含有莫诺苷与马钱素的药物制剂。

Description

山茱萸提取物及其制备方法和用途

技术领域

本发明提供了一种山茱萸提取物，还涉及该提取物的制备方法以及该提取物的用途，属于中药领域。

背景技术

缺血性血管病主要是指动、静脉系统病损引起的血管痉挛、血栓形成或血管闭塞，造成器官局部循环和功能障碍，主要包括动脉硬化、短暂性缺血发作、各种组织器官梗塞和周围血管闭塞等。缺血性血管病是危害人类生命与健康的常见病和多发病，具有发病率高、致残率高、死亡率高和复发率高的特点，是中老年人致死和致残的主要疾病。因此，发现和研制防治缺血性血管病的药物具有重要的意义。山茱萸为补益肝肾、涩精固脱的传统中药，临床上常与其它中药配伍组成复方治疗不同疾病，但很少见有山茱萸单味药治疗疾病，尤其山茱萸提取物中有效成分的研究报告极少，国内外尚未见有该化合物防治缺血性血管病的报道。山茱萸提取物是从山茱萸科植物山茱萸Cornus officinalis果肉中提取的产物(Cornus total glycosides，山茱萸提取物)，其中主要包括莫诺苷(morroniside)、马钱素(loganin即番木鳖苷)等。本发明通过特定的提取方法提取得到山茱萸的提取物，并发明了该提取物的制药新用途。

发明内容

本发明一个目的在于提供了山茱萸的提取物及其提取方法；本发明另一个目的在于提供了山茱萸提取物的制药新用途；本发明另一个目的在于提一种新的治疗缺血性血管病的药物制剂。

本发明所述山茱萸提取物，含有莫诺苷25-50％、马钱素25-40％，二者总含量占50-90％。(以重量百分比计)

上述本发明山茱萸提取物可以用如下方法制备：

山茱萸药材用水煎煮2-4遍，加水量3-14倍，煎煮时间1-4小时；合并煎煮液，过滤后减压浓缩，过滤后冷藏备用；

将上述浓缩的山茱萸水提取液过大孔吸附树脂柱，使药液流过全柱，依次用去离子水、5％-95％乙醇进行梯度洗脱，减压浓缩成浸膏；

将大孔吸附树脂分离的浸膏用乙酸乙酯或乙醇等有机溶媒进行精制，得有效部位提取物。

或者山茱萸药材用水煎煮2-4遍，加水量3-14倍，时间1-4小时。合并煎煮液，过滤后减压浓缩，加乙醇调至醇浓度为50％-90％，冷藏12-48小时，过滤，滤液减压回收乙醇。

将上述浓缩的醇沉液过HP20大孔吸附树脂柱，再过Al₂O₃层析柱，使药液流过全柱，依次用去离子水、5％-95％乙醇进行梯度洗脱，减压浓缩成浸膏，冷冻干燥。本发明所说的山茱萸提取物，是指经过上述方法提取获得的有效部位。

有效部位的测定方法：对上述提取物制品应用薄层层析进行定性分析。并且对上述提取物制品应用高效液相色谱仪进行定量分析，色谱条件：Lichrospher-C18色谱柱，流动相甲醇-水(30∶70)，检测波长240nm，流速1.0ml/分钟。检测分析结果：莫诺苷含量占25-50％、马钱素含量占25-40％，二者总含量占50-90％(以重量百分比计)。

本发明所述的山茱萸提取物可以按药剂学方法，加入辅料制备成多种临床药物剂型，包括口服制剂或非肠道给药的剂型。所说的口服制剂选自于片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、混悬剂、滴丸、口服液体制剂中的任何一种；所说的非肠道给剂型选自于注射剂、气雾剂、栓剂或皮下给药剂型当中的一种。

所述辅料是指常规的赋形剂，如溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂、粘合剂等。

本发明公开一种治疗缺血性血管病药物制剂，其特征在于该制剂含有5-95％莫诺苷、5-95％马钱素；优选10-80％莫诺苷、10-80％马钱素；更优选20-60％莫诺苷、60-20％。该药物制剂中还可含有药学上可接受的辅料。所述的莫诺苷、马钱素均可选用市面上销售的提纯品。

辅料如蔗糖、柠檬酸、阿斯巴甜、山梨酸钾、香精、滑石粉和乳糖。本发明提取方法得到的山茱萸提取物，含量明确，经实验证明，在治疗缺血性血管病方面具有确切的疗效，可用于制备治疗缺血性心脑血管病或周围血管病等的药物。

以下实验例进一步说明本发明，但并不构成对本发明所要求保护范围的限定。

实验例1山茱萸提取物对大鼠血小板聚集性的影响

实验目的：在正常情况下，血小板以分散状态在血管内运行。但当血管损伤、血流改变或受到化学物质刺激时，血小板则发生形态改变、黏附、聚集和释放，在血栓形成中起着重要作用。血小板聚集性增高也可作为诊断高凝状态的参考指标和血栓形成的危险因子。本研究观察山茱萸提取物对大鼠血小板聚集性的影响。

实验方法：雄性SD大鼠连续灌胃给山茱萸提取物14天后，进行实验。取血前1小时给药一次，戊巴比妥钠麻醉。腹主动脉取血，3.8％枸橼酸钠抗凝(1∶9)，离心制备富血小板(PRP)及贫血小板血浆(PPP)，用上海斯隆公司MPG3E型血小板聚集仪测定ADP(1.25mmol/L)及凝血酶诱导的血小板聚集。

实验结果：山茱萸提取物具有显著降低ADP及凝血酶致血小板聚集的作用(表1)。表明该化合物有利于防治各种组织器官血管内血栓形成。

表1山茱萸提取物对大鼠血小板聚集的的影响

组别动物数最大聚集率(％)

ADP诱导凝血酶诱导

对照组 10 60.0±5.8 58.9±6.2

海得琴(阳性对照药) 9 44.1±6.6* 39.1±5.8*

山茱萸提取物0.33g/kg 9 50.7±9.5 44.6±6.7*

山茱萸提取物1g/kg 10 46.9±5.1* 37.9±9.2*

山茱萸提取物3g/kg 10 37.7±5.7* 35.8±6.5*

M±SD；*p＜0.05，与对照组相比

实验例2山茱萸提取物对小鼠断颅致急性全脑缺血模型的影响

实验目的：断颅致急性全脑缺血小鼠模型是常用的快速筛选抗脑缺血缺氧药物的模型，此模型可模拟脑内能量代谢的降低，引起神经元死亡。断颅后脑内存有的一些供能物质仍够维持一定时间的小鼠张口呼吸，所以可用张口呼吸时间来表示供能物质耗竭的时间。本研究旨在观察山茱萸提取物对小鼠急性全脑缺血模型的保护作用。

实验方法：昆明种小鼠，雌雄各半，体重18-22克。给小鼠灌胃给药每天2次，连续给药5天。于第六天上午给药1小时后断颅，用秒表记录小鼠张口连续呼吸持续时间，以两次呼吸间隔大于5秒为死亡。

实验结果：山茱萸提取物灌胃口服可延长小鼠断颅后张口呼吸的时间(表2)，表明山茱萸提取物具有拮抗脑缺血缺氧引起的能量代谢降低造成的神经细胞损伤的作用。

表2山茱萸提取物对小鼠断颅致急性全脑缺血后张口呼吸时间的影响

组别动物数张口呼吸时间(秒)

对照组 10 25.34±2.58

尼莫地平(阳性对照药) 14 28.66±1.22**

山茱萸提取物0.75g/kg 12 27.02±2.27*

山茱萸提取物1.5g/kg 13 27.62±2,00*

山茱萸提取物3.0g/kg 11 31.44±6.42**

M±SD；*p＜0.05，**p＜0.01，与对照组相比

实验例3山茱萸提取物对自由基损伤致局部组织缺血坏死小鼠模型的影响

实验目的：由氧自由基增高引起血管内皮细胞损伤，血小板聚集，形成血栓，导致局部组织缺血坏死是缺血性心脑血管病和周围血管病的共同病理变化。本实验的造模原理是将光敏物质(玫瑰红)注入小鼠尾静脉，以560nm波长的冷光源照射小鼠颅部，发生光化学反应，生成大量氧自由基，引起血管内皮细胞损伤，血小板聚集，在照射区内形成血栓，局部皮层组织缺血坏死。本研究旨在观察山茱萸提取物对自由基损伤致局部组织缺血坏死及缺血半暗区的影响。

实验方法：给小鼠灌服不同剂量山茱萸提取物，15天后造模。将光敏物质(玫瑰红)注入小鼠尾静脉，以560nm波长的冷光源照射小鼠颅部。在造模后3小时经舌静脉注入伊文斯兰染料，1小时后处死动物。处死后取脑组织制成匀浆，并以比色法测定平均脑组织的光密度。梗塞严重者，染色深，光密度大，缺血半暗区面积大。

实验结果：灌服山茱萸提取物可降低模型小鼠脑组织伊文斯兰的光密度，并减少模型小鼠缺血半暗区的面积(表3)。表明山茱萸提取物可减轻由于氧自由基增高而引起血管损伤和血栓形成，有利于防治缺血性血管病的血管损伤和组织坏死。

表3山茱萸提取物对自由基损伤诱导血管损伤及脑梗塞小鼠模型的影响

组别动物数伊文斯兰(OD值) 缺血半暗带面积

模型组 6 0.1333±0.0759 ++++

海得琴(阳性对照药) 7 0.1121±0.0441 +

山茱萸提取物0.167g/kg 6 0.1097±0.0259 ++

山茱萸提取物0.5g/kg 8 0.1072±0.0303 +

山茱萸提取物1.5g/kg 8 0.0547±0.0260* +

M±SD；*p＜0.05，与模型组相比

缺血半暗带：+，++，+++，++++代表面积依次由小到大。

实施例4山茱萸提取物对动脉闭塞致局灶性组织缺血大鼠模型的影响

实验目的：由缺血引起的胞浆钙离子浓度异常增高是缺血性心脑血管病和周围血管病的共同病理变化，钙离子增高也可引起血管收缩或痉挛。由缺血引起的胞浆钙离子浓度异常增高，可使得受钙离子调节的磷脂酶、蛋白酶、核酸内切酶等被激活导致膜磷脂分解和细胞骨架破坏，细胞产生不可逆性损伤。本研究旨在观察山茱萸提取物对缺血后胞浆内钙离子浓度的影响。

实验方法：(1)模型制作：实验大鼠于第14天给药30分钟后行腹腔麻醉，于右外耳道与右外眦连线中点作一上下的斜行切口，分离至充分暴露大脑中动脉，以浸有50％三氯化铁的滤纸条贴于大脑中动脉与大脑前静脉交叉处，30分钟后用显微镜观察大脑中动脉血流确已阻断，去滤纸，生理盐水冲洗、缝合。(2)海马细胞内钙离子荧光强度的测定：大鼠造模后24小时，断头取脑后置于人工脑脊液中，于视交叉水平切300微米厚的脑片。加入含5uM Fluo-3/AM的人工脑脊液400微升，孵育1小时后激光共聚焦显微镜测定海马区细胞内钙离子荧光强度。

实验结果：每组右侧为缺血侧，钙离子浓度比健侧(左侧)增高。左右脑钙离子浓度差值比较，模型组海马细胞内钙离子荧光强度增高较对照组明显，模型是成立的。山茱萸提取物用药组较模型组海马细胞内钙离子浓度降低(表4)。表明该化合物降低胞浆内钙离子浓度的作用有利于扩张血管和保护缺血组织，提高细胞存活率，对缺血性血管病的防治具有重要意义。

表4山茱萸提取物对缺血模型大鼠海马细胞内钙离子浓度的影响

组别动物数钙离子荧光强度差值

缺血侧健侧 (缺血侧-健侧)差值

对照组 6 47.99±26.28 36.72±6.93 11.27±22.38*

模型组 6 105.27±41.30 60.31±32.34 44.96±12.44

海得琴 4 86.02±35.10 56.15±27.30 29.88±29.13*

山茱萸提取物0.33g/kg 4 99.20±13.52 58.33±19.10 40.86±18.23

山茱萸提取物1g/kg 6 89.57±15.67 54.57±17.75 34.60±3.92*

山茱萸提取物3g/kg 6 95.22±29.42 64.40±23.44 30.82±17.39*

M±SD；*p＜0.05，与对照组相比

实验例5山茱萸提取物对双侧颈总动脉结扎大鼠模型学习记忆功能的影响

实验目的：组织器官缺血及其病理变化的结果是导致功能减退甚至丧失。长期脑缺血可造成学习记忆功能下降或血管性痴呆。本研究观察山茱萸提取物对双侧颈总动脉结扎8周后大鼠学习记忆功能的影响。

模型制备及给药：SD大鼠，腹腔注射麻醉，分离双侧颈总动脉，用1号丝线永久结扎，缝合肌肉皮肤。术前预防灌胃给山茱萸提取物2周，术后灌胃给药8周。

避暗法：检测被动回避记忆功能。采用大鼠避暗箱，于术后第8周进行实验，第一天进行训练，将大鼠放入明室中，使其进入暗室受电击2次，24小时后进行测试，记录大鼠进入暗室的次数和潜伏期，并分级。两前肢进入暗室记为1分；三前肢进入暗室记为2分；四肢同时进入暗室记为3分。结果组间比较，进行t检验。

通道式水迷宫法：于术后第8周开始训练。实验分4天进行，第1天训练2盲端2次，第2天训练3盲端2次；第3天训练4盲端2次，第4天测4盲端。每次训练时间限定在2min，超时者采用人工引导，按2min计时。每只大鼠每次训练和测试均记录到达终点的时间(到达时间)和进入盲端的次数(错误数)。以4盲端训练期到达时间和错误数的均值作为学习成绩，4盲端测试期到达时间和错误数作为记忆成绩，结果组间比较，进行t检验。

Morris水迷宫法：，于术后第8周开始训练。实验分5天进行，每天训练2次。第1天训练2次，入池位置为站台所对象限及所邻象限。于象限边1/2弧度处将大鼠头朝池壁入水。训练时间限定在2min，超时者采用人工引导，按2min计时。每只大鼠每次训练均记录游出时间、距离、搜索站台的轨迹。结果组间比较，进行t检验。

实验结果：本实验发现双侧颈总动脉长期结扎使大鼠产生学习记忆障碍。山茱萸提取物可改善模型大鼠的学习记忆，表现在可缩短水迷宫试验中的游出时间和距离、减少错误次数( 表5-7)；在避暗试验中可延长潜伏期，减少错误次数(表8)。表明山茱萸提取物可改善长期组织器官缺血导致的功能障碍。

表5山茱萸提取物对双侧颈总动脉结扎模型大鼠Morris水迷宫游出时间(秒)的影响

组别例数第二天第三天第四天

正常对照 14 25.78±23.36 12.82±15.22* 9.50±5.73*

模型 12 46.38±34.56 35.36±24.17 25.75±20.20

山茱萸提取物3g/kg 9 32.85±22.56 10.52±7.04** 16.55±10.98

M±SD，与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01

表6山茱萸提取物对双侧颈总动脉结扎大鼠模型Morris水迷宫游出距离(厘米)的影响

组别例数第二天第三天第四天

正常对照 14 532.51±485.17 307.46±382.49* 190.06±108.84*

模型 12 934.25±759.87 746.41±540.72 612.66±505.56

山茱萸提取物3g/kg 9 710.44±457.20 227.11±134.18* 366.78±251.87

M±SD，与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01

表7山茱萸提取物对双侧颈总动脉结扎模型大鼠通道式水迷宫学习记忆的影响

学习成绩(4盲端) 记忆成绩(4盲端)

组别游泳时间(s) 错误次数游泳时间(s) 错误次数

正常 59.43±16.19 1.19±0.61** 28.64±20.55** 0.39±0.77*

模型 74.41±31.02 2.92±1.83 66.33±28.85 1.83±2.02

山茱萸提(3g/kg) 63.22±36.83 2.78±2.38 35.33±24.47* 0.61±0.82*

M±SD，与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01

表8.山茱萸提取物对双侧颈总动脉结扎模型大鼠避暗实验的影响

组别例数潜伏期(秒) 错误次数分级

正常对照 14 234.64±20.04* 0.07±0.27* 0.07±0.27*

模型 12 169.75±99.34 0.92±1.31 1.17±1.59

山茱萸提取(3g/kg) 9 211.25±58.42 0.25±0.46 0.38±0.74

M±SD，与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01

实验例6山茱萸提取物对双侧颈总动脉结扎大鼠模型大脑皮层乙酰胆碱酯酶活性的影响

实验目的：脑内乙酰胆碱酯酶(AchE)是水解神经递质乙酰胆碱的酶类。AchE抑制剂可减缓乙酰胆碱的分解代谢，提高学习记忆能力。本研究观察山茱萸提取物对缺血大鼠脑组织AchE活性的影响。

实验方法：大鼠大脑皮层匀浆离心后，取上清液用生化方法测定AchE活性。

实验结果：长期脑缺血模型大鼠大脑皮层AchE活性明显增强。山茱萸提取物可明显抑制模型大鼠大脑皮层AchE活性(表9)。

表9 山茱萸提取物对双侧颈总动脉结扎模型大鼠大脑皮层AchE活性的影响

组别例数 AchE(umol/mg蛋白)

正常对照 12 0.430±0.073*

模型 8 0.623±0.189

山茱萸提取物3g/kg 6 0.329±0.077**

M±SD，与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01

实验例7山茱萸提取物对双侧颈总动脉结扎模型大鼠大脑皮层单胺氧化酶B活性的影响

实验目的：单胺氧化酶广泛分布在动物组织，主要位于细胞线粒体部分，它可催化各种单胺类使其脱氨生成相应的醛，进一步氧化成酸或使醛转化成醇再进行下一步代谢。单胺氧化酶B(MAO-B)与衰老关系密切，随增龄多种组织的MAO-B活性增高。近年来MAO-B抑制剂可用于治疗心脑血管病帕金森病、老年痴呆症和延缓衰老。本研究观察山茱萸提取物对双侧颈总动脉结扎模型大鼠大脑皮层MAO-B活性的影响。

实验方法：大鼠脑组织匀浆离心后，取上清液用生化方法测定MAO-B活性。

实验结果：双侧颈总动脉结扎大鼠大脑皮层MAO-B活性比对照组明显增高。山茱萸提取物可明显抑制双侧颈总动脉结扎模型大鼠大脑皮层MAO-B活性(表10)。

表10山茱萸提取物对双侧颈总动脉结扎模型大鼠大脑皮层MAO-B活性的影响

组别例数 MAO-B(U/mg/h)

正常对照 12 899.2±190.4*

模型 8 1214.0±230.1

山茱萸提取物3g/kg 6 851.3±263.5*

M±SD，与模型组比较：*P＜0.05

实验例8本发明所述山茱萸提取物定性分析

对本发明提取物及其制品应用高效液相色谱仪进行定量分析，色谱条件：Lichrospher-C18色谱柱，流动相甲醇-水(30∶70)，检测波长240nm，流速1.0ml/分钟。检测分析结果：

莫诺苷含量％马钱素含量％

提取物1 45 40

提取物2 35 40

提取物3 35 35

提取物4 60 25

提取物5 30 55

提取物6 28.5 35.5

实验例9莫诺苷与马钱素组合物(morroniside combined with loganin，MCL，莫诺苷占45％，马钱素占40％，药用淀粉15％的混合物)防治脑缺血缺氧的作用1.MCL提高缺血再灌注小鼠模型学习记忆能力实验方法：

昆明小鼠，体重20±2g，连续灌胃给MCL7天，末次给药后1小时用双侧颈总动脉反复夹闭再通(夹闭2次，每次15min，中间再通10min)合并尾部放血的方法建立脑缺血再灌模型。术后第7天开始进行Morris水迷宫和小鼠跳台测试，检测其学习记忆能力。

Morris水迷宫测定：Morris水迷宫主要由直径1.4m的圆形水池和自动录象及分析系统两部分组成。水深15cm，水温25℃±2℃，加适量奶粉使水呈乳白色，每只小鼠头部涂以黑色，水池上方置一射像头采集小鼠游泳轨迹，第一天训练2次，入池位置为站台所对象限及所邻象限，于象限边1/2弧度处将小鼠头朝池壁入水，120S未找到站台者，将其引致站台，放置30S引导其学习与记忆。第2、3和4天重复测试；数据采集和处理均由图像自动监视和处理系统完成。

小鼠跳台实验：测定小鼠被动回避反应。将各组小鼠分别放入反应箱中适应3min，通以36V交流电，训练5min；24h后将小鼠放于铜栅上，通电，记录小鼠第一次跳上跳台的时间(反应期)、第一次跳下的时间(潜伏期)、5min内跳下的次数(错误次数)。

实验结果：小鼠脑缺血缺氧后可出现明显的学习记忆障碍，表现为Morris水迷宫试验游出时间增加及游出距离的延长，跳台试验反应期延长及潜伏期缩短，提示MCL有改善模型小鼠学习记忆能力的作用，表现为Morris水迷宫试验游出时间及游出距离的缩短。

表11 MCL对缺血再灌注小鼠模型Morris水迷宫游出时间的影响(n＝10)

游出时间(s)

组别

第二天第三天第四天

正常对照

53.78±32.28** 56.21±23.06** 55.50±32.35**

模型(缺血缺氧)

96.75±30.82 95.54±33.17 91.27±36.00

MCL 250mg/kg

67.29±43.65* 75.73±43.87 51.72±38.34**

M±SD，与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01

表12 MCL对缺血再灌小鼠模型Morris水迷宫游出距离的影响(n＝10)

游出距离(cm)

组别

第二天第三天第四天

正常对照

825.7±510.3* 822.0±728.7** 952.4±715.2

模型组(缺血缺氧)

1153.3±657.4 1352.0±625.5 1522.7±798.8*

缺血缺氧+MCL 150mg/kg

841.7±535.9 936.7±713.4* 1046.4±553.00*

MCL 750mg/kg

652.5±522.2* 866.0±580.9* 933.2±541.0*

M±SD，与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01

表13跳台法观察MCL对缺血再灌小鼠模型学习记忆功能的影响(n＝10)

组别反应期潜伏期

正常对照

10.00±9.29* 287.00±11.29**

模型(缺血缺氧)

49.92±57.84 232.92±58.05

MCL 150mg/kg

13.09±13.37* 283.91±13.37*

MCL 750mg/kg

10.83±14.12* 287.17±14.12**

M±SD，与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01

2.MCL抑制缺血再灌小鼠模型脂质过氧化

实验方法：昆明小鼠，20±2g，随机分组后，连续灌胃给MCL7天，末次给药后1小时用双侧颈总动脉反复夹闭再通(夹闭2次，每次15min，中间再通10min)合并尾部放血的方法建立脑缺血缺氧模型。14天后，迅速断头取脑，分离脑皮层组织，用硫代巴比妥(TAB)法测定脑组织中过氧化脂质丙二醛(MDA)含量。实验结果：MCL灌服可降低缺血再灌小鼠脑组织MDA含量，表明该药可以抑制脂质过氧化(表14)，具有抗氧化作用。

表14 5-HMF对缺血再灌小鼠脑组织MDA含量的影响(n＝10)

组别 MDA(nmol/mg蛋白)

正常 2.50±0.48**

模型(缺血缺氧) 3.29±0.59

MCL 150mg/kg 2.38±0.89*

MCL 750mg/kg 2.49±0.51*

M±SD，与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01

综上所述，从山茱萸中提取获得的产物，或由莫诺苷与马钱素组成的组合物制剂，可明显降低由ADP和凝血酶诱导的血小板聚集，减轻组织器官的血管损伤，减小缺血半暗区面积，降低细胞内钙离子浓度，改善组织器官缺血缺氧后的能量和物质代谢，提高长期脑缺血动物模型的学习记忆能力，抑制乙酰胆碱酯酶和单胺氧化酶B活性；而且可明显改善缺血再灌注动物模型的学习记忆功能，抑制器官组织脂质过氧化。表明该药物制剂具有防治缺血性血管病的作用。可用于治疗动、静脉系统病损引起的血管痉挛、血栓形成或血管闭塞，或者造成各种器官局部循环和功能障碍。临床上主要用于治疗动脉硬化、缺血性心脑血管病和周围血管病等。

以下实施例均能达到上述实验例的效果。

最佳实施方式

实施例1山茱萸提取物的制备

山茱萸药材用水煎煮3遍，加水量6倍，时间2小时。合并3次煎煮液，过滤后减压浓缩，过滤后冷藏备用；取浓缩的山茱萸水提取，上HP20大孔吸附树脂柱，使药液流过全柱，依次用去离子水、30％、50％乙醇进行梯度洗脱，收集50％乙醇的洗脱液，减压浓缩成浸膏；将大孔吸附树脂分离的产物浸膏用乙醇萃取，脱除有机溶剂，浓缩，干燥，获得固体产物。得率2.5％。

实施例2山茱萸提取物的制备

山茱萸药材用水煎煮3遍，加水量6倍，时间2小时。合并3次煎煮液，过滤后减压浓缩，加乙醇调至醇浓度为70％，冷藏24小时，过滤，滤液减压回收乙醇后，冷藏备用。

取上述山茱萸水提醇沉提取液，上HP20大孔吸附树脂柱，使药液流过全柱，依次用去离子水、30％、50％乙醇进行梯度洗脱，收集50％乙醇的洗脱液，减压浓缩成浸膏。

将大孔吸附树脂分离的流浸膏上Al₂O₃层析柱，用乙醇洗脱进行精制，冻干获得固体产物，得率2.3％。

经高效液相色谱仪分析，所述产物中莫诺苷含量占25-50％、马钱素含量占25-40％，二者总含量占50-90％。

实施例3胶囊剂

本发明山茱萸提取物300g药用淀粉1000g，混合均匀，装入1号胶囊，每粒0.35g，每次口服1-2粒，每日两次。

实施例4片剂

本发明山茱萸提取物300g，羧甲基纤维素40g，乳糖50g，硬脂酸镁4g。将上述组分粉碎，混合，压片，制成片剂，每片0.4g，每次3片，每日3次。

实施例5胶囊剂

莫诺苷140g，马钱素120g药用淀粉1000g，混合均匀，装入1号胶囊，每粒0.35g，每次口服1-2粒，每日两次。

实施例6片剂

莫诺苷140g，马钱素120g，羧甲基纤维素40g，乳糖50g，硬脂酸镁4g。将上述组分粉碎，混合，压片，制成片剂，每片0.4g，每次3片，每日3次。

实施例7胶囊剂

莫诺苷300g，马钱素200g药用淀粉800g，混合均匀，装入1号胶囊，每粒0.20g，每次口服1-2粒，每日两次。

实施例8胶囊剂

莫诺苷400g，马钱素200g药用淀粉800g，混合均匀，装入1号胶囊。

实施例9胶囊剂

莫诺苷300g，马钱素500g药用淀粉800g，混合均匀，装入1号胶囊。

Claims

1、一种山茱萸提取物，其特征在于该提取物中含有莫诺苷25-50％、马钱素25-40％。

2、如权利要求1所述的提取物，其特征在于它是以下述方法提取获得：山茱萸药材用水煎煮2-4遍，加水量3-14倍，煎煮时间1-4小时；合并煎煮液，过滤后减压浓缩，过滤后冷藏备用；

3、根据权利要求1所述的山茱萸提取物，其特征在于它是以下述方法提取获得：

山茱萸药材用水煎煮2-4遍，加水量3-14倍，时间1-4小时；合并煎煮液，过滤后减压浓缩，加乙醇调至醇浓度为50％-90％，冷藏12-48小时，过滤，滤液减压回收乙醇；

将上述的醇沉液过HP20大孔吸附树脂柱，再过Al₂O₃层析柱，使药液流过全柱，依次用去离子水、5％-95％乙醇进行梯度洗脱，减压浓缩成浸膏，冷冻干燥。

4、如权利要求1-3所述山茱萸提取物，其特征在于该提取物可以用高效液相色谱仪进行质量控制，色谱条件：Lichrospher-C18色谱柱，流动相30∶70甲醇-水，检测波长240nm，流速1.0ml/分钟。

5、山茱萸提取物在制备防治缺血性血管病药物中的应用。

6、根据权利要求5所述的用途，其特征在于所说的缺血性血管病是指动、静脉系统病损引起的血管痉挛、血栓形成、或血管闭塞，或者所造成的各种器官局部循环或功能障碍。

7、根据权利要求5所述的用途，其特征在于所说的缺血性血管病是指动脉硬化、短暂性缺血发作、或各种组织器官梗塞、或周围血管闭塞中的任何一种。

8、根据权利要求5所述的用途，其特征在于所说的缺血性血管病的病理机制表现为各种原因所致血管痉挛或管腔狭窄，血管内皮损伤，血小板聚集性增高，血栓形成，或栓子阻塞，导致组织缺血以至坏死。

9、山茱萸提取物在制备具有下述任一药理作用的药物中的应用，其中所述的药理作用包括抑制血小板聚集，减轻急性脑梗塞性血管损伤，减小梗塞缺血半暗区面积；降低细胞内钙离子浓度，改善急性全脑缺血缺氧后的能量和物质代谢，提高学习记忆能力，抑制乙酰胆碱酯酶和单胺氧化酶B活性，抑制自由基增高及脂质过氧化。

10、一种防治缺血性血管病的药物制剂，其特征在于该制剂含有5-95％莫诺苷、5-95％马钱素。

11、根据权利要求10所述的防治缺血性血管病的药物制剂，其特征在于该制剂含有10-80％莫诺苷、10-80％马钱素。

12.根据权利要求10所述的防治缺血性血管病的药物制剂，其特征在于该制剂含有20-60％莫诺苷、60-20％马钱素。