CN1460519A

CN1460519A - 博宁霉素在治疗银屑病和脂溢性皮炎中的新用途

Info

Publication number: CN1460519A
Application number: CN 03141374
Authority: CN
Inventors: 许鸿章; 陈汝贤; 张瑞; 鲁敏
Original assignee: Institute of Medicinal Biotechnology of CAMS
Current assignee: Institute of Medicinal Biotechnology of CAMS
Priority date: 2003-06-06
Filing date: 2003-06-06
Publication date: 2003-12-10

Abstract

本发明涉及一种抗肿瘤抗生素博宁霉素在治疗银屑病及脂溢性皮炎中的新用途，动物模型试验表明，该药对小鼠激素期阴道上皮有丝分裂有明显抑制作用，又促进小鼠尾表皮颗粒层形成，并对T淋巴细胞增生有明显抑制作用；进一步的药效学研究证明，博宁霉素不仅对银屑病有效，而且对脂溢性皮炎取得更为满意的结果，由于博宁霉素毒性较低，不损害机体免疫和造血功能，无局部刺激，有望开发出该药在治疗银屑病、脂溢性皮炎等不明病因的疑难病中的新用途。

Description

博宁霉素在治疗银屑病和脂溢性皮炎中的新用途

技术领域：

本发明涉及一种抗肿瘤抗生素博宁霉素在治疗银屑病和脂溢性皮炎中的新用途。

背景技术：

银屑病是一种常见的病因不清的慢性皮肤病，具有特征性的红色丘疹、斑块及银白色鳞屑，好发于头皮、四肢伸侧，冬重夏轻。临床上分为寻常型银屑病和非寻常型银屑病两大类型。非寻常型银屑病包括脓疱型、关节型及红皮病型，较为少见，约占银屑病的5％左右。银屑病在自然人群中的患病率为0.1-3％。欧美国家为1％-2％。中国1984年进行大规模调查的结果为0.12％，其中北方高于南方，城市高于农村，男性高于女性。据此估计，中国银屑病患者达150万人以上，约60％的患者皮损少于10％体表面积。该病顽固难治，频繁复发，罹患终身，给社会、个人都带来了沉重的精神压力和经济负担。银屑病从19世纪被Willan和Hebra首次报道作为一种独立的疾病至今已有100多年的历史。目前对银屑病的研究已达分子水平，但病因尚未完全清楚，治疗只能起到暂时缓解作用，很难根本治愈。临床实践证明，抗肿瘤药物如甲氨蝶呤、乙双吗啉等，用于银屑病的治疗往往奏效。但由于其毒副作用大，临床上一般不提倡使用此类药物治疗银屑病。银屑病的基本病理特点为皮损部位表皮细胞过度增殖和角化不全。近年来，国内外学者以处于雌激素期小鼠的阴道上皮、小鼠尾部表皮为病理模型，前者细胞增殖活跃，上皮细胞转换加快；后者的表皮结构与银屑病患者相似，某种药物如能抑制表皮细胞过度增殖或诱导表皮颗粒细胞生成，促进皮肤角化，则有可能具有治疗银屑病的药理功效[黄畋等，中华皮肤科杂志，1985；18(1)：37。][苏秀玲等，中华皮肤科杂志，1989：22(6)：400]]。

本实验室对博宁霉素的前期研究发现，该抗生素不仅对实验动物的肿瘤细胞具有明显的抑制作用，且毒性较低[发明专利公报，15(41)公开号：CN1231340A]，而且进一步的研究表明，它对银屑病(牛皮癣)和脂溢性皮炎也有肯定的作用。本发明所使用的博宁霉素(Z-893)是从争光霉素复合物分离得到的一个新化合物。争光霉素是由轮枝链霉菌平阳变种(Streptomyces verticillusvar.pingyangensis n.sp)产生的一组具抗肿瘤活性的复合物。博宁霉素可以用轮枝链霉菌平阳变种经深层发酵培养，分离提取制备得到。博宁霉素具有以下化学结构式：

R＝NH(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NHCOCH₃MW：1540(M+1，FAB-MS) C₆₂H₉₈N₂₀O₂₂S₂

由于博宁霉素毒性低，既可全身用药，也可局部外用，全身用药时对自身免疫系统和造血系统无损害，对重要器官如心、肝、肾和肺部基本没有影响，且无局部刺激作用，这是一般抗肿瘤药所不具备的优点。因此将博宁霉素作为一种治疗银屑病(牛皮癣)、脂溢性皮炎等不明病因的疑难疾患专用药物进行研究开发具有良好的前景。

本发明的目的是提供一种抗肿瘤抗生素博宁霉素在制备治疗银屑病、脂溢性皮炎药物中的新用途。

发明内容：

为了完成本发明的任务，首先选用了银屑病实验模型，以观察博宁霉素对这些模型的影响。该模型包括：对小鼠雌激素阴道上皮细胞有丝分裂的影响；对小鼠尾部表皮厚度和颗粒层形成的影响；对小鼠T淋巴细胞增殖反应的影响。博宁霉素对银屑病及脂溢性皮炎的安全性和药效学研究使用了小鼠模型、健康犬及患病犬进行试验。一、博宁霉素对银屑病试验模型的影响

1、材料：

1)、用药：博宁霉素粉针剂(中国医学科学院医药生物技术研究所提供)；甲氨蝶呤(北京医科大学实验药厂生产，批号20000502)；博宁霉素药膏和甲氨蝶呤药膏均为自制。本发明使用的外用药可以是霜剂、软膏、搽剂、凝胶剂等。

2)、动物：昆明种小白鼠(沈阳陆军总医院动物室提供，合格证号：10-5113)。

3)、方法：

A、对小鼠雌激素期阴道上皮有丝分裂的影响

取雌性健康小白鼠70只，20-30g。腹腔注射乙烯雌酚0.2mg/只，每日1次，连续3日，使其处于雌激素期，然后按表1随机分为7组，每组10只，阳性对照药(甲氨蝶呤1mg/kg)和博宁霉素腹腔注射，高剂量组(10mg/kg)、低剂量组(5mg/kg)，每日ip1次，连续3天，外用对照药(0.1％甲氨蝶呤药膏)和博宁霉素外用药膏(0.1％和0.05％)组，每日涂抹阴道一次，连续3天。末次药后一小时，腹腔注射秋水仙碱2mg/kg，6h后后处死小鼠，取其阴道组织，用10％福尔马林固定，石腊包埋，HE染色。光镜下计数300个阴道上皮基底细胞的有丝分裂数，其百分率为有丝分裂指数(表1)。

表1对小鼠雌激素期阴道上皮细胞有丝分裂的影响(n＝10)组别剂量给药方式有丝分裂指数模型对照 18.196±2.957甲氨蝶呤 1mg/kg 腹腔注射 5.580±2.722^***博宁霉素(针剂) 5mg/kg 腹腔注射 15.338±3.129^*

105mg/kg 腹腔注射 13.723±3.033^**甲氨蝶呤药膏 0.1％外用涂抹 5.077±1.154^***博宁霉素(膏剂) 0.05％外用涂抹 6.634±1.802

0.1％外用涂抹 5.763±1.431^***与模型对照组比较，-P＜0.05，**P＜0.01，***＜0.001。

B、对小鼠尾部表皮厚度和颗粒层形成的影响

取健康小白鼠70只，雌雄各半，按表2随机分成7组，每组10只，阳性对照药甲氨蝶呤隔日腹腔注射一次，共计8次，博宁霉素高、低剂量组每日腹腔注射一次，共计15次。外用对照药甲氨蝶呤药膏和0.1％及0.05％博宁霉素药膏，每日涂抹鼠尾一次，连续15日，末次药后2h处死全部小鼠，取距鼠尾根部1.8cm处背部皮肤一长条，用10％福尔马林固定，石蜡包埋，常规制片，HE染色，于光镜下(400X)测量鼠尾表皮厚度和颗粒层形成情况(表2)。

表2对小鼠尾部表皮厚度和颗粒层形成的影响

给药方式组别剂量表皮厚度颗粒层

(次数)对照组 11.28±3.33 5.8±3.4甲氨蝶呤(针剂) 1mg/kg 腹腔注射(8) 10.81±2.07 17.2±5.6*博宁霉素(针剂) 5mg/kg 腹腔注射(15) 9.54±1.45 20.1±5.6*

10mg/kg 腹腔注射(15) 8.35±0.67 25.8±6.6*ΔΔ甲氨蝶呤(膏剂) 0.1％外用(15) 13.6±2.21 25.4±7.3*博宁霉素(膏剂) 0.05％外用(15) 14.8±2.38 33.2±8.9*Δ

0.1％外用(15) 15.30±1.74 35.1±8.6*ΔΔ

与对照组比较，*P＜0.001；与甲氨蝶呤组比较，ΔP＜0.05 ΔΔP＜0.01

C、对小鼠T淋巴细胞增殖反应的影响

取NIH健康小鼠无菌操作取脾，用含5％小牛血清的Hank’s液，制成脾细胞悬液，经2000r/min离心后，弃上清液，加入RPMI1640培养液离心洗涤3次，调细胞浓度至7×10⁶/ml，铺板加样，设三复孔，每孔取脾细胞悬液100μl，再加入ConA及被试药物，使每孔最终体积为200μl，受试药物博宁霉素的浓度分别为1000、100、10、1、0.1、0.01、(μg/ml)，甲氨喋呤，浓度分别为100、10、1(μg/ml)，另设ConA对照组。置37℃孵箱孵育48小时，然后每孔加入噻唑蓝10μl(5mg/ml)，继续孵育4小时。小心吸去上清，每孔加入二甲基亚砜100μl，震荡10分钟后于570nm处测定OD值。以此反映T淋巴细胞的增殖程度(表3)。

上述试验结果表明，博宁霉素无论腹腔注射，还是局部外用，对小鼠雌激素期阴道上皮的有丝分裂均有明显的抑制作用。其抑制程度与药物剂量和给药方式密切相关，与已知在临床上对银屑病有显著疗效的甲氨蝶呤相比，局部外用两者药效相近。博宁霉素10mg/kg及5mg/kg腹腔注射连续15天，对小鼠尾部表皮颗粒层形成具有明显的促进作用(P＜0.01)，局部用药作用更强。而且两种给药途径药效均优于甲氨蝶呤。此外，博宁霉素和甲氨蝶呤局部外用均显示不同程度诱导颗粒细胞和棘细胞增生、使表皮增厚的作用。从表3看出，博宁霉素从1μg/ml～1000μg/ml对T淋巴细胞增殖的抑制作用依次递增，呈现很好的量效关系。甲氨蝶呤是临床上治疗银屑病的常用有效药物。通过比较发现在100μg/ml浓度下，博宁霉素对T淋巴细胞增生的抑制作用明显大于甲氨蝶呤。

表3.博宁霉素对小鼠T淋巴细胞增殖反应的影响组别浓度(μg/ml) OD值 X±SD P博宁霉素 1000 0.21 0.227±0.021 P＜0.001

0.22

0.25

100 0.32 0.350±0.036 P＜0.01

0.34

0.39

10 0.59 0.580±0.036 P＜0.05

0.54

0.61

1 0.90 0.770±0.125 P＞0.05

0.76

0.65

0.1 0.55 0.607±0.055 P＞0.05

0.61

0.66

0.01 0.59 0.637±0.050 P＜0.05

0.69

0.63甲氨蝶呤 100 0.49 0.503±0.023 P＜0.01

0.49

0.53

10 0.6 0.527±0.064 P＜0.05

0.49

1 0.51 0.550±0.035 P＜0.05

0.57

0.57ConA对照 0.70 0.687±0.015

0.69

0.67二、博宁霉素对银屑病和脂溢性皮炎的疗效观察

1、耐受性试验

1)、动物：临床健康雄性成年犬3条，购入后隔离饲养7天，于此间接种犬六联疫苗。

2)、药品：博宁霉素注射剂，3mg/支，冻干品(中国医学科学院医药生物技术研究所研制提供)。

3)、方法：博宁霉素注射剂，使用前以注射用水稀释，作皮下注射，3条犬所用剂量分别为1mg/5kg、1mg/10kg、1mg/15kg体重。于給药前和給药后2、6、8小时分别测量犬的体温和心率，并对受试动物的精神状态、饮食欲及皮肤反应进行观察记录结果(表4)

表4博宁霉素注射剂对健康犬实验结果

单位：T：℃； P：次/分犬名体重剂量用药前用药后2h 用药后6h 用药后8h 用药前用药后风团、疹块(kg)(mg/-kg) 等皮肤反应

T P T P T P T P 食欲钦欲食欲钦欲苏联红 30.2 1/5 38.8 38 38.8 46 38.3 50 38.7 48 正常正常正常正常无大白熊 25.8 1/10 37.9 26 37.7 24 38.2 28 38.6 30 正常正常正常正常无狼青 31.0 1/15 37.7 27 37.5 30 37.6 30 38.6 26 正常正常正常正常无

给药后3条犬的精神状态良好，饮食欲正常，体温和心率的变化均在正常范围内，经给药后连续3天观察，未发现任何过敏性反应。

2、药效学试验

1)、动物：具有典型临床症状的脂溢性皮炎病犬21条，平均年龄3.8岁(0.5岁-7.5岁)，平均体重6.8kg(2.1-27kg)。其中雄性7条，雌性14条。患有银屑病变犬3条，雄性1条，雌性2条。以上21条犬在治疗前均行皮肤取样(于病变与健康皮肤交界处取样，以刮出血为度)，对所取样品进行涂片观察和真菌培养，以排除蠕形螨、疥螨、虱、蚤等体外寄生虫及皮肤真菌病。

2)、药品：博宁霉素注射剂，3mg/支，冻干品(中国医学科学院医药生物技术研究所研制提供)。注射前以注射用水稀释，浓度为1mg/ml。

3)、方法：按1mg/5kg体重的剂量给患犬皮下注射，隔日一次，5次为一疗程。一疗程无明显改善者间隔3天进行第二疗程。

4)、疗效：患犬临床症状消失，皮损消退为治愈；患犬临床症状明显减轻，皮损消退50％以上为好转；临床症状及皮损未改变为无效(表5)。

表5博宁霉素注射剂对犬脂溢性皮炎及银屑病病变的治疗效果

疾病名称	第一疗程第二疗程
	第一疗程第二疗程	治愈好转无效治愈好转无效
	脂溢性皮炎 5 14 2 7 7 2银屑病病变 0 3 0 1 2 0

以上结果表明，在第一疗程中博宁霉素注射剂对犬脂溢性皮炎的治疗效果比较明显，在所有21个病例中，两个疗程总治愈率为57％(12/21)，总有效率为90.5％(19/21)，无效占9.5％(2/21)。对于银屑病患犬，3条犬在第一疗程后均表现好转，在第二疗程中1例痊愈，2例80％以上皮损消退，仍属好转。这些结果比以往采用激素疗法和二十碳五烯酸治疗效果提高20％左右(KralF，Schwartzman R M.Veterinary and comparative dermatology[M].J BLippincott Company，1964)，同时，对银屑病变也有明显的治疗作用。发明效果：

由于博宁霉素毒性低，既可全身用药，也可局部外用，全身用药时对自身免疫系统和造血系统无损害，对重要器官如心、肝、肾和肺部基本没有影响，且无局部刺激作用，这是一般抗肿瘤药所不具备的优点。因此开发出博宁霉素在治疗银屑病(牛皮癣)和脂溢性皮炎等不明病因的疑难疾病中的新用途是可能的，其前景是良好的。

Claims

1、博宁霉素在制备治疗银屑病和脂溢性皮炎药物中的应用。

2、如权利要求1所述的应用，其特征在于给药方式可以是通过针剂注射内用，也可以是皮肤患处涂药外用。