CN1454904A - 高纯度真菌多糖的制备方法 - Google Patents
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Abstract
高纯度真菌多糖的制备方法，以粉末状真菌子实体或深层发酵的菌丝体为原料，经水提后，残渣再用NaOH溶液提取，水提取液和经盐酸中和后的碱提取液分别用硫酸铵沉淀，离心去除沉淀后，上清液用超过滤膜分离技术脱盐并浓缩，浓缩液经冷冻干燥或喷雾干燥制得多糖纯度达到97％以上的真菌多糖粉末。进一步可制成胶囊或片剂。浓缩液如不进行浓缩可直接用作水剂或注射针剂的原料。脱除的硫酸铵溶液经浓缩结晶后可循环使用或直接用作化学肥料。本发明工艺先进、合理、简单，产品制备效率高，质量好，成本低。避免使用任何有机溶剂，无污染物质排放，适合大规模工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及从真菌的子实体或深层发酵的菌丝体中提取真菌多糖的一种制备工艺方法，属于生物工程技术领域。
背景技术
真菌多糖是具有高度免疫活性的一类多糖，广泛存在于真菌的子实体和深层发酵的菌丝体中，高纯度的真菌多糖既可以直接用于口服，也可以加工成注射制剂。通常制备高纯度的真菌多糖是水提取或碱提取后，用蛋白酶处理或用有机溶剂处理去除粗提液中的主要杂质——蛋白质，再经过葡聚糖凝胶过滤纯化。现有的从真菌的子实体或深层发酵的菌丝体中提取真菌多糖的工艺方法，不能实现大规模的工业化生产，工艺路线长，生产效率低，产品成本高，不能满足市场的需要。
发明内容
本发明的目的是要提供一种制备效率高，过程简单，生产成本低的高纯度真菌多糖的制备方法。
本发明的目的是这样实现的，高纯度真菌多糖的制备方法，是以真菌为原料，采用真菌重量2-5倍的水，在温度为70℃-90℃进行2小时-4小时的提取，经筛网过滤去掉残渣，获得的水提取液中加入提取水重量60％-85％的硫酸铵，搅拌后静置1小时以上沉淀蛋白质，再离心去除沉淀，将上清液用膜分离装置超过滤脱盐，再经多次加稀释水和超过滤循环操作，获得真菌多糖浓缩液(收集的最后1次透过液)，浓缩液经干燥制得多糖纯度达到97％-99.5％的真菌多糖粉末。所说的筛网为100目-400目的筛网。超过滤的操作压力为0.01-0.04MPa。干燥为冷冻干燥或喷雾干燥。所说的残渣再用0.5N NaOH提取，提取液加入1∶4的盐酸溶液，调节至pH6.5-7.0后加入硫酸铵，搅拌后静置2小时以上沉淀蛋白质，再离心去除沉淀，将上清液用膜分离装置超过滤脱盐，再经多次加稀释水和超过滤循环操作，获得真菌多糖浓缩液，浓缩液经干燥制得多糖纯度达到97％-99.5％的真菌多糖粉末。真菌包括香菇、灵芝、姬松茸的粉末状子实体和深层发酵菌丝体。稀释水的重量是提取水重量的1/10-1/3。所说的离心去除沉淀是3000rpm离心20min去除沉淀。膜分离装置为截留分子量为10000的膜分离装置。多次加稀释水和超过滤循环操作为至少10次加稀释水和超过滤循环操作。获得真菌多糖浓缩液，如不进行浓缩可直接用作水剂或注射针剂的原料。保留液中脱除的硫酸铵溶液经浓缩结晶后可循环使用或直接用作化学肥料。制得的真菌多糖粉末可进一步制成胶囊或片剂。所述的硫酸铵为纯度不小于99％的硫酸铵。
本发明以粉末状真菌子实体或深层发酵的菌丝体为原料，经水提后残渣再用NaOH提取，水提取液和经盐酸中和后的碱提取液分别用硫酸铵沉淀蛋白质杂质，离心去除沉淀后，上清液用超过滤膜分离技术脱盐并浓缩，浓缩液经冷冻干燥或喷雾干燥制得高纯度真菌多糖粉末。工艺先进、合理、简单，产品制备效率高，质量好，成本低。避免使用任何有机溶剂，无污染物质排放，适合大规模工业化生产。有很好的推广应用价值。
具体实施方式
实施例1
将100kg香菇子实体粉碎，加入300kg水，80℃提取2h，用200目筛网过滤，向滤液中缓慢加入180kg硫酸铵，搅拌均匀后静置4h，3000rpm离心20min去除沉淀后，上清液用截留分子量为10000的膜分离装置超过滤脱盐，操作压力0.02MPa，每次操作控制保留液体积为60kg，向透过液中加入60kg水，再进行超过滤操作，如此进行30次循环操作，收集最后1次透过液，用作水剂或注射针剂的原料。保留液中脱除的硫酸铵溶液经浓缩结晶后可循环使用或直接用作化学肥料。
实施例2
收集实施例1中水提取后的残渣，向残渣中缓慢加入0.5N NaOH 400kg，边加边搅拌，防止局部碱浓度过高，静置4h，用200目筛网过滤，向滤液中缓慢加入1∶4的盐酸溶液约24kg，调节至pH6.5-7.0，再缓慢加入240kg硫酸铵，搅拌均匀后静置4h，3000rpm离心20min去除沉淀后，上清液用截留分子量为10000的膜分离装置超过滤脱盐，操作压力0.02MPa，每次操作控制保留液体积为80kg，向透过液中加入80kg水，再进行超过滤操作，如此进行30次循环操作，收集最后1次透过液，用作水剂或注射针剂的原料。保留液中脱除的硫酸铵溶液经浓缩结晶后可循环使用或直接用作化学肥料。
实施例3
将100kg香菇子实体粉碎，加入300kg水，80℃提取2h，用200目筛网过滤，向滤液中缓慢加入180kg硫酸铵，搅拌均匀后静置4h，3000rpm离心20min去除沉淀后，上清液用截留分子量为10000的膜分离装置超过滤脱盐，操作压力0.02MPa，每次操作控制保留液体积为60kg，向透过液中加入60kg水，再进行超过滤操作，如此进行30次循环操作，收集最后1次透过液，冷冻干燥或喷雾干燥制得香菇多糖粉末。保留液中脱除的硫酸铵溶液经浓缩结晶后可循环使用或直接用作化学肥料。
实施例4
收集实施例3中水提取后的残渣，向残渣中缓慢加入0.5N NaOH 300kg，边加边搅拌，防止局部碱浓度过高，静置4h，用200目筛网过滤，向滤液中缓慢加入1∶4的盐酸溶液约18kg，调节至pH6.5-7.0，再缓慢加入180kg硫酸铵，搅拌均匀后静置4h，3000rpm离心20min去除沉淀后，上清液用截留分子量为10000的膜分离装置超过滤脱盐，操作压力0.02MPa，每次操作控制保留液体积为90kg，向透过液中加入90kg水，再进行超过滤操作，如此进行30次循环操作，收集最后1次透过液，冷冻干燥或喷雾干燥制得香菇多糖粉末。保留液中脱除的硫酸铵溶液经浓缩结晶后可循环使用或直接用作化学肥料。
实施例5
向100kg深层发酵的香菇菌丝体中加入300kg水，80℃提取2h，用200目筛网过滤，向滤液中缓慢加入180kg硫酸铵，搅拌均匀后静置4h，3000rpm离心20min去除沉淀后，上清液用截留分子量为10000的膜分离装置超过滤脱盐，操作压力0.02MPa，每次操作控制保留液体积为60kg，向透过液中加入60kg水，再进行超过滤操作，如此进行30次循环操作，收集最后1次透过液，用作水剂或注射针剂的原料。保留液中脱除的硫酸铵溶液经浓缩结晶后可循环使用或直接用作化学肥料。
实施例6
收集实施例5中水提取后的残渣，向残渣中缓慢加入0.5N NaOH 300kg，边加边搅拌，防止局部碱浓度过高，静置4h，用200目筛网过滤，向滤液中缓慢加入1∶4的盐酸溶液约18kg，调节至pH6.5-7.0，再缓慢加入180kg硫酸铵，搅拌均匀后静置4h，3000rpm离心20min去除沉淀后，上清液用截留分子量为10000的膜分离装置超过滤脱盐，操作压力0.02MPa，每次操作控制保留液体积为70kg，向透过液中加入70kg水，再进行超过滤操作，如此进行30次循环操作，收集最后1次透过液，用作水剂或注射针剂的原料。保留液中脱除的硫酸铵溶液经浓缩结晶后可循环使用或直接用作化学肥料。
实施例7
向100kg深层发酵的香菇菌丝体中加入300kg水，80℃提取2h，用200目筛网过滤，向滤液中缓慢加入180kg硫酸铵，搅拌均匀后静置4h，3000rpm离心20min去除沉淀后，上清液用截留分子量为10000的膜分离装置超过滤脱盐，操作压力0.02MPa，每次操作控制保留液体积为60kg，向透过液中加入60kg水，再进行超过滤操作，如此进行30次循环操作，收集最后1次透过液，冷冻干燥或喷雾干燥制得香菇多糖粉末。保留液中脱除的硫酸铵溶液经浓缩结晶后可循环使用或直接用作化学肥料。
实施例8
收集实施例7中水提取后的残渣，向残渣中缓慢加入0.5N NaOH 400kg，边加边搅拌，防止局部碱浓度过高，静置4h，用200目筛网过滤，向滤液中缓慢加入1∶4的盐酸溶液约24kg，调节至pH6.5-7.0，再缓慢加入240kg硫酸铵，搅拌均匀后静置4h，3000rpm离心20min去除沉淀后，上清液用截留分子量为10000的膜分离装置超过滤脱盐，操作压力0.02MPa，每次操作控制保留液体积为80kg，向透过液中加入80kg水，再进行超过滤操作，如此进行30次循环操作，收集最后1次透过液，冷冻干燥或喷雾干燥制得香菇多糖粉末。保留液中脱除的硫酸铵溶液经浓缩结晶后可循环使用或直接用作化学肥料。
实施例9
将100kg灵芝子实体粉碎，加入400kg水，90℃提取2h，用200目筛网过滤，向滤液中缓慢加入240kg硫酸铵，搅拌均匀后静置4h，3000rpm离心20min去除沉淀后，上清液用截留分子量为10000的膜分离装置超过滤脱盐，操作压力0.02MPa，每次操作控制保留液体积为80kg，向透过液中加入80kg水，再进行超过滤操作，如此进行30次循环操作，收集最后1次透过液，用作水剂或注射针剂的原料。保留液中脱除的硫酸铵溶液经浓缩结晶后可循环使用或直接用作化学肥料。
实施例10
收集实施例9中水提取后的残渣，向残渣中缓慢加入0.5N NaOH 400kg，边加边搅拌，防止局部碱浓度过高，静置4h，用200目筛网过滤，向滤液中缓慢加入1∶4的盐酸溶液约24kg，调节至pH6.5-7.0，再缓慢加入240kg硫酸铵，搅拌均匀后静置4h，3000rpm离心20min去除沉淀后，上清液用截留分子量为10000的膜分离装置超过滤脱盐，操作压力0.02MPa，每次操作控制保留液体积为80kg，向透过液中加入80kg水，再进行超过滤操作，如此进行30次循环操作，收集最后1次透过液，用作水剂或注射针剂的原料。保留液中脱除的硫酸铵溶液经浓缩结晶后可循环使用或直接用作化学肥料。
实施例11
将100kg灵芝子实体粉碎，加入300kg水，80℃提取2h，用200目筛网过滤，向滤液中缓慢加入180kg硫酸铵，搅拌均匀后静置4h，3000rpm离心20min去除沉淀后，上清液用截留分子量为10000的膜分离装置超过滤脱盐，操作压力0.02MPa，每次操作控制保留液体积为60kg，向透过液中加入60kg水，再进行超过滤操作，如此进行30次循环操作，收集最后1次透过液，冷冻干燥或喷雾干燥制得灵芝多糖粉末。保留液中脱除的硫酸铵溶液经浓缩结晶后可循环使用或直接用作化学肥料。
实施例12
收集实施例11中水提取后的残渣，向残渣中缓慢加入0.5N NaOH 300kg，边加边搅拌，防止局部碱浓度过高，静置4h，用200目筛网过滤，向滤液中缓慢加入1∶4的盐酸溶液约18kg，调节至pH6.5-7.0，再缓慢加入180kg硫酸铵，搅拌均匀后静置4h，3000rpm离心20min去除沉淀后，上清液用截留分子量为10000的膜分离装置超过滤脱盐，操作压力0.02MPa，每次操作控制保留液体积为80kg，向透过液中加入80kg水，再进行超过滤操作，如此进行30次循环操作，收集最后1次透过液，冷冻干燥或喷雾干燥制得灵芝多糖粉末。保留液中脱除的硫酸铵溶液经浓缩结晶后可循环使用或直接用作化学肥料。
实施例13
向100kg深层发酵的灵芝菌丝体中加入300kg水，80℃提取2h，用200目筛网过滤，向滤液中缓慢加入180kg硫酸铵，搅拌均匀后静置4h，3000rpm离心20min去除沉淀后，上清液用截留分子量为10000的膜分离装置超过滤脱盐，操作压力0.02MPa，每次操作控制保留液体积为60kg，向透过液中加入60kg水，再进行超过滤操作，如此进行30次循环操作，收集最后1次透过液，用作水剂或注射针剂的原料。保留液中脱除的硫酸铵溶液经浓缩结晶后可循环使用或直接用作化学肥料。
实施例14
收集实施例13中水提取后的残渣，向残渣中缓慢加入0.5N NaOH 300kg，边加边搅拌，防止局部碱浓度过高，静置4h，用200目筛网过滤，向滤液中缓慢加入1∶4的盐酸溶液约18kg，调节至pH6.5-7.0，再缓慢加入180kg硫酸铵，搅拌均匀后静置4h，3000rpm离心20min去除沉淀后，上清液用截留分子量为10000的膜分离装置超过滤脱盐，操作压力0.02MPa，每次操作控制保留液体积为60kg，向透过液中加入60kg水，再进行超过滤操作，如此进行30次循环操作，收集最后1次透过液，用作水剂或注射针剂的原料。保留液中脱除的硫酸铵溶液经浓缩结晶后可循环使用或直接用作化学肥料。
实施例15
向100kg深层发酵的灵芝菌丝体中加入300kg水，80℃提取2h，用200目筛网过滤，向滤液中缓慢加入180kg硫酸铵，搅拌均匀后静置4h，3000rpm离心20min去除沉淀后，上清液用截留分子量为10000的膜分离装置超过滤脱盐，操作压力0.02MPa，每次操作控制保留液体积为60kg，向透过液中加入60kg水，再进行超过滤操作，如此进行30次循环操作，收集最后1次透过液，冷冻干燥或喷雾干燥制得灵芝多糖粉末。保留液中脱除的硫酸铵溶液经浓缩结晶后可循环使用或直接用作化学肥料。
实施例16
收集实施例15中水提取后的残渣，向残渣中缓慢加入0.5N NaOH 400kg，边加边搅拌，防止局部碱浓度过高，静置4h，用200目筛网过滤，向滤液中缓慢加入1∶4的盐酸溶液约24kg，调节至pH6.5-7.0，再缓慢加入240kg硫酸铵，搅拌均匀后静置4h，3000 rpm离心20min去除沉淀后，上清液用截留分子量为10000的膜分离装置超过滤脱盐，操作压力0.02MPa，每次操作控制保留液体积为80kg，向透过液中加入80kg水，再进行超过滤操作，如此进行30次循环操作，收集最后1次透过液，冷冻干燥或喷雾干燥制得灵芝多糖粉末。保留液中脱除的硫酸铵溶液经浓缩结晶后可循环使用或直接用作化学肥料。
实施例17
将100kg姬松茸子实体粉碎，加入300kg水，80℃提取2h，用200目筛网过滤，向滤液中缓慢加入180kg硫酸铵，搅拌均匀后静置4h，3000rpm离心20min去除沉淀后，上清液用截留分子量为10000的膜分离装置超过滤脱盐，操作压力0.02MPa，每次操作控制保留液体积为60kg，向透过液中加入60kg水，再进行超过滤操作，如此进行30次循环操作，收集最后1次透过液，用作水剂或注射针剂的原料。保留液中脱除的硫酸铵溶液经浓缩结晶后可循环使用或直接用作化学肥料。
实施例18
收集实施例17中水提取后的残渣，向残渣中缓慢加入0.5N NaOH 400kg，边加边搅拌，防止局部碱浓度过高，静置4h，用200目筛网过滤，向滤液中缓慢加入1∶4的盐酸溶液约24kg，调节至pH6.5-7.0，再缓慢加入240kg硫酸铵，搅拌均匀后静置4h，3000rpm离心20min去除沉淀后，上清液用截留分子量为10000的膜分离装置超过滤脱盐，操作压力0.02MPa，每次操作控制保留液体积为80kg，向透过液中加入80kg水，再进行超过滤操作，如此进行30次循环操作，收集最后1次透过液，用作水剂或注射针剂的原料。保留液中脱除的硫酸铵溶液经浓缩结晶后可循环使用或直接用作化学肥料。
实施例19
将100kg姬松茸子实体粉碎，加入300kg水，80℃提取2h，用200目筛网过滤，向滤液中缓慢加入180kg硫酸铵，搅拌均匀后静置4h，3000rpm离心20min去除沉淀后，上清液用截留分子量为10000的膜分离装置超过滤脱盐，操作压力0.02MPa，每次操作控制保留液体积为60kg，向透过液中加入60kg水，再进行超过滤操作，如此进行30次循环操作，收集最后1次透过液，冷冻干燥或喷雾干燥制得姬松茸多糖粉末。保留液中脱除的硫酸铵溶液经浓缩结晶后可循环使用或直接用作化学肥料。
实施例20
收集实施例19中水提取后的残渣，向残渣中缓慢加入0.5N NaOH 400kg，边加边搅拌，防止局部碱浓度过高，静置4h，用200目筛网过滤，向滤液中缓慢加入1∶4的盐酸溶液约24kg，调节至pH6.5-7.0，再缓慢加入240kg硫酸铵，搅拌均匀后静置4h，3000rpm离心20min去除沉淀后，上清液用截留分子量为10000的膜分离装置超过滤脱盐，操作压力0.02MPa，每次操作控制保留液体积为80kg，向透过液中加入80kg水，再进行超过滤操作，如此进行30次循环操作，收集最后1次透过液，冷冻干燥或喷雾干燥制得姬松茸多糖粉末。保留液中脱除的硫酸铵溶液经浓缩结晶后可循环使用或直接用作化学肥料。
实施例21
向100kg深层发酵的姬松茸菌丝体中加入300kg水，80℃提取2h，用200目筛网过滤，向滤液中缓慢加入180kg硫酸铵，搅拌均匀后静置4h，3000rpm离心20min去除沉淀后，上清液用截留分子量为10000的膜分离装置超过滤脱盐，操作压力0.02MPa，每次操作控制保留液体积为60kg，向透过液中加入60kg水，再进行超过滤操作，如此进行30次循环操作，收集最后1次透过液，用作水剂或注射针剂的原料。保留液中脱除的硫酸铵溶液经浓缩结晶后可循环使用或直接用作化学肥料。
实施例22
收集实施例21中水提取后的残渣，向残渣中缓慢加入0.5N NaOH 400kg，边加边搅拌，防止局部碱浓度过高，静置4h，用200目筛网过滤，向滤液中缓慢加入1∶4的盐酸溶液约24kg，调节至pH6.5-7.0，再缓慢加入240kg硫酸铵，搅拌均匀后静置4h，3000rpm离心20min去除沉淀后，上清液用截留分子量为10000的膜分离装置超过滤脱盐，操作压力0.02MPa，每次操作控制保留液体积为80kg，向透过液中加入80kg水，再进行超过滤操作，如此进行30次循环操作，收集最后1次透过液，用作水剂或注射针剂的原料。保留液中脱除的硫酸铵溶液经浓缩结晶后可循环使用或直接用作化学肥料。
实施例23
向100kg深层发酵的姬松茸菌丝体中加入300kg水，80℃提取2h，用200目筛网过滤，向滤液中缓慢加入180kg硫酸铵，搅拌均匀后静置4h，3000rpm离心20min去除沉淀后，上清液用截留分子量为10000的膜分离装置超过滤脱盐，操作压力0.02MPa，每次操作控制保留液体积为60kg，向透过液中加入60kg水，再进行超过滤操作，如此进行30次循环操作，收集最后1次透过液，冷冻干燥或喷雾干燥制得姬松茸多糖粉末。保留液中脱除的硫酸铵溶液经浓缩结晶后可循环使用或直接用作化学肥料。
实施例24
收集实施例23中水提取后的残渣，向残渣中缓慢加入0.5N NaOH 400kg，边加边搅拌，防止局部碱浓度过高，静置4h，用200目筛网过滤，向滤液中缓慢加入1∶4的盐酸溶液约24kg，调节至pH6.5-7.0，再缓慢加入240kg硫酸铵，搅拌均匀后静置4h，3000rpm离心20min去除沉淀后，上清液用截留分子量为10000的膜分离装置超过滤脱盐，操作压力0.02MPa，每次操作控制保留液体积为80kg，向透过液中加入80kg水，再进行超过滤操作，如此进行30次循环操作，收集最后1次透过液，冷冻干燥或喷雾干燥制得姬松茸多糖粉末。保留液中脱除的硫酸铵溶液经浓缩结晶后可循环使用或直接用作化学肥料。
Claims (10)
1、一种高纯度真菌多糖的制备方法，其特征是以真菌为原料，采用真菌重量2-5倍的水，在温度为70℃-90℃进行2小时-4小时的提取，经筛网过滤去掉残渣获得的水提取液中加入提取水重量60％-85％的硫酸铵，搅拌后静置1小时以上沉淀蛋白质，再离心去除沉淀，将上清液用膜分离装置超过滤脱盐，再经多次加稀释水和超过滤循环操作，获得真菌多糖浓缩液，浓缩液经干燥制得多糖纯度达到97％-99.5％的真菌多糖粉末。
2、根据权利要求1所述的高纯度真菌多糖的制备方法，其特征是所说的筛网为100目-400目的筛网。
3、根据权利要求1所述的高纯度真菌多糖的制备方法，其特征是所说的超过滤的操作压力为0.01-0.04MPa。
4、根据权利要求1所述的高纯度真菌多糖的制备方法，其特征是所说的干燥为冷冻干燥或喷雾干燥。
5、根据权利要求1所述的高纯度真菌多糖的制备方法，其特征是所说的残渣再用0.5N NaOH提取，提取液加入1∶4的盐酸溶液，调节至pH6.5-7.0后用硫酸铵搅拌后静置1小时以上沉淀蛋白质，再离心去除沉淀，将上清液用膜分离装置超过滤脱盐，再经多次加稀释水和超过滤循环操作，获得真菌多糖浓缩液，浓缩液经干燥制得多糖纯度达到97％-99.5％的真菌多糖粉末。
6、根据权利要求1所述的高纯度真菌多糖的制备方法，其特征是所说的真菌包括香菇、灵芝、姬松茸的粉末状子实体和深层发酵菌丝体。
7、根据权利要求1所述的高纯度真菌多糖的制备方法，其特征是所说的稀释水的重量是提取水重量的1/10-1/3。
8、根据权利要求1、5所述的高纯度真菌多糖的制备方法，其特征是所说的离心去除沉淀是3000rpm离心20min去除沉淀。
9、根据权利要求1、5所述的高纯度真菌多糖的制备方法，其特征是所说的膜分离装置为截留分子量为10000的膜分离装置。
10、根据权利要求1、5所述的高纯度真菌多糖的制备方法，其特征是所说的多次加稀释水和超过滤循环操作为至少20次加稀释水和超过滤循环操作。
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|---|---|
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