CN1433770A - 卡介菌多糖核酸在制备口腔局部给药的药物中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及卡介菌多糖核酸在制备口腔局部给药的药物中的新用途，通过口腔局部给药可以达到双向免疫调节，以治疗慢性支气管炎、感冒、哮喘。本发明还提供了有效量的卡介菌多糖核酸加上药学上可接受的辅料制备成口腔局部给药的具有双向免疫调节功能的药物组合物，该组合物具有治疗慢性支气管炎、感冒、哮喘等功能。采用卡介菌多糖核酸的口腔局部用药具有疗效佳，毒性小，副作用少，安全性高，服药方便等优点。

Description

卡介菌多糖核酸在制备口腔局部给药的药物中的用途

                          技术领域

本发明涉及卡介菌多糖核酸的用途，具体地说，是卡介菌多糖核酸在制备口腔局部给药的药物中的用途。

                          背景技术

慢性支气管炎、哮喘、变态反应性鼻炎、变态反应性皮肤病均为春季常见多发疾病。临床上抗菌、抗组织胺、激素类药物较多，对这些疾病发作时症状控制已不是难题，但无法控制其反复发作。卡介菌多糖核酸的应用推广，又多了一种可控制这些疾病复发的有效方法。但是，临床上传统应用卡介菌多糖核酸的施药手段是肌肉注射方式，虽然其注射途径疗效是肯定的，但存在以下几个缺点：一是临床上注射途径用药不方便，二是卡介菌多糖核酸临床用药疗程较长，如患者中途放弃治疗，将贻误病情。卡介菌多糖核酸注射液治疗慢性支气管炎、感冒、哮喘，采用肌肉注射给药难以达到直接作用于病灶部位的目的，不能满足局部给药。

                          发明内容

本发明的目的是提供卡介菌多糖核酸的新的给药途径，具体的说，是提供其在制备口腔局部给药的药物中的用途。

本发明的另一目的是提供这种新的药物制剂的制备方法。

本发明的技术方案：

本发明提供卡介菌多糖核酸在制备口腔局部给药的具有双向免疫调节功能的药物的用途。

具体的是卡介菌多糖核酸在制备口腔局部给药的治疗慢性支气管炎、感冒、哮喘的药物中的用途。

同时，本发明还提供有效量的卡介菌多糖核酸加上药学上可接受的辅料制备成口腔局部给药的具有双向免疫调节功能的药物组合物。

进一步的是，有效量的卡介菌多糖核酸加上药学上可接受的辅料制备成口腔局部给药的治疗慢性支气管炎、感冒、哮喘的药物组合物。

所述药物组合物为口腔局部用药的固体制剂或液体制剂，具体的说所述固体制剂是口含片、口腔粘附片或膜剂，更具体地说这种口含片、口腔粘附片或膜剂，含有卡介菌多糖核酸0.5mg～6mg/片，所述的液体制剂是喷雾剂，其中，含卡介菌多糖核酸0.5mg～6mg/揿。

本发明还提供了所述药物组合物的制备方法，包括：a、液体浮膜培养或固体培养制备卡介菌菌体；b、热酚乙醇提取卡介菌多糖核酸；c、在b步骤中制备的有效量卡介菌多糖核酸与药学上可接受的辅料混合，制成口腔局部给药的药物制剂。

卡介菌多糖核酸可通过口腔粘膜吸收而发挥其双向免疫调节功能，一方面通过增强单核——巨噬细胞功能，增强人体血液中T细胞总数，提高NK细胞的活性，提高IgG及C₃含量等机制，增强免疫功能低下患者的免疫功能，故对免疫功能低下所致的疾病如呼吸道反复感染；流感有很好的疗效；另一方面，通过提高TH₁/TH₂的比值稳定肥大细胞膜，产生抗体封闭作用等，对免疫功能过强所致的疾病如哮喘，过敏性鼻炎，过敏性皮炎等也有很好的疗效。除此机理之外，本发明中卡介菌多糖核酸是采用口腔粘膜用药而引发的粘膜免疫反应，产生强的TH₁型细胞免疫应答，从而产生r-干扰素等免疫刺激细胞因子以及激活免疫效应机制，因此，本发明的卡介菌多糖核酸口腔局部给药的制剂主要用于预防和治疗慢性支气管炎、感冒、哮喘等疾病。

卡介菌多糖核酸采用口腔局部用药具有疗效佳，毒性小，副作用少，安全性高，服药方便等优点。

                        具体实施方式

以下通过试验来进一步阐述本发明所述药物的有益效果，包括药效试验和毒理试验。试验例1卡介菌多糖核酸口腔局部给药的动物效力试验一、材料：

1、试验动物：豚鼠300-450g雌雄各半，共计80只

2、试剂：小牛血清、卡介菌多糖核酸(半成品粉剂)、蔗糖、淀粉、生理盐水、卡舒宁(卡介菌多糖核酸针剂)。

3、试验器材：烧杯、三角瓶、注射器及针头、量筒、电子天平、医用剪刀、医用镊子等。二、步骤：

1、配置小牛血清(10mg/ml，1mg/ml)，辅形剂(比例为蔗糖1∶1淀粉)

2、将80只豚鼠分别称重并按随机分组法分成五组，每组12只且雌雄各半，每只豚鼠分别肌肉注射小牛血清(0.5mg/ml/只)进行致敏，隔日一次，共计3次，末次注射后，各组分别做以下处理：第一组分别肌肉注射卡舒宁，隔日一次，共计10次；第二组分别灌胃卡舒宁(1支/只)，隔日一次，共计10次；第三组分别口腔喷含卡介菌多糖核酸(0.5mg/只)+辅形剂，隔日一次，共计10次；第四、五组分别口腔喷含等量的辅形剂，隔日一次，共计10次；各组做完以上处理后，末次次日，第一、二、三、四各组选10只健康豚鼠分别后肢静脉注射小牛血清(10mg/ml/只)进行攻击，第五组用生理盐水(1ml/只)后肢静脉攻击。每只动物在攻击后观察其30分钟内的反应情况，各组按以下标准进行打分，并通过计算各组间的P值来判断差异。

3、反应打分标准

反应级数                     反应症状

0                            无明显反应

1                            有抓鼻、颤抖或竖毛

2                            有几次咳嗽有抓鼻、颤抖或竖毛

3                            多次或连续咳嗽，伴有呼吸困难，痉挛

4                            痉挛、抽搐、休克死亡四结果见下表：

        表1卡介菌多糖核酸的几种服药方案的药效状况

五口含辅形剂

10只

五分析与讨论

以上结果中第一组作为试验的脱敏阳性对照，二、三组为不同口服途径及方案的试验组，第四组为脱敏阴性对照，第五组为整个试验的致敏系统的阴性对照。

计算各试验组分别与脱敏阴性和阳性组间的P值，以及阴阳组间的P值。得到以下结果：

1组、3组分别与4组间的P值均为＜0.05

1组分别与3组间的P值均为     ＞0.05

2组与4组间的P值为           ＞0.05

根据以上P值结果可以说明本次脱敏试验设立的阴阳性对照(4组与1组)是成立的，即二者间存在显著差异，同样试验组中第3组与阴性对照组存在显著差异，并与阳性对照组间无显著差异。

第二组卡介菌多糖核酸(灌服卡舒宁)与第三组喷含卡介菌多糖核酸两组试验结果为反应级别                    零  一  二  三  四灌服组各级别动物数    (C1)  1   1   1   3   3口腔喷含组各级别动物数(C2)  2   4   3   -   1

经计算两种结果之间统计学P值为0.034，且小于0.05，从而说明二者间存在显著性差异。

上述试验表明：口腔喷含卡介菌多糖核酸的脱敏效果与肌注方式近似，而优于口服卡介菌多糖核酸。试验二卡介菌多糖核酸口腔局部给药的急毒性试验一、试验材料

1、试剂和器材：卡舒宁、辅形剂(蔗糖与淀粉1∶1配制)、电子分析天

   平、微量进样器、乳钵、烧杯等。

2、动物：选用25±2g健康昆明种小鼠，每一实验组16只，雌雄各半。二、试验方法

1、剂量：试验组卡介菌多糖核酸口含采用3个剂量，分别为：

   卡介菌多糖核酸1mg+辅形剂9mg/只、卡介菌多糖核酸2mg+辅形剂8mg/

   只、

   卡介菌多糖核酸4mg+辅形剂6mg/只；对照组口含辅形剂10mg/只。

2、分组与观察：小鼠按性别随机分成8组，其中雌性4组，雄性4组；

   三个实验组分别按上述剂量一次给予小鼠，对照组只给予等量辅形剂，

   小鼠给药后连续10天观察动物死亡情况，10天后各组进行称重。三、实验结果

1、小鼠给药后观察和称重结果如表2所示：

         表2卡介菌多糖核酸口含片急毒性试验剂量卡介菌多     途径   动物    观察日/    动物健康     存活数及糖核酸       口腔   性别    情         况           (死亡率)+辅形剂      喷含           1 2 3 4 5  6 7 8 9 101mg          口     雄8只     ------     ----       8(0.0％)+9mg/只      含     雌8只     ------     ----       8(0.0％)2mg          口     雄8只     ------     ----       8(0.0％)+8mg/只      含     雌8只     ------     ----       8(0.0％)4mg          口     雄8只     ------     ----       8(0.0％)+6mg/只      含     雌8只     ------     ----       8(0.0％)0mg          口     雄8只     ------     ----       8(0.0％)+10mg/只     含     雌8只     ------     ----       8(0.0％)

                       -注：口含日期                               “-”表示动物健康2、10日后动物称重情况：

第一组(口含卡介菌多糖核酸1mg+9mg辅形剂)

      雄性平均体重32.6g    雌性平均体重31.4g

第二组(口含卡介菌多糖核酸2mg+8mg辅形剂)

      雄性平均体重33.3g    雌性平均体重31.5g

第三组(口含卡介菌多糖核酸4mg+6mg辅形剂)

      雄性平均体重31.9g    雌性平均体重31.2g

第四组(口含辅形剂10mg即对照组)

      雄性平均体重32.4g    雌性平均体重32.1g四、结论

以上三组中不同剂量的卡介菌多糖核酸口含给小鼠后均未引起动物死亡。根据人用剂量以2mg/50kg来计算，试验的三组剂量分别为人用剂量的1000倍，2000倍，4000倍，且各组动物体重均未出现明显减轻，反而是表现为正常生长的增重现象，这些均表明口含卡介菌多糖核酸人用剂量是安全的、低毒的。

下面通过实施例的方式来进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。实施例1卡介菌多糖核酸口含片制备a.液体浮膜培养技术及固体培养技术制备卡介菌菌体涉及特定的苏通氏培养基配制处方(1000ml)MgSO₄                   0.5gK₂HPO₄                 0.5g柠檬酸                    2g味精                      8g甘油                      60ml柠檬酸铁铵                0.05g1‰硫酸锌                 1ml方法：加热水溶，氨水调节PH为7.5，0.1Mpa30分钟灭菌。卡介菌菌体培养技术

将保存于苏通马铃薯培养基的卡介菌菌种接种于上述特定的苏通氏培养基，在38±0.5℃条件下培养7天后为S₁菌膜，将S₁菌膜接种于苏通氏培养基内连续培养10-12天即为S_II菌膜，用S_II菌膜再继续接种上述含味精苏通氏培养基21天制备沙膜，收取沙膜用于卡介菌多糖核酸的制备。b.卡介菌菌体经热酚法提取制备卡介菌多糖核酸粉末

取破碎菌悬液与等量热酚混匀，以静止法或离心沉淀菌体，吸取上清液以透析法或其它适宜方法除酚，加入适量乙醇沉淀多糖核酸，搜集沉淀物。分别以乙醇、乙醚混匀洗涤，离心后干燥即得精制多糖核酸。c.辅料(乳糖)混合制备湿软材，将湿软材过筛，干燥，制备成空白颗粒。d.将卡介菌多糖核酸粉末与空白颗粒充分混合，在常温条件下直接压片，每片含卡介菌多糖核酸0.5mg。实施例2卡介菌多糖核酸口含片制备步骤a和b，同实施例1，c、淀粉乳糖混合制备湿软材，将湿软材过筛，干燥，制备成空白颗粒。d、将卡介菌多糖核酸粉末与空白颗粒充分混合，在常温条件下直接压片，每片含卡介菌多糖核酸6mg。实施例3卡介菌多糖核酸口含片制备步骤a和b同实施例1，c、淀粉乳糖混合制备湿软材，将湿软材过筛，干燥，制备成空白颗粒。d、将卡介菌多糖核酸粉末与空白颗粒充分混合，在常温条件下直接压片，每片含卡介菌多糖核酸2mg。实施例4卡介菌多糖核酸粘附片制备步骤a和b同实施例1，c、将辅料、卡介菌多糖核酸分三层：下层用HPC/CP作基质，中层为卡介菌多糖核酸，上层为乳糖，直接压片，每片含卡介菌多糖核酸2mg。实施例5卡介菌多糖核酸膜剂制备步骤a和b同实施例1，c、用聚乙烯作基质，用膜压机直接压片成膜剂，每片含卡介菌多糖核酸6mg。实施例6卡介菌多糖核酸喷雾剂步骤a和b同实施例1，c、用常规的喷雾剂辅料与卡介菌多糖核酸混合，制备成卡介菌多糖核酸喷雾剂，规格：3mg/揿。

Claims (10)

1、卡介菌多糖核酸在制备口腔局部给药的具有双向免疫调节功能的药物的用途。

2、卡介菌多糖核酸在制备口腔局部给药的治疗慢性支气管炎、感冒、哮喘的药物中的用途。

3、有效量的卡介菌多糖核酸加上药学上可接受的辅料制备成口腔局部给药的具有双向免疫调节功能的药物组合物。

4、有效量的卡介菌多糖核酸加上药学上可接受的辅料制备成口腔局部给药的治疗慢性支气管炎、感冒、哮喘的药物组合物。

5、根据权利要求3，4所述的药物组合物，其特征在于所述药物组合物为口腔局部用药的固体制剂或液体制剂。

6、根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于所述固体制剂是口含片、口腔粘附片或膜剂。

7、根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于所述口含片、口腔粘附片或膜剂，含有卡介菌多糖核酸0.5mg～6mg/片。

8、根据权利要求5述的药物组合物，其特征在于所述液体制剂是喷雾剂。

9、根据权利要求8所述的药物组合物，其特征是所述的喷雾剂含卡介菌多糖核酸0.5mg～6mg/揿。

10、权利要求3所述的药物组合物的制备方法，其特征是：

a、液体浮膜培养或固体培养制备卡介菌菌体；

b、热酚乙醇提取卡介菌多糖核酸；

c、在b步骤中制备的有效量卡介菌多糖核酸与药学上可接受的辅料混合，制成口腔局部给药的药物制剂。