CN100339398C - 卡介菌多糖、核酸原粉制备过程中的破菌方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了卡介菌多糖、核酸原粉制备过程中破菌方法。采用高剪切分散乳化法进行破菌。本发明方法可提高卡介菌多糖、核酸原粉的收得率及卡介菌多糖核酸原粉中核酸含量，从而降低生产成本和提高产品质量。
Description
技术领域
本发明涉及卡介菌多糖、核酸原粉制备过程中破菌方法，特别涉及到5将卡介菌菌体采用高剪切分散乳化法进行破菌。
背景技术
卡介菌多糖、核酸(BCG Polysaccharide and Nucleic)具有调节人体的免疫功能、治疗及预防感冒、哮喘、慢性湿症和慢性特发性荨麻疹等疾病。
现有的卡介菌多糖、核酸原粉制备全过程是培养基制备、接种培养、收菌、破菌、提取、精制和制备干粉。其中破菌过程为整个制备过程的关键步骤，破菌的优劣严重影响产品的收率和质量。目前国内生产厂家一般采用高速组织捣碎法进行破菌。
现有的卡介菌多糖、核酸原粉制备过程中破菌方法为：将上步培养所得菌体和注射用水置于高速组织捣碎机内，开动机器进行破菌，得匀浆，将制得的匀浆进入下一步工序，最后制得卡介菌多糖、核酸原粉。
然而现有的制备工艺，由于刀具转动过程中破菌液形成涡流，刀具和菌体的接触不够充分，同时刀具和菌体之间为单纯的切割，因此破菌不够彻底，原粉收得率只有2％左右，核酸含量为10％±1％，明显低于《2000年版生物制品规程》标准范围的10-20％。
发明内容
本发明提供了卡介菌多糖、核酸原粉制备过程中破菌新方法，采用高剪切分散乳化法进行破菌，提取卡介菌菌体内的多糖与核酸。
卡介菌多糖、核酸原粉制备过程中破菌新方法为：取卡介菌菌体，加一定比例的注射用水，然后将剪切机伸入破菌液中，开动电源，连续运转3小时进行破菌，破菌完毕，制备的匀浆进入下一道工序进行提取，最后制得卡介菌多糖、核酸原粉。
本发明由于改变了破菌方式，即采用高剪切分散乳化法破菌，在不增加任何赋形剂、破菌时间及其他提取工艺都未改变的情况下，使该原粉收得率提高到3％左右，比现有的制备工艺增加了30-40％；而且核酸的含量也提高至18-20％，在操作方法上也比现有方法方便、简单。
实施例1
将6公斤菌体放入20升容积的不锈钢桶内，加注射用水6升，将破菌刀具伸入液体中，刀具离桶底5厘米左右，开启电源，连续运转(10000转/分钟)3小时，制备的匀浆进入下一道工序进一步提取，最后制得卡介菌多糖、核酸原粉。计算产品收得率和检测产品中组分含量，结果见表1。
比较实施例1
取6公斤菌体和16升注射用水置于捣碎机容器内，盖上盖子，连接刀具，慢速启动，刀具旋转至匀速(6000转/分钟)，然后开启快速档，运行时间1分钟，并用手把扶容器，以免捣碎机震移。间隔1分钟后，再按以上方法进行第二次操作，共捣碎3分钟，将制备的匀浆进入下一道工序进行提取，最后制得卡介菌多糖、核酸原粉。计算产品收得率和检测产品中组分含量，结果见表1。
表1卡介菌多糖、核酸原粉各组分含量及收率表：
| 含量标准 | 比较实施例1 | 实施例1 | |
| 多糖含量 | 70～80％ | 89.2％ | 79.5％ |
| 核酸含量 | 10～20％ | 10.5％ | 19.6％ |
| 收得率 | / | 1.9％ | 2.6％ |
关于表1的说明：
1、糖含量与核酸含量参照《2000年版生物制品规程》；
2、收得率＝卡介菌多糖、核酸原粉质量/菌体质量×100％。
采用高速组织捣碎法破菌，由于转速低(约6000转/分)，且运行过程中产生涡流，刀具和菌体的接触不充分，同时刀具和菌体的作用过程为切割过程，菌体受力较弱，因此破菌不够彻底；采用高剪切分散乳化法进行破菌，由于转速高(大于10000转/分)，且运行过程中产生紊流，刀片和菌体的接触充分，同时刀片和菌体的作用过程为剪切过程，因此破菌较彻底。
本发明方法可提高卡介菌多糖、核酸原粉的收得率与核酸的含量，并且在整个破菌期间无须专人看守，从而节约了生产力，降低了生产成本。
虽然以上具体描述了本发明某些实施方案和实施例，但本领域所属技术人员应当理解，在不脱离本发明基本精神和范围的前提下可对本发明实施方案进行各种修改和替换，而这些修改和替换均应包括在本发明的等同范围内。
Claims (1)
1、在卡介菌多糖、核酸原粉制备过程中的一种破菌方法，所述方法采用高剪切分散乳化法进行破菌以提取卡介菌内的多糖与核酸，其特征在于：取卡介菌菌体，加入一定比例的注射用水，然后将剪切机伸入水中，开动电源，在10000转/分的机器转速下连续运转3小时，在破菌过程中，破菌液产生紊流，破菌完毕，所制备的匀浆进入下一道工序进行提取，最后制备卡介菌多糖、核酸原粉。
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