CN103585121A

CN103585121A - 一种卡介菌多糖核酸口含片

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Publication number: CN103585121A
Application number: CN201210291759.0A
Authority: CN
Inventors: 刘芳洁; 谷陟欣; 刘念; 颜冬兰; 辛秀; 张妮瑜
Original assignee: Jiuzhitang Co Ltd
Current assignee: Jiuzhitang Co Ltd
Priority date: 2012-08-16
Filing date: 2012-08-16
Publication date: 2014-02-19

Abstract

本发明提供了一种卡介菌多糖核酸为活性成分的口含片，是由卡介菌多糖核酸与药学上可接受的辅料制成的药物组合物，同时提供了该口含片的制备方法，该口含片主要用于预防和治疗呼吸道感染、哮喘。

Description

一种卡介菌多糖核酸口含片

技术领域

本发明涉及一种卡介菌多糖核酸为活性成分的口含片及其制备方法，属于生物技术领域。

背景技术

支气管哮喘(bronchial asthma)简称“哮喘”，是当今世界上一种最常见的慢性呼吸道疾病，发生机制复杂，现代研究认为哮喘患者体内存在着细胞免疫功能缺陷，从而引发气道变应性炎症，这可能是哮喘患者气道反应性增高的重要机制之一。该病可发生于任何年龄，以1—6岁发病较多，大多在3岁以内发病。

小儿反复呼吸道感染是指在单位时间内上下呼吸道感染反复发作超过规定次数而言的一种临床综合征，为儿科常见疾病，它不仅影响患儿的生长和发育，同时严重影响患儿的身心健康。由于反复呼吸道感染导致经常应用抗生素治疗，而长期反复的抗生素治疗会进一步削弱机体免疫力，如此往复造成恶性循环，给社会和家庭带来诸多的负担和痛苦。

目前应用在小儿反复呼吸道感染及哮喘的常规用药，起效快，疗效显著。但同时存在着毒副作用明显，容易复发等问题。卡介菌多糖核酸在治疗小儿反复呼吸道感染及哮喘开辟了免疫治疗的新方向，通过调节机体内的细胞免疫、体液免疫、刺激网状内皮系统，激活单核－巨噬细胞功能，增强自然杀伤细胞功能来增强机体抗病能力；通过稳定肥大细胞，封闭IgE功能，减少脱颗粒细胞释放活性物质，以及具有抗乙酰胆碱所致的支气管痉挛作用，达到抗过敏及平喘作用。在常规治疗的基础上，加用卡介菌多糖核酸，缩短疗程，降低毒副作用，减轻症状，减少复发。

目前的市售卡介菌多糖核酸为注射剂，在临床应用方面存在着些许不足：卡介菌多糖核酸给药频次高，给药时间长，采用注射给药需要患者到医院治疗，用药不便。这些不足使患者不能坚持用药，影响疗效，特别是小儿患者的顺应性差。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供一种卡介菌多糖核酸为活性成分的口含片，是由卡介菌多糖核酸与药学上可接受的辅料制成的药物组合物。

本发明所述卡介菌多糖核酸口含片，其特征在于，所述口含片由以下重量份的组分制成：卡介菌多糖核酸3-15 份，填充剂90-120份，粘合剂3-10份，矫味剂2-6份，润滑剂0.5-3份。

所述填充剂为可溶性辅料，包括但不限于蔗糖、木糖、乳糖、三氯蔗糖、甘露醇、木糖醇、山梨醇中的一种或几种；所述粘合剂为聚维酮K₃₀；所述矫味剂包括但不限于薄荷脑、薄荷油、乙基麦芽酚、柠檬酸、酒石酸、苹果酸中的一种或几种；所述润滑剂包括但不限于硬脂酸镁、硬脂酸钙、微粉硅胶、滑石粉、山嵛酸甘油酯中的一种。

本发明所述的重量份可以是μg、mg、g、kg等医药领域公知的质量单位。

本发明涉及的卡介菌多糖核酸口含片的剂量以单元剂型中存在的量计算，在单元剂型中本发明涉及的卡介菌多糖核酸含量约为3-15mg。

本发明提供的卡介菌多糖核酸口含片以下几种制备方式：

原辅材料准备：卡介菌多糖核酸3-15 份，填充剂90-120份，粘合剂3-10份，矫味剂2-6份，润滑剂0.5-3份。上述原辅料过80目筛备用。

方法一：

卡介菌多糖核酸、填充剂过80目筛混匀，加入喷雾干燥制粒机；粘合剂、矫味剂溶解在50%的乙醇溶液中，喷雾干燥一步制粒，22目筛整粒。控制颗粒水分在2%左右，颗粒加入润滑剂混匀。压片机压片，控制硬度在5Kg以上。

方法二：

矫味剂混匀，依次加入卡介菌多糖核酸、粘合剂、填充剂混匀，再加入50%的乙醇制湿颗粒，湿颗粒在45-50℃鼓风干燥，22目筛整粒，控制水分在2%左右，加入润滑剂混匀。压片机压片，控制硬度在5Kg以上。

方法三：

矫味剂混匀，依次加入卡介菌多糖核酸、粘合剂、填充剂混匀，最后加入润滑剂混匀。压片机压片，控制硬度在5Kg以上。

本发明提供了一种以卡介菌多糖核酸为活性成分的口含片，口腔黏膜作为给药部位，避免了活性成分通过人体胃肠道和肝脏等器官时所产生的损耗。口含片制剂形式有利于储存跟运输，同时也为临床治疗和预防哮喘及反复呼吸道感染提供了新的更便利，患者依从性更好给药途径。

具体实施方式

本发明所需的卡介菌多糖核酸可通过按照2000版《中国生物制品规程》P235-239记载的制备，也可以通过实施例1的方法获得，但本领域技术人员可以理解卡介菌多糖核酸的制备包括但并不限于这两种方法：

实施例1

1）卡介菌的培养和收获

1. 菌体培养：将液体低温保藏的菌种（中国卡介苗制备用卡介菌株D2PB302，中国药品生物制品检定所）室温下溶解，接种于马铃薯苏通培养基，37℃连续培养14-20天；或在37℃连续培养15天后转种于改良的液体苏通培养基，37℃连续培养14-20天。

2. 菌体收集：待菌体生长至对数期时，对培养瓶逐瓶检查后，收集菌膜，加入适量去离子蒸馏水洗涤，压干后称重。

2）卡介菌多糖核酸混合物的制备

1. 菌体破碎和热酚处理：将收集的菌体按10︰1的比例加入纯化水，以组织捣碎匀浆机(12000rpm/min)破碎菌体，3 min×3次，将菌体捣碎，然后再加入破碎菌悬液0.5-2.0倍体积量的热苯酚（30～100℃），在低速搅拌中保温30分钟～1小时。

2. 卡介菌多糖核酸混合物的提取：将热酚好的混合液自然沉淀1～10天，吸取上清液，管式离心机高速离心后，上清经0.45μm无菌滤器过滤，即为卡介菌多糖核酸混合物。

3）精制卡介菌多糖核酸提取物的制备

可通过以下两种方法来制备卡介菌多糖核酸提取物：

1. 透析法精制卡介菌多糖核酸提取物

将卡介菌多糖核酸混合物人工装入透析袋（截流分子量>5000道尔顿）中在100倍体积的纯化水中透析7～10天，每天更换透析池中纯化水，每天从透析袋中抽样检测苯酚残留量。将透析好的卡介菌多糖核酸混合物中加入适量乙醇使含醇量60～85％，自然沉淀1～10天后，沉淀物用无水乙醇充分搅拌均匀、离心洗涤3次。然后用乙醚洗涤离心3次后，放至干燥器干燥，干燥2～5天即为精制卡介菌多糖核酸提取物。

2. 凝胶柱层析法精制卡介菌多糖核酸提取物

采用美国密里博（MILLIPORE）公司制造的K- PRIME 40Ⅱ凝胶层析过滤系统和GH-25凝胶介质进行卡介菌多糖核酸、苯酚及卡介菌蛋白的分离。具体的制备过程如下：

（1）打开主机及监控电脑，将系统预热20至30分钟，并检查管道，柱体是否畅通完好，是否存在气泡。

（2）平衡：用0.9%生理盐水以1000mL/分钟经柱正向流动，直至柱前柱后电导、pH一致时结束平衡过程。

（3）上样：将卡介菌多糖核酸混合物经上样系统进行上样，上样速度为600mL/分钟。

（4）洗脱：上样结束后，用0.9%生理盐水以800mL/分钟速度进行洗脱，采用紫外分光仪（波长采用260 nm或280nm）检测流出液，收集目的峰，将收集的目的峰通过0.45μm无菌滤器过滤，即为精制卡介菌多糖核酸提取液。

（5） 清洗：洗脱后用注射用水对系统进行清洗直至柱前、柱后电导接近于零时为止。

将所收集的精制卡介菌多糖核酸提取液进行醇沉，在精制卡介菌多糖核酸提取液中加入药用乙醇进行醇沉，含醇量为70-75％。自然沉淀4天后，收集沉淀物。沉淀物通过无水乙醇充分搅拌均匀、离心洗涤3次，然后用乙醚洗涤离心3次后，放至干燥器干燥，干燥物即为精制卡介菌多糖核酸提取物。

实施例2

处方如下：

卡介菌多糖核酸 3g

蔗糖 40g

甘露醇 50g

聚维酮K₃₀6g

薄荷脑 1g

柠檬酸 1g

硬脂酸镁 0.5g

制备方法：原辅料过80目筛备用；卡介菌多糖核酸、蔗糖、甘露醇按等量递加法过80目筛混匀；聚维酮K₃₀、薄荷脑、柠檬酸溶解在50%的乙醇溶液中，喷雾干燥一步制粒；控制颗粒水分在2%左右，22目筛整粒，加入硬脂酸镁混匀。压片机压迫，硬度控制在5kg以上。双铝箔分包装。

实施例3

处方如下：

卡介菌多糖核酸 10g

蔗糖 80g

木糖醇 40g

聚维酮K₃₀3g

薄荷脑 1g

酒石酸 5g

硬脂酸镁 1.5g

制备方法：原辅料过80目筛备用；卡介菌多糖核酸、蔗糖、木糖醇按等量递加法过80目筛混匀；聚维酮K₃₀、薄荷脑、酒石酸溶解在50%的乙醇溶液中，喷雾干燥一步制粒；控制颗粒水分在2%左右，22目筛整粒，加入硬脂酸镁混匀。压片机压迫，硬度控制在5kg以上。双铝箔分包装。

实施例4

处方如下：

卡介菌多糖核酸 15g

乳糖 60g

蔗糖 40g

聚维酮K₃₀4g

薄荷油 2g

苹果酸 4g

微粉硅胶 1g

制备方法：原辅料过80目筛备用；卡介菌多糖核酸、蔗糖、乳糖按等量递加法过80目筛混匀；聚维酮K₃₀、薄荷油、苹果酸溶解在50%乙醇溶液中，湿法制粒；湿颗粒在45-50℃鼓风干燥，控制颗粒水分在2%左右，22目筛整粒，加入微粉硅胶混匀。压片机压迫，硬度控制在5kg以上。双铝箔分包装。

实施例5

处方如下：

卡介菌多糖核酸 5g

三氯蔗糖 30g

木糖 60g

聚维酮K₃₀6g

薄荷油 2g

柠檬酸 4g

滑石粉 2g

制备方法：原辅料过80目筛备用；卡介菌多糖核酸、三氯蔗糖、木糖按等量递加法过80目筛混匀；聚维酮K₃₀、薄荷油、柠檬酸溶解在50%乙醇溶液中，湿法制粒；湿颗粒在45-50℃鼓风干燥，控制颗粒水分在2%左右，22目筛整粒，加入滑石粉混匀。压片机压迫，硬度控制在5kg以上。双铝箔分包装。

实施例6

处方如下：

卡介菌多糖核酸 15g

乳糖 70g

甘露醇 40g

聚维酮K₃₀10g

薄荷脑 3g

乙基麦芽酚 3g

山嵛酸甘油酯 3g

制备方法：原辅料过80目筛备用；薄荷脑、乙基麦芽酚过80目筛混匀，再依次加入卡介菌多糖核酸、聚维酮K₃₀、甘露醇、乳糖过80目筛混匀；最后加入已过80目筛的山嵛酸甘油酯混匀。压片机压迫，硬度控制在5kg以上。双铝箔分包装。

实施例7

处方如下：

卡介菌多糖核酸 8g

乳糖 60g

山梨醇 40g

聚维酮K₃₀8g

薄荷脑 3g

酒石酸 2g

硬脂酸钙 2g

制备方法：原辅料过80目筛备用；薄荷脑、酒石酸过80目筛混匀，再依次加入聚维酮K_30、卡介菌多糖核酸、山梨醇、乳糖过80目筛混匀；最后加入已过80目筛的硬脂酸钙混匀。压片机压迫，硬度控制在5kg以上。双铝箔分包装。

口含片药效学实验例

致敏试验：SD大鼠分为8组，分别为致敏组、卡介菌多糖核酸注射液组、实验组（实施例2-7的口含片组），每组10 只。以卵白蛋白（OVA）首次致敏，分别在第0 天、第7 天、第14 天OVA (0. 01 % OVA ,0. 2 ml/ 只) 腹腔注射致敏，第28 天、第29 天、第30 天OVA (0. 2 % OVA ,50μl/ 只) 麻醉后滴鼻激发，1 次/ d。此为哮喘组。

试验方法：卡介菌多糖核酸注射液组(0.35 mg·kg- 1 )，均为首次致敏前7 d 腹腔注射给药。卡介菌多糖核酸口含片组（1 mg·kg- 1）为首次致敏前7 d 口腔给药。在末次激发48 h 后，大鼠以50 mg/ kg 戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后，行气管插管，以0.8 ml PBS 灌洗3 次,回收率在80 %以上。4 ℃1500 r/ min ,离心10 min ,沉淀涂片并行苏木素-伊红染色,连续计数200 个细胞并计数其中嗜酸粒细胞(eosinop hil ,EOS) 数,得EOS 百分比。结果见表1。

表1 卡介菌多糖核酸不同给药途径

对支气管哮喘大鼠气道炎症的影响（n=10）

注：与哮喘组相比，^*P﹤0.05；^**P﹤0.01；与卡介菌多糖核酸注射液组相比，^△P>0.05

结果表明，本发明的卡介菌多糖核酸口含片与哮喘组对比具有极显著差异，与卡介菌多糖核酸注射液无显著性差异。

Claims

1.一种卡介菌多糖核酸为活性成分的口含片，其特征在于，所述口含片由以下重量份的组分制成：卡介菌多糖核酸3-15 份，填充剂90-120份，粘合剂3-10份，矫味剂2-6份，润滑剂0.5-3份。

2.根据权利要求1所述的口含片，其特征在于，所述的填充剂为可溶性填充剂。

3.根据权利要求1所述的口含片，其特征在于，所述的填充剂为蔗糖、木糖、乳糖、三氯蔗糖、甘露醇、木糖醇、山梨醇中的一种或几种。

4.根据权利要求1所述的口含片，其特征在于，所述的粘合剂为聚维酮K₃₀。

5.根据权利要求1所述的口含片，其特征在于，所述的矫味剂为薄荷脑、薄荷油、乙基麦芽酚、柠檬酸、酒石酸、苹果酸中的一种或几种。

6.根据权利要求1所述的口含片，其特征在于，所述的润滑剂为硬脂酸镁、硬脂酸钙、微粉硅胶、滑石粉、山嵛酸甘油酯中的一种。

7.根据权利要求1所述的口含片，其特征在于其制备方法为：

（1）原辅材料准备：卡介菌多糖核酸3-15 份，填充剂90-120份，粘合剂3-10份，矫味剂2-6份，润滑剂0.5-3份，所有原辅材料过80目筛备用；

（2）卡介菌多糖核酸、填充剂过80目筛混匀，加入喷雾干燥制粒机；粘合剂、矫味剂溶解在50%的乙醇溶液中，喷雾干燥一步制粒，22目筛整粒；控制颗粒水分在2%左右，颗粒加入润滑剂混匀；压片机压片，控制硬度在5Kg以上。

8.根据权利要求1所述的口含片，其特征在于其制备方法为：

（2）矫味剂混匀，依次加入卡介菌多糖核酸、粘合剂、填充剂混匀，再加入50%的乙醇制湿颗粒，湿颗粒在45-50℃鼓风干燥，22目筛整粒，控制水分在2%左右，加入润滑剂混匀；压片机压片，控制硬度在5Kg以上。

9.根据权利要求1所述的口含片，其特征在于其制备方法为：

（2）矫味剂混匀，依次加入卡介菌多糖核酸、粘合剂、填充剂混匀，最后加入润滑剂混匀；压片机压片，控制硬度在5Kg以上。

10.权利要求1所述的口含片，其特征在于用于预防和治疗呼吸道感染、哮喘。