CN1425379A - 一种治疗心脑血管疾病的中药有效部位复方制剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明为一种治疗心脑血管疾病的中药有效部位复方制剂及其制备方法。该复方制剂由从丹参中提取的总丹参酚酸和从三七中提取的三七总苷按一定的配比组合制成。本发明的复方药物既提高了传统中药的药理作用和临床疗效，同时降低了杂质含量，可制成各种制剂，用于治疗脑梗塞、脑缺血、冠心病、心绞痛、心肌缺血、心肌梗死、心衰、心律失常等，实现了现代中药复方安全、有效、稳定、可控、方便的目的。
Description
技术领域
本发明属医药技术领域，具体涉及一种治疗心脑血管疾病的中药有效部位的组合物及其制备方法，具体说是由中药丹参中的总丹酚酸和三七中的三七总苷组成的药物组合物及其制备方法。
背景技术
丹参是一味传统的活血化瘀的中药，大量的研究表明，丹参的有效成分为总丹参酚酸，其中丹酚酸B镁盐的作用最强，而传统的水提法并不能得到含丹酚酸B较多的总丹参酚酸。
三七是一味传统的散瘀止血、消肿定痛的中药。大量的研究表明，三七的有效成分为三七总苷。用传统的提取方法提取的三七总苷含量不高，杂质较多，病人用药后的不良反应较多，特别是注射用药时，该问题就显得尤为重要。
中医认为气滞血瘀是心脑血管病发病的一个主要原因，以丹参、三七组成的中药复方用于气滞血瘀心脑血管病，疗效显著。但传统的中药复方存在着成分不清、机理不明、质量难控、疗效不稳的缺点。
发明内容
本发明的目的在于提供一种由中药丹参、三七的有效部位组成的药物组合物，即现代中药复方制剂，其成分明确、质量易控、疗效可靠，可用于治疗心脑血管疾病。并提出该中药复方制剂的制备方法。
本发明提出的中药有效部位复方制剂，是由从丹参中提取的总丹参酚酸和从三七中提取的三七总苷为原料组配而成。
本中药有效部位复方制剂，其比较合适的配比(按重量)为：
总丹参酚酸(含丹酚酸B镁盐50％以上) 1份
三七总苷(含人参皂苷Rg1、Rb1、R1占50％以上)0.1-15份，
上述中药组合物所治的心脑血管疾病包括：脑梗塞、脑缺血、冠心病、心绞痛、心肌缺血、心肌梗死、心衰、心律大常等。
本发明还提出了上述有效部位组合物的制备方法。
对丹参，以丙酮进行渗漉法提取，再经大孔树脂纯化，得到含50％以上丹酚酸B镁盐的总丹参酚酸。
对三七，以乙醇进行渗漉法提取，再经大孔树脂纯化，得到含50％以上三七总苷提取物。
将上述2种组份按配比再配上相应的各种辅剂，即可制得各种复方制剂。
所述制剂可以是注射剂、输液、粉针剂、片剂、胶囊剂、缓释片、滴丸、冲剂、微粒剂。
所述辅剂为各种制剂的常规辅料。
本发明中，总丹参酚酸及黄芪总苷的提取纯化的具体步骤如下：
1.丹酚酸提取纯化
丹参酚酸性质不稳定，遇酸、碱、热等剧烈条件会发生降解，故采用条件温和、效率高的渗漉法。以丹酚酸B镁盐的得率及其纯度为指标，对影响丹参酚酸得率的主要因素：所用丙酮浓度、量、渗漉前浸泡时间按三因素三水平进行L9(33)正交试验。试验结果表明，丙酮浓度在50～70％之间较好，溶剂使用量为丹参重量10倍以上，浸泡时间影响不大，一般在20分钟以上。
将丙酮渗漉提取液，浓缩到原体积的1/10左右后，至无丙酮味，加少量水稀释后，按比吸附量1∶1(树脂量与药材量)通过大孔树脂柱，先以去离子蒸馏水洗脱，再以10倍以上柱体积的20-40％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，即得丹酚酸成分。再以高浓度乙醇液洗去脂溶性杂质，再进行下一轮纯化。
丹酚酸成分对热不稳定，故采用冰冻干燥法进行浓缩干燥。于低温(＜50℃)减压浓缩除去乙醇，继续浓缩至原体积的1/10左右，以0.45μm微孔滤膜过滤，浓缩液按照常规冻干工艺：-50℃预冻3-4小时，-10℃冻干，升温至20℃保温2-3小时，最终得黄色疏松结晶性粉末。其中，含丹酚酸B镁盐这50％以上。
2.三七总苷提取纯化
三七总苷可溶于水和乙醇，考虑到三七中含有大量淀粉，不宜采用水和低浓度的乙醇，以免糊化。故选择55％～95％乙醇作为提取溶剂，采取以下三种提取方法：渗漉法、浸渍法、水煎醇沉法，在此基础上选定乙醇浓度、提取方法和乙醇用量作为考察的3个因素，进行三因素三水平L9(33)试验。结果表明影响最大的是提取方法，其次是乙醇浓度，而乙醇用量则影响很小，渗漉法的效果最好。
渗漉提取液，浓缩到原体积的1/10左右后，加少量水稀释，按比吸附量1∶1(树脂量与药材量)通过大孔树脂柱，先以去离子蒸馏水洗脱，再以10倍以上柱体积20-40％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩即得。其中，人参皂苷Rg1、Rb1、R1占50％以上。
总丹参酚酸和三七总苷组合物的药效学试验：
为了考察不同配比的总丹参酚酸和三七总苷的药效，找到最佳疗效的组方，设计不同试验，观察总丹参酚酸和三七总苷对犬冠状动脉结扎造成心肌梗塞模型的治疗作用。实验选择的配比为(总丹参酚酸/三七总苷)10/0、1/1、1/3、1/7、1/10、1/15、0/10，其给药剂量总的均为1mg/kg；另加阴性对照生理盐水组、阳性对照恬尔心组，共9组。
试验有关文献报告的方法进行。分别在给药后30min、60min、90min、120min、180min记录心外膜电图的变化。心外膜电图观察指标：以ST段升高2mV以上的导联数(NST)和ST段升高值的总和(∑ST)为指标观察给药前后的变化，并计算心肌缺血程度(∑ST)和范围(NST)。以用药后不同时间实测值与用药前进行比较，以用药后不同时间变化百分率(用药前为100％)进行组间比较。
每组动物数为5条，给总丹参酚酸/三七总苷1.0mg/kg(临用前用生理盐水新鲜配制)，阳性对照药剂量为0.5mg/kg，阴性对照组给1.0mg/kg的生理盐水，三者均静脉注射单次给药。观察犬心外膜电图，观察时间为给药后0～3小时。
实验结果如下：
(1)总丹参酚酸和三七总苷对心肌缺血程度(心外膜电图∑ST)的影响：冠脉结扎后，心外电图ST段总和(∑ST)明显升高。生理盐水组120min时∑ST升高达26.5±12.1％；总丹参酚酸和三七总苷静脉给药后均能减轻心肌缺血程度，其中1/1、1/3、1/7和1/10组及阳性对照组∑ST显著下降(P＜0.01)，并有一定的剂量关系。作用从给药30min持续至180min，各时间点与生理盐水组比较均有显著差异(P＜0.01)。实验结果见表1。
实验结果表明，总丹参酚酸和三七总苷静脉给药对犬冠脉结扎引起的急性心肌缺血程度有显著的治疗作用，且该作用与药物配比有关。
给药前后变化的统计检验用各组不同时间点变化值与生理盐水组同一时间点变化值作组间方差分析检验。
(2)总丹参酚酸和三七总苷对心肌缺血范围(心外膜电图N-ST)的影响：总丹参酚酸和三七总苷能缩小心肌缺血范围，降低N-ST值，作用可持续180min。其中1/1、1/3、1/7组及阳性对照组与生理盐水组同时间点比较，有显著差异(P＜0.05)或极显著差异(P＜0.01)，1/10组仅在60min时差异显著(P＜0.05)。实验结果见表2。
实验结果表明，总丹参酚酸和三七总苷静脉注射能显著降低心肌缺血范围，且该作用与药物配比有关。
(3)总丹参酚酸和三七总苷对心肌梗塞范围的定量组织学检测的影响：用定量组织学检测心肌梗塞范围即用N-BT染色显示总丹参酚酸和三七总苷对心肌梗塞范围的影响与心外膜电图测定的结果一致。总丹参酚酸和三七总苷静脉注射均能减少心肌梗塞范围。其中1/1、1/3、1/7组及阳性对照组与生理盐水组比较，有显著差异(P＜0.05)或极显著差异(P＜0.01)，1/10组仅对“梗塞区/全心”差异显著(P＜0.05)。实验结果见表3。
实验结果表明，总丹参酚酸和三七总苷静脉给药对犬冠脉结扎引起的心肌梗塞范围有显著的改善作用，且该作用与药物配比有关。
实验结果证明，总丹参酚酸和三七总苷静脉注射能显著降低冠脉结扎犬的心肌缺血的程度，缩小心肌缺血范围，定量组织学检测与心外膜电图测定的结果一致，与生理盐水对照组比较，梗塞区显著缩小，证明总丹参酚酸和三七总苷静脉注射对犬冠状动脉结扎引起的心肌梗塞有明显的治疗作用。实验结果还证明，总丹参酚酸和三七总苷的配比对药效有影响，从实验结果分析，总丹参酚酸和三七总苷的最佳配比应为1/3～1/7。
具体实施方式
实施例1：
取丹参10kg，用10倍量的70％的丙酮浸泡30min后开始渗漉，渗漉液减压浓缩到没有丙酮味，用适当体积的水稀释浓缩液，按照比吸附量1∶1(树脂量与药材量)通过AB-8大孔树脂柱，即用10kg大孔树脂填充柱。先以4倍体积去离子蒸馏水洗脱，再以10倍柱体积20％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，即得丹酚酸成分。40℃减压浓缩除去乙醇，继续浓缩至原体积的1/10，以0.45微孔滤膜过滤，浓缩液按以下工艺冻干：-50℃预冻4小时，-10℃冻干，升温至20℃保温3小时，然后得到黄色疏松结晶型粉末。其中含丹酚酸B镁盐50％以上。
将10kg三七粉碎成粗粉(20～40目)，按中国药典收载的渗漉法，用10倍量75％的乙醇浸渍24h后，以每公斤每分钟2ml速度缓慢渗漉，收集渗漉液；减压浓缩渗漉液至原体积的1/10，加适量水稀释，按比吸附量1∶1(树脂量与药材量)通过AB-8大孔树脂柱，先用5倍体积的去离子蒸馏水洗脱，再用12倍柱体积的20％的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩即得。其中含人参皂苷Rg1、Rb1、R1 50％以上。
取丹参酚酸提取物2g，三七总苷6g混合后用适量注射用水溶解，加甘露醇8g，按照常规冻干工艺冻干，即得注射用冻干粉。
实施例2：
取丹参10kg，用10倍量的50％的丙酮浸泡30min后开始渗漉，渗漉液减压浓缩到没有丙酮味，用适当体积的水稀释浓缩液，按照比吸附量1∶1(树脂量与药材量)通过AB-8大孔树脂柱，即用10kg大孔树脂填充柱。先以4倍体积去离子蒸馏水洗脱，再以12倍柱体积30％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，即得丹酚酸成分。45℃减压浓缩除去乙醇，继续浓缩至原体积的1/10，以0.45微孔滤膜过滤，浓缩液按以下工艺冻干：-50℃预冻3小时，-10℃冻干，升温至20℃保温2小时，然后得到黄色疏松结晶型粉末。其中含丹酚酸B镁盐50％以上。
将10kg三七粉碎成粗粉(20～40目)，按中国药典收载的渗漉法，用12倍量75％的乙醇浸渍12h后，以每公斤每分钟3ml速度缓慢渗漉，收集渗漉液；减压浓缩渗漉液至原体积的1/10，加适量水稀释，按比吸附量1∶1(树脂量与药材量)通过D101大孔树脂柱，先用4倍体积的去离子蒸馏水洗脱，再用10倍柱体积的40％的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩即得。其中含人参皂苷Rg1、Rb1、R1 50％以上。
取丹参酚酸提取物2g，加注射用水溶解；取三七总苷14g，加注射用水溶解。合并两部分溶液，按常规方法配制成1000ml药液，过滤，精滤，灌封，灭菌，检验，得20ml/支注射剂共50支。
表1 犬冠脉结扎对心外膜电图ST段总和(∑ST)的影响(mV，x±SD，n＝5只/组)组别 剂量 指标 0min 30min 60min 90min 120min 180min生理盐水 1ml/kg x±SD 332.8±120.5 366.0±133.2 411.9±178.5 412.0±185.0 422.8±172.3 398.4±140.1
变化％ 10.6±6.0 22.2±12.4 21.8±15.0 26.5±12.1 23.0±20.6恬尔心 0.5mg/kg x±SD 278.9±124.6 180.0±134.0 177.4±140.7 176.6±155.0 177.5±135.9 204.3±146.8
变化％ -42.4±21.3*** -43.8±21.1*** -45.0±24.0*** -42.7±18.5*** -33.0±24.0***10/0 1mg/kg x±SD 317.6±103.0 289.9±107.4 246.7±110.2 294.0±83.1 261.2±77.9 243.6±92.1
变化％ 2.9±2.2 8.0±5.6 16.8±10.0 9.2±6.7 11.1±7.51/1 1mg/kg x±SD 173.7±59.8 119.0±61.8 129.3±66.2 131.7±65.6 121.1±65.1 121.9±34.9
变化％ -33.4±11.1*** -27.5±13.6*** -26.1±12.3*** -32.7±12.2*** -27.8±13.5***1/3 1mg/kg x±SD 349.8±162.1 256.0±125.1 249.8±124.4 261.5±130.6 249.5±117.7 228.9±104.6
变化％ -25.3±16.4*** -28.2±11.5*** -26.1±6.6*** -28.4±5.3*** -31.6±16.6***1/7 1mg/kg x±SD 271.5±65.7 174.2±78.4 188.4±102.4 190.4±113.4 196.1±90.4 203.6±118.0
变化％ -38.0±18.2*** -33.7±26.9*** -34.3±30.1*** -30.7±21.9*** -29.7±28.9***1/10 1mg/kg x±SD 264.2±126.8 161.8±114.0 148.0±104.7 140.7±113.4 160.7±113.3 150.7±117.9
变化％ -40.9±18.1*** -43.5±21.7*** -46.4±25.4*** -40.9±20.2*** -44.6±21.7***1/15 1mg/kg x±SD 308.5±155.0 267.9±88.3 279.1±120.0 285.2±82.9 310.4±103.5 224.7±66.1
变化％ 7.9±3.9 14.6±6.7 11.0±7.2 8.9±5.7 3.1±2.50/10 1mg/kg x±SD 348.1±123.8 286.0±94.7 277.9±108.6 265.2±105.4 243.9±75.9 301.6±133.3
变化％ 12.6±7.0 8.6±7.5 10.3±6.2 16.9±8.5 17.3±10.5**P＜0.05，***P＜0.01与生理盐水组比较
表2 犬冠脉结扎对心肌梗塞范围(N-ST)的影响(点，x±SD，n＝5只/组)组别 剂量 指标 0min 30min 60min 90min 120min 180min生理盐水 1ml/kg x±SD 28.4±1.3 28.6±2.1 28.6±1.7 28.4±1.1 28.4±1.5 27.8±1.5
变化％ 0.6±3.0 0.7±2.9 0.2±7.4 0.2±8.1 -1.8±10.0恬尔心 0.5mg/kg x±SD 26.6±2.1 18.8±5.0 18.0±3.7 17.6±4.9 17.4±3.8 17.2±5.4
变化％ -29.9±13.8*** -32.3±13.2*** -34.0±17.3*** -34.8±12.5*** -35.4±19.4***10/0 1mg/kg x±SD 26.6±3.7 22.4±3.2 23.2±3.1 23.6±2.3 22.4±2.6 23.2±2.2
变化％ -15.0±12.7 -12.2±10.7 -10.2±12.4 -14.5±14.9 -11.9±9.71/1 1mg/kg x±SD 26.4±1.1 18.8±4.1 20.0±4.1 22.2±3.8 19.0±4.0 19.8±2.2
变化％ -29.1±13.0*** -24.6±12.4** -16.2±12.0*** -28.4±11.9** -25.0±7.5**1/3 1mg/kg x±SD 27.0±2.2 22.0±3.7 20.8±6.1 21.8±5.4 19.6±3.2 18.8±3.3
变化％ -18.6±11.7** -23.5±19.8** -19.7±16.8*** -27.7±8.0*** -30.7±7.7***1/7 1mg/kg x±SD 27.8±1.8 20.8±1.6 20.6±3.4 20.8±4.8 20.6±3.2 19.6±3.0
变化％ -24.9±7.9*** -25.6±13.6*** -24.9±17.6*** -26.0±9.2*** -29.5±9.6***1/10 1mg/kg x±SD 28.7±2.8 23.9±5.6 24.7±4.4 22.2±3.8 24.6±4.0 23.6±3.9
变化％ -14.0±17.7 -11.2±3.9** -8.2±13.0 -9.5±13.9 -16.9±15.01/15 1mg/kg x±SD 26.4±2.1 23.9±5.6 24.7±4.4 22.2±3.8 24.6±4.0 23.6±3.9
变化％ -9.2±13.0 -16.0±15.7 -11.3±14.1 -17.2±17.0 -6.4±13.50/10 1mg/kg x±SD 28.8±1.7 26.3±4.1 25.9±6.8 27.2±4.3 25.7±3.5 26.2±3.5
变化％ 1.6±1.0 4.4±1.9 -2.2±1.3 -0.8±3.8 2.8±3.1**P＜0.05，***P＜0.01与生理盐水组比
表3犬冠脉结扎对N-BT染色测定心肌梗塞范围的影响
( x±SD，n＝5只/组)组别 剂量 梗塞区/全心(％) 梗塞区/左心室(％)生理盐水 1ml/kg 13.7±2.1 22.8±3.5恬尔心 0.5mg/kg 6.7±1.5*** 10.9±2.0***10/0 1mg/kg 10.2±4.6 16.3±8.11/1 1mg/kg 9.4±3.0** 14.5±5.2***1/3 1mg/kg 7.8±2.3*** 12.6±3.8***1/7 1mg/kg 7.0±2.4*** 10.5±3.8***1/10 1mg/kg 11.4±2.5** 17.0±5.31/15 1mg/kg 11.2±4.3 17.9±7.20/10 1mg/kg 12.0±4.3 18.8±7.6**P＜0.05，***P＜0.01与生理盐水组比较
Claims (7)
1、一种治疗心脑血管疾病的中药有效部位复方制剂，其特征在于由从丹参中提取的总丹参酚酸和从三七中提取的三七总苷为原料组配而成。
2、根据权利要求1所述的中药有效部位复方制剂，其特征在于原料组份的重量配比为：
含丹酚酸B镁盐50％以上的总丹参酚酸 1份，
含人参皂苷Rg1、Rb1、R1 50％以上的三七总苷 0.1-15份。
3、根据权利要求2所述的中药有效部位复方制剂，其特征在于原料组份的重量配比为：总丹参酚酸：三七总苷为1∶3-1∶7。
4、根据权利要求1或2或3所述的中药有效部位复方制剂，其特征在于加入相应辅料，成为注射剂、输液、粉针剂、片剂、胶囊剂、缓释片、滴丸、冲剂、微粒剂。
5、一种如权利要求1-3所述的治疗心脑血管疾病的中药有效部位复方制剂的制备方法，其特征在于，对丹参，以丙酮进行渗漉法提取，再经大孔树脂纯化，得到含50％以上丹酚酸B镁盐的总丹参酚酸；对三七，以乙醇进行渗漉法提取，再经大孔树脂纯化，得到含50％以上三七总苷提取物；将取两种有效部位，按配比混合，即制得各种制剂。
6、根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于提取丹参酚酸时，丙酮浓度在50～70％之间，溶剂使用量为丹参重量10倍以上，浸泡时间在20分钟以上；将丙酮渗漉提取液，浓缩到原体积的1/10左右后，至无丙酮味，加少量水稀释后，按比吸附量1∶1(树脂量与药材量)通过大孔树脂柱，先以去离子蒸馏水洗脱，再以10倍以上柱体积的20-40％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，即得丹酚酸成分；再以高浓度乙醇液洗去脂溶性杂质，再进行下一轮纯化，采用冰冻干燥法进行浓缩干燥，最终得黄色疏松结晶性粉末。
7、根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于提取三七总苷时，选择55％～95％乙醇作为提取溶剂；渗漉提取液，浓缩到原体积的1/10左右后，加少量水稀释，按比吸附量1∶1(树脂量与药材量)通过大孔树脂柱，先以去离子蒸馏水洗脱，再以10倍以上柱体积20-40％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩即得。
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