CN1413588A - 含有蒺藜果总皂苷的药物组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及含有蒺藜果总皂苷的药物组合物及其制备方法,特别是涉及蒺藜果总皂苷在预防、治疗人或动物心肌和脑组织缺血、缺氧中的应用。本发明的药物组合物含有蒺藜果总皂苷中的有效成分蒺藜呋甾皂苷和蒺藜螺甾皂苷的含量为50%(w/w)以上,并含有一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂的药物组合物。
Description
技术领域:
本发明涉及含有蒺藜果总皂苷的药物组合物及其制备方法,特别是涉及蒺藜果总皂苷在预防、治疗人或动物心肌和脑组织缺血、缺氧中的应用。
背景技术:
蒺藜Tribulus terrestris L.在植物分类学上属于蒺藜科植物蒺藜属植物。蒺藜果及茎叶均含有许多种甾体皂苷,近几年来对蒺藜的皂苷成分进行了一些研究,发现蒺藜皂苷具有广泛的生物活性。
六十年代初,Nag.和Tombesi等人先后从蒺藜果中分离出了薯蓣皂甙元(Diosgenin)和海柯皂甙元及3-脱氧薯蓣皂甙元-3-deo-xy-Δ33-diosgenin.。1996年wang yan等人从蒺藜果中分离出terrestrosin A,D,等10个螺甾皂苷及terrestrosinH,G,I等6个呋甾皂苷单体化合物。但迄今尚没有关于将蒺藜果总皂苷开发成药物的报导。
发明内容:
本发明的目的在于提供一类新的具有药用的以蒺藜果总皂苷的组合物为基本活性成分。
本发明的另一个目的是提供生产以蒺藜果总皂苷为基本活性成分的药物组合物的方法。
本发明的进一步的目的是提供一种治疗心脏、脑动脉血管硬化或栓塞引起的心肌和脑组织缺血、缺氧及氧化脂质升高的药物组合物。
本发明的另一目的是提供一种以蒺藜果总皂苷的组合物为基本活性成分制备治疗心脏、脑动脉血管硬化或栓塞引起的心肌和脑组织缺血、缺氧及氧化脂质升高的药物方面的应用。本发明的蒺藜果总皂苷中的基本活性成分是由螺甾皂苷和呋甾皂苷组成。其制备工艺是:
a、取原料蒺藜果,用0%-95%醇提取1-10次,最好使用70%醇提取,提取3次,提取液合并,过滤,滤液经过大孔吸附树脂柱,可以是AB-8;b、用水洗至无色后,用40%-95%醇洗脱后收集洗脱液,最佳用60%醇洗脱,回收醇,至无醇味,减压下或常压下浓缩成浸膏状或干粉;c、用60%-95%醇溶解,最好用80%醇溶解,滤过,除去沉淀物并回收滤液,减压回收醇后得到所需的蒺藜果总皂苷。化学分析表明,所得终产物中西洋参茎叶总皂苷含量大约为50%以上。
其药物组合物的制备方法包括以下步骤:
(1)提供蒺藜果总皂苷;
(2)将步骤(1)得到蒺藜总皂苷与一种或多种医药上可接受的载体和/或赋形剂相混合。
本发明的药物组合物含有蒺藜果总皂苷中的有效成分蒺藜呋甾皂苷和蒺藜螺甾皂苷的含量为50%(w/w)以上,并含有一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂的药物组合物。
本发明以蒺藜果总皂苷为基本活性成分的药物组合在心脏、脑动脉血管硬化或栓塞引起的心肌和脑组织缺血、缺氧及氧化脂质升高方面有治疗作用。
大量的一般药理学和药效学实验表明;本发明的药物组合物对动物(小鼠、大鼠和犬)的活动和行为没有明显影响。蒺藜果总皂苷分别以200mg/kg和100mg/kg连续灌胃三天,果蒺藜总皂苷以30mg/kg经十二指肠插管给药一次,动物的血压、心率和心电图均基本正常,未发现有统计学上有意义的变化。药效学研究结果显示,本发明的药物组合物(50-100mg/kg)十二指肠给药可减小阻断大脑中动脉(MCAO)所致的大鼠局灶性脑缺血面积;抑制急性不完全性脑缺血模型大鼠的脑血管通透性升高,阻止脑水肿的形成;降低脑缺血后高水平的血栓素A2(TXA2),但对前列环素(PGI2)则无影响,从而改变PGI2/TXA2的比值,抑制体内血栓的的形成;降低脑缺血大鼠血中内皮素含量,提高血中超氧化物歧化酶活性;降低血瘀模型大鼠的血液粘度,抑制血小板聚集;改善血流变性;(200mg/kg)灌胃给药也可促进纤维蛋白溶解;提高小鼠常压耐缺氧能力。此外,(15-30mg/kg)十二指肠给药可增加麻醉犬的脑血流量,降低脑血管阻力,使犬的心率减慢,血压下降。因此,蒺藜果总皂苷对实验性脑缺血有明显的保护作用。
另外,应特别指出的是,可根据需要在本发明的药物组合物中加入一种或多种天然或合成的其他与蒺藜果总皂苷具有协同或辅助作用的活性成分。这些可能被加入的天然或合成的辅助活性成分是本领域技术人员已知的和可以想到的。
可以将蒺藜果总皂苷与一种或多种医药上可接受的载体或赋形剂按适当比例混合,制成适子临床上使用的不同剂型的药物组合物。例如可将所说的组合物配制成可供静脉内,肌肉内、腹腔内、皮下、脑脊髓腔内和嚷内注射给药的注射液,或者制成适于口服给药的片剂、粉末剂。丸剂、胶囊剂和悬浮剂,以及适于局部给药的喷雾剂、霜剂、软膏和栓剂。
为了制备适于胃肠道外途径药的溶液剂,例如可使用蒸馏水、注射用水、等渗氯化钠溶液或葡萄糖溶液,或者低浓度(例如1-100mM)磷酸盐缓冲盐水(PBS)作为载体或赋形剂。可以在这些胃肠道外给药的制剂中加入一种或多种其他辅助成分或添加剂,例如可使用抗坏血酸作为抗氧化剂,使用苯甲酸钠或尼泊金甲酪作为防腐剂,使用二甲基亚砜作为吸收促进剂。
为了制备适于口服给药的片剂、粉末剂,悬浮剂或胶囊剂,可以使用蔗糖、半乳糖、玉米淀粉、明胶、脂质、微晶纤维素、滑石粉等作为载体或赋形剂。在这些适于口服给药的制剂中,还可含有其他适当的添加剂,例如增溶剂、崩解剂、润滑剂、吸收促进剂、分散剂、表面活性剂、味味剂或着色剂等。
最好将本发明的药物组合物制成各种适于口服绐药的剂型,例如片剂、粉末剂、胶囊剂,或口服液或乳剂。这些口服制剂的单位剂量一般包含30-200mg蒺藜果总皂苷。例如用于治疗缺血性心脑疾病时,通常60公斤体重成年人的用药量为每天50-600mg,分三次给药。本发明药物组合物的另一个优选给药途径是静脉内或肌肉内注射适于这些给药途径的注射液。例如对于某些急性心肌梗塞或脑栓塞急性期或恢复期的病人,或心绞痛频繁发作的病人,可将本发明药物组合物的注射液制剂加在等渗葡萄糖溶液或等渗氯化钠溶液中,持续地滴注给药。静脉内给药的剂量一般为每天50-200mg。
本发明进一步提供了所说的含有蒺藜果总皂苷的药物组合物在治疗或预防全身或局部组织,特别是心脑组织缺血、缺氧及相关病理条件中的应用。
具体实施方式:
下面结合实施例对本发明作进一步描述:
实施例1:蒺藜果总皂苷的制备
在容器内将预先清洗并干燥的蒺藜果1000g加适量的水反复加热煮沸(三次,每次60分钟)。收集并合并所得的水浸提物,并过滤,将滤液加于预先用酸和碱处理的大孔径吸附树脂AB-8(中国天津南开大学化学)柱上,用去离子水洗柱直到洗出液无颜色后用65%乙醇(约500ml)洗脱。收集流出的洗脱物并子减压下回流浓缩之,将所得浓缩物置于空真干燥器内MgSO4上方干燥后得到黄色粉末状总皂甙18g(收率1.8%)。
实施例2:蒺藜果总皂苷的成分分析
将按实施例1所述方法提取的蒺藜果总皂苷25.0g溶解于1000ml蒸馏水中,用乙酸乙酯反复萃取5次(每次100mi)收集并合并所得到的乙酸乙酯提取液,进行硅胶柱层析,用CHCl3-MeOH梯度洗脱,合并相同流分,从39-62得A,从63-81得B,从82-112得C。B进行硅胶柱色谱,以CHCl3-EtOH溶剂系统梯度洗脱,每份为100ml,自13-32份得化合物I(86mg),A再次经硅胶分离,以CHCl3-EtOH(9∶1-8∶2)洗脱,每100ml为1份,自21-34份中得一混合物。此混合物经制备HPLC分离,依次用60%,50%,40%MeOH水溶液洗脱得化合物II(72mg)。
化合物I:白色粉末,mp 273-275℃(MeOH),IR(KBr)cm-1 3420,2930,2874,1706,1654,1631,1453,1429,1375,1243,1228,1159,1070,986,920,898,851,772,669.ESl/Ms m/z 915.1(M+-1)-,939.7(M++Na)+,777.1(M++Na-162)+,753.1(M+-H-162)-,615.1(M++Na-162-162)+,591.3(M+-H-162-162)-.1HNMR(δ,C5D5N):0.65(3H,s,19-Me),1.07(3H,s,18-Me),1.06(3H,d,J=6.5Hz,27-Me),1.34(3H,d,J=6.5Hz,21-Me),4.87(1H,d,J=7.5Hz,Gal 1-H),5.14(1H,d,J=7.5Hz,Glc(2)1-H),5.22(1H,d,J=7.2Hz,Glc(1)1-H).经IH-NRR和′3C-NMR光谱分析结果证实,I为新甾体皂苷,命名为蒺藜皂苷A。
化合物II:白色粉末mp263-265℃ IR(KBr)cm-1 3423,1708,1632,1454,1373,987,919,898,856.MALDI/MS m/z 793(M+K)+,777(M++Na)+.1HNMR(δ,C5D5N),0.70(3H,s,19-Me),1.02(3H,s,18-Me),1.08(3H,d,J=6.8Hz,27-Me),1.34(3H,d,J=6.8Hz,21-Me),4.60(1H,d,J=7.5Hz,Gal 1-H),5.11(1H,d,J=7.5Hz,Glc 1-H).经IH-NRR和′3C-NMR光谱分析结果证实化合物II为新化合物,分别命名为蒺藜皂苷B。
实施例3:蒺藜果总皂苷对大鼠体内血栓的影响
是以蒺藜果总皂苷为基本活性成分的药物组合物(以下简称西蒺藜果总皂苷组合物)对大鼠体内血栓的影响体重300-400g的Wistar大鼠,按表5分组给药,每天一次,连续灌胃三天,末次给药30min腹腔注射水合氯醛(360mg/kg)麻醉,仰卧位固定并分离出右侧颈总动脉和左侧颈外静脉,在聚乙烯管的中段放入一根事先称重长约6cm的4号手术线,以肝素生理盐水溶液(50u/ml)充满聚乙烯管腔。当管的一端插入左颈外静脉后,另一端准确地注入肝素(50u/kg)抗凝,然后再插入右颈总动脉。血液从右颈总动脉流至聚乙烯管内,再返流入左颈外静脉,15min后阻断血流,迅速取出丝线称重,总重量减去线量即得血栓湿重,结果见表5。结果发现,蒺藜果总皂苷50和100mg/kg,心脑舒通100mg/kg可明显抑制血栓形成,25mg/kg无效。
实施例4:蒺藜果总皂苷对脑缺血后脑含水量及毛细血管通透性的影响体重250-300gWistar雄性大鼠,3.5%水合氯醛腹腔注射(360mg/Kg)麻醉,分离迷走神经及颈总动脉后尾静脉注射伊文思兰60mg/Kg,10min后结扎带迷走神经的颈总动脉,结扎后即刻在腹部切一小口,经十二指肠给予受试药物(模型组、假手术组给予等量生理盐水),逐层缝合伤口后放回笼饲养。5h后断头取脑,以大脑纵裂为标志将大脑切成两半,取右半脑按干湿法测脑含水量;取左半脑称重后,置甲酰胺溶液中,在45℃下温育60h后用分光光度计在632nm处测吸收度,根据标准曲线计算脑内伊文思兰的含量,结果见表2。结果表明蒺藜果总皂苷50和100mg/kg,心脑舒通100mg/kg剂量组与缺血模型组相比脑缺血后脑含水量及脑内伊文思兰含量明显下降,有减轻脑水肿作用。
实施例5:蒺藜果总皂苷对脑缺血后血中SOD、内皮素、6-Keto-PGF1α和TXB2的影响大鼠行阻断大脑中动脉的手术后给药,24h后取血(同时取10μl加2.0ml蒸馏水充分溶血后用于SOD的测定),一部分置于含有10%Na2-EDTA30μl和400u抑肽酶的试管中(用于内皮素的测定),另一部分置于含有消炎痛-Na2EDTA100ul的试管中(用于6-Keto-PGF1α和TXB2的测定),3000r/min离心10min,分离制备血浆,按试剂盒说明书操作,测定SOD、内皮素、6-Keto-PGF1α和TXB2;结果见表3和表4,结果表明蒺藜果总皂苷50和100mg/kg,心脑舒通100mg/kg剂量组与缺血模型组相比脑缺血后血中SOD明显升高,内皮素含量明显降低(P<0.05);6-Keto-PGF1α无明显变化,但TXB2水平明显降低(P<0.05),从而使PGI2/TXA2比值增大,降低血栓形成机率。
实施例6.
蒺藜果总皂苷对血瘀模型大鼠血液流变性的影响体重200-300g的Wistar大鼠,按表8分组给药,每天灌胃给药一,连续7天,末次给药后造血瘀模型:皮下注射10μg/ml的盐酸肾上腺素0.8ml/kg,共两次,间隔4h,并在此期间将大鼠浸入冰水中5min,然后禁食不禁水,次日晨动物腹腔注射水合氯醛(360mg/kg)麻醉,腹主动脉取血,测全血及血浆比黏度,结果见表8。结果可见蒺藜果总皂苷50-100mg/kg,心脑舒通100mg/kg可明显降低全血及血浆黏度。表1 蒺藜果总皂苷对大鼠血栓形成的影响(X±SD,n=10)组别 剂量(mg/Kg) 血栓重(mg) 抑制率%对照组 30.2±6.4 -心脑舒通 100 22.4±4.7** 25.83总皂苷组 25 27.8±7.6 7.95
50 23.7±6.0* 21.52
100 20.6±5.4** 31.79
与对照组比较*P<0.05;**P<0.01表2.蒺藜果总皂苷对大鼠脑缺血后脑含水量及血管通透性的影响(X±SD,n=10)组别 剂量 脑含水量 脑组织中伊文思兰含量
(mg/Kg) (%) (ug/g脑湿重)假手术组 --- 78.35±0.80 1.95±0.47膜型组 --- 79.43±0.91 3.76±1.47心脑舒通 100 78.40±1.09* 2.56±0.65*总皂苷组 25 78.83±0.79 3.10±0.72
50 78.52±0.71* 2.57±0.63*
100 78.70±0.65* 2.36±0.61*
与膜型组比较*P<0.05;**P<0.01表3.蒺藜果总皂苷对大鼠脑缺血后血中内皮素含量和SOD含量的影响(X±SD,n=10)组别 剂量(mg/Kg) 内皮素含量(ng/L) SOD含量(ng/L)假手术组 --- 226.4±109.2 13.30±3.27模型组 --- 421.3±148.1 9.65±2.32心脑舒通 100 281.4±106.8* 13.18±3.93*总皂苷组 25 339.5±117.6 11.02±2.75
50 284.7±103.9* 12.15±2.01*
100 272.6±105.7* 13.02±3.42*
与模型组比较*P<0.05;**P<0.01表4.蒺藜果总皂苷对脑缺血后血中6-Keto-PGF1α和TXB2的影响(X±SD,n=10)组别 剂量(mg/Kg) 6-Keto-PGF1α(ng/L) TXB2(ng/L)假手术组 522.9±209.1 230.5±163.4模型组 628.9±317.9 507.8±182.8心脑舒通 100 563.0±255.0 326.5±157.8*总皂苷组 25 660.8±289.1 389.6±129.5
50 559.3±296.9 343.3±161.4*
100 595.9±288.4 309.0±179.1*
与模型组比较*P<0.05;**P<0.01表5蒺藜果总皂苷对血瘀大鼠血液流变学的影响(X±SD,n=10)
剂量 全血粘度 血浆
(mg/ug) 低切 中切 高切 粘度空白对照 -- 14.74±2.41 8.43±1.13 5.73±0.67 1.72±0.22模型组 -- 18.59±1.06 10.21±0.86 7.68±0.72 2.10±0.21心脑舒通 100 14.92±3.65** 8.51±1.64** 5.85±0.98** 1.83±0.28*总皂苷组 25 17.04±2.34 9.74±1.70 7.04±1.04 1.90±0.21*
50 15.74±3.91* 8.85±2.14 6.37±1.67* 1.97±0.38
100 15.05±2.88** 8.99±1.36* 6.24±1.18** 1.80±0.20**
与模型组比较:*P<0.05 **P>0.01
Claims (10)
1、一种以蒺藜果总皂苷组合物为基本活性成分,新的具有药用的以蒺藜果总皂苷的组合物为基本活性成分,其有效成为蒺藜呋甾皂苷和蒺藜螺甾皂苷。
2、根据权利要求1所述的蒺藜果总皂苷的制备工艺是:
a、取原料蒺藜果,用0%-95%醇提取1-10次,提取液合并,过滤,滤液经过大孔吸附树脂柱,b、用水洗至无色后,用40%-95%醇洗脱后收集洗脱液,回收醇,至无醇味,减压下或常压下浓缩成浸膏状或干粉;c、用0%-95%醇溶解,滤过,除去沉淀物并回收滤液,减压回收醇后得到所需的蒺藜果总皂苷。
3、根据权利要求2所述的工艺,其中步骤a中所述的用醇提取为70%,提取次数为3次,树脂柱是AB-8。
4、根据权利要求2所述的工艺,其中步骤b中所述的醇用60%洗脱。
5、根据权利要求2所述的工艺,其中步骤c中所述的醇溶解为80%。
6、根据权利要求1所述的药物组合物含有蒺藜果总皂苷中的有效成分蒺藜呋甾皂苷和蒺藜螺甾皂苷的含量为50%(w/w)以上,并含有一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂的药物组合物。
7、根据权利要求1所述的含有蒺藜果总皂苷的药物组合物制备方法包括以下步骤:
(1)提供蒺藜果总皂苷;
(2)将步骤(1)得到蒺藜总皂苷与一种或多种医药上可接受的载体和/或赋形剂相混合。
8、根据权利要求1的药物组合物,其中还可含有一种或多种天然或化学合成的,与基本活性成分蒺藜果总皂苷组合物有辅助或协向作用的其他活性成分,
9、根据权利要求1所述的一种治疗心脏、脑动脉血管硬化或栓塞引起的心肌和脑组织缺血、缺氧及氧化脂质升高的药物组合物。
10、根据权利要求1所述的一种以蒺藜果总皂苷的组合物为基本活性成分制备治疗心脏、脑动脉血管硬化或栓塞引起的心肌和脑组织缺血、缺氧及氧化脂质升高的药物方面的应用。
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