CN104474150B - 一种具有抗缺氧作用的药物组合物及制备方法 - Google Patents

Abstract

一种具有抗缺氧作用的天然药物组合物，其特征在于首次将具有抗炎抗渗出的积雪草提取物与具有抗缺血、缺氧的蒺藜总皂苷及显齿蛇葡萄总黄酮组方而成。在处方组成上除考虑抗缺血、缺氧物质基础外，本发明更突出贡献在于考虑了由于缺血、缺氧给心脑血管组织造成的应急性炎症渗出及水肿的预防和治疗。经过药效学实验证明，本发明组合物较单一积雪草提取物、蒺藜总皂苷及显齿蛇葡萄总黄酮具有更强的活性，体现了中药化学成分之间的协同作用。可将其制成口服制剂，如硬胶囊、片剂、颗粒剂、散剂、丸剂、袋泡茶、口服液。该组合物可用于有助于提高缺氧耐受力的中成药或保健食品。

Description

一种具有抗缺氧作用的药物组合物及制备方法

技术领域

本发明涉及一种具有抗缺氧作用的天然药物组合物及制备方法，属于医药技术领域。

背景技术

氧是人类及许多生物赖以生存的重要条件。机体生命活动所需的氧不能得到充足的供给的状态时则称为低氧或缺氧。缺氧将引起机体代谢、机能、甚至形态结构发生异常改变。严重或长期缺氧会给机体带来严重危害，最终可导致机体心、脑等重要脏器由于能量供应不足而死亡。氧和低氧是生命科学基本理论的重要课题。低氧的形成可分为三类：第一类是外界环境氧含量降低，使正常生理活动过程不能摄取足够氧，如高原、潜水和航空等特殊环境导致的缺氧；第二类是指因疾病等导致外界正常氧量不能充分到达机体内，造成心、脑和呼吸系统等的缺氧；第三类是机体活动所需氧消耗量，超过了生理动员能力，造成相对氧供给不足，常见于剧烈运动和超限量劳动。长期低氧是危害人体健康的重要隐患，严重者甚至可危及生命，可出现肺部疾患(肺炎、肺水肿等)，胸廓疾患(胸腔积液、气胸等)及其他一些疾病(如甲状腺机能减退、代谢性碱中毒等)所致的肺的通气和(或) 换气功能障碍，因此，研究耐缺氧的药品或保健食品具有广阔的市场发展前景。

本发明就是将从天然植物中发现或者提取的一种具有抗缺氧作用的天然药物组合物。该组合物是由有效成分创新组合成天然产物组合物，体现了中药“多靶点、多效应”的特点，具有标本兼治的效果，以期从疗效和安全性上有显著的突破和提高。

蒺藜皂苷是从蒺藜科植物蒺藜Tribulus terrestris L.干燥成熟果实中提取的有效组分，是以甾体皂苷为主的十多种皂苷的混合物，主要包括呋甾醇和螺甾醇。国内研究资料表明，蒺藜皂苷具有降低血压、舒张血管、抗缺氧、降低胆固醇、阻止动脉、心肌和肝脏的脂质沉着、干预动脉粥样硬化的发生和发展，保护离体大鼠心脏缺血再灌注损伤、保护大鼠脑缺血损伤、降低血糖、改善微循环、抗衰老和增强性功能等作用。我国市场上也已经出现了以蒺藜茎叶总皂苷为主要药效成分且临床疗效确切的中药制剂，如心脑舒通胶囊，临床应用多年，疗效显著。蒺藜总皂苷(心脑舒通)能增加氧自由基消除剂Cat(过氧化氢酶)的含量、降低过氧化脂质(LPO)的含量，具有抗氧自由基保护细胞膜的作用；具有改善心脑功能和血管弹性，保护机体细胞而延缓衰老的作用(陈慧敏，心脑舒通抗衰老29例临床观察，实用老年医学，1993，第三期，140)。动物实验表明，给小鼠喂食蒺藜总皂苷，发现其能增强小鼠在高温、低温和缺氧环境下的耐受能力，延长小鼠游泳时间(曹惠玲，蒺藜及其有效成分的药理与临床研究进展，中成药，2001，第8期，602-605)。药理及临床研究一致证明蒺藜总皂苷对缺氧再给氧、缺血再灌注心肌的保护作用(钱本余，蒺藜研究概述，中成药，1990，第1期，34)。

积雪草提取物是从伞形科植物积雪草Centella asiatica(L.)Urban 的干燥全草或带根全草提取而得。积雪草性寒，味苦、辛，具有清热利湿、解毒消肿之功效。积雪草主要成分为积雪草苷、羟基积雪草苷和积雪草苷B。另外含有黄酮类、挥发油类、多炔烯炔类等，还有少量积雪草酸与羟基积雪草酸(赵宇新等报道积雪草研究进展，中国中医药信息杂志，2002年8月第9卷第8期，81-84)。现代药理研究发现积雪草总苷具有抗炎、促进创面愈合、防止瘢痕过度增生等作用，主要用于治疗各种皮肤损伤，包括外伤疤痕、消化道溃疡、硬皮病等；另外还有抗泌尿系统感染、诱导肿瘤细胞调亡等作用。黄怀鹏发明专利(公开号：CN1712013A)报道了积雪草总苷具有防治慢性肾功能衰竭的作用。宋吉伦发明专利(公开号：CN100588403C)报道了积雪草总皂苷具有促进伤口愈合，刺激肉芽生长，促进表皮角质化作用。胡刚等发明专利(公开号：CN1429553A)报道了积雪草总苷具有防治乳腺增生的作用。张胜华研究报道了积雪草苷具有良好的体内、外抗菌活性，尤其对妇科泌尿系感染的作用。

显齿蛇葡萄是国家规定的新资源食品。显齿蛇葡萄总黄酮是从葡萄科蛇葡萄属植物显齿蛇葡萄(藤茶)Ampelopsis Grossedenta

(Hand-Mazz.)W.T.Wa中提取纯化而得。显齿蛇葡萄嫩茎叶中总黄酮的含量高达43.4％-45.52％。显齿蛇葡萄中的黄酮化合物种类多样，有二氢杨梅素、槲皮素、花旗松素、山奈酚、显齿蛇葡萄素、杨梅苷、橙皮素、洋芹素等。其中二氢杨梅素是显齿蛇葡萄中的主要活性成分。研究表明，显齿蛇葡萄总黄酮毒性小，小鼠灌胃给药，最大耐受量为 22.5g/kg(钟正贤,广西藤茶总黄酮保肝作用的实验研究，广西科学，2002，第1期，57)，并且具有广泛的生理活性，其抗氧化作用可清除氧自由基，可抑制机体内的氧化损伤，免疫功能的调节作用可调节人体免疫机能；降低血糖血脂作用可用于防治糖尿病、动脉粥样硬化、高血脂等症；同时具有护肝、抗血栓、抗病毒、抗炎等作用。

本发明完成前，还未发现从蒺藜中提取的蒺藜总皂苷、积雪草中提取的积雪草提取物、显齿蛇葡萄中提取的总黄酮组成的组合物用于提高缺氧耐受力方面的报道。

发明内容

本发明人从药效物质基础出发、经过反复试验，选用了蒺藜、积雪草、显齿蛇葡萄等三种卫生部规定的可用于保健食品及新资源食品的原料，利用从中分别提取的蒺藜总皂苷、积雪草提取物、显齿蛇葡萄总黄酮组方，所以该处方组成非常安全，用于制备有助于提高缺氧耐受力的保健食品或药品，无任何毒副作用。在选取本发明的各原料进行组合搭配时，充分发挥了它们各自的功效，并经合理搭配产生协调效果。在处方组成上除考虑抗缺血、缺氧物质基础外，本发明更突出贡献在于考虑了由于缺血、缺氧给心脑血管组织造成的应急性炎症渗出的预防和治疗。首次将具有抗炎抗渗出的积雪草提取物与具有抗缺血、缺氧的蒺藜总皂苷及显齿蛇葡萄总黄酮组方，本组合物与市场上具有抗缺氧缺血单一靶点的西药具有明显的不同；同时与目前已有的有助于提高缺氧耐受力中成药相比，具有活性更确切，化学组成具有明显的特色，这是本发明的突出贡献。

本发明的另一个贡献在于，经药效学实验证明本发明组合物较单一蒺藜总皂苷、积雪草提取物及显齿蛇葡萄总黄酮具有更强抗缺氧的活性，体现了中药化学成分的协同作用。

蒺藜总皂苷具有舒张血管、抗缺氧、降低胆固醇、阻止动脉、心肌和肝脏的脂质沉着、干预动脉粥样硬化的发生和发展，保护心脏缺血再灌注损伤、保护脑缺血损伤等作用；积雪草提取物具有抗炎、促进创面愈合及具有治疗肺部渗出炎症的作用；显齿蛇葡萄总黄酮具有营养心肌，扩张血管、抗渗出炎症、抗氧化、改变血液流变学指标的作用。这些化学成分相互协同、多靶点、多途径作用，三类成分组合从根本上全面调节人机体耐缺氧能力，改善身体健康状况。本发明通过对缺氧状态下神经系统的保护作用、心血管系统的保护作用、机体能量代谢的影响，通过提高机体抗氧化能力、对缺氧诱导细胞凋亡的对抗作用，达到有助于提高机体缺氧耐受力。具有明显的创新性和技术进步。

本发明另一突出贡献在于，首次利用显齿蛇葡萄组方用于提高机体的缺氧耐受力，既为显齿蛇葡萄提供一种新用途又为显齿蛇葡萄资源提供了效益增长点，是本发明的另一个技术进步。

本发明提供了一种有助于提高缺氧耐受力的天然产物制成的组合物，该组合物包括蒺藜总皂苷150-400份，显齿蛇葡萄总黄酮 100-300份，积雪草提取物150-400份。优选蒺藜总皂苷200份，显齿蛇葡萄总黄酮150份，积雪草提取物300份，其按照比例混合组成活性成份与药用辅料制成的。

本发明的另一目的是提供了分别提取蒺藜总皂苷、积雪草提取物、显齿蛇葡萄总黄酮的方法及组合物的制备方法，该方法包括：

(1)蒺藜用50-95％乙醇回流提取2-3次，每次2-3小时，过滤，滤液回收乙醇，得乙醇提取物，乙醇提取物通过预先处理好的D-101 大孔树脂柱，先用去离子水洗脱，弃去洗脱液，继用50-90％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，干燥，得蒺藜总皂苷；

(2)显齿蛇葡萄用50-85％乙醇回流提取2-3次，每次2-3小时，过滤，滤液回收乙醇，得乙醇提取物，乙醇提取物通过预先处理好的 AB-8大孔树脂柱，先用去离子水洗脱，弃去洗脱液，再用10-25％乙醇洗脱，弃去洗脱液，继用60-90％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，干燥，得显齿蛇葡萄总黄酮；

(3)积雪草用去离子水提取2-3次，每次2-3小时，过滤，滤液浓缩，干燥，得到积雪草提取物；

(4)将蒺藜总皂苷、显齿蛇葡萄总黄酮、积雪草提取物，按照比例混合均匀后，加入辅料均匀，即得。

本发明又一个目的是提供了上述提取的蒺藜总皂苷、积雪草提取物及显齿蛇葡萄总黄酮组成的组合物在制备有助于提高缺氧耐受力的药物和保健食品中的应用。

由于本发明首次公开了由蒺藜总皂苷、积雪草提取物及显齿蛇葡萄总黄酮组成的组合物具有有助于提高缺氧耐受力的作用，因此，将本组合物单独或与其它活性组份或辅料配合制成药剂，只要是该药剂用于有助于提高缺氧耐受力，均属于本发明的保护范围。本发明的组合物在制成任何一种剂型时，均具有耐缺氧的作用。

由蒺藜总皂苷、积雪草提取物及显齿蛇葡萄总黄酮组成的组合物 (简称组合物，实例4制备而得)具有耐缺氧作用，通过以下药效学实验得到证实。

本发明组合物由实例4制备得到，蒺藜总皂苷由实例1制备得到，积雪草提取物由实例2制备得到，显齿蛇葡萄总黄酮由实例3制备得到。亚硝酸钠分析纯、钠石灰，乳酸测定试剂盒由南京建成生物工程研究所生产，批号为20130502。阳性对照品药红景天参杞胶囊(批号：20131202，四川麦力若科技发展有限责任公司)。

ICR小鼠160只，体重18～22g，长春高新实验动物中心提供，实验动物生产许可证号为2013-0015。

每个实验取小鼠80只，分成8组，每组10只。设6个试验组、1个空白对照组和1个阳性对照组。本发明组合物试验组的剂量分别为75mg/kg、150mg/kg、300mg/kg；蒺藜总皂苷、积雪草提取物及显齿蛇葡萄总黄酮的剂量均为300mg/kg；空白对照组给予蒸馏水；阳性对照组剂量为300mg/kg。实验各组灌胃给样品，每天1次，连续 30d，灌胃容积为0.1ml/10g体重。

1、本组合物对小鼠常压耐缺氧存活时间的影响

于末次给予样品后1h，将各组小鼠分别放入盛有5g钠石灰的250ml磨口瓶内(每瓶1只)，加盖密封，以呼吸停止为死亡指征，观察小鼠存活时间。实验结果见表1。

表1本组合物对小鼠常压耐缺氧存活时间的影响

与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

由表1可知，本发明组合物低、中、高三剂量组均可以延长小鼠的存活时间，常压耐缺氧存活时间和空白对照组相比，高、中剂量组具有显著性差异。并且高剂量组小鼠存活时间长于低剂量和中剂量组小鼠。同时实验数据表明，本发明组合物高、中剂量组较单一蒺藜总皂苷、积雪草提取物及显齿蛇葡萄总黄酮具有更强的活性。

2、本发明组合物对小鼠亚硝酸钠中毒存活时间的影响

于末次给予样品后1h，各组动物按240mg/kg体重剂量腹腔注射亚硝酸钠，观察动物存活时间。实验结果见表2。

表2本发明组合物对小鼠亚硝酸钠中毒存活时间的影响

与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

由表2可知，与空白对照组相比，本发明组合物3个剂量组均可明显延长小鼠亚硝酸钠中毒存活时间，具有显著性差异。本发明组合物高、中剂量组较单一蒺藜总皂苷、积雪草提取物及显齿蛇葡萄总黄酮具有更强的活性。

3、本发明组合物对小鼠急性脑缺血性缺氧存活时间的影响

于末次给予样品后1h，各组动物自颈部逐只断头，立即按秒表记录小鼠断头后至张口喘气停止时间。实验结果见表3。

表3本发明组合物对小鼠急性脑缺血性缺氧存活时间的影响

与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

由表3可知，本发明组合物可以明显延长小鼠急性脑缺血性缺氧存活时间。本发明组合物高、中剂量组较单一蒺藜总皂苷、积雪草提取物及显齿蛇葡萄总黄酮具有更强的活性。

4、本发明组合物对小鼠运动后血乳酸的影响

于小鼠末次给予样品30min后采血，然后不负重在温度为30℃的水中游泳10min后取出立即再次采血，最后休息20min第3次采血。按试剂盒测定3个时间点的血乳酸含量，并按下式计算乳酸曲线下面积。实验结果见表4。

血乳酸曲线下面积＝5×(游泳前血乳酸值+3×游泳后0min的血乳酸值+2×游泳后休息20min的血乳酸值)

表4本发明组合物对小鼠运动后血乳酸的影响

与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

由表4可知，本发明组合物高、中剂量组可明显降低小鼠运动后血乳酸曲线下面积含量。从而提高机体糖代谢系统的供能水平，减少蛋白质代谢供能的比例，从而提高抗缺氧能力。同时，试验数据表明本发明组合物较单一蒺藜总皂苷、积雪草提取物及显齿蛇葡萄总黄酮具有更强的活性。

本发明是通过下面的实施例进行详细的说明，但不意味着本发明仅限于此，具体实施方案如下：

实施例1、蒺藜总皂苷的制备

蒺藜果5kg，用70％乙醇回流提取3次，每次2小时，过滤，滤液回收乙醇，得乙醇提取物，加水至每1ml含1.0g药材，通过预先处理好的D-101大孔树脂柱，先用去离子水洗脱5倍柱体积，弃去洗脱液，继用70％乙醇洗脱4倍柱体积，收集洗脱液，回收乙醇，干燥，得蒺藜总皂苷。

实施例2、积雪草提取物的制备

积雪草5kg，用12倍量去离子水提取2次，每次2小时，过滤，滤液浓缩，干燥，得到积雪草提取物。

实施例3、显齿蛇葡萄总黄酮的制备

显齿蛇葡萄5kg，用70％乙醇回流提取2次，每次3小时，过滤，滤液回收乙醇，得乙醇提取物，加水至每1ml含1.0g药材，通过预先处理好的AB-8大孔树脂柱，先用去离子水洗脱4倍柱体积，弃去洗脱液，再用15％乙醇洗脱3倍柱体积，弃去洗脱液，继用80％乙醇洗脱5倍柱体积，收集洗脱液，回收乙醇，干燥，得显齿蛇葡萄总黄酮。

实施例4、胶囊剂的制备

称取蒺藜总皂苷60g，积雪草提取物90g，显齿蛇葡萄总黄酮45g，药用淀粉适量，混合均匀，制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成1000 粒，即得。每次1粒、每日2次。

实施例5、片剂的制备

称取蒺藜总皂苷60g，积雪草提取物90g，显齿蛇葡萄总黄酮45g，药用淀粉适量，混合均匀，制粒，干燥，整粒，压片，制成1000片，即得。每次1片、每日2次。

Claims (4)

1.一种具有抗缺氧作用的天然药物组合物，其特征在于，它是由下述重量份的原料制成：蒺藜总皂苷150-400份，显齿蛇葡萄总黄酮100-300份，积雪草提取物150-400份。

2.根据权利要求1所述一种具有抗缺氧作用的天然药物组合物，其特征在于，它是由下述重量份的原料制成：蒺藜总皂苷200份，显齿蛇葡萄总黄酮150份，积雪草提取物300份。

3.根据权利要求1或2所述的一种具有抗缺氧作用的天然药物组合物，其制备方法如下：

(1)蒺藜用50-95％乙醇回流提取2-3次，每次2-3小时，过滤，滤液回收乙醇，得乙醇提取物，乙醇提取物通过预先处理好的D-101大孔树脂柱，先用去离子水洗脱，弃去洗脱液，继用50-90％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，干燥，得蒺藜总皂苷；

(2)显齿蛇葡萄用50-85％乙醇回流提取2-3次，每次2-3小时，过滤，滤液回收乙醇，得乙醇提取物，乙醇提取物通过预先处理好的AB-8大孔树脂柱，先用去离子水洗脱，弃去洗脱液，再用10-25％乙醇洗脱，弃去洗脱液，继用60-90％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，干燥，得显齿蛇葡萄总黄酮；

(3)积雪草用去离子水提取2-3次，每次2-3小时，过滤，滤液浓缩，干燥，得到积雪草提取物；

(4)将蒺藜总皂苷、显齿蛇葡萄总黄酮、积雪草提取物，按照比例混合均匀后，加入药用辅料均匀，即得。

4.一种具有抗缺氧作用的天然药物组合物口服制剂，其特征在于将权利要求1-3所述的天然药物组合物，与药用辅料混合，制成硬胶囊、软胶囊、片剂、颗粒剂、散剂、丸剂、袋泡茶、口服液中的任意一种。