CN1405326A - 生物分子微阵列的制备方法及定点装置 - Google Patents

Abstract

生物分子微阵列的制备方法及该方法中使用的装置，该方法包括预备表面上有多个能特异且定量接受探针生物分子的探针生物分子接纳固相部的基板，将含有探针生物分子的溶液点到上述固相部，将该溶液中所含探针生物分子固定到上述固相部(该溶液的点样是：溶液的1滴液滴要覆盖1个固相部的整面，且1个液滴中所含探针生物分子的数目在1个固相部所能容纳的数目以上)。上述基板表面上有用于确定基板位置的调准标志，根据与调准标志的位置关系确定上述固相部的位置，并且溶液的滴点相对于通过与调准标志间的位置关系而进行位置确定的固相部进行。

Description

生物分子微阵列的制备方法及定点装置

[技术领域]

本发明涉及定点型生物分子微阵列的制造方法。

特别地，本发明属于检测靶生物分子的生物分子检测技术，它是以具有要检测的靶生物分子互补碱基序列的单链生物分子或者以与要检测的靶生物分子有相互作用的单链生物分子为探针，通过检测该探针生物分子与生物体来源的核酸样品是否通过杂交或相互作用而形成双链而进行测定的技术。

[现有技术]

用于检测生物体来源的样品中所有存在的生物分子(DNA、RNA等)的设备有DNA微阵列(亦叫做DNA芯片)。应用DNA微阵列可一并对数百～数万个生物分子进行检测处理或进行碱基序列测定处理。DNA微阵列是将数百～数万的DNA检测点(定点部分)井然有序地分配到数平方厘米～数十平方厘米的玻璃基板或硅基板上。持有预先已知碱基序列的单链核酸聚合物(基因片段)作为探针(检测子)按每一种固定到每个DNA检测点上。结果DNA微阵列上整齐排列着许多种类的核酸探针。让用荧光物质标记的核酸样品水溶液在DNA微阵列上流动，该样品核酸中的核酸碱基序列只有在与探针互补时二者才能进行杂交，洗涤后，只有与探针杂交的靶核酸残存在DNA微阵列上。可通过检测DNA微阵列上残存的靶核酸上标记的荧光物质发出的荧光来判断该样品中是否存在靶核酸。

根据制备方法的不同DNA微阵列可大致分为光分解色谱(フオトリ ソグラフイ)型和定点型2种。

光分解色谱型中采用的制备方法是通过在半导体集成电路的制备过程中应用的光分解色谱在基板(或薄片)上合成所希望的多种DNA(寡核苷酸)，它使具有高密度DNA检测点的DNA微阵列实用化(参照美国特许5744305、5445934等)。

而定点型中应用的制备方法是：应用整面覆盖了固相化剂(聚赖氨酸或氨基硅烷)的载物玻片基板(或片)，将预先制备的含探针DNA的液滴一滴一滴点到基板上后，使之干燥，由此形成DNA检测点(参照美国特许587522、特表平10-503841号等)。

[发明内容]

上述2种DNA微阵列有以下不同的特性。

光分解色谱型DNA微阵列的优点在于：由于它能使DNA检测点很细小、均一生成DNA，所以能保证高的测定灵敏度和再现性，能用于SNP(单核苷酸多态性)分析。但是，合成1个碱基需要1个掩蔽罩(マスク)，因为有A、T、G、C四种碱基，所以至少需要4个掩蔽罩(マスク)。例如合成20个碱基长的探针时80个掩蔽罩(マスク)是必要的。1个掩蔽罩(マスク)的价格高达十万元，制作DNA微阵列就需要数千万元的花费。因此，只在一部分研究机构使用是其现状。

定点型DNA微阵列应用于将含有探针DNA的液滴加到基板上使之干燥的方法。因此有制备廉价这一优点，但是有不能保证固定到基板上的DNA的密度和均一性这样的缺点。也就是说，由于DNA检测点的尺寸和形状不均一，所以固定在各DNA检测点上的DNA量亦多少不一。因此，定点型DNA微阵列可用于定性分析不宜于定量分析。也就是说，可检测有无与靶生物分子杂交产生的DNA检测点，而不能测定在各DNA检测点杂交的靶生物分子的量。另外，为了实现某种程度的定量性有必要将参照样品作为内部标准同时进行杂交。

再者定点型DNA微阵列还有这样的问题：由于附着在DNA检测点周围的固相化试剂的存在，靶DNA非特异性吸附到基板上，引起噪音增强，降低了S/N比。

于是本发明者们以提供可用于定量分析且S/N比高的定点型生物分子微阵列为目的，首先开发了具有能定量接纳、固化核酸等探针生物分子的探针生物分子接纳固相部的生物分子微阵列用基板。将含有探针生物分子的溶液点到该基板的探针生物分子接纳固相部可得到所定量的探针生物分子固化到检测点上的生物分子微阵列。

然而，为了将所定量的探针生物分子固定到检测点有必要将含有所定量探针生物分子的溶液点到区域微小且众多的探针生物分子接纳固相部的各个区域。但是到目前为止还没有相对于有确定位置的探针生物分子接纳固相部，而将含有探针生物分子的溶液精细定点制备生物分子微阵列的方法。

因此本发明的目的是提供生物分子微阵列的制备方法和装置，相对于具有确定位置的探针生物分子接纳固相部，它高精度地定点含有探针生物分子的溶液，将所定量(数量)的探针生物分子固定到各探针生物分子接纳固相部。

本发明如下：

(权利要求1)生物分子微阵列的制备方法，它包括准备表面有多个探针生物分子接纳固相部的基板的工序(其中上述各探针生物分子接纳固相部特异且定量地接受探针生物分子)，以及将包含探针生物分子的溶液定点到上述探针生物分子接纳固相部，将该溶液中所包含的探针生物分子固化到上述探针生物分子接纳固相部的工序(其中上述溶液的定点是：上述溶液的1个液滴至少要全面覆盖上述1个探针生物分子接纳固相部，且上述1个液滴中包含的探针生物分子的数在1个探针生物分子接纳固相部所能接纳的数目以上)；其中基板表面上有确定基板位置的调准标志，上述探针生物分子接纳固相部根据与上述调准标志的位置关系而确定位置，且上述溶液的定点相对于由与上述调准标志间的位置关系而确定位置的上述探针生物分子接纳固相部进行。

(权利要求2)权利要求1的制备方法，用CCD相机读取上述调准标志，根据相机的读取识别定点手段中基板表面的探针生物分子接纳固相部的位置，通过识别位置的定点手段来定点包含探针生物分子的溶液。

(权利要求3)权利要求1或2的制备方法，其特征在于，上述探针生物分子为DNA、RNA、PNA或蛋白质。

(权利要求4)包含探针生物分子的溶液的定点装置，它具有读取生物分子微阵列用基板上的调准标志的CCD相机，根据用该CCD相机读取的调准标志的位置识别探针生物分子接纳固相部的位置的装置，以及定点装置，该装置具有通过定点手段将包含探针生物分子的溶液定点到由上述装置进行位置识别所识别的探针生物分子接纳固相部上的位置控制装置。

(权利要求5)权利要求4的定点装置，它还有用于使生物分子微阵列用基板整齐排列的台面和保持用于定点包含探针生物分子的溶液的针(チツプ)的持针器，持针器借助持针器位置校正回转结构(θ轴)而接续于X轴、Y轴和Z轴的各移动装置上。

(权利要求6)权利要求4或5的定点装置，在持针器位置校正回转结构(θ轴)附近它还有基板读取相机和印记(スタンプ)观察装置。

本发明的生物分子微阵列的制备方法由准备基板的工序和定点溶液的工序构成。

[准备基板的工序]

该工序中准备生物分子微阵列用基板，基板表面设置多个探针生物分子接纳固相部。其中各探针生物分子接纳固相部是能特异且定量接纳探针生物分子的部分。

上述生物分子微阵列用基板可以，例如在基板表面的大约整个表面规则设置多个微细的能分别定量接受探针生物分子的探针生物分子接纳固相部。该生物分子微阵列用基板中，虽然探针生物分子接纳固相部是能定量接受探针生物分子的部位，但为了能定量接纳探针生物分子，要将针对探针生物分子的固相化试剂定量吸附到探针生物分子接纳固相部。根据附着到探针生物分子接纳固相部的固相化试剂的量可以适当决定所固定的探针生物分子的量(数量)。也就是说，假若吸附到探针生物分子接纳固相部的固相化试剂的量在各个探针生物分子接纳固相部相同，那么供给足量的探针生物分子给各个探针生物分子接纳固相部，使之固定，那么固定到各个探针生物分子接纳固相部的探针生物分子的量(数量)相同。

上述固相化试剂包括具有有固相化能力官能团的物质，例如有亲和素、链霉亲和素、生物素、氨基、羰基、羟基、琥珀酰基(スクシニイド基)、马来酰基(マレイド基)、巯基等基团的物质。后面描述将固相化试剂吸附到基板上的方法。特别地，探针生物分子接纳固相部为亲和素分子单层结合到结合于基板表面的生物素分子末端的固相部。

各探针生物分子接纳固相部的直径为，例如50-200μm，各探针生物分子接纳固相部之间的间隔为，例如100-500μm。上述直径是指探针生物分子接纳固相部的形状为圆形时的直径，当其形状为正方形时指一边的长度。另外，期望上述形状与上述生物分子微阵列的生物分子检测点部的摄像中使用的固体摄像元件的象素的形状大致一致。

对于基板的材料没有特殊限制，只要是能吸附固相化试剂的物质即可。例如可以适当使用玻璃基板、硅基板、塑料基板、金基板、银基板等作为基板。

可应用光分解色谱技术和蚀刻技术，通过在基板所定部位设置探针生物分子接纳固相部制造上述生物分子微阵列用基板。

图1说明了生物分子微阵列用基板的制备方法。图1是一制备流程图，表示生物分子微阵列用基板制备方法的一例。

图中流程(9)中所示的100为生物分子微阵列用基板，该基板100进行了只在特定部位101吸附探针DNA的表面处理。

基板100的制备流程如下：

(1)基板洗涤过程：洗涤载物玻片基板11，除去杂物。

(2)铝膜蒸镀过程：在载物玻片基板11的表面蒸镀(涂布)一层铝膜12。

(3)光致抗蚀剂(photoresist)的涂布过程：在铝膜12的表面涂布一层阴性光致抗蚀剂。

(4)露光过程：只用光(hν)照射通过光罩14的(3)基板上的特定部位101。

(5)显像过程：(4)基板上的光致抗蚀剂13显像。该阶段除去特定部位101的光致抗蚀剂13。

(6)蚀刻工序：蚀刻除去(5)基板上的光致抗蚀剂而露出的部位101的铝膜。由此除去特定部位101的铝膜12。

(7)除去抗蚀剂的过程：用丙酮等溶剂溶解除去(6)基板上的光致抗蚀剂。该阶段在载玻片基板11的表示只露出特定部位101，其余的表面被铝膜覆盖。

(8)DNA固相化膜形成过程：将吸附探针DNA使之固相化的固相化试剂涂到(7)的基板上，形成DNA固相化膜15。具体而言，该过程包括用氨基硅烷处理基板将氨基导入基板表面的过程和用生物素琥珀酰胺处理基板将生物素导入基板表面的氨基的过程。

(9)DNA附着部位形成过程：用酸、碱或螯合剂溶解去除(8)基板上的铝膜12。该阶段只在载玻片基板11表面的特定部位101形成DNA固相化膜15。

(10)亲和素结合过程：将亲和素溶液导入(9)的基板上，使亲和素分子单层结合到在特定部位101形成的DNA固相化膜15的生物素分子的末端。

通过以上(1)～(9)或(1)～(10)的流程，可得到只在载玻片基板11表示的特定部位101单层固定了生物素或亲和素的DNA微阵列基板100。特定部位101的直径在200μm以下，特定部位101之间的间隔小于500μm。

图2显示了亲和素分子单层结合到DNA固相化膜15的生物素分子末端的过程。

因为光罩的光透过孔的面积和形状均一，所以经过上面(1)～(9)而制成的在各基板表示形成的特定部位101的面积和形状可全部均一。因此，固定在各特定部位101的生物素分子23的数目也可大体一致。与固化到各特定部位101的生物素分子23结合的亲和素分子的数目在各特定部位101之间也是均等的。

可通过改变露光过程中所使用的光罩而任意改变特定部位101的形状和尺寸以及特定部位101之间的间隔。因此，固定到特定部位101的亲和素分子的数目也可通过光罩而任意调控。

生物分子微阵列用基板的制备方法不限于上述实施方案。也就是说也可采用与图1所示的制备方法不同的方法，如最初在基板11的表面整体形成DNA固相化膜15，而只在特定部位101露出DNA固相化膜15。这种情况下，在基板11的表面整体顺次叠层DNA固相化膜15和铝膜12后，在铝膜12上叠层形成阳性光致抗蚀剂13，通过光罩，只在特定部位101露光，然后与上面同样进行显像和蚀刻，可只在特定部位101露出DNA固相化膜15。当然阳性光致抗蚀剂并非必要，也可使用阴性光致抗蚀剂。

[点溶液的过程]

该过程是将包含探针生物分子的溶液点到探针生物分子接纳固相部，将该溶液中所包含的探针生物分子固化到上述探针生物分子接纳固相部。

如上所述探针生物分子接纳固相部上附着与所定量的探针生物分子相对应的固相化试剂，将足量的探针生物分子供给各探针生物分子接纳固相部，使之固化，固定到各探针生物分子接纳固相部的探针生物分子的量(数量)几乎相同。但是若不供给各探针生物分子接纳固相部足量的探针生物分子，固定的探针生物分子的量(数量)就不能大致相同，就不能进行定量。

本发明的制备方法中溶液的滴点是溶液的1滴液滴至少要全面覆盖1个探针生物分子接纳固相部。这样才不至于在探针生物分子接纳固相部的一部分中存在没有滴到探针生物分子的地方。此外，1滴液中包含的探针生物分子的数目在1个探针生物分子接纳固相部所能接纳的数目以上。液滴覆盖探针生物分子接纳固相部的全面，且该液滴中包含其可接纳能力以上的探针生物分子的话，那么探针生物分子接纳固相部整面且其接纳能力上限量的探针生物分子被固定。若液滴中供给的探针生物分子不足可接纳的数目，那么即便溶液的1滴液滴能覆盖1个探针生物分子接纳固相部的全面，也不能固定覆盖探针生物分子接纳固相部整面且其接纳能力的上限量的探针生物分子。

为了使上述固定化适当进行，其前提是溶液的液滴正确定点到各探针生物分子接纳固相部是必要的。但是如上所述探针生物分子接纳固相部的大小，直径为，例如50-200μm，间隔为，例如100-500μm。为了将各液滴供给到如此微细且间隔狭窄的各探针生物分子接纳固相部，在本发明中首先使用表面上有调准标志的基板，该标志能确定基板的位置。图3中显示了表面上有能确定基板位置的调准标志的基板的例子。该基板是载玻片30的表面有固相部31的基板，并且除固相部31以外载玻片上有4条调准标志32。由于调准标志由CCD相机来读取，考虑到目前CCD相机的分辨能力，调准标志可以是图4所示的尺寸。但是，CCD相机的分辨能力增强的话，可用与之相匹配的调准标志。

再者，本发明的制备方法中使用的基板，其各个探针生物分子接纳固相部通过与调准标志间的位置关系来进行位置确定。也就是说，各个探针生物分子接纳固相部设置成与基板表面的调准标志相对应的规定位置。应用光分解色谱技术和蚀刻技术，将探针生物分子接纳固相部设置到基板的规定部位可得到上述本发明的制备方法中所使用的基板，这样的精密加工也很容易进行。

再者，包含探针生物分子的溶液的滴点是相对于探针生物分子接纳固相部进行的，该固相部的位置是根据与调准标志间的位置关系而确定的。更具体而言，用CCD相机读取基板上的调准标志。然后根据其读取的定点手段识别基板表面的探针生物分子接纳固相部的位置。识别探针生物分子接纳固相部位置的定点手段有，例如通过Tip(针)将含有探针生物分子的溶液正确点到探针生物分子接纳固相部。

将包含探针生物分子的溶液点到基板表面规定位置的方法和装置有已知的。定点方法有，例如库伊鲁(クイル)法、针和环(ピンアンドリング)法、喷墨打印法。库伊鲁法是让溶液浸入钢笔状的针头来点的方法。针和环法是将溶液拉成环，让针通过溶液形成的膜而进行滴点的方法。喷墨打印法是用喷墨打印机进行滴点的方法。本发明中可应用任一种方法。

本发明制备方法可应用有下面结构的装置实施：

(1)读取基板上的调准标志时用的CCD相机；

(2)根据CCD相机读取的调准标志的位置识别探针生物分子接纳固相部位置的结构；及

(3)定点结构，其具有用定点手段将包含探针生物分子的溶液点到(2)中位置识别的探针生物分子接纳固相部的位置调控结构。

图5显示了一例这样的装置。

图5是DNA阵列系统50的立体图，它由将包含探针生物分子的溶液定点到生物分子微阵列用基板的装置51(图中左前)和将包含探针生物分子的溶液由样品平台供给定点手段针的装置52(图中右后)构成。

定点溶液的装置51上有载玻片台面53和保持点溶液的针的持针器55，53是为了整齐排列生物分子微阵列用基板载玻片54。持针器55借助持针器位置校正回转结构(θ轴)56可接续于X轴57、Y轴58和Z轴59的各移动装置。持针器位置校正回转结构(θ轴)56上设置了读取载玻片的相机(CCD相机)60和观察定点过程中滴点状态的印记观察装置(CCD相机)61。此外，滴点溶液的装置51和供给针样品溶液的装置52之间有持针器位置读取传感器63。

以下对上述装置的运作进行说明。

首先，在将样品溶液供给针的装置52中，通过持针器交换结构64将定点完成的针交换成从新的样品台面65供给含有探针生物分子的溶液的针。新的针固定在定点溶液的装置51上，通过持针器位置读取传感器63读取持针器上针的位置。接着通过载玻片读取相机读取定点的载玻片上的调准标志，识别载玻片的位置及设置在载玻片上的探针生物分子接纳固相部的位置。然后为了能正确定点探针生物分子接纳固相部，操作X轴57、Y轴58和位置校正回转结构(θ轴)56的各移动装置进行位置补正(X、Y、θ方向)。然后从进行了位置补正的持针器上固定的针将探针生物分子点到各个探针生物分子接纳固相部。

本发明的制备方法中探针生物分子可以是例如DNA、RNA、PNA或蛋白质。另外，这些探针生物分子可以是，例如生物素标记的生物分子，探针生物分子接纳固相部附着的亲和素或链霉亲和素等。

[实施例]

以下通过实施例进一步详细说明本发明。

(定量基板制备方法的各步骤)

(a)载玻片的洗涤

在预清洁的载玻片(マツナミ公司，S1111)上涂上丙酮，超声波洗涤30分钟。其后用去离子水洗涤3次。接着涂上过氧化氢水/浓硫酸(1∶1)，超声波洗涤30分钟。其后用去离子水洗涤3次。然后用超纯水(ミリ Q水)超声波洗涤30分钟。其后用超纯水洗涤3次，60℃烤箱中干燥20分钟。

(b)铝的真空蒸镀

用真空蒸镀装置(ULVAC公司)给洗净的载玻片蒸镀铝膜(膜厚约300nm)。

(c)涂光致抗蚀剂

在蒸镀了铝膜的载玻片涂上阳性光致抗蚀剂(シプレ一公司，S1813)，用旋转的涂层(ミカサ公司)涂1μm厚。其后120℃烤20分钟。

(d)露光

将涂了抗蚀剂的载玻片通过制作DNA固相化部位图形的光罩，只在DNA固相化部位的中间暴露紫外光。该露光操作中应用能扫描露光YAG激光的3倍波长(波长：355nm；激光源：80nW)的露光装置。求出最近的扫描时间，结果为120秒(30×80mm的面积)。

(e)显影

露光后浸到显影液(シプレ一公司、CD-26)中35秒后，用超纯水洗涤。结果仅在紫外照射的DNA固相化部位抗蚀剂溶解，露出铝膜。

(f)蚀刻

将制作了抗蚀剂图形的载玻片浸到蚀刻溶液(磷酸/醋酸/硝酸/超纯水(16∶2∶1∶1))中3分钟，仅在DNA固化部位溶解铝膜，用超纯水洗涤。然后用丙酮1次，2次，3次洗涤，只有抗蚀剂被溶解。

(g)涂布氨基硅烷

在1％氨基硅烷溶液(3-(2-氨基乙基氨基丙基)-三甲氧基硅烷于95％丙酮中)中浸10分钟。其后用丙酮洗涤10分钟，洗3次，以洗去未结合的氨基。然后在110℃烤箱中干燥40分钟。其后室温自然放置。

(h)生物素化反应

接着在5mg/ml生物素-Long arm-NHS溶液(于0.05M NaHCO₃，pH8.6)中室温浸入4小时。其后用超纯水洗涤，真空干燥。

(i)溶解

为了溶解残余的铝膜，在蚀刻溶液中边超声边浸3-5分钟，其后在超纯水中边超声边浸30分钟。通过这步操作，在溶解铝膜的基础上还可物理性剥离其上面的生物素化的膜。这样只在DNA固相化部位形成生物素化的膜。

(j)结合亲和素反应

接下来将0.1mg/ml亲和素溶液(Cy3标记的链霉抗生物素，Vector；缓冲液：1×SSPE，pH7.3)涂到形成生物素图形的载玻片上，室温静置30分钟。然后用1×SSPE(pH7.3)缓冲10分钟洗涤2次。然后用超纯水洗涤5次，真空干燥。这样完成DNA固相化部位结合了亲和素的定量基板。

表示点到表面处理基板上的探针生物分子接纳固相部(特定部位)的溶液中的DNA量(浓度)与固化到特定部位的DNA量间关系的测定例。图6的测定结果表明点3×10⁹～5×10⁹个探针DNA的话固定到特定部位的探针DNA量一定。

(定点方法)

为了实现定点速度的高速化，图5所示的定点装置由将样品溶液点到载玻片上的装置和洗涤点样品溶液的针使之干燥，从样品板中取样的装置构成。通过使点样动作和取样等动作并列进行，采样等的时间不加算在点样时间内。因此设计了2台持针器，通过持针器交换结构在点样装置和采样等装置间进行持针器的交换。

(进行取样等装置)

a)取样等

将处于持针器待机位置的针移动给持针器交换结构，进行针的超声洗涤、流水洗涤、干燥处理，从样品板中取样，再定置回到持针器待机位置。

(点样装置)

a)载玻片位置识别

读取载玻片的调准标志识别载玻片的位置。

b)交换持针器

通过持针器交换结构从定点侧装置摘下定点结束的针，移动到持针器待机位置进行定位，通过持针器交换结构移动已经定位了的新的供给样品的针，安装到定点侧装置。

c)持针器位置识别、位置补正

用持针器位置读取传感器读取持针器的安装位置进行位置补正(X、Y、Q)

d)点样

分别进行与各个载玻片相对应的持针器的位置补正(X、Y、Q)，进行点样。

用上述方法进行定点可制备生物分子微阵列。

本发明可提供制备生物分子微阵列的方法和装置，它高精确度地将含有探针生物分子的溶液定点到相应的有规定位置的探针生物分子接纳固相部，将规定量(数量)的探针生物分子固定到各个探针生物分子接纳固相部。

按本发明的方法得到的DNA微阵列上的DNA检测点部分全部是相同形状、相同面积，且整个检测点部分均固定了相同数目的探针DNA，所以应用该DNA微阵列可以进行定量分析。因为DNA微阵列上的DNA吸附部位只限于特定部位，即只限于DNA检测点部，所以可以防止DNA非特异性吸附到DNA检测点部的周围。因此可减少荧光检测时的噪音(不想要的光)，从而增强S/N比。

再者，通过使DNA检测点部的形状即上述的特定部位的形状与摄像时使用的固体摄像元件(CCD传感器、CMOS传感器等)的象素形状保持一致，可进一步提高S/N比。

[附图简述]

[图1]表示一例生物分子微阵列用基板制备方法的制造流程图。

[图2]表示亲和素分子单层结合到各DNA固相化膜15的生物素分子末端的过程。

[图3]表示表面上有用于确定基板位置的调准标志的基板的实例。

[图4]表示一例调准标志。

[图5]表示一例本发明的装置。

[图6]表示点到表面处理基板上的探针生物分子接纳固相部(特定部位)的溶液中DNA量(浓度)与固化到特定部位的DNA量之间的关系的测定结果。

Claims (6)

1.生物分子微阵列的制备方法，它包含准备表面有多个探针生物分子接纳固相部的基板的工序，其中上述各个探针生物分子接纳固相部能特异且定量接受探针生物分子，以及将包含探针生物分子的溶液定点到上述探针生物分子接纳固相部，使该溶液中所含探针生物分子固化到探针生物分子接纳固相部的工序，其中上述溶液的滴点是：该溶液的1个液滴至少要覆盖1个探针生物分子接纳固相部的整面，且所述1个液滴中所含探针生物分子的数目在1个探针生物分子接纳固相部所能容纳的数目以上；

其中所述基板表面上有确定基板位置的调准标志，上述探针生物分子接纳固相部通过与调准标志间的位置关系而进行位置确定，且上述溶液的滴点相对于通过上述调准标志间的位置关系而进行位置确定的探针生物分子接纳固相部进行。

2.权利要求1的制备方法，它用CCD相机读取上述调准标志，通过这种读取识别基板表面的探针生物分子接纳固相部的位置，通过识别位置的定点手段来滴点包含探针生物分子的溶液。

3.权利要求1或2的制备方法，其特征在于，探针生物分子为DNA、RNA、PNA或蛋白质。

4.含有探针生物分子的溶液的定点装置，它具有读取生物分子微阵列用基板上的调准标志的CCD相机，根据该CCD相机读取的调准标志的位置识别探针生物分子接纳固相部的位置的结构，以及定点结构，该结构具有通过定点手段将包含探针生物分子的溶液定点到由上述结构进行位置识别所识别的探针生物分子接纳固相部上的位置调控结构。

5.权利要求4的定点装置，它还有用于整齐排列生物分子微阵列用基板的台面和保持针的持针器，针用于滴点包含探针生物分子的溶液，持针器介助于持针器位置补正回转结构(θ轴)而接续于X轴、Y轴和Z轴的各移动装置上。

6.权利要求4或5的定点装置，在持针器位置补正回转结构(θ轴)附近它还有基板读取相机和印记观察装置。

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