KR20050014409A - 생체물질 고정용 기판 및 이의 제조방법 - Google Patents

생체물질 고정용 기판 및 이의 제조방법

Info

Publication number
KR20050014409A
KR20050014409A KR1020030053041A KR20030053041A KR20050014409A KR 20050014409 A KR20050014409 A KR 20050014409A KR 1020030053041 A KR1020030053041 A KR 1020030053041A KR 20030053041 A KR20030053041 A KR 20030053041A KR 20050014409 A KR20050014409 A KR 20050014409A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
group
substrate
amine
carbon atoms
anhydride
Prior art date
Application number
KR1020030053041A
Other languages
English (en)
Inventor
황규연
남궁지나
박태준
서강일
Original Assignee
삼성에스디아이 주식회사
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 삼성에스디아이 주식회사 filed Critical 삼성에스디아이 주식회사
Priority to KR1020030053041A priority Critical patent/KR20050014409A/ko
Publication of KR20050014409A publication Critical patent/KR20050014409A/ko

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/5306—Improving reaction conditions, e.g. reduction of non-specific binding, promotion of specific binding
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
    • G01N33/533—Production of labelled immunochemicals with fluorescent label
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54393—Improving reaction conditions or stability, e.g. by coating or irradiation of surface, by reduction of non-specific binding, by promotion of specific binding

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)

Abstract

본 발명은 기판; 상기 기판 위에 아민층; 및 상기 아민층 위에 형성된 환형 무수화물 고정화층을 포함하는 생체물질 고정용 기판을 제공한다. 상기 생체물질 고정용 기판은 기판 위에 아민계 코팅물질을 코팅하여 아민층을 형성하는 단계; 및 상기 아민층 위에 이환형 무수화물(dicyclic anhydride)을 코팅하여 고정화층을 형성하여 제조된다.

Description

생체물질 고정용 기판 및 이의 제조방법{SUBSTRATE FOR IMMOBILIZING PHYSIOLOGICAL MATERIAL, AND A METHOD OF PREPARING THE SAME}
[발명이 속하는 기술분야]
본 발명은 생체물질 고정용 기판 및 이의 제조방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 바이오칩 제조공정시 비활성화(blocking) 공정을 생략할 수 있어 보다 간편하게 바이오칩을 제조할 수 있고 바이오 칩의 혼성화 감도를 향상시킬 수 있는 생체물질 고정용 기판 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
[종래기술]
최근 들어 생명공학과 반도체 제조 기술을 접목시켜 핵산, 단백질, 효소, 항원, 항체 등과 같은 생체물질 분자들의 활성을 밝히려는 노력이 전세계적으로 확산되고 있다. 작은 실리콘 칩 위에 반도체 가공 기술을 이용하여 미세한 특정한 구역 내에 원하는 생체물질 분자를 고정한 바이오 칩을 생화학적으로 일괄 검색하면 유용한 정보를 쉽게 얻어낼 수 있다.
바이오칩은 생물에서 유래된 효소, 단백질, 항체, DNA, 미생물, 동식물 세포 및 기관, 신경세포 및 기관, 신경세포 등과 같은 생체 유기물과 반도체와 같은 무기물을 조합하여 기존의 반도체 칩 형태로 만든 소자이다. 바이오 칩은 크게 DNA 탐침(probe)이 고정된 "DNA 칩", 효소, 항체, 항원 등과 같은 단백질이 고정된 "단백질 칩", 시료의 전처리, 생화학 반응, 검출, 자료해석 기능까지 소형 집적화 되어 자동 분석기능을 갖는 "실험실 칩(lab-on-a-chip)"과 같은 각종 생화학물질을 검출 및 분석기능을 수행할 수 있는 "바이오센서(biosenser)"등으로 분류될 수 있다.
이러한 바이오칩을 개발하기 위해서는 생체물질과 고정화 기판의 계면을 효율적으로 형성하고 생체물질의 고유 기능을 최대한 활용할 수 있도록 하는 생체물질의 고정화 기술이 중요하다. 생체물질의 고정화는 슬라이드 유리, 실리콘 웨이퍼, 마이크로웰 플레이트(microwell plate), 튜브, 구형 입자, 다공성막 표면에서 일어난다. 특히 DNA칩이나 단백질칩 등과 같은 바이오칩에서는 관련 생체물질을 마이크로미터 스케일의 제한된 영역에 고정화하는 일이 무엇보다 중요하다.
기질 표면과 탐침(probe) DNA 와의 결합을 유도하기 위하여 여러 가지 방법들이 제시되고 있으며, 아민 관능기를 가지고 있는 실란 화합물 또는 아미노실란올리고머 등을 이용한 생체물질 고정화방법이 실제로 가장 널리 적용되고 있다.
DNA의 고정화 방식에는 폴리라이신(poly-lysine) 코팅[Shena et al. Science 467, 270(1995)]에서처럼 수소화된(protonated) 아민과 음전하적인(polyanion) 성격을 띄는 DNA와의 이온적 상호작용(ionic interaction) 또는 소수적 상호작용(hydrophobic interaction)[Allemand et al. Biophys. J 2064, 73 (1997)]과 같이 비공유결합적 화학반응을 의존하는 방법들이 있다. 그러나, 이와 같은 경우에는 DNA 막이 높은 염농도나 온도에서 제거되기 쉬운 성질을 보인다. 그러므로, 공유결합적 방법이 더 선호된다. 대체로, DNA는 UV 조사에 의해 골격상에 존재하는 티미딘(thymidine) 성분과 기판위에 존재하는 양이온으로 하전된 아민그룹과 가교결합(crosslinking) 된다[Duggan et al. Nature Genetics(Supple.) 10, 21(1999)]. 그러나 DNA의 고정화장소의 위치와 숫자가 정확하지 않아, 혼성화(hybridization) 과정에 사용되는 DNA 길이나 염기서열은 고정화할 때마다 다르게 된다. 이러한 문제점을 개선하기 위해 DNA의 말단을 기판에 결합하는 방식이 제시되었다. 카르복실화되거나(carboxylated) 혹은 포스포릴레이트화된(phosphorylated) DNA를 아민화된 기판위에 결합시키거나 카르복실화되거나 포스포릴레이트화된 기판에 아민화된 DNA를 결합시킬 수 있다.
그러나 이러한 방법들은 카보디이미드(carbodiimide)/이미다졸(imidazole)과 같은 탈수제를 사용하게 되므로 다단계의 반응경로를 거쳐야 하며 처리시간도 길어진다(미국특허 제5,760,130호). 아민화된 DNA는 이소티오시아네이트화(isothiocynated), 알데하이드화(aldehyde)[Guo et al.Nucleic Acid Research 5456, 22(1994)] 혹은 에폭시화(epoxylated)[Maskos et al. Nucleic acid Research 1679, 20(1992)] 기판에 결합이 가능하다. 디알데하이드(dialdehyde) 물질을 사용하여 폴리에틸렌이민(polyethyleneimine)을 가교제(crosslinker)로 사용한 경우도 있다(미국특허 제5,702,818호). 이외에 티올(thiol)이나 디설파이드(disulfide)화된 DNA는 가교제(heterobifunctional crosslinker)에 의해 아민화된 기판위에 결합이 가능하거나 혹은 티올화된 기판위에 결합이 가능하다[Linda et al. Nucleic Acid Research 3031, 24(1996)]. 그러나, 이러한 반응 메카니즘들은 그 속도가 매우 느리며 수율이 떨어지는 단점이 있다.
현재 생체물질 고정용 기판으로 널리 사용되고 있는 것은 아미노실란 물질을 이용한 아민계 기판이다. 아민계 기판은 도 1a의 제조공정 순서도에서 보는 바와 같이 탐침(probe) DNA를 고정화한 후(S2) 반응하지 않는 작용기들이 상당부분 남아있기 때문에 비특이적 결합(non-specific binding)을 방지하기 위한 상기 작용기들의 비활성화(Blocking) 과정(S3)이 필수적이다. 이로써 후속공정인 혼성화과정(S4)의 감도를 증가시킬 수 있다. 실제적으로 가장 널리 사용되는 방법은 Succinic anhydride-NMP-borate 처리 방법으로 탐침(probe) DNA와 반응하지 않은 작용기들을 음이온 형태를 갖는 카르복실레이트(carboxylate) 형태로 변환시킨다[Frank et al. Nucleic Acid Research e38, 29(2001)]. 그럼으로써, DNA와 기판간에 이온적 상호작용에 의한 비특이적 결합(non-specific binding)을 방지할 수 있다. 이러한 방법외에 prehybridization 방법이나 과량의 외래(exogenous) DNA 를첨가하는 방법 등이 사용되고 있다. 또한 무수화물(anhydride)을 이용하여 아민계 기판을 카르복실화시킨 후 그 위에 N-hydroxysuccinimide로 다시 반응시켜 비활성화 과정을 피하는 방법이 있다[Rudiger et. al Chembiochem, 686, 2(2001)].
상기와 같은 종래기술의 문제점을 해결하고자, 본 발명은 비활성화 과정을 수행하지 않아도 혼성화 감도를 향상시킬 수 있는 생체물질 고정용 기판을 제공하기 위한 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 생체물질 고정용 기판의 제조방법을 제공하기 위한 것이다.
도 1a는 종래의 바이오칩 제조공정 단계를 보인 도면이고 도 1b는 본 발명의 바이오 칩 제조공정을 보인 도면이다.
도 2는 본 발명의 생체물질 고정용 기판의 제조공정을 보인 도면이다.
도 3a 및 3c는 각각 실시예 1 및 비교예 1, 비교예 2에 따라 제조된 기판을 이용하여 제조된 DNA 칩의 혼성화 반응 후의 스캔이미지 사진을 보인 도면.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 기판; 상기 기판 위에 아민층; 및 상기 아민층 위에 형성된 환형 무수화물 고정화층을 포함하는 생체물질 고정용 기판을 제공한다.
또한 본 발명은 기판 위에 아민계 코팅물질을 코팅하여 아민층을 형성하는 단계; 및 상기 아민층 위에 이환형 무수화물(dicyclic anhydride)을 코팅하여 고정화층을 형성하는 단계를 포함하는 생체물질 고정용 기판의 제조방법을 제공한다.
또한 본 발명은 상기 생체물질 고정용 기판에 고정된 생체물질을 포함하는 바이오칩 또는 바이오센서를 제공한다.
이하, 본 발명을 더욱 자세히 설명하고자 한다.
현재 생체물질 고정용 기판으로 널리 사용되고 있는 아민계 기판은 비특이적결합(non-specific binding)을 방지하기 위한 방법으로써 비활성화(blocking) 과정이라는 공정이 필수적으로 요구된다(도 1a 참조). 그러나, 본 발명의 생체물질 고정용 기판은 도 1b에 도시된 바와 같이 아민계 기판(S11) 위에 환형 무수화물 고정화층을 형성하고(S12), 탐침을 고정화한 다음(S13), 혼성화 과정(S14)을 거친다. 즉 본 발명의 생체물질 고정용 기판은 종래의 아민계 기판의 비활성화 과정을 실시하지 않아도 충분한 혼성화 감도를 얻을 수 있다. 기판 위에 탐침(probe)이 패터닝 되지 않은 부분, 즉 스팟(spot) 이외의 부분은 탐침(probe) 고정화 과정 이후에 진행되는 후처리 공정, 예를 들면 증류수나 에탄올에 의한 세정과정에 의해 자연히 카르복실레이트 형태로 분해되어, 음전하적 성질을 갖게 된다. 따라서, 타겟(target) 물질과의 이온적 상호작용(ionic interaction)에 의한 비특이적 결합(non-specific binding)을 방지할 수 있으므로, DNA칩 백그라운드(background)의 발광정도를 충분히 낮추어 칩의 특성을 향상시킬 수 있다. 이러한 기판특성으로 아민계 기판에서 자주 발생하는 스팟(spot)의 유성꼬리화(comet tail) 현상이나 백그라운드 얼룩 등 다양한 문제점을 원천적으로 극복할 수 있다. 본 발명에 사용된 물질의 관능기인 환형 무수화물은 뛰어난 반응성으로 인해 아민기와의 반응수율이 우수할 뿐 만 아니라 반응소요시간도 기존에 사용되는 가교제(crosslinker)보다 상당히 줄일 수 있다. 또한, 환형 무수화물 관능기가 분자 양쪽 말단에 존재하는 구조적 특징으로 인해 스페이서(spacer) 혹은 가교제(homobifunctional crosslinker)로서의 역할을 기대할 수도 있다. 한쪽은 기판에 다른 한쪽은 액상의 생체분자에 결합하므로, 불균일 반응계에서 일어날 수 있는 확산저항이나 입체장애 효과를 줄일 수 있다. 그리고, 기판 표면에 고정화층으로 반응성이 우수한 환형 무수화물을 도입함으로써, 이들 환형 무수화물이 다양한 다른 관능기로 변환될 수 있어 가교제(crosslinker)로서의 응용예는 상당히 넓다고 할 수 있다.
상기 환형 무수화물 고정화층을 포함하는 생체물질 고정용 기판의 형성과정을 도 2에 도시하였다. 먼저 세정된 기판(1) 위에 아민층(2)을 형성한다(S10). 이때 기판은 근본적으로 투명한 고체기질 또는 실리콘 웨이퍼와 같은 불투명 고체기질, 어느 것이라도 사용 가능하며 특히 적합한 물질로는 환경적으로 안정하거나 내화학성을 가진 유리, 폴리카보네이트, 폴리에스터, 폴리에틸렌(PE), 폴리프로필렌(PP) 또는 웨이퍼 등이 가능하나 이들에 한정되는 것은 아니다. 상기 아민층의 형성(S10)은 세정된 기판을 아민계 코팅 물질을 코팅하여 이루어진다.
상기 아민계 코팅물질은 이환형 무수화물과 반응할 수 있는 1차 또는 2차 아민을 포함하고 있는 물질이면 된다. 도 2에서 R은 상기 아민계 코팅물질에 따라 달라질 수 있으며, 하기 화학식 1 또는 2의 R1에 해당된다. 아민계 관능기를 보유하고 있는 물질은 다음과 같은 화학식 1 또는 2로 표현될 수 있다.
NH2-R1-Si(OR2)3(1)
NH-(R1-Si-(OR2)3)2(2)
상기 식에서 R1은 알킬, 방향족 탄화수소, 에테르, 에스테르, 및 이민으로이루어진 군에서 선택되며, 바람직하게는 메틸, 에틸, 프로필, 또는 부틸이다. R2는 수소, 탄소원자 수가 1 내지 20개의 알킬기 또는 페닐기로 이루어진 군에서 선택된다.
상기 아민계 코팅물질의 바람직한 예로는 3-아미노프로필트리메톡시실란(aminopropyltrimethoxysilane), 3-아미노프로필트리에톡시실란(aminopropyltriethoxysilane), 2-아미노운데실트리메톡시실란(aminoundecyltrimethoxysilane), 아미노페닐트리메톡시실란(aminophenyltrimethoxysilane), 비스(트리메톡시릴릴프로필)아민(bis(trimethoxysilylpropyl)amine), N-(2-아미노에틸아미노프로필)트리메톡시실란(N-(2-aminoethylaminopropyl)trimethoxysilane) 등이 있다.
또한 아민막의 소수성을 조절하기 위하여 하기 화학식 3의 소수성 실란화합물이나 결착력 증대를 위해 하기 화학식 4의 실란 알콕사이드, 또는 이들 모두를 상기 아민계 코팅물질에 혼합하여 사용할 수 있다.
(3)
상기 식에서, R3는 탄소수 1 내지 14의 알킬기, 탄소수 6 내지 12의 방향족기또는 치환된 방향족기(여기서 치환기로는 메틸, 에틸 또는 프로필이 바람직함) 및 CX3(X는 할로겐)로 이루어진 군에서 선택되고, 바람직하게는 메틸, 에틸 또는 프로필이며, R4및 R5는 각각 독립적으로 탄소수 1 내지 14의 알콕시, 아세톡시, 히드록시기 및 할로겐기로 이루어진 군에서 선택되고, 바람직하게는 메톡시, 에톡시, 아세톡시 또는 염소이고, R6은 수소, 탄소수 1 내지 14의 알킬기 및 탄소수 6 내지 12의 방향족기로 이루어진 군에서 선택되고, 바람직하게는 메틸 또는 에틸이며, k는 1 내지 15의 정수이다.
M(OR7)n(4)
상기 식에서 M은 주기율표의 4B, 3A, 4A, 및 5A 족 원소로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 원소이고, 바람직하게는 Si, Zr, Ti, Al, Sn, In 및 Sb로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 원소이며, R7은 수소, 탄소수 1 내지 20의 알킬기 또는 탄소수 6 내지 12의 방향족기이고, 바람직하게는 수소, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸 또는 페닐이며, n은 M에 따라 결정되며 3 내지 4의 범위에 있다.
상기 화학식 3의 소수성 실란 화합물을 아민계 코팅물질과 함께 사용하면 아민층의 친수성을 조절할 수 있다. 이러한 소수성 실란 화합물의 예로는 메틸트리메톡시실란(methyltrimethoxysilane), 프로필트리아세톡시실란(propyltriacetoxysilane) 등이 있다.
상기 화학식 4의 실란 알콕사이드를 함께 사용하면 기판과의 결착력을 증대시킬 수 있다. 상기 화학식 4를 가지는 화합물의 바람직한 예로는 테트라에틸오르토실리케이트와 같은 실리콘 테트라알콕사이드, 알루미늄 트리부톡사이드, 지르코늄 테트라부톡사이드 등이 있다.
상기 아민계 코팅 물질과 상기 화학식 3 또는 4의 화합물을 함께 사용하는 0.01:99.99 내지 100:0의 중량비로 사용하는 것이 바람직하며, 50:50 내지 95:5의 중량비로 사용되는 것이 더 바람직하다.
상기 화학식 1, 2, 또는 이들의 혼합물, 선택적으로 화학식 3 또는 4의 화합물을 추가로 포함하는 아민계 코팅물질을 물, 에탄올, 메탄올 등과 같은 알코올류를 첨가하여 코팅 용액을 제조하고; 상기 코팅 용액을 교반하여 실란화합물을 축합 반응시켜 용액 내에 존재하는 올리고머 수화물을 얻은 다음 이를 세정된 기판에 코팅하여 얻어진 아민 코팅막을 100~300도 정도의 온도에서 소성과정을 거쳐 3차원 망상구조층을 형성하여 아민층을 형성할 수 있다.
또한 아민계 코팅물질을 포함하는 용액을 침지코팅법(자기조립박막코팅법), 스핀 코팅법, 스프레이법, 프린팅법 등과 같은 습식 코팅방법으로 코팅처리하고 다시 코팅물질에 사용된 용매로 세정하여 기판 표면에 존재하는 불순물 및 물리적으로 약하게 결합된 아민계 코팅 물질을 제거함으로써 기판 위에 아민 단분자막을 형성시키는 방법이 이용될 수도 있다. 침지코팅법(자기조립박막코팅법)은 1분 이상의 침지시간이면 가능하고 스핀 코팅법은 300 rpm ~ 1000 rpm 범위에서 가능하다.
상기에서와 같이 형성된 아민층(2) 위에 이환형 무수화물(dicyclic anhydride)을 코팅하여 고정화층(3)을 형성한다(S12).
이환형 무수화물(dicyclic anhydride)을 아민계 기판에 적용함으로써 얻을 수 있는 가장 큰 효과는 아민계 기판을 이용한 바이오 칩 제작의 필수 공정중의 하나인 비활성화(blocking) 과정을 생략할 수 있는 동시에 탐침(probe) 물질의 고정화시킬 수 있는 작용기로서의 역할을 동시에 수행할 수 있다는 것이다.
상기 이환형 무수화물은 하기 화학식 5로 표현될 수 있다.
CA-R8-CA (5)
상기 화학식에서 CA는 환형무수화물(cyclic anhydride)로, 바람직하게는 숙시닉 안하이드라이드(succinic anhydride) 또는 글루타릭 안하이드라이드(glutaric anhydride)이다. R8은 탄소원자수가 1 내지 20 정도의 알킬기, 페닐기, 나프탈렌을 포함한 다중환 방향족기(polycyclic aromatic group) 또는 에테르이다. 대표적인 화합물로는 1,2,4,5-벤젠테트라카르복실릭 디안하이드라이드(1,2,4,5-benzenetetracarboxylic dianhydride), 3,3',4,4'-벤조페논테르라카르복실릭 디안하이드라이드(3,3',4,4'-benzophenonetetracarboxylic dianhydride), 1,4,5,8-나프탈렌테트라카르복실릭 디안하이드라이드(1,4,5,8-naphthalenetetracarboxylic dianhydride), 1,4-부틸카르복실릭 디안하이드라이드(1,4-buthylcarboxylic dianhydride), 1,5-메톡시펜탄카르복실릭 디안하이드라이드(1,5-methoxypentanecarboxylic dianhydride) 등이 있다.
이환형 무수화물(dicyclic anhydride)을 0.02 내지 90 중량%의 농도를 갖도록 유기 용매에 녹여 교반하여 코팅조성물로 제조하여 사용하는 것이 바람직하다.이환형 무수화물의 함량이 0.02 중량% 미만의 농도에서는 효과적인 이환형 무수화물 고정화층의 형성이 어렵고 90 중량%를 초과하는 경우에는 코팅성을 확보하기 어렵다. 사용하는 용매는 물과 알코올류를 제외하며 극성을 가지고 있는 용매를 사용하는 것이 바람직하다. 물 혹은 알코올류의 용매에 무수화물은 분해된다. 용매로서 가장 대표적인 것은 메틸에틸케톤, 디메틸포름아마이드, 메틸피롤리돈(N-methyl pyrrolidone) 등이 있다.
이환형 무수화물(dicyclic anhydride) 용액에 아민기판을 10분 이상 침적하여 기판위에 환형무수화물 반응기가 단분자막으로 형성되도록 자기조립박막코팅을 수행한다. 상기 반응은 아민기에 의한 친핵성 치환반응으로 진행된다. 반응시간 종료 후 반응용매를 사용하여 물리적으로 흡착되어 있는 이환형 무수화물을 세정제거하고, 질소 분위기하에서 건조시킨다. 잔존하는 세정용매를 제거하기 위해 질소분위기의 오븐에서 건조시킨다. 표면 무수화물 관능기의 형성은 접촉각과 아민 관능기와만 선택적으로 반응이 진행되는 형광체(FITC; fluorescence isothiocynate) 처리를 통해 확인할 수 있다.
상기와 같이 아민층위에 이환형 무수화물 고정화층이 형성된 생체물질 고정용 기판에 생체물질 또는 관능기를 가지도록 활성화된 생체물질을 반응시켜 결합시킨 다음 미반응 생체물질을 세정하여 패턴을 형성함으로써 제조되는 바이오칩을 제공한다. 생체물질과 고정화 관능기의 반응시간은 1 내지 24시간이 바람직하다.
본 발명에서 "생체물질"이라 함은 생물에서 유래되거나, 이와 동등한 것이나 생체외에서 제조된 것을 모두 포함하며, 예컨대 효소, 단백질, 항체, 미생물, 동식물 세포 및 기관, 신경세포, DNA, 및 RNA 등을 의미한다. 더욱 바람직하게는 DNA, RNA 또는 단백질일 수 있으며, 여기서, 상기 DNA는 cDNA, 게놈 DNA, 올리고뉴클레오타이드를 포함하며, 상기 RNA는 게놈 RNA, mRNA, 올리고뉴클레오타이드를 포함하며, 상기 단백질의 예로는 항체, 항원, 효소, 펩타이드 등을 포함한다.
생체물질은 포토리소그래피(photolithography) 방법, 잉크젯 프린터와 같은 압전 인쇄(piezoelectric printing) 방법, 마이크로 피펫팅, 스폿팅(spotting) 등의 방법을 통하여 고정화 기판에 고정될 수 있다.
바이오 칩중 DNA칩을 제조하는 방법을 간략히 기술하면 기판 표면위에 생체물질, 즉 올리고핵산을 상기 방법중 하나로 고정화시키고, 여기에 형광물질로 라벨링(labelling)시킨 시료 용액(target DNA)과 1 내지 24시간 정도 일정조건하에서 반응시켜, 발광되는 빛을 레이져 빔을 조사하여 신호처리한다.
이하 본 발명의 바람직한 실시예를 기재한다. 그러나 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것으로서 본 발명이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
[실시예]
실시예 1: 생체물질 고정용 기판의 제조
3-아미노프로필트로메톡시실란 0.2g과 비스(트리메톡시실릴프로필)아민(bis(trimethoxysilylpropyl)amine) 0.1g 을 에탄올 150ml에 혼합, 교반하여 아민코팅액으로 사용한다. 이 코팅액에 세정된 슬라이드 타입 유리를 침지시켜 아민 코팅액을 코팅하고, 120 도에서 1시간 동안 건조하였다. 1,2,4,5-벤젠테르라카르복실릭 디안하이드라이드(benzenetetracarboxylicdianhydride)를 N-메틸피롤리돈(N-methyl pyrrolidone)에 녹여 0.04M (0.84 중량%) 농도로 만들었다. 아민코팅된 슬라이드를 1,2,4,5-벤젠테르라카르복실릭 디안하이드라이드 용액에 침지하여 코팅을 수행하였다. 500ml의 메틸에틸케톤으로 2번 세정 후 질소분위기 80도에서 건조시켜 생체물질 고정용 기판을 제조하였다.
실시예 2: 생체물질 고정용 기판의 제조
1,2,4,5-벤젠테르라카르복실릭 디안하이드라이드대신 1,4,5,8-나프탈렌테트라카르복실릭 디안이드라이드(1,4,5,8-naphthalenetetracarboxylic dianhydride)를 사용한 것을 제외하고 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 생체물질 고정용 기판을 제조하였다.
비교예 1: 생체물질 고정용 기판의 제조
3-아미노프로필트로메톡시실란 0.2g과 비스(트리메톡시실릴프로필)아민(bis(trimethoxysilylpropyl)amine) 0.1g을 에탄올 150ml 에 혼합, 교반하여 아민코팅액으로 사용하였다. 이 코팅액에 세정된 슬라이드 타입 유리를 침지시켜 아민 코팅액을 코팅하고, 120 도에서 1시간 동안 건조하여 생체물질 고정용 기판을 제조하였다.
비교예 2: 생체물질 고정용 기판의 제조
3-아미노프로필트로메톡시실란 0.2g과 비스(트리메톡시실릴프로필)아민(bis(trimethoxysilylpropyl)amine) 0.1g을 에탄올 150ml 에 혼합, 교반하여 아민코팅액으로 사용한다. 이 코팅액에 세정된 슬라이드 타입 유리를 침지시켜 아민 코팅액을 코팅하고, 120 도에서 1시간 동안 건조하였다. DSG(disuccimidyl glutarate)을 메틸피롤리돈(N-methyl pyrrolidone)에 녹여 0.04M 농도로 만들었다. 아민코팅된 슬라이드를 DSG(disuccimidyl glutarate) 용액으로 침지코팅을 수행하였다. 500ml의 메틸에틸케톤으로 2번 세정 후 질소분위기 80도에서 건조시켜 생체물질 고정용 기판을 제조하였다.
상기 실시예 1 및 비교예 1, 2에 따라 제조된 생체물질 고정용 기판을 FITC를 디메틸포름아미드에 용해시킨 용액을 이용하여 처리하여 고정화층을 라벨화시킨 다음 레이져 빔을 연속적으로 조사하여 FITC에 의해 발광되는 빛을 스캐너(Packard사)로 검출하였다. 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.
[표 1]
실시예 1 비교예 1 비교예 2
FITC 형광강도(a.u.) 10679 31456 31400
상기 표 1에서 보는 바와 같이 이환형 무수화물 처리된 실시예 1의 기판이 이환형 무수화물을 사용하지 않은 비교예 1이나 DSG로 처리된 비교예 2의 기판에 비하여 아민기가 더 많이 반응에 참여하여 형광정도가 상당히 낮음을 알 수 있다.
DNA 칩의 제조 및 비특이적 결합강도 측정
실시예 1 및 비교예 1, 2의 기판에 DNA를 접촉식 방식인 스폿팅(Spotting) 방법으로 프로브 DNA를 고정하여 DNA 칩을 제조하였다. 이 공정을 좀더 상세히 설명하면 다음과 같다. 올리고뉴클레오타이드 프로브(5' CAGGTGGGACTGGTT-NH23') 를 DMSO 에 섞어, 스포터를 사용하여 기판위에 스폿을 형성하였다. 1시간 동안 37도 100% 의 습도에서 고정화하고, 세정 후처리를 수행하였다. 얻어진 기판을 상기 프로브와 상보적인 타겟 올리고뉴클레오타이드를 혼성화반응시켰다. 혼성화 조건은 0.1% SSPET (0.1% Triton X-100 을 포함하는 saline sodium phosphate EDTA buffer) 용매에 타겟을 녹이고, 37도 에서 14시간 동안 반응시켰다. 반응후 칩을 6X SSPET 와 3X SSPET 로 각각 5분간 세척하고, 질소상에서 건조시켰다. 건조된 칩을 엑손 (Axon) 사의 GenePix 4000B 모델을 이용하여 스캐닝하였다. 그 결과를 도 3a 내지 도 3c에 도시하였다. 스캔이미지로부터 측정된 비특이적 결합강도(non-specific binding intensity)를 하기 표 2에 기재하였다.
[표 2]
실시예 1 비교예 1 비교예 2
비특이적 결합강도(a.u.) 210 8000 6100
표 3에서 보는 바와 같이 이환형 무수화물로 처리한 실시예 1의 기판이 이환형 무수화물로 처리되지 않은 비교예 1 및 DSG로 처리된 비교예 2의 기판에 비하여 비특이적 결합(non-specific binding)이 상당히 적음을 알 수 있다. 또한 도 3a 내지 도 3c에서 보는 바와 같이 비특이적 결합이 적음에 따라 실시예 1의 기판을 사용하여 제조된 DNA 칩의 이미지가 비교예 1 또는 비교예 2의 기판을 사용하여 제조된 DNA 칩의 이미지보다 선명한 것으로 나타났다.
본 발명의 생체물질 고정용 기판은 환형 무수화물이 고정화층에 도입되어 바이오칩 제조공정시 비활성화(blocking) 공정을 생략할 수 있으므로 보다 간편하게바이오칩을 제조할 수 있고 바이오 칩의 혼성화 감도를 향상시킬 수 있다. 상기 환형 무수화물은 뛰어난 반응성으로 인해 아민기와의 반응수율이 우수할 뿐 만 아니라 반응소요시간도 기존에 사용되는 가교제(crosslinker)보다 상당히 줄일 수 있다. 또한, 환형 무수화물 관능기가 분자 양쪽 말단에 존재하는 구조적 특징으로 인해 스페이서(spacer) 혹은 가교제(homobifunctional crosslinker)로서의 역할을 기대할 수도 있다. 한쪽은 기판에 다른 한쪽은 액상의 생체분자에 결합하므로, 불균일반응계에서 일어날 수 있는 확산저항이나 입체장애 효과를 줄일 수 있다.

Claims (23)

  1. 기판; 상기 기판 위에 아민층; 및 상기 아민층 위에 형성된 환형 무수화물 고정화층을 포함하는 생체물질 고정용 기판.
  2. 제1항에 있어서, 상기 기판은 유리, 폴리카보네이트, 폴리에스터, 폴리에틸렌(PE), 폴리프로필렌(PP) 및 웨이퍼로 이루어진 군에서 선택되는 것인 생체물질 고정용 기판.
  3. 제1항에 있어서, 상기 아민층 형성용 화합물은 하기 화학식 1의 화합물, 화학식 2의 화합물 또는 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택되는 아민계 물질인 생체물질 고정용 기판:
    NH2-R1-Si(OR2)3(1)
    NH-(R1-Si-(OR2)3)2(2)
    상기 식에서 R1은 알킬, 방향족 탄화수소, 에테르, 에스테르, 및 이민으로 이루어진 군에서 선택되며, R2는 수소, 탄소원자 수가 1~20개 정도의 알킬기 또는 페닐기로 이루어진 군에서 선택됨.
  4. 제3항에 있어서, 상기 아민계 물질은 3-아미노프로필트리메톡시실란(aminopropyltrimethoxysilane), 3-아미노프로필트리에톡시실란(aminopropyltriethoxysilane), 2-아미노운데실트리메톡시실란(aminoundecyltrimethoxysilane), 아미노페닐트리메톡시실란(aminophenyltrimethoxysilane), 비스(트리메톡시릴릴프로필)아민(bis(trimethoxysilylpropyl)amine), N-(2-아미노에틸아미노프로필)트리메톡시실란(N-(2-aminoethylaminopropyl)trimethoxysilane) 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택되는 것인 생체물질 고정용 기판.
  5. 제3항에 있어서, 상기 아민층 형성용 화합물은 하기 화학식 3의 소수성 실란 화합물, 하기 화학식 4의 실란 알콕사이드, 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택되는 화합물을 추가로 포함하는 것인 생체물질 고정용 기판:
    (3)
    상기 식에서, R3는 탄소수 1 내지 14의 알킬기, 탄소수 6 내지 12의 방향족기 또는 치환된 방향족기(여기서 치환기로는 메틸, 에틸 또는 프로필임) 및 CX3(X는 할로겐)로 이루어진 군에서 선택되고, R4및 R5는 각각 독립적으로 탄소수 1 내지 14의알콕시, 아세톡시, 히드록시기 및 할로겐기로 이루어진 군에서 선택되고, R6은 수소, 탄소수 1 내지 14의 알킬기 및 탄소수 6 내지 12의 방향족기로 이루어진 군에서 선택되고, k는 1 내지 15의 정수임;
    M(OR7)n(4)
    상기 식에서 M은 주기율표의 4B, 3A, 4A, 및 5A 족 원소로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 원소이고, R7은 수소, 탄소수 1 내지 20의 알킬기 또는 탄소수 6 내지 12의 방향족기이고, n은 M에 따라 결정되며 3 내지 4의 범위에 있음.
  6. 제5항에 있어서, 상기 환형 무수화물 고정화층 형성용 화합물은 하기 화학식 (5)의 이환형 무수화물를 포함하는 것인 생체물질 고정용 기판:
    CA-R8-CA (5)
    상기 식에서 CA는 환형무수화물(cyclic anhydride)이고, R8은 탄소원자수가 1~20 정도의 알킬기, 페닐기, 나프탈렌을 포함한 다중환 방향족기(polycyclic aromatic group) 및 에테르로 이루어진 군에서 선택됨.
  7. 제6항에 있어서, 상기 환형무수화물은 숙시닉 안하이드라이드(succinic anhydride) 또는 글루타릭 안하이드라이드(glutaric anhydride)인 생체물질 고정용 기판.
  8. 제6항에 있어서, 상기 이환형 무수화물은 1,2,4,5-벤젠테트라카르복실릭 디안하이드라이드(1,2,4,5-benzenetetracarboxylic dianhydride), 3,3',4,4'-벤조페논테르라카르복실릭 디안하이드라이드(3,3',4,4'-benzophenonetetracarboxylic dianhydride), 1,4,5,8-나프탈렌테트라카르복실릭 디안이드라이드(1,4,5,8-naphthalenetetracarboxylic dianhydride), 1,4-부틸카르복실릭 디안하이드라이드(1,4-buthylcarboxylic dianhydride), 1,5-메톡시펜탄카르복실릭 디안하이드라이드(1,5-methoxypentanecarboxylic dianhydride) 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택되는 것인 생체물질 고정용 기판.
  9. 기판 위에 아민계 코팅물질을 코팅하여 아민층을 형성하는 단계; 및
    상기 아민층 위에 이환형 무수화물(dicyclic anhydride)을 코팅하여 고정화층을 형성하는 단계를 포함하는 생체물질 고정용 기판의 제조방법.
  10. 제9항에 있어서, 상기 아민계 코팅물질은 하기 화학식 1의 화합물, 화학식 2의 화합물 또는 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택되는 것인 생체물질 고정용 기판의 제조방법:
    NH2-R1-Si(OR2)3(1)
    NH-(R1-Si-(OR2)3)2(2)
    상기 식에서 R1은 알킬, 방향족 탄화수소, 에테르, 에스테르, 및 이민으로 이루어진 군에서 선택되며, R2는 수소, 탄소원자 수가 1~20개 정도의 알킬기 또는 페닐기로 이루어진 군에서 선택됨.
  11. 제10항에 있어서, 상기 아민계 코팅물질은 3-아미노프로필트리메톡시실란(aminopropyltrimethoxysilane), 3-아미노프로필트리에톡시실란(aminopropyltriethoxysilane), 2-아미노운데실트리메톡시실란(aminoundecyltrimethoxysilane), 아미노페닐트리메톡시실란(aminophenyltrimethoxysilane), 비스(트리메톡시릴릴프로필)아민(bis(trimethoxysilylpropyl)amine), N-(2-아미노에틸아미노프로필)트리메톡시실란(N-(2-aminoethylaminopropyl)trimethoxysilane) 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택되는 것인 생체물질 고정용 기판의 제조방법.
  12. 제10항에 있어서, 상기 아민계 코팅물질은 하기 화학식 3의 소수성 실란 화합물, 하기 화학식 4의 실란 알콕사이드, 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택되는 화합물을 추가로 포함하는 것인 생체물질 고정용 기판의 제조방법:
    (3)
    상기 식에서, R3는 탄소수 1 내지 14의 알킬기, 탄소수 6 내지 12의 방향족기 또는 치환된 방향족기(여기서 치환기로는 메틸, 에틸 또는 프로필임) 및 CX3(X는 할로겐)로 이루어진 군에서 선택되고, R4및 R5는 각각 독립적으로 탄소수 1 내지 14의 알콕시, 아세톡시, 히드록시기 및 할로겐기로 이루어진 군에서 선택되고, R6은 수소, 탄소수 1 내지 14의 알킬기 및 탄소수 6 내지 12의 방향족기로 이루어진 군에서 선택되고, k는 1 내지 15의 정수임;
    M(OR7)n(4)
    상기 식에서 M은 주기율표의 4B, 3A, 4A, 및 5A 족 원소로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 원소이고, R7은 수소, 탄소수 1 내지 20의 알킬기 또는 탄소수 6 내지 12의 방향족기이고, n은 M에 따라 결정되며 3 내지 4의 범위에 있음.
  13. 제9항에 있어서, 상기 이환형 무수화물은 하기 화학식 (5)를 가지는 것인 생체물질 고정용 기판의 제조방법:
    CA-R8-CA (5)
    상기 식에서 CA는 환형무수화물(cyclic anhydride)이고, R8은 탄소원자수가 1~20 정도의 알킬기, 페닐기, 나프탈렌을 포함한 다중환 방향족기(polycyclic aromatic group) 및 에테르로 이루어진 군에서 선택됨.
  14. 제13항에 있어서, 상기 환형무수화물은 숙시닉 안하이드라이드(succinic anhydride) 또는 글루타릭 안하이드라이드(glutaric anhydride)인 생체물질 고정용 기판의 제조방법.
  15. 제13항에 있어서, 상기 이환형 무수화물은 1,2,4,5-벤젠테트라카르복실릭 디안하이드라이드(1,2,4,5-benzenetetracarboxylic dianhydride), 3,3',4,4'-벤조페논테르라카르복실릭 디안하이드라이드(3,3',4,4'-benzophenonetetracarboxylic dianhydride), 1,4,5,8-나프탈렌테트라카르복실릭 디안이드라이드(1,4,5,8-naphthalenetetracarboxylic dianhydride), 1,4-부틸카르복실릭 디안하이드라이드(1,4-buthylcarboxylic dianhydride), 1,5-메톡시펜탄카르복실릭 디안하이드라이드(1,5-methoxypentanecarboxylic dianhydride) 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택되는 것인 생체물질 고정용 기판의 제조방법.
  16. 제9항에 있어서, 상기 이환형 무수화물은 0.02 내지 90 중량%의 농도를 갖도록 유기 용매에 첨가하여 코팅되는 것인 생체물질 고정용 기판의 제조방법.
  17. 제16항에 있어서, 상기 유기용매는 메틸에틸케톤, 디메틸포름아마이드, 메틸피롤리돈(N-methyl pyrrolidone) 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택되는 것인 생체물질 고정용 기판의 제조방법.
  18. 제1항 내지 제8항 중 어느 하나의 항에 따른 기판에 고정화된 생체 물질을 포함하는 바이오칩.
  19. 제18항에 있어서, 상기 생체 물질은 효소, 단백질, DNA, RNA, 미생물, 동식물 세포 및 기관, 및 신경세포로 이루어진 군에서 선택되는 것인 바이오칩.
  20. 제18항의 바이오 칩을 포함하는 바이오센서.
  21. 제9항 내지 제17항 중 어느 하나의 항에 따라 제조된 기판에 고정화된 생체 물질을 포함하는 바이오칩.
  22. 제21에 있어서, 상기 생체 물질은 효소, 단백질, DNA, RNA, 미생물, 동식물 세포 및 기관, 및 신경세포로 이루어진 군에서 선택되는 것인 바이오칩.
  23. 제21항의 바이오 칩을 포함하는 바이오센서.
KR1020030053041A 2003-07-31 2003-07-31 생체물질 고정용 기판 및 이의 제조방법 KR20050014409A (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020030053041A KR20050014409A (ko) 2003-07-31 2003-07-31 생체물질 고정용 기판 및 이의 제조방법

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020030053041A KR20050014409A (ko) 2003-07-31 2003-07-31 생체물질 고정용 기판 및 이의 제조방법

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20050014409A true KR20050014409A (ko) 2005-02-07

Family

ID=37225550

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020030053041A KR20050014409A (ko) 2003-07-31 2003-07-31 생체물질 고정용 기판 및 이의 제조방법

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR20050014409A (ko)

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100884934B1 (ko) * 2007-05-21 2009-02-23 한국기술산업 (주) 비형광 물질을 도포하여 웰이 형성된 단백질 칩, 및 그제작 방법
KR100968546B1 (ko) * 2008-06-19 2010-07-08 한국전자통신연구원 바이오센서 기판의 패턴형성방법 및 이를 이용한바이오센서
KR101535069B1 (ko) * 2014-02-03 2015-07-09 가천대학교 산학협력단 폴리카보네이트 기판 표면에 친수성 또는 소수성 코팅층을 형성하는 방법 및 친수성 또는 소수성 마이크로채널을 구비한 폴리카보네이트 기판 접합체의 제조 방법
KR20150123391A (ko) * 2014-04-24 2015-11-04 한국과학기술원 바이오물질 부착을 위한 기질필름의 표면처리방법 및 이를 이용한 면역센서칩
KR101875470B1 (ko) * 2017-04-04 2018-07-06 한국생명공학연구원 바이오 센서 기판, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 바이오 센서
KR101875471B1 (ko) * 2017-04-04 2018-07-06 한국생명공학연구원 바이오 센서 기판, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 바이오 센서
KR20190056627A (ko) * 2017-11-17 2019-05-27 국방과학연구소 석영 모세관을 이용한 형광표지 없는 생물입자 검출 시스템

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100884934B1 (ko) * 2007-05-21 2009-02-23 한국기술산업 (주) 비형광 물질을 도포하여 웰이 형성된 단백질 칩, 및 그제작 방법
KR100968546B1 (ko) * 2008-06-19 2010-07-08 한국전자통신연구원 바이오센서 기판의 패턴형성방법 및 이를 이용한바이오센서
KR101535069B1 (ko) * 2014-02-03 2015-07-09 가천대학교 산학협력단 폴리카보네이트 기판 표면에 친수성 또는 소수성 코팅층을 형성하는 방법 및 친수성 또는 소수성 마이크로채널을 구비한 폴리카보네이트 기판 접합체의 제조 방법
KR20150123391A (ko) * 2014-04-24 2015-11-04 한국과학기술원 바이오물질 부착을 위한 기질필름의 표면처리방법 및 이를 이용한 면역센서칩
KR101875470B1 (ko) * 2017-04-04 2018-07-06 한국생명공학연구원 바이오 센서 기판, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 바이오 센서
KR101875471B1 (ko) * 2017-04-04 2018-07-06 한국생명공학연구원 바이오 센서 기판, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 바이오 센서
WO2018186683A1 (ko) * 2017-04-04 2018-10-11 한국생명공학연구원 바이오 센서 기판, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 바이오 센서
WO2018186682A1 (ko) * 2017-04-04 2018-10-11 한국생명공학연구원 바이오 센서 기판, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 바이오 센서
KR20190056627A (ko) * 2017-11-17 2019-05-27 국방과학연구소 석영 모세관을 이용한 형광표지 없는 생물입자 검출 시스템

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Benters et al. Dendrimer‐activated solid supports for nucleic acid and protein microarrays
EP1553415B1 (en) Method for immobilizing a biomolecule on a solid substrate at a high density by using the substrate having an activated carboxyl group on a surface thereof and microarray produced using the method
EP1974214B1 (en) Supports for assaying analytes and methods of making and using thereof
JP4233283B2 (ja) 生体物質固定用基板及びその製造方法
US20020090739A1 (en) Silsesquioxane-coated substrates for immobilizing biomolecules
US20210011013A1 (en) Novel Biochip Substrate, Preparation Method and Application Thereof
JP4505287B2 (ja) マイクロチップ並びにその製造方法及びそれを用いた検査方法
KR100484640B1 (ko) 생물분자 고정용 올리고머, 및 이를 포함하는 생물분자고정화 조성물
KR20050014409A (ko) 생체물질 고정용 기판 및 이의 제조방법
US20030129740A1 (en) Method of preparing substrate having functional group pattern for immobilizing physiological material
US7195908B2 (en) Supports treated with triamine for immobilizing biomolecules
KR100778432B1 (ko) 생체물질 고정용 올리고머, 그 제조 방법 및 이를 포함하는 생체물질 고정용 코팅 조성물
KR20050023753A (ko) 생체물질 고정용 기판 및 이의 제조방법
KR100450191B1 (ko) 생체물질 고정용 기판 및 이의 제조방법
KR100823474B1 (ko) 생물분자 고정화 조성물, 바이오칩 고정화층의 제조방법및 상기 고정화층을 포함하는 바이오칩
US10180429B2 (en) Molecule immobilization patterns and method for forming the same
US20050136538A1 (en) Lithographic method for attaching biological cells to a solid substrate using a small molecule linker
KR20050018028A (ko) 생체물질 고정용 기판의 제조방법
KR100869784B1 (ko) 생체물질 고정용 발색 화합물 및 이를 이용한 생체물질고정용 코팅막 제조방법
KR20030057219A (ko) 기질에 중간층을 형성시키는 화합물, 이를 포함하는중간층 형성용 조성물 및 이를 이용한 바이오칩
Dietrich et al. Chapter The Role of Substrates in Microarray Experimentation and How to Choose the Correct Coating for Microarraying
Dietrich et al. 6 The Role of Substrates in Microarray Experimentation and How to Choose the Correct Coating for Microarraying

Legal Events

Date Code Title Description
WITN Withdrawal due to no request for examination