CN1403566A - 桑黄菌丝体制品及其生产方法和用途 - Google Patents

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章卫民
钟韩
徐学平
黄茂先
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桑黄菌丝体制品及其生产方法和用途，本发明的桑黄菌丝体由桑黄菌[Phellinus yucatanensis(Murr.)Imaz.]为菌种进行人工发酵而制得，其发酵工艺流程包括：试管斜面菌种培养、摇瓶种子培养、一级种子培养、二级种子培养、发酵罐培养、放罐。本发明的桑黄菌丝体制品可用于治疗迁延性、慢性肝炎。本发明的生产工艺稳定可靠，适于工业化生产，解决了自然资源严重不足的桑黄菌这种药用资源的开发和利用问题。

Description

桑黄菌丝体制品及其生产方法和用途
本发明属于一种药用真菌发酵菌丝体制品及其生产方法。
桑黄[Phellinus yucatanensis(Murr.)Imaz.]属担子菌亚门(Basidiomycotina)、非褶菌目(Aphyllophorales)、多孔菌科(Polyporaceae)的真菌，在自然界十分罕见。《本草纲目》记载可治癖饮积聚，腹痛金疮。《中药大辞典》叙述可治内科等疾病。民间以子实体入药，用于治疗肝炎、肝硬化等。直接用桑黄子实体入药，既存在自然资源严重不足的问题，还存在使用不方便和疗效较低的问题。
本发明的目的是提供一种利用桑黄菌进行人工发酵而制得的桑黄菌丝体制品及其进行工业化生产的方法，以解决桑黄自然资源的严重不足，生产的发酵菌丝体制品可用于治疗迁延性、慢性肝炎。
本发明所提供的桑黄菌丝体制品是由桑黄菌[Phellinus yucatanensis(Murr.)Imaz.]菌种经人工发酵而成的菌丝体，可制成胶囊或糖衣片，其主要有效成分为桑黄多糖，其单糖组成主要有葡萄糖、甘露糖、半乳糖、木糖、岩藻糖、阿拉伯糖等，属杂多糖，多糖分子中含有β构型糖甘键。
生产本发明所述的桑黄菌丝体制品的方法，是以桑黄菌[Phellinusyucatanensis(Murr.)Imaz.]为菌种按下述工艺流程进行人工发酵：
试管斜面菌种培养——→摇瓶种子培养——→一级种子培养——→二级种子培养——→发酵罐培养——→放罐
具体的工艺步骤如下：(1)试管斜面的培养：
培养基：PDA培养基加培养基总量(重量)0～0.01％的维生素B1；
培养条件：培养温度20～30℃，培养时间5～10天，pH自然；(2)摇瓶种子培养：
培养基组分(重量百分比)：葡萄糖1～5％，花生饼粉0.1～3％，酵母粉0.1～2％，MgSO4 0.05％，KH2PO4 0.1％；
培养条件：旋转式摇床培养，转速100～200次/分，培养温度20～30℃，pH自然，培养时间5～9天；(3)一级种子罐种子培养：
培养基组分(重量百分比)：葡萄糖1～5％，花生饼粉0.1～2％，酵母粉0.1～2％，MgSO4 0.05％，KH2PO4 0.1％，消泡油0.1～0.5％；
培养条件：接种量0.1～5％，培养温度20～30℃，通气量1∶0.1～1∶1.5v/v/分，搅拌转速100～250转/分，罐压0.2～0.8公斤/厘米2，pH自然，培养时间2～5天；(4)二级种子罐种子培养：
培养基组分(重量百分比)：同一级种子罐；
培养条件：接种量10～30％，搅拌转速100～250转/分，培养温度、培养时间、罐压、通气量、pH等同一级种子罐；(5)发酵罐培养：
培养基组分(重量百分比)：花生饼粉0.1～2％，酵母粉0.1～2％，葡萄糖1～5％，MgSO4 0.05％，KH2PO4 0.1％，消泡油0.2～0.8％；
培养条件：接种量10～30％，搅拌转速100～200转/分，培养温度、通气量、罐压、pH等同种子罐，培养时间72～120小时。
本发明的工艺方法稳定可靠，适于进行工业化生产。所生产的桑黄菌丝体产品经各种分析和试验，证明可作为治疗迁延性、慢性肝炎的医药原料或保健品原料。从而解决了自然资源严重不足的桑黄菌这种药用资源的开发和利用问题。
对本发明所生产的桑黄菌丝体的有关分析试验结果如下：
药化研究：结合药理试验，化学分析的结果表明，桑黄多糖是发酵菌丝体的主要有效成分，其单糖组成主要有葡萄糖、甘露糖、半乳糖、木糖、岩藻糖、阿拉伯糖等，属杂多糖，多糖分子中含有β构型糖甘键。
药理研究：药理试验结果表明，发酵菌丝体的醇沉物(含桑黄多糖)对中毒性肝炎动物模型有护肝效应，可促进小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能，提高炭廓清功能，对抗免疫抑制剂所引起的血清溶菌酶值的下降，提高外周淋巴细胞ANAE阳性率，对动物免疫中枢器官胸腺亦呈活性，且对炎症性关节肿有抗炎作用。因此桑黄菌丝体有护肝、抗炎作用及免疫活性。
毒性试验：发酵菌丝体醇沉物毒性测定结果如下：(1)急性毒性试验：小鼠口服LD50＞10g/Kg，腹腔注射LD50为3936.1mg/Kg，根据毒性分级标准，受试物属无毒级。(2)亚急性毒性试验：大鼠罐胃30天，无论高剂量组(约合临床量80倍)或低剂量组(约合临床量50倍)SGPT、NPN、血象等生理指标未见异常，给药
前后变化无显著差异，主要脏器(心、肝、肾)组织切片检查亦未见异常。
临床初试：用发酵菌丝体制成糖衣片供空军广州医院对迁延性、慢性病毒性肝炎进行治疗观察，共68例，结果SGPT复常率为63.2％，随访19例中复发率为31.5％，明显低于对照的五味子制剂组，该组复发率为69.8％。
实施例一
用桑黄菌[Phellinus yucatanensis(Murr.)Imaz.]菌种进行人工发酵生产菌丝体的工艺过程如下：1.摇瓶种子培养：(1)培养基：葡萄糖1％，花生饼粉0.5％，酵母粉0.2％，MgSO4 0.05％，KH2PO4 0.1％。(2)培养条件：旋转式摇床培养，转速120次/分，培养温度25℃，pH自然，培养时间6天。2.一级种子罐种子培养：(1)培养基：葡萄糖1％，花生饼粉0.5％，酵母粉0.5％，MgSO4 0.05％，KH2PO4 0.1％，消泡油0.2％。(2)培养条件：接种量0.5％，培养温度25℃，通气量1∶0.3v/v/分，搅拌转速150转/分，罐压0.3公斤/厘米2，pH自然，培养时间2天。3.二级种子罐种子培养：(1)培养基：同一级种子罐。(2)培养条件：接种量15％，搅拌转速、培养温度、培养时间、罐压、通气量、pH等同一级种子罐。4.发酵罐培养：(1)培养基：葡萄糖2％，花生饼粉0.5％，酵母粉0.1％，MgSO4 0.05％，KH2PO40.1％，消泡油0.3％。(2)培养条件：接种量10％，搅拌转速160转/分，培养温度、通气量、罐压、pH等同种子罐，培养时间80小时。
实施例二
1.摇瓶种子培养：(1)培养基：葡萄糖2％，花生饼粉1％，酵母粉0.2％，MgSO4 0.05％，KH2PO4 0.1％。(2)培养条件：旋转式摇床培养，转速160次/分，培养温度28℃，pH自然，培养时间7天，菌球密度约占培养液40～50％，菌液从混浊变清，黄色至深黄色。2.一级种子罐种子培养：(1)培养基：葡萄糖2％，花生饼粉0.8％，酵母粉0.1％，MgSO4 0.05％，KH2PO4 0.1％，消泡油0.3％。(2)培养条件：接种量0.8％，培养温度28℃，通气量1∶0.5v/v/分，搅拌转速180转/分，罐压0.4公斤/厘米2，pH自然，培养时间3天，发酵液由混浊变清，浅黄色，味香。3.二级种子罐种子培养：(1)培养基：同一级种子罐。(2)培养条件：接种量18％，搅拌转速200转/分，培养温度、培养时间、罐压、通气量、pH等同一级种子罐。培养3天后发酵液变稠，浅黄色，味香。4.发酵罐培养：(1)培养基：葡萄糖3％，花生饼粉1％，酵母粉0.2％，MgSO4 0.05％，KH2PO4 0.1％，消泡油0.4％。(2)培养条件：接种量16％，搅拌转速170转/分，培养温度、通气量、罐压、pH等同种子罐，培养时间95小时，还原糖0.5～2％以下，干菌丝得率1.5％；发酵液的菌球球形或近球形，直径最大0.3厘米，具长绒毛；菌丝丝状，粗2～4.8微米；锁状联合和分隔不明显。
实施例三1.摇瓶种子培养：(1)培养基：葡萄糖4％，花生饼粉2％，酵母粉1％，MgSO4 0.05％，KH2PO4 0.1％。(2)培养条件：旋转式摇床培养，转速180次/分，培养温度30℃，pH自然，培养时间9天。2.一级种子罐种子培养：(1)培养基：葡萄糖4％，花生饼粉1.5％，酵母粉2％，MgSO4 0.05％，KH2PO4 0.1％，消泡油0.5％。(2)培养条件：接种量3％，培养温度30℃，通气量1∶1.2v/v/分，搅拌转速200转/分，罐压0.8公斤/厘米2，pH自然，培养时间4天。3.二级种子罐种子培养：
(1)培养基：同一级种子罐。
(2)培养条件：接种量25％，搅拌转速、培养温度、培养时间、罐压、通气量、pH等同一级种子罐。4.发酵罐培养：(1)培养基：葡萄糖5％，花生饼粉2％，酵母粉1％，MgSO4 0.05％，KH2PO4 0.1％，消泡油0.6％。(2)培养条件：接种量20％，搅拌转速、培养温度、通气量、罐压、pH等同种子罐，培养时间120小时。

Claims (3)

1.一种桑黄菌丝体制剂，其特征在于是由桑黄菌[Phellinusyucatanensis(Murr.)Imaz.]菌种经人工发酵而成的菌丝体，其主要有效成分为桑黄多糖，其单糖组成主要有葡萄糖、甘露糖、半乳糖、木糖、岩藻糖、阿拉伯糖，属杂多糖，多糖分子中含有β构型糖甘键。
2.权利要求1所述的桑黄菌丝体的生产方法，其特征在于以桑黄菌[Phellinusyucatanensis(Murr.)Imaz.]为菌种，按以下工艺步骤进行人工发酵：(1)试管斜面的培养：
培养基：PDA培养基加培养基总量(重量)0～0.01％的维生素B1；
培养条件：培养温度20～30℃，培养时间5～10天，pH自然；(2)摇瓶种子培养：
培养基组分(重量百分比)：葡萄糖1～5％，花生饼粉0.1～3％，酵母粉0.1～2％，MgSO4 0.05％，KH2PO4 0.1％；
培养条件：旋转式摇床培养，转速100～200次/分，培养温度20～30℃，pH自然，培养时间5～9天；(3)一级种子罐种子培养：
培养基组分(重量百分比)：葡萄糖1～5％，花生饼粉0.1～2％，酵母粉0.1～2％，MgSO4 0.05％，KH2PO4 0.1％，消泡油0.1～0.5％；
培养条件：接种量0.1～5％，培养温度20～30℃，通气量1∶0.1～1∶1.5v/v/分，搅拌转速100～250转/分，罐压0.2～0.8公斤/厘米2，pH自然，培养时间2～5天；(4)二级种子罐种子培养：
培养基组分(重量百分比)：同一级种子罐；
培养条件：接种量10～30％，搅拌转速100～250转/分，培养温度、培养时间、罐压、通气量、pH等同一级种子罐；(5)发酵罐培养：
培养基组分(重量百分比)：花生饼粉0.1～2％，酵母粉0.1～2％，葡萄糖1～5％，MgSO4 0.05％，KH2PO4 0.1％，消泡油0.2～0.8％；
培养条件：接种量10～30％，搅拌转速100～200转/分，培养温度、通气量、罐压、pH等同种子罐，培养时间72～120小时。
3.权利要求1所述的桑黄菌丝体制品的用途是作为治疗迁延性、慢性肝炎的医药原料。
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