CN1317382C - 血芝的液体发酵方法及获得的产品 - Google Patents

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Abstract

本发明的目的在于提供一种真菌—血芝的液体发酵方法及其获得的产品，以利于制药工业、食品工业规模应用。血芝，学名皱盖假芝(Amauroderma rudis)，其子实体幼嫩时伤口处会有血样分泌物而得名。本发明血芝的液体发酵生产方法的培养基按照重量/重量的比例是：玉米粉1—2%、豆饼粉2—5%、葡萄糖2—5%、酵母膏0.2%、KHP2O40.1%，水余量，pH值5.5，0.1MPa、121℃灭菌20分钟；培养条件是：在250ml摇瓶中装入100—120ml培养基，接种后置于旋转摇床150—200rpm，28±1℃培养5天，过滤收集菌丝体。动物试验证明血芝的液体发酵产物具有超常的生物活性，在抗衰老和提高免疫机能方面有重要的应用前景。

Description

血芝的液体发酵方法及获得的产品
技术领域
本发明涉及到一种血芝生物发酵方法及获得的产品，属于食药两用真菌保健品的生物加工技术领域。
背景技术
血芝，学名皱盖假芝(Amauroderma rudis)，其子实体幼嫩时伤口处会有血样分泌物而得名。据初步研究报道，血芝营养丰富，可提高机体免疫力，治疗妇女病，对小鼠S180肉瘤抑制率可达80％以上，动物实验中也表现出很强的免疫增强作用。但目前无论是野生采集、人工种植还是工业培养对其均无规模利用的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种血芝的液体发酵方法及其获得的产品，以利于制药工业、食品工业规模应用。
本发明的技术方案是这样实现的：这种血芝的液体发酵方法，其特征在于：
1、血芝的液体发酵方法，其特征在于：
A、培养基：按照重量/重量的比例是：玉米粉1-2％、豆饼粉2-5％、葡萄糖2-5％、酵母膏0.2％、KHP2O40.1％，水余量，PH值5.5，0.1Mpa、121℃灭菌20分钟；
B、培养条件：
(1)、一级摇瓶：250ml摇瓶装入100ml-120ml培养基，接入发酵培养用母种，置于旋转摇床150-200rpm，28±1℃培养5天；
(2)、种子摇瓶：250ml摇瓶装入100ml培养基，按照体积/体积的比例，接种量7％，置于旋转摇床150-200rpm，28±1℃培养5天；
(3)、罐培养：100L种子罐，按照体积/体积的比例装入培养基和菌种，接种量10％，前10小时，风量1；0.8，之后1；1.5-2.0，培养温度26±1℃培养5天，得到血芝发酵醪液。
所述的血芝的液体发酵方法中所述的培养基的组分按照重量/重量的比例是：玉米粉1％、豆饼粉2％、葡萄糖3％、酵母膏0.2％、KHP2O4 0.1％，水余量。
所述的血芝的液体发酵方法所述的培养条件(1)中在250ml摇瓶中装入100ml培养基，接种后置于旋转摇床180rpm。
所述的血芝的液体发酵方法所述的培养条件(3)中可应用0.01％植物油作消泡剂。
所述的血芝的液体发酵方法所述的培养条件(1)或(2)或(3)中可过滤得到的血芝培养醪液，收集菌丝体提取多糖。
上述的血芝的液体发酵方法获得的产品，包括食品或药品中含有血芝液体发酵醪液或发酵菌丝或菌丝提取物。
所述血芝的液体发酵方法获得的产品包括：血芝醪液过滤，水洗菌丝体，负压冻干制成的粉末状保健品或药物制剂成分。
所述血芝的液体发酵方法获得的产品还包括：血芝醪液匀浆，制成的口服液或饮料成分。
所述血芝的液体发酵方法获得的产品还包括：血芝醪液过滤，水洗菌丝后匀浆，加入溶媒提取，制成血芝多糖。
所述血芝的液体发酵方法获得的产品，其延伸技术方案还包括：血芝醪液过滤，血芝醪液过滤，水洗菌丝后匀浆加8倍量水，98±1℃提取3h，离心得上清液，沉淀再以8倍量水重复提取两次，合并上清液后浓缩至原体积1/5，Sevag法除蛋白两次，制成注射用制剂或注射剂成份。
动物实验表明用血芝菌丝体水提物(按多糖计)以10m9/Kg.d的剂量对昆明种小鼠进行为期一周的腹腔注射，无论是吞噬率还是吞噬指数都未出现显著提高，但20mg/kg.d或100mg/kg.d的剂量可分别将小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率显著地提高50.16％和87.36％，将吞噬指数显著地提高107.5％和210.4％，表现出一定的量效关系。可见该水提物的确具有增强机体免疫力的功效，对其进行进一步的研究仍是具有一定意义的。
果蝇生存试验表明：5％、1％和0.2％剂量的血芝菌丝体水提物可分别将雄性果蝇的平均寿命延长31.8％、12.6％和11.8％，与对照组相比延长效果均达极显著水平(p＜0.01)。三个剂量之间相比，5％剂量组的延长效果最好，该剂量组的平均寿命极显著地高于1％和0.2％剂量组，而后两者之间无显著差别。
同时该水提物还具有推迟雄性野生型黑腹果蝇半数死亡时间并延长其最高寿命的功效，其中5％的剂量可将半数死亡时间推迟12天；将最高寿命甚至延长18天。综上所述，该水提物具有抗衰老的作用。
通过观察人工栽培灵芝与血芝所提取的多糖对果蝇寿命的影响，结果显示出灵芝与血芝对果蝇都有延长最高寿命与平均寿命的作用。不仅如此，通过卡平方检验显示出灵芝对提高果蝇平均寿命有较显著的作用(p＜0.05)；而血芝对提高果蝇平均寿命与提高果蝇最高寿命有很显著的作用(p＜0.01)。所以结果表明血芝延长果蝇寿命的作用要明显高于灵芝。所以可以得出血芝与灵芝都有抗衰老的动物学功能，且血芝的抗衰老作用更为显著的结论。
鉴于血芝超常的生物活性，对血芝的深层发酵培养具有产业上的重要意义。
具体实施方式
下面结合本发明的液体发酵方法实例，说明本发明的具体实施方式：
本发明血芝的试验菌株(Amauroderma rude)由河北大学生命科学院食药用真菌研究所提供。
实施例1：血芝液体发酵试验培养
培养基：玉米粉1％、豆饼粉2％、葡萄糖2％、酵母膏0.2％、KHP2O4 0.1％，PH值5.5，0.1Mpa、121℃灭菌20分钟
培养条件：250ml摇瓶装入100ml培养基接种后置于旋转摇床180rpm，28℃培养5天，直接利用血芝发酵醪液。
实施例2：血芝液体发酵试验培养
培养基：玉米粉1％、豆饼粉3％、葡萄糖5％、酵母膏0.1％、KHP2O4 0.2％，PH值5.5，0.1Mpa、121℃灭菌20分钟。
培养条件：250ml摇瓶装入120ml培养基接种后置于旋转摇床150rpm，26℃培养5天，过滤收集菌丝体。
实施例3：血芝液体发酵工业培养
培养基：玉米粉2％、豆饼粉5％、葡萄糖3％、酵母膏0.3％、KHP2O4 0.1％，PH值5.5，0.1Mpa、121℃灭菌20分钟。
培养条件：
(1)、一级摇瓶：250ml摇瓶装入100ml-120ml培养基，接入发酵培养用母种，置于旋转摇床150-200rpm，28±1℃培养5天；
(2)、种子摇瓶：250ml摇瓶装入100ml培养基，按照体积/体积的比例，接种量7％，置于旋转摇床150-200rpm，28±1℃培养5天；
(3)、罐培养：100L种子罐，按照体积/体积的比例装入培养基和菌种，接种量10％，前10小时，风量1；0.8，之后1；1.5-2.0，培养温度26±1℃培养5天，得到血芝发酵醪液。
(4)、1000L发酵罐，培养条件同(3)。
上述罐培养时可应用0.01％植物油作消泡剂。
实施例4：后续血芝产品的加工：
1、血芝液体培养物过滤，水洗菌丝体，负压冻干制成粉末制成保健品或药物制剂成分；
2、血芝液体培养物匀浆，制成口服液或饮料成分；
3、血芝液体培养物过滤，水洗菌丝后匀浆加8倍量水，98±1℃提取3h，离心得上清液，沉淀再以8倍量水重复提取两次，合并上清液后浓缩至原体积1/5，Sevag法除蛋白两次，制成注射用制剂成份。
4、血芝液体培养物过滤，水洗菌丝后匀浆，利用其它溶媒提取多糖成份，制成药品或食品。

Claims (10)

1、血芝的液体发酵方法，其特征在于：
A、培养基：按照重量/重量的比例是：玉米粉1-2％、豆饼粉2-5％、葡萄糖2-5％、酵母膏0.2％、KHP2O4 0.1％，水余量，PH值5.5，0.1Mpa、121℃灭菌20分钟；
B、培养条件：
(1)、一级摇瓶：250ml摇瓶装入100ml-120ml培养基，接入发酵培养用母种，置于旋转摇床150-200rpm，28±1℃培养5天；
(2)、种子摇瓶：250ml摇瓶装入100ml培养基，按照体积/体积的比例，接种量7％，置于旋转摇床150-200rpm，28±1℃培养5天；
(3)、罐培养：100L种子罐，按照体积/体积的比例装入培养基和菌种，接种量10％，前10小时，风量1∶0.8，之后1∶1.5-2.0，培养温度26±1℃培养5天，得到血芝发酵醪液。
2、根据权利要求1所述的血芝的液体发酵方法，其特征在于：所述的培养基的组分按照重量/重量的比例是：玉米粉1％、豆饼粉2％、葡萄糖3％、酵母膏0.2％、KHP2O4 0.1％，水余量。
3、根据权利要求1所述的血芝的液体发酵方法，其特征在于所述的培养条件(1)中在250ml摇瓶中装入100ml培养基，接种后置于旋转摇床180rpm。
4、根据权利要求1所述的血芝的液体发酵方法，其特征在于所述的培养条件(3)中可应用0.01％植物油作消泡剂。
5、根据权利要求1所述血芝的液体发酵方法，其特征在于所述的培养条件(1)或(2)或(3)中可过滤得到血芝培养醪液，收集菌丝体提取多糖。
6、根据权利要求5所述血芝的液体发酵方法获得的产品，其特征在于：这些产品是含有血芝液体发酵醪液或发酵菌丝提取物多糖的食品或药品。
7、根据权利要求6所述血芝的液体发酵方法获得的产品，其特征在于：这些产品是血芝菌丝体负压冻干制成的粉末状保健品或药物制剂。
8、根据权利要求6所述血芝的液体发酵方法获得的产品，其特征在于：这些产品是血芝醪液制成的口服液或饮料。
9、根据权利要求6所述血芝的液体发酵方法获得的产品，其特征在于：这些产品是血芝醪液制成的血芝多糖。
10、根据权利要求9所述血芝的液体发酵方法获得的产品，其特征在于：这些产品是血芝多糖制成注射用制剂或注射剂成份。
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