CN1395579A - 含α－D－GAL(1→3)GAL的寡糖的合成方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于合成包含α－D－Gal(1→3)－D－Gal的生物学活性二糖和三糖的试剂和方法。具体地说，本发明提供用于溶液或固相合成α－D－吡喃半乳糖基－(1→3)－D－半乳糖及其衍生物的新试剂、中间体和方法。在一个优选的实施方案中，本发明提供分子式(II)的保护的单糖结构单元：其中R3为甲氧基或甲基；R1为H、苯甲酰基、新戊酰基、4－氯苯甲酰基、乙酰基、氯乙酰基、乙酰丙酰基、4－甲基苯甲酰基、苄基、3，4－亚甲二氧基苄基、4－甲氧基苄基、4－氯苄基、4－乙酰胺基苄基或4－叠氮苄基；且R2为H、Fmoc、苯甲酰基、新戊酰基、4－氯苯甲酰基、乙酰基、氯乙酰基、乙酰丙酰基、4－甲基苯甲酰基、苄基、3，4－亚甲二氧基苄基、4－甲氧基苄基、4－氯苄基、4－乙酰胺基苄基或4－叠氮苄基。

Description

含α-D-GAL(1→3)GAL的寡糖的合成方法
技术领域
本发明涉及包含α-D-Gal(1→3)-D-Gal的生物活性二糖和三糖的合成方法。具体而言，本发明提供用于溶液或固相合成α-D-吡喃半乳糖基(1→3)-D-半乳糖及其衍生物的新试剂、中间体和方法。
背景技术
成功的器官移植方法的出现已经导致适于临床应用的供体器官的缺乏增多。免疫一致的物种如非人灵长类是潜在的提供最低免疫学障碍的同种异体移植物的来源；但是有限的可用性和与伦理有关的考虑，以及以灵长类逆转录酶病毒为代表的风险，意味着这种来源没有提供长期解决方案。来自不一致但更容易获得的物种如猪的异种移植物通常几乎立即受到排斥。这种现象称为超急性排斥(HAR)。因此，抑制异种反应的天然抗体是进行成功的异种移植术的关键过程(Tong，Z.等，1998)。已报道包含非还原末端寡糖Galα(1→3)Gal和Galα(1 →3)Galβ(1 →4)GlcNAc的配体表现出与人抗猪抗体具有最高的亲合力(Good，H.等，1992)。在多种提议用于克服HAR的方法中，最简单的构思是在体内竞争性阻断Galα(1→3)Gal抗体或体外除去循环中的这些抗体(Simon，P.M.，1996)。这两种方法均要求容易获得二糖或三糖。
除了这个问题，肠内的艰难梭状芽胞杆菌(Clostridium difficile)感染是住院患者，特别是年老患者腹泻的一个最普遍的原因(Boriello，S.P.，1990)。已发现艰难梭状芽胞杆菌(C.difficile)是与抗生素有关的腹泻和假膜性结肠炎的病因物质(Smith，J.A.等，1997)。艰难梭状芽胞杆菌(C.difficile)产生两种毒素，毒素A和毒素B。其中，毒素A在动物研究中表现为引起增加的肠渗透性、液体分泌和炎症，并导致肠上皮细胞严重破坏的肠毒素(Burakoff，R.等，1995；Castex，F.等，1994；Eglow，R.等，1992；Torres，J.等，1990)。在模型动物系统中，已证明与毒素A结合的糖部分终止于三糖序列Galα(1→3)Galβ(1→4)GlcNAc(Krivan，H.C.等，1986)。
虽然已广泛地研究了寡糖化合物的化学和生物化学，但仍然存在与它们的合成和纯化有关的困难。因此，本领域需要合成和纯化这些化合物的改进的方法。
除了有效结构单元的设计以外，在Galα(1→3)Gal、Galα(1→3)Galβ(1→4)GlcNAc和相关化合物的合成中的一个最为困难的步骤是α(1→3)键的形成。虽然已描述了多种合成路线，但所有这些方法都是复杂、耗时和昂贵的，并且不适于大规模合成。
Chacon-Fuertes提供了用于合成3-O-α-D-吡喃半乳糖基-D-半乳糖[i]的方法，
Figure A0180372100131
所述方法要求氰化汞催化的糖基化，以形成α(1→3)糖苷键(Chacon-Fuertes M.E.和Martin-Lomas，M.，1975)。此合成拖延时间，要求色谱分离并使用危险试剂。
Lemieux描述了用过-O-苄基化的α-D-吡喃半乳糖基溴化物糖供体和2，2，2-三氯乙基2，4，6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖苷受体化学合成3-O-α-D-吡喃半乳糖基-D-半乳糖(Lemieux，R.U.和Driguez，H.，1975)。Lemieux采用溴化四乙铵作为反应中的助催化剂，色谱分离后得到35％收率的产物。1H NMR谱表明，糖基化产物仍含有显著杂质。在用锌/乙酸去保护和制备薄层色谱、脱-O-乙酰化、氢解和纸色谱以后，最终得到3-O-α-D-吡喃半乳糖基-D-半乳糖的真实样品。
另一方法使用烯丙基2-O-苯甲酰基-4，6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖苷受体和亚氨逐乙酸酯(acetimidate)糖供体(Sinay，P.和Jacquinet，J.C.，1979)。用甲苯磺酸在硝基甲烷中以良好收率形成α(1→3)键，但需要色谱进行纯化。虽然合成目标3-O-α-D-吡喃半乳糖基-D-半乳糖的其余步骤的收率通常大于90％，但在大部分步骤中需要进行色谱。类似地，使用α-D-吡喃半乳糖基溴供体，但采用甲锡亚烷基化学以选择性地活化受体半乳糖苷的3-O-位置，合成了苄基化的Gal(α1→3)Gal二糖(Auge，C.和Veyrieres，A.，J.C.S.，1979)。然后将苄基化的Galα(1→3)Gal二糖氢解，得到3-O-α-D-吡喃半乳糖基-D-半乳糖。报道的收率非常低，且大部分步骤需要进行色谱。
3-O-(α-D-半乳糖基-D-半乳糖二糖的另一种合成采用苄基2，4，6-三-O-苄基-β-D-吡喃半乳糖苷受体和完全苄基化的亚胺酯(imidate)半乳糖基供体(Milat，M-L.等，1982)。在最后的氢解之后，最终得到游离二糖，虽然获得了合理的收率，但在此合成的许多步骤不可避免地进行色谱。Takeo采用半乳糖基溴供体和溴化四乙铵作为助催化剂，并在进行色谱后以40％的收率合成了保护形式的有用二糖。然后氢解得到3-O-α-D-吡喃半乳糖基-D-半乳糖(Takeo，K.和Maeda，H.，1988)。化学-酶促合成使用来自咖啡豆的α-D-半乳糖苷酶以形成二糖，其收率未报道。对硝基苯基-α-D-吡喃半乳糖苷同时用作受体和供体。然后将所得的二糖衍生物修饰并进行色谱，得到3-O-α-D-吡喃半乳糖基-D-半乳糖(Matsuo，I.等，1997)。
期望避免使用有毒试剂，而且为了降低成本，还非常期望将纯化步骤的数目最小化。如果可能的话，特别期望将色谱纯化步骤的数目最小化，或者甚至完全避免进行色谱纯化的需要，因为这种技术耗时且昂贵。
可以理解，三糖α-D-吡喃半乳糖基(1→3)-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-N-乙酰基-D-葡糖胺(ii)的合成比α-D-吡喃半乳糖基-(1→3)-D-半乳糖的合成更难。
Figure A0180372100151
没有文献报道采用化学手段合成(ii)的方法，虽然已开发出非常相似的化合物用于体外和体内应用(Garegg，P.J.和Oscarson，S.，1985；Schaubach，R.等，1991)。已有一些酶促合成寡糖(ii)及其衍生物的报道。Nilsson通过酶促方法，用α-D-半乳糖苷酶形成α(1→3)糖苷键，然后进行β-D-半乳糖苷酶处理，合成了2-N-三氯乙氧羰基保护的(ii)的乙基硫代糖苷(Nilsson，K.G.I.，1997)。类似地，已将半乳糖苷酶用于合成目标化合物(ii)，此合成采用类似的方法(Matsuo，I.等，1997)。(ii)的另一种乙基硫苷衍生物的合成使用α和β半乳糖苷酶(Vic，G.等，1997)。使用α(1→3)半乳糖基转移酶合成类似于上述的具有通过糖苷键连接的亲脂性尾的(ii)的类似物(Sujino，K.等，1998)。
本说明书中引述的所有参考文献，包括任何专利或专利申请都引入本文作参考。不承认任何参考资料构成现有技术。对这些参考资料的讨论表明它们的作者主张，且申请人保留质询所引述的文献的准确性和相关性的权利。可以明白地理解，虽然本文引用了大量现有技术出版物，但在澳大利亚或任何其它国家，这种引用并不意同表明任何这些文献构成了现有技术公知常识的一部分。
现在我们发现，新的硫代酰基取代的3-O-α-D-吡喃半乳糖基-D-半乳糖的半乳糖苷可以用于通过化学方法的糖缀合物合成。这些衍生物可以连接到适宜的固体载体，如聚乙二醇上。这些化合物可以用于在异种移植术之前除去移植受者血液中的抗Gal抗体，或作为抗菌剂对抗细菌如艰难梭状芽胞杆菌(C.difficile)。
发明内容
在第一方面，本发明提供通式I的保护的葡糖胺化合物：
Figure A0180372100161
其中R1为H或乙酰基，且R2为苄基或4-氯苯甲酰基，附加条件是当R2为苄基时，R1不为乙酰基。
在第二方面，本发明提供通式II的保护的单糖结构单元：
Figure A0180372100162
其中R3为H、甲氧基或甲基，且其中：
(a)当R3为甲氧基或甲基时，R1为H、苯甲酰基、新戊酰基、4-氯苯甲酰基、乙酰基、氯乙酰基、乙酰丙酰基、4-甲基苯甲酰基、苄基、3，4-亚甲二氧基苄基、4-甲氧基苄基、4-氯苄基、4-乙酰胺基苄基或4-叠氮苄基；且
R2为H、Fmoc、苯甲酰基、新戊酰基、4-氯苯甲酰基、乙酰基、氯乙酰基、乙酰丙酰基、4-甲基苯甲酰基、苄基、3，4-亚甲二氧基苄基、4-甲氧基苄基、4-氯苄基、4-乙酰胺基苄基或4-叠氮苄基；
(b)当R3为H时，R1为苯甲酰基、新戊酰基、4-氯苯甲酰基、乙酰基、氯乙酰基、乙酰丙酰基、苄基、3，4-亚甲二氧基苄基、4-甲氧基苄基、4-氯苄基、4-乙酰胺基苄基或4-叠氮苄基，且
R2为Fmoc、苯甲酰基、4-氯苯甲酰基、乙酰基、氯乙酰基、乙酰丙酰基、4-甲基苯甲酰基、苄基、3，4-亚甲二氧基苄基、4-甲氧基苄基、4-氯苄基、4-乙酰胺基苄基或4-叠氮苄基，
附加条件是(i)当R1为乙酰基时，R2不为氯乙酰基或乙酰基，反之亦然；(ii)当R2为乙酰丙酰基时，R1不为苯甲酰基，反之亦然；且(iii)当R1为苯甲酰基时，R2不为苯甲酰基，反之亦然。
当R2为Fmoc时，R1为苯甲酰基、新戊酰基、4-氯苯甲酰基、乙酰基、氯乙酰基、乙酰丙酰基、4-甲基苯甲酰基、苄基、3，4-亚甲二氧基苄基、4-甲氧基苄基、4-氯苄基、4-乙酰胺基苄基或4-叠氮苄基。
优选地此化合物为通式III的化合物：
其中R1为新戊酰基、苯甲酰基、4-氯苯甲酰基、4-甲氧基苄基或3，4-亚甲二氧基苄基，且
R2为H、Fmoc、4-氯苯甲酰基、乙酰基、氯乙酰基、乙酰丙酰基、4-甲氧基苄基或3，4-亚甲二氧基苄基，附加条件是如果R1为苯甲酰基，则R2不为乙酰丙酰基。
在优选的实施方案中，此化合物为
(a)通式III的吡喃半乳糖苷，其中R1为4-氯苯甲酰基、新戊酰基或乙酰基，且R2为Fmoc或H；
(b)通式III的化合物，其中R1为4-氯苯甲酰基，且R2为氯乙酰基；或者
(c)通式III的化合物，其中R1和R2均为3，4-亚甲二氧基苄基。
在第三方面，本发明提供通式IV的吡喃半乳糖苷化合物：其中各个R1独立地为4-氯苄基、4-叠氮苄基、4-N-乙酰胺基苄基、4-甲基苄基、3，4-亚甲基二甲氧基苄基或2-硝基苄基。
优选地，各个R1为4-氯苄基。
在第四方面，本发明提供通式V的聚乙二醇(PEG)连接的单糖：
Figure A0180372100182
其中，n为1-5的整数；
R1为连接基团或适于形成共价键的基团，且包括但不限于如下基团：卤素、叠氮基、羧酸、硫醇、羟基、硫代酸酯、黄原酸酯、酰氨基或二硫代氨基甲酸酯；R2为乙酰基、4-氯苯甲酰基、乙酰丙酰基、新戊酰基、氯乙酸酯、苯甲酰基或4-甲基苯甲酰基；
R3为H、Fmoc、苯甲酰基、新戊酰基、4-氯苯甲酰基、乙酰基、氯乙酰基、乙酰丙酰基、4-甲基苯甲酰基、3，4-亚甲二氧基苄基、4-甲氧基苄基、4-乙酰胺基苄基或4-叠氮苄基；且
R4为甲氧基、H或甲基。
优选地，n为2，R1为硫代苯甲酸酯或硫代联苯羰基，R2为4-氯苯甲酰基，R3为H，且R4为H。
在第五方面，本发明提供通式VI的化合物：其中R7为H、甲氧基或甲基；
R1为芳基、取代的芳基、苄基、取代的苄基、烷基、取代的烷基、PEG或取代的PEG；
R2为乙酰胺基或氨基；
R3和R4独立地为苄基、取代的苄基、甲硅烷基醚或酰基；
R5为4-氯苯甲酰基、苯甲酰基、新戊酰基、乙酰基、乙酰丙酰基或4-甲基苯甲酰基；且
R6为取代或未取代的吡喃糖或呋喃糖、H、Fmoc、乙酰基、氯乙酰基、乙酰丙酰基、3，4-亚甲二氧基苄基、4-甲氧基苄基、4-乙酰胺基苄基或4-叠氮苄基。
当通式VI的葡糖胺部分的端基异构构型为α，R3为苄基，R4为苯甲酰基，且R7为H时，R2可以是乙酰胺基、氨基、N-苯二酰亚氨基，R5可以是4-氯苯甲酰基、苯甲酰基、新戊酰基、乙酰基、乙酰丙酰基或4-甲基苯甲酰基，且R6为取代或未取代的吡喃糖或呋喃糖、H、Fmoc、乙酰基、氯乙酰基、乙酰丙酰基、3，4-亚甲二氧基苄基、4-甲氧基苄基、4-乙酰胺基苄基或4-叠氮苄基。
当通式VI的葡糖胺部分的端基异构构型为β，R1为苄基，R7为H时，R2为乙酰胺基、氨基或N-苯二酰亚氨基；R3和R4独立地为苄基、取代的苄基、甲硅烷基醚或酰基；R5为4-氯苯甲酰基、苯甲酰基、新戊酰基、乙酰基、乙酰丙酰基或4-甲基苯甲酰基；且R6为取代或未取代的吡喃糖或呋喃糖、H、Fmoc、乙酰基、氯乙酰基、乙酰丙酰基、3，4-亚甲二氧基苄基、4-甲氧基苄基、4-乙酰胺基苄基或4-叠氮苄基。
当通式VI的葡糖胺部分的端基异构构型为α，R1、R3和R4为苄基或取代的苄基，且R7为H时，R2为乙酰胺基、氨基或N-苯二酰亚氨基，R5为新戊酰基、4-氯苯甲酰基、苯甲酰基或乙酰丙酰基，且R6为取代或未取代的吡喃糖或呋喃糖、H、Fmoc、乙酰基、氯乙酰基、乙酰丙酰基、3，4-亚甲二氧基苄基、4-甲氧基苄基、4-乙酰胺基苄基或4-叠氮苄基，附加条件是当R3和R4为苄基时，R5不为乙酰基或苯甲酰基。
在优选的实施方案中：
(a)通式VI的葡糖胺部分的端基异构构型为β，R1为苄基，R2为氨基或乙酰胺基，R3和R4为苄基，R5为4-氯苯甲酰基、新戊酰基或乙酰基，R6为Fmoc或H，且R7为H；
(b)通式VI的葡糖胺部分的端基异构构型为α，R1为苄基，R2为乙酰胺基，R3为苄基，R4为苯甲酰基或苄基，R5为4-氯苯甲酰基，R6为H或4-氯乙酰基，且R7为H；
(c)此化合物为通式VII的三糖：其中R为H或乙酰基；R1为氢、苄基、苯甲酰基或对氯苯甲酰基；且R2为氢、4-氯-苯甲酰基、乙酰基、苯甲酰基或新戊酰基；
(d)此化合物为通式VII的三糖，其中还原端的端基异构构型为α，R为乙酰基，R1为苯甲酰基、4-氯苯甲酰基或H，且R2为4-氯苯甲酰基或H；或者
(e)此化合物为通式VII的三糖，其中还原糖的端基异构构型为β，R为乙酰基或H，R1为苄基，且R2为H、4-氯苯甲酰基、新戊酰基或乙酰基。
在第六方面，本发明提供通式VIII的化合物：
Figure A0180372100211
其中R5、R6和R7独立地为H、4-氯苄基、4-甲氧基苄基、4-甲基苄基、4-乙酰胺基苄基、叠氮苄基或3，4-亚甲二氧基苄基；
X为O、S或N；
R1为烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、PEG或取代的PEG；
R2为乙酰丙酰基、4-氯苯甲酰基、苯甲酰基、4-甲基苯甲酰基、乙酰基或新戊酰基；且
R3和R4可以组合形成亚苄基环，此环任选地在4位被甲基或甲氧基取代；或者R3和R4独立地为H、苄基或取代的苄基。
当R5为4-氯苄基、4-甲氧基苄基、4-甲基苄基、4-乙酰胺基苄基、叠氮苄基或3，4-亚甲二氧基苄基，且R6和R7组合形成亚苄基或取代的亚苄基环时，X为O、S或N，R1为烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、PEG、取代的PEG、酰基或取代的酰基，且R2为乙酰丙酰基、4-氯苯甲酰基、苯甲酰基、4-甲基苯甲酰基、乙酰基或新戊酰基。
当X为氧，且R1为3，4-亚甲二氧基苄基时，R2为H、4-氯苯甲酰基、新戊酰基、乙酰基、乙酰丙酰基、苯甲酰基或氯乙酰基，R3和R4可以组合成为亚苄基环或可以独立地为H、苄基或取代的苄基，且R5、R6和R7可以为H、苄基、4-氯苄基、4-甲氧基苄基、4-乙酰胺基苄基、叠氮苄基或3，4-亚甲二氧基苄基。
当X为氧，且R1为2-[2-(2-硫代苯甲酰基)-乙氧基)乙基或2-[2-(2-硫代联苯羰基)乙氧基]时，R2为H、4-氯苯甲酰基、新戊酰基、乙酰基、乙酰丙酰基、苯甲酰基或氯乙酰基，R3和R4可以组合形成亚苄基环或可以独立地为H、苄基、4-氯苄基、4-甲氧基苄基、4-乙酰胺基苄基、叠氮苄基或3，4-亚甲二氧基苄基，R5为H、苄基、4-氯苄基、4-甲氧基苄基、4-乙酰胺基苄基、叠氮苄基或3，4-亚甲二氧基苄基，且R6和R7可以组合成为亚苄基环或可以独立地为H、苄基、4-氯苄基、4-甲氧基苄基、4-乙酰胺基苄基、叠氮苄基或3，4-亚甲二氧基苄基。
当X为硫，R1为烷基、取代的烷基、芳基或取代的芳基，R3和R4组合形成亚苄基环，且R5、R6和R7为苄基时，R2为乙酰丙酰基、4-氯苯甲酰基、苯甲酰基、乙酰基或新戊酰基，附加条件是当R1为苯基时，R2不为乙酰丙酰基。
优选以下任一种情况：
(a)X为氧，R1为2-[2-(2-硫代苯甲酰基)乙氧基)乙基或2-[2-(2-硫代联苯羰基)乙氧基]，R2为H或4-氯苯甲酰基，R3和R4为H或组合形成亚苄基环，R5为H或3，4-亚甲二氧基苄基，且R6和R7均为H或组合形成亚苄基环；
(b)X为S，R1为甲基，R2为4-氯苯甲酰基，R3和R4组合形成亚苄基环，且R5、R6和R7各自为4-氯苄基；或者
(c)X为氧，R1为3，4-亚甲二氧基苄基，R2为4-氯苯甲酰基或H，R3和R4组合形成亚苄基环或均为H，且R5、R6和R7独立地为4-氯苄基或H。
在第七方面，本发明提供通式IX的化合物：
其中R1为4-氯苯甲酰基、新戊酰基、乙酰基、乙酰丙酰基、苯甲酰基或氯乙酰基；
R2为H、苄基、4-氯苄基、4-甲氧基苄基、4-乙酰胺基苄基、叠氮苄基、3，4-亚甲二氧基苄基、Fmoc、乙酰丙酰基、乙酰基或氯乙酰基；且
R3和R4可以组合形成亚苄基环或可以独立地为H、苄基、4-氯苄基、4-甲氧基苄基、4-乙酰胺基苄基、叠氮苄基或3，4-亚甲二氧基苄基。
优选地，R1为4-氯苯甲酰基，R2为H，且R3和R4组合形成亚苄基环。
在第八方面，本发明提供通式X的聚乙二醇(PEG)连接的二糖或通式XI的三糖：
其中R为氢或酰基，且n为1-3的整数。
优选地，通式XI的化合物为2-[2-(2-硫代联苯羰基)乙氧基]-乙基3-O-(α-D-吡喃半乳糖基)-α-吡喃半乳糖苷。
在第九方面，本发明提供偶联到固体载体上的Galα(1→3)Galβ(1→4)GlcNAc，以得到通式XII的化合物：
Figure A0180372100241
其中，X为固体载体，如琼脂糖或硅胶，且n为3至6的整数。
本发明的前七方面的化合物用作合成二糖和三糖的中间体。因此，在第十方面，本发明提供合成以下化合物的方法：通式X至通式XII的目标化合物，或者化合物α-D-吡喃半乳糖基-(1→3)-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-N-乙酰基-D-葡糖胺(Galα(1→3)Galβ(1→4)GlcNAc)、α-D-吡喃半乳糖基-(1→3)-β-D-吡喃半乳糖(Galα(1→3)Gal)或β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-N-乙酰基-D-葡糖胺(Galβ(1→4)GlcNAc)；所述方法包括使用通式I-IX的化合物作为中间体的步骤。
优选地，当目标化合物为通式X或XI的化合物时，中间体化合物为通式V的化合物。显然可以理解，虽然通式VI的化合物的合成可以使用通式I的化合物作为中间体，但也存在其他合成方法。
为了说明的目的，术语“烷基”意指包括饱和、不饱和和环状烃基以及这些基团的组合。烃链或芳环上的适宜的取代基包括Br、Cl、F、I、CF3、NH2、取代的氨基如NH酰基、羟基、羧基、C1-16烷基氨基和C1-6烷氧基如甲氧基，并优选F、Cl、羟基、C1-6烷氧基、氨基、C1-6烷基氨基或C1-6羧基。
在第十一方面，本发明提供预防或减少与异种移植术有关的超急性排斥反应的方法，所述方法包括给予需要这种治疗的受试者有效剂量的硫代烷基Galα-(1→3)Gal或硫代烷基Galα(1→3)Galβ(1→4)GlcNAc的步骤。
可以在异种移植术之前、期间或之后给予该化合物。
在第十二方面，本发明提供预防或减少与异种移植术有关的超急性排斥的方法，所述方法包括以下步骤：
a)从将要接受异种移植术的患者取血浆；
b)使血浆与连接到固体载体上的硫代烷基Galα(1→3)Gal或硫代烷基Galα(1→3)Galβ(1→4)GlcNAc接触；
c)将如此处理的血浆再输入至该患者。
在第十三方面，本发明提供耗尽来自血浆或血清样品的抗Galα(1→3)Gal抗体的方法，所述方法包括使血浆或血清与连接到固体载体上的硫代烷基Galα(1→3)Gal或硫代烷基Galα(1→3)Galβ(1→4)GlcNAc接触的步骤。
在第十四方面，本发明提供治疗艰难梭状芽胞杆菌(C.difficile)感染的方法，所述方法包括给予需要这种治疗的受试者有效量的，优选地连接到固体载体上的α-D-吡喃半乳糖基-(1→3)-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)N-乙酰基-D-葡糖胺(Galα(1→3)Galβ(1→4)GlcNAc)或硫代烷基Galα(1→3)Galβ(1→4)GlcNA的步骤。
优选地，固体载体为多齿配体或树枝状大分子化合物。在例如，国际专利PCT/AU95/00350(W095/34595)中，由生物分子研究所有限公司(Biomolecular Research Institute Ltd)公开了适宜的枝状状大分子。
在本发明的第十一至十四方面，受试者可以是人，或者可以是家畜、宠物或动物园动物。虽然具体考虑本发明的化合物适用于人的医治，但它们还适用于兽医治疗，包括宠物如狗与猫，以及家畜如马、牛与羊，或动物园动物如猫科、犬科、牛科和有蹄类动物的治疗。
用于制备药物组合物的方法和药物载体在本领域已知，如在教科书如Remington′s Pharmaceutical Sciences，第19版，Mack PublishingCompany，Easton，宾夕法尼亚州，美国。
本发明的化合物和组合物可以适当的途径给药，而且本领域技术人员将容易地确定所治疗症状的最适宜的途径和剂量。剂量由出诊的内科医生或兽医来决定，并取决于治疗症状的性质和状态，接受治疗的受试者的年龄和一般健康状况，给药途径和先前的给药治疗。
载体或稀释剂和其它赋形剂将取决于给药途径，而且同样本领域技术人员将容易地确定每一具体情况下的最适宜的配方。
为了说明的目的，应该清楚地理解单词“包括”意指“包括但不限于”，而单词“包含”具有相应的含义。
具体实施方式
仅通过参考以下非限制性实施例详细描述本发明。
本文所用的缩写如下：
AcN                  乙腈
Bn                    苄基
CH2Cl2              二氯甲烷
CHCl3                氯仿
pClBn                 对氯苄基
pClBz               对氯苯甲酰基
DCM                 二氯甲烷
DMF                 N，N′-二甲基甲酰胺
DMTST               二甲基(甲硫基)三氟甲磺酸锍
EtOAc               乙酸乙酯
EtOH                乙醇
H2O                水
HRMS                高分辨质谱
MDBn                3，4-亚甲二氧基苄基
Me                  甲基
MeCN                乙腈
MeOH                甲醇
MgSO4              硫酸镁
NaHCO3             碳酸氢钠
NMR                 核磁共振
PEG                 聚乙二醇
Ph                  苯基
SOCl2              亚硫酰氯
TBDMS               叔丁基二甲基甲硅烷基
THF                 四氢呋喃实施例1：3，4-亚甲二氧基苄基4，6-O-亚苄基2-O-(4-氯苯甲酰基)-β- D-吡喃半乳糖苷受体的制备
该制备的策略如在反应路线1中所述。α-D-吡喃半乳糖基-(1→3)-D-半乳糖的合成
                    反应路线1甲基6-O-叔丁基二甲基甲硅烷基1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(2)
80℃下将在干燥的1，2-二氯乙烷(800mL)中的叔丁基二甲基甲硅烷基氯(68.35g，453.51mmol)和4-二甲基氨基吡啶(55.40g，453.51mmol)的混合物搅拌15分钟。80℃下在15分钟内将甲基1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(1)(100g，476.19mmol)分5部分加入搅拌的溶液，并将反应混合物回流搅拌1小时。将所得的澄清溶液冷却至室温，用CHCl3(2000mL)稀释，用稀盐水溶液(水-盐水2∶1)(750mL)洗涤4次。收集最后两次洗涤的水层并用CHCl3(400mL)萃取。合并有机层，用MgSO4干燥并蒸发。将残余物在高真空下放置15分钟，然后将其溶于无水MeCN(200mL)。蒸发此溶液并将残余物在高真空下放置15分钟。用另一份200mL的无水MeCN重复此干燥处理，得到粗品甲基6-O-叔丁基二甲基甲硅烷基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(2)(117.5g，80％)，为糖浆。Rf 0.65(MeCN/H2O 10∶1)MS(电喷雾)C13H28O5SSi(324.23)m/z(％)347[M+Na]+(100)，325[M+H]+(75)。甲基6-O-叔丁基二甲基甲硅烷基-3，4-O-异亚丙基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(3)
40℃下将在无水MeCN(800mL)中的粗品甲基6-O-叔丁基二甲基甲硅烷基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(2)(117.46g，362.27mmol)、2，2-二甲氧基丙烷(66.82mL，543.41mmol)和对甲苯磺酸(200mg)的混合物搅拌30分钟。用三乙胺(3mL)中和反应混合物，并蒸发得到白色晶体残余物(3)(161.3g)。Rf 0.62(EtOAc/己烷2∶1)MS(电喷雾)C16H32O5Ssi(364.58)m/z(％)387[M+Na]+(45)，365[M+H]+(100)。甲基6-O-叔丁基二甲基甲硅烷基-2-O-(4-氯苯甲酰基)-3，4-O-异亚丙基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(4)
室温下搅拌在无水1，2-二氯乙烷(750mL)中的甲基6-O-叔丁基二甲基甲硅烷基-3，4-O-异亚丙基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(3)(155.44g，427.03mmol)和4-二甲基氨基吡啶(62.60g，512.44mmol)的混合物。15分钟内将4-氯苯甲酰氯(89.68.g，512.44mmol)加入搅拌的反应混合物。加入以后，回流搅拌所得的悬浮液30分钟。将反应混合物冷却至10℃并过滤。在漏斗上用无水1，2-二氯乙烷(300mL)洗涤晶体固体并过滤。合并滤液，用CHCl3(2000mL)稀释，并用稀盐水溶液(水-盐水2∶1)(1500mL)洗涤两次。用MgSO4干燥有机层并蒸发。残余物在高真空下放置15分钟。将所得的糖浆溶于无水MeCN(200mL)并蒸发，在蒸发结束时使用高真空，得到粗品甲基6-O-叔丁基二甲基甲硅烷基-2-O-(4-氯苯甲酰基)-3，4-O-异亚丙基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(4)(165g)，为无色糖浆。Rf 0.68(己烷/EtOAc 2∶1)MS(电喷雾)C23H35O6Ssi(503.14)，m/z(％)503[M+H]+(100)，525[M+Na]+(38)。甲基2-O-(4-氯苯甲酰基)-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(5)
将在MeOH-MeCN 3∶1(2000mL)中的甲基6-O-叔丁基二甲基甲硅烷基-2-O-(4-氯苯甲酰基)-3，4-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖苷(4)(173g，344.62mmol)和对甲苯磺酸(600mg)的混合物回流搅拌1小时。将反应混合物冷却至室温并蒸发。将所得的白色固体残余物悬浮在二异丙醚(1000mL)中并过滤。用二异丙醚(300mL)洗涤该晶体固体两次，然后用二乙醚(500mL)洗涤，并干燥得到甲基2-O-(4-氯苯甲酰基)-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(5)(107g)，为白色晶体粉末。Rf 0.45(MeCN/H2O 10∶1)MS(电喷雾)C14H17ClO6S(348.80)m/z(％)371[M+Na]+(35)，349[M+H]+(100)。甲基2-O-(4-氯苯甲酰基)-4，6-O-亚苄基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(6)
70℃下将在无水MeCN(500mL)中的甲基2-O-(4-氯苯甲酰基)-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(5)(94.16g，270.57mmol)、α，α-二甲氧基甲苯(60.9mL，405.86mmol)和对甲苯磺酸(200mg)的混合物搅拌30分钟。将反应混合物冷却至室温，用三乙胺(3mL)中和并蒸发。在CHCl3中处理残余物，用稀盐水溶液(水-盐水2∶1)(750mL)洗涤、用饱和NaHCO3溶液(500mL)洗涤、再次用稀盐水(水-盐水2∶1)(750mL)洗涤，用MgSO4干燥并蒸发。将所得白色固体在高真空下放置15分钟。室温下从MeCN(250mL)中结晶干燥的残余物，得到68.5g纯产物。将水(80mL)缓慢加入母液，并将溶液在室温下放置，结晶出另一份20.8g甲基2-O-(4-氯苯甲酰基)-4，6-O-亚苄基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(6)(收率：75％)。Rf 0.65(EtOAc/己烷2∶1)MS(电喷雾)C21H21ClO6S(436.91)m/z(％)437[M+H]+(56)，459[M+Na]+(100)。1H NMR(CDCl3)δ8.01-7.37(9H，芳基)，5.56(s，1H，亚苄基)，5.44(t，1H，H-2)，4.5(d，1H，J1-2＝9.0，H-1)，4.38(dd，1H，H-6a)，4.30(dd，1H，H-4)，4.04(dd，1H，H-6b)，3.90(m，1H，H-3)，3.6(s，1H，H-5)，2.25(s，3H，S-CH3)。3，4-亚甲二氧基苄基4，6-O-亚苄基2-O-(4-氯苯甲酰基)-β-D-吡喃半乳糖苷(7)
在氮气氛下，将三氟甲磺酸甲酯(6g，36.6mmol)一次性加入0℃的处在无水1，2-二氯乙烷(200mL)中的甲基4，6-O-亚苄基2-O-(4-氯苯甲酰基)-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(6)(10g，22.9mmol)、3，4-亚甲二氧基苄醇(5.6g，36.8mmol)和粉末状分子筛(5_，15g)的混合物。密封反应混合物，将其暖至室温，并搅拌3小时。然后用三乙胺(15mL)中和混合物，用CHCl3(350mL)稀释，并通过C盐过滤。用饱和NaHCO3溶液(4×500mL)洗涤滤液，用MgSO4干燥有机层并蒸发至干，留下白色固体。将固体悬浮在二异丙醚(200mL)中，过滤，用二异丙醚(200mL)洗涤，并干燥得到3，4-亚甲二氧基苄基4，6-O-亚苄基2-O-(4-氯苯甲酰基)-β-D-吡喃半乳糖苷(7)(7.5g，61％收率)，为白色粉末。Rf 0.60(CH2Cl2/EtOH 20∶1)MS(电喷雾)C28H25ClO9(540.95)m/z(％)437[M+H]+(56)，558[M+H+NH3]+(100)。实施例2：甲基234，6-四-O-(4-氯苄基)-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷糖 基供体的制备甲基2，3，4，6-四-O-(4-氯苄基)-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(8)
在0℃的氮气氛下将在无水DMF(200mL)中的甲基1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(1)(20g，95.23mmol)溶液滴加入在无水DMF(300mL)中的搅拌的氢化钠(95％)(14.43g，571.42mol)悬浮液。在加入结束时，移开冰浴并在室温下将反应混合物搅拌30分钟。在保持温度10-20℃的条件下将4-氯苄基氯(97.74g，571.42mmol)滴加入搅拌的反应混合物。加入后，室温下将反应混合物搅拌过夜。用冰浴冷却所得的悬浮液并将甲醇(11mL)缓慢加入。当氢形成停止时，在45-50℃下将悬浮液蒸发至干。剩余的DMF通过用二甲苯(100mL)共蒸发而除去。在CH2Cl2(500mL)中处理残余物，用水(500mL)洗涤两次，用饱和NaHCO3溶液(500mL)洗涤，用MgSO4干燥并蒸发。从EtOH(500mL)中结晶残余物得到甲基2，3，4，6-四-O-(4-氯苄基)-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(8)(40g，60％)，为白色晶体固体。Rf 0.72(己烷/EtOAc 3∶1)MS(电喷雾)C35H34Cl4O5S(708.53)m/z(％)709[M+H]+(100)，731[M+Na]+(48)。实施例3：3-O-(α-D-吡喃半乳糖基)-D-吡喃半乳糖的制备3，4-亚甲二氧基苄基4，6-O-亚苄基-2-O-(4-氯苯甲酰基)-3-O-(2，3，4，6-四-O-(4-氯苄基)-α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖苷(9)
氮气氛下将三氟甲磺酸甲酯(4g，24mmol)加入在无水1，2-二氯乙烷(250mL)中的3，4-亚甲二氧基苄基4，6-O-亚苄基2-O-(4-氯苯甲酰基)-β-D-吡喃半乳糖苷(7)(6.5g，12mmol)、甲基2，3，4，6-四-O-(4-氯苄基)-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(8)(12g，17mmol)和粉末状分子筛(5_，10g)的混合物。将密封的反应混合物放置以暖至室温，然后搅拌80分钟。用三乙胺(12g)中和反应混合物，并用CHCl3(500mL)稀释。通过C盐过滤悬浮液，并用饱和NaCO3溶液(3×500mL)洗涤滤液。用MgSO4干燥有机相并蒸发至干，得到油状残余物。将残余物悬浮在二异丙醚(150mL)中并过滤所得的固体。用二异丙醚(100mL)洗涤固体，并在高真空和室温下干燥得到3，4-亚甲二氧基苄基4，6-O-亚苄基-2-O-(4-氯苯甲酰基)-3-O-(2，3，4，6-四-O-(4-氯苄基)-α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖苷(9)(6.7g，47％)，为白色粉末。Rf 0.50(EtOAc/己烷1∶1)MS(电喷雾)C62H55C15O14(1201.38)m/z(％)1221[M+Na]+(80)。3，4-亚甲二氧基苄基4，6-O-亚苄基-3-O-(2，3，4，6-四-O-(4-氯苄基)-α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖苷(10)
向在无水甲醇(50mL)中的甲醇钠(280mg，10.4mmol)溶液中加入在无水THF-MeOH 2∶1(150mL)中的3，4-亚甲二氧基-苄基4，6-O-亚苄基-2-O-(4-氯苯甲酰基)-3-O-(2，3，4，6-四-O-(4-氯苄基)-α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖苷(9)(6.3g，5.2mmol)。40℃下将所得混合物搅拌5小时。将反应混合物冷却至18℃，并用Amberlite IR-120 H+阳离子交换树脂中和(pH7.0)。滤出树脂并将滤液蒸发至干得到油状残余物。将粗产物悬浮在己烷(200mL)中，然后剧烈搅拌以破坏结块。过滤悬浮液，并在室温下真空干燥得到3，4-亚甲二氧基苄基4，6-O-亚苄基-3-O-(2，3，4，6-四-O-(4-氯苄基)-α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖苷(10)(5.2g，93％)，为白色粉末。Rf 0.30(CH2Cl2/乙醇50∶1)，MS(电喷雾)m/z C55H52Cl4O13(1062.83)m/z(％)1098[M+K]+(72)3，4-亚甲二氧基苄基3-O-(α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖苷(11)
向在THF-EtOH-H2O 6∶2∶1的混合物(5mL)中的Pd/C(10％)催化剂(220mg)悬浮液中加入在THF-EtOH-H2O 6∶2∶1的混合物(5mL)中的3，4-亚甲二氧基苄基4，6-O-亚苄基-3-O-(2，3，4，6-四-O-(4-氯苄基)-α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖苷(10)(200mg，0.19mmol)溶液。在氢正压(45PSI)下将所得的悬浮液振荡2.5小时。通过C盐过滤反应混合物，并在室温下浓缩滤液至体积大约为15mL。用去离子水(50mL)稀释所得的黄色溶液并用过量的混合红色树脂(Amberlite-MB 1)中和(pH7.0)。过滤含水悬浮液，在高真空下将滤液蒸发至干得到粗产物，为无色残余物。用CHCl3-MeOH-H2O 5∶5∶1作为流动相通过色谱法纯化粗产物，得到3，4-亚甲二氧基苄基3-O-(α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖苷(11)(72mg，73％)。Rf 0.42(CHCl3/MeOH/H2O 5∶5∶1)MS(电喷雾)C20H28O13(476.43)m/z(％)499[M+Na]+(38)，477[M+H]+(72)3-O-(α-D-吡喃半乳糖基)-D-吡喃半乳糖(12)
在氢正压(60PSI)下，将在THF-MeOH-H2O 4∶1∶1的混合物(30mL)中的Pd(OH)2(20％)Pearlman催化剂(0.7g)和3，4-亚甲二氧基苄基4，6-O-亚苄基-3-O-(2，3，4，6-四-O-(4-氯苄基)-α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖苷(10)(2.0g，1.9mmol)的混合物振荡过夜。通过C盐过滤反应混合物，用混合床离子交换树脂(Amberlite-MB 1)/反向硝酸银(I)试验/来中和滤液。过滤反应混合物，并在真空和室温下将滤液浓缩至干。在去离子水(2mL)中处理残余物并通过C18 Sep Pak药筒，用milli-Q-水(30mL)洗脱。减压下蒸发滤液得到3-O-(α-D-吡喃半乳糖基)-D-吡喃半乳糖(12)(560mg，86％)，为白色固体。
TLC(CHCl3-MeOH-H2O 10∶10∶2)Rf＝0.3，带有脉冲电流检测的高效阴离子交换色谱/HPAE-PAD/(具有保护柱的4×250mm DionexCarbopaK-PAl分析柱，1mL/分钟150mM氢氧化钠)tR＝5.0分钟，MS(电喷雾)m/z 365[M+Na]+。
Rf 0.30(CHCl3/MeOH/H2O 5∶5∶1)MS(电喷雾)C12H22O11(342.29)m/z(％)406[M+Na+MeCN]+(100)，365[M+Na]+(62)。实施例4：2-[2-(2-硫代联苯羰基)-乙氧基]乙基3-O-α-D-吡喃半乳糖 基-β-D-吡喃半乳糖苷(23)的制备
该制备的试剂的合成以及制备路线本身分别如在反应路线2和3中所述。用于合成2-[2-(2-硫代联苯羰基)-乙氧基]乙基3-O-α-D-吡喃半乳糖基-β-D-吡喃半乳糖苷的试剂
                                      反应路线2
                                 反应路线32-[2-(2-硫代苯甲酰基)乙氧基]乙醇(14)
75℃下将在无水DMF(200mL)中的2-[2-(2-氯乙氧基)乙氧基]乙醇(13)(17.1g，101mmol)和硫代苯甲酸铯(38.24g，142mmol)的混合物搅拌1.5小时。将反应混合物冷却至室温并蒸发至干。在二乙醚(600mL)中处理残余物，用饱和NaHCO3溶液(400mL)洗涤三次，并用水(500mL)洗涤。用MgSO4干燥有机相并蒸发至干得到23g粗产物。用二乙醚作为流动相通过色谱法纯化粗残余物得到2-[2-(2-硫代苯甲酰基)乙氧基]乙醇(14)(18.75g，68％)，为橙色糖浆。Rf 0.60(二乙醚/EtOH 19∶1)MS(电喷雾)C13H18O4S(270.34)m/z(％)293[M+Na]+(62)，271[M+H]+(100)3，4-亚甲二氧基苄基氯(16)
将在CH2Cl2(50mL)中的3，4-亚甲二氧基苄基醇(15)(50g，328.62mmol)溶液冷却至0℃并滴加SOCl2(250mL。0℃下将反应混合物搅拌1小时，室温下搅拌4小时，然后蒸发至干。真空下蒸馏纯化残余物得到3，4-亚甲二氧基苄基氯(16)(49g，87％)。Rf 0.75(CHCl3/EtOAc 20∶1)甲基4，6-O-亚苄基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(17)
室温下将在MeCN(500mL)中的甲基1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(1)(23.6g，112mmol)、α，α-二甲氧基甲苯(25.62g，168mmol)和对甲苯磺酸(100mg)的混合物搅拌30分钟。用三乙胺(1mL)中和反应混合物并蒸发至干，然后与甲苯共蒸发。在CH2Cl2(250mL)中处理残余物，用盐水(250mL)洗涤两次，用MgSO4干燥并蒸发。从EtOH结晶所得的白色固体，得到甲基4，6-O-亚苄基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(17)(27.5g，82％)。Rf 0.32(EtOAc)MS(电喷雾)C14H18O5S(298.36)m/z(％)321[M+Na]+(32)，299[M+H]+(100)甲基4，6-O-亚苄基2，3-二-O-(3，4-亚甲二氧基苄基)-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(18)
0℃下将在无水DMF(350mL)中的甲基4，6-O-亚苄基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(17)(20g，66.80mmol)和氢化钠(95％)(4.80g，201.2mmol)的混合物搅拌30分钟，然后加入在DMF(20mL)中的3，4-亚甲二氧基苄基氯(34.3g，201.2mmol)(16)。室温下将反应混合物搅拌过夜。加入甲醇(20mL)并将反应混合物蒸发至干。在CH2Cl2(500mL)中处理残余物，用盐水(500mL)洗涤两次，用MgSO4干燥并蒸发。从2-丙醇(1L)结晶残余物得到甲基4，6-O-亚苄基-2，3-二-O-(3，4-亚甲二氧基苄基)-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(18)(19g，50％)。Rf 0.62(CHCl3/EtOAc 20∶1)，MS(电喷雾)C30H30O9S(566.62)m/z(％)589[M+Na]+(100)，567[M+H]+(25)2-[2-(2-硫代苯甲酰基)乙氧基]乙基4，6-O-亚苄基2-O-(4-氯苯甲酰基)-β-D-吡喃半乳糖苷(19)
0℃下在无水1，2-二氯乙烷(100mL)中将甲基4，6-O-亚苄基-2-O-(4-氯苯甲酰基)-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(6)(10g，22.93mmol)、2-[2-(2-硫代苯甲酰基)乙氧基]乙醇(13)(6.81g，25.22mmol)、粉末状分子筛4_(20g)和二甲基(甲硫基)四氟硼酸锍(7.0g，35.71mmol)的混合物搅拌2小时。用三乙胺(10mL)中和混合物，用CH2Cl2(300mL)稀释，并通过C盐过滤。用饱和碳酸氢钠溶液(200mL)将滤液洗涤三次，用MgSO4干燥并蒸发至干。将残余物悬浮在二异丙醚(600mL)中并过滤。从乙醇(50mL)中结晶所得的固体，用二异丙醚(200mL)洗涤，并干燥得到2-[2-(2-硫代苯甲酰基)乙氧基]乙基4，6-O-亚苄基2-O-(4-氯苯甲酰基)-β-D-吡喃半乳糖苷(19)(10g，66％)，为白色粉末。Rf 0.30(二乙醚/EtOAc 2∶1)，MS(电喷雾)C33H35ClO10S(659.15)m/z(％)681[M+Na]+(70)，659[M+H]+(40)2-[2-(2-硫代苯甲酰基)乙氧基]乙基4，6-O-亚苄基-2-O-(4-氯苯甲酰基)-3-O-[4，6-O-亚苄基-2，3-二-O-(3，4-亚甲二氧基苄基)]-α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖苷(20)
室温下在无水1，2-二氯乙烷(100mL)中将2-[2-(2-硫代苯甲酰基)乙氧基]乙基4，6-O-亚苄基2-O-(4-氯苯甲酰基)-β-D-吡喃半乳糖苷(19)(8.55g，12.99mmol)、甲基4，6-O-亚苄基-2，3-二-O-(3，4-亚甲二氧基苄基)-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(18)(8.00g，14.29mmol)、粉末状分子筛4_(20g)和三氟甲磺酸甲酯(4.68g，28.58mmol)的混合物搅拌2小时。用三乙胺(4mL)中和混合物，用CH2Cl2(200mL)稀释，并通过C盐过滤。用饱和NaHCO3溶液(200mL)洗涤滤液三次，用MgSO4干燥并蒸发至干。用二乙醚-EtOAc 2∶1作为流动相通过色谱纯化残余物得到7.5g 2-[2-(2-硫代苯甲酰基)乙氧基]乙基4，6-O-亚苄基-2-O-(4-氯苯甲酰基)-3-O-[4，6-O-亚苄基-2，3-二-O-(3，4-亚甲二氧基苄基)]-α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖苷(20)(7.5g，50％)，为白色固体泡沫。Rf 0.55(二乙醚/EtOAc 2∶1)，MS(电喷雾)C62H61ClO19S(1177.67)m/z(％)1199[M+Na]+(100)，1177(21)2-[2-(2-硫代苯甲酰基)乙氧基]乙基4，6-O-亚苄基2-O-(4-氯苯甲酰基)-3-O-(4，6-O-亚苄基-α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖苷(21)
室温下将在CH2Cl2/H2O 7∶2的混合物(70mL)中的2-[2-(2-硫代苯甲酰基)乙氧基]乙基4，6-O-亚苄基-2-O-(4-氯苯甲酰基)-3-O-[4，6-O-亚苄基-2，3-二-O-(3，4-亚甲二氧基苄基)]-α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖苷(20)(7.02g，5.97mmol)和2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌(2.71g，11.93mmol)的混合物搅拌1小时。过滤反应混合物，用CHCl3(300mL)稀释滤液，用饱和NaHCO3溶液(150mL)洗涤二次并浓缩至干。在热二异丙醚(150mL)中处理残余物并在室温下将溶液搅拌2小时。过滤所得的悬浮液，然后从EtOAc(40mL)中结晶。用二乙醚-EtOAc 1∶1的混合物作为流动相通过色谱纯化母液。合并纯化产物得到2-[2-(2-硫代苯甲酰基)乙氧基]乙基4，6-O-亚苄基-2-O-(4-氯苯甲酰基)-3-O-(4，6-O-亚苄基-(α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖苷(21)(3.69g，68％)。Rf 0.32(二乙醚/EtOAc 2∶1)，MS(电喷雾)C46H49ClO15S(909.40)m/z(％)931[M+Na]+(35)，909[M+H]+(100)2-[2-(2-硫代苯甲酰基)乙氧基]乙基2-O-(4-氯苯甲酰基)-3-O-α-D-吡喃半乳糖基-β-D-吡喃半乳糖苷(22)
将在乙腈-甲醇1∶1的混合物(350mL)中的2-[2-(2-硫代苯甲酰基)乙氧基]乙基4，6-O-亚苄基-2-O-(4-氯苯甲酰基)-3-O-(4，6-O-亚苄基-α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖苷(21)(3.5g，3.85mmol)和对甲苯磺酸(100mg)的混合物回流搅拌2小时。将反应混合物蒸发至干，然后用MeCN-H2O 10∶1作为流动相通过色谱纯化残余物得到2-[2-(2-硫代苯甲酰基)乙氧基]乙基2-O-(4-氯苯甲酰基)-3-O-α-D-吡喃半乳糖基-β-D-吡喃半乳糖苷(22)(2.46g，87％)。Rf 0.42(MeCN/H2O 10∶1)，MS(电喷雾)C32H41ClO15S(733.13)m/z(％)755[M+Na]+(52)，733[M+H]+(100)2-[2-(2-硫代联苯羰基)乙氧基]乙基3-O-α-D-吡喃半乳糖基-β-D-吡喃半乳糖苷(23)
40℃下将在无水甲醇(15mL)中的2-[2-(2-硫代苯甲酰基)乙氧基]乙基2-O-(4-氯苯甲酰基)-3-O-α-D-吡喃半乳糖基-β-D-吡喃半乳糖苷(22)(210mg，0.287mmol)和甲醇钠(9mg，0.287mmol)的混合物搅拌4小时。将反应混合物冷却至室温，并加入联苯羰基氯(62.17mg，0.287mmol)。室温下搅拌30分钟后，将反应混合物蒸发至干。用MeCN-H2O 5∶1作为流动相通过色谱纯化残余物得到2-[2-(2-硫代联苯羰基)乙氧基]乙基3-O-α-D-吡喃半乳糖基-β-D-吡喃半乳糖苷(23)(120mg，62％)。Rf 0.35(MeCN/H2O 10∶2)，MS(电喷雾)C31H42O14S(670.73)m/z(％)693[M+Na]+(100)，671[M+H]+(20)实施例5：2-乙酰胺基-2-脱氧-4-O-[3-O-(α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡 喃半乳糖基]-D-吡喃葡糖(28)的制备
该制备的一般策略如反应路线4所述。反应路线4甲基4，6-O-亚苄基-2-O-(4-氯苯甲酰基)-3-O-(2，3，4，6-四-O-(4-氯苄基)-α-D-吡喃半乳糖基)-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(24)
室温下搅拌在无水THF(30mL)中的甲基2，3，4，6-四-O-(4-氯苄基)-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(8)(3.9g，5.5mmol)、分子筛4_(4g)的混合物，然后加入在CH2Cl2(5mL)中的溴(1.18g，6.66mmol)溶液。室温下将反应混合物搅拌10分钟，然后加入环己烷(1mL)。向搅拌的反应混合物中加入甲基4，6-O-亚苄基2-O-(4-氯苯甲酰基)-β-D-吡喃半乳糖苷(6)(2.0g，3.7mmol)，然后将此悬浮液冷却至-15℃。在15分钟内在氮气氛下滴加在无水THF(10mL)中的三氟甲磺酸银(1.4g，5.5mmol)溶液。将反应沸合物在0℃放置过夜。用三乙胺(2mL)中和反应混合物并过滤。将滤液蒸发至干，并在CHCl3(300mL)中处理残余物。用饱和NaHCO3溶液(3×300mL)洗涤溶液。用MgSO4干燥有机相并蒸发至干得到油状残余物。用二乙醚-乙醇20∶1作为流动相通过色谱纯化残余物，得到甲基4，6-O-亚苄基-2-O-(4-氯苯甲酰基)-3-O-(2，3，4，6-四-O-(4-氯-苄基)-α-D-吡喃半乳糖基)-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(24)(1.60g，40％)。Rf 0.30(二乙醚)，MS(电喷雾)C55H51Cl5O11S(1097.33)m/z(％)1117[M+Na]+(100)，1095[M+H]+(32)苄基2-乙酰胺基-3，6-二-O-苄基-2-脱氧4-O-[4，6-O-亚苄基-2-O-(4-氯苯甲酰基)-3-O-(2，3，4，6-四-O-(4-氯苄基)-α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖基]]-α-D-吡喃葡糖苷(26)
室温下将在无水1，2-二氯乙烷(15mL)中的甲基4，6-O-亚苄基-2-O-(4-氯苯甲酰基)-3-O-(2，3，4，6-四-O-(4-氯苄基)-α-D-吡喃半乳糖基)-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(24)(430mg，0.39mmol)、苄基2-乙酰胺基-3，6-二-O-苄基-2-脱氧-α-D-吡喃葡糖苷(25)(300mg，0.59mmol)、分子筛4_(5g)和三氟甲磺酸甲酯(97mg，0.59mmol)的混合物搅拌过夜。用三乙胺(2mL)中和反应混合物并过滤。用CHCl3(100mL)稀释滤液并用饱和NaHCO3溶液(2×100mL)洗涤。用MgSO4干燥有机相并蒸发至干得到油状残余物。用二乙醚-乙醇25∶1作为流动相通过色谱纯化残余物得到苄基2-乙酰胺基-3，6-二-O-苄基-2-脱氧-4-O-[4，6-O-亚苄基-2-O-(4-氯苯甲酰基)-3-O-(2，3，4，6-四-O-(4-氯苄基)-α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖基]]-α-D-吡喃葡糖苷(26)(300mg，50％)。Rf 0.33(二乙醚/EtOH 25∶1)，MS(电喷雾)C83H80Cl5NO17(1540.83)m/z(％)1560[M+Na]+(100)、1538[M+H]+(27).苄基2-乙酰胺基-3，6-二-O-苄基-2-脱氧-4-O-[4，6-O-亚苄基-3-O-(2，3，4，6-四-O-(4-氯苄基)-α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖基]]-α-D-吡喃葡糖苷(27)
向在无水甲醇(10mL)中的甲醇钠(73mg，0.13mmol)溶液中加入苄基2-乙酰胺基-3，6-二-O-苄基-2-脱氧-4-O-[4，6-O-亚苄基-2-O-(4-氯苯甲酰基)-3-O-(2，3，4，6-四-O-(4-氯苄基)-α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖基]]-α-D-吡喃葡糖苷(26)(300mg，0.19mmol)。40℃下将所得的混合物搅拌4.5小时。将反应混合物在0℃下放置1小时并过滤。用冷的无水MeOH(10mL)洗涤固体沉淀物得到苄基2-乙酰胺基-3，6-二-O-苄基-2-脱氧-4-O-[4，6-O-亚苄基-3-O-(2，3，4，6-四-O-(4-氯苄基)-α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖基]]-α-D-吡喃葡糖苷(27)(190mg，67％)，为白色粉末。Rf 0.35(CHCl3/MeOH 7∶3)，MS(电喷雾)C76H77Cl4NO16(1402.27)m/z(％)1423[M+Na]+(100)，1401[M+H]+(35)2-乙酰胺基-2-脱氧-4-O-[3-O-(α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖基]-D-吡喃葡糖(28)
在正氢压(45PSI)下，将Pd/C(10％)催化剂(1.0g)、苄基2-乙酰胺基-3，6-二-O-苄基-2-脱氧-4-O-[4，6-O-亚苄基-3-O-(2，3，4，6-四-O-(4-氯苄基)-α-D-喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖基]]-α-D-吡喃葡糖苷(27)(190mg，0.13mmol)和乙酸(3滴)的悬浮液振荡4小时。通过C盐过滤反应混合物，并用过量的混合床树脂(Amberlite-MB 1)中和滤液。滤掉树脂并将滤液蒸发至干。在milli-Q水(10mL)中处理残余物，用0.22μm滤器过滤所得的溶液。将滤液通过C-18 Sep-pak药筒(1g)。将滤液蒸发至干，并再于室温和高真空下用五氧化二磷干燥所得的固体，得到2-乙酰胺基-2-脱氧-4-O-[3-O-(α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖基]-D-吡喃葡糖(28)(32mg，43％)，为白色固体。Rf 0.36(CHCl3/MeOH/H2O 10∶12∶3)，MS(电喷雾)C20H35NO16(545.50)m/z(％)568[M+Na]+(100)，546[M+H]+(52)实施例6：化合物(28)的可选择合成
还可以用不同的葡糖胺受体、苄基-6-O-苯甲酰基-3-O-苯甲酰基1-2-乙酰胺基-2-脱氧-x-D-吡喃葡糖苷，采用反应路线5所述的策略制备化合物(28)。可以容易地高收率地制备受体。
                        反应路线52-乙酰胺基-2-脱氧-D-吡喃葡糖(29)
钠(23.4g，1.02mol)与无水甲醇(1.6L)反应，然后将所得的溶液冷却至40℃。将葡糖胺盐酸盐(200g，0.926mol)加入溶液，并将反应混合物剧烈搅拌5分钟。在无水条件下过滤悬浮液。0℃下在30分钟内将乙酸酐(140mL，1.48mol)滴加入滤液中。室温下将所得的悬浮液再搅拌30分钟。用醚(2L)稀释反应混合物，过滤并将固体产物干燥得到2-乙酰胺基-2-脱氧-D-吡喃葡糖(29)(177g，86％)。苄基2-乙酰胺基-2-脱氧-α-D-吡喃葡糖苷(30)
80℃下将在苄醇(1.25L)中的2-乙酰胺基-2-脱氧-D-吡喃葡糖(29)(150g，0.68mol)、Amberlite IR 120[H+]离子交换树脂(150g)的混合物搅拌3.5小时。过滤反应混合物。90℃下减压蒸发滤液。在热异丙醇(600mL)中处理残余物并过滤。放置滤液以结晶，滤出白色晶体固体，用冷异丙醇(200mL)洗涤两次，并用醚(200mL)洗涤两次得到2-乙酰胺基2-脱氧-α-D-吡喃葡糖苷(30)(56.2g，27％)。苄基4，6-O-亚苄基-2-乙酰胺基-2-脱氧-α-D-吡喃葡糖苷(31)
将苄基2-乙酰胺基-2-脱氧-α-D-吡喃葡糖苷(30)(50g，0.16mmol)溶于无水DMF(200mL)中。将无水乙腈(100mL)、α，α-二甲氧基甲苯(29g，0.19mol，1.2eq)和对甲苯磺酸(50mg)加入DMF溶液中。80℃和高真空(350mbar)下将反应混合物搅拌2小时；产物在1小时后开始沉淀。将所得的悬浮液冷却(60℃)，并通过加入三乙胺调节pH至7。将悬浮液冷却至0℃，并将冷甲醇(500mL)(-10℃)缓慢加入混合物中。过滤产物，用冷甲醇(200mL)洗涤，然后用冷醚(2×200mL)洗涤得到苄基4，6-O-亚苄基-2-乙酰胺基-2-脱氧-α-D-吡喃葡糖苷(31)(48g，75％)。苄基3-O-苄基-4，6-O-亚苄基-2-乙酰胺基-2-脱氧-α-D-吡喃葡糖苷(32)
将在无水DMF(25mL)中的氢化钠(3.6g，0.15mol，1.2eq)悬浮液冷却到0℃，并在30分钟内滴加在无水DMF(450mL)中的苄基4，6-O-亚苄基-2-乙酰胺基-2-脱氧-α-D-吡喃葡糖苷(32)(50g，0.125mol)溶液。0℃下将所得的溶液搅拌30分钟，并在0℃下滴加苄基溴(25.66g，0.15mol，1.2eq)(产物在加入苄基溴的开始时沉淀)。室温下将反应混合物搅拌45分钟，冷却至0℃，并滴加无水甲醇(25mL)。用冷醚(1L)稀释反应混合物，并将混合物搅拌30分钟。过滤所得的悬浮液，并用醚(400mL)洗涤三次得到苄基3-O-苄基-4，6-O-亚苄基-2-乙酰胺基-2-脱氧-α-D-吡喃葡糖苷(32)(62.0g)，为白色粉末，具有定量收率。苄基3-O-苄基-2-乙酰胺基-2-脱氧-α-D-吡喃葡糖苷(33)
110℃下将在乙酸(500mL)和水(25mL)中的苄基3-O-苄基-4，6-O-亚苄基-2-乙酰胺基-2-脱氧-α-D-吡喃葡糖苷(32)(50g，0.102mol)的悬浮液搅拌45分钟。40℃下减压浓缩反应混合物。在甲苯(200mL)中处理油状残余物两次并浓缩。用二异丙醚(250mL)处理残余物，并将所得的悬浮液搅拌30分钟。滤掉白色固体，用冷醚(200mL)洗涤两次得到苄基3-O-苄基-2-乙酰胺基-2-脱氧-α-D-吡喃葡糖苷(33)(38.0g，93％)。苄基6-O-苯甲酰基-3-O-苄基-2-乙酰胺基-2-脱氧-α-D-吡喃葡糖苷(34)
5℃下将在无水1，2-二氯乙烷(150mL)中的苯甲酰氯(6.3g，0.045mol，1.2eq)和咪唑(6g，0.09mol，2.4eq)溶液搅拌20分钟。在无水条件下过滤所得的悬浮液。将滤液加入在无水1，2-二氯乙烷(600mL)中的苄基3-O-苄基-2-乙酰胺基-2-脱氧-α-D-吡喃葡糖苷(33)(15g，37.6mmol)溶液中。90℃下将反应混合物搅拌48小时并冷却至室温。过滤所得的悬浮液，用盐水(300mL)洗涤两次，用MgSO4干燥并浓缩。在热异丙醇(300mL)中处理残余物并放置以结晶。滤出白色晶体固体得到苄基6-O-苯甲酰基-3-O-苄基-2-乙酰胺基-2-脱氧-α-D-吡喃葡糖苷(34)(11.7g，62％)。甲基4，6-O-亚苄基-3-O-氯乙酰基-2-O-(4-氯苯甲酰基)-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(35)
0℃下搅拌在无水1，2-二氯乙烷(100mL)中的甲基4，6-O-亚苄基-2-O-(4-氯苯甲酰基)-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(6)(10.0g，23mmol)和4-二甲基氨基吡啶(3.40g，27.8mmol)的混合物，然后将氯乙酰氯(3.4g，27.8mmol，1.2eq)滴加入此溶液中。室温下将反应混合物搅拌2.5小时，然后用1，2二氯乙烷(100mL)稀释。用饱和盐水溶液(100mL)将所得的溶液洗涤两次，用MgSO4干燥并浓缩得到甲基4，6-O-亚苄基-3-O-氯乙酰基-2-O-(4-氯苯甲酰基)-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(35)(10.2g，86％)，为白色晶体固体。苄基2-乙酰胺基-6-O-苯甲酰基-3-O-苄基-4-O-4，6-O-亚苄基-3-O-氯乙酰基-2-O-(4-氯苯甲酰基)-β-D-吡喃半乳糖基]-2-脱氧-α-D-吡喃葡糖苷(36)
在氮气氛下，向在无水1，2-二氯乙烷(300mL)中的苄基2-乙酰胺基-6-O-苯甲酰基-3-O-苄基-4-O-2-脱氧-α-D-吡喃葡糖苷(34)(5g，9.9mmol)、甲基4，6-O-亚苄基-3-O-氯乙酰基-2-O-(4-氯苯甲酰基)-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(35)(5.71g，11.1mmol，1.12eq)和分子筛4_(2.5g)的混合物中加入DMTST(5.75g，2.4eq)。室温下将反应混合物搅拌5小时，然后通过加入吡啶(5mL)中和。加入乙酸酐(2.5mL)，并在室温下将反应混合物搅拌0.5小时。通过C盐床过滤所得的悬浮液。用饱和NaHCO3(200mL)洗涤滤液，用盐水(200mL)洗涤两次，用MgSO4干燥并浓缩。在DCM(25mL)中处理残余物，并加入二异丙醚(200mL)。滤出所得的黄色沉淀，并用冷二异丙醚(100mL)洗涤两次。用DCM(20mL)和醚(25mL)的混合物结晶固体得到苄基2-乙酰胺基-6-O-苯甲酰基-3-O-苄基-4-O-[4，6-O-亚苄基-3-O-氯乙酰基-2-O-(4-氯苯甲酰基)-β-D-吡喃半乳糖基]-2-脱氧-α-D-吡喃葡糖苷(36)(5.1g，55％)，为白色晶体固体。苄基2-乙酰胺基-6-O-苯甲酰基-3-O-苄基-4-O-[4，6-O-亚苄基-2-O-(4-氯苯甲酰基)-β-D-吡喃半乳糖基]-2-脱氧-α-D-吡喃葡糖苷(37)
室温下将在THF(3mL)和水(0.5mL)中的苄基2-乙酰胺基-6-O-苯甲酰基-3-O-苄基-4-O-[4，6-O-亚苄基-3-O-氯乙酰基-2-O-(4-氯苯甲酰基)-β-D-吡喃半乳糖基]-2-脱氧-α-D-吡喃葡糖苷(36)(0.5g)和硫脲(303mg)搅拌14小时，然后用氯仿(100mL)稀释反应混合物。用水(50mL)将所溶液洗涤两次，用MgSO4干燥并浓缩。用DCM/EtOAc 1∶1作为流动相通过闪蒸色谱纯化残余物得到苄基2-乙酰胺基-6-O-苯甲酰基-3-O-苄基-4-O-[4，6-O-亚苄基-2-O-(4-氯苯甲酰基)-β-D-吡喃半乳糖基]-2-脱氧-α-D-吡喃葡糖苷(37)(280mg，61％)，为白色固体。苄基2-乙酰胺基-6-O-苯甲酰基3-O-苄基-2-脱氧-4-O-[4，6-O-亚苄基-2-O-(4-氯苯甲酰基)-3-O-(2，3，4，6-四-O-(4-氯苄基)-α，β-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖基]]-α-D-吡喃葡糖苷(38)
将DMTST(300mg，1.2mmol)加入在无水1，2-二氯乙烷(3mL)中的甲基2，3，4，6-四-O-(4-氯苄基)-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(430mg，0.602mmol)、苄基2-乙酰胺基-6-O-苯甲酰基-3-O-苄基-4-O-[4，6-O-亚苄基-2-O-(4-氯苯甲酰基)-β-D-吡喃半乳糖基]-2-脱氧-α-D-吡喃葡糖苷(37)(280mg，0.301mmol)和分子筛4_(300mg)的混合物中。室温下将反应混合物搅拌3小时。用三乙胺(1mL)中和反应混合物，用CHCl3(50mL)稀释并过滤。然后用饱和NaHCO3溶液(3×50mL)洗涤。用MgSO4干燥有机相并蒸发至干得到固体泡沫。用CHCl3-EtOAc 1∶1作为流动相通过色谱纯化残余物，得到苄基2-乙酰胺基-6-O-苯甲酰基-3-O-苄基-2-脱氧-4-O-[4，6-O-亚苄基-2-O-(4-氯苯甲酰基)-3-O-(2，3，4，6-四-O-(4-氯苄基)-α，β-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖基]]]-α-D-吡喃葡糖苷(38)(325mg，70％，α/β＝85/15)。苄基2-乙酰胺基-3-O-苄基-2-脱氧-4-O-[4，6-O-亚苄基-3-O-(2，3，4，6-四-O-(4-氯苄基)-α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖基]]-α-D-吡喃葡糖苷(39)
向在无水甲醇(2mL)中的甲醇钠(20mg，0.37mmol)溶液中加入苄基2-乙酰胺基-6-O-苯甲酰基-3-O-苄基-2-脱氧-4-O-[4，6-O-亚苄基-2-O-(4-氯苯甲酰基)-3-O-(2，3，4，6-四-O-(4-氯苄基)-α，β-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖基]]-α-D-吡喃葡糖苷(38)(190mg，0.12mmol)。40℃下将所得的混合物搅拌4小时。将反应混合物冷却至室温并过滤。用冷无水MeOH(10mL)洗涤固体沉淀，然后用己烷(2×25mL)洗涤得到苄基2-乙酰胺基-3-O-苄基-2-脱氧-4-O-[4，6-O-亚苄基-3-O-(2，3，4，6-四-O-(4-氯苄基)-α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖基]]-α-D-吡喃葡糖苷(39)(110mg，68％)，为白色粉末。TLC Rf 0.35(EtOAc/CHCl3 7∶3)。2-乙酰胺基-2-脱氧-4-O-[3-O-(α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖基]-D-吡喃葡糖(28)
在正氢压(60PSI)下，将在THF-MeOH-H2O 5∶1∶1(7mL)中的Pd/C(10％)催化剂(100mg)、苄基2-乙酰胺基-3-O-苄基-2-脱氧-4-O-[4，6-O-亚苄基-3-O-(2，3，4，6-四-O-(4-氯苄基)-α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖基]]-α-D-吡喃葡糖苷(39)(80mg，0.06mmol)和乙酸(3滴)的悬浮液振荡过夜。用milliQ水(30mL)稀释反应混合物，通过C盐过滤，用过量的混合床树脂(Amberlite-MB 1)中和滤液。滤出树脂，并将滤液蒸发至干。在milli-Q水(5mL)中处理残余物，并将所得的溶液通过C-18 Sep pak药筒(1g)。蒸发滤液至干，再在室温和高真空下用五氧化二磷干燥剩余的固体，得到2-乙酰胺基-2-脱氧-4-O-[3-O-(α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖基]-D-吡喃葡糖(28)(20mg，53％)，为白色固体。Rf 0.36(CHCl3/MeOH/H2O 10∶12∶3)，MS(电喷雾)C20H35NO16(545.50)m/z(％)568[M+Na]+(100)，546[M+H]+(52)实施例6：2-乙酰胺基-2-脱氧-4-O-[3-O-(α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡 喃半乳糖基]-D-吡喃葡糖(28)的固定化
以下反应路线，路线6例举了本发明的化合物如何使用两种可选择的连接基团结合到固体载体上。第二种连接基团为二氧代化合物，如在我们的国际专利申请PCT/AU98/00808中所述。可以理解，本发明的其它化合物可以类似的方式连接到固体载体上。
Figure A0180372100531
                               反应路线6路线7：参与的吡喃半乳糖苷结构单元的合成
Figure A0180372100541
44(R＝新戊酰基)       45(R＝新戊酰基)48(R＝乙酰基)         48(R＝乙酰基)
Figure A0180372100542
43(R＝4-氯苯甲酰基)   46(R＝新戊酰基)47(R＝新戊酰基)50(R＝Ac)路线7实施例7：甲基4，6-O-亚苄基-2-O-(4-氯苯甲酰基)-3-O-芴基甲基-氧 羰基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷的合成甲基4，6-O-亚苄基-2-O-(4-氯苯甲酰基)-3-O-芴基甲基氧羰基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(43)
将在1，2-二氯乙烷[200mL]中的甲基4，6-O-亚苄基-2-O-(4-氯苯甲酰基)-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷6[20g，45.87mmol]的悬浮液冷却至0℃。将DMAP[16.81g，138mmol]加入冷却的悬浮液中，然后加入Fmoc-Cl[35.60g，137mmol]]。现在将溶液回复到室温，并搅拌2小时。然后用氯仿[200mL]稀释反应混合物，并用5％的柠檬酸溶液[2×400mL]饱和盐水溶液[2×400mL]洗涤反应混合物。将层分离并用Na2SO4干燥有机层，然后过滤并真空除去溶剂。通过柱色谱法[20％乙酸乙酯/石油醚v/v]纯化所得的残余物得到甲基4，6-O-亚苄基-2-O-(4-氯苯甲酰基)-3-O-芴基甲基氧羰基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷43，为白色泡沫[27.2g，90％]；Rf＝0.22；ES-MS给出m/z(离子，相对强度)；1H NMR(CDCl3)δ7.88-7.07(17H，芳基)，6.01(t，1H，H-2)，5.79(s，1H，亚苄基)，5.36(dd，1H，H-3)，4.91(d，1H，J1-2＝8.5，H-1)，4.89(d，1H，H-4)，4.78(dd，1H，H-6a)，4.67(m，2H，芴基-CH2-)，4.52(t，1H，9-芴基甲基)，4.49(dd，1H，H-6b)，4.14(s，1H，H-5)，2.29(s，3H，S-CH3)实施例8：甲基4，6-O-亚苄基-3-O-芴基甲基氧羰基-2-O-新戊酰基-1- 硫代-β-D-吡喃半乳糖苷的合成甲基6-O-叔丁基二甲基甲硅烷基)-3，4-O-异亚丙基2-O-(新戊酰基)-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(44)
向在1，2-二氯乙烷[40mL]中的6-O-叔丁基二甲基甲硅烷基-3，4-O-异亚丙基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷[11.5g，31.59mmol]和DMAP[5.5g，45.5mmol]的混合物中滴加2，2，2-三甲基乙酰氯。搅拌反应物2小时，然后用氯仿[100mL]稀释，并用10％的柠檬酸溶液[2×150mL]、饱和NaHCO3溶液[2×150mL]和饱和盐水溶液[2×150mL]洗涤。将层分离并用Na2SO4干燥有机层。真空除去溶剂得到油状残余物。通过柱色谱法(5％乙酸乙酯/石油醚)纯化残余物得到白色泡沫，甲基6-O-叔丁基二甲基甲硅烷基-3，4-O-异亚丙基-2-O-新戊酰基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷44[13.7g，97％]。Rf＝0.75(乙酸乙酯/石油醚，1∶2，v/v)；1H NMR(CDCl3)δ5.05(dd，1H，H-2)，4.29(dd，1H，H-4)，4.25(d，1H，J1-2＝10.12，H-1)，4.17(dd，1H，H-3)，3.93-3.84(m，3H，H-6a，H-6b，H-5)，2.16(s，3H，S-CH3)。甲基2-O-新戊酰基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(45)
将甲基6-O-叔丁基二甲基甲硅烷基-2-O-新戊酰基-3，4-O-异亚丙基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷44[3.34g，7.45mmol]x溶于25％的乙腈/甲醇[40mL]中。将4-甲苯磺酸[17mg，90.43μmol]加入此溶液，然后回流搅拌此溶液3小时。随后将反应温度降至40℃并放置过夜。然后浓缩反应混合物，残余物与甲苯共沸，然后与二乙醚共沸得到白色残余物。通过柱色谱法(10％乙腈/乙酸乙酯，v/v)纯化残余物得到白色固体，甲基2-O-新戊酰基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷45[2.19g，83％]，Rf＝0.20(乙酸乙酯)；ES-MS m/z(离子，相对强度)295([M+H]+，100％)；1H NMR(CDCl3)δ5.08(dd，1H，H-2)，4.39(d，1H，J1-2＝9.88Hz，H-1)，4.13(d，1H，H-4)，4.01-3.92(m，2H，H-6a，H-6b)，3.72(dd，1H，H-3)，3.62(1dd，1H，H-5)，2.21(s，3H，S-CH3)，1.27(s，9H，叔丁基)。甲基4，6-O-亚苄基-2-O-新戊酰基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(46)
将甲基2-O-(新戊酰基)-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷45[1.68g，5.71mmol]、α，α-二甲氧基甲苯和4-甲苯磺酸[10mg，43.19mmol]的混合物溶于乙腈[50mL]，并在60℃下搅拌加热1小时。然后使反应物回复到室温，用2当量的三乙胺中和并真空浓缩。在氯仿[100mL]中处理残余物，并用稀盐水[3∶1；H2O∶盐水，1×100mL]、饱和NaHCO3溶液[1×100mL]和饱和盐水溶液[1×100mL]洗涤有机层。将层分离并用Na2SO4干燥有机层。浓缩有机层，并通过柱色谱法(33％乙酸乙酯/石油醚，v/v)纯化残余物得到甲基4，6-O-亚苄基-2-O-新戊酰基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷46[1.91g，87％]。Rf＝0.63(乙酸乙酯)，ES-MS m/z(离子，相对强度)341([M+H]+，100％)；1H NMR(CDCl3)δ7.51(m，2H，芳基)，7.41(m，3H，芳基)，5.58(s，1H，CH-亚苄基)，5.24(dd，1H，H-2)，4.4(dd，1H，H-6a)，4.39(d，1H，J1-2＝9.77，H-1)，4.29(dd，1H，H-4)，4.08(dd，1H，H-6b)，3.8(ddd，1H，H-3)，3.60(s，1H，H-5)，2.26(s，3H，S-CH3)，1.27(s，9H，叔丁基)。甲基4，6-O-亚苄基-3-O-芴基甲基氧羰基-2-O-新戊酰基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(47)
将甲基4，6-O-亚苄基-2-O-新戊酰基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷46[1.90g，4.97mmol]溶于1，2-二氯乙烷(20mL)，并将所得的溶液冷却到0℃。此时依次加入DMAP[1.82g，14.92mmol]和Fmoc-Cl[3.87g，14.92mmol]。然后移走冷浴，并使反应物回复至室温。室温下将反应物搅拌2小时，然后用CHCl3[～50mL]稀释。然后用5％柠檬酸溶液[2×100mL]和饱和盐水溶液[2×100mL]洗涤反应混合物。将层分离并用Na2SO4干燥有机层。然后过滤溶液并浓缩得到黄色残余物，通过柱色谱法(20％乙酸乙酯/石油醚v/v)将其纯化得到甲基4，6-O-亚苄基-3-O-芴基甲基氧羰基-2-O-新戊酰基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷47[2.74g，91％]；Rf＝0.38(25％乙酸乙酯/石油醚v/v)；ES-MS m/z(离子，强度)；1H NMR(CDCl3)δ7.78-7.25(13H，芳基)，5.61(t，1H，H-2)，5.57(s，1H，亚苄基)，4.97(dd，1H，H-3)，4.50(d，1H，H-4)，4.45(d，1H，J1-2＝9.10hz，H-1)，4.47-4.33(m，2H，Fmoc-CH2-)，4.25(t，1H，9-芴基亚甲基)，4.40(dd，1H，H-6a)，4.08(dd，1H，H-6b)，3.65(s，1H，H-5)，2.30(s，3H，S-CH3)，1.20(s，9H，叔丁基)。实施例9：甲基2-O-乙酰基-4，6-O-亚苄基-3-O-芴基甲基氧羰基-1-硫  代-β-D-吡喃半乳糖苷的合成甲基2-O-乙酰基-6-O-叔丁基二甲基甲硅烷基-3，4-O-异亚丙基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(48)的合成
室温下搅拌在无水1，2-二氯乙烷(750mL)中的甲基6-O-叔丁基二甲基甲硅烷基-3，4-O-异亚丙基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(3.00g，8.24mmol)和4-二甲基氨基吡啶(2.42g，19.78mmol)的混合物。15分钟内将乙酰氯[1.05mL，14.84mmol]滴加入此溶液。室温下将反应物搅拌2小时，此时用氯仿稀释，并用10％柠檬酸溶液[2×100mL]、饱和碳酸氢钠[2×100mL]和最终用饱和盐水溶液[2×100mL]洗涤。将层分离并用Na2SO4干燥有机层。过滤此溶液并浓缩得到白色残余物，通过柱色谱法(20％乙酸乙酯/石油醚v/v)纯化此残余物，得到甲基2-O-乙酰基-6-O-叔丁基二甲基甲硅烷基-3，4-O-异亚丙基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷48，为白色固体[2.65g，79％]；Rf＝0.43(25％乙酸乙酯/石油醚v/v)。甲基2-O-乙酰基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(49)的合成
将2-O-乙酰基-6-O-叔丁基二甲基甲硅烷基-3，4-O-异亚丙基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷x溶于50％乙腈/甲醇[50mL]，并在60℃下加热。向搅拌的溶液中加入4-甲苯磺酸[10mg，53.19μmol]并使反应物放置4小时。然后将反应温度降至40℃并放置过夜。然后浓缩反应混合物并从甲醇中结晶残余物得到2-O-乙酰基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷49，为白色固体[1.26g，79％]；Rf＝0.2(25％乙腈/乙酸乙酯v/v)；1H NMR(d-MeOH)δ3.95(t，1H，H-2)，3.27(d，1H，J1-2＝8.63，H-1)，2.92(1H，H-4)，2.79-2.69(m，2H，H-6a和H-6b)，2.62(t，1H，H-3)，2.38(m，1H，H-5)，1.37(s，3H，S-CH3)，1.31(s，3H，-C(O)CH3)甲基2-O-乙酰基-4，6-O-亚苄基-3-O-芴基甲基氧羰基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(50)的合成
将2-O-乙酰基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷49溶于乙腈[20mL]并加热至60℃。向搅拌的溶液中加入α，α-二甲氧基甲苯[1.09g，7.10mmol]和4-甲苯磺酸[10mg，53.19μmol]。将反应物搅拌2小时，然后回复至室温。用2当量的三乙胺中和反应物并蒸发至干。在氯仿中处理残余物并用稀盐水[1×100mL]、饱和碳酸氢钠溶液[1×100mL]和饱和盐水溶液[1×100mL]洗涤。将层分离并用Na2SO4干燥有机层。过滤溶液并浓缩。连续地用石油醚洗涤残余物，然后将所得的白色固体悬浮在甲苯和任何剩余的在共蒸发条件下共沸的水。将来自前一步骤的残余物悬浮在1，2-二氯乙烷[20mL]中，并冷却至0℃。0℃下向搅拌的悬浮液中加入4，4-二甲基氨基吡啶[1.62g，13.23mmol]和Fmoc-Cl[3.42g，12.23mmol]。现在将溶液回复到室温并搅拌1小时。此时用氯仿稀释反应物，并用5％柠檬酸溶液[2×75mL]和饱和盐水溶液[2×75mL]洗涤。然后将层分离并用Na2SO4干燥有机层。过滤溶液并真空除去溶剂得到黄色油状残余物，通过柱色谱法(33％乙酸乙酯/石油醚v/v)将其纯化得到甲基2-O-乙酰基-4，6-O-亚苄基-3-O-芴基甲基氧羰基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷50[2.19g，82％]Rf＝0.2(33％乙酸乙酯/石油醚，v/v)；1H NMR(CDCl3)δ7.78-7.24(13H，芳基)，5.60(t，1H，H-2)，5.55(s，1H，亚苄基)，4.88(dd，1H，H-2)，4.50(d，1H，H-4)，4.55-4.38(m，4H，H-1，Fmoc-CH2，H-6a)，4.28(t，1H，9-芴基-亚甲基)，4.06(dd，1H，H-6b)，3.63(s，1H，H-5)，2.29(s，3H，S-CH3)，2.1(s，3H，-C(O)CH3)。路线8：Galα(1-3)-β(1-4)-GlcNAc的固相合成
Figure A0180372100601
实施例10：部分保护的树脂连接的糖缀合物的合成苄基3，6-二-O-苄基-2-脱氧-2-氨基-β-D-吡喃葡糖苷(51)
向在乙醇[100mL]中的3，6-二-O-苄基-2-脱氧-2-苯二酰亚氨基-β-D-吡喃葡糖苷[6.20g，10.71mmol]溶液中加入水合肼[6.2mL，55％/H2O]和水[5mL]。将溶液回流过夜，然后使其回复到室温。过滤溶液，真空除去溶剂，并在CHCl3[200mL]中处理残余物。过滤氯仿悬浮液，用Na2SO4干燥滤液并减压浓缩得到纯的澄清的油，苄基3，6-二-O-苄基-2-脱氧-2-氨基-β-D-吡喃葡糖苷51[4.7g，97％]；Rf＝0.5(乙腈)，ES-MS的m/z(离子，相对强度)：450([M+H]+，100％)；1H NMR(CDCl3)δ7.43-7.30(m，15H，芳基)，5.00-4.60(6H，3CH2-C6H5)，4.38(d，1H，J1，2＝7.92Hz，H-1)，3.85-3.75(m，3H，H-6a，H-6b，H-3)，3.53(ddd，1H，H-5)，3.38(dd，1H，H-3)，2.92(dd，1H，H-2)。苄基3，6-二-O-苄基-2-脱氧-2-N-(6-(4，4-二甲基-2，6-二氧亚环己基)-戊酸-6-基)-β-D-吡喃葡糖苷(52)
向在乙醇[100mL]中的苄基3，6-二-O-苄基-2-脱氧-2-氨基-β-D-吡喃葡糖苷51[4.70g，10.47mmol]溶液中加入6-羟基-6-(4，4-二甲基-2，6-二氧亚环己基)-戊酸[5.32g，20.93mmol]，然后加入三乙胺[1.5mL，10.69mmol]。60℃下将反应混合物加热过夜，然后使其回复到室温。浓缩反应混合物，并在氯仿[200mL]中处理残余物。用0.3N HCl[2×200mL]溶液和饱和盐水溶液[1×200mL]洗涤有机层。用Na2SO4干燥有机层并浓缩得到淡黄色残余物。用乙酸乙酯-石油醚-乙酸，5∶15∶0.4通过柱色谱纯化残余物得到苄基3，6-二-O-苄基-2-脱氧-2-N-(6-(4，4-二甲基-2，6-二氧亚环己基)-戊酸-6-基)-β-D-吡喃葡糖苷52[6.09g，85％]。Rf＝0.10(乙酸乙酯-石油醚-乙酸，5∶15∶0.4)，ES-MS m/z(离子，相对强度)：686.5([M+H]+，100％)将苄基3，6-二-O-苄基-2-脱氧-2-N-(6-(4，4-二甲基2，6-二氧亚环己基)-戊酸-6-基)-β-D-吡喃葡糖苷偶联到MBHA树脂(0.7mmol/g)(53)
在200mL肽反应容器中，使MBHA树脂[11.86g，8.30mmol]在最小量的无水N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中膨胀。DMF[50mL]溶液由苄基3，6-二-O-苄基-2-脱氧-2-N-(6-(4，4-二甲基-2，6-二氧亚环己基)-戊酸-6-基)-β-D-吡喃葡糖苷52[6.09g，8.90xmmol]、二异丙基乙基胺(DIPEA)[3.11mL，17.8mmol]和O-苯并三唑-1-基-N，N，N′，N′-四甲基尿鎓六氟磷酸盐(HBTU)[3.37g，8.9mmol]制成，然后将该DMF溶液加入反应容器。将容器密闭并振荡过夜。茚三酮试验表明反应完成大于99.4％，停止反应，并用DMF[4×100mL]、50％DCM/MeOH[4×100mL]和DCM[4×100mL]洗涤该树脂。在室内真空下将树脂干燥4小时，然后在高真空干燥过夜。树脂53的收率为[17.15g，98.6％(重量)]。苄基2-乙酰胺基-3，6-二-O-苄基-2-脱氧-4-O-[4，6-O-亚苄基-2-O-新戊酰基-3-O-(2，3，4，6-四-O-(4-氯苄基)-α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖基)]-β-D-吡喃葡糖苷(58)
在氮气氛下，将树脂53[300mg，141μmol]、4，6-O-亚苄基-3-O-芴基甲基氧羰基-2-O-新戊酰基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷47[557mg，846μmol]和粉末状分子筛4_[600mg]悬浮在二氯甲烷[3mL]中，然后加入三氟甲磺酸甲酯[95.7μL，846μmol]。密闭反应容器，并在室温下将反应混合物搅拌5小时。然后用DMF[3×20mL]、50％MeOH/DCM[3×20mL]DCM[3×20mL]洗涤树脂。随后将树脂漂浮在DCM中以将树脂和任何剩余的筛分离。收集树脂54并在室内真空下干燥1小时。然后用20％三乙胺/DMF溶液处理树脂25分钟，随后如上处理。在高真空下将树脂55干燥过夜。然后在氮气氛下将树脂与甲基2，3，4，6-四-O-(4-氯苄基)-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷8[600mg，846μmol]、粉末状分子筛4_[800mm]和二氯甲烷[4mL]混合，最后加入三氟甲磺酸甲酯[95.74μL，846μmol]。密闭反应容器，室温下将反应混合物搅拌5小时。然后按标准洗涤树脂，收集并在烧结漏斗中干燥。然后在反应容器中，将树脂56与5％水合肼(55％/H2O)/DMF[5mL]溶液混合，并在室温下搅拌4小时。从树脂中滤出DMF溶液，然后再用DMF[7mL]洗涤树脂。合并滤液并真空除去溶剂。在最小量的二氯甲烷中处理残余物，并使其通过二氧化硅塞(洗脱液；DCM，TLC：CH2Cl2∶MeOH，20∶0.3)。浓缩合并的馏分，然后在1，2-二氯乙烷[3mL]中处理残余物57，并在室温下，在DMAP[84mg，684μmol]存在下与乙酰氯[46μL，648μmol]反应3小时。用氯仿[20mL]稀释反应物，并用饱和柠檬酸溶液[2×20mL]、饱和碳酸氢钠溶液[2×20mL]和饱和盐水溶液[2×20mL]洗涤。分离有机层，用Na2SO4干燥，并浓缩得到白色固体残余物。通过柱色谱法(0.5％MeOH/DCM，v/v)纯化残余物得到2-乙酰胺基-3，6-二-O-苄基-2-脱氧-4-O-[4，6-O-亚苄基-2-O-新戊酰基-3-O-(2，3，4，6-四-O-(4-氯苄基)-α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖基)]-β-D-吡喃葡糖苷58(213mg，76.3％)。Rf＝0.57(66％乙酸乙酯/石油醚，v/v)，ES-MS m/z(离子，强度)1486.29([M+H]+100％)。
在试验58的同类试验中，用化合物43代替化合物47(本试验采用树脂53(425mg，0.199mmol/g))，以提供2-乙酰胺基-3，6-二-O-苄基-2-脱氧-4-O-[4，6-O-亚苄基-2-O-(4-氯苯甲酰基)-3-O-(2，3，4，6-四-O-(4-氯苄基)-α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖基)]-β-D-吡喃葡糖苷59(96mg，34％)，Rf＝0.23(1.64％甲醇/二氯甲烷，v/v)，ES-MS m/z(离子，强度)1543.29([M+H]+100％)。
在试验58的另一同类试验中，用化合物50代替化合物47以提供2-氨基-3，6-二-O-苄基-2-脱氧-4-O-[4，6-O-亚苄基-3-O-(2，3，4，6-四-O-(4-氯苄基)-α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖基)]-β-D-吡喃葡糖苷60，Rf＝0.5(1.96％甲醇/二氯甲烷，v/v)，ES-MS m/z(离子，强度)1360.73([M+H]+100％)。2-乙酰胺基-3，6-二-O-苄基-2-脱氧-4-O-[4，6-O-亚苄基-3-O-(2，3，4，6-四-O-(4-氯苄基)-α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖基)]-β-D-吡喃葡糖苷(61)的合成
将2-乙酰胺基-3，6-二-O-苄基-2-脱氧-4-O-[4，6-O-亚苄基-2-O-新戊酰基-3-O-(2，3，4，6-四-O-(4-氯苄基)-(α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖基)]-β-D-吡喃葡糖苷58[288mg，188μmol]悬浮在加入乙腈[5mL]的NaOMe/MeOH[0.13M，10mL]溶液中。70℃下加热反应物直至TLC表明反应已经完成(4-5天)。然后将反应混合物浓缩，在二氯甲烷[20mL]中进行处理，并用10％柠檬酸溶液[2×20mL]和饱和盐水溶液[2×20mL]洗涤。分离有机层，用Na2SO2干燥，并在真空下除去溶剂得到固体白色残余物。通过制备薄层色谱法(洗脱剂：13％丙酮/DCM)纯化残余物得到2-乙酰胺基-3，6-二-O-苄基-2-脱氧-4-O-[4，6-O-亚苄基-3-O-(2，3，4，6-四-O-(4-氯苄基)-α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖基)]-β-D-吡喃葡糖苷61[189mg，69％]。Rf 0.24(1.47％MeOH/DCM)；ES-MS m/z(离子，强度)1403.29([M+H]+，100％)。Gal-α-(1-3)-Gal-β-(1-4)-GIcNAc-连接缀合物的合成和固定。路线9：Gal-α-(1-3)-Gal-β-(1-4)-GlucNac-缀合物的合成
Figure A0180372100651
实施例11：糖连接缀合物的合成2-乙酰胺基-2-脱氧-4-O-[3-O-(α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖基]-D-吡喃葡糖胺(62)
40℃下将在30％氨水(20mL)中的2-乙酰胺基-2-脱氧-4-O-[3-O-(α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖基]-D-吡喃葡糖(1g，1.8mmol)28和碳酸氢铵(0.15g，1.9mmol)溶液搅拌48小时。然后将反应混合物冻干得到62(1.0g，tlc测得收率为～80％)，为白色固体。Tlc Rf 0.2(can：水，3∶1)1-N-(3-氯丙基)-1-N′-脲基-2-乙酰胺基-2-脱氧-4-O-[3-O-(α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖基]-D-吡喃葡糖苷(63)
向在甲醇(5mL)中的62(0.35g，6.5mmol)溶液中加入异氰酸3-氯丙酯(0.1g，0.84mmol)。然后将反应混合物于室温下搅拌过夜。将反应内含物蒸发至干，将残余物溶于水*(～3mL)，并将其装载到C-18 Sep-pack柱(5g)。用水(50mL)洗脱**柱，然后用在水(50mL)中的25％甲醇洗脱。合并甲醇部分并蒸发至干，得到纯的63(350mg，～80％收率)，为白色固体。Tlc Rf 0.6(AcN∶水，3∶1)发现M+H为664对于α/β异头物，HPLCRt 4.0和4.5分钟(线性梯度：15分钟内5％can至20％AcN，C-18柱)1-N-(3-乙酸基硫代丙基)-1-N′-脲基-2-乙酰胺基-2-脱氧-4-O-[3-O-(α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖基]-D-吡喃葡糖苷(64)
80℃下将在水(10mL)中的63(0.2g，0.30mmol)、碘化钠(0.1g，0.67mmol)和硫代乙酸钾(0.2g，1.74mmol)的混合物搅拌2小时。然后将反应混合物冷却至室温并浓缩至5mL。将浓缩物装载到C-18Sep-pack柱(5g)，然后用水(100mL)洗脱，接着用在水中的25％甲醇(100mL)洗脱。合并甲醇部分并蒸发至干，得到纯的64(0.18g，～85％收率)，为白色固体。Tlc Rf 0.6(AcN∶水，3∶1)发现M+H为703对于α/β异头物，HPLCRt 5.5和6.0分钟(线性梯度：15分钟内5％can至20％AcN，C-18柱)。1-N-[3-(甲基羧基甲硫基)-丙基]-1-N′-脲基-2-乙酰胺基-2-脱氧-4-O-[3-O-(α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖基]-D-吡喃葡糖苷(65)
向在甲醇(3mL)中的甲醇钠溶液中加入64(110mg，0.24mmol)。室温下将反应混合物搅拌20分钟，然后加入溴乙酸甲酯(50mg，0.30mmol)。将所得的混合物于室温下搅拌2小时。用乙酸(200μL)淬灭反应混合物，然后蒸发至干。将残余物溶于水(2mL)并装载到C-18 Sep-pack柱(5g)。用水(50mL)洗脱柱，然后用在水中的50％甲醇(50mL)洗脱。将甲醇部分合并并蒸发至干，得到65(100.8mg，90％收率)，为白色固体。Tlc Rt 0.65(AcN∶水，3∶1)发现M+H为734，发现M+Na为7551-N-[3-(羧基甲硫基)-丙基]-1-N′-脲基-2-乙酰胺基-2-脱氧-4-O-[3-O-(α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖基]-D-吡喃葡糖苷(66)
室温下将在30％甲醇水溶液(15mL)中的65(300mg，0.41mmol)和氢氧化钾(30mg，0.53mmol)搅拌4小时。用甲醇将反应混合物稀释至50mL，然后用IR-120 H+树脂中和。随后将悬浮液过滤，并将滤液蒸发至干，留下66(295mg，100％收率)，为白色固体。Tlc Rf 0.30(AcN∶水，3∶1)发现M+H为719注 *一直使用Milli-Q-水**流速一直为1滴/秒路线10：将Gal-α-(1-3)-Gal-β-(1-4)-GlucNAc-连接缀合物偶联到丙基氨基官能化的二氧化硅和己基氨基官能化的琼脂糖上
Figure A0180372100681
实施例12：Gal-α-(1-3)-Gal-β-(1-4)-GlucNAc-连接缀合物的固定化0.3mmol丙基酰氨基-FmocAla-官能化的二氧化硅(67)的制备
将DIPEA(1.1g，8.5mmol)加入在无水DMF(20mL)中的FMOC-Ala(2.65g，8.5mmol)和HBTU(3.23g，8.5mmol)的混合物中。将混合物振荡2分钟，然后放置15分钟。然后将混合物加入在无水DMF(20mL)中的丙基氨基官能化的二氧化硅*(17g)的悬浮液。室温下将所得的混合物不停振荡18小时。过滤混合物，用DMF(3×100mL)洗涤二氧化硅，然后用甲醇(3×100mL)洗涤。将树脂再悬浮在甲醇(100mL)和乙酸酐(50mL)的混合物中，然后振荡2小时(此后进行阴性茚三酮试验)。过滤悬浮液，然后用甲醇(4×100mL)洗涤二氧化硅并干燥。发现FMOC-Ala装载量为0.3mmol每克**二氧化硅。*在偶联前用DIPEA洗涤二氧化硅。**通过以下方法定量FMOC-Ala的装载量：分解(在DMF中的20％哌啶)已知量的FMOC-Ala封端的二氧化硅，并根据分解产物在290nm处相对于标准曲线的UV吸收来测定浓度。将66偶联到丙基酰氨基-Ala-官能化的二氧化硅(68)上
通过标准方法(在DMF中的20％哌啶，室温，20分钟)分解上述的FMOC-Ala改性的二氧化硅，得到对应的游离氨基(～0.3mmol装载量)官能化的二氧化硅。然后将其用于下述的三糖偶联。装载1，～20mgF每克Ala封端的二氧化硅：
将在水(10mL)中的66(100mg，0.139mmol)和EDC·HCl(2.15g，11.2mmol)的溶液加入NHS(235mg，2.08mmol)。将所得的溶液加入在水(～10mL)中的Ala封端的二氧化硅(5g)的悬浮液中。室温下将此悬浮液振荡3小时，此时根据tlc在滤液中不存在三糖。然后将悬浮液排干，用水(4×50mL)洗涤，用稀碳酸氢钠溶液(3×50mL)洗涤，并再次用水(3×50mL)洗涤。然后将二氧化硅再悬浮在甲醇/乙酸酐(30mL，3∶1)，并振荡1小时(此后阴性茚三酮试验)。然后将悬浮液排干，用甲醇(4×50mL)洗涤二氧化硅，得到三糖封端的二氧化硅。装载2，～5.0mg的66每克Ala封端的二氧化硅：
66(25mg，0.034mmol)、NHS(100mg，0.884mmol)、EDC·HCl(1.2g，6.25mmol)和Ala封端的二氧化硅(5g)。如装载1中所述制备。装载3，～0.5mg的66每克Ala封端的二氧化硅：
66(2.5mg，0.0034mmol)、NHS(30mg，0.265mmol)、EDC·HCl(130mg，0.677mmol)和Ala封端的二氧化硅(5g)。如装载1所述制备。将66偶联到己基氨基官能化的琼脂糖(EAH琼脂糖4B)(69)上装载，～3.5-6.0mg的66每mL的EAH琼脂糖：
用水(3×50mL)洗涤EAH琼脂糖(5mL)，然后将其悬浮在水(5mL)中。将在水(15mL)中的66(94mg，0.131mmol)、EDC·HCl(1.55g，8.10mmol)和NHS(290mg，2.57mmol)的溶液加入该悬浮液中。室温下将反应混合物振荡过夜。滤液的tlc表明此后不存在66。将反应内容物排干并用水(3×50mL)洗涤树脂。然后将改性的琼脂糖以在5％乙醇水溶液(5mL)中的浓悬浮液贮存。
本领域技术人员显然可以理解，虽然为了清楚和理解的目的较详细地描述了本发明，但可以在不背离本说明书所公开的发明构思的范围的情况下，对本文所述的实施方案和方法进行多种改变和修正。
本文引用的参考文献列在以下页中，本文引用其作为参考。
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Claims (47)

1.通式I的葡糖胺化合物：
Figure A0180372100021
其中R1为H或乙酰基，且R2为苄基或4-氯苯甲酰基，附加条件是当R2为苄基时，R1不为乙酰基。
2.通式II的保护的单糖结构单元：其中R3为甲氧基或甲基；
R1为H、苯甲酰基、新戊酰基、4-氯苯甲酰基、乙酰基、氯乙酰基、乙酰丙酰基、4-甲基苯甲酰基、苄基、3，4-亚甲二氧基苄基、4-甲氧基苄基、4-氯苄基、4-乙酰胺基苄基或4-叠氮苄基；且
R2为H、Fmoc、苯甲酰基、新戊酰基、4-氯苯甲酰基、乙酰基、氯乙酰基、乙酰丙酰基、4-甲基苯甲酰基、苄基、3，4-亚甲二氧基苄基、4-甲氧基苄基、4-氯苄基、4-乙酰胺基苄基或4-叠氮苄基。
3.根据权利要求2的保护的单糖结构单元，其中，
R3为H，R1为苯甲酰基、新戊酰基、4-氯苯甲酰基、乙酰基、氯乙酰基、乙酰丙酰基、苄基、3，4-亚甲二氧基苄基、4-甲氧基苄基、4-氯苄基、4-乙酰胺基苄基或4-叠氮苄基，且
R2为Fmoc、苯甲酰基、4-氯苯甲酰基、乙酰基、氯乙酰基、乙酰丙酰基、4-甲基苯甲酰基、苄基、3，4-亚甲二氧基苄基、4-甲氧基苄基、4-氯苄基、4-乙酰胺基苄基或4-叠氮苄基，
附加条件是：(a)当R1为乙酰基时，R2不为氯乙酰基或乙酰基，反之亦然；(b)当R2为乙酰丙酰基时，R1不为苯甲酰基，反之亦然；且(c)当R1为苯甲酰基时，R2不为苯甲酰基，反之亦然。
4.根据权利要求2或3的保护的单糖结构单元，其中R2为Fmoc，且R1为苯甲酰基、新戊酰基、4-氯苯甲酰基、乙酰基、氯乙酰基、乙酰丙酰基、4-甲基苯甲酰基、苄基、3，4-亚甲二氧基苄基、4-甲氧基苄基、4-氯苄基、4-乙酰胺基苄基或4-叠氮苄基。
5.根据权利要求2-4之任一项的保护的单糖结构单元，其中所述化合物为通式III的化合物：
其中R1为新戊酰基、苯甲酰基、4-氯苯甲酰基、4-甲氧基苄基或3，4-亚甲二氧基苄基，且
R2为H、Fmoc、4-氯苯甲酰基、乙酰基、氯乙酰基、乙酰丙酰基、4-甲氧基苄基或3，4-亚甲二氧基苄基，附加条件是如果R1为苯甲酰基，则R2不为乙酰丙酰基。
6.根据权利要求5的保护的单糖结构单元，其中该化合物为吡喃半乳糖苷，R1为4-氯苯甲酰基、新戊酰基或乙酰基，且R2为Fmoc或H。
7.根据权利要求5的保护的单糖结构单元，其中R1为4-氯苯甲酰基，且R2为氯乙酰基。
8.根据权利要求5的保护的单糖结构单元，其中R1和R2均为3，4-亚甲二氧基苄基。
9.通式IV的吡喃半乳糖苷化合物：
Figure A0180372100041
其中各个R1独立地为4-氯苄基、4-叠氮苄基、4-N-乙酰胺基苄基、4-甲基苄基、3，4-亚甲基二甲氧基苄基或2-硝基苄基。
10.根据权利要求9的吡喃半乳糖苷，其中各个R1为4-氯苄基。
11.通式V的聚乙二醇(PEG)连接的单糖：
Figure A0180372100042
其中，n为1-5的整数；
R1为连接基团或适于形成共价键的基团；
R2为乙酰基、4-氯苯甲酰基、乙酰丙酰基、新戊酰基、氯乙酸酯、苯甲酰基、4-甲基苯甲酰基；
R3为H、Fmoc、苯甲酰基、新戊酰基、4-氯苯甲酰基、乙酰基、氯乙酰基、乙酰丙酰基、4-甲基苯甲酰基、3，4-亚甲二氧基苄基、4-甲氧基苄基、4-乙酰胺基苄基或4-叠氮苄基；且
R4为甲氧基、H或甲基。
12.根据权利要求11的聚乙二醇(PEG)连接的单糖，其中R1选自卤素、叠氮基、羧酸、硫醇、羟基、硫代酸酯、黄原酸酯、酰氨基和二硫代氨基甲酸酯。
13.根据权利要求11或12的PEG连接的单糖，其中n为2，R1为硫代苯甲酸酯或硫代联苯羰基，R2为4-氯苯甲酰基，R3为H，且R4为H。
14.通式VI的化合物：其中R7为H、甲氧基或甲基；
R1为芳基、取代的芳基、苄基、取代的苄基、烷基、取代的烷基、PEG或取代的PEG；
R2为乙酰胺基或氨基；
R3和R4独立地为苄基、取代的苄基、甲硅烷基醚或酰基；
R5为4-氯苯甲酰基、苯甲酰基、新戊酰基、乙酰基、乙酰丙酰基或4-甲基苯甲酰基；且
R6为取代或未取代的吡喃糖或呋喃糖、H、Fmoc、乙酰基、氯乙酰基、乙酰丙酰基、3，4-亚甲二氧基苄基、4-甲氧基苄基、4-乙酰胺基苄基或4-叠氮苄基。
15.根据权利要求14的化合物，其中葡糖胺部分的端基异构构型为α；R3为苄基，R4为苯甲酰基，且R7为H，R2任选地为乙酰胺基、氨基或N-苯二酰亚氨基，R5任选地为4-氯苯甲酰基、苯甲酰基、新戊酰基、乙酰基、乙酰丙酰基或4-甲基苯甲酰基，且R6为取代或未取代的吡喃糖或呋喃糖、H、Fmoc、乙酰基、氯乙酰基、乙酰丙酰基、3，4-亚甲二氧基苄基、4-甲氧基苄基、4-乙酰胺基苄基或4-叠氮苄基。
16.根据权利要求14的化合物，其中葡糖胺部分的端基异构构型为β；R1为苄基，且R7为H，R2为乙酰胺基、氨基或N-苯二酰亚氨基；R3和R4独立地为苄基、取代的苄基、甲硅烷基醚或酰基；R5为4-氯苯甲酰基、苯甲酰基、新戊酰基、乙酰基、乙酰丙酰基或4-甲基苯甲酰基，且R6为取代或未取代的吡喃糖或呋喃糖、H、Fmoc、乙酰基、氯乙酰基、乙酰丙酰基、3，4-亚甲二氧基苄基、4-甲氧基苄基、4-乙酰胺基苄基或4-叠氮苄基。
17.根据权利要求14的化合物，其中葡糖胺部分的端基异构构型为α；R1、R3和R4为苄基或取代的苄基，且R7为H，R2为乙酰胺基、氨基或N-苯二酰亚氨基，R5为新戊酰基、4-氯苯甲酰基、苯甲酰基或乙酰丙酰基，且R6为取代或未取代的吡喃糖或呋喃糖、H、Fmoc、乙酰基、氯乙酰基、乙酰丙酰基、3，4-亚甲二氧基苄基、4-甲氧基苄基、4-乙酰胺基苄基或4-叠氮苄基，附加条件是当R3和R4为苄基时，R5不为乙酰基或苯甲酰基。
18.根据权利要求14的化合物，其中葡糖胺部分的端基异构构型为β；R1为苄基，R2为氨基或乙酰胺基，R3和R4为苄基，R5为4-氯苯甲酰基、新戊酰基或乙酰基，R6为Fmoc或H，且R7为H。
19.根据权利要求14的化合物，其中葡糖胺部分的端基异构构型为α；R1为苄基，R2为乙酰胺基，R3为苄基，R4为苯甲酰基或苄基，R5为4-氯苯甲酰基，R6为H或4-氯乙酰基，且R7为H。
20.根据权利要求14的化合物，其中该化合物为通式VII的三糖：其中R为H或乙酰基；R1为氢、苄基、苯甲酰基或对氯苯甲酰基；且R2为氢、4-氯-苯甲酰基、乙酰基、苯甲酰基或新戊酰基。
21.根据权利要求20的化合物，其中该三糖还原端的端基异构构型为α，R为乙酰基，R1为苯甲酰基、4-氯苯甲酰基或H，且R2为4-氯苯甲酰基或H。
22.根据权利要求20的化合物，其中该三糖的还原端的端基异构构型为β，R为乙酰基或H，R1为苄基，且R2为H、4-氯苯甲酰基、新戊酰基或乙酰基。
23.通式VIII的化合物：
Figure A0180372100071
其中R5、R6和R7独立地为H、4-氯苄基、4-甲氧基苄基、4-甲基苄基、4-乙酰胺基苄基、叠氮苄基或3，4-亚甲二氧基苄基；
X为O、S或N；
R1为烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、PEG或取代的PEG；
R2为乙酰丙酰基、4-氯苯甲酰基、苯甲酰基、4-甲基苯甲酰基、乙酰基或新戊酰基；且
R3和R4组合形成亚苄基环，此环任选地在4位被甲基(mthyl)或甲氧基取代，或者R3和R4独立地为H、苄基或取代的苄基。
24.根据权利要求23的化合物，其中R5为4-氯苄基、4-甲氧基苄基、4-甲基苄基、4-乙酰胺基苄基、叠氮苄基或3，4-亚甲二氧基苄基，且R6和R7组合形成亚苄基或取代的亚苄基环；X为O、S或N；R1为烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、PEG、取代的PEG、酰基或取代的酰基；且R2为乙酰丙酰基、4-氯苯甲酰基、苯甲酰基、4-甲基苯甲酰基、乙酰基或新戊酰基。
25.根据权利要求23的化合物，其中X为氧；R1为3，4-亚甲二氧基苄基；R2为H、4-氯苯甲酰基、新戊酰基、乙酰基、乙酰丙酰基、苯甲酰基或氯乙酰基；R3和R4组合成为亚苄基环或独立地为H、苄基或取代的苄基；且R5、R6和R7可以为H、苄基、4-氯苄基、4-甲氧基苄基、4-乙酰胺基苄基、叠氮苄基或3，4-亚甲二氧基苄基。
26.根据权利要求23的化合物，其中X为氧；R1为2-[2-(2-硫代苯甲酰基)-乙氧基)乙基或2-[2-(2-硫代联苯羰基)乙氧基]；R2为H、4-氯苯甲酰基、新戊酰基、乙酰基、乙酰丙酰基、苯甲酰基或氯乙酰基；R3和R4组合形成亚苄基环或独立地为H、苄基、4-氯苄基、4-甲氧基苄基、4-乙酰胺基苄基、叠氮苄基或3，4-亚甲二氧基苄基；R5为H、苄基、4-氯苄基、4-甲氧基苄基、4-乙酰胺基苄基、叠氮苄基或3，4-亚甲二氧基苄基；且R6和R7组合成为亚苄基环或独立地为H、苄基、4-氯苄基、4-甲氧基苄基、4-乙酰胺基苄基、叠氮苄基或3，4-亚甲二氧基苄基。
27.根据权利要求23的化合物，其中X为硫；R1为烷基、取代的烷基、芳基或取代的芳基；R3和R4组合形成亚苄基环；R5、R6和R7为苄基；且R2为乙酰丙酰基、4-氯苯甲酰基、苯甲酰基、乙酰基或新戊酰基，
附加条件是当R1为苯基时，R2不为乙酰丙酰基。
28.根据权利要求23的化合物，其中X为氧；R1为2-[2-(2-硫代苯甲酰基)乙氧基)乙基或2-[2-(2-硫代联苯羰基)乙氧基]；R2为H或4-氯苯甲酰基；R3和R4为H或组合形成亚苄基环；R5为H或3，4-亚甲二氧基苄基；且R6和R7均为H或组合形成亚苄基环。
29.根据权利要求23的化合物，其中X为S，R1为甲基；R2为4-氯苯甲酰基；R3和R4组合形成亚苄基环；且R5、R6和R7各自为4-氯苄基。
30.根据权利要求23的化合物，其中X为氧；R1为3，4-亚甲二氧基苄基；R2为4-氯苯甲酰基或H；R3和R4组合形成亚苄基环或均为H；且R5、R6和R7独立地为4-氯苄基或H。
31.通式IX的化合物：
其中R1为4-氯苯甲酰基、新戊酰基、乙酰基、乙酰丙酰基、苯甲酰基或氯乙酰基；
R2为H、苄基、4-氯苄基、4-甲氧基苄基、4-乙酰胺基苄基、叠氮苄基、3，4-亚甲二氧基苄基、Fmoc、乙酰丙酰基、乙酰基或氯乙酰基；且
R3和R4组合形成亚苄基环或独立地为H、苄基、4-氯苄基、4-甲氧基苄基、4-乙酰胺基苄基、叠氮苄基或3，4-亚甲二氧基苄基。
32.根据权利要求31的化合物，其中R1为4-氯苯甲酰基，R2为H，且R3和R4组合形成亚苄基环。
33.通式X的聚乙二醇(PEG)连接的二糖或通式XI的三糖：其中R为氢或酰基，且n为1-3的整数。
34.根据权利要求33的分子式XI的化合物，所述化合物为2-[2-(2-硫代联苯羰基)乙氧基]-乙基3-O-(α-D-吡喃半乳糖基)-α-吡喃半乳糖苷。
35.通式XII的化合物：其中，X为固体载体，且n为3至6的整数。
36.根据权利要求35的化合物，其中X为琼脂糖。
37.根据权利要求35的化合物，其中X为硅胶。
38.合成二糖或三糖的方法，所述方法包括使用权利要求1-32之任一项的化合物作为中间体的步骤。
39.根据权利要求38的方法，其中该二糖或三糖选自(a)通式X、通式XI或通式XII的化合物；(b)α-D-吡喃半乳糖基-(1→3)-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-N-乙酰基-D-
 葡糖胺
(Galα(1→3)Galβ(1→4)GlcNAc)；(c)α-D-吡喃半乳糖基-(1→3)-β-D-吡喃半乳糖
(Galα(1→3)Gal)；以及(d)β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-N-乙酰基-D-葡糖胺
(Galβ(1→4)GlcNAc)。
40.根据权利要求38或39的方法，其中该化合物为通式X或XI的化合物，且中间体化合物为通式V的化合物。
41.根据权利要求38的方法，其中该化合物为通式VI的化合物，且中间体化合物为通式I的化合物。
42.预防或减少与异种移植术有关的超急性排斥反应的方法，所述方法包括给予需要这种治疗的受试者有效剂量的硫代烷基Galα-(1→3)Gal或硫代烷基Galα(1→3)Galβ(1→4)GlcNAc。
43.预防或减少与异种移植术有关的超急性排斥反应的方法，所述方法包括以下步骤：
a)从将要接受异种移植术的患者取血浆；
b)使血浆与连接到固体载体上的硫代烷基Galα(1→3)Gal或硫代烷基Galα(1→3)Galβ(1→4)GlcNAc接触；
c)将如此处理的血浆再输入至该患者。
44.耗尽来自血浆或血清样品的抗Galα(1→3)Gal抗体的方法，所述方法包括使血浆或血清与连接到固体载体上的硫代烷基Galα(1→3)Gal或硫代烷基Galα(1→3)Galβ(1→4)GlcNAc接触的步骤。
45.治疗艰难梭状芽胞杆菌感染的方法，所述方法包括给予需要这种治疗的受试者有效量的α-D-吡喃半乳糖基-(1→3)-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-N-乙酰基-D-葡糖胺(Galα(1→3)Galβ(1→4)GlcNAc)或硫代烷基Galα(1→3)Galβ(1→4)GlcNAc。
46.根据权利要求45的方法，其中Galα(1→3)Galβ(1→4)GlcNAc或硫代烷基Galα(1→3)Galβ(1→4)GlcNAc连接到固体载体上。
47.根据权利要求45的方法，其中固体载体为多齿配体或树枝状大分子化合物。
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