CN1375013A - 取代的3－苯基丙酸酯和取代的3－苯基丙酸的制备方法 - Google Patents

取代的3－苯基丙酸酯和取代的3－苯基丙酸的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种方法,该方法包括将外消旋的或以对应异构体富集的式(I)或(IV)的酯的两种对应异构体之一通过酶以高于其它对应异构体的速度进行水解或酯交换,以得到酯(II)和酸(III)或具有不同R基团的两种不同的酯(V)和(VI),二者均具有增加了的对应异构体纯度,以及通过酶催化酯化外消旋或以对应异构体富集的酸(VII)以得到对应异构体纯度均增加了的酯和酸的方法。

Description

取代的3-苯基丙酸酯和取代的3-苯基丙酸的制备方法
发明领域
本发明涉及一种制备旋光富集的取代的3-苯基丙酸酯和取代的3-苯基丙酸的新方法。
                           发明背景
Yasuo Kato等人指出，用马红球菌(C或ynebacterium equi)成熟细胞培养α-苄氧基羧酸酯经由不对称水解得到手性酯(Tetrahedron Letters，Vol.28，No.12，1303-1306，1987)。
日本专利申请61-208680描述了利用属于棒状杆菌类的细菌来制备旋光的α-羟基羧酸衍生物的方法。在该专利申请中描述了在培养液中(其中微生物能够生长)于24～65小时的振动培养期间转化外消旋酯的方法(2g/l)。
但是，根据K.Faber的“Biotransf或mations in或ganic Chemsitry”，4thEd.，Springer Verlag 1999，p.10，相对于分离酶，使用生长的细胞培养物具有很多缺点，如更困难的工艺控制，化学工厂的生物处理量大，及形成更多的副产物。
日本专利申请63-107536描述了使用一些脂肪酶来制备旋光的2-羟基羧酸和酯。
Jean-Marc Ricca等人发现，悬浮于有机溶剂中的α-糜蛋白酶对于L-氨基酸衍生物的水解具有立体选择性，但是，使用α-羟基酯作为底物时没有观测到立体选择性(J.Chem.Soc.Perkin Trans.，Vol.1，1225-1233，1993)。
David Haigh等人指出，德列马根霉(Rhizopus delemar)脂肪酶催化水解3-[4-[2-[N-(苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]-苯基]-2-甲氧基丙酸甲酯得到(R)-(+)和(S)-(-)异构体大于84％旋光对应异构体(Bio或ganic和MedicinalChemistry vol.7，821-830，1999)。
但是，为了获得这样旋光纯度的(S)-酸，需要将对应异构体进行双酶催化拆分：从初始的酶催化水解物中分离出(S)-酸，再酯化，并再酶催化水解。
如Collins Sheldrake Crosby(Chirality in Industry，1992 section 1.3.1)所描述的，处理最小量的材料是大规模生产的巨大优点。为了能够这样做，在合成途径中需要尽可能早地进行手性纯化。但是，这与在Haigh文献中所观察到的方法相反但是与本专利申请中描述的方法一致。整个方法的费用如环境费用(产生更少的废物)、运行费用和材料费用一般低于合成早期实施手性分离的方法，这在本发明中可以看到。
最近WO 99/193 13指出，β-芳基-α-氧取代的烷基羧酸具有促进血清脂质减少和抗血糖增多的用途。
这些化合物的合成包括若干步骤，以获得具有药理活性的纯对应异构体形式的化合物。
WO 00/26200描述了旋光富集的β-芳基-α-氧取代的烷基羧酸及与WO99/19313中提及的化合物有关的酯的合成方法。
因此，本发明的目的是提供一种新方法，该方法包括酶催化拆分步骤，以制备旋光富集的取代的3-苯基-丙酸酯和取代的3-苯基-丙酸，该方法适用于大规模生产，提供良好的产率和高的纯度，并降低生产费用，如环境费用(产生更少的废物)。
发明描述
本发明涉及一种方法，该方法包括将外消旋的或以对应异构体富集的式(I)或(IV)的酯的两种对应异构体之一通过酶以高于其它对应异构体的速度进行水解或酯交换，以得到酯(II)和酸(III)或具有不同R基团的两种不同的酯(V)和(VI)，二者均具有增加了的对应异构体纯度，及通过酶催化酯化外消旋或以对应异构体富集的酸(VII)以得到对应异构体纯度均增加了的酯(IX)和酸(VIII)的方法。
该方法可用来合成重要的结构单元，以制备对如WO 99/19313和Haigh等人(Bio或ganic和Medicinal Chemistry vol.7，821-830，1999)所描述的过氧化物酶增生体活化的受体(PPAR)具有活性的化合物。
本发明的方法可以分成下列三种类型的反应方案：
方法1
Figure A0081291000331
通过酶将外消旋或以对应异构体富集的(I)的两种对应异构体之一在溶剂中以高于其它对应异构体的速度水解，得到对应异构体的纯度均增加了的酸(III)和酯(II)的产物混合物，其中R1为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-CF3，-CN，-OH，-SH，-COOH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，-SCF3，-OCF3，-CONH2，-CSNH2，Z，-NRXRY，其中X和Y被独立地定义为氢或C1-6-烷基，或者R1任选地被苯基或苯氧基所取代，其中该苯基或苯氧基任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，-CN，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-SCF3，-OCF3，-CONH2或-CSNH2；和
R4为直链或支链的C1-10-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，直链或支链的C4-10-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-CF3，-CN，-OH，-SH，-COOH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，-SCF3，-OCF3，-CONH2，-CSNH2，Z，-NRXRY，其中X和Y被独立地定义为氢或C1-6-烷基，或者R4任选地被苯基或苯氧基所取代，其中该苯基或苯氧基任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，-CN，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-SCF3，-OCF3，-CONH2或-CSNH2；和
Z为5元或6元的杂环基，该杂环基的碳或氮原子上任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，-CN，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-SCF3，-OCF3，-CONH2，-CSNH2，苯基，苄基或噻吩基，或该杂环基中的碳原子与氧原子一起形成羰基，或者该杂环基任选地与苯基稠合。
依据所使用的酶，可以生成下列的产物混合物：光学富集的R(II)和S(III)或光学富集的S(II)和R(III)。方法2
Figure A0081291000341
通过酶将外消旋或以对应异构体富集的(IV)的两种对应异构体之一在包含适宜醇R2-OH的溶剂或只在没有溶剂的适宜醇中以高于其它对应异构体的速度进行酯交换，得到两种对应异构体的纯度均增加了的不同酯(V)和(VI)的产物混合物，其中R1为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-CF3，-CN，-OH，-SH，-COOH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，-SCF3，-OCF3，-CONH2，-CSNH2，Z，-NRXRY，其中RX和RY独立地定义为氢或C1-6-烷基，或者R1任选地被苯基或苯氧基所取代，其中该苯基或苯氧基任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，-CN，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-SCF3，-OCF3，-CONH2或-CSNH2而其中R2如R1那样定义，条件是R2与原料中的R1不同；和
R4为直链或支链的C1-10-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，直链或支链的C4-10-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-CF3，-CN，-OH，-SH，-COOH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，-SCF3，-OCF3，-CONH2，-CSNH2，Z，-NRXRY，其中X和Y被独立地定义为氢或C1-6-烷基，或者R4任选地被苯基或苯氧基所取代，其中该苯基或苯氧基任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，-CN，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-SCF3，-OCF3，-CONH2或-CSNH2；和
Z为5元或6元的杂环基，该杂环基的碳或氮原子上任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，-CN，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-SCF3，-OCF3，-CONH2，-CSNH2，苯基，苄基或噻吩基，或该杂环基中的碳原子与氧原子一起形成羰基，或者该杂环基任选地与苯基稠合。
依据所使用的酶，可以生成下列的产物混合物：富集的R(V)和S(VI)或富集的S(V)和R(VI)。
这两种酯如此之不同，以至于它们优选可以通过例如萃取而容易分离，例如R1使原料(IV)溶解于水而R2使产物(VI)溶解于不与水混溶的有机溶剂。
方法3
Figure A0081291000351
通过酶将外消旋的或以对应异构体富集的(VII)的两种对应异构体之一在包含适宜醇R3-OH的溶剂或只在没有溶剂的适宜醇中以高于其它对应异构体的速度进行酯化，得到对应异构体的纯度均增加了的酸(VIII)和酯(IX)的产物混合物，其中R3为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-CF3，-CN，-OH，-SH，-COOH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，-SCF3，-OCF3，-CONH2，-CSNH2，Z，-NRXRY，其中X和Y被独立地定义为氢或C1-6-烷基，或者R3任选地被苯基或苯氧基所取代，其中该苯基或苯氧基任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，-CN，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-SCF3，-OCF3，-CONH2或-CSNH2；和
R4为直链或支链的C1-10-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，直链或支链的C4-10-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-CF3，-CN，-OH，-SH，-COOH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，-SCF3，-OCF3，-CONH2，-CSNH2，Z，-NRXRY，其中X和Y被独立地定义为氢或C1-6-烷基，或者R4任选地被苯基或苯氧基所取代，其中该苯基或苯氧基任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，-CN，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-SCF3，-OCF3，-CONH2或-CSNH2；和
Z为5元或6元的杂环基，该杂环基的碳或氮原子上任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，-CN，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-SCF3，-OCF3，-CONH2，-CSNH2，苯基，苄基或噻吩基，或该杂环基中的碳原子与氧原子一起形成羰基，或者该杂环基任选地与苯基稠合。
依据所使用的酶，可以生成下列的产物混合物：富集的R(VIII)和S(IX)或富集的S(VIII)和R(IX)。
这两种酯优选可以通过例如萃取而容易分离。
方法1，方法2，及方法3可以结合，以便提高对应异构体的纯度。以对应异构体富集的III可以用作方法3中的原料VII；以对应异构体富集的II或IX可以用作方法2中的原料IV；以对应异构体富集的V，VI和IX可以用作方法1中的原料I。
本文中单独或组合使用的术语″C1-n＇-烷基″，其中n＇可以为2～30，包括那些具有指定长度的烷基，其结构或者是直链的或者是支链的或者是环状的，有例如环丙基，环丁基，环戊基，环己基，环庚基和环辛基等。典型的C1-30-烷基包括但不限于，甲基，乙基，正丙基，异丙基，丁基，异丁基，仲丁基，叔丁基，戊基，异戊基，己基，异己基，环丙基，环丁基，环戊基，环己基，环庚基和环辛基。
本文中所使用的术语″C2-n＇-链烯基″，其中n＇可以为3～30，代表烯属不饱和的支链或直链基团，具有2至指定数目的碳原子和至少一个双键。这类基团的实例包括但不限于乙烯基，1-丙烯基，2-丙烯基，烯丙基，异丙烯基，1，3-丁二烯基，1-丁烯基，己烯基，戊烯基等。
本文中所使用的术语″C2-n＇-炔基″，其中n＇可以为3～30，代表不饱和的支链或直链基团，具有2至指定数目的碳原子和至少一个三键。这类基团的实例包括但不限于1-丙炔基，2-丙炔基，1-丁炔基，2-丁炔基，1-戊炔基，2-戊炔基等。
本文中所使用的术语″C4-n＇-烯炔基″，其中n＇可以为5～30，代表不饱和的支链或直链的烃基，具有4至指定数目的碳原子以及至少一个双键和至少一个三键。这类基团的实例包括但不限于1-戊烯-4-炔，3-戊烯-1-炔，1，3-己二烯-5-炔等。
本文中单独或组合使用的术语″C1-6-烷氧基″包括那些具有指定长度的C1-6烷基，其结构或者是直链的或者是支链的或者是环状的，连接有醚氧原子，且自由价键来自醚氧原子。直链烷氧基的实例是甲氧基，乙氧基，丙氧基，丁氧基，戊氧基，己氧基等。支链烷氧基的实例是异丙氧基，仲丁氧基，叔丁氧基，异戊氧基，异己氧基等。环状烷氧基的实例是环丙氧基，环丁氧基，环戊氧基，环己氧基等。
本文中单独或组合使用的术语″C1-6-烷硫基″是指直链的或支链的或环状的一价取代基，该取代基包括连接了二价硫原子的C1-6-烷基，其自由价键来自硫原子并且具有1～6个碳原子，例如甲基硫基，乙基硫基，丙基硫基，丁基硫基，戊基硫基等。环状烷硫基的实例是环丙基硫基，环丁基硫基，环戊基硫基，环己基硫基等。
本文中所使用的术语“5或6元杂环基”是指包含1～4个N，O或S原子或其组合的基团，该杂环基的碳或氮原子上任选地被下列基团所取代：卤素，-OH，-CF3，-CN，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-SCF3，-OCF3，-CONH2，-CSNH2，苯基，苄基或噻吩基，或该杂环基中的碳原子与氧原子一起形成羰基，或者该杂环基任选地与苯基稠合。该术语″5或6元杂环基″包括但不限于具有一个杂原子的5元杂环(例如噻吩，吡咯，呋喃)；1，2或1，3位具有两个杂原子的5元杂环(例如噁唑，吡唑，咪唑，噻唑，嘌呤)；具有三个杂原子的5元杂环(例如三唑，噻二唑)；具有四个杂原子的5元杂环；具有一个杂原子的6元杂环(例如吡啶，喹啉，异喹啉，菲啶，芳庚并[b]吡啶)；具有两个杂原子的6元杂环(例如哒嗪，噌啉，2，3二氮杂萘，吡嗪，嘧啶，喹唑啉)；具有三个杂原子的6元杂环(例如1，3，5-三嗪)和具有三个杂原子的6元杂环。
在本文中，术语″蛋白酶″是指任何水解酶，肽酶，蛋白酶或EC 3.4-3.11中所包括的具有水解蛋白活性的酶，及它们的修饰体，该修饰体保留了酶的活性。具有蛋白酶活性的酶可以通过利用微生物的手段或通过重组手段而得到。
根据本发明的适宜的蛋白酶包括那些来源于动物，植物或微生物，优选微生物的蛋白酶。包括化学修饰的或蛋白质工程的突变体。该蛋白酶可以是丝氨酸蛋白酶或金属蛋白酶，例如碱性的微生物蛋白酶或类胰蛋白酶的蛋白酶。碱性蛋白酶的实例是枯草杆菌蛋白酶，特别是那些来源于芽孢杆菌的蛋白酶，例如枯草杆菌蛋白酶Novo，枯草杆菌蛋白酶Carlsberg，枯草杆菌蛋白酶309，枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168(见WO 89/06279)。类胰蛋白酶的蛋白酶的实例是胰蛋白酶(如来源于猪和牛的胰蛋白酶)及镰孢属(Fusarium)蛋白酶，见WO 89/06270和WO 94/25583。
可使用的蛋白酶的其它实例是WO 92/19729，WO 98/20115，WO98/20116及WO 98/34946中所描述的变体，特别是一个或多个下列位置被取代了的变体：27，36，57，76，87，97，101，104，120，123，167，170，194，206，218，222，224，235和274。
市场上可得到的可使用的具体的蛋白酶包括Alcalase，Savinase，Primase，Duralase，Esperase和Kannase(Novo N或disk A/S)，Maxatase，Maxacal，Maxapem，Properase，Purafect，Purafect OxP，FN2TM和FN3TM(Genenc或International Inc.)。
在本文中，术语″脂肪酶″是指任何水解酶或EC 3.1.1-3.1.7中所包括的具有脂肪分解活性的酶，及它们的修饰体，该修饰体保留了酶的活性。具有脂肪酶活性的酶可以通过利用微生物的手段或通过重组手段而得到。
根据本发明的亲代脂肪分解酶可以是原核生物特别是细菌的酶，例如来源于假单胞菌属(Pseudomonas)的酶。其实例是假单胞菌脂肪酶，例如来源于洋葱伯克霍尔德氏菌(P.cepacia)(US 5,290,694，pdb file 1OIL)，荚壳伯克霍尔德氏菌(P.glumae)(N Frenken et al.(1992)，Appl.Envir.Microbiol.583787-3791，pdb files 1TAH和1QGE)，类产碱假单胞菌(P.pseudoalcaligenes)(EP 334 462)及假单胞菌菌株SD 705(FERM BP-4772)(WO 95/06720，EP 721 981，WO 96/27002，EP 812 910)的假单胞菌脂肪酶。洋葱伯克霍尔德氏菌脂肪酶序列与粘稠色杆菌(Chromobacteriumviscosum)(DE 3908131 A1)的氨基酸序列相同。其它的实例是细菌角质酶(cutinase)，例如来源于门多萨假单胞菌(P.mendocina)(US 5,389,536)或恶臭假单胞菌(P.putida)(WO 88/09367)等假单胞菌的角质酶。
作为选择，该亲代脂解酶可以是原核的，例如真菌脂肪分解酶，如腐质菌属(Humicola)和Zygomycetes菌属家族的脂肪分解酶以及真菌的角质酶。
腐质菌属家族的脂肪分解酶包括来源于H.lanuginosa菌株DSM 4109的脂肪酶及与所述脂肪酶的同源性超过50％的脂肪酶。来源于H.lanuginosa(Thermomyces lanuginosus的同义词)的脂肪酶见EP 258 068和EP 305 216，其氨基酸序列示于US 5,869,438的SEQ ID NO：2的1～269位。
腐质菌属家族还包括下列脂肪分解酶：来源于沙门氏柏干酪青霉(Penicillium camembertii)(P25234)的脂肪酶，来源于尖孢镰孢(Fusarium oxysp或um)(EP130064，WO98/26057)的脂肪酶/磷脂酶，来源于异孢镰孢(F.heterosp)或um(R87979)的脂肪酶，来源于臭曲霉(Aspergillus foetidus)(W33009)的溶血磷脂酶，来源于米曲霉(A.或yzae)(JP-A 10-155493)的磷脂酶A1，来源于米曲霉(D85895)的脂肪酶，来源于黑曲霉(A.niger)(Y09330)的脂肪酶/阿魏酸酯酶，来源于塔宾曲霉(A.tubingensis)(Y09331)的脂肪酶/阿魏酸酯酶，来源于塔宾曲霉(WO98/45453)的脂肪酶，来源于黑曲霉(WO98/31790)的溶血磷脂酶，来源于茄病镰孢(F.solanii)具有6.9等电点和30kDa表观分子量的脂肪酶(WO 96/18729)。
接合菌亚钢(Zygomycetes)家族包括具有至少50％与米赫根毛霉(Rhizomycetes miehei)(P19515)同源的脂肪酶。该家族还包括来源于反射梨头酶(Absidia reflexa)，A.sp或oph或a，伞枝梨头酶(A.c或ymbifera)，A.blakesleeana，A.griseola(均描述在WO 96/13578和WO 97/27276中)及米根霉(Rhizopus或yzae)(P21811)的脂肪酶。括号中的数字是指公开号或者EMBL，GenBank，GeneSeqp或Swiss-Prot数据库的登记号。
在本文中，术语“酯酶”是指能够水解和形成酯键的任何酶。
在本文中，术语“角质酶”是指能够水解底物角质的任何酶。
本发明的真菌角质酶的实例是茄病镰孢(Fusarium solani pisi)(S.Longhiet al.，Journal of Molecular Biology，268(4)，779-799(1997))和Humicolainsolens(US 5,827,719)的角质酶。
本文所使用的术语“溶剂”是指其中可以进行所述反应的溶剂。
在优选的实施方案中，本文中所使用的术语“溶剂”是指有机溶剂，有机溶剂的混合物，有机溶剂或有机溶剂的混合物与含盐或不含盐缓冲或非缓冲的水，含盐的缓冲或非缓冲的水，包含有机相和水相的两相体系，乳浊液和悬浮液。
在另一优选实施方案中，本文所使用的术语“溶剂”是指有机溶剂，有机溶剂的混合物，有机溶剂或有机溶剂的混合物与含盐或不含盐缓冲或非缓冲的水，含盐的缓冲或非缓冲的水，包含有机相和水相的两相体系，乳浊液和悬浮液，其中“有机溶剂”是指例如烃如己烷，环己烷，庚烷，甲苯，二甲苯，酮如叔丁基甲基酮，甲基异丙基酮，2-丁酮，丙酮，4-甲基-2-戊酮，醚如乙醚，叔丁基甲基醚，异丙基甲基醚，二噁烷，二丁基醚，二氧戊环，茴香醚，及四氢呋喃，腈如乙腈和3-羟基丙腈，极性溶剂如二甲亚砜，N，N-二甲基甲酰胺，N-甲基吡咯烷酮，环丁砜，二甲基丙基脲(DMPU)，乙二醛，酸如乙酸和甲酸，醛如乙醛，卤化烃如二氯甲烷，三氯乙烷，氯仿，氯苯，二氯苯，及二氯乙烷，酯如乙酸乙酯，乙酸异丙酯，或乙酸叔丁酯，直链或支链的醇如2-甲基-2-丁醇，叔丁醇，甲醇，乙醇，正丙醇，正丁醇，及异丙醇。
在另一优选实施方案中，本文所使用的术语“溶剂”是指缓冲(例如磷酸盐，乙酸盐)的，非缓冲的水，或者缓冲或非缓冲的包含下列与水混溶的有机溶剂的水：丙酮，四氢呋喃，2-丙醇，乙醇，叔丁醇，二甲基甲酰胺，二甲亚砜，或2-甲基-2-戊酮或者醚，如叔丁基甲基醚，其被水饱和或未饱和。
在本发明的另一优选实施方案中，术语“溶剂”是指有机溶剂，有机溶剂的混合物，有机溶剂或有机溶剂的混合物与含盐或不含盐缓冲或非缓冲的水，含盐的缓冲或非缓冲的水，包含有机相和水相的两相体系，乳浊液和悬浮液，其中“有机溶剂”是指例如烃如己烷和庚烷，酮如叔丁基甲基酮，2-丁酮和丙酮，2-甲基-2-戊酮，醚如乙醚，叔丁基甲基醚，异丙基甲基醚及四氢呋喃，腈如乙腈和3-羟基丙腈，二甲亚砜，N，N-二甲基甲酰胺，N-甲基吡咯烷酮，环丁砜，二甲基丙基脲(DMPU)，乙二醛，酸如乙酸和甲酸，醛如乙醛，卤化烃如二氯甲烷和二氯乙烷，酯如乙酸叔丁酯，直链或支链的醇如2-甲基-2-丁醇，叔丁醇，甲醇，乙醇，丙醇或异丙醇。
在本发明的另一优选实施方案中，本文所使用的术语“溶剂”是指缓冲(例如磷酸盐，乙酸盐)的，非缓冲的水，或者缓冲或非缓冲的包含如乙腈或2-甲基-2-戊酮的有机溶剂的水。
在本发明的优选实施方案中，根据方法1的酶催化水解是在下列条件下进行的：pH 3-9，5-80℃，于缓冲或非缓冲的水中，该水中任选地添加可与水混溶的有机共溶剂。
在本发明的优选实施方案中，根据方法1的酶催化水解是在下列条件下进行的：pH 3-9，10-50℃，于缓冲或非缓冲的水中，该水中任选地添加可与水混溶的有机共溶剂。
在本发明的优选实施方案中，根据方法1的酶催化水解是在下列条件下进行的：pH 3-9，10-50℃，于缓冲或非缓冲的任选加入与水混溶的有机共溶剂的水中，所述有机共溶剂如丙酮，四氢呋喃，2-丙醇，乙醇，叔丁醇，二甲基甲酰胺。
在本发明的优选实施方案中，根据方法1的酶催化水解是在下列条件下进行的：pH 3-9，10-50℃，于缓冲或非缓冲的任选加入与水混溶的有机共溶剂的水中，所述有机共溶剂选自丙酮，四氢呋喃，2-丙醇，乙醇，叔丁醇，二甲基甲酰胺。
在本发明的另一优选实施方案中，根据方法1的酶催化水解是在下列条件下进行的：pH 4-8，10-50℃，于缓冲或非缓冲的水中，该水中任选地添加可与水混溶的有机共溶剂。
在本发明的另一优选实施方案中，根据方法1的酶催化水解是在下列条件下进行的：pH 4-8，10-50℃，于缓冲或非缓冲的任选加入与水混溶的有机共溶剂的水中，所述有机共溶剂如丙酮，四氢呋喃，2-丙醇，乙醇，叔丁醇，二甲基甲酰胺，二甲亚砜。
在本发明的另一优选实施方案中，根据方法1的酶催化水解是在下列条件下进行的：pH 4-8，10-50℃，于缓冲或非缓冲的任选加入与水混溶的有机共溶剂的水中，所述有机共溶剂选自丙酮，四氢呋喃，2-丙醇，乙醇，叔丁醇，二甲基甲酰胺，二甲亚砜。
在本发明的另一优选实施方案中，根据方法1的酶催化水解是在下列条件下进行的：pH 5-8，20-40℃，于缓冲或非缓冲的水中，该水中任选地添加可与水混溶的有机共溶剂。
在本发明的另一优选实施方案中，根据方法1的酶催化水解是在下列条件下进行的：pH 5-8，20-40℃，于缓冲或非缓冲的任选加入与水混溶的有机共溶剂的水中，所述有机共溶剂如丙酮，四氢呋喃，2-丙醇，乙醇，叔丁醇，二甲基甲酰胺，二甲亚砜。
在本发明的另一优选实施方案中，根据方法1的酶催化水解是在下列条件下进行的：pH 5-8，20-40℃，于缓冲或非缓冲的任选加入与水混溶的有机共溶剂的水中，所述有机共溶剂选自丙酮，四氢呋喃，2-丙醇，乙醇，叔丁醇，二甲基甲酰胺，二甲亚砜。
在本发明的另一优选实施方案中，根据方法1的酶催化水解是在下列条件下进行的：pH 5-8，20-30℃，于缓冲或非缓冲的水中，该水中任选地添加可与水混溶的有机共溶剂。
在本发明的另一优选实施方案中，根据方法1的酶催化水解是在下列条件下进行的：pH 5-8，20-30℃，于缓冲或非缓冲的任选加入与水混溶的有机共溶剂的水中，所述有机共溶剂如丙酮，四氢呋喃，2-丙醇，乙醇，叔丁醇，二甲基甲酰胺，二甲亚砜。
在本发明的另一优选实施方案中，根据方法1的酶催化水解是在下列条件下进行的：pH 5-8，20-30℃，于缓冲或非缓冲的任选加入与水混溶的有机共溶剂的水中，所述有机共溶剂选自丙酮，四氢呋喃，2-丙醇，乙醇，叔丁醇，二甲基甲酰胺，二甲亚砜。
在本发明的另一优选实施方案中，根据方法1的酶催化水解是在下列条件下进行的：pH 5-7，20-30℃，于缓冲或非缓冲的水中，该水中任选地添加可与水混溶的有机共溶剂。
在本发明的另一优选实施方案中，根据方法1的酶催化水解是在下列条件下进行的：pH 5-7，20-30℃，于缓冲或非缓冲的任选加入与水混溶的有机共溶剂的水中，所述有机共溶剂如丙酮，四氢呋喃，2-丙醇，乙醇，叔丁醇，二甲基甲酰胺，二甲亚砜。
在本发明的另一优选实施方案中，根据方法1的酶催化水解是在下列条件下进行的：pH 5-7，20-30℃，于缓冲或非缓冲的任选加入与水混溶的有机共溶剂的水中，所述有机共溶剂选自丙酮，四氢呋喃，2-丙醇，乙醇，叔丁醇，二甲基甲酰胺，二甲亚砜。
在本发明的另一优选实施方案中，根据方法3的酶催化酯化是在下列条件下进行的：15-90℃，于醚或烃或酮或卤化烃中。
在本发明的另一优选实施方案中，根据方法3的酶催化酯化是在下列条件下进行的：15-90℃，于醚或烃中。
在本发明的另一优选实施方案中，根据方法3的酶催化酯化是在下列条件下进行的：15-90℃，于醇中。
在本发明的另一优选实施方案中，根据方法3的酶催化酯化是在下列条件下进行的：15-90℃，于醇中，该醇用作酯化反应的亲核体。
在本发明的另一优选实施方案中，根据方法3的酶催化酯化是在下列条件下进行的：15-90℃，于甲醇，或2-丙醇，或乙醇，或1-丙醇中。
在本发明的另一优选实施方案中，根据方法3的酶催化酯化是在下列条件下进行的：30-85℃，于醚或烃中。
在本发明的另一优选实施方案中，根据方法3的酶催化酯化是在下列条件下进行的：30-85℃，于如叔丁基甲基醚的醚中。
在本发明的另一优选实施方案中，根据方法3的酶催化酯化是在下列条件下进行的：50-60℃，于叔丁基甲基醚中。
在另一优选实施方案中，R1为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-CF3，-OH，-SH，-COOH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，-CONH2，Z，-NRXRY，其中X和Y被独立地定义为氢或C1-6-烷基，或者R1任选地被苯基或苯氧基所取代，其中该苯基或苯氧基任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-CONH2；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，直链或支链的C4-10-烯炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，-COOH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，Z，苯基或苯氧基，其中该苯基或苯氧基任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-CONH2；和
Z为5元或6元的杂环基，该杂环基的碳或氮原子上任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-CONH2，-CSNH2，苯基，苄基或噻吩基，或该杂环基中的碳原子与氧原子一起形成羰基，或者该杂环基任选地与苯基稠合。
在另一优选实施方案中，R2为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-CF3，-OH，-SH，-COOH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，-CONH2，Z，-NRXRY，其中X和Y被独立地定义为氢或C1-6-烷基，或者R2任选地被苯基或苯氧基所取代，其中该苯基或苯氧基任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-CONH2；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，直链或支链的C4-10-烯炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，-COOH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，Z，苯基或苯氧基，其中该苯基或苯氧基任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-CONH2；和
Z为5元或6元的杂环基，该杂环基的碳或氮原子上任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-CONH2，-CSNH2，苯基，苄基或噻吩基，或该杂环基中的碳原子与氧原子一起形成羰基，或者该杂环基任选地与苯基稠合。
在另一优选实施方案中，R3为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-CF3，-OH，-SH，-COOH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，-CONH2，Z，-NRXRY，其中X和Y被独立地定义为氢或C1-6-烷基，或者R3任选地被苯基或苯氧基所取代，其中该苯基或苯氧基任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-CONH2；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，直链或支链的C4-10-烯炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，-COOH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，Z，苯基或苯氧基，其中该苯基或苯氧基任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-CONH2；和
Z为5元或6元的杂环基，该杂环基的碳或氮原子上任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-CONH2，-CSNH2，苯基，苄基或噻吩基，或该杂环基中的碳原子与氧原子一起形成羰基，或者该杂环基任选地与苯基稠合。
在另一优选实施方案中，R1为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，Z，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，或者R1任选地被苯基或苯氧基所取代；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，直链或支链的C4-10-烯炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，Z，苯基或苯氧基；和
Z为5元或6元的杂环基，或者该杂环基任选地与苯基稠合。
在另一优选实施方案中，R2为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，Z，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，或者R2任选地被苯基或苯氧基所取代；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，直链或支链的C4-10-烯炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，Z，苯基或苯氧基；和
Z为5元或6元的杂环基，或者该杂环基任选地与苯基稠合。
在另一优选实施方案中，R3为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，Z，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，或者R3任选地被苯基或苯氧基所取代；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，直链或支链的C4-10-烯炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，Z，苯基或苯氧基；和
Z为5元或6元的杂环基，或者该杂环基任选地与苯基稠合。
在另一优选实施方案中，R1为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：-OH，-SH，Z，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，Z，苯基或苯氧基；和
Z为5元或6元的杂环基。
在另一优选实施方案中，R2为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：-OH，-SH，Z，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基Z，苯基或苯氧基；和
Z为5元或6元的杂环基。
在另一优选实施方案中，R3为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：-OH，-SH，Z，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，Z，苯基或苯氧基；和
Z为5元或6元的杂环基。
在另一优选实施方案中，R1为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：-OH，-SH，Z，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，Z，苯基或苯氧基；和
Z为噻吩，吡咯，呋喃，噁唑，吡唑，咪唑，噻唑，嘌呤，三唑，噻二唑，吡啶，喹啉，异喹啉，菲啶，芳庚并[b]吡啶，哒嗪，噌啉，2，3-二氮杂萘，吡嗪，嘧啶，喹唑啉或1，3，5-三嗪。
在另一优选实施方案中，R2为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：-OH，-SH，Z，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基Z，苯基或苯氧基；和
Z为噻吩，吡咯，呋喃，噁唑，吡唑，咪唑，噻唑，嘌呤，三唑，噻二唑，吡啶，喹啉，异喹啉，菲啶，芳庚并[b]吡啶，哒嗪，噌啉，2，3-二氮杂萘，吡嗪，嘧啶，喹唑啉或1，3，5-三嗪。
在另一优选实施方案中，R3为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：-OH，-SH，Z，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，Z，苯基或苯氧基；和
Z为噻吩，吡咯，呋喃，噁唑，吡唑，咪唑，噻唑，嘌呤，三唑，噻二唑，吡啶，喹啉，异喹啉，菲啶，芳庚并[b]吡啶，哒嗪，噌啉，2，3-二氮杂萘，吡嗪，嘧啶，喹唑啉或1，3，5-三嗪。
在另一优选实施方案中，R1为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：-OH，-SH，Z，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，Z，苯基或苯氧基；和
Z为噻吩，吡咯，呋喃，咪唑，三唑，吡啶，喹啉或异喹啉。
在另一优选实施方案中，R2为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：-OH，-SH，Z，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基Z，苯基或苯氧基；和
Z为噻吩，吡咯，呋喃，咪唑，三唑，吡啶，喹啉或异喹啉。
在另一优选实施方案中，R3为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：-OH，-SH，Z，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，Z，苯基或苯氧基；和
Z为噻吩，吡咯，呋喃，咪唑，三唑，吡啶，喹啉或异喹啉。
在另一优选实施方案中，R1为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链的C2-12-链烯基，直链或支链的C2-12-炔基，直链或支链的C4-10-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基或苯基。
在另一优选实施方案中，R2为直链或支链的C4-20-烷基，直链或支链的C6-30-链烯基，直链或支链的C6-30-炔基，直链或支链的C8-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基或苯基。
在另一优选实施方案中，R3为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链的C2-12-链烯基，直链或支链的C2-12-炔基，直链或支链的C4-10-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基或苯基。
在另一更优选的实施方案中，R1为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链的C2-12-链烯基，直链或支链的C2-12-炔基，直链或支链的C4-10-烯炔基；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基或苯基。
在另一优选实施方案中，R2为直链或支链的C4-20-烷基，直链或支链的C6-30-链烯基，直链或支链的C6-30-炔基，直链或支链的C8-30-烯炔基；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基或苯基。
在另一优选实施方案中，R3为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链的C2-12-链烯基，直链或支链的C2-12-炔基，直链或支链的C4-10-烯炔基；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基或苯基。
在另一优选实施方案中，R1为直链或支链的C1-12-烷基，其任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
R4为直链或支链的C1-10-烷基或者R4任选地被下列基团所取代：C1-6-烷氧基或苯基。
在另一优选实施方案中，R2为直链或支链的C4-20-烷基，其任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
R4为直链或支链的C1-10-烷基或者R4任选地被下列基团所取代：C1-6-烷氧基或苯基。
在另一优选实施方案中，R3为直链或支链的C1-12-烷基，其任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
R4为直链或支链的C1-10-烷基或者R4任选地被下列基团所取代：C1-6-烷氧基或苯基。
在另一优选实施方案中，R1为直链或支链的C1-12-烷基，其任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：C1-6-烷氧基；和
R4为直链或支链的C1-8-烷基或者R4任选地被苯基取代。
在另一优选实施方案中，R2为直链或支链的C4-20-烷基，其任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：C1-6-烷氧基；和
R4为直链或支链的C1-8-烷基或者R4任选地被苯基取代。
在另一优选实施方案中，R3为直链或支链的C1-12-烷基，其任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：C1-6-烷氧基；和
R4为直链或支链的C1-8-烷基或者R4任选地被苯基取代。
在另一优选实施方案中，R1为直链或支链的C1-10-烷基，其任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：C1-6-烷氧基；和
R4为直链或支链的C1-8-烷基或者R4任选地被苯基取代。
在另一优选实施方案中，R2为直链或支链的C8-20-烷基，其任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：C1-6烷氧基；和
R4为直链或支链的C1-8-烷基或者R4任选地被苯基取代。
在另一优选实施方案中，R3为直链或支链的C1-10-烷基，其任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：C1-6-烷氧基；和
R4为直链或支链的C1-8-烷基或者R4任选地被苯基取代。
在另一优选实施方案中，R1为甲基，乙基，1-丙基，2-丙基，1-己基，或者乙氧基乙基；和
R4为乙基，2-丙基，1-丁基，1-己基或4-苯基-1-丁基。
在另一优选实施方案中，R2为正丁基，正己基，正癸基或者3-甲基-1-丁基；和
R4为乙基，2-丙基，1-丁基，1-己基或4-苯基-1-丁基。
在另一优选实施方案中，R3为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链的C2-12-链烯基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-CN，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
R4为乙基，2-丙基，1-丁基，1-己基，4-苯基-1-丁基。
在另一优选实施方案中，R3为甲基，乙基，1-丙基，2-丙基，1-丁基，1-戊基，1-己基，1-庚基，1-辛基，1-癸基，1-十二烷基，3-甲基-1-丁基，4-甲基-1-戊基，乙氧基乙基，4，4，4-三氟丁基，2-(甲硫基)乙基，5-己烯-1-基，3-氰基丙基，3，3-二甲基-1-丁基，3-氯-1-丙基，香茅基，3-环己基-1-丙基，3-苯基丙基，3-(4-羟基苯基)丙基；和
R4为乙基，2-丙基，1-丁基，1-己基，4-苯基-1-丁基。
在另一优选实施方案中，R3为甲基，乙基，1-丙基，2-丙基，1-丁基，1-戊基，1-己基，1-庚基，1-辛基，1-癸基，1-十二烷基，3-甲基-1-丁基，4-甲基-1-戊基，乙氧基乙基，3，3-二甲基-1-丁基，3-环己基-1-丙基，3-苯基丙基；和
R4为乙基，2-丙基，1-丁基，1-己基，4-苯基-1-丁基。
在另一优选实施方案中，R2为甲基，乙基，1-丙基，2-丙基，1-丁基，或者乙氧基乙基，且R1和R3独立地为直链或支链的C6-30-烷基；和
R4为乙基，异丙基和正丁基，正己基或4-苯基-1-丁基。
另一优选实施方案中，R1和R3独立地为甲基，乙基，正丙基，2-丙基，丁基，或者乙氧基乙基，且R2为直链或支链的C6-30-烷基；和
R4为乙基，异丙基，正丁基，正己基或4-苯基-1-丁基。
在另一优选实施方案中，R1为甲基，乙基，1-丙基，2-丙基，1-己基，或者乙氧基乙基，且R2为正丁基，正己基，正癸基或者3-甲基-1-丁基；和
R4为乙基，异丙基，正丁基，正己基或4-苯基-1-丁基。
在另一优选实施方案中，R2为甲基，乙基，1-丙基，2-丙基，1-己基，或者乙氧基乙基，且R1为正丁基，正己基，正癸基或者3-甲基-1-丁基；和
R4为乙基，异丙基和正丁基，正己基或4-苯基-1-丁基。
在另一优选实施方案中，R1为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-CF3，-OH，-SH，-COOH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，-CONH2，Z，-NRXRY，其中X和Y被独立地定义为氢或C1-6-烷基，或者R1任选地被苯基或苯氧基所取代，其中该苯基或苯氧基任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-CONH2；和
Z为5元或6元的杂环基，该杂环基的碳或氮原子上任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-CONH2，-CSNH2，苯基，苄基或噻吩基，或该杂环基中的碳原子与氧原子一起形成羰基，或者该杂环基任选地与苯基稠合。
在另一优选实施方案中，R2为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-CF3，-OH，-SH，-COOH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，-CONH2，Z，-NRXRY，其中X和Y被独立地定义为氢或C1-6-烷基，或者R2 is任选地被苯基或苯氧基所取代，其中该苯基或苯氧基任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-CONH2；和
Z为5元或6元的杂环基，该杂环基的碳或氮原子上任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-CONH2，-CSNH2，苯基，苄基或噻吩基，或该杂环基中的碳原子与氧原子一起形成羰基，或者该杂环基任选地与苯基稠合。
在另一优选实施方案中，R3为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-CF3，-OH，-SH，-COOH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，-CONH2，Z，-NRXRY，其中X和Y被独立地定义为氢或C1-6-烷基，或者R3 is任选地被苯基或苯氧基所取代，其中该苯基或苯氧基任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-CONH2；和
Z为5元或6元的杂环基，该杂环基的碳或氮原子上任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-CONH2，-CSNH2，苯基，苄基或噻吩基，或该杂环基中的碳原子与氧原子一起形成羰基，或者该杂环基任选地与苯基稠合。
在另一优选实施方案中，R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，直链或支链的C4-10-烯炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，-COOH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，Z，苯基或苯氧基，其中该苯基或苯氧基任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-CONH2；和
Z为5元或6元的杂环基，该杂环基的碳或氮原子上任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-CONH2，-CSNH2，苯基，苄基或噻吩基，或该杂环基中的碳原子与氧原子一起形成羰基，或者该杂环基任选地与苯基稠合。
在另一优选实施方案中，R1为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，Z，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，或者R1任选地被苯基或苯氧基所取代；和
Z为5元或6元的杂环基，或者该杂环基任选地与苯基稠合。
在另一优选实施方案中，R2为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，Z，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，或者R2任选地被苯基或苯氧基所取代；和
Z为5元或6元的杂环基，或者该杂环基任选地与苯基稠合。
在另一优选实施方案中，R3为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，Z，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，或者R3任选地被苯基或苯氧基所取代；和
Z为5元或6元的杂环基，或者该杂环基任选地与苯基稠合。
在另一优选实施方案中，R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，直链或支链的C4-10-烯炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，Z，苯基或苯氧基；和
Z为5元或6元的杂环基，或者该杂环基任选地与苯基稠合。
在另一优选实施方案中，R1为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：-OH，-SH，Z，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
Z为5元或6元的杂环基。
在另一优选实施方案中，R2为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：-OH，-SH，Z，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
Z为5元或6元的杂环基。
在另一优选实施方案中，R3为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：-OH，-SH，Z，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
Z为5元或6元的杂环基。
在另一优选实施方案中，R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，Z，苯基或苯氧基；和
Z为5元或6元的杂环基。
在另一优选实施方案中，R1为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：-OH，-SH，Z，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
Z为噻吩，吡咯，呋喃，噁唑，吡唑，咪唑，噻唑，嘌呤，三唑，噻二唑，吡啶，喹啉，异喹啉，菲啶，芳庚并[b]吡啶，哒嗪，噌啉，2，3-二氮杂萘，吡嗪，嘧啶，喹唑啉或1，3，5-三嗪。
在另一优选实施方案中，R2为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：-OH，-SH，Z，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
Z为噻吩，吡咯，呋喃，噁唑，吡唑，咪唑，噻唑，嘌呤，三唑，噻二唑，吡啶，喹啉，异喹啉，菲啶，芳庚并[b]吡啶，哒嗪，噌啉，2，3-二氮杂萘，吡嗪，嘧啶，喹唑啉或1，3，5-三嗪。
在另一优选实施方案中，R3为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：-OH，-SH，Z，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
Z为噻吩，吡咯，呋喃，噁唑，吡唑，咪唑，噻唑，嘌呤，三唑，噻二唑，吡啶，喹啉，异喹啉，菲啶，芳庚并[b]吡啶，哒嗪，噌啉，2，3-二氮杂萘，吡嗪，嘧啶，喹唑啉或1，3，5-三嗪。
在另一优选实施方案中，R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，Z，苯基或苯氧基；和
Z为噻吩，吡咯，呋喃，噁唑，吡唑，咪唑，噻唑，嘌呤，三唑，噻二唑，吡啶，喹啉，异喹啉，菲啶，芳庚并[b]吡啶，哒嗪，噌啉，2，3-二氮杂萘，吡嗪，嘧啶，喹唑啉或1，3，5-三嗪。
在另一优选实施方案中，R1为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：-OH，-SH，Z，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
Z为噻吩，吡咯，呋喃，咪唑，三唑，吡啶，喹啉或异喹啉。
在另一优选实施方案中，R2为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：-OH，-SH，Z，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
Z为噻吩，吡咯，呋喃，咪唑，三唑，吡啶，喹啉或异喹啉。
在另一优选实施方案中，R3为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：-OH，-SH，Z，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
Z为噻吩，吡咯，呋喃，咪唑，三唑，吡啶，喹啉或异喹啉。
在另一优选实施方案中，R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，Z，苯基或苯氧基；和
Z为噻吩，吡咯，呋喃，咪唑，三唑，吡啶，喹啉或异喹啉。
在另一优选实施方案中，R1为直链或支链的C1-6-烷基，直链或支链的C2-8-链烯基，直链或支链的C2-8-炔基，直链或支链的C4-10-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基。
在另一优选实施方案中，R2为直链或支链的C4-20-烷基，直链或支链的C6-30-链烯基，直链或支链的C6-30-炔基，直链或支链的C8-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基。
在另一优选实施方案中，R3为直链或支链的C1-6-烷基，直链或支链的C2-8-链烯基，直链或支链的C2-8-炔基，直链或支链的C4-10-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基。
在另一优选实施方案中，R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基或苯基。
在另一优选实施方案中，R1为直链或支链的C1-6-烷基，直链或支链的C2-8-链烯基，直链或支链的C2-8-炔基，直链或支链的C4-10-烯炔基。
在另一优选实施方案中，R2为直链或支链的C4-20-烷基，直链或支链的C6-30-链烯基，直链或支链的C6-30-炔基，直链或支链的C8-30-烯炔基。
在另一优选实施方案中，R3为直链或支链的C1-6-烷基，直链或支链的C2-8-链烯基，直链或支链的C2-8-炔基，直链或支链的C4-10-烯炔基。
在另一优选实施方案中，R4为直链或支链的C1-12-烷基或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基或苯基。
在另一优选实施方案中，R1为直链或支链的C1-10-烷基，其任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基。
在另一优选实施方案中，R2为直链或支链的C4-20-烷基，其任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：C1-6烷氧基，C1-6-烷硫基。
在另一优选实施方案中，R3为直链或支链的C1-6-烷基，其任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基。
在另一优选实施方案中，R4为直链或支链的C1-10-烷基或者R4任选地被下列基团所取代：C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基或苯基。
在另一优选实施方案中，R1为直链或支链的C1-12-烷基，其任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：C1-6-烷氧基。
在另一优选实施方案中，R2为直链或支链的C4-20-烷基，其任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：C1-6-烷氧基。
在另一优选实施方案中，R3为直链或支链的C1-12-烷基，其任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：C1-6-烷氧基。
在另一优选实施方案中，R4为直链或支链的C1-10-烷基或者R4任选地被下列基团所取代：C1-6-烷氧基或苯基。
在另一优选实施方案中，R4为直链或支链的C1-8-烷基或者R4任选地被下列基团所取代：C1-6-烷氧基，或苯基。
在另一优选实施方案中，R4为直链或支链的C1-8-烷基或者R4任选地被苯基取代。
在另一优选实施方案中，R1为甲基，乙基，1-丙基，2-丙基，1-己基，或者乙氧基乙基。
在另一优选实施方案中，R2为正丁基，正己基，正癸基或者3-甲基-1-丁基。
在另一优选实施方案中，R3为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链的C2-12-链烯基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-CN，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基。
在另一优选实施方案中，R3为甲基，乙基，1-丙基，2-丙基，1-丁基，1-戊基，1-己基，1-庚基，1-辛基，1-癸基，1-十二烷基，3-甲基-1-丁基，4-甲基-1-戊基，乙氧基乙基，4，4，4-三氟丁基，2-(甲硫基)乙基，5-己烯-1-基，3-氰基丙基，3，3-二甲基-1-丁基，3-氯-1-丙基，香茅基，3-环己基-1-丙基，3-苯基丙基，或3-(4-羟基苯基)丙基。
在另一优选实施方案中，R3为甲基，乙基，1-丙基，2-丙基，1-丁基，1-戊基，1-己基，1-庚基，1-辛基，1-癸基，1-十二烷基，3-甲基-1-丁基，4-甲基-1-戊基，乙氧基乙基，3，3-二甲基-1-丁基，3-环己基-1-丙基，或3-苯基丙基。
在另一优选实施方案中，R3为甲基，乙基，1-丙基，2-丙基，1-丁基，1-戊基，1-己基，1-庚基，1-辛基，1-癸基，或1-dodececyl。
在另一优选实施方案中，R2为甲基，乙基，1-丙基，2-丙基，1-丁基，或者乙氧基乙基，且R1和R3独立地为直链或支链的C6-30-烷基。
在另一优选实施方案中，R1和R3独立地为甲基，乙基，正丙基，2-丙基，丁基，或者乙氧基乙基，且R2为直链或支链的C6-30-烷基。
在另一优选实施方案中，R1为甲基，乙基，1-丙基，2-丙基，1-己基，乙氧基乙基且R2为正丁基，正己基，正癸基或者3-甲基-1-丁基。
在另一优选实施方案中，R2为甲基，乙基，1-丙基，2-丙基，1-己基，或者乙氧基乙基，且R1为正丁基，正己基，正癸基或者3-甲基-1-丁基。
在另一优选实施方案中，R2为甲基，乙基，正丙基，2-丙基，丁基，或者乙氧基乙基，且R1和R3独立地为直链或支链的C6-30-烷基。
在另一优选实施方案中，R4为乙基，2-丙基，1-丁基，1-己基或4-苯基-1-丁基。
在本发明的另一优选实施方案中，所述的酶为蛋白酶。
在本发明的另一优选实施方案中，该蛋白酶为商品蛋白酶如Alcalase(通过地衣形芽孢杆菌(Bacillus lichenif或mis)菌株的液面下发酵而制备)，Esperase(通过芽孢杆菌的嗜碱性菌种的液面下发酵而制备)，Rennilase(通过米赫根毛霉(Muc或miehei)的非致病性菌株的液面下发酵制备的)，Savinase(通过芽孢杆菌的基因修饰的菌株的液面下发酵制备的)，例如以WO 92/19729公开的国际专利申请中所描述的变体，及Durazym(Savinase的蛋白质工程的变体)。还可以使用Everlase和Kannase。所提到的所有商品蛋白酶均由Novo N或disk A/S，DK-2880 Bagsvaerd(丹麦)生产和出售。另外可使用的商品蛋白酶是来源于International Bio-Synthetics，Inc.(荷兰)的MAXATASE，及由Genenc或International，Inc.根据下列专利中一个或多个制造的蛋白酶：Caldwell等人，US5,185,258，5,204,015及5,244,791，例如Properase。上述的专利文献全部引入本专利申请中。
其它优选的丝氨酸-蛋白酶是来源于拟诺卡氏菌属(Nocardiopsis)，曲霉属(Aspergillus)，根霉属(Rhizopus)，嗜碱芽孢杆菌(Bacillus alcalophilus)，蜡状芽孢杆菌(B.cereus)，N.natto，普通芽孢杆菌(B.vulgatus)，蕈状芽孢杆菌(B.mycoide)，及来源于芽孢杆菌的枯草杆菌蛋白酶，特别是来源于拟诺卡氏菌属菌种和达松维尔拟诺卡氏菌(Nocardiopsis dassonvillei)的蛋白酶，如国际专利申请WO 88/03947中所公开的那些蛋白酶，尤其是来源于拟诺卡氏菌属菌种NRRL 18262和达松维尔拟诺卡氏菌NRRL 18133的蛋白酶。其它优选的蛋白酶还有来源于枯草芽孢杆菌属突变体的丝氨酸蛋白酶，其公开于国际专利申请PCT/DK89/00002和国际专利申请WO 91/00345中，以及EP415296中所公开的蛋白酶。
另一类优选的蛋白酶是来源于微生物的金属蛋白酶。可以方便地使用常规的发酵商品蛋白酶。这种商品蛋白酶的实例是Neutrase(Zn)(由枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株的液面下发酵而制备)，其是由Novo N或diskA/S，DK-2880 Bagsvaerd(丹麦)制备和出售的。上述的专利文献全部引入本专利申请中。
其它优选的商品蛋白酶酶制剂是BactosolWO和BactosolSI，由S和oz AG，Basle(瑞士)提供；Toyozyme，由Toyo Boseki Co.Ltd.(日本)提供；和Proteinase K(通过芽孢杆菌的KSM-K16菌株的液面下发酵制得)，得自KaoC或p或ation Ltd.(日本)。
其它优选的蛋白酶包括蛋白酶A(见欧洲专利申请EP 130,756，1985年1月9日公开出版)；蛋白酶B(见1987年4月28日提交的序列号为87303761.8的欧洲专利申请及1985年1月9日公开的Bott等人的欧洲专利申请EP 130,756。上述的专利文献全部引入本专利申请中。
在本发明的另一优选实施方案中，该蛋白酶选自下面：
蛋白酶2(或曲霉胃蛋白酶I)，来源于棘孢曲霉(Aspergillus aculeatus)，
Kannase，Savinase的变体，来源于Bacillus clausii，
类胰蛋白酶的蛋白酶，来源于尖孢镰孢(Fusarium oxysp或um)，
Alp蛋白酶(或或yzin)，来源于米曲霉(Aspergillus或yzae)，
蛋白酶2A，来源于米曲霉，
C-组分，来源于地衣形芽孢杆菌(Bacillus Lichenif或mis)，
蛋白酶1(或曲霉胃蛋白酶II)，来源于棘孢曲霉，
NpI蛋白酶(或者中性蛋白酶I或Fungalysin)，来源于米曲霉，
NpII蛋白酶，来源于米曲霉，
胃蛋白酶A蛋白酶，来源于米曲霉，
PD 498蛋白酶，来源于芽孢杆菌的菌种，
甘氨酸特异性蛋白酶，来源于番木瓜，
II型α-糜蛋白酶，来源于牛胰腺，
VII型α-糜蛋白酶，来源于牛胰腺，
蛋白酶2A，来源于米曲霉，
蛋白酶，来源于恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)，例如Novozym 180，
蛋白酶6，来源于米曲霉，
Flavourzyme，来源于米曲霉。
在本发明的另一优选实施方案中，该蛋白酶是由曲霉属，芽孢杆菌，镰孢属(Fusarium)，番木瓜，牛胰腺制备的或从中分离出来的。
在本发明的另一优选实施方案中，该蛋白酶是由棘孢曲霉，Bacillusclausii，尖孢镰孢，黑色曲霉(Aspergillus Niger)，米曲霉，地衣形芽孢杆菌，芽孢杆菌的细菌，番木瓜，牛胰腺制备的或分离出来的。
在本发明的另一优选实施方案中，该酶为脂肪酶。
在本发明的另一优选实施方案中，该酶为选自下列的脂肪酶：酵母，例如假丝酵母脂肪酶；细菌，例如假单胞菌或芽孢杆菌脂肪酶；或真菌，例如腐质霉属或根霉属脂肪酶。更具体地，适宜的脂肪酶可以是米赫根毛霉脂肪酶(例如按EP 238023中的描述制备的，得自Novo N或disk的商品名称为LipozymeTM的脂肪酶)，按EP 305216中所描述的方法制备的Thermomyceslanuginosa脂肪酶(得自Novo N或disk，商品名称为LipolaseTM)，Humicolainsolens脂肪酶，Humicola lanuginosa脂肪酶，施氏假单胞菌(Pseudomonasstutzeri)(例如ATCC 19.154)脂肪酶，洋葱伯克霍尔德氏菌脂肪酶，C和idaantarctica脂肪酶A或B，或者来源于下列的脂肪酶：rGPL，Absidiablakesleena，伞枝梨头霉(Absidia c或ymbifera)，茄病镰孢，尖孢镰孢，圆弧青霉(Penicillum cyclopium)，皮落青霉(Penicillum crustosum)，扩展青霉(Penicillum expansum)，胶粘红酵母(Rhodot或ula glutinis)，Thiarosp或ellaphaseolina，小孢根霉(Rhizopus microsp或us)，Sp或obolomyces shibatanus，出芽短柄霉(Aureobasidium pullulans)，异常汉逊氏酵母(Hansenula anomala)，Geotricum penicillatum，弯曲乳杆菌(Lactobacillus curvatus)，热杀索丝菌(Brochothrix thermosohata)，Coprinus cinerius，Trichoderma harzanium，Trichoderma reesei，日本根霉(Rhizopus japonicus)或Pseudomonas plantari。适宜脂肪酶的其它实例可以是上述脂肪酶任意一种的变体，例如WO92/05249或WO 93/11254中所描述的。本发明所使用的适宜的脂肪酶包括日本专利申请53,20487中所描述的那些脂肪酶，该专利申请于1978年2月24日公开。该脂肪酶可以从Amano Pharmaceutical Co.Ltd.，Nagoya(日本)得到，商品名称为脂肪酶P″Amano″，下文中称为″Amano-P″。其它商品脂肪酶包括Amano-CES，由粘稠色杆菌(chromobacter vicosum)得到的脂肪酶，例如可从Toyo Jozo Co.(日本，Tagata)买到的粘稠色杆菌脂解变体NRRLB3673，和由U.S.Biochemical Corp.(美国)和Disoynth Co.(荷兰)买到的其他粘稠色杆菌脂肪酶，和由老鹳草假单孢菌(Pseudomonas gladioli)得到的脂肪酶。上述专利文献全部引入本专利申请中。
在本发明的另一优选实施方案中，该酶为角质酶。
在本发明的优选实施方案中，该角质酶来源于生物体茄病镰孢(Fusarium solani pisi)(S.Longhi et al.，Journal of Molecular Biology，268(4)，779-799(1997))或Humicola insolens(US 5,827,719)。
在本发明的另一优选实施方案中该酶为磷脂酶。
在本发明的另一优选实施方案中该酶为酯酶。
在本发明的另一优选实施方案中，该酯酶是来源于兔肝脏的酯酶SigmaE-9636，来源于猪肝脏的酯酶Sigma E-7259，来源于肥猪胰腺的酯酶，来源于肥猪肝脏的酯酶，来源于电鳗的V-S型酯酶，或来源于恶臭假单胞菌的酯酶。
在本发明的另一优选实施方案中，该酯酶为来源于米曲霉的阿魏酸酯酶，或来源于表达在米曲霉中的棘孢曲霉的乙酰木聚糖酯酶。
在本发明的另一优选实施方案中，该酯酶是由曲霉制备的。
在本发明的另一优选实施方案中，该酯酶是由棘孢曲霉制备的。
在本发明的另一优选实施方案中，该酯酶是由米曲霉制备的。
在本发明的另一优选实施方案中，该酯酶是由黑色曲霉制备的。
在本发明的另一优选实施方案中，该酯酶是由假单胞菌制备的。
在本发明的另一优选实施方案中，该酯酶来源于表达在棘孢曲霉或米曲霉或黑色曲霉中的商品酶制剂，例如PectinexTM Ultra SP-L，PectinexTM BE，FlavourzymeTM，KojizymeTM 500 MG，ShearzymeTM 500L，PectinexTM AFP L-2，PectinexTM SMASH，Novozyme 188，Rheozyme，均得自Novo N或disk A/S。
在本发明的另一优选实施方案中，该酯酶得自于米曲霉的发酵(IFO4177 Institute f或Fermentation，Osaka，Japan)。
在本发明的另一优选实施方案中，该酯酶得自于棘孢曲霉的发酵(CBSdatabase No.CBS590.94)。
在本发明的另一优选实施方案中，该酶为水解酶的混合物，其包含两种或更多种水解酶，如蛋白酶，脂肪酶，酯酶，角质酶，或磷脂酶或者三种或更多种蛋白酶，脂肪酶，酯酶，角质酶，或磷脂酶。
在另一关于方法1的优选实施方案中，该酶是由根霉属，腐质霉属，芽孢杆菌，牛胰腺，假单胞菌，曲霉属，胰蛋白酶或镰孢属制备的或分离的。
在另一关于方法1的优选实施方案中，该酶为酯酶。
在本发明的另一优选实施方案中，关于方法1，该酯酶是由曲霉属制备的。
在本发明的另一优选实施方案中，关于方法1，该酯酶是由棘孢曲霉制备的。
在本发明的另一优选实施方案中，关于方法1，该酯酶是由米曲霉制备的。
在本发明的另一优选实施方案中，关于方法1，该酯酶是由黑色曲霉制备的。
在本发明的另一优选实施方案中，关于方法1，该酯酶来源于表达在棘孢曲霉或米曲霉或黑色曲霉中的商品酶制剂，例如PectinexTM Ultra SP-L，PectinexTM BE，FlavourzymeTM，KojizymeTM 500 MG，ShearzymeTM 500L，PectinexTM AFP L-2，PectinexTM SMASH，Novozyme 188，Rheozyme，均得自Novo N或disk A/S。
在本发明的另一优选实施方案中，关于方法1，该酯酶得自于米曲霉的发酵(IFO 4177 Institute f或Fermentation，Osaka，Japan)。
在本发明的另一优选实施方案中，关于方法1，该酶得自于棘孢曲霉的发酵(CBS database No.CBS590.94)。
在本发明的另一优选实施方案中，关于方法1，该酶选自：
米赫根毛霉脂肪酶，
Humicola lanuginosa脂肪酶，
Esperase(地衣形芽孢杆菌蛋白酶)，
Savinase(Bacillus clausii蛋白酶)，
α-糜蛋白酶，来源于牛胰腺，
蛋白酶，来源于恶臭假单胞菌，例如Novozym 180，
蛋白酶6，来源于曲霉属的菌种，
Flavourzyme，来源于米曲霉，
蛋白酶1(或曲霉胃蛋白酶II)，来源于表达在米曲霉中的棘孢曲霉且包含米曲霉分泌的酶，
蛋白酶2(或曲霉胃蛋白酶I)，来源于表达在米曲霉中的棘孢曲霉且包含米曲霉分泌的酶，
NpI蛋白酶(或中性蛋白酶I或Fungalysin)，来源于表达在米曲霉中的棘孢曲霉且包含米曲霉分泌的酶，
类胰蛋白酶的蛋白酶，来源于表达在米曲霉中的尖孢镰孢且包含米曲霉分泌的酶，
Rheozyme，一种来源于棘孢曲霉的果胶甲基酯酶，
Alp.蛋白酶(或或yzin)，来源于表达在米曲霉中的米曲霉且包含米曲霉分泌的酶，
蛋白酶2A，来源于米曲霉，
Pectinex Ultra SP-L，来源于棘孢曲霉，
Pectinex BE 3L，来源于黑色曲霉，
Kojizyme 500MG，来源于米曲霉，
阿魏酸酯酶，来源于米曲霉，
乙酰木聚糖酯酶，来源于棘孢曲霉，
Shearzyme 500L，来源于棘孢曲霉，
Pectinex AFP L-2，
Pectinex SMASH，
Novozym 188，来源于黑色曲霉，
Kannase，Savinase的变体，来源于Bacillus clausii，
角质酶，来源于Humicola insolens，
水解酶混合物，得自米曲霉的发酵。
在更优选的实施方案中，关于方法1，该酶选自：
蛋白酶1(或曲霉胃蛋白酶II)，来源于表达在米曲霉中的棘孢曲霉且包含米曲霉分泌的酶，
蛋白酶2(或曲霉胃蛋白酶I)，来源于表达在米曲霉中的棘孢曲霉且包含米曲霉分泌的酶，
蛋白酶NpI，来源于棘孢曲霉，
NpI蛋白酶(或中性蛋白酶I或Fungalysin)，来源于表达在米曲霉中的米曲霉且包含米曲霉分泌的酶，
类胰蛋白酶的蛋白酶，来源于表达在米曲霉中的尖孢镰孢且包含米曲霉分泌的酶，
Rheozyme，一种来源于棘孢曲霉的果胶甲基酯酶，
Alp.蛋白酶(或或yzin)，来源于表达在米曲霉中的米曲霉且包含米曲霉分泌的酶，
蛋白酶2A，来源于米曲霉，
Pectinex Ultra SP-L，来源于棘孢曲霉，
Pectinex BE 3L，来源于黑色曲霉，
Kojizyme 500MG，来源于米曲霉，
阿魏酸酯酶，来源于米曲霉，
乙酰木聚糖酯酶，来源于棘孢曲霉，
Shearzyme 500L，来源于棘孢曲霉，
Pectinex AFP L-2，
Pectinex SMASH，
Novozym 188，来源于黑色曲霉，
Kannase，Savinase的变体，来源于Bacillus clausii，
角质酶，来源于Humicola insolens，
水解酶混合物，得自米曲霉的发酵。
在最优选的实施方案中，关于方法1，该酶选自：
蛋白酶1(或曲霉胃蛋白酶II)，来源于表达在米曲霉中的棘孢曲霉且包含米曲霉分泌的酶，
蛋白酶2(或曲霉胃蛋白酶I)，来源于表达在米曲霉中的棘孢曲霉且包含米曲霉分泌的酶，
蛋白酶NpI，来源于棘孢曲霉，
NpI蛋白酶(或中性蛋白酶I或Fungalysin)，来源于表达在米曲霉中的米曲霉且包含米曲霉分泌的酶，
类胰蛋白酶的蛋白酶，来源于表达在米曲霉中的尖孢镰孢且包含米曲霉分泌的酶，
Rheozyme，一种来源于棘孢曲霉的果胶甲基酯酶，
Alp.蛋白酶(或或yzin)，来源于表达在米曲霉中的米曲霉且包含米曲霉分泌的酶，
蛋白酶2A，来源于米曲霉，
Pectinex Ultra SP-L，来源于棘孢曲霉，
Pectinex BE 3L，来源于黑色曲霉，
Kojizyme 500MG，来源于米曲霉，
阿魏酸酯酶，来源于米曲霉，
乙酰木聚糖酯酶，来源于棘孢曲霉，
Shearzyme 500L，来源于棘孢曲霉，
Pectinex AFP L-2，
Pectinex SMASH，
Novozym 188，来源于黑色曲霉，
水解酶混合物，得自米曲霉的发酵。
在另一优选实施方案中，关于方法2，该酶来源于根霉家族。
在另一优选实施方案中，关于方法3，该酶来源于根霉家族。
在另一优选实施方案中，关于方法2，该酶为米赫根毛霉酯酶。
在另一优选实施方案中，关于方法3，该酶为米赫根毛霉酯酶。
在关于方法1的优选实施方案中，R1为直链或支链的C1-6-烷基或乙氧基乙基，该酶为来源于棘孢曲霉或米曲霉的水解酶或酯酶，反应混合物的pH为4～8，反应混合物包含水和0～15％的有机溶剂，温度为15～40℃。
在关于方法1的更优选实施方案中，R1为直链或支链的C1-3-烷基或乙氧基乙基，该酶为来源于棘孢曲霉或米曲霉的水解酶或酯酶，反应混合物的pH为5～7，反应混合物包含水和0～5％的有机溶剂，温度为20～30℃。
实施例
其中R4＝乙基的起始化合物可以根据已知的文献方法(Geoffrey G.Cox等，Tetrahedron Letters，35，3139，1994)来制备。下面给出一般性的描述：
(2RS)3-[4-(苄氧基)苯基]-2-乙氧基丙酸2-乙氧基乙基酯
该酯可以通过3-[4-(苄氧基)苯基]-2-乙氧基丙酸与/在2-乙氧基乙醇中的酸催化酯化而制备。等浓度HPLC法2(4.34分钟)：97.6％。
(2RS)3-[4-(苄氧基)苯基]-2-乙氧基丙酸2-丙基酯
该酯可以通过3-[4-(苄氧基)苯基]-2-乙氧基丙酸与/在2-丙醇中的酸催化酯化而制备。等浓度HPLC法2(4.96分钟)：98.4％。
(2RS)3-[4-(苄氧基)苯基]-2-乙氧基丙酸己基酯
该酯可以通过3-[4-(苄氧基)苯基]-2-乙氧基丙酸与/在1-己醇中的酸催化酯化而制备。等浓度HPLC法2(8.57分钟)：92.2％。
(2RS)2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯
该标题化合物可以按Geoffrey G.Cox等有关甲基酯的描述而制备。等浓度HPLC法2(2.88)：95.6％；1H-NMR(CDCl3)δ：1.18(dt，6H)；2.93(d，2H)；3.38(m，1H)；3.60(m，1H)；4.01(t，1H)；4.15((q，2H)；6.01(bs，1H)；6.72(d，2H)；7.06(d，2H)。
(2RS)2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸2-乙氧基乙基酯
该去苄基化的酯是通过(2RS)3-[4-(苄氧基)苯基]-2-乙氧基丙酸2-乙氧基乙基酯在乙醇中的标准的钯/炭低压氢化而制备的。等浓度HPLC法2(2.85分钟)：99.6％；1H-NMR(CDCl3)δ：1.17(dt，6H)；2.95(dd，2H)；3.32(m，1H)；3.51(q，2H)；3.55-3.68 3.68(m，3H)；4.01(t，1H)；4.25(t，2H)；5.92(s，1H)；6.72(d，2H)；7.08(d，2H)。
(2RS)2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸2-丙基酯
该去苄基化的酯是通过(2RS)3-[4-(苄氧基)苯基]2-乙氧基丙酸2-丙基酯在乙醇中的标准的钯/炭低压氢化而制备的。等浓度HPLC法2(3.0分钟)：99.0％；1H-NMR(CDCl3)δ：1.19(dt，6H)；2.93(d，2H)；3.38(m，1H)；3.59(m，1H)；3.96(t，1H)；5.03(m，1H)；5.63(bs，1H)；6.72(d，2H)；7.10(d，2H)。
(2RS)2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸己基酯
该去苄基化的酯是通过(2RS)3-[4-(苄氧基)苯基]-2-乙氧基丙酸己基酯在乙醇中的标准的钯/炭低压氢化而制备的。等浓度HPLC法2(3.9分钟)：98.0％；1H-NMR(CDCl3)δ：＝0.89(t，3H)，1.19(t，3H)；1.28(m，6H)，1.59(m，2H)，2.93(d，2H)；3.38(m，1H)；3.59(m，1H)；3.98(t，1H)；4.07(t，2H)，5.65(bs，1H)，6.73(d，2H)，7.09(d，2H)。
(2RS)2-丁氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸丁基酯
该标题化合物是通过4-(苄氧基)苯甲醛与2-丁氧基-2-(二乙氧基磷酰基)乙酸丁基酯(根据Grell等，Liebigs Ann.Chem.Vol.699，53-67，1966，于Michaelis-Arbuzov反应中由丁氧基-氯-乙酸丁基酯和亚磷酸三乙酯制备的)的Wittig-H或ner-Emmons反应，及随后的还原双键并去除苄基保护基的标准钯/炭催化氢化而制备的。1H-NMR(CDCl3)δ：0.85(t，3H)，0.91(t，3H)，1.34(m，4H)，1.56(m，4H)，2.94(d，2H)，3.28(m，1H)，3.54(m，1H)，3.97(t，1H)，4.11(t，2H)，5.5(bs，1H)，6.73(d，2H)；7.08(d，2H)；MS(ES)295(MH+).
(2RS)3-(4-羟基苯基)-2-异丙氧基丙酸乙基酯
该标题化合物是通过4-(苄氧基)苯甲醛与2-异丙氧基-2-(二乙氧基磷酰基)乙酸乙基酯(根据Moody等，Tetrahedron，Vol.48，3991-4004，1992中所描述的一般方法来制备)的Wittig-H或ner-Emmons反应，及随后的还原双键并去除苄基保护基的标准钯/炭催化氢化而制备的。1H-NMR(CDCl3)δ：0.98(d，3H)；1.15(d，3H)，1.24(t，3H)，2.91(m，2H)，3.51(m，1H)；4.01(m，1H)；4.17(m，2H)；5.5(bs，1H)；6.74(d，2H)；7.09(d，2H)；MS(ES)253(MH+)。
(2RS)2-(己氧基)-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯
该标题化合物是通过4-(苄氧基)苯甲醛与2-(二乙氧基磷酰基)-2-(己氧基)乙酸乙基酯(根据Moody等，Tetrahedron，Vol.48，3991-4004，1992中所描述的一般方法来制备)的Wittig-H或ner-Emmons反应，及随后的还原双键并去除苄基保护基的标准氢化而制备的。1H-NMR(CDCl3)δ：0.85(t，3H)，1.23(t，3H)，1.2(m，6H)，1.53(m，2H)，2.94(d，2H)，3.29(m，1H)，3.53(m，1H)，3.97(t，1H)，4.17(m，2H)，6.0(bs，1H)，6.73(d，2H)；7.08(d，2H)。
(2RS)3-(4-羟基苯基)-2-(4-苯基丁氧基)丙酸乙基酯
该标题化合物是通过4-(苄氧基)苯甲醛与2-(二乙氧基磷酰基)-2-(4-苯基丁氧基)乙酸乙基酯(根据Moody等，Tetrahedron，Vol.48，3991-4004，1992中所描述的一般方法来制备)的Wittig-H或ner-Emmons反应，及随后的还原双键并去除苄基保护基的标准化而制备的。1H-NMR(CDCl3)δ：1.22(t，3H)，1.5(m，4H)，2.56(m，2H)，2.93(m，2H)，3.27(m，1H)，3.57(m，1H)，3.94(t，1H)，4.16(m，2H)，6.72(d，2H)，7.08(d，2H)，7.13(m，2H)，7.28(m，3H).
(2RS)3-(4-羟基苯基)-2-取代丙酸
该标题化合物是由相应的酯采用标准方法通过碱性水解而制备的。色谱方法：等浓度HPLC法1条件：●色谱柱：                250×4.0mm，5mm C-18 YMC-Silica 120●流速：                  0.9ml/分钟●检测器波长：            220nm●运行时间：              30分钟HPLC洗脱液：●50％乙腈，pH为3等浓度HPLC法2条件：●色谱柱：                250×4.0mm，5mm C-18 YMC-Silica 120●流速：                          0.9ml/分钟●检测器波长：                    220nm.●运行时间：                      30分钟HPLC洗脱液：●90％甲醇，pH为7(用三乙基胺和磷酸调整pH)梯度HPLC方法1(乙基，2-丙基，乙氧基乙基酯及相应的酸)条件：●色谱柱：                        Nucleosil C18 60*4●检测器波长：                    225nm/275nmHPLC洗脱液：A：           含有0.01％的三氟乙酸的水B：           含有0.01％的三氟乙酸的乙腈时间表：时间(分钟)                B％                   流速(ml/分钟)0                         0                     1.80.01                      0                     2.76                         100                   2.76.2                       100                   2.76.3                       0                     2.76.9                       0                     2.77                         0                     1.8梯度HPLC方法2(乙基和癸基酯)条件：●色谱柱：                             Nucleosil C18 60*4●检测器波长：                         225nm/275nm●运行时间：                           55分钟HPLC洗脱液：A：           含有0.01％的三氟乙酸的水B：           含有0.01％的三氟乙酸的乙腈时间表：时间(分钟)                B％                   流速(ml/分钟)0                         0                     1.80.01                      0                     2.72.7                       45                    2.74                         100                   2.75.4                       100                   2.755                        0                     1.8梯度HPLC方法3(乙基酯及相应的酸)条件：●色谱柱：                250×4.0mm，5mm C-18 YMC-Silica 120●检测器波长：            250nm●运行时间：              40分钟HPLC洗脱液：A：         80％的含有0.1％磷酸的水20％乙腈B：         含有0.1％磷酸的乙腈时间表：时间(分钟)                B％                   流速(ml/分钟)0                         0                     1.025                        75                    1.030                        75                    1.031                        0                     1.040                        0                     1.0手性HPLC方法的样品制备：
用乙酸乙酯(200μl)萃取反应混合物样品(200μl)。蒸发有机相并将其溶解于正庚烷与2-丙醇(85/15)的混合物(200μl)中。手性HPLC方法1(乙基酯)条件：●色谱柱：                  Chiracel OD 250*4.6●流速：                    1ml/分钟●检测器波长：              225/275nm●运行时间：                35分钟HPLC洗脱液：                正庚烷/2-丙醇/乙酸(95∶5∶0.1)手性HPLC方法2(乙氧基乙基酯)条件：●色谱柱：                  Chiracel OD 250*4.6●流速：                    1ml/分钟●检测器波长：              225/275nm●运行时间：                45分钟HPLC洗脱液：A：           正庚烷/2-丙醇/乙酸(90∶10∶0.1)B：           正庚烷/乙酸0.1％A∶B(60∶40)手性HPLC方法3(2-丙基酯)条件：●色谱柱：                  Chiralpak AS 250*4.6●流速：                    1ml/分钟●检测器波长：              225/275nm●运行时间：                40分钟HPLC洗脱液：                正庚烷/2-丙醇/乙酸(98∶2∶0.1)手性HPLC方法4(癸基酯)条件：●色谱柱：                  Chiralpak AS 250*4.6●流速：                    0.9ml/分钟●检测器波长：              225/275nm●运行时间：                20分钟HPLC洗脱液：                正庚烷/2-丙醇/乙酸(97∶3∶0.1)手性HPLC方法5条件：●色谱柱：                  Chiralpak AS 250*4.6●流速：                    1ml/分钟●检测器波长：              225nm●运行时间：                40分钟HPLC洗脱液：                正庚烷/2-丙醇/三氟乙酸(96∶4∶0.1)手性毛细管电泳(CCE)方法1条件：●HP 3D毛细管电泳。●80.5/72.0cm，50μm HP气泡毛细管。●电解液为10/90 ACN/10mM SB-β-CD(Advasep)，50mM磷酸盐缓冲液pH2.5(HP)。方法：
注入已稀释至约0.04mg/ml的反应混合物(20mbar于3.0秒内)。Rs为1.7而羧酸产物的迁移时间为19.1分钟和19.4分钟。手性毛细管电泳(CCE)方法2条件：●HP 3D毛细管电泳。●80.5/72.0cm，50μm HP气泡毛细管。●电解液为HS-β-CD(Regis)(2％w/v)和TM-β-CD(Sigma)(2％w/v)于25mMpH 9.3硼酸盐缓冲液(HP)中。方法：
注入已在5mM pH9.3的硼酸盐缓冲液中稀释约25倍(或最终浓度约0.025～0.1mg/ml)的反应混合物(50mbar于4.0秒内)。所使用的电压为30kV。
Figure A0081291000721
图：(2RS)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯和(2RS)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸混合物的载体电泳图(CCE方法2)。手性毛细管(CCE)方法3条件：●HP 3D毛细管电泳●80.5/72.0cm，50μm HP气泡毛细管●电解液：HS-β-CD(Regis)(2％w/v)于25mM pH 9.3硼酸盐缓冲液(HP)中●电压：30kV●注入：30mbar 5秒方法：
将反应混合物酸化并用乙酸乙酯萃取。蒸发乙酸乙酯萃取物并再溶解于pH9.3乙腈：5mM硼酸盐缓冲液(4∶6)。
由米曲霉制备水解酶混合物：
以麦芽糖/麦芽糖糊精或葡萄糖作为主要的碳源通过分批给料(fed-batch)法发酵米曲霉IFO4177。批料介质中包含：麦芽糖/麦芽糖糊精，硫酸铵，磷酸二氢钾，酵母提取物，山毛榉木聚糖，MgSO4·7H2O，柠檬酸，硫酸钾，痕量的金属溶液及消泡剂。所有这些组分均以1～18g/L的最终介质浓度来使用。介质的pH是关键的工艺参数，在整个发酵过程中保持为4.5。进料包括280g/L的麦芽糖/麦芽糖糊精或葡萄糖。用500mL种子培养物接种6.5kg的批介质。该批介质发酵15～25小时之后，开始加料，加料速度为15～25g进料/小时。将该分批进料的状态继续发酵100～160小时。通过搅拌速度的闭环控制，保持溶解氧高于50％的饱和状态。保持每小时每体积批料介质为1体积空气的通风。在整个发酵中，保持顶部空间的压力为0.5bar的过压。收获发酵液之后，滤除生物质和不溶物。利用超滤、蒸发或冷冻干燥去水以浓缩所得到的上清液。
实施例1
(2S)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸/(2R)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯
室温下，将(2RS)(+/-)2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯(100mg)溶解于4-甲基-2-戊酮(18ml)饱和的水溶液中。加入固定在accurel EP 100载体上的固定化的米赫根毛霉脂肪酶：187klu/g(1mg)并摇动反应混合物。然后通过所述的等浓度HPLC方法1和2转化外消旋的或以对应异构体富集的酯混合物。在不同的时间停止搅拌并移出ml无酶的反应混合物。4小时之后停止搅拌并将反应混合物在3℃储存18小时。在这一段时间之后，继续在室温下搅拌反应混合物。
原料的转化率(等浓度HPLC法1)：
时间/小时      1   1   2   2   3   4   5   7   9
产物酸(％)   10   18   25   31   36   40   46   58   61   64
装有4和9小时样品的小瓶是通过CCE法分析的：
样品(4小时)：转化率51％；ee(酯)：69％.
样品(9小时)：转化率79％；ee(酯)：81％.
实施例2
(2S)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸/(2R)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯
室温下，将(2RS)(+/-)2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯(100mg)溶解于4-甲基-2-戊酮(18ml)饱和的水溶液中。加入固定在accurel EP 100载体上的固定化的Humicola lanuginosa脂肪酶：712klu/g(0.5mg)并摇动反应混合物。然后通过所述的等浓度HPLC方法1和2转化外消旋的或以对应异构体富集的酯混合物。在不同的时间停止搅拌并移出ml无酶的反应混合物。4小时之后停止搅拌并将反应混合物在3℃储存18小时。在这一段时间之后，继续在室温下搅拌反应混合物。
原料转化率(等浓度HPLC法1)：
时间/小时 1  1  2  2 3  4  5  7  9
产物酸(％) 1.4 2.9  4.5  6.5  8 10  13  27  31  36
装有9小时样品的小瓶是通过CCE法分析的：
样品(9h)：转化率57％；ee(酯)：29％。
实施例3
(2S)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸/(2R)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸2-乙氧基乙基酯
将(2RS)(+/-)2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙氧基乙基酯(0.5ml溶液，该溶液包含2mg/ml，于磷酸盐缓冲液中，pH7，0.1M，或乙酸盐缓冲液中，pH5，0.1M)加到反应容器中，然后加入酶(0.5ml酶溶液)。室温下摇动反应混合物并在不同时间(最大36小时)进行分析。在无须整理的情况下，通过梯度HPLC方法1，手性HPLC方法2和5，及CCE方法1对反应混合物进行分析。
原料的转化率：
酶的来源    浓度/mg/ml 缓冲液/pH          梯度HPLC     手性HPLC或手性CE/ee
 18h 24h 36h
地衣芽孢杆菌 5 pH7 68％ 71％ 84％ ee酸＝14(24h)ee酯＝19(24h)
刺孢曲霉 6 pH5 27％ 33％ 47％ ee酸＝96(36h)ee酯＝78(36h)
棘孢曲霉 2.5 pH5 57％ 58％ 61％ ee酸＝84(18h)ee酯≈100(18h)
米曲霉 1 pH7 20％ 25％ 36％ ee酸＝96(36h)ee酯＝58(36h)
aEsperase；b蛋白酶1(或曲霉胃蛋白酶II)，来源于表达在米曲霉中的棘孢曲霉且包括米曲霉分泌的酶(WO95/02044；H和book of ProteolyticEnzymes，Barrett，Rawlings，和Woessner Eds.，1998，Academic Press ref.1 chap.327)；c蛋白酶2(或曲霉胃蛋白酶I)，来源于表达在米曲霉中的棘孢曲霉且包括米曲霉分泌的酶(WO95/02044；H和book of Proteolytic Enzymes，Barrett，Rawlings，和Woessner Eds.，1998，Academic Press ref.1 chap.294)；dNpI蛋白酶(或者中性蛋白酶I或Fungalysin)，来源于表达在米曲霉中的米曲霉且包含米曲霉分泌的酶(EMBL ID＝AC＝AF099904；H和book of ProteolyticEnzymes，Barrett，Rawlings，和Woessner Eds.，1998，Academic Press ref.1 chap.514)。
实施例4
(2S)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸/(2R)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯
将(2RS)(+/-)2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯(0.5ml溶液，该溶液包含2mg/ml，于磷酸盐缓冲液中，pH7，0.1M，或乙酸盐缓冲液中，pH5，0.1M)加到反应容器中，然后加入酶(0.5ml酶溶液)。室温下摇动反应混合物并在不同时间进行分析(最大36小时)。在无须整理的情况下，通过梯度HPLC方法1及手性HPLC方法2和5和手性HPLC对反应混合物进行分析。
原料的转化率：
酶的来源   浓度/mg/ml 缓冲液/pH             梯度HPLC 手性HPLC/ee
 3h 24h 36h
  Bacillus clausiia     2.5   pH7 50％ 100％   ee酯＝72(24h)
  Bacillus clausiib     7   pH7  30％ 50％ 100％   ee酯＝91(24h)
  尖孢镰孢     7   pH7  35％ 50％ 50％   ee酯＝97(24h)
  棘孢曲酶     6   pH5i 50％ 50％   ee酯＝78(24h)
  棘孢曲酶     2.5   pH5i  50％ 50％ 50％   ee酯≈100(24h)
  棘孢曲酶     9   pH7 49％   ee酯≈98％(24h)
  牛胰腺f     2.5   pH7  85％ 100％ 100％   ee酯＝38(3h)
  牛胰腺g     5   pH7  50％ 100％ 100％   ee酯＝39(3h)
  米曲酶     3   pH7  50％ 50％ 50％   ee酯＝97(3h)
aSavinase，来源于Bacillus clausii；bKannase和/或Savinase的变体，来源于Bacillus clausii；c类胰蛋白酶的蛋白酶，来源于表达在米曲霉中的尖孢镰孢且包含米曲霉分泌的酶(Swissprot AC＝P35049和/或EMBLID＝AC＝S63 827，H和book of Proteolytic Enzymes，Barrett，Rawlings，和Woessner Eds.，1998，Academic Press ref.1 chap.3)；d蛋白酶1(或曲霉胃蛋白酶II)，来源于表达在米曲霉中的棘孢曲霉且包括米曲霉分泌的酶(WO95/02044；H和book of Proteolytic Enzymes，Barrett，Rawlings，和Woessner Eds.，1998，Academic Press ref.1 chap.327)；e蛋白酶2(或曲霉胃蛋白酶I)，来源于表达在米曲霉中的棘孢曲霉且包括米曲霉分泌的酶(WO95/02044；H和book of Proteolytic Enzymes，Barrett，Rawlings，和Woessner Eds.，1998，Academic Press ref.1 chap.294)；fII型α-糜蛋白酶，来源于牛胰腺(SIGMA)；gVIII型α-糜蛋白酶，来源于牛胰腺(SIGMA)；hAlp蛋白酶(或或yzin)，来源于表达在米曲霉中的米曲霉且包含米曲霉分泌的酶(Swissprot AC＝P12547；H和book of Proteolytic Enzymes，Barrett，Rawlings，和Woessner Eds.，1998，Academic Press ref.1 chap.105)；i乙酸盐缓冲液，0.1M；jRheozyme，来源于棘孢曲霉的果胶甲基酯酶。
实施例5
(2S)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸/(2R)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸异丙基酯
将(2RS)(+/-)2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸异丙基酯(0.5ml溶液，该溶液包含2mg/ml，于磷酸盐缓冲液中，pH7，0.1M，或乙酸盐缓冲液中，pH5，0.1M)加到反应容器中，然后加入酶(0.5ml酶溶液)。室温下，摇动反应混合物并于不同时间进行分析(最大28小时)。在无须整理的情况下，通过梯度HPLC方法1，手性HPLC方法3和5，及CCE方法1对反应混合物进行分析。
原料的转化率：
酶的来源    浓度/mg/ml 缓冲液/pH            梯度HPLC     手性HPLC及手性CE/ee
 6h 22h 28h
尖孢镰孢 7 pH7 23％ 49％ 49％   ee酯＝86(28h)ee酸＝93(28h)
棘孢曲霉 2.5 pH5f 54％ 56％ 53％   ee酯≈100(22h)ee酸＝97(22h)
米曲霉 3 pH7 57％ 58％ 54％   ee酯≈100(28h)ee酸＝86(28h)
  H.insolense     5   pH7  11g％ 15g％ 24g％   ee酸＝79(48h)
a类胰蛋白酶的蛋白酶，来源于表达在米曲霉中的尖孢镰孢且包含米曲霉分泌的酶(Swissprot AC＝P35049和/或EMBL ID＝AC＝S63827，H和bookof Proteolytic Enzymes，Barrett，Rawlings，和Woessner Eds.，1998，AcademicPress ref.1 chap.3)；b蛋白酶2(或曲霉胃蛋白酶I)，来源于表达在米曲霉中的棘孢曲霉且包括米曲霉分泌的酶(WO95/02044；H和book of ProteolyticEnzymes，Barrett，Rawlings，和Woessner Eds.，1998，Academic Press ref.1 chap.294)；dAlp蛋白酶(或或yzin)，来源于表达在米曲霉中的米曲霉且包含米曲霉分泌的酶(Swissprot AC＝P12547；H和book of Proteolytic Enzymes，Barrett，Rawlings，和Woessner Eds.，1998，Academic Press ref.1 chap.105)；e角质酶，来源于H.insolens；f乙酸盐缓冲液，0.1M；g时间间隔19，26，48小时。
实施例6
(2S)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸
将(2R/S)(+/-)2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯(13g)加到含水的0.1MpH7磷酸盐缓冲液(2.6l)中。加入来源于米曲霉的蛋白酶2A(Fluka No：82463；0.51单位/mg)(7.9g)，并在室温下搅拌该混合物14小时。然后通过所述的等浓度HPLC方法1进行酯到酸的转化。搅拌反应混合物6小时之后用乙酸乙酯萃取5次，直到水相(水相的pH为6.8)中不能再检出酯为止。加入4M的盐酸水溶液(200ml)(水相的pH为1)，然后加入叔丁基甲基醚(500ml)。通过hyflo过滤该乳浊液并将两相分离。水相用叔丁基甲基醚(500ml×3)萃取。合并的有机相用Na2SO4干燥并蒸发，得到4.9g标题化合物(CCE方法1：ee＝97％)。δ(400MHz；[2H6]DMSO)1.04(3H，t，)；2.78(2H，ddd)，3.38(1H，dq)；3.49(1H，dq)；3.90(1H，m)，6.62(2H，d)；7.0(2H，d)；9.1(1H，bs)；12.53(1H，bs)。
原料的转化率(等浓度HPLC法1)：
时间/小时 1  2  3  4  5  6
产物酸(％) 9  17  25  32  38  42
实施例7
(2R)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸/(2S)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸2-乙氧基乙基酯
加入(2RS)2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙氧基乙基酯(0.5ml溶液，该溶液包含2mg/ml，于磷酸盐缓冲液中，pH7，0.1M)，然后加入来源于恶臭假单胞菌的固定化蛋白酶(L-氨基肽酶，得自Novo N或disk的Novozym 180或SP 180)(5mg)和磷酸盐缓冲液(0.1M，pH7，0.5ml)。室温下，摇动该反应混合物并于不同时间进行分析(最大36小时)。在无须整理的情况下，通过梯度HPLC方法1和手性HPLC方法对反应混合物进行分析。
原料的转化率：
时间/小时 18  24  36
产物酸(％) 49  36  46
产物酸(ee) 37  43  40
实施例8
(2R)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸/(2S)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸异丙基酯
加入(2RS)(+/-)2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸异丙基酯(0.5ml溶液，该溶液包含2mg/ml，于磷酸盐缓冲液，0.1M，pH7)，然后加入来源于牛胰腺的II型α-糜蛋白酶(SIGMA)(2.5mg，于磷酸盐缓冲液中，0.1M，pH7，0.5ml)。室温下，摇动该反应混合物并于不同时间进行分析(最大28小时)。在无须整理的情况下，通过梯度HPLC方法1和手性HPLC方法对反应混合物进行分析。
原料的转化率：
时间/小时 6  22  28
产物酸(％) 22  53  52
产物酯(ee) 44  52
产物酸(ee) 65  58
实施例9
(2S)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸/(2R)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯
加入0.4ml的(2RS)(+/-)2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯溶液，该溶液含有6.25mg/ml的酯，于乙酸缓冲液(0.1M，pH5，加有12.5体积％乙腈的缓冲液)中，随后加入蛋白酶2(或曲霉胃蛋白酶I)试样，其来源于表达在米曲霉中的棘孢曲霉且包括米曲霉分泌的酶(WO95/02044；H和book ofProteolytic Enzymes，Barrett，Rawlings，和Woessner Eds.，1998，AcademicPress ref.1 chap.294)(0.1ml的溶液，含量为5mg/ml)于乙酸缓冲液(0.1M；pH＝5)中。室温下，摇动该反应混合物并于不同时间进行分析(最大24小时)。在无须整理的情况下，通过梯度HPLC方法1和手性HPLC方法1对反应混合物进行分析。
原料的转化率：
时间/小时 5  8  24
产物酸(％) 35  43  50
产物酸(ee) ≥95 ≥95 ≥95
产物酯(ee) 52  74 ≈100
实施例10
(2S)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸正癸基酯/(2R)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯
将(2RS)(+/-)2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯(9mg)加到包含下列成分的溶液中：固定在accurel EP 100载体上的固定化米赫根毛霉脂肪酶187klu/g(18mg)，正癸醇14μl，庚烷0.9ml和4分子筛。室温下，摇动该反应混合物并于不同时间进行分析(最大7小时)。通过梯度HPLC方法2并通过手性HPLC方法4对反应混合物进行分析。
原料的转化率：
时间/小时 3  7
产物酸(％) 46  46
癸基酯(ee) 86  68
乙基酯(ee) 70  67
实施例11
(2RS)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸与正烷基醇的酯化
将溶解于1ml叔丁基甲基醚(TMBE)中的(2RS)(+/-)2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸(100mg)及相应的正烷基醇(1.2当量)与10mg Lipozyme IM(得自Novo N或disk的固定化的米赫根毛霉脂肪酶)一起于25℃(对于甲醇为40℃)下摇动。通过手性CCE方法2于不同时间对反应混合物进行分析。
48小时和144小时之后的产率及各个酯的ee：
醇   产物酯48h(％)     (ee)酯48h(％)     (ee)酸48h(％)    产物酯144h(％)    (ee)酯144h(％)   (ee)酸144h(％)
    甲醇     33     n.d.     40     n.d.     n.d.     n.d.
    乙醇     28     89     34     40     78     48
    1-丙醇     31     86     32     43     64     61
    1-丁醇     18     89     14     38     78     72
    1-戊醇     20     n.d.     18     39     n.d.     69
    1-己醇     15     n.d.     20     40     n.d.     69
    1-庚醇     20     77     20     43     61     70
    1-辛醇     19     91     22     45     49     66
    1-十二烷醇     n.d.     18     20     43     44     64
    3-甲基-1-丁醇     24     30     20     42     49     63
    4-甲基-1-戊醇     18     22     14     42     n.d.     68
    2-丙醇     n.d.     n.d.     n.d.     6     ＞99     6
实施例12
(2S)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸/(2R)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯
将(2RS)(+/-)2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯(0.5g)与60mg来源于米曲霉的冻干水解酶混合物在1ml 1M磷酸盐缓冲液(pH＝7)与有机共溶剂(根据下表)中于27℃下摇动。4小时之后将反应混合物倒入20ml MeOH中以终止酶催化反应，然后通过手性CCE方法2进行分析。
      共溶剂   产物酸(％)   (ee)酸(％)
  丙酮/0.1ml     37     93
  丙酮/0.3ml     31     94
  THF/0.1ml     36     94
  THF/0.2ml     31     93
  THF/0.3ml     21     91
  2-丙醇/0.1ml     36     97
  2-丙醇/0.3ml     27     93
  乙醇/0.1ml     35     96
  乙醇/0.2ml     32     96
  乙醇/0.3ml     22     93
实施例13
以对映异构体富集的(2S)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸与乙醇的酯化
将溶解于叔丁基甲基醚(4～10ml/g的酸)的以对映异构体富集的(2S)(+/-)2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸和乙醇(1.5～2当量)与10～30重量％/酸的Lipozyme IM(得自Novo N或disk的固定化的米赫根毛霉脂肪酶)在环境温度下或在回流下一起摇动。当达到下表所示的转化率(通过梯度HPLC方法3测定)时，通过手性CCE方法2对反应混合物进行分析。
起始的酸和最终的乙基酯的产率和ee
  项目     (ee)酸   产物酯(％)   产物酯(ee％)
    1     94     86     98
    2     96     93     99
    3     99     93     ＞99
    4     93     85     99
    5     79     76     97
    6     89     93     98
    7     91     88     99
    8     96     92     99
实施例14
(2R)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯
将以对应异构体富集的(ee R对应体＝60％)2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯(5.2g)溶解于30ml丙酮并加到含水的0.1M pH7磷酸盐缓冲液(1.0l)中。加入来源于米曲霉的蛋白酶2A(Fluka No：82463；0.51单位/mg)(13g)并将混合物在室温下搅拌3天。用200ml TBME萃取反应混合物4次。在用Na2SO4干燥合并的有机相之后，蒸发TBME，得到4.3g(2R)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基油状物(CCE方法2：ee＝100％)。
原料的转化率(等浓度HPLC法1)：
时间/小时   8   72
产物酸(％)   14   25
实施例15
(2S)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸/(2R)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯
将(2R/S)(+/-)2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯(5g)加到含水的0.1MpH7磷酸盐缓冲液(10ml)中。加入Pectinex Ultra SP-L(Novo N或disk)(15ml)并将混合物在室温下搅拌44小时。其间，通过加入NaOH保持反应混合物的pH恒定为7。大部分水真空蒸发。将甲醇加到剩余的浆液中以终止水解。滤除所生成的沉淀并真空蒸发甲醇。将剩余的油状物溶解于水，然后用TMBE萃取未反应的酯(CCE方法2：ee酯＝100％)。将水相酸化至pH＝3并用TMBE对该酸进行萃取。待用Na2SO4干燥之后，蒸发TMBE，得到1.7g(2S)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸油状物，其经放置后结晶(CCE方法2：ee酸＝98％)。
实施例16
(2S)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸/(2R)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯
将(2R/S)(+/-)2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯(5g)加到含水的0.1M pH7磷酸盐缓冲液(10ml)中。加入100mg来源于米曲霉的冻干的酶混合物并将该混合物在室温下搅拌18小时。其间，通过加入NaOH保持反应混合物的pH恒定为6-8。大部分水在真空中蒸发。将甲醇加到剩余的浆液中以终止水解。滤除所生成的沉淀并在真空中蒸发甲醇。将剩余的油状物溶解于水，然后用TMBE萃取未反应的酯(CCE方法2：ee酯＝87％)。将水相酸化至pH＝3并用TMBE对该酸进行萃取。待用Na2SO4干燥之后，蒸发TMBE，得到1.8g(2S)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸油状物，其经放置后结晶(m.p.＝105℃，CCE方法2：ee酸≥99％)。
实施例17
(2S)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸正癸基酯/(2R)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯
向(2RS)(+/-)2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯(5mg)于庚烷(在4分子筛上干燥过)(1ml)、三乙基胺(0.4μl)和正癸醇(8μl)中的溶液中，加入4分子筛和无根根霉(Rhizopus arrhizus)脂肪酶(Fluka 62305；2.2U/g)(20mg)。
室温下，摇动该反应混合物并于不同时间进行分析。通过梯度HPLC方法2并通过手性HPLC方法4对反应混合物进行分析。
原料的转化率：
时间/小时 24  72
产物(癸基酯)(％) 29  47
癸基酯(％ee)  47
实施例18
(2S)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸酯正癸基/(2R)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯
向(2RS)(+/-)2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯(5mg)在庚烷(在4分子筛上干燥过)(0.5ml)，三乙基胺(0.4μl)和正癸醇(8μl)中的溶液中加入4分子筛和黑色曲霉脂肪酶(Fluka 62294；1U/mg)(40mg)。室温下，摇动该反应混合物并于不同时间进行分析。通过梯度HPLC方法2并通过手性HPLC方法4对反应混合物进行分析。
原料的转化率：
时间/小时 24  72
癸基酯(％) 31  47
％ee癸基酯  56
实施例19
(2S)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸/(2R)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯
向(2RS)(+/-)2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯(0.5ml于磷酸盐或柠檬酸盐-磷酸盐中的0.1M的缓冲液中的溶液，其包含1mg/ml)中加入酶(数量如下所示)。室温下，摇动该反应混合物并于不同时间进行分析。通过梯度HPLC方法1并通过手性HPLC对反应混合物进行分析。
原料的转化率：
  酶   酶数量 缓冲液/pH 反应时间 ％产物   ee产物
  蛋白酶6a   0.5mg   pH7h   96h   46   47
  Flavourzymeb   250μl   pH7i   23h   39   50
  Pectinex BE 3Lc   100μl   pH5i   5min   47   95
  Kojizyme 500MGd   10mg   pH6i   50min   45   98
  阿魏酸酯酶e   200μl   pH7i   23h   49   98
  乙酰基木聚糖酯酶f   100μl   pH7h   26h   47   99
  Pectinex Ultra SP-Lg   250μl   pH7h   15min   46   99
a来源于曲霉属菌种的蛋白酶6(Fluka 82539)；b来源于米曲霉的Flavourzyme(Novo N或disk)；c来源于黑色曲霉的Pectinex BE 3L(Novo N或disk)；d来源于米曲霉的Kojizyme 500MG(Novo N或disk)；e来源于米曲霉的阿魏酸酯酶(0.5mg/ml)；f来源于棘孢曲霉的乙酰木聚糖酯酶(2mg/ml)；g来源于棘孢曲霉的Pectinex Ultra SP-L(Novo N或disk)；h磷酸盐缓冲液，0.1M；i磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液0.1M。
实施例20
(2S)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸/(2R)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸己基酯
向(2RS)(+/-)2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸己基酯(0.5ml溶液，该溶液包含2mg/ml，于磷酸盐缓冲液中，pH7，0.1M，或乙酸盐缓冲液中，pH5，0.1M)加入酶(0.5ml酶溶液)。室温下，摇动该反应混合物并于不同时间进行分析(最大30小时)。通过梯度HPLC方法1，及手性CE方法1对反应混合物进行分析。
原料的转化率：
酶的来源   浓度/mg/ml 缓冲液/pH             ％水解 ％ee酸
  6h   24h   30h
B.clausiia     7     pH7e   52％   20(6h)
地衣形芽孢杆菌b     5     pH7e   14％   45％   20(24h)
棘孢曲霉c     2     pH5f   42％   97(6h)
米曲霉d     1     pH7e   12％   32％   48％   89(30h)
aKannase，来源于Bacillus clausii的Savinase的变体；b来源于地衣形芽孢杆菌的Esperase；c蛋白酶2(或曲霉胃蛋白酶I)，来源于表达在米曲霉中的棘孢曲霉且包括米曲霉分泌的酶(WO95/02044；H和book of ProteolyticEnzymes，Barrett，Rawlings，和Woessner Eds.，1998，Academic Press ref.1chap.294)；dNpI蛋白酶(或者中性蛋白酶I或Fungalysin)，来源于表达在米曲霉中的米曲霉且包含米曲霉分泌的酶(EMBL ID＝AC＝AF099904；H和bookof Proteolytic Enzymes，Barrett，Rawlings，和Woessner Eds.，1998，AcademicPress ref.1 chap.514)；e磷酸盐缓冲液0.1M；f乙酸缓冲液0.1M。
实施例21
(2S)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸/(2R)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯
将酶(100μl)a加到(2RS)(+/-)2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯(2.5mg于乙酸缓冲液0.1M pH5(350μl)及根据下表的有机共溶剂中的溶液(50μl))中。室温下，摇动该反应混合物并于不同时间进行分析。通过梯度HPLC方法1并通过手性CE方法1对反应混合物进行分析。
a蛋白酶2(或曲霉胃蛋白酶I)，来源于表达在米曲霉中的棘孢曲霉且包括米曲霉分泌的酶(WO95/02044；H和book of Proteolytic Enzymes，Barrett，Rawlings，和Woessner Eds.，1998，Academic Press ref.1 chap.294)(1mg/ml)。
原料的转化率：
共溶剂                 ％水解 ％ee酸
  1h30   2h30   4h   5h
  叔丁醇   27   36   43   46   99(5h)
  丙酮   28   37   44   47   99(5h)
  DMF   24   33   40   44   99(5h)
  DMSO   35   42   47   49   99(5h)
实施例22
(2S)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)-丙酸/(2R)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)-丙酸乙基酯
向(2RS)(+/-)2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)-丙酸乙基酯(0.25ml溶液含量为2mg/ml于磷酸盐0.1M pH7缓冲液中的溶液)加入稀释于0.1M pH7磷酸盐缓冲液(缓冲液的体积，如总的反应混合物的体积为0.5ml)中的酶(数量如下所示)。室温下，摇动该反应混合物并于不同时间进行分析。通过梯度HPLC方法1并通过手性CE方法2对反应混合物进行分析。
原料的转化率：
酶   酶数量 反应时间 ％产物 ee产物
Pectinex Smasha     10μl     1h15     46   99％
Pectinex AFP L-2b     10μl     1h     46   98％
Novozyme 188c     50μl     37min     47   98％
Shearzyme 500Ld     50μl     37min     42   99％
aPectinex Smash (Novo N或disk)；b来源于黑色曲霉和棘孢曲霉的Pectinex AFP L-2(Novo N或disk)；c来源于黑色曲霉的Novozyme 188(Novo N或disk)；d来源于米曲霉的Shearzyme 500L(Novo N或disk)。
实施例23
(2S)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸/(2R)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸异丙基酯
向(2RS)(+/-)2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)-丙酸异丙基酯(0.25ml含量为2mg/ml的于0.1M pH7磷酸盐缓冲液和10％乙腈(v/v)中的溶液)加入稀释于0.1M pH7磷酸盐缓冲液(缓冲液的体积，如总的反应混合物的体积为0.5ml)中的酶(数量如下所示)。室温下，摇动该反应混合物并于不同时间进行分析。通过梯度HPLC方法1，及手性CE方法2对反应混合物进行分析。
原料的转化率：
酶   酶数量 反应时间 ％产物     ee产物
Pectinex Smasha     10μl     1h15     46 ≈100％
Pectinex AFP L-2b     10μl     1h30     46   99％
Novozyme 188c     25μl     1h10     48   98％
Shearzyme 500Ld     25μl     1h30     48   99％
aPectinex Smash(Novo N或disk)；b来源于黑色曲霉和棘孢曲霉的Pectinex AFP L-2(Novo N或disk)；c来源于黑色曲霉的Novozyme 188(Novo N或disk)；d来源于米曲霉的Shearzyme 500L(Novo N或disk)。
实施例24
(2S)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸/(2R)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙氧基乙基酯
向(2RS)(+/-)2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙氧基乙基酯(0.25ml含量为2mg/ml的于0.1M pH7磷酸盐缓冲液中的溶液)加入稀释于0.1M pH7磷酸盐缓冲液(缓冲液的体积，如总的反应混合物的体积为0.5ml)中的酶(数量如下所示)。室温下，摇动该反应混合物并于不同时间进行分析。通过梯度HPLC方法1，及CE方法2对反应混合物进行分析。
原料的转化率：
酶   酶数量 反应时间 ％产物   ee产物
Pectinex Smasha     10μl     45mn     43   98％
Pectinex AFP L-2b     10μl     45mn     44   98％
Novozyme 188c     25μl     30mn     47   96％
Shearzyme 500Ld     25μl     30mn     47   99％
aPectinex Smash(Novo N或disk)；b来源于黑色曲霉和棘孢曲霉的Pectinex AFP L-2(Novo N或disk)；c来源于黑色曲霉的Novozyme 188(NovoN或disk)；d来源于米曲霉的Shearzyme 500L(Novo N或disk)。
实施例25
(2S)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸/(2R)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸己基酯
向(2RS)(+/-)2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸己基酯(0.25ml含量为2mg/ml的于0.1M pH7磷酸盐缓冲液和乙腈(数量如下所示)中的悬浮液)加入稀释于0.1MpH7磷酸盐缓冲液(缓冲液的体积，如总的反应混合物的体积为0.5ml)中的酶(数量如下所示)。室温下，摇动该反应混合物并于不同时间进行分析。通过梯度HPLC方法1，及手性CE方法2对反应混合物进行分析。
原料的转化率：
酶   酶数量   乙腈e 反应时间 ％产物     ee产物
Pectinex AFP L-2b     10μl     5％     1h   ≈47％     99％
Novozyme 188c     25μl     15％     1h   ≈41％   ≈100％
Shearzyme 500Ld     25μl     15％     1h30   ≈46％     99％
aPectinex Smash(Novo N或disk)；b来源于黑色曲霉和棘孢曲霉的Pectinex AFP L-2(Novo N或disk)；c来源于黑色曲霉的Novozyme 188(NovoN或disk)；d来源于米曲霉的Shearzyme 500L(Novo N或disk)；e反应混合物的体积百分数(v/v)。
实施例26
(2R)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸正己基酯/(2S)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯
向(2RS)(+/-)2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯于叔丁基乙基醚(于3分子筛上干燥过)中的溶液(10mg/ml)中加入正己醇(2当量)，三乙基胺(于3分子筛上干燥过)(14mol％)，4分子筛，及米赫根毛霉脂肪酶LipozymeIM(得自Novo N或disk)(20mg)。室温下，摇动该反应混合物并于不同时间进行分析。通过梯度HPLC方法1并通过手性CE方法2对反应混合物进行分析。
原料的转化率：
时间/小时     1     3
产物己基酯(％)     37     51
乙基酯(％ee)     57     74
实施例27
(2R)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸烷基酯/(2S)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯
向(2RS)(+/-)2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯的叔丁基乙基醚(于3的分子筛上干燥过)溶液(10mg/ml)中加入烷醇(2当量)，三乙基胺(于3分子筛上干燥过)(14mol％)，4分子筛，及米赫根毛霉脂肪酶Lipozyme IM(得自Novo N或disk)(20mg)。室温下，摇动该反应混合物并于不同时间进行分析。通过梯度HPLC方法1并通过手性CE方法2对反应混合物进行分析。
原料的转化率：
烷醇 反应时间 ％酯交换 ％ee乙基酯 ％ee产物酯
正丁醇     1h30     36％     56％     71％
    5h30     56％     71％     45％
3-甲基-1-丁醇     3h     38％     67％     nd
    5h     53％     77％     nd
实施例28
(2S)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸正癸基酯/(2R)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯
将(2RS)(+/-)2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯(5mg)加到包含米赫根毛霉脂肪酶Lipozym IM(得自Novo N或disk的固定化的商品米赫根毛霉脂肪酶)(10mg)，正癸醇8μl，庚烷0.5ml及4分子筛的溶液中。室温下，摇动该反应混合物并于不同时间进行分析。通过梯度HPLC方法2并通过手性HPLC方法对反应混合物进行分析。
原料的转化率：
时间/小时     2h
产物癸基酯(％)     46
癸基酯(ee)     87
乙基酯(ee)     78
实施例29
(2R，S)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸与醇的酯化
将溶解于叔丁基甲基醚(2ml)中的外消旋的(2R，S)(+/-)2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸(200mg)，及不同的醇(1.2当量)与20mg Lipozyme IM(得自NovoN或disk的固定化的商品米赫根毛霉脂肪酶)于25℃下一起摇动。243小时之后，通过手性CCE方法2和梯度HPLC方法3对反应混合物进行分析。
起始酸的转化率和ee
醇 剩余的R-酸(ee％) 产物酯(％)
4，4，4，-三氟丁醇     40     39
2-(甲硫基)乙醇     28     36
5-己烯-1-醇     64     23
3-羟基丙腈     14     22
3，3-二甲基-1-丁醇     24     14
二甘醇单氯醇     10     12
3-氯-1-丙醇     44     37
2-戊烯-4-基-1-醇(E/Z混合物)     20     19
香茅醇     66     63*
3-环己基-1-丙醇     66     60*
3-苯基丙醇     60     58*
3-(4-羟基苯基)丙醇     66     37
*：数据来源于CE-测量
实施例30
(2S)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸/(2R)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯
向溶解于柠檬酸盐-磷酸盐缓冲液0.1M(400μl)(pH如下所示)中的(2RS)(+/-)2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)-丙酸乙基酯(2.5mg)中，加入蛋白酶2(或曲霉胃蛋白酶I)，该蛋白酶2来源于表达在米曲霉中的棘孢曲霉且包括米曲霉分泌的酶(WO95/02044；H和book of Enzymes，Barrett，Rawlings，和Woessner Eds.，1998，Academic Press ref.1 chap.294)(100μl，1mg蛋白质/ml的最终浓度)。室温下，摇动该反应混合物并于不同时间进行分析。通过梯度HPLC方法1并通过手性HPLC方法5对反应混合物进行分析。
时间        pH5        pH6         pH7
％产物 ％ee产物 ％产物 ％ee产物 ％产物 ％ee产物
3h     40     99     41     99     41     98
3h30     42     99     43     99     43     99
4h     44     99     45     98     45     99
4h30     45     99     46     99     46     99
实施例31
(2S)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸/(2R)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯
向溶解于柠檬酸盐-磷酸盐缓冲液0.1M pH5(400μl)中的(2RS)(+/-)2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯(2.5mg)中，加入蛋白酶2(或曲霉胃蛋白酶I)，该蛋白酶2来源于表达在米曲霉中的棘孢曲霉且包括米曲霉分泌的酶(WO95/02044；H和book of Proteolytic Enzymes，Barrett，Rawlings，和Woessner Eds.，1998，Academic Press ref.1 chap.294)(100μl，1mg蛋白质/ml的最终浓度)。在下面所示温度下摇动反应混合物，并于不同时间进行分析。通过梯度HPLC方法1并通过手性HPLC方法5对反应混合物进行分析。
时间          20℃         30℃
％产物 ％ee产物 ％产物 ％ee产物
3h     n.d     n.d     46     99
3h30     42     99     47     99
4h     43     99     49     99
4h30     45     99     48     98
5h     46     99     n.d     n.d
5h30     48     99     n.d     n.d
6h     48     99     n.d     n.d
实施例32
(2S)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸正癸基酯/(2R)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯
将(2RS)(+/-)2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯(5mg)加到包含米赫根毛霉脂肪酶Lipozym IM(得自Novo N或disk的固定化的商品米赫根毛霉脂肪酶)(10mg)，正癸醇8μl，庚烷0.5ml和4分子筛的溶液中。室温下，摇动该反应混合物并于不同时间进行分析。通过梯度HPLC方法2并通过手性HPLC方法4对反应混合物进行分析。
原料的转化率：
时间/小时     2h
产物酸(％)     46
癸基酯(ee)     87
乙基酯(ee)     78
实施例33
(2S)3-(4-羟基苯基)-2-异丙氧基丙酸/(2R)-3-(4-羟基苯基)-2-异丙氧基丙酸乙基酯
向(+/-)(2RS)-3-(4-羟基苯基)-2-异丙氧基丙酸乙基酯(0.25ml含量为2mg/ml的50mM pH7磷酸盐缓冲液和乙腈(9∶1)的溶液)中加入酶(数量如下所示)，该酶稀释于50mM pH7磷酸盐缓冲液(缓冲液的体积，如总的反应混合物体积为0.5ml)中。室温下，摇动该反应混合物并于不同时间进行分析。通过梯度HPLC方法1并通过手性CE方法2对反应混合物进行分析。
原料的转化率：
酶的来源 酶数量  反应时间   ％水解    ee酸    ee酯
米曲酶a 11.0mg   40min   47％   88％   nd
米曲酶或棘孢曲霉b 1.0mg   50min   43％ ≈100％   76％
尖孢镰孢c 1.9mg   7h15min   37％   93％   59％
  9h   42％   91％   76％
  21h   53％   88％ ≈100％
棘孢曲霉d 3.8mg   5h   45％ ≈100％   81％
黑曲霉e 25ul   50min   49％   92％   89％
棘孢曲霉f 50ul   15min   50％   89％   nd
米曲霉g 1.5mg   45min   49％   91％   nd
米曲霉h 11.0mg   1h   44％   95％   98％
棘孢曲霉i 2.4mg   34h30min   43％   96％   64％
黑色曲霉和棘曲霉j 2ul   3h10min   51％   90％   94％
a来源于米曲霉的蛋白酶2；b蛋白酶2(或曲霉胃蛋白酶I)，其来源于表达在米曲霉中的棘孢曲霉且包括米曲霉分泌的酶(WO95/02044；H和book ofProteolytic Enzymes，Barrett，Rawlings，和Woessner Eds.，1998，AcademicPress ref.1 chap.294)；c类胰蛋白酶的蛋白酶，其来源于表达在米曲霉中的尖孢镰孢且包含米曲霉分泌的酶(Swissprot AC＝P35049和/或EMBL ID＝AC＝S63827)；dRheozyme，来源于棘孢曲霉的果胶甲基酯酶；e来源于黑色曲霉的Novozyme 188(Novo N或disk)；f来源于棘孢曲霉的Pectinex Ultra SP-L(Novo N或disk)；gAlp蛋白酶(或或yzin)，其来源于表达在米曲霉中的米曲霉且包含米曲霉分泌的酶(Swissprot AC＝P12547；H和book of ProteolyticEnzymes，Barrett，Rawlings，和Woessner Eds.，1998，Academic Press ref.1chap.105)；h来源于米曲霉的Kojizyme 500MG；i蛋白酶1(或曲霉胃蛋白酶II)，其来源于表达在米曲霉中的棘孢曲霉且包括米曲霉分泌的酶(WO95/02044；H和book of Proteolytic Enzymes，Barrett，Rawlings，和Woessner Eds.，1998，Academic Press ref.1 chap.327)；j来源于黑色曲霉和棘孢曲霉的Pectinex AFP L-2(Novo N或disk)。
实施例34
(2S)2-丁氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸/(2R)2-丁氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸丁基酯
向(2RS)(+/-)2-丁氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸丁基酯(0.25ml含量为2mg/ml的50mM pH7磷酸盐缓冲液和丙酮(7∶3)的溶液)中加入酶(数量如下所示)，该酶稀释于50mM pH7磷酸盐缓冲液(缓冲液的体积例如总的反应混合物体积为0.5ml)中。室温下，摇动该反应混合物并于不同时间进行分析。通过梯度HPLC方法1并通过手性CE方法2对反应混合物进行分析。
原料的转化率：
酶的来源   酶数量  反应时间  ％水解   ee酸
米曲霉或棘孢曲霉a   1.0mg   50min   47％   95％
尖孢镰孢b   1.9mg   17h   53％   67％
棘孢曲霉c   3.8mg   49h   42％   98％
黑色曲霉d   25μl   4h30min   47％   99％
棘孢曲霉e   50μl   1h   44％   98％
米曲霉f   1.5mg   35min   50％   96％
a蛋白酶2(或曲霉胃蛋白酶I)，来源于表达在米曲霉中的棘孢曲霉且包括米曲霉分泌的酶(WO95/02044；H和book of Proteolytic Enzymes，Barrett，Rawlings，和Woessner Eds.，1998，Academic Press ref.1 chap.294)；b类胰蛋白酶的蛋白酶，来源于表达在米曲霉中的尖孢镰孢且包含米曲霉分泌的酶(Swissprot AC＝P35049和/或EMBL ID＝AC＝S63827)；cRheozyme，来源于棘孢曲霉的果胶甲基酯酶；d来源于黑色曲霉的Novozyme 188(Novo N或disk)；e来源于棘孢曲霉的Pectinex Ultra SP-L(Novo N或disk)；fAlp蛋白酶(或或yzin)，来源于表达在米曲霉中的米曲霉且包含米曲霉分泌的酶(SwissprotAC＝P12547；H和book of Proteolytic Enzymes，Barrett，Rawlings，和Woessner Eds.，1998，Academic Press ref.1 chap.105)。
实施例35
(2RS)-2-丁氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸与醇的酯化
将溶解于3ml叔丁基甲基醚(TMBE)中的(2RS)(+/-)2-丁氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸(10mg)及相应的醇(12当量)与10mg Lipozyme IM(得自Novo N或disk的固定化的商品米赫根毛霉脂肪酶)于30℃一起摇动。通过CCE方法2于不同时间对反应混合物进行分析。
21和43小时之后剩余酸的转化率和ee：
醇   产物酯21h(％)   (ee)酸21h(％)   产物酯43h(％)   (ee)酸43h(％)    产物酯120h(％)    (ee)酸120h(％)
甲醇     47     64     61     74     n.d.     n.d.
乙醇     35     44     52     70     n.d.     n.d.
1-丙醇     35     40     55     74     n.d.     n.d.
2-丙醇     n.d.     n.d.     n.d.     n.d.     16     14
1-己醇     24     26     43     56     n.d.     n.d.
1-癸醇     23     32     44     66     n.d.     n.d.
实施例36
(2RS)3-(4-羟基苯基)-2-异丙氧基丙酸与醇的酯化
将溶解于3ml叔丁基甲基醚(TMBE)中的(2RS)(+/-)3-(4-羟基苯基)-2-异丙氧基丙酸(10mg)和相应的醇(12当量)与10mg Lipozyme IM(得自Novo N或disk的固定化的商品米赫根毛霉脂肪酶)于30℃一起摇动。通过CCE方法2于不同时间对反应混合物进行分析。
21和43小时之后剩余酸的转化率和ee：
醇     产物酯21h(％)     (ee)酸21h(％)   产物酯43h(％)     (ee)酸43h(％)
甲醇     25     36     41     70
乙醇     28     40     44     72
1-丙醇     15     18     31     44
1-己醇     16     16     30     36
1-癸醇     16     18     32     40
实施例37
(2S)2-(己氧基)-3-(4-羟基苯基)丙酸/(2R)2-(己氧基)-3-(4-羟基苯基)丙酸乙基酯
向(2RS)(+/-)2-己氧基-3-(4-羟基苯基)-丙酸乙基酯(0.25ml含量为2mg/ml的50mM pH7磷酸盐缓冲液和丙酮(8∶2)的溶液)中加入酶(数量如下所示)，该酶稀释于50mM pH7磷酸盐缓冲液(缓冲液体积例如总的反应混合物的体积为0.5ml)中。室温下，摇动该反应混合物并于不同时间进行分析。通过梯度HPLC方法1并通过手性CE方法3对反应混合物进行分析。
原料的转化率：
酶的来源   酶数量 反应时间 ％水解   ee酸
米曲霉或棘孢曲霉a   1.25mg   2h30   44％   95％
黑色曲霉b   40μl   1h   45％   99％
棘孢曲霉c   40μl   1h20   42％   98％
a蛋白酶2(或曲霉胃蛋白酶I)，来源于表达在米曲霉中的棘孢曲霉且包括米曲霉分泌的酶(WO95/02044；H和book of Proteolytic Enzymes，Barrett，Rawlings，和Woessner Eds.，1998，Academic Press ref.1 chap.294)；b来源于黑色曲霉的Novozyme 188(Novo N或disk)；c来源于棘孢曲霉的PectinexUltra SP-L(Novo N或disk)。
实施例38
(2RS)2-(己氧基)-3-(4-羟基苯基)丙酸与醇的酯化
将溶解于3ml叔丁基甲基醚(TMBE)中的(2RS)(+/-)2-(己氧基)-3-(4-羟基苯基)丙酸(15mg)和相应的醇(12当量)与10mg Lipozyme IM(得自Novo N或disk的固定化的商品米赫根毛霉脂肪酶)于40℃一起摇动。通过CCE方法3于不同时间对反应混合物进行分析。
19小时之后剩余酸的转化率和ee：
醇     产物酯19h(％)     (ee)酯19h(％)     (ee)酸19h(％)
乙醇     38     32     48
1-丙醇     38     n.d.     50
1-己醇     n.d.     n.d.     46
1-癸醇     n.d.     n.d.     60
实施例39
(2S)3-(4-羟基苯基)-2-(4-苯基丁氧基)丙酸/(2R)3-(4-羟基苯基)-2-(4-苯基丁氧基)丙酸乙基酯
向(2R)(+/-)3-(4-羟基苯基)-2-(4-苯基丁氧基)丙酸乙基酯(0.25ml含量为2mg/ml的50mM pH7磷酸盐缓冲液和丙酮(7∶3)的溶液)中加入酶(数量如下所示)，该酶稀释于50mM pH7磷酸盐缓冲液(缓冲液体积如总的反应混合物体积为0.5ml)中。室温下，摇动该反应混合物并于不同时间进行分析。通过梯度HPLC方法1并通过手性CE方法3对反应混合物进行分析。
原料的转化率：
酶的来源   酶数量 反应时间   ％水解   ee酸
米曲霉或棘孢曲霉a    1.25mg     11h     34％   96％
黑色曲霉b    80μl     1h30     44％   96％
棘孢曲霉c    100μl     1h45     39％ ＞99％
a蛋白酶2(或曲霉胃蛋白酶I)，来源于表达在米曲霉中的棘孢曲霉且包括米曲霉分泌的酶(WO95/02044；H和book of Proteolytic Enzymes，Barrett，Rawlings，和Woessner Eds.，1998，Academic Press ref.1 chap.294)；b来源于黑色曲霉的Novozyme 188(Novo N或disk)；c来源于棘孢曲霉的PectinexUltra SP-L(Novo N或disk)。
实施例40
(2RS)3-(4-羟基苯基)-2-(4-苯基丁氧基)丙酸与醇的酯化
将溶解于3ml叔丁基甲基醚(TMBE)中的(2RS)(+/-)3-(4-羟基苯基)-2-(4-苯基丁氧基)丙酸(15mg)和相应的醇(12当量)与10mg Lipozyme IM(得自Novo N或disk的固定化的商品米赫根毛霉脂肪酶)于40℃一起摇动。通过CCE方法3于不同时间对反应混合物进行分析。
19小时之后剩余酸的转化率和ee：
醇 产物酯19h(％) (ee)酯19h(％) (ee)酸19h(％)
乙醇     33     20     48
1-丙醇     25     28     50
1-己醇     n.d.     n.d.     55
1-癸醇     n.d.     n.d.     56

Claims (166)

1.一种以高于其它对应异构体的速度将外消旋的或以对应异构富集的底物(I)，(IV)和(VII)的两种对应异构体之一转化成(III)，(VI)和(IX)，以生成可以从其中分离出产物混合物(II)与(III)，(V)与(VI)及(VIII)与(IX)的反应混合物的方法，该方法包括将外消旋或以对应异构体富集的式(I)的酯的两种对应异构体之一通过酶以高于其它对应异构体的速度进行水解或酯交换，以得到酯(II)和酸(III)或两种不同的酯(V)和(VI)，二者均具有增加了的对应异构体纯度，以及通过酶催化酯化外消旋或以对应异构体富集的酸(VII)以得到对应异构体纯度均增加了的酯(IX)和酸(VIII)的方法，其特征在于下列方法：
方法1其中外消旋或以对应异构体富集的(I)的两种对应异构体之一在溶剂中被酶以高于其它对应异构体的速度水解，得到酸(III)和酯(II)的产物混合物，二者的对应异构体的纯度均增加了，
其中R1被定义为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-CF3，-CN，-OH，-SH，-COOH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，-SCF3，-OCF3，-CONH2，-CSNH2，Z，-NRXRY，其中X和Y被独立地定义为氢或C1-6-烷基，或者R1任选地被苯基或苯氧基所取代，其中该苯基或苯氧基任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，-CN，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-SCF3，-OCF3，-CONH2或-CSNH2；和
R4为直链或支链的C1-10-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，直链或支链的C4-10-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-CF3，-CN，-OH，-SH，-COOH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，-SCF3，-OCF3，-CONH2，-CSNH2，Z，-NRXRY，其中X和Y被独立地定义为氢或C1-6-烷基，或者R4任选地被苯基或苯氧基所取代，其中该苯基或苯氧基任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，-CN，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-SCF3，-OCF3，-CONH2或-CSNH2；和
Z为5元或6元的杂环基，该杂环基的碳或氮原子上任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，-CN，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-SCF3，-OCF3，-CONH2，-CSNH2，苯基，苄基或噻吩基，或该杂环基中的碳原子与氧原子一起形成羰基，或该杂环基任选地与苯基稠合；或者
方法2
Figure A0081291000031
其中外消旋或以对应异构体富集的(IV)的两种对应异构体之一在包含适宜醇的溶剂中被酶以高于其它对应异构体的速度进行酯交换，得到两种不同酯(V)和(VI)的产物混合物，二者的对应异构体的纯度均增加了，
其中R1被定义为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-CF3，-CN，-OH，-SH，-COOH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，-SCF3，-OCF3，-CONH2，-CSNH2，Z，-NRXRY，其中X和Y被独立地定义为氢或C1-6-烷基，或者R1任选地被苯基或苯氧基所取代，其中该苯基或苯氧基任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，-CN，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-SCF3，-OCF3，-CONH2或-CSNH2，且其中R2如R1那样定义，条件是R2与原料中的R1不同；和
R4为直链或支链的C1-10-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，直链或支链的C4-10-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-CF3，-CN，-OH，-SH，-COOH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，-SCF3，-OCF3，-CONH2，-CSNH2，Z，-NRXRY，其中X和Y被独立地定义为氢或C1-6-烷基，或者R4任选地被苯基或苯氧基所取代，其中该苯基或苯氧基任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，-CN，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-SCF3，-OCF3，-CONH2或-CSNH2；和
Z为5元或6元的杂环基，该杂环基的碳或氮原子上任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，-CN，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-SCF3，-OCF3，-CONH2，-CSNH2，苯基，苄基或噻吩基，或该杂环基中的碳原子与氧原子一起形成羰基，或该杂环基任选地与苯基稠合；或者
方法3
Figure A0081291000051
其中外消旋的或以对应异构体富集的(VII)的两种对应异构体之一在包含适宜醇的溶剂中被酶以高于其它对应异构体的速度进行酯化，得到酸(VIII)和酯(IX)的产物混合物，二者的对应异构体的纯度均增加了，
其中R3被定义为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-CF3，-CN，-OH，-SH，-COOH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，-SCF3，-OCF3，-CONH2，-CSNH2，Z，-NRXRY，其中X和Y被独立地定义为氢或C1-6-烷基，或者R3任选地被苯基或苯氧基取代，其中该苯基或苯氧基任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，-CN，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-SCF3，-OCF3，-CONH2或-CSNH2；和
R4为直链或支链的C1-10-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，直链或支链的C4-10-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-CF3，-CN，-OH，-SH，-COOH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，-SCF3，-OCF3，-CONH2，-CSNH2，Z，-NRXRY，其中X和Y被独立地定义为氢或C1-6-烷基，或者R4任选地被苯基或苯氧基所取代，其中该苯基或苯氧基任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，-CN，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-SCF3，-OCF3，-CONH2或-CSNH2；和
Z为5元或6元的杂环基，该杂环基的碳或氮原子上任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，-CN，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-SCF3，-OCF3，-CONH2，-CSNH2，苯基，苄基或噻吩基，或该杂环基中的碳原子与氧原子一起形成羰基，或者该杂环基任选地与苯基稠合。
2.权利要求1的方法，其中R1为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-CF3，-OH，-SH，-COOH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，-CONH2，Z，-NRXRY，其中X和Y被独立地定义为氢或C1-6-烷基，或者R1任选地被苯基或苯氧基所取代，其中该苯基或苯氧基任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-CONH2；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，直链或支链的C4-10-烯炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，-COOH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，Z，苯基或苯氧基，其中该苯基或苯氧基任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-CONH2；和
Z为5元或6元的杂环基，该杂环基的碳或氮原子上任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-CONH2，-CSNH2，苯基，苄基或噻吩基，或该杂环基中的碳原子与氧原子一起形成羰基，或者该杂环基任选地与苯基稠合。
3.前述权利要求中任一项的方法，其中R2为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-CF3，-OH，-SH，-COOH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，-CONH2，Z，-NRXRY，其中X和Y被独立地定义为氢或C1-6-烷基，或者R2任选地被苯基或苯氧基所取代，其中该苯基或苯氧基任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-CONH2；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，直链或支链的C4-10-烯炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，-COOH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，Z，苯基或苯氧基，其中该苯基或苯氧基任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-CONH2；和
Z为5元或6元的杂环基，该杂环基的碳或氮原子上任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-CONH2，-CSNH2，苯基，苄基或噻吩基，或该杂环基中的碳原子与氧原子一起形成羰基，或者该杂环基任选地与苯基稠合。
4.前述权利要求中任一项的方法，其中R3为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-CF3，-OH，-SH，-COOH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，-CONH2，Z，-NRXRY，其中X和Y被独立地定义为氢或C1-6-烷基，或者R3任选地被苯基或苯氧基所取代，其中该苯基或苯氧基任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-CONH2；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，直链或支链的C4-10-烯炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，-COOH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，Z，苯基或苯氧基，其中该苯基或苯氧基任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-CONH2；和
Z为5元或6元的杂环基，该杂环基的碳或氮原子上任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-CONH2，-CSNH2，苯基，苄基或噻吩基，或该杂环基中的碳原子与氧原子一起形成羰基，或者该杂环基任选地与苯基稠合。
5.前述权利要求中任一项的方法，其中R1为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，Z，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，或者R1任选地被苯基或苯氧基所取代；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，直链或支链的C4-10-烯炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，Z，苯基或苯氧基；和
Z为5元或6元的杂环基，或者该杂环基任选地与苯基稠合。
6.前述权利要求中任一项的方法，其中R2为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，Z，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，或者R2任选地被苯基或苯氧基所取代；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，直链或支链的C4-10-烯炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，Z，苯基或苯氧基；和
Z为5元或6元的杂环基，或者该杂环基任选地与苯基稠合。
7.前述权利要求中任一项的方法，其中R3为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，Z，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，或者R3任选地被苯基或苯氧基所取代；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，直链或支链的C4-10-烯炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，Z，苯基或苯氧基；和
Z为5元或6元的杂环基，或者该杂环基任选地与苯基稠合。
8.前述权利要求中任一项的方法，其中R1为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：-OH，-SH，Z，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，Z，苯基或苯氧基；和
Z为5元或6元的杂环基。
9.前述权利要求中任一项的方法，其中R2为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：-OH，-SH，Z，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基Z，苯基或苯氧基；和
Z为5元或6元的杂环基。
10.前述权利要求中任一项的方法，其中R3为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：-OH，-SH，Z，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，Z，苯基或苯氧基；和
Z为5元或6元的杂环基。
11.前述权利要求中任一项的方法，其中R1为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：-OH，-SH，Z，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，Z，苯基或苯氧基；和
Z为噻吩，吡咯，呋喃，噁唑，吡唑，咪唑，噻唑，嘌呤，三唑，噻二唑，吡啶，喹啉，异喹啉，菲啶，芳庚并[b]吡啶，哒嗪，噌啉，2，3-二氮杂萘，吡嗪，嘧啶，喹唑啉或1，3，5-三嗪。
12.前述权利要求中任一项的方法，其中R2为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：-OH，-SH，Z，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，Z，苯基或苯氧基；和
Z为噻吩，吡咯，呋喃，噁唑，吡唑，咪唑，噻唑，嘌呤，三唑，噻二唑，吡啶，喹啉，异喹啉，菲啶，芳庚并[b]吡啶，哒嗪，噌啉，2，3-二氮杂萘，吡嗪，嘧啶，喹唑啉或1，3，5-三嗪。
13.前述权利要求中任一项的方法，其中R3为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：-OH，-SH，Z，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，Z，苯基或苯氧基；和
Z为噻吩，吡咯，呋喃，噁唑，吡唑，咪唑，噻唑，嘌呤，三唑，噻二唑，吡啶，喹啉，异喹啉，菲啶，芳庚并[b]吡啶，哒嗪，噌啉，2，3-二氮杂萘，吡嗪，嘧啶，喹唑啉或1，3，5-三嗪。
14.前述权利要求中任一项的方法，其中R1为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：-OH，-SH，Z，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，Z，苯基或苯氧基；和
Z为噻吩，吡咯，呋喃，咪唑，三唑，吡啶，喹啉或异喹啉。
15.前述权利要求中任一项的方法，其中R2为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：-OH，-SH，Z，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基Z，苯基或苯氧基；和
Z为噻吩，吡咯，呋喃，咪唑，三唑，吡啶，喹啉或异喹啉。
16.前述权利要求中任一项的方法，其中R3为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：-OH，-SH，Z，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，Z，苯基或苯氧基；和
Z为噻吩，吡咯，呋喃，咪唑，三唑，吡啶，喹啉或异喹啉。
17.前述权利要求中任一项的方法，其中R1为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链的C2-12-链烯基，直链或支链的C2-12-炔基，直链或支链的C4-10-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基或苯基。
18.前述权利要求中任一项的方法，其中R2为直链或支链的C4-20-烷基，直链或支链的C6-30-链烯基，直链或支链的C6-30-炔基，直链或支链的C8-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基或苯基。
19.前述权利要求中任一项的方法，其中R3为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链的C2-12-链烯基，直链或支链的C2-12-炔基，直链或支链的C4-10-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基或苯基。
20.前述权利要求中任一项的方法，其中R1为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链的C2-12-链烯基，直链或支链的C2-12-炔基，直链或支链的C4-10-烯炔基；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基或苯基。
21.前述权利要求中任一项的方法，其中R2为直链或支链的C4-20-烷基，直链或支链的C6-30-链烯基，直链或支链的C6-30-炔基，直链或支链的C8-30-烯炔基；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基或苯基。
22.前述权利要求中任一项的方法，其中R3为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链的C2-12-链烯基，直链或支链的C2-12-炔基，直链或支链的C4-10-烯炔基；和
R4为直链或支链的C1-12-烷基或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基或苯基。
23.前述权利要求中任一项的方法，其中R1为直链或支链的C1-12-烷基，其任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
R4为直链或支链的C1-10-烷基或者R4任选地被下列基团所取代：C1-6-烷氧基或苯基。
24.前述权利要求中任一项的方法，其中R2为直链或支链的C4-20-烷基，其任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
R4为直链或支链的C1-10-烷基或者R4任选地被下列基团所取代：C1-6-烷氧基或苯基。
25.前述权利要求中任一项的方法，其中R3为直链或支链的C1-12-烷基，其任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
R4为直链或支链的C1-10-烷基或者R4任选地被下列基团所取代：C1-6-烷氧基或苯基。
26.前述权利要求中任一项的方法，其中R1为直链或支链的C1-12-烷基，其任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：C1-6-烷氧基；和
R4为直链或支链的C1-8-烷基或者R4任选地被苯基所取代。
27.前述权利要求中任一项的方法，其中R2为直链或支链的C4-20-烷基，其任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：C1-6-烷氧基；和
R4为直链或支链的C1-8-烷基或者R4任选地被苯基所取代。
28.前述权利要求中任一项的方法，其中R3为直链或支链的C1-12-烷基，其任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：C1-6-烷氧基；和
R4为直链或支链的C1-8-烷基或者R4任选地被苯基所取代。
29.前述权利要求中任一项的方法，其中R1为直链或支链的C1-10-烷基，其任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：C1-6-烷氧基；和
R4为直链或支链的C1-8-烷基或者R4任选地被苯基所取代。
30.前述权利要求中任一项的方法，其中R2为直链或支链的C8-20-烷基，其任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：C1-6-烷氧基；和
R4为直链或支链的C1-8-烷基或者R4任选地苯基所取代。
31.前述权利要求中任一项的方法，其中R3为直链或支链的C1-10-烷基，其任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：C1-6-烷氧基；和
R4为直链或支链的C1-8-烷基或者R4任选地被苯基所取代。
32.前述权利要求中任一项的方法，其中R1为甲基，乙基，1-丙基，2-丙基，1-己基，或者乙氧基乙基；和
R4为乙基，2-丙基，1-丁基，1-己基或4-苯基-1-丁基。
33.前述权利要求中任一项的方法，其中R2为正丁基，正己基，正癸基或者3-甲基-1-丁基；和
R4为乙基，2-丙基，1-丁基，1-己基或4-苯基-1-丁基。
34.前述权利要求中任一项的方法，其中R3为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链的C2-12-链烯基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-CN，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
R4为乙基，2-丙基，1-丁基，1-己基，4-苯基-1-丁基。
35.前述权利要求中任一项的方法，其中R3为甲基，乙基，1-丙基，2-丙基，1-丁基，1-戊基，1-己基，1-庚基，1-辛基，1-癸基，1-十二烷基(1-docecyl)，3-甲基-1-丁基，4-甲基-1-戊基，乙氧基乙基，4，4，4-三氟丁基，2-(甲硫基)乙基，5-己烯-1-基，3-氰基丙基，3，3-二甲基-1-丁基，3-氯-1-丙基，香茅基，3-环己基-1-丙基，3-苯基丙基，3-(4-羟基苯基)丙基；和
R4为乙基，2-丙基，1-丁基，1-己基，4-苯基-1-丁基。
36.前述权利要求中任一项的方法，其中R3为甲基，乙基，1-丙基，2-丙基，1-丁基，1-戊基，1-己基，1-庚基，1-辛基，1-癸基，1-十二烷基，3-甲基-1-丁基，4-甲基-1-戊基，乙氧基乙基，3，3-二甲基-1-丁基，3-环己基-1-丙基，3-苯基丙基；和
R4为乙基，2-丙基，1-丁基，1-己基，4-苯基-1-丁基。
37.前述权利要求中任一项的方法，其中R2为甲基，乙基，1-丙基，2-丙基，1-丁基，或者乙氧基乙基，且R1和R3独立地为直链或支链的C6-30-烷基；和
R4为乙基，异丙基和正丁基，正己基或4-苯基-1-丁基。
38.前述权利要求中任一项的方法，其中R1和R3独立地为甲基，乙基，正丙基，2-丙基，丁基，或者乙氧基乙基，且R2为直链或支链的C6-30-烷基；和
R4为乙基，异丙基，正丁基，正己基或4-苯基-1-丁基。
39.前述权利要求中任一项的方法，其中R1为甲基，乙基，1-丙基，2-丙基，1-己基，或者乙氧基乙基，且R2为正丁基，正己基，正癸基或者3-甲基-1-丁基；和
R4为乙基，异丙基，正丁基，正己基或4-苯基-1-丁基。
40.前述权利要求中任一项的方法，其中R2为甲基，乙基，1-丙基，2-丙基，1-己基，或者乙氧基乙基，且R1为正丁基，正己基，正癸基或者3-甲基-1-丁基；和
R4为乙基，异丙基和正丁基，正己基或4-苯基-1-丁基。
41.前述权利要求中任一项的方法，其中R1为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-CF3，-OH，-SH，-COOH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，-CONH2，Z，-NRXRY，其中X和Y被独立地定义为氢或C1-6-烷基，或者R1任选地被苯基或苯氧基所取代，其中该苯基或苯氧基任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-CONH2；和
Z为5元或6元的杂环基，该杂环基的碳或氮原子上任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-CONH2，-CSNH2，苯基，苄基或噻吩基，或该杂环基中的碳原子与氧原子一起形成羰基，或者该杂环基任选地与苯基稠合。
42.前述权利要求中任一项的方法，其中R2为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-CF3，-OH，-SH，-COOH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，-CONH2，Z，-NRXRY，其中X和Y被独立地定义为氢或C1-6-烷基，或者R2任选地被苯基或苯氧基所取代，其中该苯基或苯氧基任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-CONH2；和
Z为5元或6元的杂环基，该杂环基的碳或氮原子上任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-CONH2，-CSNH2，苯基，苄基或噻吩基，或该杂环基中的碳原子与氧原子一起形成羰基，或者该杂环基任选地与苯基稠合。
43.前述权利要求中任一项的方法，其中R3为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-CF3，-OH，-SH，-COOH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，-CONH2，Z，-NRXRY，其中X和Y被独立地定义为氢或C1-6-烷基，或者R3任选地被苯基或苯氧基所取代，其中该苯基或苯氧基任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-CONH2；和
Z为5元或6元的杂环基，该杂环基的碳或氮原子上任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-CONH2，-CSNH2，苯基，苄基或噻吩基，或该杂环基中的碳原子与氧原子一起形成羰基，或者该杂环基任选地与苯基稠合。
44.前述权利要求中任一项的方法，其中R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，直链或支链的C4-10-烯炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，-COOH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，Z，苯基或苯氧基，其中该苯基或苯氧基任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-CONH2；和
Z为5元或6元的杂环基，该杂环基的碳或氮原子上任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，-SH，-COOH，-NRXRY，-CF3，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，C1-4-烷硫基，-CONH2，-CSNH2，苯基，苄基或噻吩基，或该杂环基中的碳原子与氧原子一起形成羰基，或者该杂环基任选地与苯基稠合。
45.前述权利要求中任一项的方法，其中R1为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，Z，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，或者R1任选地被苯基或苯氧基所取代；和
Z为5元或6元的杂环基，或者该杂环基任选地与苯基稠合。
46.前述权利要求中任一项的方法，其中R2为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，Z，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，或者R2任选地被苯基或苯氧基所取代；和
Z为5元或6元的杂环基，或者该杂环基任选地与苯基稠合。
47.前述权利要求中任一项的方法，其中R3为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-OH，Z，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，或者R3任选地被苯基或苯氧基所取代；和
Z为5元或6元的杂环基，或者该杂环基任选地与苯基稠合。
48.前述权利要求中任一项的方法，其中R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，直链或支链的C4-10-烯炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，Z，苯基或苯氧基；和
Z为5元或6元的杂环基，或者该杂环基任选地与苯基稠合。
49.前述权利要求中任一项的方法，其中R1为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：-OH，-SH，Z，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
Z为5元或6元的杂环基。
50.前述权利要求中任一项的方法，其中R2为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：-OH，-SH，Z，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
Z为5元或6元的杂环基。
51.前述权利要求中任一项的方法，其中R3为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：-OH，-SH，Z，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
Z为5元或6元的杂环基。
52.前述权利要求中任一项的方法，其中R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，Z，苯基或苯氧基；和
Z为5元或6元的杂环基。
53.前述权利要求中任一项的方法，其中R1为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：-OH，-SH，Z，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
Z为噻吩，吡咯，呋喃，噁唑，吡唑，咪唑，噻唑，嘌呤，三唑，噻二唑，吡啶，喹啉，异喹啉，菲啶，芳庚并[b]吡啶，哒嗪，噌啉，2，3-二氮杂萘，吡嗪，嘧啶，喹唑啉或1，3，5-三嗪。
54.前述权利要求中任一项的方法，其中R2为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：-OH，-SH，Z，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
Z为噻吩，吡咯，呋喃，噁唑，吡唑，咪唑，噻唑，嘌呤，三唑，噻二唑，吡啶，喹啉，异喹啉，菲啶，芳庚并[b]吡啶，哒嗪，噌啉，2，3-二氮杂萘，吡嗪，嘧啶，喹唑啉或1，3，5-三嗪。
55.前述权利要求中任一项的方法，其中R3为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：-OH，-SH，Z，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
Z为噻吩，吡咯，呋喃，噁唑，吡唑，咪唑，噻唑，嘌呤，三唑，噻二唑，吡啶，喹啉，异喹啉，菲啶，芳庚并[b]吡啶，哒嗪，噌啉，2，3-二氮杂萘，吡嗪，嘧啶，喹唑啉或1，3，5-三嗪。
56.前述权利要求中任一项的方法，其中R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，Z，苯基或苯氧基；和
Z为噻吩，吡咯，呋喃，噁唑，吡唑，咪唑，噻唑，嘌呤，三唑，噻二唑，吡啶，喹啉，异喹啉，菲啶，芳庚并[b]吡啶，哒嗪，噌啉，2，3-二氮杂萘，吡嗪，嘧啶，喹唑啉或1，3，5-三嗪。
57.前述权利要求中任一项的方法，其中R1为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：-OH，-SH，Z，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
Z为噻吩，吡咯，呋喃，咪唑，三唑，吡啶，喹啉或异喹啉。
58.前述权利要求中任一项的方法，其中R2为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：-OH，-SH，Z，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
Z为噻吩，吡咯，呋喃，咪唑，三唑，吡啶，喹啉或异喹啉。
59.前述权利要求中任一项的方法，其中R3为直链或支链的C1-30-烷基，直链或支链的C2-30-链烯基，直链或支链的C2-30-炔基，直链或支链的C4-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：-OH，-SH，Z，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基；和
Z为噻吩，吡咯，呋喃，咪唑，三唑，吡啶，喹啉或异喹啉。
60.前述权利要求中任一项的方法，其中R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基，Z，苯基或苯氧基；和
Z为噻吩，吡咯，呋喃，咪唑，三唑，吡啶，喹啉或异喹啉。
61.前述权利要求中任一项的方法，其中R1为直链或支链的C1-6-烷基，直链或支链的C2-8-链烯基，直链或支链的C2-8-炔基，直链或支链的C4-10-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基。
62.前述权利要求中任一项的方法，其中R2为直链或支链的C4-20-烷基，直链或支链的C6-30-链烯基，直链或支链的C6-30-炔基，直链或支链的C8-30-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基。
63.前述权利要求中任一项的方法，其中R3为直链或支链的C1-6-烷基，直链或支链的C2-8-链烯基，直链或支链的C2-8-炔基，直链或支链的C4-10-烯炔基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：CF3，-OH，-SH，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基。
64.前述权利要求中任一项的方法，其中R4为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链C2-10-链烯基，直链或支链的C2-10-炔基，或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基或苯基。
65.前述权利要求中任一项的方法，其中R1为直链或支链的C1-6-烷基，直链或支链的C2-8-链烯基，直链或支链的C2-8-炔基，直链或支链的C4-10-烯炔基。
66.前述权利要求中任一项的方法，其中R2为直链或支链的C4-20-烷基，直链或支链的C6-30-链烯基，直链或支链的C6-30-炔基，直链或支链的C8-30-烯炔基。
67.前述权利要求中任一项的方法，其中R3为直链或支链的C1-6-烷基，直链或支链的C2-8-链烯基，直链或支链的C2-8-炔基，直链或支链的C4-10-烯炔基。
68.前述权利要求中任一项的方法，其中R4为直链或支链的C1-12-烷基或者R4任选地被下列基团所取代：CF3，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基或苯基。
69.前述权利要求中任一项的方法，其中R1为直链或支链的C1-10-烷基，其任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基。
70.前述权利要求中任一项的方法，其中R2为直链或支链的C4-20-烷基，其任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基。
71.前述权利要求中任一项的方法，其中R3为直链或支链的C1-6-烷基，其任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基。
72.前述权利要求中任一项的方法，其中R4为直链或支链的C1-10-烷基或者R4任选地被下列基团所取代：C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基或苯基。
73.前述权利要求中任一项的方法，其中R1为直链或支链的C1-12-烷基，其任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：C1-6-烷氧基。
74.前述权利要求中任一项的方法，其中R2为直链或支链的C4-20-烷基，其任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：C1-6-烷氧基。
75.前述权利要求中任一项的方法，其中R3为直链或支链的C1-12-烷基，其任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：C1-6-烷氧基。
76.前述权利要求中任一项的方法，其中R4为直链或支链的C1-10-烷基或者R4任选地被下列基团所取代：C1-6-烷氧基或苯基。
77.前述权利要求中任一项的方法，其中R4为直链或支链的C1-8-烷基或者R4任选地被下列基团所取代：C1-6-烷氧基或苯基。
78.前述权利要求中任一项的方法，其中R4为直链或支链的C1-8-烷基或者R4任选地苯基所取代。
79.前述权利要求中任一项的方法，其中R1为甲基，乙基，1-丙基，2-丙基，1-己基，或者乙氧基乙基。
80.前述权利要求中任一项的方法，其中R2为正丁基，正己基，正癸基或者3-甲基-1-丁基。
81.前述权利要求中任一项的方法，其中R3为直链或支链的C1-12-烷基，直链或支链的C2-12-链烯基，其中每个基团任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素，-CN，C1-6-烷氧基，C1-6-烷硫基。
82.前述权利要求中任一项的方法，其中R3为甲基，乙基，1-丙基，2-丙基，1-丁基，1-戊基，1-己基，1-庚基，1-辛基，1-癸基，1-十二烷基，3-甲基-1-丁基，4-甲基-1-戊基，乙氧基乙基，4，4，4-三氟丁基，2-(甲硫基)乙基，5-己烯-1-基，3-氰基丙基，3，3-二甲基-1-丁基，3-氯-1-丙基，香茅基，3-环己基-1-丙基，3-苯基丙基，3-(4-羟基苯基)丙基。
83.前述权利要求中任一项的方法，其中R3为甲基，乙基，1-丙基，2-丙基，1-丁基，1-戊基，1-己基，1-庚基，1-辛基，1-癸基，1-十二烷基，3-甲基-1-丁基，4-甲基-1-戊基，乙氧基乙基，3，3-二甲基-1-丁基，3-环己基-1-丙基，或者3-苯基丙基。
84.前述权利要求中任一项的方法，其中R3为甲基，乙基，1-丙基，2-丙基，1-丁基，1-戊基，1-己基，1-庚基，1-辛基，1-癸基，或者1-十二烷基。
85.前述权利要求中任一项的方法，其中R2为甲基，乙基，1-丙基，2-丙基，1-丁基，或者乙氧基乙基，且R1和R3独立地为直链或支链的C6-30-烷基。
86.前述权利要求中任一项的方法，其中R1和R3独立地为甲基，乙基，正丙基，2-丙基，丁基，或者乙氧基乙基，且R2为直链或支链的C6-30-烷基。
87.前述权利要求中任一项的方法，其中R1为甲基，乙基，1-丙基，2-丙基，1-己基，或者乙氧基乙基，且R2为正丁基，正己基，正癸基或者3-甲基-1-丁基。
88.前述权利要求中任一项的方法，其中R2为甲基，乙基，1-丙基，2-丙基，1-己基，或者乙氧基乙基，且R1为正丁基，正己基，正癸基或者3-甲基-1-丁基。
89.前述权利要求中任一项的方法，其中R2为甲基，乙基，正丙基，2-丙基，丁基，或者乙氧基乙基，且R1和R3独立地为直链或支链的C6-30-烷基。
90.前述权利要求中任一项的方法，其中R4为乙基，2-丙基，1-丁基，1-己基或4-苯基-1-丁基。
91.前述权利要求中任一项的方法，其中方法1的酶催化水解在下列条件下进行：pH 3-9，5-80℃，于缓冲或非缓冲的水中，该水中任选地添加可与水混溶的有机共溶剂。
92.前述权利要求中任一项的方法，其中方法1的酶催化水解在下列条件下进行：pH 3-9，10-50℃，于缓冲或非缓冲的水中，该水中任选地添加可与水混溶的有机共溶剂。
93.前述权利要求中任一项的方法，其中方法1的酶催化水解在下列条件下进行：pH 3-9，10-50℃，于缓冲或非缓冲的水中，该水中任选地添加可与水混溶的有机共溶剂，例如丙酮，四氢呋喃，2-丙醇，乙醇，叔丁醇，二甲基甲酰胺，二甲亚砜。
94.前述权利要求中任一项的方法，其中方法1的酶催化水解在下列条件下进行：pH 3-9，10-50℃，于缓冲或非缓冲的水中，该水中任选地添加可与水混溶的有机共溶剂，该共溶剂选自丙酮，四氢呋喃，2-丙醇，乙醇，叔丁醇，二甲基甲酰胺，二甲亚砜。
95.前述权利要求中任一项的方法，其中方法1的酶催化水解在下列条件下进行：pH 4-8，10-50℃，于缓冲或非缓冲的水中，该水中任选地添加可与水混溶的有机共溶剂。
96.前述权利要求中任一项的方法，其中方法1的酶催化水解在下列条件下进行：pH 4-8，10-50℃，于缓冲或非缓冲的水中，该水中任选地添加可与水混溶的有机共溶剂，例如丙酮，四氢呋喃，2-丙醇，乙醇，叔丁醇，二甲基甲酰胺，二甲亚砜。
97.前述权利要求中任一项的方法，其中方法1的酶催化水解在下列条件下进行：pH 4-8，10-50℃，于缓冲或非缓冲的水中，该水中任选地添加可与水混溶的有机共溶剂，该共溶剂选自丙酮，四氢呋喃，2-丙醇，乙醇，叔丁醇，二甲基甲酰胺，二甲亚砜。
98.前述权利要求中任一项的方法，其中方法1的酶催化水解在下列条件下进行：pH 5-8，20-40℃，于缓冲或非缓冲的水中，该水中任选地添加可与水混溶的有机共溶剂。
99.前述权利要求中任一项的方法，其中方法1的酶催化水解在下列条件下进行：pH 5-8，20-40℃，于缓冲或非缓冲的水中，该水中任选地添加可与水混溶的有机共溶剂，例如丙酮，四氢呋喃，2-丙醇，乙醇，叔丁醇，二甲基甲酰胺，二甲亚砜。
100.前述权利要求中任一项的方法，其中方法1的酶催化水解在下列条件下进行：pH 5-8，20-40℃，于缓冲或非缓冲的水中，该水中任选地添加可与水混溶的有机共溶剂，该共溶剂选自丙酮，四氢呋喃，2-丙醇，乙醇，叔丁醇，二甲基甲酰胺，二甲亚砜。
101.前述权利要求中任一项的方法，其中方法1的酶催化水解在下列条件下进行：pH 5-8，20-30℃，于缓冲或非缓冲的水中，该水中任选地添加可与水混溶的有机共溶剂。
102.前述权利要求中任一项的方法，其中方法1的酶催化水解在下列条件下进行：pH 5-8，20-30℃，于缓冲或非缓冲的水中，该水中任选地添加可与水混溶的有机共溶剂，例如丙酮，四氢呋喃，2-丙醇，乙醇，叔丁醇，二甲基甲酰胺，二甲亚砜。
103.前述权利要求中任一项的方法，其中方法1的酶催化水解在下列条件下进行：pH 5-8，20-30℃，于缓冲或非缓冲的水中，该水中任选地添加可与水混溶的有机共溶剂，该共溶剂选自丙酮，四氢呋喃，2-丙醇，乙醇，叔丁醇，二甲基甲酰胺，二甲亚砜。
104.前述权利要求中任一项的方法，其中方法1的酶催化水解在下列条件下进行：pH 5-7，20-30℃，于缓冲或非缓冲的水中，该水中任选地添加可与水混溶的有机共溶剂。
105.前述权利要求中任一项的方法，其中方法1的酶催化水解在下列条件下进行：pH 5-7，20-30℃，于缓冲或非缓冲的水中，该水中任选地添加可与水混溶的有机共溶剂，例如丙酮，四氢呋喃，2-丙醇，乙醇，叔丁醇，二甲基甲酰胺，二甲亚砜。
106.前述权利要求中任一项的方法，其中方法1的酶催化水解在下列条件下进行：pH 5-7，20-30℃，于缓冲或非缓冲的水中，该水中任选地添加可与水混溶的有机共溶剂，该共溶剂选自丙酮，四氢呋喃，2-丙醇，乙醇，叔丁醇，二甲基甲酰胺，二甲亚砜。
107.前述权利要求中任一项的方法，其中方法3的酶催化酯化在下列条件下进行：15-90℃，于醚或烃或酮或卤化烃中。
108.前述权利要求中任一项的方法，其中方法3的酶催化酯化在下列条件下进行：15-90℃，于醚或烃中。
109.前述权利要求中任一项的方法，其中方法3的酶催化酯化在下列条件下进行：15-90℃，于醇中。
110.前述权利要求中任一项的方法，其中方法3的酶催化酯化在下列条件下进行：15-90℃，于醇中，该醇用作酯化反应的亲核体。
111.前述权利要求中任一项的方法，其中方法3的酶催化酯化在下列条件下进行：15-90℃，于甲醇或2-丙醇或乙醇或1-丙醇中。
112.前述权利要求中任一项的方法，其中方法3的酶催化酯化在下列条件下进行：30-85℃，于醚或烃中。
113.前述权利要求中任一项的方法，其中方法3的酶催化酯化在下列条件下进行：30-85℃，于醚如叔丁基甲基醚中。
114.前述权利要求中任一项的方法，其中方法3的酶催化酯化在下列条件下进行：50-60℃，于叔丁基甲基醚中。
115.前述权利要求中任一项的方法，其中所使用的术语“溶剂”包括有机溶剂，有机溶剂的混合物，有机溶剂或有机溶剂的混合物与含盐或不含盐缓冲或非缓冲的水，含盐的缓冲或非缓冲的水，包含有机相和水相的两相体系，乳浊液和悬浮液。
116.前述权利要求中任一项的方法，其中所使用的术语“溶剂”包括有机溶剂，有机溶剂的混合物，有机溶剂或有机溶剂的混合物与含盐或不含盐缓冲或非缓冲的水，含盐的缓冲或非缓冲的水，包含有机相和水相的两相体系，乳浊液和悬浮液，其中“有机溶剂”是指例如烃如己烷，环己烷，庚烷，甲苯，二甲苯，酮如叔丁基甲基酮，甲基异丙基酮，2-丁酮，丙酮，4-甲基-2-戊酮，醚如乙醚，叔丁基甲基醚，异丙基甲基醚，二噁烷，二丁基醚，二氧戊环，茴香醚，及四氢呋喃，腈如乙腈和3-羟基丙腈，极性溶剂如二甲亚砜，N，N-二甲基甲酰胺，N-甲基吡咯烷酮，环丁砜，二甲基丙基脲(DMPU)，乙二醛，酸如乙酸和甲酸，醛如乙醛，卤化烃如二氯甲烷，三氯乙烷，氯仿，氯苯，二氯苯，及二氯乙烷，酯如乙酸乙酯，乙酸异丙酯，或乙酸叔丁酯，直链或支链的醇如2-甲基-2-丁醇，叔丁醇，甲醇，乙醇，正丙醇，正丁醇，及异丙醇。
117.前述权利要求中任一项的方法，其中所使用的术语“溶剂”包括缓冲的(如磷酸盐，乙酸盐)，非缓冲的水，或者缓冲或非缓冲的包含与水混溶的有机溶剂的水，所述有机溶剂如丙酮，四氢呋喃，2-丙醇，乙醇，叔丁醇，二甲基甲酰胺，二甲亚砜，或2-甲基-2-戊酮或者醚，如叔丁基甲基醚，其被水饱和或不被水饱和。
118.前述权利要求中任一项的方法，其中所使用的术语“溶剂”包括有机溶剂，有机溶剂的混合物，有机溶剂或有机溶剂的混合物与含盐或不含盐缓冲或非缓冲的水，含盐的缓冲或非缓冲的水，包含有机相和水相的两相体系，乳浊液和悬浮液，其中“有机溶剂”是指例如烃如己烷和庚烷，酮如叔丁基甲基酮，2-丁酮和丙酮，2-甲基-2-戊酮，醚如乙醚，叔丁基甲基醚，异丙基甲基醚和四氢呋喃，腈如乙腈和3-羟基丙腈，二甲亚砜，N，N-二甲基甲酰胺，N-甲基吡咯烷酮，环丁砜，二甲基丙基脲(DMPU)，乙二醛，酸如乙酸和甲酸，醛如乙醛，卤化烃如二氯甲烷和二氯乙烷，酯如乙酸叔丁酯，直链或支链的醇如2-甲基-2-丁醇，叔丁醇，甲醇，乙醇，丙醇及异丙醇。
119.前述权利要求中任一项的方法，其中所使用的术语“溶剂”包括缓冲(如磷酸盐，乙酸盐)，非缓冲的水，或者缓冲或非缓冲的包含有机溶剂的水，所述有机溶剂如乙腈或2-甲基-2-戊酮。
120.前述权利要求中任一项的方法，其中所述的酶为蛋白酶。
121.前述权利要求中任一项的方法，其中该蛋白酶为商品蛋白酶如Alcalase，Esperase，Rennilase，Durazym，Everlase，Kannase，MAXATASE或Properase。
122.前述权利要求中任一项的方法，其中该蛋白酶来源于生物体拟诺卡氏菌属，曲霉菌属，根霉菌属，嗜碱芽孢杆菌，蜡状芽孢杆菌，N.natto，普通芽孢杆菌，蕈状芽孢杆菌，拟诺卡氏菌属的菌种或达松维尔拟诺卡氏菌。
123.前述权利要求中任一项的方法，其中丝氨酸蛋白酶来源于枯草芽孢杆菌蛋白酶的突变体。
124.前述权利要求中任一项的方法，其中该蛋白酶为Neutrase(Zn)。
125.前述权利要求中任一项的方法，其中该蛋白酶酶制剂为BactosolWO或BactosolSI，Toyozyme，或者Proteinase K。
126.前述权利要求中任一项的方法，其中该蛋白酶为蛋白酶A或蛋白酶B，
蛋白酶2(或曲霉胃蛋白酶I)，来源于棘孢曲霉，
Kannase，Savinase的变体，来源于Bacillus clausii，
类胰蛋白酶的蛋白酶，来源于尖孢镰孢，
Alp蛋白酶(或或yzin)，来源于米曲霉，
蛋白酶2A，来源于米曲霉，
C-组分，来源于地衣形芽孢杆菌，
蛋白酶1(或曲霉胃蛋白酶II)，来源于棘孢曲霉，
NpI蛋白酶(或中性蛋白酶I或Fungalysin)，来源于米曲霉，
NpII蛋白酶，来源于米曲霉，
胃蛋白酶A蛋白酶，来源于米曲霉，
PD 498蛋白酶，来源于芽孢杆菌属的菌种，
甘氨酸特异性蛋白酶，来源于番木瓜，
II型-糜蛋白酶，来源于牛胰腺，
VII型-糜蛋白酶，来源于牛胰腺，
蛋白酶2A，来源于米曲霉，
蛋白酶，来源于恶臭假单胞菌，例如Novozym 180，
蛋白酶6，来源于米曲霉，
Flavourzyme，来源于米曲霉。
127.前述权利要求中任一项的方法，其中该蛋白酶是由曲霉菌属，芽孢杆菌，镰孢属，番木瓜，牛胰腺制备的或从中分离出来的。
128.前述权利要求中任一项的方法，其中该蛋白酶是由棘孢曲霉，Bacillus clausii，尖孢镰孢，黑色曲霉，米曲霉，地衣形芽孢杆菌，芽孢杆菌属的细菌，番木瓜，牛胰腺制备的或从中分离出来的。
129.前述权利要求中任一项的方法，其中所述的酶为脂肪酶。
130.前述权利要求中任一项的方法，其中所述的酶为脂肪酶，其选自酵母如假丝酵母属脂肪酶，细菌如假单胞菌属或芽孢杆菌脂肪酶，或真菌如腐质霉属或根霉菌属脂肪酶。
131.前述权利要求中任一项的方法，其中该脂肪酶为米赫根毛霉脂肪酶(LipozymeTM)，Thermomyces lanuginosa脂肪酶(LipolaseTM)，Humicolainsolens脂肪酶，Humicola lanuginosa脂肪酶，施氏假单胞菌(如ATCC 19.154)脂肪酶，洋葱伯克霍尔德氏菌脂肪酶，C和ida antarctica脂肪酶A或B，或来源于下列的脂肪酶：rGPL，Absidia blakesleena，伞枝梨头霉，茄病镰孢，尖孢镰孢，圆弧青霉，皮落青霉，扩展青霉，胶粘红酵母，Thiarosp或ellaphaseolina，小孢根霉，Sp或obolomyces shibatanus，出芽短柄霉，异常汉逊氏酵母，Geotricum penicillatum，弯曲乳杆菌，热杀索丝菌，Coprinus cinerius，Trichoderma harzanium，Trichoderma reesei，日本根霉或Pseudomonasplantari。
132.前述权利要求中任一项的方法，其中该脂肪酶为脂肪酶P″Amano，Amano-CES或NRRLB 3673。
133.前述权利要求中任一项的方法，其中所述的酶为角质酶。
134.前述权利要求中任一项的方法，其中该该角质酶来源于生物体茄病镰孢或Humicola insolens。
135.前述权利要求中任一项的方法，其中所述的酶为磷脂酶。
136.前述权利要求中任一项的方法，其中所述的酶为酯酶。
137.前述权利要求中任一项的方法，其中该酯酶为来源于兔肝脏的酯酶Sigma E-9636，来源于猪肝脏的酯酶Sigma E-7259，来源于肥猪胰腺的酯酶，来源于肥猪肝脏的脂酶，来源于电鳗的V-S型酯酶，或来源于恶臭假单胞菌的酯酶。
138.前述权利要求中任一项的方法，其中该酯酶为来源于米曲霉的阿魏酸酯酶，或来源于米曲霉中表达的棘孢曲霉的乙酰木聚糖酯酶。
139.前述权利要求中任一项的方法，其中该酯酶由曲霉属制备。
140.前述权利要求中任一项的方法，其中该酯酶由棘孢曲霉制备。
141.前述权利要求中任一项的方法，其中该酯酶由米曲霉制备。
142.前述权利要求中任一项的方法，其中该酯酶由黑色曲霉制备。
143.前述权利要求中任一项的方法，其中该酯酶由假单胞菌属制备。
144.前述权利要求中任一项的方法，其中该酯酶来源于表达在棘孢曲霉或米曲霉或黑色曲霉中的商品酶制剂。
145.前述权利要求中任一项的方法，其中该酯酶为PectinexTM UltraSP-L，PectinexTM BE，FlavourzymeTM，KojizymeTM 500 MG，ShearzymeTM500L，PectinexTM AFP L-2，PectinexTM SMASH，Novozyme 188或者Rheozyme。
146.前述权利要求中任一项的方法，其中该酯酶得自米曲霉的发酵。
147.前述权利要求中任一项的方法，其中该酯酶得自棘孢曲霉的发酵。
148.前述权利要求中任一项的方法，其中所述的酶为水解酶混合物，其包含两种或更多种水解酶，如蛋白酶，脂肪酶，酯酶，角质酶，或磷脂酶，或者三种或更多种蛋白酶，脂肪酶，酯酶，角质酶，或磷脂酶。
149.前述权利要求中任一项的方法，其中关于方法1，该酶是由根霉菌属，腐质霉属，芽孢杆菌属，牛胰腺，假单胞菌属，曲霉菌属，胰蛋白酶或镰孢属制备的或从中分离出来的。
150.前述权利要求中任一项的方法，其中关于方法1，该酶为酯酶。
151.前述权利要求中任一项的方法，其中关于方法1，该酶是由曲霉菌属制备的。
152.前述权利要求中任一项的方法，其中关于方法1，该酶是由棘孢曲霉制备的。
153.前述权利要求中任一项的方法，其中关于方法1，该酶是由米曲霉制备的。
154.前述权利要求中任一项的方法，其中关于方法1，该酶是由黑色曲霉制备的。
155.前述权利要求中任一项的方法，其中关于方法1，该酶来源于表达在棘孢曲霉或米曲霉或黑色曲霉中的商品酶制剂。
156.前述权利要求中任一项的方法，其中关于方法1，该酶为PectinexTMUltra SP-L，PectinexTM BE，FlavourzymeTM，KojizymeTM 500 MG，ShearzymeTM 500L，PectinexTM AFP L-2，PectinexTM SMASH，Novozyme 188或者Rheozyme。
157.前述权利要求中任一项的方法，其中关于方法1，该酶得自米曲霉的发酵。
158.前述权利要求中任一项的方法，其中关于方法1，该酶得自棘孢曲霉的发酵。
159.前述权利要求中任一项的方法，其中关于方法1，该酶选自：
米赫根毛霉脂肪酶，
Humicola lanuginosa脂肪酶，
Esperase(地衣形芽孢杆菌蛋白酶)，
Savinase(Bacillus clausii蛋白酶)，
α-糜蛋白酶，来源于牛胰腺，
蛋白酶，来源于恶臭假单胞菌，例如Novozym 180，
蛋白酶6，来源于曲霉菌属的菌种，
Flavourzyme，来源于米曲霉，
蛋白酶1(或曲霉胃蛋白酶II)，来源于米曲霉中表达的棘孢曲霉，还包含米曲霉分泌的酶，
蛋白酶2(或曲霉胃蛋白酶I)，来源于米曲霉中表达的棘孢曲霉，还包含米曲霉分泌的酶，
NpI蛋白酶(或中性蛋白酶I或Fungalysin)，来源于米曲霉中表达的米曲霉还包含米曲霉分泌的酶，
类胰蛋白酶的蛋白酶，来源于米曲霉中表达的尖孢镰孢还包含米曲霉分泌的酶，
Rheozyme，一种来源于棘孢曲霉的果胶甲基酯酶，
Alp蛋白酶(或或yzin)，来源于米曲霉中表达的米曲霉还包含米曲霉分泌的酶，
蛋白酶2A，来源于米曲霉，
Pectinex Ultra SP-L，来源于棘孢曲霉，
Pectinex BE 3L，来源于黑色曲霉，
Kojizyme 500MG，来源于米曲霉，
阿魏酸酯酶，来源于米曲霉，
乙酰木聚糖酯酶，来源于棘孢曲霉，
Shearzyme 500L，来源于棘孢曲霉，
Pectinex AFP L-2，
Pectinex SMASH，
Novozym 188，来源于黑色曲霉，
Kannase，a variant of Savinase，来源于Bacillus clausii，
角质酶，来源于Humicola insolens，
水解酶混合物，得自米曲霉的发酵。
160.前述权利要求中任一项的方法，其中关于方法1，该酶选自：
蛋白酶1(或曲霉胃蛋白酶II)，来源于米曲霉中表达的棘孢曲霉还包含米曲霉分泌的酶，
蛋白酶2(或曲霉胃蛋白酶I)，来源于米曲霉中表达的棘孢曲霉还包含米曲霉分泌的酶，
蛋白酶NpI，来源于棘孢曲霉，
NpI蛋白酶(或中性蛋白酶I或Fungalysin)，来源于米曲霉中表达的米曲霉还包含米曲霉分泌的酶，
类胰蛋白酶的蛋白酶，来源于米曲霉中表达的尖孢镰孢还包含米曲霉分泌的酶，
Rheozyme，一种来源于棘孢曲霉的果胶甲基酯酶，
Alp蛋白酶(或或yzin)，来源于米曲霉中表达的米曲霉还包含米曲霉分泌的酶，
蛋白酶2A，来源于米曲霉，
Pectinex Ultra SP-L，来源于棘孢曲霉，
Pectinex BE 3L，来源于黑色曲霉，
Kojizyme 500MG，来源于米曲霉，
阿魏酸酯酶，来源于米曲霉，
乙酰木聚糖酯酶，来源于棘孢曲霉，
Shearzyme 500L，来源于棘孢曲霉，
Pectinex AFP L-2，
Pectinex SMASH，
Novozym 188，来源于黑色曲霉，
Kannase，a variant of Savinase，来源于Bacillus clausii，
角质酶，来源于Humicola insolens，
水解酶混合物，得自米曲霉的发酵。
161.前述权利要求中任一项的方法，其中关于方法1，该酶选自：
蛋白酶1(或曲霉胃蛋白酶II)，来源于米曲霉中表达的棘孢曲霉还包含米曲霉分泌的酶，
蛋白酶2(或曲霉胃蛋白酶I)，来源于米曲霉中表达的棘孢曲霉还包含米曲霉分泌的酶，
蛋白酶NpI，来源于棘孢曲霉，
NpI蛋白酶(或中性蛋白酶I或Fungalysin)，来源于米曲霉中表达的米曲霉还包含米曲霉分泌的酶，
类胰蛋白酶的蛋白酶，来源于米曲霉中表达的尖孢镰孢还包含米曲霉分泌的酶，
Rheozyme，一种来源于棘孢曲霉的果胶甲基酯酶，
Alp蛋白酶(或或yzin)，来源于米曲霉中表达的米曲霉还包含米曲霉分泌的酶，
蛋白酶2A，来源于米曲霉，
Pectinex Ultra SP-L，来源于棘孢曲霉，
Pectinex BE 3L，来源于黑色曲霉，
Kojizyme 500MG，来源于米曲霉，
阿魏酸酯酶，来源于米曲霉，
乙酰木聚糖酯酶，来源于棘孢曲霉，
Shearzyme 500L，来源于棘孢曲霉，
Pectinex AFP L-2，
Pectinex SMASH，
Novozym 188，来源于黑色曲霉，
水解酶混合物，得自米曲霉的发酵。
162.前述权利要求中任一项的方法，其中关于方法2，该酶来源于根霉菌属家族。
163.前述权利要求中任一项的方法，其中关于方法3，该酶来源于根霉菌属家族。
164.前述权利要求中任一项的方法，其中关于方法2，该酶为米赫根毛霉脂肪酶。
165.前述权利要求中任一项的方法，其中关于方法3，该酶为米赫根毛霉脂肪酶。
166.前述权利要求中任一项的方法，其中关于方法1，R1为直链或支链的C1-6-烷基或乙氧基乙基，所述的酶为来源于棘孢曲霉或米曲霉的水解酶或酯酶，反应混合物的pH为4～8，该反应混合物包含水和0～15％的有机溶剂，且温度为15～40℃。
167.前述权利要求中任一项的方法，其中关于方法1，R1为直链或支链的C1-3-烷基或乙氧基乙基，所述的酶为来源于棘孢曲霉或米曲霉的水解酶或酯酶，反应混合物的pH为5～7，该反应混合物包含水和0～5％的有机溶剂，且温度为20～00℃。
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