CN1357633A - 动物用快速药敏试纸的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种动物用快速药敏试纸的制备方法,它包括制备灭菌滤纸片、配制药品溶液、制备药敏试纸等工艺步骤。与现有技术相比,本发明工艺简单,成本较低,使用本发明产品进行测试,操作方便、结果准确,减少了盲目、超量、乱用药带来的经济损失,降低了畜禽产品药物残留对人体的危害,为合理用药提供了最直接的依据。

Description

动物用快速药敏试纸的制备方法

本发明涉及药敏试纸的制备方法，尤其涉及一种动物用快速药敏试纸的制备方法。

目前，国内绝大多数食用畜禽都是采用集约化圈养和笼养方式饲养，防疫治病已成为畜禽饲养过程中最重要的问题。近年来，由于在畜牧业养殖中抗菌药物的滥用，耐药菌株也随之大大增加，如鸡大肠杆菌病、鸡白痢、慢性呼吸道病、葡萄球菌病和绿脓杆菌病及仔猪黄痢、白痢等疾病，因耐药性的产生，同时因养殖户缺乏对有效抗菌药物选择的正确判断，在使用中盲目给药现象相当普遍。这种现象造成的主要后果是：1.畜牧养殖户增加了不必要的经济损失；2.增加畜禽的耐药性，使防治成本上升；3.抗菌药物在畜禽动物体内超标残留严重，人们食用后对人体有相当的损害作用。为了解决上述问题，一些高校及科研机构在实验室里采用钢圈法等研究方法进行了药敏试验，但这些方法制备烦琐，使用条件苛刻，无法解决广大养殖户面临的实际问题。

本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种能快速、准确地判断动物体内致病菌对抗菌药物敏感性的动物用快速药敏试纸的制备方法。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：动物用快速药敏试纸的制备方法，其特点是，包括灭菌滤纸片的制备、药品溶液的制备、药敏试纸的制备的工艺过程，其具体工艺步骤如下：

第一步，灭菌滤纸片的制备：

A.取原型定性滤纸，将它加工成直径4～8mm双面带有文字标记的滤纸片，称量分装到西林瓶中，每瓶100～150张；

B.将分装后的滤纸片在100～140℃下干热灭菌1～2小时；

第二步：药品溶液的制备：

根据致病菌对抗菌药物的敏感性及血液中的药物浓度，将抗菌药物经过称量、溶解、定容、稀释配成一定浓度的溶液。

第三步，药敏试纸的制备：

A.用吸管将配置好的药液加到已灭菌的滤纸片上，每100张加药液0.5～0.8毫升，完全浸透后取出，在37～40℃下烘干20～24小时；

B.在无菌环境中将已烘干的药敏试纸置入药瓶中，用蜡封口密封；

C.将药瓶贴上标签并进行外包装，4～10℃下保存备用。

所述的抗菌药物选自以下药物中的一种，这些药物包括：

A.青霉素钠盐：1000～2000iu/ml；

B.氨苄青霉素钠：2～4mg/ml；

C.硫酸链霉素：200～300iu/ml；

D.硫酸卡那霉素：0.2～0.4mg/ml；

E.硫酸庆大霉素：100～300iu/ml；

F.硫酸丁胺卡那霉素：0.05～0.1mg/ml；

G.硫酸新霉素：0.06～0.15mg/ml；

H.乳糖酸红霉素：0.2～0.4mg/ml；

I.氯霉素：0.3～0.6mg/ml；

J.利高霉素：0.4～0.8mg/ml；

K.盐酸强力霉素：1～2mg/ml；

L.盐酸环丙沙星：0.3～0.6mg/ml；

M.盐酸恩诺杀星：0.3～0.6mg/ml；

N.烟酸诺氟杀星：0.3～0.6mg/ml；

O.盐酸林可霉素：0.3～0.6mg/ml；

P.磺胺类：4～8mg/ml；

G.氧氟沙星：0.3～0.5mg/ml；

R.杆菌肽锌：0.1～0.3mg/ml；

S.硫酸粘杆菌素：0.2～0.4mg/ml；

T.延胡索酸泰妙菌素：0.05～0.1mg/ml。

通过实施上述技术方案，使本发明获得了一种能快速、准确地判断的物体内致病菌的药敏试纸，它把只有在相当技术和物质条件下才能进行的、复杂的药敏试验过程，简化成一般养殖户都能掌握的快速、简便的测试方法。本发明操作简单、使用方便、结果准确、费用低廉，适用于养殖生产上各种动物感染性的疾病中致病菌对抗菌药物敏感性的测定，使用本发明产品进行测试，减少了盲目、超量、乱用药带来的损失，降低了畜禽产品药物残留的危害，为合理用药提供最直接的依据。

下面通过具体实施例，对本发明作进一步详细说明。

实施例1

本实施例为一种动物体内致病菌对青霉素钠盐敏感的药敏试纸的制备方法。它分为以下工艺步骤：

第一步，滤纸片的制备，首先取原型定性滤纸，采用喷印技术将它加工成双面带有“青霉素钠盐”的标记的直径为6mm的滤纸小圆片，称量分装到西林瓶中，每瓶100张，然后在120℃下干热灭菌2小时；第二步，药品溶液的制备，称取青霉素钠盐的标准品8×10⁴IU，加少量磷酸缓冲液将药品溶解后，置入50ml定量瓶中定容，然后将它稀释到1600IU/ml；第三步，药敏试纸的制备，首先用吸管将配置好的青霉素钠盐药液加到上述已灭菌的滤纸片上，每100张加药液0.6ml，完全浸透后取出，在38℃下烘干24小时，然后在灭菌环境中将已烘干的药敏试纸置入药瓶中，用蜡封口密封，最后在药瓶上贴上标有青霉素钠盐的字样后进行外包装，置入冰箱，在4～10℃下保存备用。

本发明制得的药敏试纸一般要结合测定用培养基、测定用器皿一起使用，为使养殖户使用方便，也可以将药敏试纸、培养基、测定器皿装在一个包装盒内。下面分别介绍一下它们的制备方法：(1)测定用培养基的制备，培养基分为普通营养琼脂培养基、血清营养琼脂培养基和马铃薯琼脂培养基，培养基一般是置于培养基皿中，培养基的制备又可分为以下几步，首先购得标准营养琼脂产品，然后进行溶解、加热，再在消毒环境中均匀置于培养基皿中冷却定型，如有特殊要求，可加入附加物质，如血清等，最后装入灭菌包装袋后密封，置入包装盒。(2)测定用器皿的制备，测定用器皿包括玻棒、吸管、瓶塞等，要求在医药管理部门定点的医药玻璃制品厂、橡胶制品厂和塑料制品厂选购，这些器皿经清洗后灭菌、干燥，并在灭菌环境中组合包装，置入包装盒。(3)药敏试纸测定包装盒的制备，取一个具有一定容积的盒体，依次装入药敏试纸、培养基皿、测试器皿以及使用说明书等，外盒封闭后即完成。

为了更加清楚地说明本发明，下面简述一下依本发明制得的药敏试纸盒的使用方法。

1.取出培养基盒，取其中一袋培养基皿拆封；

2.接种致病菌，将可疑的致病菌接种到已做好的平皿培养基上；

3.药敏试纸的放置，接种细菌后，从瓶中取出药敏试纸置于皿上，每皿最多可均匀放置药敏试纸7张；

4.培养，将已放置药敏试纸的平皿培养基在37℃的恒温箱中培养24小时；

5.观察判定，判定标准：

抑菌圈直径(mm)	判定标准
		≥1511～15mm≤10mm	高度敏感中度敏感耐药

各种致病菌对不同的抗菌药物的敏感性不同，同一致病菌的不同菌株对不同抗菌药物的敏感性也有差异。分离致病菌经培养后，使用不同药物的药敏试纸对菌群进行敏感测验，以肉眼可明显观察到的抑菌现象，做出菌群对不同抗菌药物的杀伤敏感性的判断，据此药敏试纸测定的结果可提供一个快速合理的给药方案，提高疗效，降低用药成本，为养殖业中预防和治疗感染性疾病找到了一条可靠而科学的途径。

实施例2

本实施例为动物体内致病菌对氨苄青霉素钠敏感的药敏试纸的制备方法。它包括以下工艺步骤：首先取加工成直径为4mm的滤纸片在100℃下干热灭菌2小时，然后取浓度为2mg/ml的氨苄青霉素钠加到已灭菌的滤纸片上，每100张加0.5ml，完全浸透后取出，在37℃下烘干20小时；最后在灭菌环境中将已烘干的药敏试纸置入药瓶中蜡封备用。其余有关工艺与实施例1相同。

实施例3

本实施例为动物体内致病菌对硫酸链霉素敏感的药敏试纸的制备方法。它包括以下工艺步骤：首先取加工成直径为8mm的滤纸片在140℃下干热灭菌1小时，然后取浓度为250iu/ml的硫酸链霉素加到已灭菌的滤纸片上，每100张加0.8ml，完全浸透后取出，在40℃下烘干24小时；最后在灭菌环境中将已烘干的药敏试纸置入药瓶中蜡封备用。其余有关工艺与实施例1相同。

实施例4～20

以下实施例为动物体内致病菌分别对硫酸卡那霉素等17种抗菌药物敏感的药敏试纸的制备方法。

其使用的抗菌药物及其浓度如下表所示：

硫酸卡那霉素	0.2～0.4mg/ml
		硫酸庆大霉素	100～300iu/ml
硫酸丁胺卡那霉素	0.05～0.1mg/ml
		硫酸新霉素	0.06～0.15mg/ml
乳糖酸红霉素	0.2～0.4mg/ml
		氯霉素	0.3～0.6mg/ml
利高霉素	0.4～0.8mg/ml
		盐酸强力霉素	1～2mg/ml
盐酸环丙沙星	0.3～0.6mg/ml
		盐酸恩诺杀星	0.3～0.6mg/ml
烟酸诺氟杀星	0.3～0.6mg/ml
		盐酸林可霉素	0.3～0.6mg/ml
磺胺类	4～8mg/ml
		氧氟沙星	0.3～0.5mg/ml
杆菌肽锌	0.1～0.3mg/ml
		硫酸粘杆菌素	0.2～0.4mg/ml
延胡索酸泰妙菌素	0.05～0.1mg/ml

将上述的抗菌药物加到已灭菌的滤纸片上，其余工艺与实施例1相同。

Claims (2)

1、动物用快速药敏试纸的制备方法，其特征在于，包括灭菌滤纸片的制备、药品溶液的制备、药敏试纸的制备的工艺过程，其具体工艺步骤如下：

第一步，灭菌滤纸片的制备：

A.取原型定性滤纸，将它加工成直径4～8mm双面带有文字标记的滤纸片，称量分装到西林瓶中，每瓶100～150张；

B.将分装后的滤纸片在100～140℃下干热灭菌1～2小时；

第二步：药品溶液的制备：

根据致病菌对抗菌药物的敏感性及血液中的药物浓度，将抗菌药物经过称量、溶解、定容、稀释配成一定浓度的溶液。

第三步，药敏试纸的制备：

A.用吸管将配置好的药液加到已灭菌的滤纸片上，每100张加药液0.5～0.8毫升，完全浸透后取出，在37～40℃下烘干20～24小时；

B.在无菌环境中将已烘干的药敏试纸置入药瓶中，用蜡封口密封；

C.将药瓶贴上标签并进行外包装，4～10℃下保存备用。

2、根据权利要求1所述的动物用快速药敏试纸的制备方法，其特征在于，所述的抗菌药物选自以下药物中的一种，这些药物包括：

A.青霉素钠盐：1000～2000iu/ml；

B.氨苄青霉素钠：2～4mg/ml；

C.硫酸链霉素：200～300iu/ml

D.硫酸卡那霉素：0.2～0.4mg/ml；

E.硫酸庆大霉素：100～300iu/ml；

F.硫酸丁胺卡那霉素：0.05～0.1mg/ml；

G.硫酸新霉素：0.06～0.15mg/ml；

H.乳糖酸红霉素：0.2～0.4mg/ml；

I.氯霉素：0.3～0.6mg/ml；

J.利高霉素：0.4～0.8mg/ml；

K.盐酸强力霉素：1～2mg/ml；

L.盐酸环丙沙星：0.3～0.6mg/ml；

M.盐酸恩诺杀星：0.3～0.6mg/ml；

N.烟酸诺氟杀星：0.3～0.6mg/ml；

O.盐酸林可霉素：0.3～0.6mg/ml；

P.磺胺类：4～8mg/ml；

G.氧氟沙星：0.3～0.5mg/ml；

R.杆菌肽锌：0.1～0.3mg/ml；

S.硫酸粘杆菌素：0.2～0.4mg/ml；

T.延胡索酸泰妙菌素：0.05～0.1mg/ml。