CN104524558A - 一种酶复配制剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种酶复配制剂,包括如下质量份数的组分:溶葡萄球菌酶0.0005~1份,抗菌肽0.0025~1份,醋酸氯已定0.08~1份,山梨醇1~5份,磷酸二氢钠0.01~1份,磷酸氢二钠0.04~1份,香精0.2~1份和蒸馏水80~100份。本发明得到的酶复配制剂具有较宽的抗致病菌谱,具有杀菌效率高,杀菌普广,毒副作用小的优点。本发明还公开了上述酶复配制剂的制备方法,该具有操作简单、可规模化生产的优点。
Description
技术领域
本发明涉及消毒剂领域,具体涉及一种酶复配制剂。
背景技术
随着人们生活水平的提高,对身体健康和个人卫生的要求也越来也高。目前,临床上的病菌感染比较严重,而这些细菌已经对人们的身体健康和生命构成了严重的影响,因此一种能够消灭细菌的的消毒剂是临床上急需的药品。
目前,临床上主要对生命产生影响的细菌有:金黄色葡萄球菌、肺炎球菌、绿脓杆菌、白色念珠菌、大肠杆菌等,这些细菌引起的感染采用常规治疗方法疗效不显著,而且还会改变患者的正常菌种的生态状况,给患者造成了额外的痛苦和经济负担。所以说研制一种杀菌效率高、杀菌普广的消毒剂是临床上亟待解决的问题。
发明内容
针对现有技术存在的上述技术问题,本发明的目的是提供一种酶复配制剂,其具有杀菌效率高,杀菌普广,毒副作用小的优点。
为了解决上述技术问题,本发明采用如下技术方案:
一种酶复配制剂,包括如下质量份数的组分:溶葡萄球菌酶0.0005~1份,抗菌肽0.0025~1份,醋酸氯已定0.08~1份,山梨醇1~5份,磷酸二氢钠0.01~1份,磷酸氢二钠0.04~1份,香精0.2~1份和蒸馏水80~100份。
本方案中,采用溶葡萄球菌酶、抗菌肽和醋酸氯已定作为抗菌组分制备酶复配制剂,其中溶葡萄球菌酶通过裂解细菌的细胞壁,可以达到彻底杀死细菌的目的;醋酸氯已定则可用于灭杀金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌;抗菌肽对革兰氏阴性基阳性细菌均有高效广谱的杀伤作用,将这三种抗菌组分配合使用,使得到的酶复配制剂具有较广的杀菌普,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌等细菌具有较高的灭杀率;而且三种抗菌组分配合使用使每个组分在发挥自身抗菌性能的同时,还能使三种组分发挥协同增效作用,使得到的酶复配制剂具有灭菌效率高,杀菌普广,无毒副作用,患者不会产生耐药性等优点。
本方案中,溶葡萄球菌酶0.0005~1份,抗菌肽0.0025~1份,醋酸氯已定0.08~1份,这样的配比使三种组分一方面对于金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌具有同等强度的灭杀能力,在用于临床应用时,具有抑菌时效长的优点;以此配比制备酶复配制剂,三种抗菌组分可以保持较高的杀菌性能,任何一种组分的缺失,将会使整体得到的消毒凝胶的消毒能力和抗菌时效下降。
本方案中,溶葡萄球菌酶0.0005~1份,抗菌肽0.0025~1份,醋酸氯已定0.08~1份,山梨醇1~5份,磷酸二氢钠0.01~1份,磷酸氢二钠0.04~1份,香精0.2~1份和蒸馏水80~100份;这样的组分配比,溶葡萄球菌酶的溶菌过程中,溶葡萄球菌酶处理后为抗菌肽的作用创造了条件从而使得抗菌肽表现明显的增强效应,使细菌裂解死亡,使二者发挥了协同增效作用,从而最终的酶复配制剂具有较高的杀菌效率。山梨醇可以使溶葡萄球菌酶保持较高活性;磷酸二氢钾和磷酸氢二钾可以使得到的酶复配制剂具有合适的pH值,具有较长的保存时间,有效的保证了杀菌效果,延长了杀菌时效。
作为优化,包括如下质量份数的组分:溶葡萄球菌酶0.5964份,抗菌肽0.5763份,醋酸氯已定0.54份,山梨醇3份,磷酸二氢钠0.2份,磷酸氢二钠0.4份,香精0.6份和蒸馏水90份。
本方案中,各种组分的配比关系是申请人经过多次试验验证后的结果,这样的组分配比:一方面,山梨醇可以保证溶葡萄球菌酶充分的发挥自身的消毒作用并长时间的保持活性;另一方面,溶葡萄球菌酶、抗菌肽和醋酸氯已定三种抗菌组分之间产生协同增效作用,具有抗菌谱广的优点;第三,磷酸二氢钠0.2和磷酸氢二钠0.4份作为缓冲剂,使得到的酶复配制剂的pH值在最适当的范围,保证了中各个组分效能的发挥,同时避免了对患者产生刺激。
作为优化,所述磷酸二氢钠和所述磷酸氢二钠的质量比为1:4。
本方案中,采用质量比为1:1的磷酸二氢钠和所述磷酸氢二钠作为缓冲剂,以调节得到酶复配制剂的酸碱度,一方面,可保证酶复配制剂的pH环境不会发生变化,保证抗菌组分的性能保持稳定,避免因为存储较长的时间使其消毒效果降低。
本发明还提供一种上述酶复配制剂的制备方法,包括如下步骤:
1)将溶葡萄球菌酶、抗菌肽和醋酸氯已定用蒸馏水溶解,混合均匀;
2)将山梨醇用蒸馏水溶解,混合均匀;
3)将磷酸二氢钠和磷酸氢二钠用蒸馏水溶解,混合均匀;
4)将步骤1)、2)和3)制备的溶液搅拌混合均匀,然后加入香精和蒸馏水搅拌,混合均匀后灌装即可。
本方案中,将溶葡萄球菌酶、抗菌肽和醋酸氯已定用蒸馏水溶解,这样可以使抗菌组分混合均匀,并发生协同增效作用;山梨醇用蒸馏水溶解,山梨醇溶解后的溶液与其他组分混合,更容易使各组分之间混合均匀,保证了抗菌组分的活性;磷酸二氢钠和磷酸氢二钠用蒸馏水溶解,将二者配成组分均匀的缓冲液,方便与其他组分混合均匀,从而保证各组分在合适的pH环境中效能的发挥,以及性能的稳定;将步骤1)、2)和3)制备的溶液搅拌混合均匀,然后加入香精和蒸馏水搅拌,这样可以使各个有效组分混合均匀,形成一个抗菌整体,保证了酶复配制剂具有较高的消毒能力,快速的杀菌效率,同时不会使患者产生耐药性。这样的制备方法具有操作简单、可规模化生产的优点。
相比现有技术,本发明具有如下有益效果:
1)将溶葡萄球菌酶、抗菌肽、醋酸氯已定作为抗菌组分配合使用,使得到的酶复配制剂具有较宽的抗致病菌谱,在抗菌活性方面具有显著的协同增强效果,从而抑制病原体繁殖。
2)本发明的酶复配制剂具有抗菌性能稳定,抑菌时效长,对皮肤无刺激的优点。
3)本发明的酶复配制剂中含有溶葡萄球菌酶、抗菌肽、醋酸氯已定、山梨醇、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠香精和蒸馏水,通过各组分之间协同增效作用,使酶复配制剂中的抗菌组分能长时间的保持消毒能力,同时对皮肤上的细菌具有较高的灭菌效率。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步的详细说明。
一、具体实施例
一种溶葡萄球菌复合酶消毒凝胶,包括如下质量份数的组分:一种酶复配制剂,包括如下质量份数的组分:溶葡萄球菌酶0.0005~1份,抗菌肽0.0025~1份,醋酸氯已定0.08~1份,山梨醇1~5份,磷酸二氢钠0.01~1份,磷酸氢二钠0.04~1份,香精0.2~1份和蒸馏水80~100份。如表1所示,其中1#~3#酶复配制剂为采用本发明的技术方案得到的,4#~6#为对比例,各个实施例中的组分配比如表1所示。
表1
组分 | 1# | 2# | 3# | 4# | 5# | 6# |
溶葡萄球菌酶 | 0.0005 | 0.5964 | 1 | 0.5964 | 0 | 0.5964 |
抗菌肽 | 1 | 0.5763 | 0.9976 | 0 | 0.5763 | 15 |
醋酸氯已定 | 0.9 | 0.58 | 0.98 | 0.58 | 0.58 | 0.5763 |
山梨醇 | 1 | 3 | 5 | 3 | 30 | 30 |
磷酸二氢钠 | 0.1 | 0.2 | 0.12 | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
磷酸氢二钠 | 0.4 | 0.4 | 0.48 | 0.4 | 0.4 | 0.4 |
香精 | 0.2 | 0.6 | 1 | 0.6 | 0.6 | 0.6 |
纯净水 | 80 | 90 | 100 | 90 | 90 | 90 |
二、性能检测
1、抑菌测试:
抑菌试验主要采用抑菌圈法测试酶复配制剂剂对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌的抑菌效果,具体试验方法包括如下步骤:
(1)菌悬液的制备:将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌制成5×106cfu/ml的菌悬液;
(2)抑菌片的制备:取表1中制备的1#~6#酶复配制剂20μL,然后分别滴加在无菌纱布上,再将无菌纱布平放于清洁的无菌平皿内,开盖置37℃的温箱中烤干, 或置室温下自然干燥后备用;
(3)阴性对照样片的制备:取无菌纱布4片;每片滴加无菌蒸馏水 20μl,干燥后备用;
(4)试验菌的接种:吸取40μL步骤(1)制备的菌悬液,在营养琼脂培养基基平板表面均匀涂抹,盖好平皿,在室温下干燥 5min;其中营养琼脂培养基的组分为:蛋白胨10g、牛肉膏5g、氯化钠5g、琼脂15g和蒸馏水1000ml,除琼脂外其他成分溶解于蒸馏水中,调节pH值为7.2~7.4,加入琼脂,加热溶解,分装,于121℃ 压力蒸汽灭菌 20min即可使用;
(5)抑菌剂样片贴放:每次试验贴放1个染菌平板,每个平板贴放4片试验样片, 1 片阴性对照样片, 共 5 片。用无菌镊子取样片贴放于平板表面。各样片中心之间相距 25mm以上, 与平板的周缘相距 15 mm 以上。贴放好后,用无菌镊子轻压样片,使其紧贴于平板表面。盖好平皿,置37℃温箱, 培养16h~18h 观察结果,用游标卡尺测量抑菌环的直径 (包括贴片) ,测试结果如表2所示。
表2
细菌种类 | 1# | 2# | 3# | 4# | 5# | 6# |
金黄色葡萄球菌 | 16.1mm | 18.2 mm | 18.3mm | 6.4mm | 5.7mm | 5.9mm |
大肠杆菌 | 16.7mm | 18.7mm | 17.9mm | 6.3mm | 5.4mm | 6.1mm |
白色念珠菌 | 16.9mm | 18.4mm | 17.3mm | 6.5mm | 5.2mm | 5.7mm |
由抑菌试验测试结果可以得知,采用本发明的方法制备的1#~3#酶复配制剂对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌均具有较好的消毒效果,其中抑菌环的直径均大于16mm,符合临床上的抑菌要求;而对比例4#~6#制备的酶复配制剂对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌的抑菌效果不符合临床上的抑菌要求。
2、灭杀微生物试验:
灭杀微生物试验主要测试实施例1~3以及对比例4~6制备的酶复配制剂对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌和大肠杆菌的灭杀效果,具体试验方法包括如下步骤:
(1)将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌配置浓度为5×108cfu/ml的菌悬液;
(2)取4支消毒试验用无菌大试管,先分别在每支无菌大使管中加入0.5ml步骤1)制备的菌悬液,再加入0.5ml有机干扰物质,将二者混合混匀后置于 20℃±1℃ 水浴中 5min,再用无菌吸管吸取实施例1~3制备的酶复配制剂4.0 ml 注入其中,迅速混匀并立即记时;有机干扰物质一般采用3%(W/V)牛血清白蛋白贮存溶液,取0.5ml加入到消毒体系中(稀释10倍),进行消毒试验。
(3)待试验菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌)与酶复配制剂相互作用至预定时间,再吸取0.5ml试验菌与实施例1~3制备的酶复配制剂加于 4.5ml 经灭菌的中和剂中混合均匀;
(4)各无菌大试管与喷剂混合液经加中和剂作用 10min 后,吸取 1.0ml样液,按活菌培养计数方法测定存活菌数,每管样液接种 2 个平皿即可。如平板上生长的菌落数较多时,可进行系列10倍稀释后,再进行活菌培养计数;
(5)同时用稀释液代替酶复配制剂,进行平行试验,作为阳性对照;
(6)所有试验样本均在 37℃ 温箱中培养,对细菌繁殖体培养48h 观察最终结果;对细菌芽孢需培养 72h 观察最终结果;
(7)计算各组的活菌浓度(cfu/ml),并换算为对数值(N),然后按下式计算杀灭对数值:
杀灭对数值 (KL)=对照组平均活菌浓度的对数值(No)-试验组活菌浓度对数值(Nx)
其中计算杀灭对数值时,取小数点后两位值,可以进行数字修约。如果消毒试验组消毒处理后平均生产菌落数,小于等于1时,其杀灭对数值,即大于等于试验前对照组平均活菌浓度的对数值。测试结果如表3所示:
表3
由以上测试结果可知:1#~3#制备的酶复配制剂对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌均具有较高的灭杀效果,其具有细菌灭杀率高、灭杀迅速、灭杀效果好的优点;而对比例4#~6#制备的酶复配制剂,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌的灭杀效果不佳,不符合临床上的灭菌要求。
本发明的上述实施例仅仅是为说明本发明所作的举例,而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说,在上述说明的基础上还可以做出其他不同形式的变化和变动。这里无法对所有的实施方式予以穷举。凡是属于本发明的技术方案所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。
Claims (4)
1.一种酶复配制剂,其特征在于,包括如下质量份数的组分:溶葡萄球菌酶0.0005~1份,抗菌肽0.0025~1份,醋酸氯已定0.08~1份,山梨醇1~5份,磷酸二氢钠0.01~1份,磷酸氢二钠0.04~1份,香精0.2~1份和蒸馏水80~100份。
2.根据权利要求1所述的酶复配制剂,其特征在于,包括如下质量份数的组分:溶葡萄球菌酶0.5964份,抗菌肽0.5763份,醋酸氯已定0.54份,山梨醇3份,磷酸二氢钠0.2份,磷酸氢二钠0.4份,香精0.6份和蒸馏水90份。
3.根据权利要求1所述的酶复配制剂,其特征在于,所述磷酸二氢钠和所述磷酸氢二钠的质量比为1:4。
4.根据权利要求1~3所述的酶复配制剂的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
1)将溶葡萄球菌酶、抗菌肽和醋酸氯已定用蒸馏水溶解,混合均匀;
2)将山梨醇用蒸馏水溶解,混合均匀;
3)将磷酸二氢钠和磷酸氢二钠用蒸馏水溶解,混合均匀;
4)将步骤1)、2)和3)制备的溶液搅拌混合均匀,然后加入香精和蒸馏水搅拌,混合均匀后灌装即可。
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