CN104721812A - 一种溶葡萄球菌复合酶消毒剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种溶葡萄球菌复合酶消毒剂，包括如下质量份数的组分：溶葡萄球菌酶1.1~10份，抗菌肽1.1~10份，醋酸氯已定1.1~10份，山梨醇10~20份，磷酸二氢钠1.1~10份，磷酸氢二钠1.1~10份。该溶葡萄球菌复合酶消毒剂具有消毒效率高、消毒效果好、易于保存、性能稳定的优点。本发明还公开了上述溶葡萄球菌复合酶的制备方法，主要包括：1）将溶葡萄球菌酶、抗菌肽和醋酸氯已定用蒸馏水溶解混合，摇匀；2）将山梨醇加入步骤1）得到的溶液中，摇匀；3）将磷酸二氢钠和磷酸氢二钠溶解于蒸馏水中并搅拌均匀，然后将得到的溶液加入到步骤2）得到的溶液中，摇匀即可。该制备方法具有工艺简单、操作性强的优点。

Description

一种溶葡萄球菌复合酶消毒剂及其制备方法

技术领域

本发明属于生物制剂领域，具体涉及一种溶葡萄球菌复合消毒剂及其制备方法。

背景技术

消毒剂主要是指用于杀灭传播媒介上病原微生物的，使其达到无害化要求的制剂。目前，消毒剂主要是抗生素、抑菌剂等化学类消毒剂，这一类的消毒剂主要通过蛋白质变性或者微生物溶解等达到消毒的目的，这些化学类消毒剂虽然能达到消毒的目的，但是其制备工艺较为复杂，而且在生产过程中会对环境造成污染，不适合大规模生产和应用。而且化学类消毒剂在临床应用中还存在消毒效率低、有毒副作用、不易保存的缺点。

所以研究者们开始转向生物制剂领域，以制备出消毒效率高无毒副作用的生物制剂类消毒剂。

发明内容

针对现有技术存在的上述技术问题，本发明的目的是提供一种消毒效率高，作用范围广，稳定性高，易于保存的溶葡萄球菌复合酶消毒剂。本发明的另一目的是提供上述溶葡萄球菌复合酶制剂的制备方法。

为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

一种溶葡萄球菌复合酶消毒剂，包括如下质量份数的组分：溶葡萄球菌酶1.1~10份，抗菌肽1.1~10份，醋酸氯已定1.1~10份，山梨醇10~20份，磷酸二氢钠1.1~10份和磷酸氢二钠1.1~10份。

本方案中，采用溶葡萄球菌酶为原料制备消毒剂，其中溶葡萄球菌酶是一种革兰氏阳性菌的溶菌素，溶葡萄球菌酶的细胞壁肽聚糖的四肽侧链的氨基酸依次为L-丙氨酸，D-谷氨酸，C-赖氨酸，D-丙氨酸，其中首位的L-丙氨酸通过酰胺键与胞壁酸相连，该聚糖链四肽侧链第三位的L-赖氨酸通过五个甘氨酸交联桥与相邻聚糖链四肽侧脸的D-丙氨酸基相连接，由此形成纵横交叉、左右联接的，坚韧的三维立体多孔结构，并聚合成较厚的肽聚糖层，溶葡萄球菌酶可以切断肽聚糖中的Gly-Gly健，而溶葡萄球菌复合酶中另一种生物酶可以切断N-乙酰细胞壁酸和N-乙酰葡萄糖胺之间的键，使细菌裂解，从而达到消毒的目的。

本发明中各组分的质量份数为：溶葡萄球菌酶1.1~10份，抗菌肽1.1~10份，醋酸氯已定1.1~10份，山梨醇10~20份，磷酸二氢钠1.1~10份和磷酸氢二钠1.1~10份。在溶葡萄球菌酶的溶菌过程中，由于溶葡萄球菌酶处理后为抗菌肽的作用创造了条件从而使得抗菌肽表现明显的增强效应，使细菌裂解死亡，使其发挥了协同增效作用，从而最终的消毒剂具有较高的消毒效率。山梨醇可以使溶葡萄球菌酶保持较高活性，消毒剂可以更好的发挥消毒作用；磷酸二氢钾和磷酸氢二钾可以使得到的消毒剂具有合适的pH值，不仅可以避免对消毒界面造成腐蚀，而且可以使消毒剂更好的保存，而不会因为酸碱性的改变使其失效。

作为优化，所述溶葡萄球菌酶、抗菌肽和醋酸氯已定的质量比为1：1:1。

本方案中，溶葡萄球菌酶、抗菌肽和醋酸氯已定的质量比为1：1:1，通过各组分之间的协同作用增效作用，得到的消毒剂具有消毒效率高，无毒副作用的优点。

作为优化，所述磷酸二氢钠和磷酸氢二钠的质量比为5:3。

本方案中，磷酸二氢钾和磷酸氢二钾的质量比为5:3，这样的配比使其用于消毒剂时能够保持消毒剂的pH值在合适的范围内，使其性能保持稳定方便保存，而且在保存的过程中不会因为条件的改变而发生消毒剂失效或者消毒效力减弱的问题。

作为优化，所述溶葡萄球菌复合酶消毒剂包括如下质量份数的组分：溶葡萄球菌酶6份，抗菌肽6份，醋酸氯已定6份，山梨醇15份，磷酸二氢钠5份，磷酸氢二钠3份。

本方案中，溶葡萄球菌复合酶消毒剂包含溶葡萄球菌酶6份，抗菌肽6份，醋酸氯已定6份，山梨醇15份，磷酸二氢钠5份和磷酸氢二钠3份，申请人经过试验证明，这样组分配比的消毒剂的消毒效率最高，同时成本低，无毒副作用。

本发明还提供一种上述溶葡萄球菌复合酶消毒剂的制备方法，包括如下制备步骤： 

1）将溶葡萄球菌酶、抗菌肽和醋酸氯已定用蒸馏水溶解混合，摇匀；

2）将山梨醇加入步骤1）得到的溶液中，摇匀；

3）将磷酸二氢钠和磷酸氢二钠溶解于蒸馏水中并搅拌均匀，然后将得到的溶液加入到步骤2）得到的溶液中，摇匀即可。

本方案中，首先将溶葡萄球菌酶、抗菌肽和醋酸氯已定用蒸馏水溶解混合摇匀，这样可以使消毒成分混合均匀，保证了得到的消毒剂的性能稳定；然后再加入山梨醇，使溶葡萄球菌酶保持较高的活性；最后加入磷酸二氢钠和磷酸氢二钠制备的缓冲液并混合均匀，可以使得到的消毒剂具有合适pH，保持性能稳定，方便存储。

相比现有技术，本发明的技术方案具有如下有益效果：

1）以溶葡萄球菌酶为原料，同时与抗菌肽和醋酸氯已定配合使用，采用双重破壁生物杀菌机理，使得到的消毒剂具有较高的消毒效率，促进创面的快速愈合的优点，同时没有毒副作用，也不会产生耐药性。

2）本方案的消毒剂中含有山梨醇组分，使消毒剂中的有效成分在较长时间里能够具有较高的活性，用于伤口、创面消毒时，具有较好的消毒效果。

3）本发明的消毒剂具有性能稳定、易于存储、保存时间长的优点。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步的详细说明。

一、具体实施例

实施例1

一种溶葡萄球菌复合酶消毒剂，包括如下质量份数的组分：溶葡萄球菌酶6份，抗菌肽6份，醋酸氯已定6份，山梨醇13份，磷酸二氢钠5份和磷酸氢二钠3份。

上述溶葡萄球菌复合酶消毒剂的制备方法包括如下步骤：

1）将6份溶葡萄球菌酶、6份抗菌肽和6份醋酸氯已定用蒸馏水溶解混合，摇匀；

2）将13份山梨醇加入步骤1）得到的溶液中，摇匀；

3）将5份磷酸二氢钠和3份磷酸氢二钠溶解于蒸馏水中并搅拌均匀，然后将得到的溶液加入到步骤2）得到的溶液中，摇匀即得到1#消毒剂。

实施例2

一种溶葡萄球菌复合酶消毒剂，包括如下质量份数的组分：溶葡萄球菌酶8份，抗菌肽3份，醋酸氯已定3份，山梨醇16份，磷酸二氢钠1.1份和磷酸氢二钠10份。

上述溶葡萄球菌复合酶消毒剂的制备方法包括如下步骤：

1）将8份溶葡萄球菌酶、3份抗菌肽和3份醋酸氯已定用蒸馏水溶解混合，摇匀；

2）将16份山梨醇加入步骤1）得到的溶液中，摇匀；

3）将1.1份磷酸二氢钠和10份磷酸氢二钠溶解于蒸馏水中并搅拌均匀，然后将得到的溶液加入到步骤2）得到的溶液中，摇匀即得到2#消毒剂。

实施例3

一种溶葡萄球菌复合酶消毒剂，包括如下质量份数的组分：溶葡萄球菌酶2份，抗菌肽7份，醋酸氯已定9份，山梨醇19份，磷酸二氢钠10份，磷酸氢二钠1.1份。

上述溶葡萄球菌复合酶消毒剂的制备方法包括如下步骤：

1）将2份溶葡萄球菌酶、7份抗菌肽和9份醋酸氯已定用蒸馏水溶解混合，摇匀；

2）将19份山梨醇加入步骤1）得到的溶液中，摇匀；

3）将10份磷酸二氢钠和1.1份磷酸氢二钠混合并搅拌均匀，然后将二者的混合物加入到步骤2）得到的混合物中，摇匀即得到3#消毒剂。

实施例4

一种溶葡萄球菌复合酶消毒剂，包括如下质量份数的组分：溶葡萄球菌酶5份，抗菌肽10份，醋酸氯已定1.1份，山梨醇10份，磷酸二氢钠7份，磷酸氢二钠7份。

上述溶葡萄球菌复合酶消毒剂的制备方法包括如下步骤：

1）将5份溶葡萄球菌酶、10份抗菌肽和1.1份醋酸氯已定用蒸馏水溶解混合，摇匀；

2）将10份山梨醇加入步骤1）得到的溶液中，摇匀；

3）将7份磷酸二氢钠和7份磷酸氢二钠溶解于蒸馏水中并搅拌均匀，然后将得到的溶液加入到步骤2）得到的溶液中，摇匀即得到4#消毒剂。

二、对比例

实施例5

一种溶葡萄球菌复合酶消毒剂，包括如下质量份数的组分：溶葡萄球菌酶6份，醋酸氯已定6份，山梨醇13份，磷酸二氢钠5份，磷酸氢二钠3份。

上述溶葡萄球菌复合酶消毒剂的制备方法包括如下步骤：

1）将6份溶葡萄球菌酶和6份醋酸氯已定用蒸馏水溶解混合，摇匀；

2）将13份山梨醇加入步骤1）得到的溶液中，摇匀；

3）将5份磷酸二氢钠和3份磷酸氢二钠溶解于蒸馏水中并搅拌均匀，然后将得到的溶液加入到步骤2）得到的溶液中，摇匀即得到5#消毒剂。

实施例6

一种溶葡萄球菌复合酶消毒剂，包括如下质量份数的组分：抗菌肽6份，醋酸氯已定6份，山梨醇13份，磷酸二氢钠5份，磷酸氢二钠3份。

上述溶葡萄球菌复合酶消毒剂的制备方法包括如下步骤：

1）将6份抗菌肽和6份醋酸氯已定用蒸馏水溶解混合，摇匀；

2）将13份山梨醇加入步骤1）得到的溶液中，摇匀；

3）将5份磷酸二氢钠和3份磷酸氢二钠溶解于蒸馏水中并搅拌均匀，然后将得到的溶液加入到步骤2）得到的溶液中，摇匀即得到6#消毒剂。

实施例7

一种溶葡萄球菌复合酶消毒剂，包括如下质量份数的组分：溶葡萄球菌酶6份，抗菌肽6份，山梨醇13份，磷酸二氢钠5份，磷酸氢二钠3份。

上述溶葡萄球菌复合酶消毒剂的制备方法包括如下步骤：

1）将6份溶葡萄球菌酶和10份抗菌肽用蒸馏水溶解混合，摇匀；

2）将13份山梨醇加入步骤1）得到的溶液中，摇匀；

3）将5份磷酸二氢钠和3份磷酸氢二钠溶解于蒸馏水中并搅拌均匀，然后将得到的溶液加入到步骤2）得到的溶液中，摇匀即得到7#消毒剂。

三、性能检测

1、抑菌试验：

抑菌试验主要采用抑菌圈法测试溶葡萄球菌复合酶消毒剂对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌的抑菌效果，具体试验方法包括如下步骤：

（1）菌悬液的制备：将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌制成5×106cfu/ml的菌悬液；

（2）抑菌片的制备：取上述方法制备的1#～7#消毒剂20μL，然后分别滴加在无菌、干燥的滤纸片上，再将滤纸片平放于清洁的无菌平皿内，开盖置37℃的温箱中烤干, 或置室温下自然干燥后备用；

（3）阴性对照样片的制备：取无菌干燥滤纸片4片；每片滴加无菌蒸馏水 20μl，干燥后备用；

（4）试验菌的接种：吸取40μL步骤（1）制备的菌悬液，在营养琼脂培养基基平板表面均匀涂抹，盖好平皿，在室温下干燥 5min；其中营养琼脂培养基的组分为：蛋白胨10g、牛肉膏5g、氯化钠5g、琼脂15g和蒸馏水1000ml，除琼脂外其他成分溶解于蒸馏水中，调节pH值为7.2～7.4，加入琼脂，加热溶解，分装，于121℃ 压力蒸汽灭菌 20min即可使用；

（5）抑菌剂样片贴放：每次试验贴放1个染菌平板,每个平板贴放4片试验样片, 1 片阴性对照样片, 共 5 片。用无菌镊子取样片贴放于平板表面。各样片中心之间相距 25mm以上, 与平板的周缘相距 15 mm 以上。贴放好后，用无菌镊子轻压样片,使其紧贴于平板表面。盖好平皿，置37℃温箱, 培养16h～18h 观察结果，用游标卡尺测量抑菌环的直径 (包括贴片) ，测试结果如表1所示。

表1 

细菌种类

1#

2#

3#

4#

5#

6#

7#

金黄色葡萄球菌

18.6mm

18.1 mm

17.4 mm

16.7 mm

6.6mm

5.9mm

5.7mm

大肠杆菌

18.7mm

17.1 mm

17.7 mm

17.4 mm

6.8mm

5.7mm

5.4mm

白色念珠菌

18.1 mm

17.3 mm

17.9 mm

16.8 mm

6.3 mm

5.4 mm

5.1 mm

由抑菌试验测试结果可以得知， 1#～4#溶葡萄球菌复合酶消毒剂对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌均具有较好的抑菌效果，其中抑菌环的直径均大于16mm，符合抑菌要求；而对比例5#～7#制备的消毒剂对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌的抑菌效果不佳，不符合抑菌要求。

3、灭杀微生物试验：

灭杀微生物试验主要测试实施例1～4以及对比例5～7制备的消毒剂对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌和大肠杆菌的灭杀效果，具体试验方法包括如下步骤：

（1）将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌配置浓度为5×108cfu/ml的菌悬液；

（2）取4支消毒试验用无菌大试管，先分别在每支无菌大使管中加入0.5ml步骤1）制备的菌悬液，再加入0.5ml有机干扰物质，将二者混合混匀后置于 20℃±1℃ 水浴中 5min，再用无菌吸管吸取实施例1～4制备的溶葡萄球菌复合酶杀菌喷剂4.0 ml 注入其中，迅速混匀并立即记时；有机干扰物质一般采用3%（W/V）牛血清白蛋白贮存溶液，取0.5ml加入到消毒体系中（稀释10倍），进行消毒试验。

（3）待试验菌（金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌）与消毒剂相互作用至预定时间，再吸取0.5ml试验菌与实施例1～4制备的溶葡萄球菌复合酶杀菌喷剂加于 4.5ml 经灭菌的中和剂中混合均匀；

（4）各无菌大试管与喷剂混合液经加中和剂作用 10min 后，吸取 1.0ml样液，按活菌培养计数方法测定存活菌数，每管样液接种 2 个平皿即可。如平板上生长的菌落数较多时，可进行系列10倍稀释后，再进行活菌培养计数；

（5）同时用稀释液代替杀菌喷剂，进行平行试验，作为阳性对照；

（6）所有试验样本均在 37℃ 温箱中培养，对细菌繁殖体培养48h 观察最终结果；对细菌芽孢需培养 72h 观察最终结果；

（7）计算各组的活菌浓度（cfu/ml），并换算为对数值（N），然后按下式计算杀灭对数值:

杀灭对数值 (KL)＝对照组平均活菌浓度的对数值（No）－试验组活菌浓度对数值（Nx）

其中计算杀灭对数值时，取小数点后两位值，可以进行数字修约。如果消毒试验组消毒处理后平均生产菌落数，小于等于1时，其杀灭对数值，即大于等于试验前对照组平均活菌浓度的对数值。测试结果如表2所示：

表2

由以上测试结果可知：1#～4#溶葡萄球菌复合酶杀菌喷剂对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌均具有较高的灭杀效果，其具有细菌灭杀率高、灭杀迅速、灭杀效果好的优点；而对比例5#～7#制备的消毒剂，对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌的灭杀效果不佳，不符合灭菌要求。

本发明的上述实施例仅仅是为说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其他不同形式的变化和变动。这里无法对所有的实施方式予以穷举。凡是属于本发明的技术方案所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。

Claims (5)

1.一种溶葡萄球菌复合酶消毒剂，其特征在于，包括如下质量份数的组分：

溶葡萄球菌酶1.1~10份，抗菌肽1.1~10份，醋酸氯已定1.1~10份，山梨醇10~20份，磷酸二氢钠1.1~10份和磷酸氢二钠1.1~10份。

2.根据权利要求1所述的溶葡萄球菌复合酶消毒剂，其特征在于，所述溶葡萄球菌酶、抗菌肽和醋酸氯已定的质量比为1：1:1。

3.根据权利要求1或者2所述的溶葡萄球菌复合酶消毒剂，其特征在于，所述磷酸二氢钠和磷酸氢二钠的质量比为5:3。

4.根据权利要求1所述的溶葡萄球菌复合酶消毒剂，其特征在于，包括如下质量份数的组分：溶葡萄球菌酶6份，抗菌肽6份，醋酸氯已定6份，山梨醇15份，磷酸二氢钠5份和磷酸氢二钠3份。

5.一种权利要求要求1~4任一项所述的溶葡萄球菌复合酶消毒剂的制备方法，其特征在于，包括如下制备步骤：

1）将溶葡萄球菌酶、抗菌肽和醋酸氯已定用蒸馏水溶解混合，摇匀；

2）将山梨醇加入步骤1）得到的溶液中，摇匀；

3）将磷酸二氢钠和磷酸氢二钠溶解于蒸馏水中并搅拌均匀，然后将得到的溶液加入到步骤2）得到的溶液中，摇匀即可。