CN1334700A - 一种制剂在控制一种靶基因表达上应用 - Google Patents
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
Abstract
一种制剂的使用,该制剂含有以下组分(a)一种挥发性的诱导剂;(b)一种聚乙氧基化的C10～C20醇或一种三硅氧烷聚乙氧基化物和(c)一种稀释剂;该制剂用于一种靶基因在一种植物体内的可控制表达,该植物体含有一个化学诱导型植物基因表达框,该框含有一个与该靶基因可操作地连接的诱导型启动子,该启动子通过对该植物应用上文(a)来诱导。特定的新的制剂也在权利要求之中。
Description
本发明涉及到一种制剂作为对一种靶基因在诸如植物这样的有机体中的表达的控制机制的应用以及有用于该途径的特定制剂。
基因表达由蛋白质编码区域的上游区域来控制，该区域通常称为“启动子”。启动子可以是组成型的，组织特异的，发育程控的或诱导型的。
对农作物进行操控以改良其性状(如产量或质量)需要在植物组织中表达外来或外源的基因。因此这样的遗传操控依赖于控制所需基因的方法的存在；例如，依赖于在植物中有效的合适的启动子的存在与使用。有多种不同的启动子的可供选择以便于为特定的基因、结构体、细胞、组织、植物或环境选出最适合的启动子是有益的。一批启动子已知在植物中是有效的。
术语“诱导型启动子”包括可以化学诱导的启动子。特别有用的启动子为由外部化学刺激控制的启动子。外部化学刺激可以是农业上可接受的化学物，适于农业实用的化学物的使用不对哺乳类或植物造成危害。这样可以在植物生长或发育的特定的阶段控制特定的基因的表达，该控制通过一种可以施用于植物或种子的的化学物的存在与否来进行，例如，通过喷雾或使用已知的种子包被技术。这些启动子被认为是基因“开关”启动子。
在诱导型启动子控制下的基因可以是提高/所需的形状或表型的基因自身，或者该诱导型启动子可以控制一种阻遏蛋白的表达，该蛋白抑制一种靶基因的表达，例如通过与该靶基因上游的一种操纵基因序列相互作用来阻止该基因的表达(如已知的细菌tet和lac操纵基因/阻遏系统)。在进一步的替代方案中，诱导型启动子控制下的基因可以表达一种与其它蛋白相作用以抑制其活性的蛋白，例如芽孢杆菌RNA酶/芽孢杆菌RNA酶抑制剂系统，该系统中芽孢杆菌RNA酶抑制或杀死缺乏芽孢杆菌RNA酶抑制剂的细胞。
这一类型的基因开关已知于很多种的应用。这包括可回复的雄性不育的产生，该特性在杂交植物的生产中非常需要，描述例见WO90/08830。这些启动子的其它应用包括在种质保护中的应用，其中特定农作物特别是转基因植物的防范，和自生自长植物的控制非常必要，其应用还包括在防止收割前发芽中的应用，如WO 94/03619所述。
许多有机体具有使其能够代谢诸如醇或酮这样的化学物的机制，例如通过产生乙醇脱氢酶。由于该启动子可以通过靶醇或酮的存在而诱导，这些系统的启动子可能有用于基因开关。
一个这样的例子可见于真菌A nidulans，该真菌只有在各种醇或酮存在生长的情况下表达乙醇脱氢酶I(ADHI)，该酶由alcA基因编码。该诱导通过调节蛋白传递，该蛋白由组成型表达的alcR基因编码。在诱导剂(醇或酮)存在的情况下，该调节蛋白激活alcA基因的表达。该调节蛋白还诱导剂存在的情况下刺激其本身的表达。这意味着在诱导条件下(即，当存在醇或酮的情况下)高水平的ADH1被产生。相反，在缺乏诱导剂的情况下alcA及其产物ADH1不被表达。alcA的表达和该酶的生产在葡萄糖存在的情况下也被抑制。
因此，alcA基因启动子是一种诱导型启动子，该启动子在存在诱导剂的情况下由alcR调节蛋白(即，通过蛋白/醇或蛋白/酮)激活。该alcR和alcA基因(包括各自的启动子)已被克隆并测序(Lockington RA et al.，1985，Gene，33：137-149；Felenbok B etal.，1988，Gene，73：385-396；Gwynne et al.，1987，Gene，51：205-216)。
乙醇脱氢酶(adh)基因已在特定的植物中被实验。在玉米或其它谷类中它们通过无氧条件被启动。玉米的adh基因的启动子区域含有一个300bp的调控子元件，该元件对于在无氧条件下的表达是必需的。但是，在任何植物中都没有发现alcR调节蛋白的等效物。因此在植物中未知alcR/alcA类型的调节基因系统。alcR在植物细胞中的组成型表达并不引起外源adh活性的激活。
WO 93/21334描述了含有一种基因开关系统的转基因植物的生产。该文件具体描述了一种化学诱导的植物基因表达框，该框含有的第一种启动子可操作地连接于一个调节序列，该调节序列编码一种调节蛋白，该框还含有一个与靶基因可操作地连接的诱导型启动子，在存在一种有效的外来诱导剂的情况下该诱导型启动子被该调节蛋白激活，由此该诱导剂的施用导致了该靶基因的表达。特别地，该alcR/alcA系统被用于结构体。在这一情况下使用的外源的化学诱导剂包括Creaser et al..J.Biochem.(1984)225，449-454所描述的化学物，例如丁-2-酮(乙基甲基甲酮)，环己酮，丙酮，丁-2-醇，3-氧代丁酸，2-丙醇和乙醇。
对于农业目的，简单的醇的应用较为优选，这是由于这些化学物相对廉价并易于降解。因此它们带来了较低的环境负担。但是，这样的化学物一般具高挥发性并且因此而在农业设备条件下操作不便，在喷洒中可能损失大量的化学物。因此，与已知的诱导物的使用相伴随的问题之一为它们在被植物吸收前迅速挥发的能力。
因此，非常需要使用一种化学诱导剂，该诱导剂与已知的诱导剂相比可被植物更有效地吸收由此可以更好地控制靶基因的表达。
因此，本发明希望能通过制备化学诱导剂来克服这一先前工艺所伴生的问题。
根据本发明的第一个方面，在此提供了一种制剂的使用，该制剂包括以下组分：
(a)一种挥发性的化学诱导剂；
(b)一种聚乙氧基化的C10～C20醇或一种三硅氧烷聚乙氧基化物和
(c)一种稀释剂
该制剂用于在一种具有化学诱导基因表达框的有机体中控制一种靶基因的表达，该框含有一个与靶基因可操作地连接的诱导型启动子，其中通过向该有机体应用上述的(a)来诱导该诱导型启动子。
在适当的情况下，该有机体为一种植物，如一种农作物。
稀释剂(c)可以是，例如，水。
根据本发明的第二个方面，在此提供了一种用于在一种诸如植物这样的有机体中控制一种靶基因表达的方法，该方法包括以化学诱导的植物基因表达框对该有机体进行转化，该框含有一个与靶基因可操作地连接的诱导型启动子，其中通过向该有机体应用上述的制剂来诱导该诱导型启动子。
在适当的情况下，该表达系统利用了一种调节蛋白。
这样，根据本发明的第三个方面，在此提供了一种用于在植物中控制一种靶基因表达的方法，该方法包括以化学诱导的植物基因表达框对该有机体进行转化，该框含有的第一种启动子可操作地连接于一个调节序列，该调节序列编码一种调节蛋白，该框还含有一个与靶基因可操作地连接的诱导型启动子，在存在一种上文定义的制剂的情况下该诱导型启动子被该调节蛋白激活，该方法包括对植物施用一种上文定义的制剂，由此该诱导制剂的施用导致了该靶基因的表达。
在上述制剂中组分(a)的性质取决于存在于该表达系统中的诱导型启动子的特性。但是，组分(a)的一个特定的例子为C1～C6醇或C3～C6酮，在优选的情况下为乙醇或丙-2-醇。这些组分可作为诱导剂作用，例如，作为下文详述的alc系统的诱导剂。
上文描述的所用的组分(b)在优选的情况下为聚乙氧基化的油醇、月桂醇、硬脂酰醇或鲸蜡醇。在更优选的情况下为一种聚氧乙烯-油醇，该醇具有的平均环氧乙烷摩尔含量为0-35，在更优选的情况下为2-20。在最优选的情况下该醇为聚氧乙烯-(2)-油醇，聚氧乙烯-(10)-油醇或聚氧乙烯-(20)-油醇。然而，组分(b)优选地为聚氧乙烯-(20)-油醇(括号中的数字表示的是平均每分子的环氧乙烷含量)这样的产物可购得如BRIJ92TM，BRIJ97TM和BRIJ98TM。
在优选的情况下，该制剂的组分(b)的浓度为约0.5％wt/wt或更低。在优选的情况下浓度为约0.2％wt/wt到0.5％wt/wt。
在一个替代方案中，用于本发明的方法的制剂包括的组分(b)为一种以氢或甲基进行封端的三硅氧烷基聚乙氧基化物。特别地，组分(b)为甲基封端的三硅氧烷聚乙氧基化物。该甲基封端的三硅氧烷聚乙氧基化物在优选的情况下具有的平均环氧乙烷摩尔含量为4到12每分子，最优选的情况下为8个每分子。这样的化合物可购得如SILWET 77TM(SILWET为Witco的商标)。
在优选的情况下，甲基封端的三硅氧烷聚乙氧基化物浓度为约0.5％wt/wt或更低。在优选的情况下浓度为约0.2％wt/wt到0.5％wt/wt。
在优选的情况下，上述实施方案中所用的制剂的组分(a)的浓度为约5％wt/wt或更低。在优选的情况下浓度为约2％wt/wt到5％wt/wt。
根据本发明的第三个方面的优选实施方案，该诱导型启动子为alcA诱导型启动子序列并且该调节序列编码alcR调节蛋白。
制剂的组分(c)的浓度在优选的情况下为约90％到98％wt/wt。
根据上述方法，所使用的特定制剂为全新的制剂，它们提供了本发明的进一步方面。
这样，根据本发明的第四个方面，在此提供了一种农用制剂，该制剂包括以下组分：
(a)一种诱导型启动子的一种挥发性的化学诱导剂；
(b)一种三硅氧烷聚乙氧基化物；以及
(c)一种稀释剂
如上所述，组分(b)在适当的情况下为一种以氢或甲基进行封端的三硅氧烷聚乙氧基化物，在优选的情况下为一种甲基封端的三硅氧烷聚乙氧基化物。在适当的情况下，该甲基封端的三硅氧烷聚乙氧基化物具有的平均环氧乙烷摩尔含量为4到12每分子，例如8个每分子。在适当的情况下，组分(a)的浓度为约2％到5％wt/wt。
这样，根据本发明的第四个方面，在此提供了一种农用制剂，该制剂包括以下组分：
(a)一种诱导型启动子的一种C1～C6醇诱导剂，含量低于5％wt/wt；
(b)一种聚乙氧基化的C10～C20醇；以及
(c)水
在这一情况下，该制剂的组分(b)在适宜情况下为聚乙氧基化的油醇、月桂醇、硬脂酰醇或鲸蜡醇，在更优选的情况下为一种聚氧乙烯-油醇。在适当的情况下，该醇具有的平均环氧乙烷摩尔含量为2-20，例如聚氧乙烯-(2)-油醇，聚氧乙烯-(10)-油醇或聚氧乙烯-(20)-油醇。对于组分(a)，其在优选的情况下乙醇或丙-2-醇，在适当的情况下该组分为约2％到5％wt/wt。组分(b)的含量在优选的情况下为约0.5％或更低。
根据本发明的第六个方面，在此提供了一种农用制剂，该制剂包括以下组分：
(a)一种C3～C9酮，该酮可作为一种诱导型启动子的化学诱导剂；
(b)一种聚乙氧基化的C10～C20醇；以及
(c)一种稀释剂。
在优选的情况下，在这些制剂中，组分(a)的浓度为约2％到5％wt/wt。同上文，组分(b)在可以为聚乙氧基化的油醇、月桂醇、硬脂酰醇或鲸蜡醇，在更优选的情况下为一种聚氧乙烯-油醇，该醇具有的平均环氧乙烷摩尔含量为2-20。组分(b)的特定例子有聚氧乙烯-(2)-油醇，聚氧乙烯-(10)-油醇或聚氧乙烯-(20)-油醇。
本发明的一个优选的实施方案为一种含有以下组分的制剂，a.乙醇；b.聚氧乙烯-(20)-油醇；c.一种稀释剂，其中组分(a)的浓度为2％wt/wt，组分(b)的浓度为0.5％wt/wt。
本发明的一个更优选的实施方案为一种含有以下组分的制剂，a.乙醇；b.甲基封端的三硅氧烷聚乙氧基化物，该化合物具有的平均环氧乙烷摩尔含量为8；c.一种稀释剂，其中组分(a)的浓度为2％wt/wt，组分(b)的浓度为0.5％wt/wt。
本发明的一个优点为同单独使用已知的诱导剂相比，该制剂可以被诸如植物这样的有机体更有效地吸收。因此，本发明的制剂提高了乙醇作为alcA/alcR启动子的诱导剂的效能。
令人惊奇的发现，聚氧乙烯油醇表面活性剂和/或甲基封端的三硅氧烷聚乙氧基化物佐剂同已知的化学诱导剂的联合使用显著提高了植物对该制剂的吸收，由此可以对靶基因进行更好的控制，该靶基因同诱导性启动子可操作地连接。
也可加入其它的添加剂，如抗菌化合物，分散剂，加湿化合物和防挥发剂。
本发明特别可用于一种植物表达系统中，该系统含有：
(i)第一种启动子，该启动子可操作地连接于一个调节序列，该调节序列编码一种调节蛋白，以及
(ii)一个与靶基因可操作地连接的诱导型启动子，在存在一种有效的外源诱导剂的情况下该诱导型启动子被该调节蛋白激活，该诱导剂为上文定义的制剂，由此该诱导制剂的应用导致了该靶基因的表达。
这样的基因表达系统可以包含于一种植物细胞以及植物组织或含有上文定义的植物细胞的一种植物，还可包含于一些植物或种子，及其衍生物。
术语“挥发性的化学诱导剂”指的是任何可以诱导一种化学诱导性启动子系统并且可以在被植物有效吸收前快速挥发的化学物。
术语“C1～C6醇”包括甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、仲丁醇、叔丁醇、正戊醇、正己醇和环己醇以及其不饱和类似物。
术语“C3～C9酮”包括丙酮、丁酮、戊酮、环己酮、庚酮、辛酮、壬酮和芳香酮，例如苯乙酮。
本发明所用的术语“靶基因”指的是任何目的基因。它包括任何需要被引入一种植物以调整其特性的基因。该靶基因可以是一种外源的植物基因或外来基因，可以是单个基因或一系列基因。该靶基因序列可以至少编码一种功能性蛋白质的部分或一种反义序列。因此，一种诱导性启动子当与一种外源或外来基因可操作地连接并通过转化引入一种真核生物时，该启动子提供了一种对该基因的表达进行外部调控的途径。
术语“表达框”与术语“结构体”，“杂合体”和“连接物”同义，它包括一种目的基因，该基因与一种诱导型启动子直接或间接地连接。间接连接的一个例子是在启动子和靶基因之间提供一种适当的间隔群体，例如一种内含子序列。这同样适用于与本发明相关的术语“融合的”，它包括直接和间接连接。这样的结构体还包括适于转化目的细胞的质粒或噬菌体。本发明的表达框还可以包括额外的组分，例如一种与其它启动子可操作地连接的调节序列，该调节蛋白在一种外源诱导剂存在的情况下激活该诱导型启动子。
术语“表达系统”指的是上文所定义的系统，该系统可在适当的有机体、组织、细胞或介质中表达。在此方面，本发明的表达系统可以含有一个或多个表达框并且可以含有额外的组分，该组分可以确保通过使用该诱导型启动子提高靶基因的表达。
任何适用于靶植物或植物细胞的转化方法均可使用，这包括通过含有重组Ti质粒的根癌农杆菌进行感染，电穿孔，细胞或原生质体的微注射，微粒子轰击，细菌轰击，特别包括“fibre”或“whisker”方法以及花粉管转化。被转化的细胞随即在适当的情况下被重新产生成完全的植物体，在该植物中新的核酸物质已经稳定地整合入基因组。以此方法可获得单子叶或双子叶植物。文献中可获得已知详细方法的参考。
可产生的遗传修饰植物的例子包括双子叶和单子叶植物，例如田间作物、谷类、水果以及蔬菜如canola、向日葵、烟草、甜菜、棉花、大豆、玉米、小麦、大麦、水稻、高粱、番茄、芒果、桃、苹果、梨、草莓、香蕉、瓜类、马铃薯、胡罗卜、莴苣、甘蓝、洋葱。
本发明的多种优选的特征和实施方案将在此通过非限制性的实施例以及所引用的图表来描述，在图表中：
图1所示为通过对叶喷雾进行的CAT诱导(每次处理重复5次)，喷雾使用单独的乙醇(2％wt/wt)和乙醇(2％wt/wt)同BRIJ92，97，98TM(0.5％wt/wt)制剂组合使用；
图2所示为在温室叶喷雾测试中2％wt/wt的乙醇的单独使用以及使用2％wt/wt的乙醇和增加浓度的SILWET L-77TM佐剂(0.2％wt/wt到0.5％wt/wt)同CAT活性的关系；
图3所示为对Alc-GUS油菜进行的诱导，诱导通过对油菜的叶片上表面使用5％wt/wt的乙醇和0.5％wt/wt的制剂来进行(‘T’＝靶叶片，‘A’＝同株植物的临近叶片)；以及
图4所示为Silwett L-77的结构。
下表给出了实施例中所描述的各表面活性剂/佐剂的详细组分。
实施例1
| 表面活性剂/佐剂 | 组分 | 制造商 |
| BRIJ 92TMBRIJ 97TMBRIJ 98TMSILWET L-77TM | 聚氧乙烯-(2)-油醇聚氧乙烯-(10)-油醇聚氧乙烯-(20)-油醇甲基封端的三硅氧烷聚乙氧基化物(8)-84％烯丙氧基聚乙二醇甲醚-16％(结构见图4) | ICI SurfactantsICI SurfactantsICI SurfactantsWitco |
组分 含量
a.乙醇 1.99g
b.BRIJ 92TM 0.51g
c.水 97.86g
在瓶中将99.86g的20％wt/wt的乙醇溶液(20.01的乙醇溶于980.56g的水)同0.51g的Brij 92TM混合。同前振荡样品。实施例2
组分 含量
a.乙醇 2.00g
b.BRIJ 97TM 0.52g
c.水 98.05g
在瓶中将100.05g的20％wt/wt的乙醇溶液(20.01的乙醇溶于980.56g的水)同0.52g的Brij 97TM混合。同前振荡样品。
实施例3
组分 含量
a.乙醇 1.99g
b.BRIJ 98TM 0.50g
c.水 97.9g
在瓶中将99.90g的20％wt/wt的乙醇溶液(20.01的乙醇溶于980.56g的水)同0.50g的Brij 98TM混合。同前振荡样品。
实施例4
组分 含量
a.乙醇 2.02g
b.SILWET L-77TM 0.50g
c.水 99.27g
在瓶中将101.30g的20％wt/wt的乙醇溶液(20.01的乙醇溶于980.56g的水)同0.50g的Silwet L77TM混合。同前振荡样品。
实施例5
为在8周大的Alc-CAT(‘Alc’指的是CaMV35S：AlcR，AlcA/CaMV35S：CAT系统)烟草中观察到上述制剂(见图1和2)的作用，以上文的实施例1到4描述的一种佐剂(或表面活性剂)-乙醇混合物对该植物在V5叶片上的近轴叶表面进行人工喷雾。该植物在温室生长条件下进行根部水灌溉并放置72小时，并且进行靶叶片取样和CAT(氯霉素乙酰基转移酶)活性分析，分析使用一种CAT ELISA试剂盒(Boehringer Mannheim)。以乙醇单独进行喷雾的植物被用作参照。每次处理重复5次(误差条所示为标准偏差)。
经发现，聚氧乙烯-(20)-油醇(BRIJ 98TM)的作为表面活性剂的使用使得CAT报告基因的表达高于单独使用乙醇。然而，与聚氧乙烯-(20)-油醇(BRIJ 9TM)同乙醇的联合使用相比，具有的平均环氧乙烷摩尔含量为每分子8的甲基封端的三硅氧烷聚乙氧基化物(SILWET L-77TM)与乙醇的联合使用可以在更大的程度上提高报告基因CAT的表达。特别地，当在同14C的乙醇(浓度为1％到5％wt/wt)的混合物中被应用于叶片的上表面时，BRIJ 98TM和SILWET L-77TM在0.2％wt/wt和0.5％wt/wt浓度下的使用显著地提高了报告基因的表达和在AlcCAT烟草中的吸收。磷成像研究(phosphoimage study)被用于检测14C的乙醇的吸收。
据发现，乙醇的单独使用导致烟草对其2.1％的吸收。从0.2％到0.5％wt/wt的提高含量的SILWET L-77TM的加入导致与单独使用浓度为5％wt/wt的乙醇相比CAT表达提高了61％到78％。同单独使用乙醇相比对，在以BRIJ98TM进行的14C-乙醇研究中乙醇的吸收提高了68％。
报告基因的显著激活还可见于以这些制剂对马铃薯和油菜的处理中。
实施例6
纯合的8周大的土壤生长的转基因Alc-GUS(CaMV35S：AlcR，AlcA/CaMV35S：CAT结构体)油菜植株经以佐剂-乙醇混合物(5％wt/wt乙醇和0.5wt/wt佐剂)对自顶端起第5层叶片的近轴表面进行人工喷雾。该植物在温室生长条件下进行根部水灌溉并放置72小时。靶叶片经取样和GUS(β-葡萄糖醛酸糖苷酸酶)活性分析，以蛋白含量数值对标准化。以无制剂的乙醇进行喷雾的植物被用作参照(“单独用乙醇”)。每次处理重复5次。如图5所示，误差条表示标准偏差，‘CaMV 35S/10’表示在含有花椰菜花叶病毒的组成型控制的植物中的来自GUS报道基因的GUS活性，‘Silwett’指的是Silett L77TM，‘EtOH’指的是无制剂的5％wt/wt的乙醇叶片喷雾处理。
本发明的其它调整对于本领域的技术人员是很明显的，这些调整并不超出本发明的范围。
Claims (43)
1.一种制剂的使用，该制剂含有以下组分：
(a)一种挥发性的化学诱导剂；
(b)一种聚乙氧基化的C10～C20醇或一种三硅氧烷聚乙氧基化物和
(c)一种稀释剂
该制剂用于在一种具有化学诱导基因表达框的有机体中控制一种靶基因的表达，该框含有一个与靶基因可操作地连接的诱导型启动子，其中通过向该有机体施用上述的(a)来诱导该诱导型启动子。
2.权利要求1的应用，其中该有机体为一种植物
3.权利要求1或2的应用，其中组分(a)为一种C1～C6醇或一种C3～C9酮。
4.权利要求1到3任意一个的应用，其中组分(a)为乙醇或丙-2-醇。
5.权利要求1到4任意一个的应用，其中组分(b)为一种聚乙氧基化的油醇、月桂醇、硬脂酰醇或鲸蜡醇。
6.任意一个前述权利要求的应用，其中组分(b)为一种聚氧乙烯油醇。
7.任意一个前述权利要求的应用，其中组分(b)为一种聚氧乙烯油醇，该聚氧乙烯油醇的平均环氧乙烷摩尔含量为2-20。
8.权利要求7的应用，其中组分(b)为聚氧乙烯-(2)-油醇，聚氧乙烯-(10)-油醇或聚氧乙烯-(20)-油醇。
9.权利要求1到8任意一个的应用，其中组分(b)的浓度为约0.5％wt/wt或更低。
10.权利要求1到4任意一个的应用，其中组分(b)为以氢或甲基进行封端的三硅氧烷聚乙氧基化物。
11.权利要求10的应用，其中组分(b)为甲基封端的三硅氧烷聚乙氧基化物。
12.权利要求10或11的应用，其中组分(b)为甲基封端的三硅氧烷聚乙氧基化物，其平均环氧乙烷摩尔含量为每分子4到12。
13.权利要求12的应用，其中组分(b)为甲基封端的三硅氧烷聚乙氧基化物，其平均环氧乙烷摩尔含量为每分子8。
14.权利要求10到13任意一个的应用，其中组分(b)的浓度为约0.5％wt/wt或更低。
15.权利要求1到14任意一个的应用，其中组分(a)的浓度为约2％wt/wt到5％wt/wt。
16.在一种有机体中对一种靶基因进行有控制地表达的方法，该方法包括以化学诱导的植物基因表达框对该有机体进行转化，该框含有一个与靶基因可操作地连接的诱导型启动子，其中该诱导型启动子通过对该有机体应用权利要求1到15之任一所定义的制剂而被诱导。
17.权利要求16的方法，其中该有机体为一种植物。
18.在一种有机体中控制一种靶基因进行表达的方法，该方法包括以化学诱导的植物基因表达框对该有机体进行转化，该框含有的第一种启动子可操作地连接于一个调节序列，该调节序列编码一种调节蛋白，该框还含有一个与靶基因可操作地连接的诱导型启动子，其中该诱导型启动子在存在权利要求1到15所定义的制剂的情况下被该调节蛋白激活，该方法包括对该植物应用权利要求1到15所定义的制剂，由此该诱导制剂的施用导致了该靶基因的表达。
19.权利要求16到18任意一个的方法，其中该诱导型启动子为alcA诱导型启动子序列，该调节序列编码alcR调节蛋白。
20.一种农用制剂，该制剂包括以下组分：
(a)一种诱导型启动子的一种挥发性的化学诱导剂；
(b)一种三硅氧烷聚乙氧基化物；以及
(c)一种稀释剂。
21.权利要求20的制剂，其中组分(b)为氢或甲基封端的三硅氧烷聚乙氧基化物。
22.权利要求21的制剂，其中组分(b)为甲基封端的三硅氧烷聚乙氧基化物。
23.权利要求21或22的制剂，其中组分(b)为甲基封端的三硅氧烷聚乙氧基化物，其平均环氧乙烷摩尔含量为每分子4到12。
24.权利要求23的制剂，其中组分(b)为甲基封端的三硅氧烷聚乙氧基化物，其平均环氧乙烷摩尔含量为每分子8。
25.权利要求20到24任意一个的制剂，其中组分(a)的浓度为约2％wt/wt到5％wt/wt。
26.一种农用制剂，该制剂包括以下组分：
(a)一种诱导型启动子的一种C1～C6醇诱导剂，含量低于5％wt/wt；
(b)一种聚乙氧基化的C10～C20醇；以及
(c)水。
27.权利要求26的制剂，其中组分(b)为一种聚乙氧基化的油醇、月桂醇、硬脂酰醇或鲸蜡醇。
28.权利要求26或27任意一个的制剂，其中组分(b)为一种聚氧乙烯油醇。
29.任意一个20到28任意一个的制剂，其中组分(b)为一种聚氧乙烯油醇，该聚氧乙烯油醇的平均环氧乙烷摩尔含量为2-20。
30.权利要求29的制剂，其中组分(b)为聚氧乙烯-(2)-油醇。
31.权利要求29的制剂，其中组分(b)为聚氧乙烯-(10)-油醇。
32.权利要求29的制剂，其中组分(b)为聚氧乙烯-(20)-油醇。
33.权利要求26到32任意一个的制剂，其中组分(a)的浓度为约2％wt/wt到低于5％wt/wt。
34.权利要求20到33任意一个的制剂，其中组分(b)的浓度为约0.5％wt/wt或更低。
35.权利要求20到34任意一个的制剂，其中组分(a)为乙醇或丙-2-醇。
36.一种农用制剂，该制剂包括以下组分：
(a)一种C3～C9酮，该酮可作为一种诱导型启动子的化学诱导剂；
(b)一种聚乙氧基化的C10～C20醇；以及
(c)一种稀释剂。
37.权利要求36的制剂，其中组分(a)的浓度为2％wt/wt到5％wt/wt。
38.权利要求36或37的制剂，其中组分(b)为一种聚乙氧基化的油醇、月桂醇、硬脂酰醇或鲸蜡醇。
39.权利要求38的制剂，其中组分(b)为一种聚氧乙烯油醇。
40.权利要求39的制剂，其中组分(b)为一种聚氧乙烯油醇，该聚氧乙烯油醇的平均环氧乙烷摩尔含量为2-20。
41.权利要求40的制剂，其中组分(b)为聚氧乙烯-(2)-油醇。
42.权利要求40的制剂，其中组分(b)为聚氧乙烯-(10)-油醇。
43.权利要求40的制剂，其中组分(b)为聚氧乙烯-(20)-油醇。
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